CN200680005023.5
2006.02.18
CN101248353A
2008.08.20
实审
审中
实质审查的生效|||公开
G01N33/566; A61K31/443
G01N33/566
艾尼纳制药公司
马莎·金光-帕克斯; 杰里米·G·里奇曼; 多米尼克·马切耶夫斯基-勒努瓦; 丹尼尔·T·康诺利
美国加利福尼亚州
2005.2.18 US 60/654,684
北京律盟知识产权代理有限责任公司
王允方;刘国伟
本发明提供一种鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用(flushing effect)的烟酸受体调节剂的方法，所述方法包含测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明：当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。
权利要求书1. 一种鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用(flushing effect)的烟酸受体调节剂的方法，其包含测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明：当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。2. 一种鉴别与烟酸相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂的方法，其包含测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明：当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。3. 一种鉴别与烟酸相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂的方法，其包含：a)鉴别烟酸受体调节剂，和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明：当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。4. 根据权利要求1、2或3所述的方法，其中所述由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低比由烟酸诱导的MAP激酶活性水平低至少2个标准差。5. 根据权利要求1、2或3所述的方法，其中使用基于抗体的检定来测定所述MAP激酶活性。6. 根据权利要求1、2或3所述的方法，其中使用ELISA来测定所述MAP激酶活性。7. 一种烟酸受体调节剂，其与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中所述调节剂是根据权利要求1所述的方法鉴别为与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的调节剂。8. 根据权利要求1、2、3或7所述的调节剂，其中所述调节剂为烟酸受体激动剂或部分激动剂。9. 根据权利要求1、2、3或7所述的调节剂，其中所述调节剂为抗脂解化合物。10. 根据权利要求1、2、3或7所述的调节剂，其中当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂不具有显著的潮红作用。11. 一种制备组合物的方法，其包含鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂，和随后将所述调节剂与载剂混合，其中所述调节剂是经权利要求1所述的方法鉴别。12. 一种医药组合物，其包含权利要求7所述的调节剂、基本上由权利要求7所述的调节剂组成或由权利要求7所述的调节剂组成。13. 一种预防或治疗个体的脂质相关病症的方法，其包含向所述个体投与有效改变脂质的量的经权利要求1所述的方法鉴别的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用。14. 根据权利要求13所述的方法，其中所述脂质相关病症为血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、代谢综合症、心脏病、中风或外周血管疾病。15. 根据权利要求13所述的方法，其中所述脂质相关病症为血脂异常。16. 根据权利要求13所述的方法，其中所述脂质相关病症为动脉粥样硬化。17. 根据权利要求13所述的方法，其另外包含向所述个体投与有效量的用于治疗肥胖症或糖尿病的药剂与有效量的烟酸受体调节剂的组合，所述调节剂是通过权利要求1所述的方法鉴别，与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用。18. 根据权利要求13所述的方法，其中所述个体为哺乳动物。19. 根据权利要求13所述的方法，其中所述个体为人类。20. 一种降低有需要的个体的LDL水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的权利要求7所述的调节剂。21. 一种降低有需要的个体的甘油三酯水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的权利要求7所述的调节剂。22. 一种增加有需要的个体的HDL水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的权利要求7所述的调节剂。23. 一种制备用作脂质改变剂的药物的方法，所述药物包含权利要求7所述的调节剂。24. 一种制备用于治疗脂质相关病症的药物的方法，所述药物包含权利要求7所述的调节剂。
