一种含TPGS的脂质体组合物及其应用.pdf

上传人:a3 文档编号:523205 上传时间:2018-02-20 格式:PDF 页数:14 大小:383.69KB
返回 下载 相关 举报
摘要
申请专利号:

CN200910101607.8

申请日:

2009.08.14

公开号:

CN101991538A

公开日:

2011.03.30

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法律详情:

授权|||实质审查的生效IPC(主分类):A61K 9/127申请日:20090814|||公开

IPC分类号:

A61K9/127; A61K31/122; A61K47/34; A61K47/22; A61K47/28; A61K47/24; A61P35/00

主分类号:

A61K9/127

申请人:

浙江工业大学

发明人:

熊素彬; R·J·李; 尹小东

地址:

310014 浙江省杭州市下城区朝晖六区

优先权:

专利代理机构:

杭州天正专利事务所有限公司 33201

代理人:

黄美娟;王兵

PDF下载: PDF下载
内容摘要

本发明公开了一种含TPGS的脂质体组合物及其应用,所述脂质体组合物由磷脂类化合物、胆固醇类化合物和TPGS组成,各组分的重量份比例磷脂类化合物:胆固醇类化合物:TPGS为5~95∶0~50∶0.1~60。所述的含TPGS的脂质体组合物应用于制备载药脂质体,不仅能提高脂质体药物稳定性,且能提高药物的疗效。

权利要求书

1: 一种含 TPGS 的脂质体组合物, 由磷脂类化合物、 胆固醇类化合物和 TPGS 组成, 各组 分的重量份比例磷脂类化合物 : 胆固醇类化合物 : TPGS 为 5 ~ 95 ∶ 0 ~ 50 ∶ 0.1 ~ 60。
2: 如权利要求 1 所述的含 TPGS 的脂质体组合物, 其特征在于所述组分的重量份比例磷 脂类化合物 : 胆固醇类化合物 : TPGS 为 50 ~ 90 ∶ 10 ~ 40 ∶ 1 ~ 40。
3: 如权利要求 2 所述的含 TPGS 的脂质体组合物, 其特征在于所述组分的重量份比例磷 脂类化合物 : 胆固醇类化合物 : TPGS 为 60 ~ 90 ∶ 10 ~ 30 ∶ 5 ~ 30。
4: 如权利要求 1 ~ 3 之一所述的含 TPGS 的脂质体组合物, 其特征在于所述的磷脂类化 合物选自下列一种或任意几种的组合 : 磷脂酰胆碱类、 磷脂酰乙醇胺类、 磷脂酰甘油类、 磷 脂酰丝氨酸类。
5: 如权利要求 4 所述的含 TPGS 的脂质体组合物, 其特征在于所述的磷脂类化合物选自 下列之一 : 蛋黄卵磷脂、 大豆卵磷脂、 氢化大豆磷脂酰胆碱、 二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱、 二棕榈 酸磷脂酰胆碱、 二硬脂酸磷脂酰胆碱。
6: 如权利要求 1 ~ 3 之一所述的脂质体组合物, 其特征在于所述的胆固醇类化合物选 自下列之一 : 胆固醇、 胆固醇半琥珀酸酯、 胆固醇硫酸酯钠、 DC-chol。
7: 如权利要求 1 所述的含 TPGS 的脂质体组合物在制备载药脂质体中的应用, 其特征在 于所述的药物为双亲性药物、 水溶性药物或脂溶性药物, 所述药物的重量为脂质体组合物 重量的 1 ~ 40%。
8: 如权利要求 7 所述的含 TPGS 的脂质体组合物在制备载药脂质体中的应用, 其特征在 于所述药物的重量为脂质体组合物重量的 1 ~ 30%。
9: 如权利要求 7 所述的含 TPGS 的脂质体组合物在制备载药脂质体中的应用, 其特征在 于所述的药物为大黄素。
10: 如权利要求 9 所述的含 TPGS 的脂质体组合物在制备载药脂质体中的应用, 其特征 在于所述的载药脂质体由下列组分制成 : 蛋黄卵磷脂 48 ~ 87 份, 胆固醇 11 ~ 24 份, TPGS 2 ~ 38 份, 大黄素 5 份。

