胆提取物、其提取方法及其应用技术领域
本发明属于生化药物领域，具体地，涉及胆提取物、其提取方法及其应
用。
背景技术
因疾病所致的各种长期难愈合的创面(溃疡)是临床外科的常见病，其
使机体失去天然屏障，抑制机体免疫功能，同时还会引发其他疾病。此病症
发生率高、愈合困难，严重影响患者的生活质量。针对创面进行医治，也就
是创伤修复，是医学界有待深入研究的重要课题之一。
细胞生长因子亦称细胞生长调节因子，是一类具有很强生理活性的多
肽，对促进细胞的生长、增殖和分化起调节作用。细胞生长因子能刺激巨噬
细胞、上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞等多种细胞的生长、具有增殖修复
能力和抗炎能力，在防止疤痕组织增生、创伤愈合及修复中起关键作用。
创伤愈合及修复是机体自身具有的重要功能，但是影响创伤愈合及修复
的因素很多，如感染、生长因子、局部营养障碍等。在被损伤的局部组织中，
细胞生长因子浓度过低，造成创伤难以愈合。另外，一些创面中的分泌物很
多，尽管用对症抗生素进行治疗，但伤口愈合的情况仍然不理想。因此加入
外源性的细胞生长因子，对创面的修复就显得至关重要。
九十年代以来，美国等国家对表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生
长因子(FGF)等细胞生长因子在创伤修复中的作用进行了长期研究，并逐
步向临床应用过渡，但至今尚未在临床上普遍应用。我国近些年来也开展了
这方面的研究工作。然而，目前国内外在研究中所采用的生长因子都是应用
基因重组技术而获取，因而价格十分昂贵，例如EGF的售价达2000元/mg。
此外，目前的研究均是就单一的生长因子对创面的作用进行观察，而其效果
也并不十分理想，并且存在着因单一生长因子刺激细胞增生而引发细胞癌变
的质疑。为了克服这些问题，提出了“分子组合”的概念，以达到共同参与
作用甚至是协同作用的效果。
在天然的生物体中寻找并分离所需的创伤修复因子是解决问题的可行
途径之一。
发明内容
本发明从哺乳动物的胆组织出发，通过简单的冻融、冷冻离心、微滤、
超滤、反渗透、冷冻干燥等工艺，提取、分离并浓缩得到含有多种有效成分
的胆提取物。
本发明的一个目的在于，提供一种胆提取物，其是含有胆囊多肽、粘蛋
白多糖、细胞有丝分裂抑制因子、胆膜素、胆盐、胆红素、胆汁多肽、胆汁
多糖、免疫球蛋白等多种细胞生长因子、细胞修复因子及抗炎因子的混合物。
本发明的一个目的在于，提供一种用于抑制皮肤炎症的胆提取物。
本发明的一个目的在于，提供一种用于促进创面组织生长修复的胆提取
物。
本发明的一个目的在于，提供一种用于防止疤痕组织增生的胆提取物。
本发明的一个目的在于，提供一种用于治疗眼底出血的胆提取物。
本发明的一个目的在于，提供一种用于治疗胃溃疡和胃炎的胆提取物。
本发明的一个目的在于，提供一种制备具有多种细胞活性因子的胆提取
物的方法。
根据本发明的一个方面，提供一种胆提取物，具有红外IR特征峰谱：
波数(cm-1)
吸收度(％T)
3427
11.39744
2923
44.86043
2848
58.75253
1634
31.00506
1540
52.03054
1447
49.30502
1397
36.9777
1378
40.05586
1241
58.28234
1092
45.37468
1036
42.01001
967
52.75048
874
68.15594
531
48.50425
469
46.89537
。