说明书治疗脂质相关病症的方法和组合物 技术领域 本发明大体来说涉及对诸如血脂异常和动脉粥样硬化的脂质相关病症的治疗，且更具体来说，涉及治疗脂质相关病症的具有减弱的潮红副作用的组合物和方法。 背景技术 动脉粥样硬化为脂肪物质、胆固醇和其它物质的沉积物积聚于动脉内层中的过程。所述积聚物被称为斑块。破裂的斑块会导致形成可阻断血液流到心脏(心脏病发作)或脑部(中风)的血凝块。在美国，心脏病发作是导致男性和女性死亡的首要原因，且中风是导致死亡的第三号原因[例如参看Nature Medicine，Special Focus on Atherosclerosis，(2002)8：1209-1262]。异常高水平的循环脂质是发展动脉粥样硬化的主要诱发因素。高水平的低密度脂蛋白(LDL)胆固醇、高水平的甘油三酯或低水平的高密度脂蛋白(HDL)胆固醇独立地为动脉粥样硬化和相关病理学的风险因素。 烟酸(即尼克酸，吡啶-3-甲酸，维生素B3)为人体健康、生长和繁殖必需的水溶性维生素。烟酸也是最早用于治疗脂质相关病症的药物之一。其由于实质上有利地影响上文所列的所有脂质参数而成为有价值的药物[Goodman and Gilman′s PharmacologicalBasis of Therapeutics，编者Harmon JG和Limbird LE，第36章，Mahley RW and Bersot TP(2001)第971-1002页]。烟酸对于治疗或预防动脉粥样硬化性心血管疾病的益处已在六个主要临床试验中得以证实[Guyton JR(1998)Am J Cardiol 82：18U-23U]。烟酸类似物或衍生物的结构和合成也在Merck Index，An Encyclopedia of Chemicals，Drugs，andBiologicals，第10版(1983)中进行论述。 不幸的是，改变血清脂质水平所需烟酸的剂量可能会相当大，而且这些剂量的副作用也会频繁出现。副作用可包括胃肠紊乱、肝毒性和葡萄糖代谢破坏和尿酸水平混乱。然而，烟酸疗法的最常见与最主要的副作用为强烈的潮红，通常伴随皮肤瘙痒、麻刺感和发热。尽管潮红反应一般无害，但患者顺应性显著降低也足以让人感觉不快。通常，在开始治疗后数天内，30-40％的患者会停止采用烟酸治疗。 已进行多种尝试研发在维持治疗功效的同时也使皮肤潮红反应减到最小的烟酸类似物、剂型和治疗方案。然而，截至目前，这些尝试导致仅部分降低皮肤潮红反应的化合物或方法。此外，这些化合物或方法可能会导致其它副作用。举例来说，可在投与烟酸之前投与诸如阿斯匹灵(aspirin)的化合物以试图减少潮红。然而，阿斯匹灵充其量仅在部分患者中引起潮红的部分减弱，且阿斯匹灵的胃肠副作用也会使其用途受限。此外，已研发出延长或持续释放的烟酸调配物，据报导其具有较低的潮红发生率。然而，也已证实，这些延长或持续释放的调配物会导致肝毒性，这是比潮红更为严重的副作用。 因此，需要能够抗脂解而不会引起在经烟酸治疗后可见的潮红水平的化合物和鉴别所述化合物的方法。本发明满足这一需求并且还提供相关的优势。 发明内容 申请者在本文中公开，烟酸受体调节剂活化细胞内MAP激酶路径的能力是所述调节剂能否在活体内引起潮红的前兆。具体来说，申请者公开，在低于烟酸的程度上活化丝裂素活化蛋白激酶(MAP激酶)的烟酸受体调节剂会在活体内产生比烟酸弱的潮红反应。活体内潮红检定是一项劳动力密集、耗时且昂贵的检定方法，因此使用有效的活体外基于细胞的检定(诸如MAP激酶检定)针对潮红能力筛选调节剂的能力将极为有利。 第一方面，本发明提供一种鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂的方法，其包含测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。在一实施例中，所述烟酸受体调节剂为烟酸受体激动剂或部分激动剂。在另一实施例中，所述烟酸受体调节剂为抗脂解化合物。在另一实施例中，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述烟酸受体调节剂不具有显著的潮红作用。在一实施例中，所述由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低比由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性水平低至少两个标准差。在另一实施例中，使用基于抗体的检定测定所述MAP激酶活性。在另一实施例中，使用酶联免疫吸收剂化验(ELISA)测定所述MAP激酶活性。 第二方面，本发明提供一种鉴别与烟酸相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂的方法，其包含测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。