说明书


一种含 TPGS 的脂质体组合物及其应用

    【技术领域】
     本发明涉及一种含 TPGS 的脂质体组合物, 以及由其制备得到的载药脂质体。背景技术 脂质体主要由磷脂和胆固醇组成的类似细胞膜的双分子层结构。 脂质体可分为三 类: 小单室 ( 层 ) 脂质体, 粒径为 20 ~ 80nm ; 大单室脂质体, 粒径约为 100 ~ 1000nm ; 多室 ( 层 ) 脂质体, 粒径约为 1000 ~ 5000nm。脂质体的发展经历了普通脂质体, PEG 修饰脂质 体, 到受体或配体修饰脂质体。目前临床应用的脂质体主要为普通脂质体 ( 如 DaunoXome) 和 PEG 修饰脂质体 ( 如 Doxil)。与普通脂质体相比, PEG 修饰脂质体具有降低脂质体的粒 径, 提高脂质体的稳定性, 延长体循环时间, 提高抗癌药物靶向性等优点。 常用的脂质体 PEG 修饰剂主要为 PEG(2000)-DSPE, 如 PEG 修饰阿霉素脂质体上市产品 Doxil ; 此外尚有一些含 PEG 的表面活性剂, 如 Tween80, Poloxmer188, 等。
     脂质体的制备方法有多种, 根据药物的性质或需要进行选择。(1) 薄膜分散法 : 系 将磷脂等膜材溶于适量的氯仿或其它有机溶剂中, 脂溶性药物可加在有机溶剂中, 然后在 减压旋转下除去溶剂, 使脂质在器壁形成薄膜后, 加入不含有或者含有水溶性药物的缓冲 溶液或其他溶液, 进行振摇, 则可形成多层脂质体。(2) 注入法 : 将磷脂等脂质材料和脂溶 性药物溶于有机溶剂中 ( 油相 ), 然后把油相均速注射到水相 ( 含有或不含有水溶性药物 ) 中, 除尽有机溶剂得到脂质体的方法。根据溶剂的不同可分为乙醇或叔丁醇注入法和乙醚 注入法等。(3) 逆相蒸发法 : 系将磷脂等脂质材料溶于有机溶剂, 如氯仿中, 再按一定比例 与含药的缓冲液混合、 乳化, 然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。 该法适合于水溶性药 物、 大分子活性物质, 如胰岛素等的脂质体制备, 可提高包封率。此外尚有冷冻干燥法和熔 融法。前面 5 种方法分散所形成的脂质体多为多室脂质体, 可用各种机械方法进一步分散, 以减小粒径并形成小单室脂质体 : a) 超声法将得到的大多层脂质体用超声波仪超声处理, 根据所采用超声的强度和作用时间长短而获得小单层脂质体。 b) 匀化法将得到的大多层脂 质体通过组织捣碎机或高压乳匀机匀化成较小粒径的脂质体。c) 挤压法将得到的大多层 脂质体在高压下连续通过孔径 1.0-0.05μm 的聚碳酸纤维膜后, 脂质体的大小分布趋于均 一, 且多为单室脂质体。
     在制备载药脂质体时, 根据药物的性质, 装载的机理不同, 可分为 “主动载药” 与 “被动载药” 两大类。所谓 “被动载药” , 即首先将药物溶于水相或有机相 ( 脂溶性药物 ) 中, 然后按所选择的脂质体制备方法制备载药脂质体。对于脂溶性的、 与磷脂膜亲和力高的药 物, “被动载药” 法较为适用。所谓 “主动载药” , 即通过脂质体内外水相的不同离子或化合 (2) 硫酸 物梯度进行载药, 主要适用于双亲性的药物。主动载药法主要包括 (1)pH 梯度法 ; 铵梯度法 ; (3) 醋酸钙梯度法或其他离子梯度法。
     硫酸铵梯度法即先将硫酸铵包于脂质体内水相, 然后通过透析、 凝胶色谱或超滤 的方法除去脂质体外水相的硫酸铵。由于离子对双分子层渗透系数的不同, 氨分子渗透系 + 数 (0.13cm/s) 较高, 能很快扩散到外水相中 ; H 的渗透系数远小于氨分子, 使脂质体内水
     相呈酸性, 形成 pH 梯度, 梯度大小由 [NH4+] 外水相 /[NH4+] 内水相比较决定, 这样使药物逆 2硫酸铵梯度载入脂质体。药物进入脂质体后与 SO4 形成的硫酸盐, 对双分子层渗透系数降 低, 因而使弱碱性药物具有很高的包封率并具有良好的稳定性。
     醋酸钙梯度法通过醋酸钙的跨膜运动产生的醋酸钙浓度梯度 ( 内部的浓度 高于外部 ), 使得大量质子从脂质体内部转运到外部产生 pH 梯度。醋酸的渗透参数 -4 (6.6×10 cm·s-1) 比 Ca2+(2.5×10-11cm·s-1) 大 7 个数量级, 所以 Ca2+ 很少穿越双分子膜 而留在脂质体内部, 醋酸分子则参与了质子转运。醋酸钙跨膜运动产生的浓度梯度 ( 内部 的浓度高于外部 ) 导致大量质子从脂质体的内部转运到外部产生 pH 梯度, 而 pH 的不平衡 为包载和聚集弱酸性药物提供了高效驱动力。
     主动载药与被动载药的共同特点是 : 在装载过程中脂质体的内外水相或双分子层 膜上的药物浓度基本一致, 决定其包封率的因素为药物与磷脂膜的作用力、 膜材的组成、 脂 质体的内水相体积、 脂质体数目及药脂比 ( 药物与磷脂膜材比 ) 等。
     维生素 E 聚乙二醇琥珀酸酯 (TPGS) 是由维生素 E 琥珀酸酯与聚乙二醇 1000 经 酯化形成的维生素 E 的水溶性衍生物, 包括 d-α- 维生素 E 琥珀酸聚乙二醇酯 (d-TPGS) 和 dl-α- 维生素 E 琥珀酸聚乙二醇酯 (dl-TPGS)。Youk 等报道将维生素 E 制备成 TPGS, 具有一定的抗癌作用 (Youk HJ, et al.Enhanced anticancer efficacy ofa-tocopheryl succinate by conjugation with polyethylene glycol.JControl Rel, 2005, 107 : 43-52.)。Yamagata 等 研 究 发 现 TPGS 可 抑 制 耐 药 乳 腺 癌 细 胞 MDCK-II 中 P-gp 的 作 用而显著促进抗癌药米托蒽醌的摄取, 提高抗癌疗效 (Yamagata T, et al.Effect of excipients on breastcancer resistance protein substrate uptake activity.J Control Rel, 2007, 124 : 1-5)。Zhao 等报道 TPGS 可促进叶酸修饰 PLGA 纳米粒在肿瘤细 胞的摄取和药物的细胞毒作用 (Zhao H, et al.Addition ofTPGS tofolate-conjugated polymer micelles for selective tumor targeting.JBiomed Mater Res A.2008, epub)。Cao 等将阿霉素与 TPGS 通过化学键形成载药胶束, 较游离阿霉素半衰期延长 4.5 倍 (Cao N, et al.Doxorubicin conjugated to D-a-tocopheryl polyethylene glycol 1000succinate(TPGS) : Conjugation chemistry, characterization, in vitro andin vivo evaluation。Biomaterials, 2008, 29 : 3856-65)。此外, TPGS 可促进药物的透皮吸收 (Chen CH, et al.Simultaneous effects of tocopherylpolyethylene glycol succinate(TPGS) on local hair growth promotionand systemic absorption of topically applied minoxidil in a mouse model.Int J Pharm.2005, 306(1-2) : 91-8.) 并促进药物的口服吸 收 (Mu L, et al.Mixed micelles made of poly(ethyleneglycol)-phosphatidylethano lamine conjugate and d-alpha-tocopherylpolyethylene glycol 1000 succinate as pharmaceutical nanocarriers forcamptothecin.Int J Pharm.2005 306(1-2) : 142-9.)
