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1、10申请公布号CN102319284A43申请公布日20120118CN102319284ACN102319284A21申请号201110199450422申请日20110718A61K36/488200601A61K125/0020060171申请人句容茅宝葛业有限公司地址212400江苏省镇江市句容市华阳南路恒生公寓句容茅宝葛业有限公司72发明人夏荣光陈义勇赵晓联李书娟翁夕锋74专利代理机构南京苏高专利商标事务所普通合伙32204代理人柏尚春54发明名称一种从葛根中高效提取制备异黄酮的方法57摘要本发明公开了一种从葛根中高效提取制备异黄酮的方法，属于农产品、食品加工技术领域。本发明的步骤是。
2、（1）粉碎取葛根粉碎至6080目的葛根粉；（2）酶解将葛根粉加入70乙醇，再加入纤维素酶和蛋白酶进行酶解得到葛根提取液，所述纤维素酶和蛋白酶加入总量为每100毫升溶液12G；（3）提取将步骤（2）得到的葛根提取液通过超声微波处理，然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根异黄酮。本发明采用纤维素酶和蛋白酶复合酶解技术，并结合超声微波辅助提取技术葛根异黄酮，充分发挥化学酶解和物理提取的技术优势，降低成本，并提高了葛根异黄酮的溶出率和提取率，使提取纯度大大高于目前现有的提取方法。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页CN102319287A1/1页21一种从葛根。
3、中高效提取制备异黄酮的方法，其特征在于它包括以下步骤（1）粉碎取葛根粉碎至6080目的葛根粉；（2）酶解将葛根粉加入70乙醇，再加入纤维素酶和蛋白酶进行酶解得到葛根提取液，所述纤维素酶和蛋白酶加入总量为每100毫升溶液12G；（3）提取将步骤（2）得到的葛根提取液通过超声微波处理，然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根异黄酮。2根据权利要求L所述的从葛根中高效提取制备异黄酮的方法，其特征在于步骤（2）中所述葛根粉和70乙醇的料液比（G/ML）为11035，所述纤维素酶和蛋白酶的质量比为113，酶解温度为5863，酶解时间为5666MIN，PH值为6。3根据权利要求L所述的从葛根中高效提取制备异黄酮的方。
4、法，其特征在于步骤（3）中超声微波处理的超声频率为40KHZ，微波功率8696W，温度控制在4553提取2030MIN。权利要求书CN102319284ACN102319287A1/3页3一种从葛根中高效提取制备异黄酮的方法技术领域0001本发明涉及一种从植物中提取化合物的方法，具体地说涉及一种从葛根中高效提取制备异黄酮的方法。背景技术0002近年来异黄酮的提取及功效备受关注，目前报道从葛根中提取葛根异黄酮的方法有加热回流法、渗漉法、浸渍法、物理强化辅助提取等，其中回流法有效成分提取率较高，但是溶剂用量大，成本高，废弃液污染环境；渗漉法所用溶剂较少，但提取时间长。目前生产上萃取葛根总异黄酮一般。
5、采用热浸提方式，但是存在能耗大，时间长，效率低的缺点。葛根黄酮的提取通常采用水提法和有机溶剂提取，采用浸提有机溶剂主要有乙醇、甲醇等，醇法是采用乙醇或甲醇进行热回流提取，以醋酸铅沉淀。水法是采用水煎煮，用酸沉淀。醇提法所得纯度较高，但过程繁琐、有效成分损失多、提取率低、时间长和成本高，主要用于医药和临床目的。水提法存在纯度、提取率较低的缺点。0003鉴于目前葛根异黄酮传统的加热回流法、渗漉法、浸渍法等提取方法存在能耗大，时间长，效率低的缺点，不宜用于工业生产。因此结合化学酶解与物理提取的方法可有效作用在葛根细胞壁并最大程度提高细胞内容物的溶出，从而提高葛根异黄酮的提取率。发明内容0004发明目。
6、的为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种结合化学酶解和物理提取并能有效提高异黄酮提取率的方法。0005技术方案为实现上述目的，本发明的提取方法步骤如下（1）粉碎取葛根粉碎至6080目的葛根粉。0006（2）酶解将葛根粉加入70乙醇，再加入纤维素酶和蛋白酶进行酶解得到葛根提取液，所述纤维素酶和蛋白酶加入总量为每100毫升溶液12G。0007（3）提取将步骤（2）得到的葛根提取液通过超声微波处理，然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根异黄酮。0008其中，将葛根粉碎是为了增大了葛根原料与浸提溶剂乙醇的接触面积，从而为提高葛根异黄酮的提取率奠定基础，采用纤维素酶和蛋白质酶进行酶解是为了加速细胞内容物的。