在一实施例中，所述烟酸受体调节剂为烟酸受体激动剂或部分激动剂。在另一实施例中，所述烟酸受体调节剂为抗脂解化合物。在另一实施例中，当与烟酸相比时，所述烟酸受体调节剂不具有显著的潮红作用。在一实施例中，所述由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低比由烟酸诱导的MAP激酶活性水平低至少两个标准差。在另一实施例中，使用基于抗体的检定测定所述MAP激酶活性。在另一实施例中，使用ELISA测定所述MAP激酶活性。 第三方面，本发明提供一种鉴别与烟酸相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂的方法，其包含：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。在一实施例中，所述烟酸受体调节剂为烟酸受体激动剂或部分激动剂。在另一实施例中，所述烟酸受体调节剂为抗脂解化合物。在另一实施例中，当与烟酸相比时，所述烟酸受体调节剂不具有显著的潮红作用。在一实施例中，所述由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低比由烟酸诱导的MAP激酶活性水平低至少两个标准差。在另一实施例中，使用基于抗体的检定测定所述MAP激酶活性。在另一实施例中，使用ELISA测定所述MAP激酶活性。 第四方面，本发明提供一种与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂，其中根据第一方面的方法将所述调节剂鉴别为与烟酸或烟酸类似物相比具有减弱的潮红作用的调节剂。在一实施例中，所述调节剂为烟酸受体激动剂或部分激动剂。在另一实施例中，所述调节剂为抗脂解化合物。在另一实施例中，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂不具有显著的潮红作用。 第五方面，本发明提供一种制备组合物的方法，其包含鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂，且随后将所述调节剂与载剂混合，其中所述调节剂是经第一方面的方法鉴别。 第六方面，本发明提供一种医药组合物，其包含第四方面的调节剂、基本上由第四方面的调节剂组成或由第四方面的调节剂组成。 第七方面，本发明提供一种预防或治疗个体的脂质相关病症的方法，其包含向所述个体投与有效改变脂质的量的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中所述调节剂是经第一方面的方法鉴别。在一实施例中，所述脂质相关病症为血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、代谢综合症、心脏病、中风或外周血管疾病。在另一实施例中，所述脂质相关病症为血脂异常。在另一实施例中，所述脂质相关病症为动脉粥样硬化。在一实施例中，第七方面的方法另外包含向所述个体投与有效量的用于治疗肥胖症或糖尿病的药剂与有效量的烟酸受体调节剂的组合，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中所述调节剂是经第一方面的方法鉴别。在一实施例中，所述个体为哺乳动物，且在另一实施例中，所述个体为人类。 第八方面，本发明提供一种降低有需要的个体体内的LDL水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的第四方面的调节剂。 第九方面，本发明提供一种降低有需要的个体体内的甘油三酯水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的第四方面的调节剂。 第十方面，本发明提供一种增加有需要的个体体内的HDL水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的第四方面的调节剂。 第十一方面，本发明提供一种制备用作脂质改变剂的药物的方法，所述药物包含第四方面的调节剂。此外，第十一方面，本发明提供一种制备用于治疗脂质相关病症的药物的方法，所述药物包含第四方面的调节剂。 附图说明 图1绘示通过ELISA和免疫印迹(Western Blot)检定的表达人类烟酸受体的CHO细胞中由烟酸诱导的MAP激酶活化。 图2绘示使用ELISA检定的表达人类烟酸受体的CHO细胞中由烟酸和化合物8引起的MAP激酶活化。 图3绘示使用以下检定比较烟酸(化合物1)和数种烟酸受体调节剂的表格：小鼠体内进行的活体内潮红检定；表达人类烟酸受体的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中进行的cAMP检定；和通过ELISA检定表达人类烟酸受体的CHO细胞中的MAP激酶活化。最后一列展示MAP激酶EC50比cAMP IC50的比率。 图4绘示表达人类烟酸受体的CHO细胞中数种烟酸受体调节剂的MAP激酶活化的曲线图。暗箭头表示已在小鼠中展示引起潮红的化合物，而亮箭头表示未在小鼠中引起潮红的化合物。水平虚线表示低于烟酸2个标准差。 图5绘示由于其对CHO细胞中所表达的人类(左上图)和小鼠(右上图)烟酸受体上的MAP激酶的低水平活化而选择的烟酸受体调节剂，即化合物11。