     鉴于 TPGS 是一种多功能的药用辅料。本发明旨在利用 TPGS 具有亲水性的 PEG 链 ( 分子量 1000) 和疏水性的维生素 E 链, 维生素 E 的疏水链可插入脂质体的疏水层, 以形成 PEG 修饰脂质体。 同时利用 TPGS 的抑制 P-gp 糖蛋白作用、 促进细胞摄取和药物吸收等特性 而设计含 TPGS 的载药脂质体配方。发明内容 本发明要解决的第一个技术问题在于提供一种新型的含 TPGS 的脂质体组合物, 其不仅能提高脂质体药物稳定性, 且能提高药物的疗效。
     为解决上述技术问题, 本发明采用如下技术方案 :
     一种含 TPGS 的脂质体组合物, 由磷脂类化合物、 胆固醇类化合物和 TPGS 组成, 各 组分的重量份比例磷脂类化合物 : 胆固醇类化合物 : TPGS 为 5 ~ 95 ∶ 0 ~ 50 ∶ 0.1 ~ 60。 其中胆固醇类化合物的重量份下限 “0” 表示可以无限趋近于零, 但不为 0。
     本发明优选所述组分的重量份比例磷脂类化合物 : 胆固醇类化合物 : TPGS 为 50 ~ 90 ∶ 10 ~ 40 ∶ 1 ~ 40。
     进一步优选所述组分的重量份比例磷脂类化合物 : 胆固醇类化合物 : TPGS 为 60 ~ 90 ∶ 10 ~ 30 ∶ 5 ~ 30。
     本发明所述的磷脂类化合物可选自下列一种或任意几种的组合 : 磷脂酰胆碱类 (PC)、 磷脂酰乙醇胺类 (PE)、 磷脂酰甘油类 (PG)、 磷脂酰丝氨酸 (PS) 等。 其中磷脂酰胆碱类 (PC) 包括天然来源的磷脂酰胆碱, 如蛋黄卵磷脂 (EPC)、 大豆卵磷脂 (SPC)、 氢化大豆磷脂 酰胆碱 (HSPC)、 氢化蛋黄卵磷脂 (HEL)、 心磷脂 (HPC)、 脑磷脂 (BPC) 和肝磷脂 (LPC) 等 ; 合 成的饱和磷脂酰胆碱如二月桂酸磷脂酰胆碱 (DLPC)、 二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱 (DMPC)、 二棕 榈酸磷脂酰胆碱 (DPPC)、 二硬脂酸磷脂酰胆碱 (DSPC) 等 ; 以及合成的不饱和磷脂酰胆碱如 二油酸磷脂酰胆碱 (DOPC) 等。磷脂酰乙醇胺类 (PE) 包括二硬脂酸磷脂酰乙醇胺 (DSPE)、 二油酸磷脂酰乙醇胺 (DOPE) 等。磷脂酰甘油类 (PG) 包括二硬脂酸磷脂酰甘油 (DSPG)、 二 肉豆蔻酰磷脂甘油 (DMPG) 等。本发明所述的磷脂类化合物优选磷脂酰胆碱类, 更优选下列 一种或任意几种的组合 : HSPC、 DPPC、 DSPC、 DMPC、 EPC、 SPC。
     本发明所述的胆固醇类化合物可选自下列之一 : 胆固醇、 胆固醇半琥珀酸酯 (CHEMS)、 胆固醇硫酸酯钠、 DC-chol(3β-[N-(N′, N- 二甲基胺乙基 ) 胺基甲酰基 ] 胆固 醇 ), 优选为胆固醇、 CHEMS 或 DC-chol。
     本发明要解决的第二个技术问题是提供所述的含 TPGS 的脂质体组合物在制备载 药脂质体中的应用, 即由脂质体组合物和药物制备载药脂质体, 该载药脂质体能显著提高 药物的疗效。
     本发明适用的药物可以是各种类型的药物, 根据其溶解性能可分为以下几类 : 水 溶性、 双亲性、 脂溶性。水溶性药物包括 : 核酸类、 蛋白类及小分子水溶性药物类如顺铂、 卡 铂、 氟尿嘧啶、 斑蝥素、 去甲斑蝥素、 氧化苦参碱等 ; 双亲性药物包括 : 弱碱性药物如盐酸阿 霉素、 盐酸柔红霉素、 盐酸米托蒽醌、 硫酸长春新碱、 磷酸氯喹、 盐酸表阿霉素等, 弱酸性药 物如泼尼松龙琥珀酸钠、 泼尼松龙磷酸钠、 地塞米松磷酸钠、 氢化可的松琥珀酸钠、 双氯芬 酸钠、 甲泼尼龙琥珀酸钠、 氯霉素琥珀酸钠、 倍他米松磷酸钠等 ; 脂溶性药物包括 : 大黄素、 大黄酸、 两性霉素 B、 紫杉醇、 多烯紫杉醇、 维生素 C 琥珀酸酯, 维生素 C 棕榈酸酯、 维生素 E 醋酸酯、 维生素 A 棕榈酸酯、 喜树碱, 羟基喜树碱等。本发明优选在载药脂质体的制备中, 所 述药物的重量为脂质体组合物重量的 1 ~ 40%, 优选 1 ~ 30%, 更优选 1 ~ 20%。
     本发明具体推荐所述的药物为大黄素。
     本发明具体推荐所述的载药脂质体由下列组分制成 : 蛋黄卵磷脂 48 ~ 87 份, 胆固 醇 11 ~ 24 份, TPGS 2 ~ 38 份, 大黄素 5 份。
     本发明所述的载药脂质体可以采用常规方法制备, 可根据药物的性质和需要自行 选择, 比如可以使用注入法、 薄膜分散法等, 药物的载入方式可以采用主动载药或者被动载 药, 一般来说, 脂溶性药物可采用被动载药方式, 两亲性药物可采用主动载药方式, 主动载 药方式可根据药物性质选用硫酸铵梯度法、 醋酸钙梯度法等。水溶性药物既可采用主动载 药方式, 也可采用被动载药方式。
     当药物为双亲性弱碱性药物时, 推荐通过如下方法进行制备 : 将磷脂类化合物、 胆 固醇和 TPGS 溶于乙醇或叔丁醇中, 快速注入 (NH4)2SO4 水溶液中, 形成多室脂质体, N2 下依 次挤压通过 200nm 和 100nm 聚碳酸酯膜, 得单室脂质体。再用蔗糖水溶液或磷酸盐等缓冲 液超滤置换脂质体分散介质中的 (NH4)2SO4, 形成脂质体双分子膜内外的 度, 得空白单室脂质体 ; 然后将双亲性弱碱性药物溶于水中, 加入空白单室脂质体中, 37-65℃水浴条 + 件下, 药物在 NH4 梯度的作用下进入脂质体载药, 得到载药脂质体。
     当药物为双亲性弱酸性药物时, 推荐通过如下方法进行制备 : 将磷脂类化合物、 胆 固醇和 TPGS 溶于乙醇或叔丁醇中, 快速注入醋酸钙水溶液中, 形成多室脂质体, N2 下依次挤 压通过 200nm 和 100nm 聚碳酸酯膜, 得单室脂质体。再用蔗糖水溶液或醋酸盐等缓冲液超 滤置换脂质体分散介质中的醋酸钙, 形成脂质体双分子膜内外的钙离子浓度梯度, 得空白 单室脂质体 ; 然后将双亲性弱酸性药物溶于水中, 加入空白单室脂质体中, 37-65℃水浴条 件下, 药物在钙离子浓度梯度的作用下进入脂质体载药, 得到载药脂质体。
     当药物为脂溶性药物时, 所述的载药脂质体推荐采用如下方法进行制备 : 将磷脂 类化合物、 胆固醇、 TPGS 和脂溶性药物置于反应器中, 加有机溶剂 ( 优选乙醇和 / 或氯仿 ) 进行溶解, 减压旋转蒸发形成薄膜, 加生理盐水或甘油水溶液水化薄膜形成多室脂质体, N2 下依次挤压通过 200nm 和 100nm 聚碳酸酯膜, 得单室载药脂质体。
     当药物为水溶性药物时, 所述的载药脂质体推荐采用如下方法制备 : 将磷脂类化 合物、 胆固醇类化合物和 TPGS 置于反应器中, 加有机溶剂 ( 优选氯仿、 二氯甲烷、 乙醇 ) 进 行溶解, 减压旋转蒸发形成薄膜, 加含有水溶性药物的生理盐水水化薄膜形成多室脂质体, N2 下依次挤压通过 200nm 和 100nm 聚碳酸酯膜, 得单室载药脂质体。
     本发明制得的载药脂质体适用于注射给药、 口服给药、 皮肤给药及其它方式给药。
     与现有技术相比, 本发明的有益效果在于 : 本发明利用 TPGS 的多功能性设计 PEG 修饰脂质体。利用 TPGS 具有亲水性的 PEG 链 ( 分子量 1000) 和疏水性的维生素 E 链, 维生 素 E 的疏水链可插入脂质体的疏水层, 以形成 PEG 修饰脂质体, 提高脂质体稳定性并具有延 长药物体循环。 同时利用 TPGS 抑制 P-gp 糖蛋白的作用、 促进细胞摄取和药物吸收等特性而 设计含 TPGS 的载药脂质体配方以提高药物疗效。与现有 PEG2000-DSPE 修饰脂质体相比, 因 TPGS 中 PEG 链 ( 分子量 1000) 较 PEG2000-DSPE(PEG 分子量 2000) 的 PEG 链短, 空间位 阻小, 易与细胞接触并摄取 ; 且 TPGS 还具有抑制 P-gp 的功能, 促进药物吸收并具有一定抗 癌作用 ; 同时 TPGS 已被 FDA 批准作为药用辅料, 价格较 PEG-DSPE 便宜, 其在脂质体的应用 将在很大程度上降低生产成本。 总之, 本发明所述的脂质体组合物和载药脂质体, 由于添加 了 TPGS, 更有利于发挥药物疗效。 附图说明