根据本发明的一个方面，所述胆来自哺乳动物。
根据本发明的一个方面，所述胆来自牛、羊和猪。
本发明的又一个目的在于提供一种制备胆提取物的方法，包括如下步骤：
1)在无菌条件下，从胆中取出胆汁以及任选的胆囊粘膜，进行低温高速
离心，收集沉淀物，和/或
2)在无菌条件下，从胆中取出胆囊以及任选的胆囊粘膜，进行粉碎匀浆，
得到匀浆液，进行低温高速离心，收集上清液，
3)将步骤1)中的沉淀物和/或步骤2)中的上清液进行微滤和超滤，收
集滤液，
4)将滤液进行反渗透浓缩，得到浓缩物，即为胆提取物。
根据本发明的一个方面，所述低温高速离心是以3000-8000rpm/min，进
行20-40min。
根据本发明的一个方面，在步骤2)中进一步包括在粉碎匀浆之前的反
复冻融步骤。
根据本发明的一个方面，所述粉碎匀浆是以8000-14000rpm/min进行。
根据本发明的一个方面，所述微滤是在0.25-0.45μm的过滤器中进行，
所述超滤是在0.001-0.02μm的过滤器中进行。
根据本发明的一个方面，进一步包括在浓缩后的干燥、冻干步骤。
本发明的一个目的在于，提供一种胆提取物在制备用于抑制皮肤炎症的
药物中的应用。
本发明的一个目的在于，提供一种胆提取物在制备用于促进创面组织生
长修复的药物中的应用。
根据本发明的一个方面，所述创面组织是糖尿病引发的皮肤溃疡。
本发明的一个目的在于，提供一种胆提取物在制备用于防止疤痕组织增
生的药物中的应用。
本发明的一个目的在于，提供一种胆提取物在制备用于治疗眼底出血的
药物中的应用。
本发明的一个目的在于，提供一种胆提取物在制备用于治疗胃溃疡和胃
炎的药物中的应用。
本发明的一个目的在于，提供一种皮肤外用药物组合物，含有根据权利
要求1所述的胆提取物作为主要成为以及药学上可接受的载体。
根据本发明的一个方面，所述的皮肤外用药物组合物用于促进创面组织
生长修复和防止疤痕组织增生。
本发明的一个目的在于，提供一种化妆品，含有所述胆提取物作为主要
成分。
本发明的一个目的在于，提供一种保健品，含有所述胆提取物作为主要
成分。
不希望局限于任何理论，但是本发明的胆提取物是创伤愈合修复的天然
分子组合物，其是由胆囊多肽、粘蛋白多糖、细胞有丝分裂抑制因子、胆膜
素、胆盐、胆红素、胆汁多肽、胆汁多糖、免疫球蛋白等组成，在功能上互
补、协调，并且更重要的是具有组合的天然合理性和有效性。有如“集团军”
作战一样，能达到明显的治疗效果，本发明的胆提取物刺激巨噬细胞、上皮
细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等的生长、分化增殖及创面肉芽组织生成
和抗炎能力，还具有抑制疤痕组织增生的作用。本发明的胆提取物安全可靠，
无毒副作用，无禁忌症。用于临床治疗时所需费用也很低廉。
本发明的胆提取物采用简单的生化技术提取，不需要采用特殊的纯化手
段，不使用层析分离，更不需要基因重组，工艺简单，成本低廉，易于工业
化生产。此外，相比于单一类型的细胞因子，本发明的胆提取物对于炎症的
治疗具有相对更高的效果。
定义
在本文中所用的术语“胆”是指获自哺乳动物的、去除了脂肪组织的全
胆组织，包括胆囊，胆囊粘膜以及胆汁。仅为了在本发明中进行区别的目的，
将胆囊与胆囊粘膜总称为胆囊体。
在本文中所用的术语“创伤”是指由于手术、烫伤、烧伤、咬伤以及其
他原因造成的皮肤损害及创面组织不愈，疤痕组织增生，皮肤溃疡，胃溃疡
和胃炎以及眼底出血等。
附图说明
图1示出了根据本发明的方法制备的胆提取物的红外IR特征峰谱。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
