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具有 34 位脯氨酸替换的神经肽 Y 的类似物
    发明领域 本发明涉及神经肽 Y 的新的类似物、 包含其的药物组合物、 包含其的药物制剂， 以 及治疗由神经肽 Y 受体结合所介导的疾病或病症的方法。更具体而言， 本发明涉及具有在 34 位的脯氨酸替换和本文所定义的其他替换的神经肽 Y 的新的类似物， 其与神经肽 Y2 受体 亚型相比选择性地结合神经肽 Y1 受体亚型。
     发明背景
     神经肽 Y(“NPY” ) 是 36 个氨基酸的肽神经递质， 它是肽类的胰腺家族的成员， 与 胰腺多肽和肽 YY 具有显著的序列同源性。人的神经肽 Y(“hNPY” ) 具有以下序列 ： H-Tyr -Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-TyrTyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ ID NO ： 1)。NPY 是从猪脑中发现、 分离和测序的， 并且由于其分离自神经组织而且在氨基和羧基末 端的氨基酸都是酪氨酸而被命名为 “神经肽 Y” 。
     NPY 及其他该肽家族的成员都具有由 N- 末端聚脯氨酸螺旋和与产生发夹样环的 β- 转角相连的两性 α- 螺旋构成的四级结构， 其有时称为 “胰多肽折叠” 。这些螺旋通过 疏水相互作用保持在一起。酰胺化的 C- 末端从发夹环中伸出。
     在其发现之后， NPY 被确认为中枢神经系统中最丰富的肽， 具有广泛的分布， 包括 皮质、 脑干、 海马、 下丘脑、 杏仁核和丘脑， 以及存在于交感神经元的外周神经系统和肾上腺 嗜铬细胞中。
     NPY 看起来符合主要的神经递质标准， 因为其储存在突触颗粒中， 当电神经刺激时 释放， 在特定受体处发挥作用。很清楚， NPY 是其功能范围内的、 可能是脑中的重要信使， 此 处 NPY 有效地抑制腺苷酸环化酶的活性， 诱导钙的细胞内水平上升。中枢注射 NPY 导致血 压改变， 增加进食， 增加脂肪储存， 升高血糖和胰岛素， 降低运动行为， 降低体温， 和僵住。
     NPY 表现为与一族密切相关的受体相互作用。这些受体通常根据不同的组织和 受体与神经肽 Y 的不同片段和密切相关的 PYY 的结合能力划分为几种亚型。Y1 受体亚型 ( “NPY-Y1 受体” ) 是主要的血管 NPY 受体。Y2 受体亚型 ( “NPY-Y2 受体” ) 也能够在血管平 滑肌上发生结合后作用。Y3 受体亚型 ( “NPY-Y3 受体” ) 是 NPY 特异性的， 不结合 PYY。该受 体可能存在于肾上腺组织、 髓质、 心脏和脑干等区域中。对于神经肽 Y 和神经肽 Y 受体的综 述可参阅例如 C.Wahlestedt 和 D.Reis， Annual Review ofPharmacology and Toxicology， 33 ： 309-352(1993)。专利合作条约 (“PCT” ) 公布号 WO 95/00161 描述了一系列的 NPY 拮 抗剂和激动剂， 用于控制生物学活性， 例如肥胖和心血管功能。
     欧洲专利 0759441 和美国专利 5,576,337 报道了与神经肽 Y 过量有关的生理学 病症， 包括 ： 涉及心脏、 血管和肾系统的病症或疾病， 例如血管痉挛、 心力衰竭、 中风、 心脏肥 大、 血压上升、 绞痛、 心肌梗塞、 心脏性猝死、 心律失常、 外周血管病和异常的肾功能， 例如液 体流动受损、 异常的物质转运或肾衰竭 ； 与交感神经活动增加有关的病症， 例如在冠状动脉 手术和胃肠道操作和手术的期间和之后 ； 脑病和与中枢神经系统有关的疾病， 例如脑梗塞、 神经变性、 癫痫、 中风和与中风相关的病症、 脑血管痉挛和出血、 抑郁、 焦虑、 精神分裂症和
     痴呆 ； 与疼痛或伤害感受有关的病症 ； 与异常的胃肠运动和分泌有关的病症， 例如不同形 式的肠梗阻， 尿失禁和克罗恩病 ； 异常的饮水和摄食紊乱， 例如厌食症和代谢性疾病 ； 与性 功能障碍和生殖系统紊乱有关的疾病 ； 与炎症有关的疾病或病症 ； 呼吸系统疾病， 例如哮 喘和与哮喘相关的病症和支气管收缩 ； 与异常的激素释放有关的疾病， 例如促黄体激素、 生 长激素、 胰岛素和催乳素。
     Reubi 的 PCT 公布号 WO 02/43776 报道了结合 NPY-Y1 受体的化合物在制备诊断或 治疗表达 NPY-Y1 受体的肿瘤的药物组合物中的用途， 特别是乳腺癌、 卵巢癌和胶质母细胞 瘤。
     有许多专利和专利出版物公开了一些 NPY 类似物及其用途， 例如美国专利号 5,026,685、 美国专利号 5,328,899、 美国专利号 6,511,984、 PCT 公布号 WO 02/43776、 PCT 公布号 WO2007/039318 等。尽管有以前这些内容， 但仍然不断需要具有改善的效能和 / 或 选择性和 / 或体外或体内特性的 NPY 类似物。
     发明概述
     一方面， 本发明提供了下式 (I)(SEQ ID NO ： 2) 的 hNPY 的肽变体 ： 2 3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
     (R R )-A -A -A -A -A -A -A -A -A -A -A -A -A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-Pro-A35-A36-A37-R1
     (I)
     其中 ：
     A1 是 Tyr、 (X1， X2， X3， X4， X5)Phe 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A2 是 Pro、 3Hyp、 顺式 -3Hyp、 4Hyp 或顺式 -4Hyp ； 3
     A 是 Ser、 Abu、 Aib、 Ala、 Thr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A4 是 Lys、 Arg、 hArg、 Dab、 Dap、 Orn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A5 是 Pro、 3Hyp、 顺式 -3Hyp、 4Hyp 或顺式 -4Hyp ； 6
     A 是 Asp、 Aib、 Asn、 Gln、 Glu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A7 是 Asn、 Aib、 Gln 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A8 是 Pro、 3Hyp、 顺式 -3Hyp、 4Hyp 或顺式 -4Hyp ； 9
     A 是 Gly、 Aib 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A10 是 Glu、 Aib、 Asn、 Asp、 Gln 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A11 是 Asp、 Aib、 Asn、 Gln、 Glu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A12 是 Ala、 Abu、 Aib、 Nva、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A13 是 Pro、 3Hyp、 顺式 -3Hyp、 4Hyp 或顺式 -4Hyp ； 14
     A 是 Ala、 Abu、 Aib、 Nva、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A15 是 Glu、 Aib、 Asn、 Asp、 Gln 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A16 是 Asp、 Aib、 Asn、 Gln、 Glu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A17 是 Met、 Acc、 Aib、 Cha、 Ile、 Leu、 hLeu、 Nle、 Nva、 Tle、 Val 或 HN-CH((CH2) 4 5 n-N(R R ))-C(O) ；
     A18 是 Ala、 Abu、 Aib、 Nva、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A19 是 Arg、 hArg、 Apc、 Dab、 Dap、 Lys、 Orn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A20 是 Tyr、 (X1， X2， X3， X4， X5)Phe 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；A21 是 Tyr、 (X1， X2， X3， X4， X5)Phe 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A22 是 Ser、 Abu、 Aib、 Ala、 Thr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A23 是 Ala、 Abu、 Aib、 Nva、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A24 是 Leu、 Acc、 Cha、 Ile、 hLeu、 Nle、 Nva、 Tle、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A25 是 Arg、 hArg、 Dab、 Dap、 Lys、 Orn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A26 是 His、 2Pal、 3Pal、 4Pal 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A27 是 Tyr、 (X1， X2， X3， X4， X5)Phe 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A28 是 Ile、 Acc、 Cha、 Leu、 hLeu、 Nle、 Nva、 Tle、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A29 是 Asn、 Aib、 Gln 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A30 是 Leu、 Acc、 Cha、 Ile、 hLeu、 Nle、 Nva、 Tle、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A31 是 Ile、 Acc、 Cha、 Leu、 hLeu、 Nle、 Nva、 Tle、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A32 是 Thr、 Aib、 Ser 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A33 是 Arg、 hArg、 Dab、 Dap、 Lys、 Orn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A35 是 Arg、 Aic、 Apc、 hArg、 Dab、 Dap、 Lys、 Orn、 NH2Phe、 NH2CH2Phe 或 HN-CH((CH2) 4 5 n-N(R R ))-C(O) ；
     A36 是 Tyr、 Aic、 (X1， X2， X3， X4， X5)Phe 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A37 是 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) 或被删除 ；