     图 1 为 PEG-DSPE 修饰的大黄素脂质体、 TPGS 修饰的大黄素脂质体和游离大黄素药物与 L1210 细胞作用 24h 的细胞毒作用图 ;
     图 2 为 PEG-DSPE 修饰的大黄素脂质体、 TPGS 修饰的大黄素脂质体和游离大黄素 药物与 L1210 细胞作用 48h 的细胞毒作用图 ;
     图 3 为 PEG-DSPE 修饰的大黄素脂质体、 TPGS 修饰的大黄素脂质体和游离大黄素 药物与 L1210 细胞作用 72h 的细胞毒作用图。 具体实施方式
     下面以具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明, 但本发明的保护范围不限 于此 :
     实施例 1 : 含 TPGS 的大黄素脂质体配方
     表 1 含 TPGS 的大黄素脂质体配方
     配方 I 处方 EPC 胆固醇 TPGS mg 87 11 2配方 II 配方 III mg 65 24 12 mg 56 22 22配方 IV mg 48 14 38大黄素
     5555将卵磷脂、 胆固醇、 TPGS 和大黄素置于圆底烧瓶中, 加 15ml 的乙醇和氯仿 (2 ∶ 8, V/V) 混合溶液溶解脂质和药物, 减压旋转蒸发形成薄膜, 加生理盐水水化薄膜形成多室脂 质体, 使大黄素的最终浓度为 0.5mg/ml。N2 下依次挤压通过 200nm 和 100nm 聚碳酸酯膜, 得单室载药脂质体, 外观为浅黄色浊状液。
     实施例 2 : PEG-DSPE 修饰与 TPGS 修饰大黄素脂质体的比较
     分别将相同摩尔比的 EPC/Chol/TPGS(55/40/5) 和 EPC/Chol/PEG-DSPE(55/40/5) 按实施例 1 的方法制备大黄素脂质体, 最终大黄素浓度为 0.5mg/ml, 结果包封率均在 90% 以上, 平均粒径 100nm 左右, 4℃冰箱放置 6 个月, 稳定性均良好。比较了两种脂质体和游离 大黄素与 L1210 细胞作用不同时间后的细胞毒作用, 结果见图 1-3。从图 1-3 可见, TPGS 修 饰的大黄素脂质体细胞毒作用较游离大黄素和 PEG-DSPE 修饰的大黄素脂质体显著提高。
     实施例 2 : 含 TPGS 的双亲性碱性药物脂质体配方
     表 2-1 含 TPGS 的双亲件碱性药物脂质体配方 I
     7101991538 A CN 101991540说处方 HSPC 胆固醇 TPGS明书mg 74 25 1 106/10 页盐酸米托蒽醌
     表 2-2含 TPGS 的双亲性碱性药物脂质体配方 II处方 HSPC 胆固醇 TPGS 盐酸阿霉素 7 mg 48 15 38
     表 2-3含 TPGS 的双亲性碱性药物脂质体配方 III处方 DSPC 胆固醇 mg 81 17TPGS 硫酸长春新碱
     2 19表 2-4含 TPGS 的双亲性碱性药物脂质体配方 IV 处方 EPC 胆固醇8mg 56 22101991538 A CN 101991540说TPGS明书22 77/10 页磷酸氯喹
     表 2-5含 TPGS 的双亲性碱性药物脂质体配方 V 处方 DPPC 胆固醇 TPGS 盐酸柔红霉素 mg 54 16 30 8将磷脂、 胆固醇和 TPGS 溶于 1ml 的乙醇中, 快速注入 5ml 含 300mM pH4.0(NH4)2SO4 的溶液中, 形成多室脂质体, N2 下依次挤压通过 200nm 和 100nm 聚碳酸酯膜, 得单室脂质体。 再用含 10%蔗糖的水溶液超滤置换脂质体分散介质中的 (NH4)2SO4, 形成脂质体双分子膜内 + 外的 NH4 梯度, 得空白单室脂质体, 脂质总浓度为 20mg/ml, 平均粒径均小于 100nm。
     将上述各处方中药物溶于水中, 加入空白单室脂质体中, 55℃水浴 1h, 药物在 NH4+ 梯度的作用下进入脂质体载药, 包封率均在 90%以上。
     实施例 3 : 含 TPGS 的双亲性酸性药物脂质体配方
     表 3-1 含 TPGS 的双亲性酸性药物脂质体配方 I
     处方 HSPCmg 73胆固醇 TPGS 泼尼松龙琥珀酸钠
     25 2 7表 3-2含 TPGS 的双亲性酸性药物脂质体配方 II 处方 HSPC mg 559101991538 A CN 101991540说胆固醇 TPGS明书23 22 108/10 页地塞米松磷酸钠
     将磷脂、 胆固醇和 TPGS 溶于 1ml 乙醇中, 快速注入 5ml 含 200mM 醋酸钙的溶液中, 形成多室脂质体, N2 下依次挤压通过 200nm 和 100nm 聚碳酸酯膜, 得单室脂质体。 再用 10% 蔗糖溶液透析置换脂质体分散介质中的醋酸钙, 形成脂质体双分子膜内外的钙离子梯度, 得空白单室脂质体, 脂质总浓度为 20mg/ml, 平均粒径小于 100nm。
     将上述配方中的药物溶于水, 加入制得的空白单室脂质体中, 65℃水浴 1h, 药物在 钙离子梯度的作用下进入脂质体载药, 包封率在 85%以上。
     实施例 4 : 含 TPGS 的水溶性药物脂质体配方
     表 4-1 含 TPGS 的水溶性药物脂质体配方
     处方 HSPC CHEMS TPGS 顺铂
     mg 65 25 10 5将磷脂、 胆固醇和 TPGS 置于圆底烧瓶中, 加氯仿 15ml 溶解脂质, 减压旋转蒸发形 成薄膜, 加顺铂生理盐水水化薄膜形成多室脂质体, N2 下依次挤压通过 200nm 和 100nm 聚 碳酸酯膜, 得单室载药脂质体, 脂质总浓度为 20mg/ml, 平均粒径小于 100nm, 包封率 85%以 上。
     实施例 5 : 含 TPGS 的难溶性药物脂质体配方
     表 5-1 含 TPGS 的难溶性药物脂质体配方 I
     处方 DPPC 胆固醇 TPGSmg 69 11 2010101991538 A CN 101991540说明书3.59/10 页紫杉醇
     表 4-2含 TPGS 的难溶性药物脂质体配方 II处方 HSPC DSPG 胆固醇 TPGS 两性霉素 B mg 58 23 14 4 15将磷脂、 胆固醇、 TPGS 和药物置于圆底烧瓶中, 加 15ml 乙醇和氯仿 (2 ∶ 8, V/V) 混合溶液溶解脂质和药物, 减压旋转蒸发形成薄膜, 加生理盐水水化薄膜形成多室脂质体, N2 下依次挤压通过 200nm 和 100nm 聚碳酸酯膜, 得单室载药脂质体, 脂质总浓度为 20mg/ml, 平均粒径小于 100nm, 包封率 85%以上。
     实施例 6 : 功能性化妆品脂质体配方
     表 6-1 含 TPGS 的功能性化妆品脂质体配方 I
     处方 SPC 胆固醇 TPGS Vc 棕榈酸酯
     mg 87 11 2 10表 6-2含 TPGS 的功能性化妆品脂质体配方 II处方 EPC 胆固醇 TPGS mg 85 5 1011101991538 A CN 101991540说明书1510/10 页VE 醋酸酯
     表 6-3含 TPGS 的功能性化妆品脂质体配方 III处方 SPC 胆固醇 TPGS VA 棕榈酸酯 mg 61 4 34 20将卵磷脂、 胆固醇、 TPGS 和药物置于圆底烧瓶中, 加 20ml 乙醇和氯仿 (3 ∶ 7, V/V) 混合溶液溶解脂质和药物, 减压旋转蒸发形成薄膜, 加甘油水溶液水化薄膜形成多室脂质 体, N2 下依次挤压通过 200nm 和 100nm 聚碳酸酯膜, 得单室载药脂质体, 脂质总浓度为 40mg/ ml, 平均粒径小于 100nm, 包封率 90%以上。
    