随后绘示当与烟酸相比时所述化合物在小鼠体内未引起显著潮红(右下图)且使小鼠体内的游离脂肪酸水平降低(左下图)。 图6绘示烟酸类似物化合物、即化合物12在以CHO细胞中所表达的人类(左图)和小鼠(右图)烟酸受体进行的MAP激酶检定中具有类似烟酸的作用。 具体实施方式 申请者已发现，烟酸受体调节剂活化细胞内MAP激酶路径的能力与所述调节剂在活体内诱导潮红的能力相关。如本文所示，烟酸与人类烟酸受体结合且活化这些细胞内的MAP激酶(参看实例1和图1)。使用两类基于抗体的检定(即ELISA和免疫印迹检定)展示MAP激酶活化。如本文所公开，经证实，与在活体内不引起潮红的调节剂相比，已知在活体内引起潮红的烟酸受体调节剂具有较高的MAP激酶活化水平(参看实例2和图3和4)。接着，申请者选择具有未知的在活体内引起潮红的能力的烟酸受体调节剂，且测试这些调节剂活化表达人类或小鼠烟酸受体的细胞中MAP激酶的能力(参看实例3)。图5绘示已基于cAMP检定选择的代表性调节剂，即化合物11。接着在MAP激酶ELISA检定中测试这一调节剂，且所述调节剂与烟酸相比，展示低水平的MAP激酶活化(参看上图)。接下来测试化合物11在活体内引起潮红的能力。如图5右下图所示，化合物11在小鼠活体内未引起任何显著的潮红反应。此外，如本文所公开，化合物11可抗脂解(参看左下图)。申请者还在本文中公开，可使用在MAP激酶检定中具有与烟酸类似的性质的烟酸类似物代替本发明方法中的烟酸。此类化合物(即化合物12)展示于图6中。 尽管多年来一直将烟酸用作脂质相关病症的疗法，但截止目前使烟酸起作用的受体尚未可知。最初，提出烟酸可经由特定GPCR起作用(LorenzenA等人(2001)MolecularPharmacology 59：349-357)。最后，已将已知的孤儿GPCR(称为HM74a)鉴别为尼克酸受体(例如参看美国申请案第10/314,048号)。人类烟酸受体的核苷酸序列可见于GenBank寄存编号第NM_177551号和本文的SEQ ID NO：1。 一般来说，当配体与其受体结合(通常称为受体的“活化”)时，引起受体构形的改变，其有助于胞内区域与胞内G-蛋白之间的偶合。尽管也存在其它G蛋白，但目前已鉴别出的G蛋白为Gq、Gs、Gi、Gz和Go。也存在似乎将数类GPCR与磷脂酶C路径偶合的混杂G蛋白(诸如Gα15或Gα16)[Offermanns&Simon，J Biol Chem(1995)270：15175-80]，或经设计为使多种不同GPCR与相同路径偶合的嵌合G蛋白[Milligan&Rees，Trends in Pharmaceutical Sciences(1999)20：118-24]。经配体活化的GPCR与G蛋白的偶合会引发信号级联过程(称为“信号转导”)。在正常条件下，信号转导最终将导致细胞活化或细胞抑制。 已知烟酸受体将与Gi G蛋白偶合，因此烟酸受体的激动作用将使胞内cAMP水平降低。在脂肪细胞中，cAMP降低会导致激素敏感性脂肪酶活性的降低和游离脂肪酸释放的减少。结果使游离脂肪酸减少两倍。首先，其最终将降低LDL-胆固醇并且升高HDL-胆固醇水平，此为引起动脉粥样硬化和相关病症的独立风险因素。其次，其将使患有胰岛素抵抗或2型糖尿病的个体的胰岛素敏感性增加。不幸的是，使用烟酸作为治疗剂将因多种相关副作用(诸如潮红)而部分受限制。 申请者在本文中公开一种通过测定化合物的MAP激酶活性来鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的化合物的方法，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述化合物诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述化合物具有减弱的潮红作用。举例来说，申请者公开一种通过测定化合物的MAP激酶活性来预测所述化合物与烟酸或烟酸类似物相比，是否具有减弱的潮红作用的方法，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述化合物诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述化合物具有减弱的潮红作用。 本发明提供一种鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂的方法，其包含测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。在一实施例中，所述烟酸受体调节剂为烟酸受体激动剂或部分激动剂。在另一实施例中，所述烟酸受体调节剂为抗脂解化合物。在另一实施例中，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述烟酸受体调节剂不具有显著的潮红作用。在一实施例中，所述由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低比由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性水平低至少两个标准差。在另一实施例中，使用基于抗体的检定测定所述MAP激酶活性。在另一实施例中，使用ELISA测定所述MAP激酶活性。 