     R1 是 OH、 NH2、 (C1-30) 烷氧基或 NH-X6-CH2-X7， 其中 X6 是 (C1-40) 烷基或 (C2-40) 链烯 基， 且其中 X7 是 H、 OH、 CO2H 或 C(O)-NH2 ； 2 3
     R 和 R 各自独立地选自 ： H、 (C1-30) 烷基、 (C1-30) 杂烷基、 (C1-30) 酰基、 (C2-30) 链烯 基、 (C2-30) 炔基、 芳基 (C1-30) 烷基、 芳基 (C1-30) 酰基、 取代的 (C1-30) 烷基、 取代的 (C1-30) 杂烷 基、 取代的 (C2-30) 酰基、 取代的 (C2-30) 链烯基、 取代的 (C2-30) 炔基、 取代的芳基 (C1-30) 烷基 和取代的芳基 (C1-30) 酰基 ；
     条件是当 R2 是 (C1-30) 酰基、 芳基 (C1-30) 酰基、 取代的 (C2-30) 酰基或取代的芳基 3 (C1-30) 酰基时， R 是 H、 (C1-30) 烷基、 (C1-30) 杂烷基、 (C2-30) 链烯基、 (C2-30) 炔基、 芳基 (C1-30) 烷基、 取代的 (C1-30) 烷基、 取代的 (C1-30) 杂烷基、 取代的 (C2-30) 链烯基、 取代的 (C2-30) 炔基 或取代的芳基 (C1-30) 烷基 ；
     R4 和 R5 各自独立地是 ： H、 (C1-40) 烷基、 (C1-40) 杂烷基、 (C1-40) 酰基、 (C2-40) 链烯基、 (C2-40) 炔基、 芳基 (C1-40) 烷基、 芳基 (C1-40) 酰基、 取代的 (C1-40) 烷基、 取代的 (C1-40) 杂烷基、 取代的 (C1-40) 酰基、 取代的 (C2-40) 链烯基、 取代的 (C2-40) 炔基、 取代的芳基 (C1-40) 烷基、 取 4 代的芳基 (C1-40) 酰基、 (C1-40) 烷基磺酰基或 C(NH)-NH2， 其中当 R 是 (C1-40) 酰基、 芳基 (C1-40) 酰基、 取代的 (C1-40) 酰基、 取代的芳基 (C1-40) 酰基、 (C1-40) 烷基磺酰基或 C(NH)-NH2 时， 则 R5 是 H 或 (C1-C40) 烷基、 (C1-40) 杂烷基、 (C2-40) 链烯基、 (C2-40) 炔基、 芳基 (C1-40) 烷基、 取代的 (C1-40) 烷基、 取代的 (C1-40) 杂烷基、 取代的 (C2-40) 链烯基、 取代的 (C2-40) 炔基或取代的芳基 (C1-40) 烷基 ；
     n 各自独立地是 1、 2、 3、 4或5； 1 2 3 4 5
     X、 X、 X、 X 和 X 各自独立地是 ： H、 F、 Cl、 Br、 I、 (C1-10) 烷基、 取代的 (C1-10) 烷基、 芳基、 取代的芳基、 OH、 CH2NH2、 NH2、 NO2 或 CN ； 且
     条件是该化合物包含至少一个选自下述的氨基酸 ： Aib、 Acc 和 HN-CH((CH2)9102325544 A CN 102325557n说明书4/14 页-N(R4R5))-C(O)， 其中所述 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) 不是 Arg、 hArg、 Lys、 Orn、 Dab 或 Dap。
     在上面式 I 范围内的亚组 (IA) 的化合物是下述那些 ：
     A1 是 Tyr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A2 是 Pro ；
     A3 是 Ser 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A4 是 Lys 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A5 是 Pro ；
     A6 是 Asp 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A7 是 Asn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A8 是 Pro ；
     A9 是 Gly 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A10 是 Glu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A11 是 Asp 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A12 是 Ala 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A13 是 Pro ； A14 是 Ala 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A15 是 Glu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A16 是 Asp 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A17 是 Met 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A18 是 Ala 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A19 是 Arg 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A20 是 Tyr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A21 是 Tyr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A22 是 Ser 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A23 是 Ala 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A24 是 Leu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A25 是 Arg 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A26 是 His 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A27 是 Tyr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A28 是 Ile 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A29 是 Asn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A30 是 Leu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A31 是 Ile、 Leu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A32 是 Thr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A33 是 Arg 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A35 是 Arg 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A36 是 Tyr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A37 是 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) 或被删除 ；R1 是 NH2 ； R2 和 R3 各自独立地是 ： H 或 (C1-30) 酰基 ； 2 条件是当 R 是 (C1-30) 酰基时， R3 是 H ； R4 和 R5 各自独立地是 ： H 或 (C1-40) 酰基 ； n是4； 且 1 2 X、 X、 X3、 X4 和 X5 各自独立地是 ： H、 CH2NH2 或 NH2。 4 5 在亚组 (IA) 中， HN-CH((CH2)n-N(R R ))-C(O) 优选是 Lys(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)。 优选的式 (I) 或亚组 (IA) 的化合物是 ： 实 施 例 1： [Leu31， Pro34， Lys36(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 2： [Leu31， Pro34， Lys35(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 3： [Lys24(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 4： [Lys23(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 5： [Lys22(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 6： [Lys21(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 7： [Lys20(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实施例8： [Lys19(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 9： [Lys18(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 10 ： [Lys17(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 11 ： [Lys16(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 12 ： [Lys15(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 13 ： [Lys14(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 14 ： [Lys12(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 15 ： [Lys11(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 16 ： [Lys10(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID11NO ： 3)
     NO ： 4)
     NO ： 5)
     NO ： 6)
     NO ： 7)
     NO ： 8)
     NO ： 9)
     NO ： 10)
     NO ： 11)
     NO ： 12)
     NO ： 13)
     NO ： 14)
     NO ： 15)
     NO ： 16)
     NO ： 17)
     102325544 A CN 102325557说明书6/14 页NO ： 18)