一种含TPGS的脂质体组合物及其应用.pdf_第1页
第1页 / 共14页
一种含TPGS的脂质体组合物及其应用.pdf_第2页
第2页 / 共14页
一种含TPGS的脂质体组合物及其应用.pdf_第3页
第3页 / 共14页
点击查看更多>>
资源描述

《一种含TPGS的脂质体组合物及其应用.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《一种含TPGS的脂质体组合物及其应用.pdf(14页珍藏版)》请在专利查询网上搜索。

1、10申请公布号CN101991538A43申请公布日20110330CN101991538ACN101991538A21申请号200910101607822申请日20090814A61K9/127200601A61K31/122200601A61K47/34200601A61K47/22200601A61K47/28200601A61K47/24200601A61P35/0020060171申请人浙江工业大学地址310014浙江省杭州市下城区朝晖六区72发明人熊素彬RJ李尹小东74专利代理机构杭州天正专利事务所有限公司33201代理人黄美娟王兵54发明名称一种含TPGS的脂质体组合物及其应用5。

2、7摘要本发明公开了一种含TPGS的脂质体组合物及其应用,所述脂质体组合物由磷脂类化合物、胆固醇类化合物和TPGS组成,各组分的重量份比例磷脂类化合物胆固醇类化合物TPGS为5950500160。所述的含TPGS的脂质体组合物应用于制备载药脂质体,不仅能提高脂质体药物稳定性,且能提高药物的疗效。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书10页附图2页CN101991540A1/1页21一种含TPGS的脂质体组合物,由磷脂类化合物、胆固醇类化合物和TPGS组成,各组分的重量份比例磷脂类化合物胆固醇类化合物TPGS为5950500160。2如权利要求1所述的含。

3、TPGS的脂质体组合物,其特征在于所述组分的重量份比例磷脂类化合物胆固醇类化合物TPGS为50901040140。3如权利要求2所述的含TPGS的脂质体组合物,其特征在于所述组分的重量份比例磷脂类化合物胆固醇类化合物TPGS为60901030530。4如权利要求13之一所述的含TPGS的脂质体组合物,其特征在于所述的磷脂类化合物选自下列一种或任意几种的组合磷脂酰胆碱类、磷脂酰乙醇胺类、磷脂酰甘油类、磷脂酰丝氨酸类。5如权利要求4所述的含TPGS的脂质体组合物,其特征在于所述的磷脂类化合物选自下列之一蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷。

4、脂酰胆碱。6如权利要求13之一所述的脂质体组合物,其特征在于所述的胆固醇类化合物选自下列之一胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯、胆固醇硫酸酯钠、DCCHOL。7如权利要求1所述的含TPGS的脂质体组合物在制备载药脂质体中的应用,其特征在于所述的药物为双亲性药物、水溶性药物或脂溶性药物,所述药物的重量为脂质体组合物重量的140。8如权利要求7所述的含TPGS的脂质体组合物在制备载药脂质体中的应用,其特征在于所述药物的重量为脂质体组合物重量的130。9如权利要求7所述的含TPGS的脂质体组合物在制备载药脂质体中的应用,其特征在于所述的药物为大黄素。10如权利要求9所述的含TPGS的脂质体组合物在制备载药脂质。

5、体中的应用,其特征在于所述的载药脂质体由下列组分制成蛋黄卵磷脂4887份,胆固醇1124份,TPGS238份,大黄素5份。权利要求书CN101991538ACN101991540A1/10页3一种含TPGS的脂质体组合物及其应用技术领域0001本发明涉及一种含TPGS的脂质体组合物,以及由其制备得到的载药脂质体。背景技术0002脂质体主要由磷脂和胆固醇组成的类似细胞膜的双分子层结构。脂质体可分为三类小单室层脂质体,粒径为2080NM;大单室脂质体,粒径约为1001000NM;多室层脂质体,粒径约为10005000NM。脂质体的发展经历了普通脂质体,PEG修饰脂质体,到受体或配体修饰脂质体。目前。

6、临床应用的脂质体主要为普通脂质体如DAUNOXOME和PEG修饰脂质体如DOXIL。与普通脂质体相比,PEG修饰脂质体具有降低脂质体的粒径,提高脂质体的稳定性,延长体循环时间,提高抗癌药物靶向性等优点。常用的脂质体PEG修饰剂主要为PEG2000DSPE,如PEG修饰阿霉素脂质体上市产品DOXIL;此外尚有一些含PEG的表面活性剂,如TWEEN80,POLOXMER188,等。0003脂质体的制备方法有多种,根据药物的性质或需要进行选择。1薄膜分散法系将磷脂等膜材溶于适量的氯仿或其它有机溶剂中,脂溶性药物可加在有机溶剂中,然后在减压旋转下除去溶剂,使脂质在器壁形成薄膜后,加入不含有或者含有水溶。

7、性药物的缓冲溶液或其他溶液,进行振摇,则可形成多层脂质体。2注入法将磷脂等脂质材料和脂溶性药物溶于有机溶剂中油相,然后把油相均速注射到水相含有或不含有水溶性药物中,除尽有机溶剂得到脂质体的方法。根据溶剂的不同可分为乙醇或叔丁醇注入法和乙醚注入法等。3逆相蒸发法系将磷脂等脂质材料溶于有机溶剂,如氯仿中,再按一定比例与含药的缓冲液混合、乳化,然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。该法适合于水溶性药物、大分子活性物质,如胰岛素等的脂质体制备,可提高包封率。此外尚有冷冻干燥法和熔融法。前面5种方法分散所形成的脂质体多为多室脂质体,可用各种机械方法进一步分散,以减小粒径并形成小单室脂质体A超声法将得到的大。