本发明还提供一种鉴别与烟酸相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂的方法，其包含测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。在一实施例中，所述烟酸受体调节剂为烟酸受体激动剂或部分激动剂。在另一实施例中，所述烟酸受体调节剂为抗脂解化合物。在另一实施例中，当与烟酸相比时，所述烟酸受体调节剂不具有显著的潮红作用。在一实施例中，所述由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低比由烟酸诱导的MAP激酶活性水平低至少两个标准差。在另一实施例中，使用基于抗体的检定测定所述MAP激酶活性。在另一实施例中，使用ELISA测定所述MAP激酶活性。 申请者在本文中公开一种通过以下步骤鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的化合物的方法：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述化合物的MAP激酶活性；其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述化合物诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述化合物具有减弱的潮红作用。举例来说，申请者公开一种通过以下步骤预测化合物与烟酸或烟酸类似物相比时，是否具有减弱的潮红作用的方法：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述化合物的MAP激酶活性；其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述化合物诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述化合物具有减弱的潮红作用。申请者公开一种通过以下步骤鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂的方法：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性；其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。 本发明另外提供一种鉴别与烟酸相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂的方法，其包含：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性；其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。在一实施例中，所述烟酸受体调节剂为烟酸受体激动剂或部分激动剂。在另一实施例中，所述烟酸受体调节剂为抗脂解化合物。在另一实施例中，当与烟酸相比时，所述烟酸受体调节剂不具有显著的潮红作用。在一实施例中，所述由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低比由烟酸诱导的MAP激酶活性水平低至少两个标准差。在另一实施例中，使用基于抗体的检定测定所述MAP激酶活性。在另一实施例中，使用ELISA测定所述MAP激酶活性。 如本文所使用的术语“潮红”意谓可检测的皮肤血管舒张反应。举例来说，潮红可由投与烟酸受体激动剂(诸如烟酸或烟酸类似物)引起。据悉，烟酸诱导的潮红是由前列腺素(诸如前列腺素D2(PGD2))所介导。潮红反应以皮肤发红为特征，并且还可包括其它症状，例如皮肤瘙痒、麻刺感、发热感或头痛。潮红反应可发生在皮肤的任何部位，例如脸上、脖子上或躯干上；并且可在一个地方或一个以上的地方发生。就人类来说，潮红反应可持续数分钟到数小时。一般来说，就人类来说，由经口投与足够剂量的烟酸或烟酸类似物所引起的潮红反应可在任何部位持续20分钟到8小时或更长时间。就小鼠或大鼠来说，潮红反应通常在投与烟酸(注射投与)后约3分钟时达到最高峰，而在约30分钟后显著下降。 产生可检测的潮红反应所需的烟酸或烟酸类似物的量视多个变数而定，例如化合物调配物和个体个体。具体来说，产生可检测的潮红反应所需的烟酸或烟酸类似物的量可视例如个体的体重、个体的遗传组成或个体的一般健康状况而定。可在人体内引起潮红反应的烟酸或烟酸类似物的量可低于降低与动脉粥样硬化相关的血清脂质的量所需的烟酸或烟酸类似物的量，且可例如包括每天至少175mg、每天至少200mg、每天至少250mg、每天至少500mg、每天至少750mg、每天至少1g、每天至少1.5g、每天至少2g、每天至少2.5g、每天至少3g、每天至少3.5g、每天至少4g、每天至少4.5g、每天至少5g、每天至少5.5g、每天至少6g、每天至少6.5g、每天至少7g、每天至少7.5g、每天至少8g或更多。举例来说，每天500mg到2g或更多量烟酸可在大部分人中引起潮红反应。 如本文所使用的“烟酸”意谓具有以下化学式的尼克酸： 术语烟酸还包括与游离酸形式的烟酸具有类似特性的烟酸的医药学上可接受的盐和溶剂化物。如所属领域技术人员所了解，烟酸可与其它化合物一起调配从而改变其药理学特性。举例来说，可视加到烟酸中的其它化合物而将烟酸调配为快速释放(IR)的形式或延长或持续释放(SR)的形式。 