一种短乳杆菌细菌素及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102605029 A (43)申请公布日 2012.07.25 CN 102605029 A *CN102605029A* (21)申请号 201210052012.X (22)申请日 2012.03.01 C12P 21/00(2006.01) C07K 14/335(2006.01) A61K 38/16(2006.01) A61P 31/04(2006.01) C12R 1/24(2006.01) (71)申请人 中国农业大学 地址 100193 北京市海淀区圆明园西路 2 号 (72)发明人 刘萍 解洛香 徐乐 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限。

2、 公司 11245 代理人 关畅 (54) 发明名称 一种短乳杆菌细菌素及其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种短乳杆菌细菌素及其制 备方法。本发明提供了一种制备短乳杆菌细菌 素的方法， 是将 CGMCC 编号为 1.558 的短乳杆菌 (Lactobacillus brevis) 进行发酵， 收集发酵上 清， 得到短乳杆菌细菌素。 本发明通过对培养基和 发酵条件的优化， 提供了一种短乳杆菌细菌素的 制备工艺， 可以得到产量较高且性能优良的短乳 杆菌细菌素。本发明提供的短乳杆菌细菌素除了 对革兰氏阳性菌有抑制作用外， 还能有效抑制革 兰氏阴性菌， 具有较高的抑制活性。 本发明对于饲 料领。

3、域具有重大价值。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 9 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 9 页 附图 1 页 1/1 页 2 1. 一 种 制 备 短 乳 杆 菌 细 菌 素 的 方 法， 是 将 CGMCC 编 号 为 1.558 的 短 乳 杆 菌 (Lactobacillus brevis) 进行发酵， 收集发酵上清， 得到短乳杆菌细菌素。 2.如权利要求1所述的方法， 其特征在于 ： 所述发酵包括如下步骤 ： 将所述短乳杆菌接 种至发酵培养基， 30-50静置培养 30-60h。 3. 如权利要。

4、求 2 所述的方法， 其特征在于 ： 所述发酵培养基的制备方法如下 ： 取 10-200g 碳源、 5-300g 氮源、 0.1-10.0g KH2PO4、 0.1-4.0g MgSO4 7H2O、 0.1-4.0gMnSO4 H2O、 0.1-4.0g CaCl2、 0.1-4.0g CuSO4 5H2O、 0.1-4.0g ZnSO4 7H2O、 0.1-4.0gFeSO4 4H2O、 1-10g 无水乙酸钠、 1-10g 柠檬酸二铵和 0.5-6ml Tween80， 用水溶解并定容至 1L。 4. 如权利要求 3 所述的方法， 其特征在于 ： 所述发酵培养基的 pH 值为 4.0-7.。

5、0。 5. 如权利要求 3 或 4 所述的方法， 其特征在于 ： 所述碳源为葡萄糖和 / 或含有蔗糖的 糖类 ； 所述氮源为酵母膏和 / 或蛋白胨和 / 或硫酸铵 ； 所述含有蔗糖的糖类具体为蔗糖或 糖蜜。 6. 如权利要求 2 至 5 中任一所述的方法， 其特征在于 ： 所述短乳杆菌接种至所述发酵 培养基的初始时刻， 所述短乳杆菌的浓度为 5106-1108cfu/ml。 7. 权利要求 1 至 6 中任一所述方法制备得到的短乳杆菌细菌素。 8. 权利要求 7 所述短乳杆菌细菌素在如下 (a) 或 (b) 中的应用 ： (a) 抑制细菌增殖 ； (b) 制备抑制细菌增殖的产品。 9. 如权利。

6、要求 8 所述的应用， 其特征在于 ： 所述细菌为革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌。 10. 如权利要求 9 所述的应用， 其特征在于 ： 所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌 ； 所述革兰 氏阳性菌为金黄色葡萄球菌。 权 利 要 求 书 CN 102605029 A 2 1/9 页 3 一种短乳杆菌细菌素及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种短乳杆菌细菌素及其制备方法。 背景技术 0002 细菌素是某些细菌产生的具有抗菌活性的物质， 主要成为为多肽、 蛋白质或 蛋白质复合物， 最早由 Jacob 于 1953 年提出的。而作为细菌素代表之一的乳酸菌素 (Lacidophilin) 是指由乳酸菌代谢。