     实 施 例 17 ： [Lys9(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 18 ： [Lys7(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 19 ： [Lys6(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 20 ： [Lys4(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 21 ： [Lys3(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实施例 22 ： [Lys1(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leuu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 23 ： [Leu31， Pro34， Lys37(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-37)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 24 ： [Leu31， Lys33(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 25 ： [Leu31， Lys32(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实施例 26 ： [Lys31(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID NO ： 28) 30 ε 31 34 实 施 例 27 ： [Lys (N -C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu ， Pro ]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 28 ： [Lys29(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 29 ： [Lys28(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 30 ： [Lys27(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 31 ： [Lys26(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 32 ： [Lys25(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ IDNO ： 19)
     NO ： 20)
     NO ： 21)
     NO ： 22)
     NO ： 23)
     NO ： 24)
     NO ： 25)
     NO ： 26)
     NO ： 27)
     NO ： 29)
     NO ： 30)
     NO ： 31)
     NO ： 32)
     NO ： 33)
     NO ： 34) 实施例 33 ： [CH3(CH2)8(CO)-Tyr1， Nle17， Pro34]hNPY(1-36)-NH2， (SEQ ID NO ： 37)。
     发明详述
     本文所用的术语 “氨基酸” 是指任何天然或非天然的氨基酸， 包括但不限于 α- 氨 基酸、 β- 氨基酸或 γ- 氨基酸， 并且可以是 D- 或 L- 氨基酸， 除非另有说明。
     除 了 N- 末 端 的 氨 基 酸 以 外， 在 本 文 中 所 有 氨 基 酸 缩 写 ( 例 如 Ala) 具 有 结 构 -NH-C(R)(R ′ )-CO-， 其中 R 和 R ′各自独立地是氢或氨基酸侧链 ( 例如对于 Ala， R ＝ CH3 和 R ′＝ H) 或 R 和 R ′可以连接形成环系统。对于 N- 末端氨基酸， 缩写代表结构
     (R2R3)-N-C(R)(R′ )-CO-， 其中 R2 和 R3 如式 (I) 中所定义。
     本发明的肽也通过另一种方式表示， 例如 [Pro34]hNPY(1-36)-NH2(SEQ ID NO ： 1)， 具有从括号内显示的天然序列替换的氨基酸， 例如在 hNPY 中用 Pro 替换 Gln。在 hNPY(1-36)-NH2(SEQ ID NO ： 1) 中 的 指 示 “NH2”表 示 该 肽 的 C- 末 端 是 酰 胺 化 的， 而 hNPY(1-36)-OH(SEQ ID NO ： 36) 表示游离酸形式。
     下面提供了本申请为了方便引用而使用的一些缩写的列表， 但是， 此处未定义的 本申请所用的任何缩写并不以与其公认含义相反的方式使用。
     Abu α- 氨基丁酸
     Acc 1- 氨基 -1- 环 (C3-9) 烷基羧酸， 其中
     A3c 表示 1- 氨基 -1- 环丙烷羧酸 ；
     A4c 表示 1- 氨基 -1- 环丁烷羧酸 ；
     A5c 表示 1- 氨基 -1- 环戊烷羧酸 ； 和
     A6c 表示 1- 氨基 -1- 环己烷羧酸
     Adc 10- 氨基癸酸
     Ado 12- 氨基十二酸
     Ahp 7- 氨基庚酸
     Ahx 6- 氨基己酸
     Aib α- 氨基异丁酸
     Aic 2- 氨基茚满 -2- 甲酸
     Ala 或 A 丙氨酸
     Anc 9- 氨基壬酸
     Aoc 8- 氨基辛酸
     Apc 4- 氨基 -4- 羧基哌啶， 由以下结构表示 ：
     其中， 平行线 “＝” 表示该部分与其他部分或序列的连接点。 Apn 5- 氨基戊酸 Arg 或 R 精氨酸 hArg 高精氨酸 Asn 或 N 天冬酰胺 Asp 或 D 天冬氨酸 Aun 11- 氨基十一酸 Cha β- 环己基丙氨酸 Cys 或 C 半胱氨酸 Dab 2， 4- 二氨基丁酸Dap 2， 3- 二氨基丙酸 Dhp 3， 4- 脱氢脯氨酸 Dmt 5， 5- 二甲基噻唑烷 -4- 甲酸 Gaba 4- 氨基丁酸 Gln 或 Q 谷氨酰胺 Glu 或 E 谷氨酸 Gly 或 G 甘氨酸 His 或 H 组氨酸 3Hyp 反式 -3- 羟基 -L- 脯氨酸， 即 (2S， 3S)-3- 羟基吡咯烷 -2- 甲酸 顺式 -3Hyp 顺式 -3- 羟基 -L- 脯氨酸， 即 (2S， 3R)-3- 羟基吡咯烷 -2- 甲酸 4Hyp 4- 羟基脯氨酸， 即 (2S， 4R)-4- 羟基吡咯烷 -2- 甲酸 顺式 -4Hyp 顺式 -4- 羟基 -L- 脯氨酸， 即 (2S， 4S)-4- 羟基吡咯烷 -2- 甲酸 Ile 或 I 异亮氨酸 Inc 二氢吲哚 -2- 甲酸 Inp 六氢异烟酸 Ktp 4- 氧代脯氨酸 Leu 或 L 亮氨酸 hLeu 高亮氨酸 Lys 或 K 赖氨酸 Met 或 M 甲硫氨酸 Nip 六氢烟酸 Nle 正亮氨酸 ε N 表示括号内的该实体与 Lys 侧链的 ε- 氮相偶联。 Nva 缬氨酸 Oic 八氢吲哚 -2- 甲酸 Orn 鸟氨酸 2-Pal β-(2- 吡啶基 ) 丙氨酸 3-Pal β-(3- 吡啶基 ) 丙氨酸 4-Pal β-(4- 吡啶基 ) 丙氨酸 Phe 或 F 苯丙氨酸 hPhe 高苯丙氨酸 4NH2CH2Phe 4- 氨基甲基 - 苯丙氨酸 4NH2Phe 4- 氨基 - 苯丙氨酸 Pro 或 P 脯氨酸 hPro 高脯氨酸 Sar 肌氨酸或 N- 甲基甘氨酸 Ser 或 S 丝氨酸 Thr 或 T 苏氨酸 Tic 1， 2， 3， 4- 四氢异喹啉 -3- 甲酸Tle 叔亮氨酸
     Val 或 V 缬氨酸
     “烷基” 是指含有一个或多个碳原子的烃基团， 其中多个碳原子 ( 如果存在的话 ) 通过单键相连， 其实例包括但不限于甲基、 乙基、 丙基和丁基。烷基烃基团可以是直链的或 含有一个或多个支链或环状基团， 其实例包括但不限于异丙基和叔丁基。
     “取代的烷基” 是指其中烃基团的一个或多个氢原子被一个或多个选自下述的取 代基替换的烷基 ： 卤素 ( 即， 氟、 氯、 溴和碘 )、 OH、 CN、 SH、 NH2、 NHCH3、 NO2、 被 1-6 个卤素取代 的 (C1-2) 烷基、 CF3、 OCH3、 OCF3， 和 (CH2)0-4-COOH。在不同的实施方案中， 存在 1、 2、 3或4个 取代基。(CH2)0-4-COOH 的存在导致产生烷基酸。含有 (CH2)0-4-COOH 的烷基酸的实例包括但 不限于 2- 降莰烷乙酸、 叔丁酸和 3- 环戊基丙酸。
     “杂烷基” 是指其中烃基团的一个或多个碳原子被一个或多个选自下述的原子或 基团替换的烷基 ： 氨基、 酰氨基、 O、 S、 N 和羰基。在不同的实施方案中， 存在 1 或 2 个杂原 子。
     “取代的杂烷基” 是指其中烃基团的一个或多个氢原子被一个或多个选自下述的 取代基替换的杂烷基 ： 卤素 ( 即， 氟、 氯、 溴和碘 )、 OH、 CN、 SH、 NH2、 NHCH3、 NO2、 被 1-6 个卤素 取代的 (C1-2) 烷基、 CF3、 OCH3、 OCF3 和 (CH2)0-4-COOH。在不同的实施方案中， 存在 1、 2、 3或4 个取代基。
     “链烯基” 是指由两个或多个碳构成的烃基团， 其中存在一个或多个碳 - 碳双键， 其 实例包括但不限于乙烯基、 烯丙基、 丁烯基和丙烯基。 链烯基烃基团可以是直链的或含有一 个或多个支链或环状基团， 其实例包括但不限于正丁烯基与叔丁烯基和正戊烯基与环戊烯 基。
     “取代的链烯基” 是指其中一个或多个氢被一个或多个选自下述的取代基替换的 链烯基 ： 卤素 ( 即， 氟、 氯、 溴和碘 )、 OH、 CN、 SH、 NH2、 NHCH3、 NO2、 被 1-6 个卤素取代的 (C1-2) 烷基、 CF3、 OCH3、 OCF3 和 (CH2)0-4-COOH。在不同的实施方案中， 存在 1、 2、 3 或 4 个取代基。
     “芳基” 是指含有至少一个具有共轭的 π- 电子系统 ( 含有最多两个共轭或稠合的 环系统 ) 的环的任选取代的芳香基团。芳基包括但不限于碳环芳基、 杂环芳基和联芳基基 团。优选地， 芳基是 5- 或 6 元环。杂环芳基优选的原子包括但不限于一个或多个硫、 氧和 氮。芳基的实例包括但不限于苯基、 1- 萘基、 2- 萘基、 吲哚、 喹啉、 2- 咪唑和 9- 蒽。芳基的 取代基选自 ： (C1-4) 烷基、 (C1-4) 烷氧基、 卤素 ( 即， 氟、 氯、 溴和碘 )、 OH、 CN、 SH、 NH2、 NO2、 被 1-5 个卤素取代的 (C1-2) 烷基、 CF3、 OCF3 和 (CH2)0-4-COOH。在不同的实施方案中， 芳基包含 0、 1、 2、 3 或 4 个取代基。
     “烷基芳基” 是指连接有如上所定义的 “芳基” 的 “烷基” 。
     术语 “环烷基” 意图包括具有本领域技术人员已知的指定碳数的单 - 环烷基基团 或联 - 环烷基基团。
     术语 “杂环” 包括具有一个或多个杂原子例如氧、 氮和硫的单环和双环系统。环系 统可以是芳香性的， 例如吡啶、 吲哚、 喹啉、 嘧啶、 噻吩、 呋喃、 苯并噻吩、 四唑、 二氢吲哚、 吲 唑、 N- 甲酰基吲哚、 苯并咪唑、 噻唑和噻二唑。环系统也可以是非芳香性的， 例如但不限于 吡咯烷、 哌啶、 吗啉等。
     合成本发明的化合物能够并且是使用本文实施例所公开的技术以及本领域已知的技 术进行制备。例如 NPY 类似物的多肽区域可以通过化学或生物化学方法合成和 / 或修饰。 参见例如 Stewart， J.M. 等人， Solid Ph ase Synth esis， Pierce Chemical Co.， 第二版 (1984) ； 和参见例如 Sambrook 等人， MolecularCloning， ALaboratory Manual， 第二版， Cold Spring Harbor LaboratoryPress(1989) 对于生物化学合成的技术例子， 包括将核酸引入 细胞并表达核酸。