延长或持续释放调配物经设计以将活性成分自片剂或胶囊中缓慢释放，这使得给药频率相对于与常规或快速剂型相关的典型给药频率有所降低。缓慢药物释放经设计以降低并延长血液中药物的水平，且因此使与常规或快速释放烟酸产品相关的潮红副作用最小化或减少。然而，在患有脂质相关病症的患者中的研究已证实，某些延长或持续释放产品不具有与快速释放烟酸相同的有利脂质改变作用，且事实上与快速释放产品相比具有更不利的副作用概况。举例来说，如Henken等人：Am J Med，91：1991(1991)和Dalton等人：Am J Med，93：102(1992)中所述，已知延长或持续释放的烟酸调配物会引起更高的肝毒性发生率。已研发出延长或持续释放的烟酸调配物，诸如Nicobid.RTM.胶囊(Rhone-Poulenc Rorer)、Endur-acin.RTM.(Innovite Corporation)和美国专利第5,126,145号和第5,268,181号中所述的调配物，所述专利中描述含有两种不同类型羟丙基甲基纤维素和疏水性组分的持续释放烟酸调配物。 如本文所使用的“烟酸类似物”意谓在结构上或功能上与烟酸相关的化合物，其与烟酸具有类似的MAP激酶概况和潮红作用。烟酸类似物的实例为化合物12(参看图6)。这一化合物在结构上与烟酸相关且其与烟酸的不同之处在于其含有四唑基团。此外，由于这一化合物结合烟酸受体，故其在功能上也与烟酸相关。另外，这一化合物具有与烟酸类似的MAP激酶概况(参看图6)和潮红作用。因此，可将这一化合物作为代替烟酸的参照物用于本发明的方法中。其它所述烟酸类似物将为所属领域技术人员显而易见。 此项技术中已知数种烟酸的结构类似物。在一些实施例中，烟酸的结构类似物含有至少一个酸性官能团，诸如羧基、四唑基等。在一些实施例中，烟酸的结构类似物含有至少一个氮环原子，诸如吡啶基、吡唑基、异噁唑基等基团中存在的氮。在一些实施例中，烟酸的结构类似物含有至少一个酸性官能团和至少一个氮环原子。这些基团包括在活体内例如通过血液水解而转化得到酸性官能团或环氮的前药基团。详细论述提供于A.C.S.Symposium Series，T.Higuchi和V.Stella，″Pro-drugs as Novel Delivery Systems，″第14卷和″Bioreversible Carriers in Drug Design，″Edward B.Roche编辑，AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中，所述两份参考文献都以引用的方式并入本文中。 烟酸类似物可在功能上与烟酸相关，例如，烟酸类似物可具有烟酸的功能，诸如与烟酸受体特异性结合，或当与烟酸受体结合时起反应而引发胞内信号。举例来说，烟酸类似物可为烟酸受体激动剂。 此项技术中已知数种烟酸类似物或衍生物，且可例如见于Merck Index，AnEncyclopedia of Chemicals，Drugs，and Biologicals，第10版(1983)。如上文关于烟酸所述，可以不同方式调配烟酸类似物以改变其药理学特性。 “烟酸受体调节剂”为当与烟酸受体结合时调节或改变胞内反应的物质，例如配体或化合物。例如，胞内反应可为GTP与膜的结合的改变或第二信使(诸如cAMP)的水平的调节。 “激动剂”为当与受体结合时活化胞内反应的物质，例如配体或化合物。例如，胞内反应可为GTP与膜的结合的增强或第二信使(诸如cAMP)的水平的调节。在一些实施例中，激动剂为先前未知的当与受体结合时活化胞内反应的物质(例如，增强GTPγS与膜的结合或降低胞内cAMP水平)。 “部分激动剂”为当与受体结合时以比完全激动剂低的程度或范围活化胞内反应的物质，例如配体或化合物。 如本文所使用的“烟酸受体部分激动剂”为当与烟酸受体结合时以比作为烟酸受体完全激动剂的烟酸低的程度活化胞内反应的物质。技术上，由于与完全激动剂相比，部分激动剂仅产生部分反应，故术语部分激动剂是一个相对术语。由于随着时间的推移，新的化合物被发现，故完全激动剂可改变，并且以前的完全激动剂可变为部分激动剂。为清楚起见，将如本文所使用的烟酸受体部分激动剂与作为完全激动剂的烟酸相比较。烟酸受体部分激动剂与烟酸相比，具有可检测的较低的活化胞内反应的程度，亦即，烟酸受体部分激动剂引起比最大反应低的反应。因此，烟酸受体部分激动剂具有比烟酸低的功效。举例来说，烟酸受体部分激动剂与烟酸相比，具有90％或更低的功效；与烟酸相比，具有85％或更低的功效；与烟酸相比，具有80％或更低的功效；与烟酸相比，具有75％或更低的功效；与烟酸相比，具有70％或更低的功效；与烟酸相比，具有65％或更低的功效；与烟酸相比，具有60％或更低的功效；与烟酸相比，具有55％或更低的功效；与烟酸相比，具有50％或更低的功效；与烟酸相比，具有45％或更低的功效；与烟酸相比，具有40％或更低的功效；与烟酸相比，具有35％或更低的功效；与烟酸相比，具有30％或更低的功效；与烟酸相比，具有25％或更低的功效；与烟酸相比，具有20％或更低的功效；与烟酸相比，具有15％或更低的功效或与烟酸相比，具有10％或更低的功效。举例来说，烟酸受体部分激动剂与烟酸相比，可具有10％到90％的功效；与烟酸相比，可具有20％到80％的功效；与烟酸相比，可具有30％到70％的功效；与烟酸相比，可具有40％到60％的功效或与烟酸相比，可具有45％到55％的功效。功效与效力不同，功效为经测量的反应的量度，而效力为引起预定反应所采用的化合物的量。