7、合成的一类对多数革兰氏阳性菌和腐败菌具有抑制作 用的蛋白或多肽类物质， 其中还有少数乳酸菌素对革兰氏阴性菌有抑制作用。 近年来， 广谱 抗生素的普及甚至滥用所带来的负面效应日益突出， 新型抗生素替代品的研究迫在眉睫。 作为蛋白质类物质， 乳酸菌素可以被蛋白酶降解， 安全性很高， 故受到越来越多的关注。自 然界中乳酸菌的种类繁多， 但是到目前为止， 只有主要针对革兰氏阳性菌的 Nisin 得到了 深入的研究和广泛的应用。 究其原因， 其它乳酸菌素产量过低、 生产菌株不稳定以及抑菌谱 较窄是主要的限制问题。 发明内容 0003 本发明的目的是提供一种短乳杆菌细菌素及其制备方法。 0004 本发明提。

8、供了一种制备短乳杆菌细菌素 ( 短乳杆菌培养物 ) 的方法， 是将 CGMCC 编号为 1.558 的短乳杆菌 (Lactobacillus brevis) 进行发酵， 收集发酵上清， 得到短乳杆 菌细菌素。 0005 所述发酵可包括如下步骤 ： 将所述短乳杆菌接种至发酵培养基， 30-50 ( 如 30-37或 37-50 ) 静置培养 30-60h(30-48h 或 48-60h)。 0006 所述发酵培养基的制备方法如下 ： 取 10-200g 碳源、 5-300g 氮源、 0.1-10.0g( 如 0.1-5g 或 5-10g)KH2PO4、 0.1-4.0g( 如 0.1-2g 或 。

9、2-4g)MgSO47H2O、 0.1-4.0g( 如 0.1-2g 或 2-4g)MnSO4H2O、 0.1-4.0g( 如 0.1-2g 或 2-4g)CaCl2、 0.1-4.0g( 如 0.1-2g 或 2-4g) CuSO45H2O、 0.1-4.0g( 如 0.1-2g 或 2-4g)ZnSO47H2O、 0.1-4.0g( 如 0.1-2g 或 2-4g) FeSO44H2O、 1-10g( 如 1-5g 或 5-10g) 无水乙酸钠、 1-10g( 如 1-5g 或 5-10g) 柠檬酸二铵 和 0.5-6ml( 如 0.5-3ml 或 3-6ml)Tween80， 用水 ( 。

10、如蒸馏水 ) 溶解并定容至 1L。 0007 所述 10-200g 碳源具体可由 5-100g 葡萄糖 ( 如 5-50g 或 50-100g) 和 5-100g( 如 5-50g或50-100g)含有蔗糖的糖类组成。 所述10-200g碳源具体可为10-200g(如10-100g 或 100-200g) 葡萄糖或 10-200g( 如 10-100g 或 100-200g) 含有蔗糖的糖类。所述含有蔗 糖的糖类具体为蔗糖或糖蜜。 0008 所述 5-300g 氮源具体可由 2-100g( 如 2-50g 或 50-100g) 酵母膏、 2-100g( 如 2-50g 或 50-100g) 蛋。

11、 白 胨 和 1-100g( 如 1-50g 或 50-100g) 硫 酸 铵 组 成，也 可 由 2.5-150g( 如 2.5-70g 或 70-150g) 酵母膏和 2.5-150g( 如 2.5-70g 或 70-150g) 蛋白胨组 成， 也可由 2.5-150g( 如 2.5-70g 或 70-150g) 酵母膏和 2.5-150g( 如 2.5-70g 或 70-150g) 硫酸铵组成， 也可由 2.5-150g( 如 2.5-70g 或 70-150g) 蛋白胨和 2.5-150g( 如 2.5-70g 或 说 明 书 CN 102605029 A 3 2/9 页 4 70-1。

12、50g)硫酸铵组成。 所述5-300g氮源具体可为5-300g酵母膏或5-300g蛋白胨或5-300g 硫酸铵。 0009 所述发酵培养基的 pH 值可为 4.0-7.0( 如 4.0-6.0 或 6.0-7.0)。 0010 所述短乳杆菌接种至所述发酵培养基的初始时刻， 所述短乳杆菌的浓度为 5106-1108cfu/ml( 如 5106-5107cfu/ml 或 5107-1108cfu/ml)。 0011 所述短乳杆菌具体可以以种子液的方式接种至所述发酵培养基。 0012 所述种子液的制备方法具体如下 ： 将所述短乳杆菌接种至种子培养基， 30-40 ( 如 30-37或 37-40 )。