     表 1 给出了本文举例说明的化合物的物理数据。
     表1
     实施例编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 分子量 ( 预期 ) 4416.1 4423.1 4466.1 4508.2 4492.2 4416.1 4416.1 4423.1 4508.2 4448.0 4464.2 4450.1 4508.2 4508.2 4464.2 4450.1 4522.2 分子量 (ESI-MS) 4415.9 4423.4 4466.1 4508.2 4491.9 4416.4 4416.5 4423.2 4508.4 4448.2 4463.7 4450.5 4508.3 4508.4 4464.9 4450.3 4522.2 ％纯度 (HPLC) ＞ 99 ＞ 99 ＞ 98 ＞ 98 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 97 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 9916102325544 A CN 102325557 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33
     4465.1 4464.2 4451.1 4492.2 4416.1 4579.2 4423.1 4478.1 4466.1 4466.1 4465.1 4466.1 4416.1 4442.1 4423.1 4376.9说明书＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 95.211/14 页4465.1 4464.2 4451.2 4492.0 4416.3 4579.2 4422.8 4478.1 4466.3 4466.3 4465.2 4466.1 4416.4 4442.4 4423.2 4377.4体外放射性配体与 NPY-Y1 和 NPY-Y2 受体结合试验
     将 分 别 表 达 NPY-Y1 和 NPY-Y2 受 体 的 人 神 经 母 细 胞 瘤 细 胞 系 SK-N-MC 和 SK-N-BE2( 美国典型培养物收藏中心， Rockville， MD， USA) 在含有 10％胎牛血清和 5％鸡 胚提取物的 EMEM 中培养， 在 37℃和 95％空气和 5％ CO2 的潮湿气氛下维持。
     对于体外的 NPY-Y1 和 NPY-Y2 放射性配体结合试验， 收集适宜的细胞 (SK-N-MC， 用 于 NPY-Y1 ； SK-N-BE2， 用 于 NPY-Y2)， 在 20ml 的 冰 冷 的 50mM Tris-HCl 中 用 Brinkman Polytron(Westbury， NY， USA)( 设置 6， 15 秒 ) 匀浆。匀浆物通过离心 (39,000g/10min) 洗 0.1mg/ml 杆菌肽 涤两次， 最终沉淀重悬浮在 50mM Tris-HCl 中， 该溶液含有 2.5mM MgCl2、 (Sigma Chemical， St.Louis， MO， USA) 和 0.1％ BSA。
     对于试验， 将上述混悬液的等分试样 (0.4ml) 与 0.05nM[125I]PYY(2200Ci/mmol， Perkin-Elmer， Boston， MA) 在含有和不含 0.05ml 的未标记的竞争性测试肽的条件下一起 孵育。孵育 100 分钟 (25 ℃ ) 后， 所结合的 [125I]PYY 与游离的通过 GF/C 滤器 (Brandel，
     Gaithersburg， MD， USA) 快速过滤分离， 该滤器预先在 0.3 ％聚乙烯亚胺中浸泡。接着将 滤器用 5-ml 等分的冰冷的 50mM Tris-HCl 洗涤三次， 在滤器上捕获的结合的放射性通过 γ- 射线光谱 (Wallac LKB， Gaithersburg， MD， USA) 计数。特异性结合被定义为总的 [125I] PYY 结合减去在 1000nM PYY(Bachem， Torrence， CA， USA) 存在下的结合。抑制常数 (Ki) 使 用公知的 Cheng-Prusoff 方程计算， 该数据以及所述化合物对于 NPY-Y1 和 NPY-Y2 的选择 性在表 2 中给出。
     实施例 1-32 的每个化合物都进行了快速的上述放射性配体试验， 几乎所有化合 物都发现具有小于 100nM 的 Ki， 并且某些示例性的化合物具有在亚 nM 范围的 Ki 值。还发 现几乎所有的化合物相对于 NPY-Y2 具有对 NPY-Y1 的高选择性结合。
     表2
     实施例编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 对于 Y1 的 Ki(nM) 307.67 120.44 3.56 19.67 4.79 10.65 108.38 13.66 6.68 54.26 20.35 10.00 6.18 22.50 4.79 5.68 对于 Y2 的 Ki(nM) 367 643 668 ＞ 1000 133 19 13 15 10 11 26 611 383 270 40 23 选择性 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y2 Y1 Y1 Y2 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y118102325544 A CN 102325557 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33
     11.82 2.94 3.44 1.49 0.55 0.73 N/A N/A 87.47 35.17 10.35 29.67 53.58 187.50 8.24 21.57 0.84说明书41 74 33 75 138 80 N/A N/A 227 ＞ 1000 292 267 ＞ 1000 787 107 ＞ 1000 672 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 N/A N/A Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y113/14 页给药
     本发明的肽能够以可药用盐的形式提供。 所述的盐的实例包括但不限于与有机酸 ( 例如乙酸、 乳酸、 马来酸、 柠檬酸、 苹果酸、 抗坏血酸、 琥珀酸、 苯甲酸、 甲磺酸、 甲苯磺酸或 双羟萘酸 )、 无机酸 ( 例如盐酸、 硫酸或磷酸 ) 和多聚体酸 ( 例如鞣酸、 羧甲基纤维素、 聚乳 酸、 聚乙醇酸或聚乳酸 - 聚乙醇酸共聚物 ) 形成的盐。 制备本发明的肽的盐的通常方法是本 领域公知的， 可通过盐交换的标准方法实现。因此， 本发明的肽的 TFA 盐 ( 该 TFA 盐来自肽 纯化中使用制备型 HPLC 用含有 TFA 的缓冲液洗脱 ) 可被转化为另一种盐， 例如乙酸盐， 通 过将肽溶于少量的 0.25N 乙酸水溶液来实现。所得溶液应用于半制备的 HPLC 柱 (Zorbax， 300SB， C-8)。该柱用 (1)0.1N 乙酸铵水溶液洗脱 0.5 小时， (2) 用 0.25N 乙酸水溶液洗脱 0.5 小时， 和 (3) 用线性梯度 (20 ％ -100 ％的溶液 B， 历经 30min) 在 4ml/min 流速下洗脱
     ( 溶液 A 是 0.25N 乙酸水溶液 ； 溶液 B 是 0.25N 乙酸在乙腈 / 水 80 ∶ 20 中的溶液 )。收集 含有肽的流分并冷冻干燥至干。
     本发明组合物中的活性成分的剂量可以变化， 但是活性成分的量必须适合所获得 的剂型。所选择的剂量取决于所需疗效、 给药途径和治疗持续时间。通常， 本发明的活性有 -7 -4 效剂量为 1×10 到 200mg/kg/ 天， 优选 1×10 到 100mg/kg/ 天， 其可以以单剂量或分成多 个剂量施用。
     本发明化合物可以经口服、 胃肠外 ( 例如肌内、 腹膜内、 静脉内或皮下注射或移 植 )、 经鼻、 阴道、 直肠、 舌下或局部途径给药， 可以与可药用载体配制成提供适合于各种给 药途径的剂型。
     口服给药的固体剂型包括胶囊、 片剂、 丸剂、 粉剂和颗粒剂。 在这些固体剂型中， 活 性化合物与至少一种惰性可药用载体如蔗糖、 乳糖或淀粉混合。这些剂型也可包含如常规 操作的其它非上述惰性稀释剂的物质， 例如润滑剂如硬脂酸镁。 在胶囊、 片剂和丸剂的情况 下， 所述剂型也可包含缓冲剂。片剂和丸剂另外可制备含有肠包衣。
     口服给药的液体剂型包括但不限于可药用的乳剂、 溶液剂、 混悬剂、 糖浆、 酏剂等， 其含有本领域常用的惰性稀释剂， 例如水。除了所述惰性稀释剂外， 组合物还可包含辅助 剂， 如湿润剂、 乳化剂和助悬剂， 以及甜味剂、 矫味剂和芳香剂。
     用于胃肠外给药的本发明的制剂包括但不限于无菌的水溶液或非水溶液、 混悬 液、 乳剂等。非水性溶剂或溶媒的实例包括丙二醇、 聚乙二醇、 植物油， 例如橄榄油和玉米 油， 明胶和可注射的有机酯， 例如油酸乙酯。这些剂型也可包含辅助剂， 例如防腐剂、 湿润 剂、 乳化剂和分散剂。它们可以通过例如阻留细菌的滤器过滤、 掺入灭菌剂、 照射或加热组 合物来灭菌。它们也可制备成无菌固体组合物的形式， 其可在临用之前溶解在无菌水或其 它一些无菌的可注射介质中。
     直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂， 除了活性成分外， 其可包含赋形剂如可可 脂或栓剂蜡。
     经鼻或舌下给药的组合物也可用本领域公知的标准赋形剂来制备。
     此外， 本发明的化合物可以以持续释放组合物给药， 例如在下列专利和专利申请 中所述的那些。美国专利号 5,672,659 教导了包含生物活性剂和聚酯的持续释放组合物。 美国专利号 5,595,760 教导了包含可胶化形式的生物活性剂的持续释放组合物。美国专 利号 5,821,221 教导了包含生物活性剂和壳聚糖的聚合的持续释放组合物。美国专利号 5,916,883 教导了包含生物活性剂和环糊精的持续释放组合物。PCT 公开物 WO99/38536 教 导了包含生物活性剂的可吸收的持续释放组合物。 PCT 公开物 WO00/04916 教导了以水包油 的方法制备包含治疗剂如肽的微粒的方法。 PCT 公开物 WO00/09166 教导了包含治疗剂如肽 和磷酸化聚合物的复合物。 PCT 公开物 WO00/25826 教导了包含治疗剂如肽和带有不可聚合 的内酯的聚合物的复合物。
     发明背景
     神经肽 Y(“NPY” ) 是 36 个氨基酸的肽神经递质， 它是肽类的胰腺家族的成员， 与 胰腺多肽和肽 YY 具有显著的序列同源性。人的神经肽 Y(“hNPY” ) 具有以下序列 ： H-Tyr -Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-TyrTyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ ID NO ： 1)。NPY 是从猪脑中发现、 分离和测序的， 并且由于其分离自神经组织而且在氨基和羧基末 端的氨基酸都是酪氨酸而被命名为 “神经肽 Y” 。
    NPY 及其他该肽家族的成员都具有由 N- 末端聚脯氨酸螺旋和与产生发夹样环的 β- 转角相连的两性 α- 螺旋构成的四级结构， 其有时称为 “胰多肽折叠” 。这些螺旋通过 疏水相互作用保持在一起。酰胺化的 C- 末端从发夹环中伸出。
     在其发现之后， NPY 被确认为中枢神经系统中最丰富的肽， 具有广泛的分布， 包括 皮质、 脑干、 海马、 下丘脑、 杏仁核和丘脑， 以及存在于交感神经元的外周神经系统和肾上腺 嗜铬细胞中。