8、多层脂质体用超声波仪超声处理,根据所采用超声的强度和作用时间长短而获得小单层脂质体。B匀化法将得到的大多层脂质体通过组织捣碎机或高压乳匀机匀化成较小粒径的脂质体。C挤压法将得到的大多层脂质体在高压下连续通过孔径10005M的聚碳酸纤维膜后,脂质体的大小分布趋于均一,且多为单室脂质体。0004在制备载药脂质体时,根据药物的性质,装载的机理不同,可分为“主动载药”与“被动载药”两大类。所谓“被动载药”,即首先将药物溶于水相或有机相脂溶性药物中,然后按所选择的脂质体制备方法制备载药脂质体。对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物,“被动载药”法较为适用。所谓“主动载药”,即通过脂质体内外水相的不同离子或。

9、化合物梯度进行载药,主要适用于双亲性的药物。主动载药法主要包括1PH梯度法;2硫酸铵梯度法;3醋酸钙梯度法或其他离子梯度法。0005硫酸铵梯度法即先将硫酸铵包于脂质体内水相,然后通过透析、凝胶色谱或超滤的方法除去脂质体外水相的硫酸铵。由于离子对双分子层渗透系数的不同,氨分子渗透系数013CM/S较高,能很快扩散到外水相中;H的渗透系数远小于氨分子,使脂质体内水说明书CN101991538ACN101991540A2/10页4相呈酸性,形成PH梯度,梯度大小由NH4外水相/NH4内水相比较决定,这样使药物逆硫酸铵梯度载入脂质体。药物进入脂质体后与SO42形成的硫酸盐,对双分子层渗透系数降低,因而。

10、使弱碱性药物具有很高的包封率并具有良好的稳定性。0006醋酸钙梯度法通过醋酸钙的跨膜运动产生的醋酸钙浓度梯度内部的浓度高于外部,使得大量质子从脂质体内部转运到外部产生PH梯度。醋酸的渗透参数66104CMS1比CA2251011CMS1大7个数量级,所以CA2很少穿越双分子膜而留在脂质体内部,醋酸分子则参与了质子转运。醋酸钙跨膜运动产生的浓度梯度内部的浓度高于外部导致大量质子从脂质体的内部转运到外部产生PH梯度,而PH的不平衡为包载和聚集弱酸性药物提供了高效驱动力。0007主动载药与被动载药的共同特点是在装载过程中脂质体的内外水相或双分子层膜上的药物浓度基本一致,决定其包封率的因素为药物与磷脂。

11、膜的作用力、膜材的组成、脂质体的内水相体积、脂质体数目及药脂比药物与磷脂膜材比等。0008维生素E聚乙二醇琥珀酸酯TPGS是由维生素E琥珀酸酯与聚乙二醇1000经酯化形成的维生素E的水溶性衍生物,包括D维生素E琥珀酸聚乙二醇酯DTPGS和DL维生素E琥珀酸聚乙二醇酯DLTPGS。YOUK等报道将维生素E制备成TPGS,具有一定的抗癌作用YOUKHJ,ETALENHANCEDANTICANCEREFFICACYOFATOCOPHERYLSUCCINATEBYCONJUGATIONWITHPOLYETHYLENEGLYCOLJCONTROLREL,2005,1074352。YAMAGATA等研究发。

12、现TPGS可抑制耐药乳腺癌细胞MDCKII中PGP的作用而显著促进抗癌药米托蒽醌的摄取,提高抗癌疗效YAMAGATAT,ETALEFFECTOFEXCIPIENTSONBREASTCANCERRESISTANCEPROTEINSUBSTRATEUPTAKEACTIVITYJCONTROLREL,2007,12415。ZHAO等报道TPGS可促进叶酸修饰PLGA纳米粒在肿瘤细胞的摄取和药物的细胞毒作用ZHAOH,ETALADDITIONOFTPGSTOFOLATECONJUGATEDPOLYMERMICELLESFORSELECTIVETUMORTARGETINGJBIOMEDMATERRESA。

13、2008,EPUB。CAO等将阿霉素与TPGS通过化学键形成载药胶束,较游离阿霉素半衰期延长45倍CAON,ETALDOXORUBICINCONJUGATEDTODATOCOPHERYLPOLYETHYLENEGLYCOL1000SUCCINATETPGSCONJUGATIONCHEMISTRY,CHARACTERIZATION,INVITROANDINVIVOEVALUATION。BIOMATERIALS,2008,29385665。此外,TPGS可促进药物的透皮吸收CHENCH,ETALSIMULTANEOUSEFFECTSOFTOCOPHERYLPOLYETHYLENEGLYCOLSUC。

14、CINATETPGSONLOCALHAIRGROWTHPROMOTIONANDSYSTEMICABSORPTIONOFTOPICALLYAPPLIEDMINOXIDILINAMOUSEMODELINTJPHARM2005,30612918并促进药物的口服吸收MUL,ETALMIXEDMICELLESMADEOFPOLYETHYLENEGLYCOLPHOSPHATIDYLETHANOLAMINECONJUGATEANDDALPHATOCOPHERYLPOLYETHYLENEGLYCOL1000SUCCINATEASPHARMACEUTICALNANOCARRIERSFORCAMPTOTHECIN。

15、INTJPHARM20053061214290009鉴于TPGS是一种多功能的药用辅料。本发明旨在利用TPGS具有亲水性的PEG链分子量1000和疏水性的维生素E链,维生素E的疏水链可插入脂质体的疏水层,以形成PEG修饰脂质体。同时利用TPGS的抑制PGP糖蛋白作用、促进细胞摄取和药物吸收等特性而设计含TPGS的载药脂质体配方。说明书CN101991538ACN101991540A3/10页5发明内容0010本发明要解决的第一个技术问题在于提供一种新型的含TPGS的脂质体组合物,其不仅能提高脂质体药物稳定性,且能提高药物的疗效。0011为解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案0012一种含T。

16、PGS的脂质体组合物,由磷脂类化合物、胆固醇类化合物和TPGS组成,各组分的重量份比例磷脂类化合物胆固醇类化合物TPGS为5950500160。其中胆固醇类化合物的重量份下限“0”表示可以无限趋近于零,但不为0。0013本发明优选所述组分的重量份比例磷脂类化合物胆固醇类化合物TPGS为50901040140。0014进一步优选所述组分的重量份比例磷脂类化合物胆固醇类化合物TPGS为60901030530。0015本发明所述的磷脂类化合物可选自下列一种或任意几种的组合磷脂酰胆碱类PC、磷脂酰乙醇胺类PE、磷脂酰甘油类PG、磷脂酰丝氨酸PS等。其中磷脂酰胆碱类PC包括天然来源的磷脂酰胆碱,如蛋黄卵。