13、、 静置培养 10-30h( 如 10-20h 或 20-30h)， 获得种子液。 0013 所述种子培养基的制备方法具体如下 ： 取 1-20g( 如 1-10g 或 10-20g) 蛋白胨、 1-20g( 如 1-10g 或 10-20g) 牛肉膏、 1-10g( 如 1-5g 或 5-10g) 酵母膏、 1-30g( 如 1-20g 或 20-30g) 葡萄糖、 1-10g( 如 1-5g 或 5-10g) 无水乙酸钠、 1-5g( 如 1-2g 或 2-5g) 柠檬酸二 铵、 0.1-5g( 如 0.1-2g 或 2-5g)K2HPO4、 0.1-5g( 如 0.1-2g 或 2-5g。

14、)MgSO47H2O、 0.1-5g( 如 0.1-2g 或 2-5g)MnSO44H2O 和 0.1-10ml( 如 0.1-5ml 或 5-10ml)Tween80， 用水 ( 如蒸馏 水 ) 溶解并定容至 1L。 0014 所述种子培养基的 pH 值具体可为 2.0-7.0( 如 2.0-5.0 或 5.0-7.0)。 0015 所述种子液的接种量为 1 -20 ( 如 1 -10或 10 -20 )。本专利中的接 种量特制种子液与发酵培养基的体积比。 0016 所述收集发酵上清的方法具体可为 ： 将完成发酵的总体系 4000rpm 离心 10min， 收 集上清液。 0017 所述方法。

15、还包括将所述发酵上清用细菌过滤器 (0.22m) 过滤的步骤。 0018 以上任一所述方法制备得到的短乳杆菌细菌素均属于本发明的保护范围。 0019 所述短乳杆菌细菌素可用于抑制细菌增殖。 所述细菌为革兰氏阴性菌或革兰氏阳 性菌。 所述革兰氏阴性菌具体可为大肠杆菌。 所述革兰氏阳性菌具体可为金黄色葡萄球菌。 0020 所述短乳杆菌细菌素可用于制备抑制细菌增殖的产品。 所述细菌为革兰氏阴性菌 或革兰氏阳性菌。所述革兰氏阴性菌具体可为大肠杆菌。所述革兰氏阳性菌具体可为金黄 色葡萄球菌 0021 本发明通过对培养基和发酵条件的优化， 提供了一种短乳杆菌细菌素的制备工 艺， 可以得到产量较高且性能优良。

16、的短乳杆菌细菌素。本发明提供的短乳杆菌细菌素除了 对革兰氏阳性菌有抑制作用外， 还能有效抑制革兰氏阴性菌， 具有较高的抑制活性。 本发明 对于饲料领域具有重大价值。 附图说明 0022 图 1 为实施例 1 中无细胞滤液对大肠杆菌的抑制效果图。 具体实施方式 0023 以下的实施例便于更好地理解本发明， 但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法， 如无特殊说明， 均为常规方法。 下述实施例中所用的试验材料， 如无特殊说明， 均为自 常规生化试剂商店购买得到的。 以下实施例中的定量试验， 均设置三次重复实验， 结果取平 均值。实施例中均采用 HCl 或 NaOH 调节培养基的 pH 值。 说 。

17、明 书 CN 102605029 A 4 3/9 页 5 0024 实施例中所用的菌株如下 ： 0025 短乳杆菌 (Lactobacillus brevis)CGMCC 1.558。 0026 大肠杆菌 (Escherichia coli) ： CGMCC 1.907。 0027 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus subsp.aureus) ： CGMCC 1.1477。 0028 实施例 1、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0029 一、 培养基的制备 0030 种子培养基 (pH2.0) ： 取 1g 蛋白胨、 1g 牛肉膏、 1g 酵母膏、 1g 葡萄糖、 1。

18、g 无水乙酸 钠、 1g 柠檬酸二铵、 0.1g K2HPO4、 0.1g MgSO47H2O、 0.1g MnSO44H2O 和 0.1mlTween80， 用 蒸馏水溶解并定容至 1L。 0031 发酵培养基 (pH4.0) ： 取碳源 (5g 葡萄糖和 5g 蔗糖 )、 氮源 (2g 酵母膏、 2g 蛋 白 胨 和 1g 硫 酸 铵 )、 10g KH2PO4、 4.0g MgSO47H2O、 4.0g MnSO4H2O、 4.0g CaCl2、 4.0g CuSO45H2O、 4.0g ZnSO47H2O、 4.0g FeSO44H2O、 10g 无水乙酸钠、 10g 柠檬酸二铵和 6。