7、溶出，并且酶解方式可经过调解酶解环境控制反应程度，使反应温和高效、保证了异黄酮的提取纯度和效率。0009步骤（2）中所述葛根粉和70乙醇的料液比（G/ML）为11035，所述纤维素酶和蛋白酶的质量比为113，酶解温度为5863，酶解时间为5666MIN，PH值为6。0010步骤（3）中超声微波处理的超声频率为40KHZ，微波功率8696W，温度控制在4553提取2030MIN。其中，超声波换能器输出功率为40KHZ。0011有益效果本发明采用纤维素酶和蛋白酶复合酶解技术，并结合超声微波辅助提取技术葛根异黄酮，充分发挥化学酶解和物理提取的技术优势，降低成本，并提高了葛根说明书CN10231928。
8、4ACN102319287A2/3页4异黄酮的溶出率和提取率，使提取纯度大大高于目前现有的提取方法。具体实施方式0012实施例1取句容野生葛根1000G粉碎至6080目的葛根粉。将葛根粉加入10L的70乙醇溶液中浸提，调节PH为6，在60下加入100G纤维素酶和100G蛋白酶酶解，酶解时间为60MIN，得到葛根提取液。酶解后将葛根提取液通过超声微波处理，超声微波处理的超声频率为40KHZ，超声波换能器输出功率为40KHZ，微波功率8696W，温度控制在4553提取25MIN。然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根异黄酮。0013实施例2取句容野生葛根1000G粉碎至6080目的葛根粉。将葛根粉加入25。
9、L的70乙醇溶液中浸提，调节PH为6，在60下加入125G纤维素酶和250G蛋白酶酶解，酶解时间为66MIN，得到葛根提取液。酶解后将葛根提取液通过超声微波处理，超声微波处理的超声频率为40KHZ，超声波换能器输出功率为40KHZ，微波功率8696W，温度控制在4553提取30MIN。然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根异黄酮。0014实施例3取句容野生葛根1000G粉碎至6080目的葛根粉。将葛根粉加入35L的70乙醇溶液中浸提，调节PH为6，在60下加入88G纤维素酶和262G蛋白酶酶解，酶解时间为58MIN，得到葛根提取液。酶解后将葛根提取液通过超声微波处理，超声微波处理的超声频率为40KHZ。
10、，超声波换能器输出功率为40KHZ，微波功率8696W，温度控制在4553提取20MIN。然后减压浓缩、冷冻干燥制得葛根异黄酮。0015试验例1分别取实施例1、实施例2和实施例3得到的葛根异黄酮，根据如下公式计算葛根异黄酮提取率葛根异黄酮提取率（）粗葛根异黄酮重量（G）/1000100结果见表1。0016表1葛根异黄酮提取率葛根异黄酮提取率（）实施例1658035实施例2665028实施例3668015平均值664试验例2准确称取葛根素对照品5MG，置于25ML容量瓶中，加入70乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精确吸取01，02，03，04，05，06，07，08，09，10于10ML容量瓶中。
11、，并各加70乙醇10ML，再加蒸馏水稀释至刻度摇匀。另取70乙醇10ML置10ML容量瓶中，加蒸馏水至刻度，作空白对照，在250NM波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。0017精确称取实施例1、实施例2和实施例3提取得到的葛根异黄酮样品5MG，置于25ML容量瓶中，加入70乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精确吸取01，02，03，04，说明书CN102319284ACN102319287A3/3页505，06，07，08，09，10于10ML容量瓶中，并各加70乙醇10ML，再加蒸馏水稀释至刻度摇匀。另取70乙醇10ML置10ML容量瓶中，加蒸馏水至刻度，作空白对。
12、照，在250NM波长处测定吸光度，根据标准曲线方程计算样品溶液中总黄酮的含量，进而计算出粗葛根异黄酮样品中葛根异黄酮的含量，根据下列公式计算出葛根异黄酮纯度。0018葛根异黄酮纯度（）葛根异黄酮重量（MG）/5100结果见表2表2葛根异黄酮纯度试验葛根异黄酮纯度（）实施例1808029实施例2802032实施例3805041平均值805现有葛根异黄酮的提取技术纯度一般在5060，而本发明提供的制取方法可得到纯度80以上的葛根异黄酮，远高于现有技术。0019以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。说明书CN102319284A。