     NPY 看起来符合主要的神经递质标准， 因为其储存在突触颗粒中， 当电神经刺激时 释放， 在特定受体处发挥作用。很清楚， NPY 是其功能范围内的、 可能是脑中的重要信使， 此 处 NPY 有效地抑制腺苷酸环化酶的活性， 诱导钙的细胞内水平上升。中枢注射 NPY 导致血 压改变， 增加进食， 增加脂肪储存， 升高血糖和胰岛素， 降低运动行为， 降低体温， 和僵住。
     NPY 表现为与一族密切相关的受体相互作用。这些受体通常根据不同的组织和 受体与神经肽 Y 的不同片段和密切相关的 PYY 的结合能力划分为几种亚型。Y1 受体亚型 ( “NPY-Y1 受体” ) 是主要的血管 NPY 受体。Y2 受体亚型 ( “NPY-Y2 受体” ) 也能够在血管平 滑肌上发生结合后作用。Y3 受体亚型 ( “NPY-Y3 受体” ) 是 NPY 特异性的， 不结合 PYY。该受 体可能存在于肾上腺组织、 髓质、 心脏和脑干等区域中。对于神经肽 Y 和神经肽 Y 受体的综 述可参阅例如 C.Wahlestedt 和 D.Reis， Annual Review ofPharmacology and Toxicology， 33 ： 309-352(1993)。专利合作条约 (“PCT” ) 公布号 WO 95/00161 描述了一系列的 NPY 拮 抗剂和激动剂， 用于控制生物学活性， 例如肥胖和心血管功能。
     欧洲专利 0759441 和美国专利 5,576,337 报道了与神经肽 Y 过量有关的生理学 病症， 包括 ： 涉及心脏、 血管和肾系统的病症或疾病， 例如血管痉挛、 心力衰竭、 中风、 心脏肥 大、 血压上升、 绞痛、 心肌梗塞、 心脏性猝死、 心律失常、 外周血管病和异常的肾功能， 例如液 体流动受损、 异常的物质转运或肾衰竭 ； 与交感神经活动增加有关的病症， 例如在冠状动脉 手术和胃肠道操作和手术的期间和之后 ； 脑病和与中枢神经系统有关的疾病， 例如脑梗塞、 神经变性、 癫痫、 中风和与中风相关的病症、 脑血管痉挛和出血、 抑郁、 焦虑、 精神分裂症和
     在其发现之后， NPY 被确认为中枢神经系统中最丰富的肽， 具有广泛的分布， 包括 皮质、 脑干、 海马、 下丘脑、 杏仁核和丘脑， 以及存在于交感神经元的外周神经系统和肾上腺 嗜铬细胞中。
     NPY 看起来符合主要的神经递质标准， 因为其储存在突触颗粒中， 当电神经刺激时 释放， 在特定受体处发挥作用。很清楚， NPY 是其功能范围内的、 可能是脑中的重要信使， 此 处 NPY 有效地抑制腺苷酸环化酶的活性， 诱导钙的细胞内水平上升。中枢注射 NPY 导致血 压改变， 增加进食， 增加脂肪储存， 升高血糖和胰岛素， 降低运动行为， 降低体温， 和僵住。
     NPY 表现为与一族密切相关的受体相互作用。这些受体通常根据不同的组织和 受体与神经肽 Y 的不同片段和密切相关的 PYY 的结合能力划分为几种亚型。Y1 受体亚型 ( “NPY-Y1 受体” ) 是主要的血管 NPY 受体。Y2 受体亚型 ( “NPY-Y2 受体” ) 也能够在血管平 滑肌上发生结合后作用。Y3 受体亚型 ( “NPY-Y3 受体” ) 是 NPY 特异性的， 不结合 PYY。该受 体可能存在于肾上腺组织、 髓质、 心脏和脑干等区域中。对于神经肽 Y 和神经肽 Y 受体的综 述可参阅例如 C.Wahlestedt 和 D.Reis， Annual Review ofPharmacology and Toxicology， 33 ： 309-352(1993)。专利合作条约 (“PCT” ) 公布号 WO 95/00161 描述了一系列的 NPY 拮 抗剂和激动剂， 用于控制生物学活性， 例如肥胖和心血管功能。
     欧洲专利 0759441 和美国专利 5,576,337 报道了与神经肽 Y 过量有关的生理学 病症， 包括 ： 涉及心脏、 血管和肾系统的病症或疾病， 例如血管痉挛、 心力衰竭、 中风、 心脏肥 大、 血压上升、 绞痛、 心肌梗塞、 心脏性猝死、 心律失常、 外周血管病和异常的肾功能， 例如液 体流动受损、 异常的物质转运或肾衰竭 ； 与交感神经活动增加有关的病症， 例如在冠状动脉 手术和胃肠道操作和手术的期间和之后 ； 脑病和与中枢神经系统有关的疾病， 例如脑梗塞、 神经变性、 癫痫、 中风和与中风相关的病症、 脑血管痉挛和出血、 抑郁、 焦虑、 精神分裂症和
     痴呆 ； 与疼痛或伤害感受有关的病症 ； 与异常的胃肠运动和分泌有关的病症， 例如不同形 式的肠梗阻， 尿失禁和克罗恩病 ； 异常的饮水和摄食紊乱， 例如厌食症和代谢性疾病 ； 与性 功能障碍和生殖系统紊乱有关的疾病 ； 与炎症有关的疾病或病症 ； 呼吸系统疾病， 例如哮 喘和与哮喘相关的病症和支气管收缩 ； 与异常的激素释放有关的疾病， 例如促黄体激素、 生 长激素、 胰岛素和催乳素。
     Reubi 的 PCT 公布号 WO 02/43776 报道了结合 NPY-Y1 受体的化合物在制备诊断或 治疗表达 NPY-Y1 受体的肿瘤的药物组合物中的用途， 特别是乳腺癌、 卵巢癌和胶质母细胞 瘤。
     有许多专利和专利出版物公开了一些 NPY 类似物及其用途， 例如美国专利号 5,026,685、 美国专利号 5,328,899、 美国专利号 6,511,984、 PCT 公布号 WO 02/43776、 PCT 公布号 WO2007/039318 等。尽管有以前这些内容， 但仍然不断需要具有改善的效能和 / 或 选择性和 / 或体外或体内特性的 NPY 类似物。
     发明概述
     一方面， 本发明提供了下式 (I)(SEQ ID NO ： 2) 的 hNPY 的肽变体 ： 2 3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
     (R R )-A -A -A -A -A -A -A -A -A -A -A -A -A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-Pro-A35-A36-A37-R1
     (I)
     其中 ：
     A1 是 Tyr、 (X1， X2， X3， X4， X5)Phe 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A2 是 Pro、 3Hyp、 顺式 -3Hyp、 4Hyp 或顺式 -4Hyp ； 3
     A 是 Ser、 Abu、 Aib、 Ala、 Thr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A4 是 Lys、 Arg、 hArg、 Dab、 Dap、 Orn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A5 是 Pro、 3Hyp、 顺式 -3Hyp、 4Hyp 或顺式 -4Hyp ； 6
     A 是 Asp、 Aib、 Asn、 Gln、 Glu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A7 是 Asn、 Aib、 Gln 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A8 是 Pro、 3Hyp、 顺式 -3Hyp、 4Hyp 或顺式 -4Hyp ； 9
     A 是 Gly、 Aib 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A10 是 Glu、 Aib、 Asn、 Asp、 Gln 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A11 是 Asp、 Aib、 Asn、 Gln、 Glu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A12 是 Ala、 Abu、 Aib、 Nva、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A13 是 Pro、 3Hyp、 顺式 -3Hyp、 4Hyp 或顺式 -4Hyp ； 14
     A 是 Ala、 Abu、 Aib、 Nva、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A15 是 Glu、 Aib、 Asn、 Asp、 Gln 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A16 是 Asp、 Aib、 Asn、 Gln、 Glu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A17 是 Met、 Acc、 Aib、 Cha、 Ile、 Leu、 hLeu、 Nle、 Nva、 Tle、 Val 或 HN-CH((CH2) 4 5 n-N(R R ))-C(O) ；
     A18 是 Ala、 Abu、 Aib、 Nva、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A19 是 Arg、 hArg、 Apc、 Dab、 Dap、 Lys、 Orn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A20 是 Tyr、 (X1， X2， X3， X4， X5)Phe 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；A21 是 Tyr、 (X1， X2， X3， X4， X5)Phe 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A22 是 Ser、 Abu、 Aib、 Ala、 Thr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A23 是 Ala、 Abu、 Aib、 Nva、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A24 是 Leu、 Acc、 Cha、 Ile、 hLeu、 Nle、 Nva、 Tle、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A25 是 Arg、 hArg、 Dab、 Dap、 Lys、 Orn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A26 是 His、 2Pal、 3Pal、 4Pal 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A27 是 Tyr、 (X1， X2， X3， X4， X5)Phe 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A28 是 Ile、 Acc、 Cha、 Leu、 hLeu、 Nle、 Nva、 Tle、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A29 是 Asn、 Aib、 Gln 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A30 是 Leu、 Acc、 Cha、 Ile、 hLeu、 Nle、 Nva、 Tle、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A31 是 Ile、 Acc、 Cha、 Leu、 hLeu、 Nle、 Nva、 Tle、 Val 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A32 是 Thr、 Aib、 Ser 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A33 是 Arg、 hArg、 Dab、 Dap、 Lys、 Orn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A35 是 Arg、 Aic、 Apc、 hArg、 Dab、 Dap、 Lys、 Orn、 NH2Phe、 NH2CH2Phe 或 HN-CH((CH2) 4 5 n-N(R R ))-C(O) ；