19、ml Tween80， 用蒸馏水溶解并定容至 1L。 0032 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0033 1、 将活化后的短乳杆菌接种至种子培养基中， 37静置培养 20h， 获得种子液。 0034 2、 在250ml三角瓶中， 将2ml种子液接种至200ml发酵培养基(接种量为1)， 得 到发酵初始体系， 发酵初始体系中短乳杆菌的浓度为 5106cfu/ml ； 将发酵初始体系 37 静置发酵 48h， 得到发酵终止体系。 0035 3、 将发酵终止体系4000rpm离心10min(离心半径为13.5cm)， 收集上清液， 将上清 液用细菌过滤器 (0.22m) 过滤， 得到无细胞滤液 ( 经平。

20、板检验无菌长出 )， 又称短乳杆菌 发酵液或短乳杆菌细菌素粗液。 0036 三、 无细胞滤液对致病菌的抑制作用 0037 将指示菌 ( 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 ) 分别进行如下实验 ： 0038 实验组 ： 吸取100l指示菌菌悬液(浓度为107cfu/ml)于15ml 45的无菌LB固 体培养基中， 充分混匀后倒平板。 在凝固的平板上放滤纸片(直径为6mm)， 在滤纸片上加入 20l 无细胞滤液， 30静置培养过夜， 观察是否有抑菌圈产生并测量抑菌圈直径的大小。 0039 对照组 ： 将无菌水代替实验组中的无细胞滤液， 其它同实验组。 0040 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌。

21、圈直径可达 12.62mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm， 见图 1。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直 径可达 9.26mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0041 实施例 2、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0042 一、 培养基的制备 0043 种子培养基 (pH7.0) ： 取 20g 蛋白胨、 20g 牛肉膏、 10g 酵母膏、 30g 葡萄糖、 10g 无 水乙酸钠、 5g 柠檬酸二铵、 5g K2HPO4、 5g MgSO47H2O、 5g MnSO44H2O 和 10mlTween80， 用蒸 馏水溶解并定容至 1L。 0044 发酵培。

22、养基(pH7.0) ： 取碳源(100g葡萄糖和100g蔗糖)、 氮源(100g酵母膏、 100g 蛋白胨和 100g 硫酸铵 )、 0.1g KH2PO4、 0.1g MgSO47H2O、 0.1g MnSO4H2O、 0.1gCaCl2、 0.1g CuSO45H2O、 O.1g ZnSO47H2O、 0.1g FeSO44H2O、 1g 无水乙酸钠、 1g 柠檬酸二铵和 0.5ml Tween80， 用蒸馏水溶解并定容至 1L。 说 明 书 CN 102605029 A 5 4/9 页 6 0045 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0046 1、 将活化后的短乳杆菌接种至种子培养基中， 30。

23、静置培养 10h， 获得种子液。 0047 2、 在250ml三角瓶中， 将40ml种子液接种至200ml发酵培养基(接种量为20)， 得到发酵初始体系， 发酵初始体系中短乳杆菌的浓度为 1108cfu/ml ； 将发酵初始体系 30静置发酵 30h， 得到发酵终止体系。 0048 3、 将发酵终止体系4000rpm离心10min(离心半径为13.5cm)， 收集上清液， 将上清 液用细菌过滤器 (0.22m) 过滤， 得到无细胞滤液 ( 经平板检验无菌长出 )， 又称短乳杆菌 发酵液或短乳杆菌细菌素粗液。 0049 三、 无细胞滤液对致病菌的抑制作用 0050 同实施例 1 的步骤三。 00。

24、51 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 18.26mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 13.50mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0052 实施例 3、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0053 一、 培养基的制备 0054 种子培养基 (pH5.0) ： 取 10g 蛋白胨、 10g 牛肉膏、 5g 酵母膏、 20g 葡萄糖、 5g 无水 乙酸钠、 2g 柠檬酸二铵、 2g K2HPO4、 2g MgSO47H2O、 2g MnSO44H2O 和 5ml Tween80， 用蒸馏 水溶解。

