杨梅根药材的含量测定方法.pdf

本发明涉及一种天然植物药材的质量控制方法，涉及药材的有效成分的含量分析测定。本发明所述的杨梅根药材的含量测定方法是用高效液相色谱法测定杨梅根药材中杨梅苷的含量。本发明所述的测定方法由以下步骤组成：色谱条件与系统适用性试验、对照品溶液制备、供试品溶液制备、测定法测定，即得。本发明提供了一种杨梅根药材的含量测定方法。能够方便、快捷、准确地对杨梅根药材的质量进行控制。

1、  一种杨梅根药材的含量测定方法，其特征在于是用高效液相色谱法测定杨梅根药材中杨梅苷的含量。

2、  如权利要求1所述的杨梅根药材的含量测定方法，其特征在于由以下步骤组成：
色谱条件与系统适用性试验  用辛基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸溶液12∶88为流动相；检测波长为260nm；柱温：40℃；理论塔板数按杨梅苷计算应不低于3000；
对照品溶液制备  精密称取杨梅苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液制备取杨梅根药材粉末0.1克，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流至甲醇提取液无色，放冷，取甲醇提取液置于量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

杨梅根药材的含量测定方法
技术领域
本发明涉及一种天然植物药材的质量控制方法，涉及药材的有效成份的含量分析测定。
背景技术
杨梅根是一种常用的中药药材，运用于多种中成药中，如千紫红颗粒、千紫红胶囊等。但是，作为制药领域中的原料药材，其有效成分的含量必须达到某一标准，否则，会大大的影响其在工业上的利用价值和所制作成药的质量。到目前为止，在现有技术中尚没有报道对杨梅根药材中有效成份的含量测定方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种杨梅根药材的含量测定方法。
本发明所述的杨梅根药材的含量测定方法是用高效液相色谱法测定杨梅根药材中杨梅苷的含量。
本发明所述的杨梅根药材的含量测定方法由以下步骤组成：
色谱条件与系统适用性试验  用辛基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸溶液(12∶88)为流动相；检测波长为260nm；柱温：40℃；理论塔板数按杨梅苷计算应不低于3000；
对照品溶液制备  精密称取杨梅苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液制备  取杨梅根药材粉末(过三号筛)0.1克，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流至甲醇提取液无色，放冷，取甲醇提取液置于量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
含量测定研究：
含量测定指标的选择  选择杨梅苷为含量测定指标。
仪器与试剂和试验材料  高效液相色谱仪：AgiLent1100系列，包括G1314A紫外检测器、G1316A柱温箱、G1313A自动进样器、G1311A四元梯度泵、G1322A真空脱气机、AgiLent ChemStation工作站。
色谱柱  ZORBAX EcLipse XDB-C8(4.6×150mm，5-Micron)，高纯水采用蒸馏水过MILLIPORE SimpLicity 185纯水机制备；乙腈(HPLC)，甲醇(AR)，乙醇(AR)，磷酸(AR)。
杨梅苷对照品(纯度＞98％)，中国科学院昆明植物所提供。
试验条件选择  (1)提取方法  根据文献资料及药材特点，采用甲醇为溶剂，进行索氏提取。经方法学验证，该方法可行。
(2)含量测定条件
检测波长的选择  以流动相为溶剂空白，在200-400nm波长范围内对对照品进行扫描，杨梅苷在260nm、360nm处有最大吸收，经试验在检测波长为260nm色谱图上无干扰峰，且260nm处测定的灵敏度较高，故设定检杨梅苷测定波长为260nm。
色谱柱的选择  在相同色谱条件下，选用下列色谱柱进行分析。不同型号色谱柱对样品分离度、保留时间影响差异大。综合分离度、峰形、保留时间等因素，辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱对该样品的分析较十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱好，故正文采用辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱作为分析柱。
Zorbax Eclipse^ XDB-C18，4.6×250mm，5-Micron
Zorbax Eclipse^ XDB-C8， 4.6×150mm，5-Micron
Zorbax Eclipse^ XDB-C8， 4.6×250mm，5-Micron
LiChrospher^100 RP-18e， 4.6×250mm，5-Micron
流动相配比的选择  根据相关文献和资料，选择乙腈-水为流动相，加磷酸适量调pH＝2～3以减少色谱峰的拖尾。杨梅苷的测定中比较了(10∶90)、(12∶88)、(15∶85)等不同比例。综合分离度、峰形对称性、保留时间等因素，表明测定杨梅苷流动相比例为(12∶88)效果较好，杨梅苷与其相邻组份的分离度及峰的对称性均好。
柱温  在相同色谱条件下，分别以25℃、30℃、40℃的柱温进行色谱分析，随柱温的下降，柱压升高，杨梅苷出峰时间延长，但对样品分离度影响不大。为使待测成分峰的保留时间稳定，故设置柱温为40℃。
(3)系统适用性试验  根据样品的HPLC图谱，测量杨梅苷峰的保留时间、半峰宽等，计算色谱柱的理论板数均大于3000，杨梅苷与相邻成分峰计算分离度，均大于2.0。因此，正文规定以杨梅苷峰计，理论板数应大于3000。
(4)方法学考察
线性关系考察  精密称取杨梅苷对照品6.25mg置25ml量瓶中，加流动相溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置25ml量瓶中，加流动相溶液稀释至刻度，摇匀即得。分别精密吸取对照品溶液1，2，5，10，15，20，25，30μL按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值(mAU*s)为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，杨梅苷：Y＝2387.6X-5.1516，r＝0.9999。结果表明杨梅苷进样量在0.1042～2.999μg范围内有良好的线性关系(见图1)。
杨梅苷线性试验