17、磷脂EPC、大豆卵磷脂SPC、氢化大豆磷脂酰胆碱HSPC、氢化蛋黄卵磷脂HEL、心磷脂HPC、脑磷脂BPC和肝磷脂LPC等;合成的饱和磷脂酰胆碱如二月桂酸磷脂酰胆碱DLPC、二肉豆蔻酸磷脂酰胆碱DMPC、二棕榈酸磷脂酰胆碱DPPC、二硬脂酸磷脂酰胆碱DSPC等;以及合成的不饱和磷脂酰胆碱如二油酸磷脂酰胆碱DOPC等。磷脂酰乙醇胺类PE包括二硬脂酸磷脂酰乙醇胺DSPE、二油酸磷脂酰乙醇胺DOPE等。磷脂酰甘油类PG包括二硬脂酸磷脂酰甘油DSPG、二肉豆蔻酰磷脂甘油DMPG等。本发明所述的磷脂类化合物优选磷脂酰胆碱类,更优选下列一种或任意几种的组合HSPC、DPPC、DSPC、DMPC、EPC、S。

18、PC。0016本发明所述的胆固醇类化合物可选自下列之一胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯CHEMS、胆固醇硫酸酯钠、DCCHOL3NN,N二甲基胺乙基胺基甲酰基胆固醇,优选为胆固醇、CHEMS或DCCHOL。0017本发明要解决的第二个技术问题是提供所述的含TPGS的脂质体组合物在制备载药脂质体中的应用,即由脂质体组合物和药物制备载药脂质体,该载药脂质体能显著提高药物的疗效。0018本发明适用的药物可以是各种类型的药物,根据其溶解性能可分为以下几类水溶性、双亲性、脂溶性。水溶性药物包括核酸类、蛋白类及小分子水溶性药物类如顺铂、卡铂、氟尿嘧啶、斑蝥素、去甲斑蝥素、氧化苦参碱等;双亲性药物包括弱碱性药物如盐。

19、酸阿霉素、盐酸柔红霉素、盐酸米托蒽醌、硫酸长春新碱、磷酸氯喹、盐酸表阿霉素等,弱酸性药物如泼尼松龙琥珀酸钠、泼尼松龙磷酸钠、地塞米松磷酸钠、氢化可的松琥珀酸钠、双氯芬酸钠、甲泼尼龙琥珀酸钠、氯霉素琥珀酸钠、倍他米松磷酸钠等;脂溶性药物包括大黄素、大黄酸、两性霉素B、紫杉醇、多烯紫杉醇、维生素C琥珀酸酯,维生素C棕榈酸酯、维生素E醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、喜树碱,羟基喜树碱等。本发明优选在载药脂质体的制备中,所述药物的重量为脂质体组合物重量的140,优选130,更优选120。0019本发明具体推荐所述的药物为大黄素。0020本发明具体推荐所述的载药脂质体由下列组分制成蛋黄卵磷脂4887份,胆固醇。

20、1124份,TPGS238份,大黄素5份。说明书CN101991538ACN101991540A4/10页60021本发明所述的载药脂质体可以采用常规方法制备,可根据药物的性质和需要自行选择,比如可以使用注入法、薄膜分散法等,药物的载入方式可以采用主动载药或者被动载药,一般来说,脂溶性药物可采用被动载药方式,两亲性药物可采用主动载药方式,主动载药方式可根据药物性质选用硫酸铵梯度法、醋酸钙梯度法等。水溶性药物既可采用主动载药方式,也可采用被动载药方式。0022当药物为双亲性弱碱性药物时,推荐通过如下方法进行制备将磷脂类化合物、胆固醇和TPGS溶于乙醇或叔丁醇中,快速注入NH42SO4水溶液中,形。

21、成多室脂质体,N2下依次挤压通过200NM和100NM聚碳酸酯膜,得单室脂质体。再用蔗糖水溶液或磷酸盐等缓冲液超滤置换脂质体分散介质中的NH42SO4,形成脂质体双分子膜内外的度,得空白单室脂质体;然后将双亲性弱碱性药物溶于水中,加入空白单室脂质体中,3765水浴条件下,药物在NH4梯度的作用下进入脂质体载药,得到载药脂质体。0023当药物为双亲性弱酸性药物时,推荐通过如下方法进行制备将磷脂类化合物、胆固醇和TPGS溶于乙醇或叔丁醇中,快速注入醋酸钙水溶液中,形成多室脂质体,N2下依次挤压通过200NM和100NM聚碳酸酯膜,得单室脂质体。再用蔗糖水溶液或醋酸盐等缓冲液超滤置换脂质体分散介质中。

22、的醋酸钙,形成脂质体双分子膜内外的钙离子浓度梯度,得空白单室脂质体;然后将双亲性弱酸性药物溶于水中,加入空白单室脂质体中,3765水浴条件下,药物在钙离子浓度梯度的作用下进入脂质体载药,得到载药脂质体。0024当药物为脂溶性药物时,所述的载药脂质体推荐采用如下方法进行制备将磷脂类化合物、胆固醇、TPGS和脂溶性药物置于反应器中,加有机溶剂优选乙醇和/或氯仿进行溶解,减压旋转蒸发形成薄膜,加生理盐水或甘油水溶液水化薄膜形成多室脂质体,N2下依次挤压通过200NM和100NM聚碳酸酯膜,得单室载药脂质体。0025当药物为水溶性药物时,所述的载药脂质体推荐采用如下方法制备将磷脂类化合物、胆固醇类化合。

23、物和TPGS置于反应器中,加有机溶剂优选氯仿、二氯甲烷、乙醇进行溶解,减压旋转蒸发形成薄膜,加含有水溶性药物的生理盐水水化薄膜形成多室脂质体,N2下依次挤压通过200NM和100NM聚碳酸酯膜,得单室载药脂质体。0026本发明制得的载药脂质体适用于注射给药、口服给药、皮肤给药及其它方式给药。0027与现有技术相比,本发明的有益效果在于本发明利用TPGS的多功能性设计PEG修饰脂质体。利用TPGS具有亲水性的PEG链分子量1000和疏水性的维生素E链,维生素E的疏水链可插入脂质体的疏水层,以形成PEG修饰脂质体,提高脂质体稳定性并具有延长药物体循环。同时利用TPGS抑制PGP糖蛋白的作用、促进细。

24、胞摄取和药物吸收等特性而设计含TPGS的载药脂质体配方以提高药物疗效。与现有PEG2000DSPE修饰脂质体相比,因TPGS中PEG链分子量1000较PEG2000DSPEPEG分子量2000的PEG链短,空间位阻小,易与细胞接触并摄取;且TPGS还具有抑制PGP的功能,促进药物吸收并具有一定抗癌作用;同时TPGS已被FDA批准作为药用辅料,价格较PEGDSPE便宜,其在脂质体的应用将在很大程度上降低生产成本。总之,本发明所述的脂质体组合物和载药脂质体,由于添加了TPGS,更有利于发挥药物疗效。附图说明0028图1为PEGDSPE修饰的大黄素脂质体、TPGS修饰的大黄素脂质体和游离大黄素说明书。