     A36 是 Tyr、 Aic、 (X1， X2， X3， X4， X5)Phe 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A37 是 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) 或被删除 ；
     R1 是 OH、 NH2、 (C1-30) 烷氧基或 NH-X6-CH2-X7， 其中 X6 是 (C1-40) 烷基或 (C2-40) 链烯 基， 且其中 X7 是 H、 OH、 CO2H 或 C(O)-NH2 ； 2 3
     R 和 R 各自独立地选自 ： H、 (C1-30) 烷基、 (C1-30) 杂烷基、 (C1-30) 酰基、 (C2-30) 链烯 基、 (C2-30) 炔基、 芳基 (C1-30) 烷基、 芳基 (C1-30) 酰基、 取代的 (C1-30) 烷基、 取代的 (C1-30) 杂烷 基、 取代的 (C2-30) 酰基、 取代的 (C2-30) 链烯基、 取代的 (C2-30) 炔基、 取代的芳基 (C1-30) 烷基 和取代的芳基 (C1-30) 酰基 ；
     条件是当 R2 是 (C1-30) 酰基、 芳基 (C1-30) 酰基、 取代的 (C2-30) 酰基或取代的芳基 3 (C1-30) 酰基时， R 是 H、 (C1-30) 烷基、 (C1-30) 杂烷基、 (C2-30) 链烯基、 (C2-30) 炔基、 芳基 (C1-30) 烷基、 取代的 (C1-30) 烷基、 取代的 (C1-30) 杂烷基、 取代的 (C2-30) 链烯基、 取代的 (C2-30) 炔基 或取代的芳基 (C1-30) 烷基 ；
     R4 和 R5 各自独立地是 ： H、 (C1-40) 烷基、 (C1-40) 杂烷基、 (C1-40) 酰基、 (C2-40) 链烯基、 (C2-40) 炔基、 芳基 (C1-40) 烷基、 芳基 (C1-40) 酰基、 取代的 (C1-40) 烷基、 取代的 (C1-40) 杂烷基、 取代的 (C1-40) 酰基、 取代的 (C2-40) 链烯基、 取代的 (C2-40) 炔基、 取代的芳基 (C1-40) 烷基、 取 4 代的芳基 (C1-40) 酰基、 (C1-40) 烷基磺酰基或 C(NH)-NH2， 其中当 R 是 (C1-40) 酰基、 芳基 (C1-40) 酰基、 取代的 (C1-40) 酰基、 取代的芳基 (C1-40) 酰基、 (C1-40) 烷基磺酰基或 C(NH)-NH2 时， 则 R5 是 H 或 (C1-C40) 烷基、 (C1-40) 杂烷基、 (C2-40) 链烯基、 (C2-40) 炔基、 芳基 (C1-40) 烷基、 取代的 (C1-40) 烷基、 取代的 (C1-40) 杂烷基、 取代的 (C2-40) 链烯基、 取代的 (C2-40) 炔基或取代的芳基 (C1-40) 烷基 ；
     n 各自独立地是 1、 2、 3、 4或5； 1 2 3 4 5
     X、 X、 X、 X 和 X 各自独立地是 ： H、 F、 Cl、 Br、 I、 (C1-10) 烷基、 取代的 (C1-10) 烷基、 芳基、 取代的芳基、 OH、 CH2NH2、 NH2、 NO2 或 CN ； 且
     条件是该化合物包含至少一个选自下述的氨基酸 ： Aib、 Acc 和 HN-CH((CH2)9102325544 A CN 102325557n说明书4/14 页-N(R4R5))-C(O)， 其中所述 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) 不是 Arg、 hArg、 Lys、 Orn、 Dab 或 Dap。
     在上面式 I 范围内的亚组 (IA) 的化合物是下述那些 ：
     A1 是 Tyr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A2 是 Pro ；
     A3 是 Ser 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A4 是 Lys 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A5 是 Pro ；
     A6 是 Asp 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A7 是 Asn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A8 是 Pro ；
     A9 是 Gly 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A10 是 Glu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A11 是 Asp 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
     A12 是 Ala 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ；
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    A13 是 Pro ； A14 是 Ala 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A15 是 Glu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A16 是 Asp 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A17 是 Met 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A18 是 Ala 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A19 是 Arg 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A20 是 Tyr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A21 是 Tyr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A22 是 Ser 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A23 是 Ala 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A24 是 Leu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A25 是 Arg 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A26 是 His 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A27 是 Tyr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A28 是 Ile 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A29 是 Asn 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A30 是 Leu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A31 是 Ile、 Leu 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A32 是 Thr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A33 是 Arg 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A35 是 Arg 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A36 是 Tyr 或 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) ； A37 是 HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O) 或被删除 ；R1 是 NH2 ； R2 和 R3 各自独立地是 ： H 或 (C1-30) 酰基 ； 2 条件是当 R 是 (C1-30) 酰基时， R3 是 H ； R4 和 R5 各自独立地是 ： H 或 (C1-40) 酰基 ； n是4； 且 1 2 X、 X、 X3、 X4 和 X5 各自独立地是 ： H、 CH2NH2 或 NH2。 4 5 在亚组 (IA) 中， HN-CH((CH2)n-N(R R ))-C(O) 优选是 Lys(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)。 优选的式 (I) 或亚组 (IA) 的化合物是 ： 实 施 例 1： [Leu31， Pro34， Lys36(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 2： [Leu31， Pro34， Lys35(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 3： [Lys24(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 4： [Lys23(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 5： [Lys22(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 6： [Lys21(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 7： [Lys20(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实施例8： [Lys19(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 9： [Lys18(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 10 ： [Lys17(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 11 ： [Lys16(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 12 ： [Lys15(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 13 ： [Lys14(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 14 ： [Lys12(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 15 ： [Lys11(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 16 ： [Lys10(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID11NO ： 3)