因此，当与激动剂、拮抗剂或反向激动剂相比时，烟酸受体部分激动剂可具有较高、较低或相当的效力。 可使用此项技术中众所周知的检定法测定烟酸受体部分激动剂。举例来说，可使用cAMP检定测定烟酸受体部分激动剂。 就烟酸受体来说，此项技术中已知多个烟酸受体序列。举例来说，人类烟酸受体核苷酸序列可见于GenBank寄存编号第NM_177551号且其在本文中列为SEQ ID NO：1。还应了解，可在不破坏烟酸受体结合烟酸的能力的情况下对烟酸受体进行有限的修饰。举例来说，预期烟酸受体包括其它烟酸受体多肽，例如人类烟酸受体多肽(SEQ ID NO：2)的物种同源物。数据库中存在人类烟酸受体的物种同源物的序列，例如烟酸受体的大鼠同源物可见于GenBank中寄存编号第BAC58009号。此外，烟酸受体包括实质上保持完整烟酸受体多肽的烟酸受体功能的烟酸受体剪接变异体和等位基因变异体。 另外，烟酸受体可含有相对于野生型受体的氨基酸改变(例如保守氨基酸改变)，只要突变受体实质上保持野生型烟酸受体多肽的烟酸受体功能即可。可使用可用算法和程序(诸如基本局部比对搜索工具(Basic Local Alignment Search Tool，“BLAST”))使用默认设置将氨基酸序列的保守和非保守氨基酸改变、缺失和插入与参考序列相比较(例如参看Karlin和Altschul，Proc Natl Acad Sci USA(1990)87：2264-8；Altschul等人，J MolBiol(1990)215：403-410；Altschul等人，Nature Genetics(1993)3：266-72；和Altschul等人，Nucleic Acids Res(1997)25：3389-3402)。 烟酸受体与烟酸特异性结合。预期术语特异性结合意谓所述多肽将对目标多肽具有亲和性，所述亲和性将显著高于其对不相关多肽的亲和性。此项技术中众所周知检测或测量受体结合的若干方法，例如放射性配体结合检定，或具有功能性读出的检定(诸如FLIPR检定)。 应了解，可使用实质上保持完整多肽的烟酸受体功能的烟酸受体片段代替完整多肽。举例来说，可使用烟酸受体的配体结合域代替完整多肽，以便测定部分激动剂与烟酸受体的结合。 “减弱”意谓可测量的数量或特定活性的降低，且其与术语“降低”、“减少”、“减小”和“减少”同义。关于潮红的量，减少的潮红反应可例如为潮红严重程度的降低和/或比将另外出现的潮红事件(潮红发生率降低)少的潮红事件。举例来说，潮红的严重程度和/或发生率可降低至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。此外，潮红可减少100％或消除从而无任何可检测的显著潮红。在一实施例中，潮红强度减少至少约80％。在另一实施例中，潮红减少为潮红的完全减少或消除。 可使用多种方法检测并量化潮红。举例来说，可经视觉检测并量化潮红。一种用于检测并量化潮红的方法为例如使用Pirimed PimII激光多普勒仪(Laser Dopler)进行的激光多普勒法。此外，可对个体进行调查以评定潮红和可能与潮红相关的症状(诸如麻刺感或发热感)的严重程度。另一种用于检测并量化潮红的方法可包括测量来自个体的生物样本(诸如血液或尿液)中前列腺素D2(PGD2)或前列腺素F2(PGF2)的水平。此外，例如可由个体的尿液测量PGD-M(即PGD2的主要尿代谢物)的水平。用于测量前列腺素水平的检定在市面有售，例如PGD2的酶免疫检定可购自Cayman Chemical(AnnArbor，MI)。 在一实施例中，在本发明的方法中，由所述化合物或所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低比由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性水平低至少两个标准差。如图4所示，低于烟酸诱导的MAP激酶活性水平至少两个标准差的MAP激酶活性的降低鉴别由亮箭头所示的所有已知不引起潮红的化合物。如所属领域技术人员所了解，可视所属领域技术人员的要求而选择不同的临界值。举例来说，如果想确保俘获每一种不引起潮红的化合物，那么由于当在活体内进行测试时一些化合物不会使潮红反应减弱停止，故可能选择偏向协助鉴别大部分化合物。在这种情况下，可将临界点设置在与烟酸或烟酸类似物的两个标准差以上，例如比烟酸或烟酸类似物低1.5个标准差。相反，可能需要避免任何具有潮红活性的化合物，且因此可将临界点设置在与烟酸或烟酸类似物的两个标准差以下，例如比烟酸或烟酸类似物低2.5个标准差。在本发明的不同实施例中，由调节剂诱导的MAP激酶活性的降低比烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性水平低至少1、1.2、1.4、1.6、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.2、3.4、3.6、3.8、4.0、4.2、4.4、4.6、4.8或5.0个标准差。也可将临界值表示成范围，例如由调节剂诱导的MAP激酶活性的降低可例如比由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性水平低1与至少4个之间、2与至少3个之间或2.5与至少3个之间的标准差。 