主要实验设备：无菌操作间(台)、冻融机、高速匀浆机、低温高速离心
机、微滤器、超滤器、反渗透器、低温冷冻干燥机、红外分光光度计，高压
灭菌锅等。
实验原料：市售购买的经过检疫的新鲜胆或冷冻储存的胆。
实验试剂：除非另有说明，否则本发明中所用的试剂都是本领域常用且
可市售购买的。
实施例1
在4℃的无菌环境中，用生理盐水反复冲洗新鲜的胆，然后用医用剪刀
剪开一个小口取出胆汁，放入容器中，留下胆囊体备用。
实施例2
在4℃的无菌环境中，将实施例1中的胆囊体去掉脂肪组织，用生理盐
水冲洗，剥离胆囊粘膜并放入一容器中，另将去除胆囊粘膜的胆囊放入另一
容器中备用。
实施例3
在4℃的无菌环境中，将在实施例1中制备的胆汁在低温高速离心机上
以8000rpm/min离心20min，收集沉淀物。
实施例4
在4℃的无菌环境中，将在实施例1中制备的胆汁以及在实施例2中制
备的胆囊粘膜在低温高速离心机上以8000rpm/min离心20min，收集沉淀物。
实施例5
在4℃的无菌环境中，将在实施例1中得到的胆囊体用剪刀剪碎成
1-1.5cm的小块，在高速匀浆机上以12000r/min进行组织粉碎10次，每次5
分钟，之后，在低温高速离心机上以4000rpm/min离心20min，收集上清液。
额外地，在进行组织粉碎匀浆之前，将在实施例1中得到的胆囊体首先在-20
℃反复冻融5次，然后执行上述步骤，收集上清液。
实施例6
在4℃的无菌环境中，将在实施例2中得到的胆囊用剪刀剪碎成1-1.5cm
的小块，在高速匀浆机上以12000r/min进行组织粉碎10次，每次5分钟，
之后，在低温高速离心机上以4000rpm/min离心20min，收集上清液。额外
地，在进行组织粉碎匀浆之前，将在实施例2中得到的胆囊首先在-20℃反复
冻融5次，然后执行上述步骤，收集上清液。
实施例7
将实施例3得到的沉淀物以1:10的比例加入去离子水溶解，用0.45μm微
滤器进行过滤除菌，去除不溶物。然后将滤液用0.02μm的超滤器进行过滤，
收集滤液。
实施例8
将实施例4得到的沉淀物以1:10的比例加入去离子水溶解，用0.45μm微
滤器进行过滤除菌，去除不溶物。然后将滤液用0.02μm的超滤器进行过滤，
收集滤液。
实施例9
将实施例5的上清液，用0.45μm微滤器进行过滤除菌，去除不溶物。
然后将滤液用0.02μm的超滤器进行过滤，收集滤液。
实施例10
将实施例6的上清液，用0.45μm微滤器进行过滤除菌，去除不溶物。
然后将滤液用0.02μm的超滤器进行过滤，收集滤液。
实施例11
对于前述一个或多个或全部实施例中收集的滤液，利用反渗透器进行过
滤浓缩，收集浓缩物。
实施例12
额外地，对于实施例11得到的浓缩物进一步在-60℃，真空度7.00pa下
利用冷冻干燥机进行干燥，得到冻干粉。
实施例13
按照上述实施例1-12的方法，从胆汁、胆囊、胆囊粘膜制备本发明的胆
提取物，所得胆提取物的具体来源在下表1的实验1-5中列出。
表1
胆汁
胆囊
胆囊粘膜
|
实验1
+
-
-
实验2
+
-
+
实验3
-
+
+
实验4
-
+
-
实验5
+
+
+
实施例14
将制得的胆提取物干粉在水中溶解，得到胆提取物溶液。可分别将溶液
稀释成1-5％浓度，备用。
实施例15
将制得的胆提取物干粉以200mg为单位填充到医药领域可接受的成囊
材料中，制备成胶囊剂，备用。
实施例16胆提取物抑制皮肤慢性溃疡
入选患者20名，年龄最大81岁，最小15岁，平均年龄为53岁。疮面