    NO ： 4)
    NO ： 5)
    NO ： 6)
    NO ： 7)
    NO ： 8)
    NO ： 9)
    NO ： 10)
    NO ： 11)
    NO ： 12)
    NO ： 13)
    NO ： 14)
    NO ： 15)
    NO ： 16)
    NO ： 17)
    102325544 A CN 102325557说明书6/14 页NO ： 18)
    实 施 例 17 ： [Lys9(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 18 ： [Lys7(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 19 ： [Lys6(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 20 ： [Lys4(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 21 ： [Lys3(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实施例 22 ： [Lys1(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leuu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 23 ： [Leu31， Pro34， Lys37(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-37)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 24 ： [Leu31， Lys33(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 25 ： [Leu31， Lys32(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实施例 26 ： [Lys31(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID NO ： 28) 30 ε 31 34 实 施 例 27 ： [Lys (N -C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu ， Pro ]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 28 ： [Lys29(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 29 ： [Lys28(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 30 ： [Lys27(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 31 ： [Lys26(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ ID 实 施 例 32 ： [Lys25(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)， Leu31， Pro34]hNPY(1-36)-NH2 ； (SEQ IDNO ： 19)
    NO ： 20)
    NO ： 21)
    NO ： 22)
    NO ： 23)
    NO ： 24)
    NO ： 25)
    NO ： 26)
    NO ： 27)
    
    NO ： 29)
    NO ： 30)
    NO ： 31)
    NO ： 32)
    NO ： 33)
    NO ： 34) 实施例 33 ： [CH3(CH2)8(CO)-Tyr1， Nle17， Pro34]hNPY(1-36)-NH2， (SEQ ID NO ： 37)。
     发明详述
     本文所用的术语 “氨基酸” 是指任何天然或非天然的氨基酸， 包括但不限于 α- 氨 基酸、 β- 氨基酸或 γ- 氨基酸， 并且可以是 D- 或 L- 氨基酸， 除非另有说明。
     除 了 N- 末 端 的 氨 基 酸 以 外， 在 本 文 中 所 有 氨 基 酸 缩 写 ( 例 如 Ala) 具 有 结 构 -NH-C(R)(R ′ )-CO-， 其中 R 和 R ′各自独立地是氢或氨基酸侧链 ( 例如对于 Ala， R ＝ CH3 和 R ′＝ H) 或 R 和 R ′可以连接形成环系统。对于 N- 末端氨基酸， 缩写代表结构
     (R2R3)-N-C(R)(R′ )-CO-， 其中 R2 和 R3 如式 (I) 中所定义。
     本发明的肽也通过另一种方式表示， 例如 [Pro34]hNPY(1-36)-NH2(SEQ ID NO ： 1)， 具有从括号内显示的天然序列替换的氨基酸， 例如在 hNPY 中用 Pro 替换 Gln。在 hNPY(1-36)-NH2(SEQ ID NO ： 1) 中 的 指 示 “NH2”表 示 该 肽 的 C- 末 端 是 酰 胺 化 的， 而 hNPY(1-36)-OH(SEQ ID NO ： 36) 表示游离酸形式。
     下面提供了本申请为了方便引用而使用的一些缩写的列表， 但是， 此处未定义的 本申请所用的任何缩写并不以与其公认含义相反的方式使用。
     Abu α- 氨基丁酸
     Acc 1- 氨基 -1- 环 (C3-9) 烷基羧酸， 其中
     A3c 表示 1- 氨基 -1- 环丙烷羧酸 ；
     A4c 表示 1- 氨基 -1- 环丁烷羧酸 ；
     A5c 表示 1- 氨基 -1- 环戊烷羧酸 ； 和
     A6c 表示 1- 氨基 -1- 环己烷羧酸
     Adc 10- 氨基癸酸
     Ado 12- 氨基十二酸
     Ahp 7- 氨基庚酸
     Ahx 6- 氨基己酸
     Aib α- 氨基异丁酸
     Aic 2- 氨基茚满 -2- 甲酸
     Ala 或 A 丙氨酸
     Anc 9- 氨基壬酸
     Aoc 8- 氨基辛酸
     Apc 4- 氨基 -4- 羧基哌啶， 由以下结构表示 ：
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    其中， 平行线 “＝” 表示该部分与其他部分或序列的连接点。 Apn 5- 氨基戊酸 Arg 或 R 精氨酸 hArg 高精氨酸 Asn 或 N 天冬酰胺 Asp 或 D 天冬氨酸 Aun 11- 氨基十一酸 Cha β- 环己基丙氨酸 Cys 或 C 半胱氨酸 Dab 2， 4- 二氨基丁酸Dap 2， 3- 二氨基丙酸 Dhp 3， 4- 脱氢脯氨酸 Dmt 5， 5- 二甲基噻唑烷 -4- 甲酸 Gaba 4- 氨基丁酸 Gln 或 Q 谷氨酰胺 Glu 或 E 谷氨酸 Gly 或 G 甘氨酸 His 或 H 组氨酸 3Hyp 反式 -3- 羟基 -L- 脯氨酸， 即 (2S， 3S)-3- 羟基吡咯烷 -2- 甲酸 顺式 -3Hyp 顺式 -3- 羟基 -L- 脯氨酸， 即 (2S， 3R)-3- 羟基吡咯烷 -2- 甲酸 4Hyp 4- 羟基脯氨酸， 即 (2S， 4R)-4- 羟基吡咯烷 -2- 甲酸 顺式 -4Hyp 顺式 -4- 羟基 -L- 脯氨酸， 即 (2S， 4S)-4- 羟基吡咯烷 -2- 甲酸 Ile 或 I 异亮氨酸 Inc 二氢吲哚 -2- 甲酸 Inp 六氢异烟酸 Ktp 4- 氧代脯氨酸 Leu 或 L 亮氨酸 hLeu 高亮氨酸 Lys 或 K 赖氨酸 Met 或 M 甲硫氨酸 Nip 六氢烟酸 Nle 正亮氨酸 ε N 表示括号内的该实体与 Lys 侧链的 ε- 氮相偶联。 Nva 缬氨酸 Oic 八氢吲哚 -2- 甲酸 Orn 鸟氨酸 2-Pal β-(2- 吡啶基 ) 丙氨酸 3-Pal β-(3- 吡啶基 ) 丙氨酸 4-Pal β-(4- 吡啶基 ) 丙氨酸 Phe 或 F 苯丙氨酸 hPhe 高苯丙氨酸 4NH2CH2Phe 4- 氨基甲基 - 苯丙氨酸 4NH2Phe 4- 氨基 - 苯丙氨酸 Pro 或 P 脯氨酸 hPro 高脯氨酸 Sar 肌氨酸或 N- 甲基甘氨酸 Ser 或 S 丝氨酸 Thr 或 T 苏氨酸 Tic 1， 2， 3， 4- 四氢异喹啉 -3- 甲酸Tle 叔亮氨酸
     Val 或 V 缬氨酸
     “烷基” 是指含有一个或多个碳原子的烃基团， 其中多个碳原子 ( 如果存在的话 ) 通过单键相连， 其实例包括但不限于甲基、 乙基、 丙基和丁基。烷基烃基团可以是直链的或 含有一个或多个支链或环状基团， 其实例包括但不限于异丙基和叔丁基。
     “取代的烷基” 是指其中烃基团的一个或多个氢原子被一个或多个选自下述的取 代基替换的烷基 ： 卤素 ( 即， 氟、 氯、 溴和碘 )、 OH、 CN、 SH、 NH2、 NHCH3、 NO2、 被 1-6 个卤素取代 的 (C1-2) 烷基、 CF3、 OCH3、 OCF3， 和 (CH2)0-4-COOH。在不同的实施方案中， 存在 1、 2、 3或4个 取代基。(CH2)0-4-COOH 的存在导致产生烷基酸。含有 (CH2)0-4-COOH 的烷基酸的实例包括但 不限于 2- 降莰烷乙酸、 叔丁酸和 3- 环戊基丙酸。
     “杂烷基” 是指其中烃基团的一个或多个碳原子被一个或多个选自下述的原子或 基团替换的烷基 ： 氨基、 酰氨基、 O、 S、 N 和羰基。在不同的实施方案中， 存在 1 或 2 个杂原 子。
     “取代的杂烷基” 是指其中烃基团的一个或多个氢原子被一个或多个选自下述的 取代基替换的杂烷基 ： 卤素 ( 即， 氟、 氯、 溴和碘 )、 OH、 CN、 SH、 NH2、 NHCH3、 NO2、 被 1-6 个卤素 取代的 (C1-2) 烷基、 CF3、 OCH3、 OCF3 和 (CH2)0-4-COOH。在不同的实施方案中， 存在 1、 2、 3或4 个取代基。
     “链烯基” 是指由两个或多个碳构成的烃基团， 其中存在一个或多个碳 - 碳双键， 其 实例包括但不限于乙烯基、 烯丙基、 丁烯基和丙烯基。 链烯基烃基团可以是直链的或含有一 个或多个支链或环状基团， 其实例包括但不限于正丁烯基与叔丁烯基和正戊烯基与环戊烯 基。
     “取代的链烯基” 是指其中一个或多个氢被一个或多个选自下述的取代基替换的 链烯基 ： 卤素 ( 即， 氟、 氯、 溴和碘 )、 OH、 CN、 SH、 NH2、 NHCH3、 NO2、 被 1-6 个卤素取代的 (C1-2) 烷基、 CF3、 OCH3、 OCF3 和 (CH2)0-4-COOH。在不同的实施方案中， 存在 1、 2、 3 或 4 个取代基。
     “芳基” 是指含有至少一个具有共轭的 π- 电子系统 ( 含有最多两个共轭或稠合的 环系统 ) 的环的任选取代的芳香基团。芳基包括但不限于碳环芳基、 杂环芳基和联芳基基 团。优选地， 芳基是 5- 或 6 元环。杂环芳基优选的原子包括但不限于一个或多个硫、 氧和 氮。芳基的实例包括但不限于苯基、 1- 萘基、 2- 萘基、 吲哚、 喹啉、 2- 咪唑和 9- 蒽。芳基的 取代基选自 ： (C1-4) 烷基、 (C1-4) 烷氧基、 卤素 ( 即， 氟、 氯、 溴和碘 )、 OH、 CN、 SH、 NH2、 NO2、 被 1-5 个卤素取代的 (C1-2) 烷基、 CF3、 OCF3 和 (CH2)0-4-COOH。在不同的实施方案中， 芳基包含 0、 1、 2、 3 或 4 个取代基。
     “烷基芳基” 是指连接有如上所定义的 “芳基” 的 “烷基” 。
     术语 “环烷基” 意图包括具有本领域技术人员已知的指定碳数的单 - 环烷基基团 或联 - 环烷基基团。