25、并定容至 1L。 0055 发酵培养基 (pH6.0) ： 取碳源 (50g 葡萄糖和 50g 蔗糖 )、 氮源 (50g 酵母膏、 50g 蛋 白胨和 50g 硫酸铵 )、 5g KH2PO4、 2g MgSO47H2O、 2g MnSO4H2O、 2g CaCl2、 2gCuSO45H2O、 2g ZnSO47H2O、 2g FeSO44H2O、 5g 无水乙酸钠、 5g 柠檬酸二铵和 3mlTween80， 用蒸馏水溶 解并定容至 1L。 0056 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0057 1、 将活化后的短乳杆菌接种至种子培养基中， 40静置培养 30h， 获得种子液。 0058 2、 在。

26、250ml三角瓶中， 将20ml种子液接种至200ml发酵培养基(接种量为10)， 得到发酵初始体系， 发酵初始体系中短乳杆菌的浓度为 5107cfu/ml ； 50静置发酵 60h， 得到发酵终止体系。 0059 3、 将发酵终止体系4000rpm离心10min(离心半径为13.5cm)， 收集上清液， 将上清 液用细菌过滤器 (0.22m) 过滤， 得到无细胞滤液 ( 经平板检验无菌长出 )， 又称短乳杆菌 发酵液或短乳杆菌细菌素粗液。 0060 三、 短小乳酸菌素产量 0061 同实施例 1 的步骤三。 0062 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 10.62mm， 。

27、而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 9.02mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0063 实施例 4、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0064 一、 培养基的制备 0065 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0066 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳源为 200g 葡萄糖， 氮源由 150g 酵母膏和 150g 蛋白胨组 说 明 书 CN 102605029 A 6 5/9 页 7 成， 其它配方同实施例 3 的发酵培养基。 0067 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0068 同实施例 3 的。

28、步骤二。 0069 三、 短小乳酸菌素产量 0070 同实施例 1 的步骤三。 0071 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 8.80mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.60mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0072 实施例 5、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0073 一、 培养基的制备 0074 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0075 发酵培养基(pH6.0) ： 碳源为10g葡萄糖， 氮源由2.5g酵母膏和2.5g蛋白胨组成， 其它配方同实施例 3。

29、 的发酵培养基。 0076 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0077 同实施例 3 的步骤二。 0078 三、 短小乳酸菌素产量 0079 同实施例 1 的步骤三。 0080 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 8.20mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.60mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0081 实施例 6、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0082 一、 培养基的制备 0083 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0084 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳。

30、源为 100g 葡萄糖， 氮源由 70g 酵母膏和 70g 蛋白胨组成， 其它配方同实施例 3 的发酵培养基。 0085 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0086 同实施例 3 的步骤二。 0087 三、 短小乳酸菌素产量 0088 同实施例 1 的步骤三。 0089 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 10.20mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 8.28mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0090 实施例 7、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0091 一、 培养基的制备 0092 种子培养基。

31、 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0093 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳源为 10g 蔗糖， 氮源由 2.5g 酵母膏和 2.5g 硫酸铵组成， 其它配方同实施例 3 的发酵培养基。 0094 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0095 同实施例 3 的步骤二。 说 明 书 CN 102605029 A 7 6/9 页 8 0096 三、 短小乳酸菌素产量 0097 同实施例 1 的步骤三。 0098 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 12.54mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 。

32、10.20mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0099 实施例 8、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0100 一、 培养基的制备 0101 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0102 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳源为 200g 蔗糖， 氮源由 150g 酵母膏和 150g 硫酸铵组成， 其它配方同实施例 3 的发酵培养基。 0103 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0104 同实施例 3 的步骤二。 0105 三、 短小乳酸菌素产量 0106 同实施例 1 的步骤三。 0107 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 10.20mm， 而。

33、对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 9.08mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0108 实施例 9、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0109 一、 培养基的制备 0110 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0111 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳源为 100g 蔗糖， 氮源由 70g 酵母膏和 70g 硫酸铵组成， 其 它配方同实施例 3 的发酵培养基。 0112 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0113 同实施例 3 的步骤二。 0114 三、 短小乳酸菌素产量 0115 同实施例 1 的。

34、步骤三。 0116 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 9.20mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.88mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0117 实施例 10、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0118 一、 培养基的制备 0119 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0120 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳源为 100g 糖蜜， 氮源由 70g 蛋白胨和 70g 硫酸铵组成， 其 它配方同实施例 3 的发酵培养基。 0121 二、 短乳杆菌细菌素的制备 。