25、CN101991538ACN101991540A5/10页7药物与L1210细胞作用24H的细胞毒作用图;0029图2为PEGDSPE修饰的大黄素脂质体、TPGS修饰的大黄素脂质体和游离大黄素药物与L1210细胞作用48H的细胞毒作用图;0030图3为PEGDSPE修饰的大黄素脂质体、TPGS修饰的大黄素脂质体和游离大黄素药物与L1210细胞作用72H的细胞毒作用图。具体实施方式0031下面以具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明,但本发明的保护范围不限于此0032实施例1含TPGS的大黄素脂质体配方0033表1含TPGS的大黄素脂质体配方0034配方I配方II配方III配方IV处方MGMG。

26、MGMGEPC87655648胆固醇11242214TPGS2122238大黄素55550035将卵磷脂、胆固醇、TPGS和大黄素置于圆底烧瓶中,加15ML的乙醇和氯仿28,V/V混合溶液溶解脂质和药物,减压旋转蒸发形成薄膜,加生理盐水水化薄膜形成多室脂质体,使大黄素的最终浓度为05MG/ML。N2下依次挤压通过200NM和100NM聚碳酸酯膜,得单室载药脂质体,外观为浅黄色浊状液。0036实施例2PEGDSPE修饰与TPGS修饰大黄素脂质体的比较0037分别将相同摩尔比的EPC/CHOL/TPGS55/40/5和EPC/CHOL/PEGDSPE55/40/5按实施例1的方法制备大黄素脂质体,。

27、最终大黄素浓度为05MG/ML,结果包封率均在90以上,平均粒径100NM左右,4冰箱放置6个月,稳定性均良好。比较了两种脂质体和游离大黄素与L1210细胞作用不同时间后的细胞毒作用,结果见图13。从图13可见,TPGS修饰的大黄素脂质体细胞毒作用较游离大黄素和PEGDSPE修饰的大黄素脂质体显著提高。0038实施例2含TPGS的双亲性碱性药物脂质体配方0039表21含TPGS的双亲件碱性药物脂质体配方I0040说明书CN101991538ACN101991540A6/10页8处方MGHSPC74胆固醇25TPGS1盐酸米托蒽醌100041表22含TPGS的双亲性碱性药物脂质体配方II0042。

28、处方MGHSPC48胆固醇15TPGS38盐酸阿霉素700430044表23含TPGS的双亲性碱性药物脂质体配方III0045处方MGDSPC81胆固醇17TPGS2硫酸长春新碱190046表24含TPGS的双亲性碱性药物脂质体配方IV0047处方MGEPC56胆固醇22说明书CN101991538ACN101991540A7/10页9TPGS22磷酸氯喹70048表25含TPGS的双亲性碱性药物脂质体配方V0049处方MGDPPC54胆固醇16TPGS30盐酸柔红霉素80050将磷脂、胆固醇和TPGS溶于1ML的乙醇中,快速注入5ML含300MMPH40NH42SO4的溶液中,形成多室脂质体。

29、,N2下依次挤压通过200NM和100NM聚碳酸酯膜,得单室脂质体。再用含10蔗糖的水溶液超滤置换脂质体分散介质中的NH42SO4,形成脂质体双分子膜内外的NH4梯度,得空白单室脂质体,脂质总浓度为20MG/ML,平均粒径均小于100NM。0051将上述各处方中药物溶于水中,加入空白单室脂质体中,55水浴1H,药物在NH4梯度的作用下进入脂质体载药,包封率均在90以上。0052实施例3含TPGS的双亲性酸性药物脂质体配方0053表31含TPGS的双亲性酸性药物脂质体配方I0054处方MGHSPC73胆固醇25TPGS2泼尼松龙琥珀酸钠70055表32含TPGS的双亲性酸性药物脂质体配方II00。

30、56处方MGHSPC55说明书CN101991538ACN101991540A8/10页10胆固醇23TPGS22地塞米松磷酸钠100057将磷脂、胆固醇和TPGS溶于1ML乙醇中,快速注入5ML含200MM醋酸钙的溶液中,形成多室脂质体,N2下依次挤压通过200NM和100NM聚碳酸酯膜,得单室脂质体。再用10蔗糖溶液透析置换脂质体分散介质中的醋酸钙,形成脂质体双分子膜内外的钙离子梯度,得空白单室脂质体,脂质总浓度为20MG/ML,平均粒径小于100NM。0058将上述配方中的药物溶于水,加入制得的空白单室脂质体中,65水浴1H,药物在钙离子梯度的作用下进入脂质体载药,包封率在85以上。00。

31、59实施例4含TPGS的水溶性药物脂质体配方0060表41含TPGS的水溶性药物脂质体配方0061处方MGHSPC65CHEMS25TPGS10顺铂50062将磷脂、胆固醇和TPGS置于圆底烧瓶中,加氯仿15ML溶解脂质,减压旋转蒸发形成薄膜,加顺铂生理盐水水化薄膜形成多室脂质体,N2下依次挤压通过200NM和100NM聚碳酸酯膜,得单室载药脂质体,脂质总浓度为20MG/ML,平均粒径小于100NM,包封率85以上。0063实施例5含TPGS的难溶性药物脂质体配方0064表51含TPGS的难溶性药物脂质体配方I0065处方MGDPPC69胆固醇11TPGS20说明书CN101991538ACN。

32、101991540A9/10页11紫杉醇3500660067表42含TPGS的难溶性药物脂质体配方II0068处方MGHSPC58DSPG23胆固醇14TPGS4两性霉素B150069将磷脂、胆固醇、TPGS和药物置于圆底烧瓶中,加15ML乙醇和氯仿28,V/V混合溶液溶解脂质和药物,减压旋转蒸发形成薄膜,加生理盐水水化薄膜形成多室脂质体,N2下依次挤压通过200NM和100NM聚碳酸酯膜,得单室载药脂质体,脂质总浓度为20MG/ML,平均粒径小于100NM,包封率85以上。0070实施例6功能性化妆品脂质体配方0071表61含TPGS的功能性化妆品脂质体配方I0072处方MGSPC87胆固醇。

33、11TPGS2VC棕榈酸酯100073表62含TPGS的功能性化妆品脂质体配方II0074处方MGEPC85胆固醇5TPGS10说明书CN101991538ACN101991540A10/10页12VE醋酸酯150075表63含TPGS的功能性化妆品脂质体配方III0076处方MGSPC61胆固醇4TPGS34VA棕榈酸酯200077将卵磷脂、胆固醇、TPGS和药物置于圆底烧瓶中,加20ML乙醇和氯仿37,V/V混合溶液溶解脂质和药物,减压旋转蒸发形成薄膜,加甘油水溶液水化薄膜形成多室脂质体,N2下依次挤压通过200NM和100NM聚碳酸酯膜,得单室载药脂质体,脂质总浓度为40MG/ML,平均粒径小于100NM,包封率90以上。说明书CN101991538ACN101991540A1/2页13图1图2说明书附图CN101991538ACN101991540A2/2页14图3说明书附图CN101991538A。

展开阅读全文
相关资源
猜你喜欢
相关搜索

当前位置:首页 > 人类生活必需 > 医学或兽医学;卫生学


copyright@ 2017-2020 zhuanlichaxun.net网站版权所有
经营许可证编号:粤ICP备2021068784号-1