     术语 “杂环” 包括具有一个或多个杂原子例如氧、 氮和硫的单环和双环系统。环系 统可以是芳香性的， 例如吡啶、 吲哚、 喹啉、 嘧啶、 噻吩、 呋喃、 苯并噻吩、 四唑、 二氢吲哚、 吲 唑、 N- 甲酰基吲哚、 苯并咪唑、 噻唑和噻二唑。环系统也可以是非芳香性的， 例如但不限于 吡咯烷、 哌啶、 吗啉等。
     合成本发明的化合物能够并且是使用本文实施例所公开的技术以及本领域已知的技 术进行制备。例如 NPY 类似物的多肽区域可以通过化学或生物化学方法合成和 / 或修饰。 参见例如 Stewart， J.M. 等人， Solid Ph ase Synth esis， Pierce Chemical Co.， 第二版 (1984) ； 和参见例如 Sambrook 等人， MolecularCloning， ALaboratory Manual， 第二版， Cold Spring Harbor LaboratoryPress(1989) 对于生物化学合成的技术例子， 包括将核酸引入 细胞并表达核酸。
     表 1 给出了本文举例说明的化合物的物理数据。
     表1
     实施例编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 分子量 ( 预期 ) 4416.1 4423.1 4466.1 4508.2 4492.2 4416.1 4416.1 4423.1 4508.2 4448.0 4464.2 4450.1 4508.2 4508.2 4464.2 4450.1 4522.2 分子量 (ESI-MS) 4415.9 4423.4 4466.1 4508.2 4491.9 4416.4 4416.5 4423.2 4508.4 4448.2 4463.7 4450.5 4508.3 4508.4 4464.9 4450.3 4522.2 ％纯度 (HPLC) ＞ 99 ＞ 99 ＞ 98 ＞ 98 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 97 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 9916102325544 A CN 102325557 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33
     4465.1 4464.2 4451.1 4492.2 4416.1 4579.2 4423.1 4478.1 4466.1 4466.1 4465.1 4466.1 4416.1 4442.1 4423.1 4376.9说明书＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 ＞ 99 95.211/14 页4465.1 4464.2 4451.2 4492.0 4416.3 4579.2 4422.8 4478.1 4466.3 4466.3 4465.2 4466.1 4416.4 4442.4 4423.2 4377.4体外放射性配体与 NPY-Y1 和 NPY-Y2 受体结合试验
     将 分 别 表 达 NPY-Y1 和 NPY-Y2 受 体 的 人 神 经 母 细 胞 瘤 细 胞 系 SK-N-MC 和 SK-N-BE2( 美国典型培养物收藏中心， Rockville， MD， USA) 在含有 10％胎牛血清和 5％鸡 胚提取物的 EMEM 中培养， 在 37℃和 95％空气和 5％ CO2 的潮湿气氛下维持。
     对于体外的 NPY-Y1 和 NPY-Y2 放射性配体结合试验， 收集适宜的细胞 (SK-N-MC， 用 于 NPY-Y1 ； SK-N-BE2， 用 于 NPY-Y2)， 在 20ml 的 冰 冷 的 50mM Tris-HCl 中 用 Brinkman Polytron(Westbury， NY， USA)( 设置 6， 15 秒 ) 匀浆。匀浆物通过离心 (39,000g/10min) 洗 0.1mg/ml 杆菌肽 涤两次， 最终沉淀重悬浮在 50mM Tris-HCl 中， 该溶液含有 2.5mM MgCl2、 (Sigma Chemical， St.Louis， MO， USA) 和 0.1％ BSA。
     对于试验， 将上述混悬液的等分试样 (0.4ml) 与 0.05nM[125I]PYY(2200Ci/mmol， Perkin-Elmer， Boston， MA) 在含有和不含 0.05ml 的未标记的竞争性测试肽的条件下一起 孵育。孵育 100 分钟 (25 ℃ ) 后， 所结合的 [125I]PYY 与游离的通过 GF/C 滤器 (Brandel，
     Gaithersburg， MD， USA) 快速过滤分离， 该滤器预先在 0.3 ％聚乙烯亚胺中浸泡。接着将 滤器用 5-ml 等分的冰冷的 50mM Tris-HCl 洗涤三次， 在滤器上捕获的结合的放射性通过 γ- 射线光谱 (Wallac LKB， Gaithersburg， MD， USA) 计数。特异性结合被定义为总的 [125I] PYY 结合减去在 1000nM PYY(Bachem， Torrence， CA， USA) 存在下的结合。抑制常数 (Ki) 使 用公知的 Cheng-Prusoff 方程计算， 该数据以及所述化合物对于 NPY-Y1 和 NPY-Y2 的选择 性在表 2 中给出。
     实施例 1-32 的每个化合物都进行了快速的上述放射性配体试验， 几乎所有化合 物都发现具有小于 100nM 的 Ki， 并且某些示例性的化合物具有在亚 nM 范围的 Ki 值。还发 现几乎所有的化合物相对于 NPY-Y2 具有对 NPY-Y1 的高选择性结合。
     表2
     实施例编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 对于 Y1 的 Ki(nM) 307.67 120.44 3.56 19.67 4.79 10.65 108.38 13.66 6.68 54.26 20.35 10.00 6.18 22.50 4.79 5.68 对于 Y2 的 Ki(nM) 367 643 668 ＞ 1000 133 19 13 15 10 11 26 611 383 270 40 23 选择性 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y2 Y1 Y1 Y2 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y118102325544 A CN 102325557 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33
     11.82 2.94 3.44 1.49 0.55 0.73 N/A N/A 87.47 35.17 10.35 29.67 53.58 187.50 8.24 21.57 0.84说明书41 74 33 75 138 80 N/A N/A 227 ＞ 1000 292 267 ＞ 1000 787 107 ＞ 1000 672 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 N/A N/A Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y1 Y113/14 页给药
     本发明的肽能够以可药用盐的形式提供。 所述的盐的实例包括但不限于与有机酸 ( 例如乙酸、 乳酸、 马来酸、 柠檬酸、 苹果酸、 抗坏血酸、 琥珀酸、 苯甲酸、 甲磺酸、 甲苯磺酸或 双羟萘酸 )、 无机酸 ( 例如盐酸、 硫酸或磷酸 ) 和多聚体酸 ( 例如鞣酸、 羧甲基纤维素、 聚乳 酸、 聚乙醇酸或聚乳酸 - 聚乙醇酸共聚物 ) 形成的盐。 制备本发明的肽的盐的通常方法是本 领域公知的， 可通过盐交换的标准方法实现。因此， 本发明的肽的 TFA 盐 ( 该 TFA 盐来自肽 纯化中使用制备型 HPLC 用含有 TFA 的缓冲液洗脱 ) 可被转化为另一种盐， 例如乙酸盐， 通 过将肽溶于少量的 0.25N 乙酸水溶液来实现。所得溶液应用于半制备的 HPLC 柱 (Zorbax， 300SB， C-8)。该柱用 (1)0.1N 乙酸铵水溶液洗脱 0.5 小时， (2) 用 0.25N 乙酸水溶液洗脱 0.5 小时， 和 (3) 用线性梯度 (20 ％ -100 ％的溶液 B， 历经 30min) 在 4ml/min 流速下洗脱
     ( 溶液 A 是 0.25N 乙酸水溶液 ； 溶液 B 是 0.25N 乙酸在乙腈 / 水 80 ∶ 20 中的溶液 )。收集 含有肽的流分并冷冻干燥至干。
     本发明组合物中的活性成分的剂量可以变化， 但是活性成分的量必须适合所获得 的剂型。所选择的剂量取决于所需疗效、 给药途径和治疗持续时间。通常， 本发明的活性有 -7 -4 效剂量为 1×10 到 200mg/kg/ 天， 优选 1×10 到 100mg/kg/ 天， 其可以以单剂量或分成多 个剂量施用。
     本发明化合物可以经口服、 胃肠外 ( 例如肌内、 腹膜内、 静脉内或皮下注射或移 植 )、 经鼻、 阴道、 直肠、 舌下或局部途径给药， 可以与可药用载体配制成提供适合于各种给 药途径的剂型。
     口服给药的固体剂型包括胶囊、 片剂、 丸剂、 粉剂和颗粒剂。 在这些固体剂型中， 活 性化合物与至少一种惰性可药用载体如蔗糖、 乳糖或淀粉混合。这些剂型也可包含如常规 操作的其它非上述惰性稀释剂的物质， 例如润滑剂如硬脂酸镁。 在胶囊、 片剂和丸剂的情况 下， 所述剂型也可包含缓冲剂。片剂和丸剂另外可制备含有肠包衣。
     口服给药的液体剂型包括但不限于可药用的乳剂、 溶液剂、 混悬剂、 糖浆、 酏剂等， 其含有本领域常用的惰性稀释剂， 例如水。除了所述惰性稀释剂外， 组合物还可包含辅助 剂， 如湿润剂、 乳化剂和助悬剂， 以及甜味剂、 矫味剂和芳香剂。
     用于胃肠外给药的本发明的制剂包括但不限于无菌的水溶液或非水溶液、 混悬 液、 乳剂等。非水性溶剂或溶媒的实例包括丙二醇、 聚乙二醇、 植物油， 例如橄榄油和玉米 油， 明胶和可注射的有机酯， 例如油酸乙酯。这些剂型也可包含辅助剂， 例如防腐剂、 湿润 剂、 乳化剂和分散剂。它们可以通过例如阻留细菌的滤器过滤、 掺入灭菌剂、 照射或加热组 合物来灭菌。它们也可制备成无菌固体组合物的形式， 其可在临用之前溶解在无菌水或其 它一些无菌的可注射介质中。
     直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂， 除了活性成分外， 其可包含赋形剂如可可 脂或栓剂蜡。
     经鼻或舌下给药的组合物也可用本领域公知的标准赋形剂来制备。
     此外， 本发明的化合物可以以持续释放组合物给药， 例如在下列专利和专利申请 中所述的那些。美国专利号 5,672,659 教导了包含生物活性剂和聚酯的持续释放组合物。 美国专利号 5,595,760 教导了包含可胶化形式的生物活性剂的持续释放组合物。美国专 利号 5,821,221 教导了包含生物活性剂和壳聚糖的聚合的持续释放组合物。美国专利号 5,916,883 教导了包含生物活性剂和环糊精的持续释放组合物。PCT 公开物 WO99/38536 教 导了包含生物活性剂的可吸收的持续释放组合物。 PCT 公开物 WO00/04916 教导了以水包油 的方法制备包含治疗剂如肽的微粒的方法。 PCT 公开物 WO00/09166 教导了包含治疗剂如肽 和磷酸化聚合物的复合物。 PCT 公开物 WO00/25826 教导了包含治疗剂如肽和带有不可聚合 的内酯的聚合物的复合物。
     除非另有定义， 否则本文所用的所有的技术和科学术语都具有本发明所属领域的 普通技术人员通常理解的相同含义。而且， 本文提及的所有出版物、 专利申请、 专利和其它 文献都以其整体引入本文作为参考。20102325544 A CN 102325557
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