最大12cm×8cm大小，最小0.5cm×0.5cm大小。其中下肢溃疡患者7例，烧
伤患者1例，结核性溃疡患者2例，脉管炎患者3例，糖尿病坏死患者3例，
瘘管患者2例，硬皮症患者1例，乳腺癌术后患者1例。
取浓度为2％的、在实验4中制备的胆提取物溶液，装入喷射器制备成
喷雾剂，喷涂入选患者的患处，每日1次，每次喷涂至患处完全被胆提取物
溶液覆盖。
效果观察：愈合15例，好转3例，无效2例。创面平均愈合时间为16.8
天。无效2例均为脉管炎患者。
实施例17胆提取物促进组织生长
入选患者7名，其中男性4名，女性3名。年龄最大63岁，最小42岁。
其中，手术后伤口感染不愈患者4例，狗咬伤感染伤口不愈患者1例，截瘫
卧床褥疮患者1例，组织炎症伤口不愈患者1例。
取浓度为5％的、在实验5中制备的胆提取物溶液，装入喷射器制备成
喷雾剂，喷涂入选患者的患处，每日1次，每次喷涂至患处完全被胆提取物
溶液覆盖。施用6-15天。
结果显示，手术后伤口感染不愈的4例患者全部愈合。组织炎症伤口不
愈1例患者的伤口愈合，狗咬伤感染伤口不愈1例患者的伤口愈合，截瘫卧
床褥疮1例患者使用15天后肉芽组织生长较快，基本愈合。
实施例18胆提取物防止疤痕组织增生
入选患者31名，其中男性21名，女性10名。年龄最小2岁，最大62
岁。患者烧烫伤部位分布：创面位于下肢者14例，面部者2例，躯干者5
例，上肢者10例。烧烫伤面积最小的0.5％，最大的5％。烧烫伤程度：浅Ⅱ°
创面3例，深Ⅱ°创面20例。
取浓度为1％的、在实验3中制备的胆提取物溶液50ml，浸泡无菌纱布，
清理创面后覆盖入选患者的患处。每日换药1次。观察创面愈合、表皮生长
情况。
结果显示：治愈21例，好转10例，无效0例。
实施例19胆提取物治疗眼底出血
入选患者为4名男性。年龄最小35岁，最大58岁。表现为进食刺激性
食物后或受到身体其他不良状况时，出现眼底出血情况，该症状可慢慢消失，
但消失时间不确定。
取浓度为5％的、在实验5中制备的胆提取物溶液制备水液。滴入入选
患者的眼内，每次2-3滴，每日2次。
结果显示，使用5天后症状消失者3例，好转者1例。进一步地，症状
消失的3例在以后受到同样的刺激下，眼底未再有出血现象。
实施例20胆提取物治疗胃炎及胃溃疡
入选患者55名，其中男性43名，女性12名。年龄分布最大72岁，最
小20岁。经医学诊断，患者中萎缩性胃炎6例，浅表性胃炎及轻度胃溃疡
27例，反流性胃炎2例，饮酒或饮食辛辣刺激性食物引起胃痛者20例。
取实施例15的胶囊剂，口服给予入选患者，每日2次，每次2-4粒。服
用时间为3-120天。
结果显示，饮酒或饮食辛辣等刺激性食物造成胃痛发作的患者，在服用
3天后症状消失的7例，5天后症状消失的6例，症状好转的7例。浅表性胃
炎及轻度胃溃疡患者服用30天症状明显好转11例，好转9例，效果不明显
7例，服用60天后症状明显好转16例，好转6例，效果不明显5例。反流
性胃炎2例，服用后症状减轻，停用后复发，长期服用可减轻症状。
本发明的效果
上面实施例仅仅是列举了本发明胆提取物的治疗效果，实验中，在上面
实施例中公开的范围内的原料、浓度、剂量对上述患者同样具有治疗效果。
本发明采用简单的冻融、冷冻离心、微滤、超滤、反渗透、冷冻干燥等
工艺，提取、分离并浓缩得到含有多种有效成分的胆提取物。本发明制备的
胆提取物对各种皮肤创伤如手术创伤、烫伤、烧伤及溃疡类皮肤损害，尤其
是糖尿病引发的溃疡有显著治疗效果。此外，本发明制备的胆提取物对胃溃
疡以及眼底出血也有明显的治疗效果。