35、0122 同实施例 3 的步骤二。 0123 三、 短小乳酸菌素产量 0124 同实施例 1 的步骤三。 0125 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 9.80mm， 而对照组抑 说 明 书 CN 102605029 A 8 7/9 页 9 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 8.40mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0126 实施例 11、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0127 一、 培养基的制备 0128 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0129 发酵培养基 (pH6.0)。

36、 ： 碳源为 200g 糖蜜， 氮源由 150g 蛋白胨和 150g 硫酸铵组成， 其它配方同实施例 3 的发酵培养基。 0130 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0131 同实施例 3 的步骤二。 0132 三、 短小乳酸菌素产量 0133 同实施例 1 的步骤三。 0134 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 10.20mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 8.86mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0135 实施例 12、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0136 一、 培养基的制备 0137。

37、 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0138 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳源为 10g 糖蜜， 氮源由 2.5g 蛋白胨和 2.5g 硫酸铵组成， 其它配方同实施例 3 的发酵培养基。 0139 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0140 同实施例 3 的步骤二。 0141 三、 短小乳酸菌素产量 0142 同实施例 1 的步骤三。 0143 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 8.28mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.10mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。

38、。 0144 实施例 13、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0145 一、 培养基的制备 0146 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0147 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳源为 10g 葡萄糖， 氮源为 5g 酵母膏， 其它配方同实施例 3 的发酵培养基。 0148 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0149 同实施例 3 的步骤二。 0150 三、 短小乳酸菌素产量 0151 同实施例 1 的步骤三。 0152 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 8.06mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，。

39、 抑菌圈直径可达 6.80mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0153 实施例 14、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 说 明 书 CN 102605029 A 9 8/9 页 10 0154 一、 培养基的制备 0155 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0156 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳源为 200g 葡萄糖， 氮源为 300g 酵母膏， 其它配方同实施 例 3 的发酵培养基。 0157 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0158 同实施例 3 的步骤二。 0159 三、 短小乳酸菌素产量 0160 同实施例 1 的步骤三。 0161 无细胞滤液对大。

40、肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.70mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.10mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0162 实施例 15、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0163 一、 培养基的制备 0164 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0165 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳源为 10g 蔗糖， 氮源为 5g 硫酸铵， 其它配方同实施例 3 的 发酵培养基。 0166 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0167 同实施例 3 的步骤二。 0168 三、 短小乳酸。

41、菌素产量 0169 同实施例 1 的步骤三。 0170 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.50mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 6.94mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0171 实施例 16、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0172 一、 培养基的制备 0173 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0174 发酵培养基(pH6.0) ： 碳源为200g蔗糖， 氮源为300g硫酸铵， 其它配方同实施例3 的发酵培养基。 0175 二、 短乳杆菌细菌素的制备。

42、 0176 同实施例 3 的步骤二。 0177 三、 短小乳酸菌素产量 0178 同实施例 1 的步骤三。 0179 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 8.40mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.44mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0180 实施例 17、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0181 一、 培养基的制备 0182 种子培养基 (pH5.0) ： 同实施例 3 的种子培养基。 0183 发酵培养基(pH6.0) ： 碳源为200g糖蜜， 氮源为300g蛋白胨， 其它配方同。

43、实施例3 说 明 书 CN 102605029 A 10 9/9 页 11 的发酵培养基。 0184 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0185 同实施例 3 的步骤二。 0186 三、 短小乳酸菌素产量 0187 同实施例 1 的步骤三。 0188 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 8.22mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.20mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 0189 实施例 18、 短乳杆菌细菌素的制备和应用 0190 一、 培养基的制备 0191 种子培养基 (pH5.0) ：。

44、 同实施例 3 的种子培养基。 0192 发酵培养基 (pH6.0) ： 碳源为 10g 糖蜜， 氮源为 5g 蛋白胨， 其它配方同实施例 3 的 发酵培养基。 0193 二、 短乳杆菌细菌素的制备 0194 同实施例 3 的步骤二。 0195 三、 短小乳酸菌素产量 0196 同实施例 1 的步骤三。 0197 无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.92mm， 而对照组抑 菌圈直径仅为 7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用， 抑菌圈直径可达 7.88mm， 而对照组抑菌圈直径仅为 6.50mm。 说 明 书 CN 102605029 A 11 1/1 页 12 图 1 说 明 书 附 图 CN 102605029 A 12 。