可将测定MAP激酶活性的任何检定用于本发明的方法中。举例来说，可将底物活性检定(诸如使用作为MAP激酶底物的髓鞘碱性蛋白进行的检定)用于本发明的方法中。在一实施例中，可使用基于抗体的检定测定MAP激酶活性。此项技术中众所周知此类检定，且其例如包括免疫印迹、ELISA、免疫沉淀、荧光偏振检定(FPA)、Biacore检定等。在一实施例中，用于测定MAP激酶活性的检定为ELISA。在一实施例中，在本发明的方法中用于测定MAP激酶活性的检定使用人类烟酸受体。 本发明还提供一种与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂，其中根据以下方法将所述调节剂鉴别为与烟酸或烟酸类似物相比具有减弱的潮红作用的调节剂：测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。举例来说，本发明提供一种与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂，其中根据以下方法将所述调节剂鉴别为与烟酸或烟酸类似物相比具有减弱的潮红作用的调节剂：测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。此外，本发明公开一种与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂，其中根据以下方法将所述调节剂鉴别为与烟酸或烟酸类似物相比具有减弱的潮红作用的调节剂：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。 在一实施例中，所述调节剂为烟酸受体激动剂或部分激动剂。在另一实施例中，所述调节剂为抗脂解化合物。在另一实施例中，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂不具有显著的潮红作用。 本发明另外提供一种制备组合物的方法，其包含：鉴别与烟酸或烟酸类似物相比具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂，且随后将所述调节剂与载剂混合，其中所述调节剂是通过测定所述调节剂的MAP激酶活性来鉴别，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。此外，本发明公开一种制备组合物的方法，其包含鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂，且随后将所述调节剂与载剂混合，其中所述调节剂是根据以下方法鉴别：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。 本发明还提供一种医药组合物，其包含与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂、基本上由或由所述烟酸受体调节剂组成，其中根据以下方法将所述调节剂鉴别为与烟酸或烟酸类似物相比具有减弱的潮红作用的调节剂：测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明：当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。本发明还公开一种医药组合物，其包含与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂、基本上由或由所述烟酸受体调节剂组成，其中根据以下方法将所述调节剂鉴别为与烟酸或烟酸类似物相比具有减弱的潮红作用的调节剂：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明：当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。 如本文所使用的“组合物”意谓包含至少一种组分的物质。医药组合物为组合物的实例。医药组合物意谓包含至少一种活性成分的组合物，借此所述组合物适合于研究个体(例如人类)中的特定、有效的结果。所属领域技术人员将了解和理解适合于基于所属领域技术人员的需求测定活性成分是否具有所需有效结果的技术。 本文所述的组合物可包括医药学或生理学上可接受的载剂。适当的医药学上可接受的载剂可为所属领域技术者所利用；例如参看Remington：The Science and Practice orPharmacy，第20版，2000，Lippincott，Williams&Wilkons，(Gennaro等人编)。尽管对用于预防或治疗而言，在替代使用中可能以化学原料或纯化学物质形式投与本发明化合物，但以医药调配物或组合物形式提供化合物或活性成分也是需要的。 因此，本发明另外提供医药调配物，其包含本发明的化合物或其医药学上可接受的盐或衍生物，连同一种或一种以上其医药学上可接受的载剂和/或预防成分。在载剂可与调配物中的其它成分相容且不会对其接受者过度有害的意义上来说，载剂是“可接受的”。 医药调配物包括适于经口、经直肠、经鼻、局部(包括口腔和舌下)、经阴道或不经肠(包括肌内、皮下和静脉内)投与或适于通过吸入或吹入投与的形式的医药调配物。 可将本发明的化合物连同常规佐剂、载剂或稀释剂一起放置成医药调配物和其单位剂量的形式，且在所述形式中其可以下列形式使用：经口使用的固体形式(诸如片剂或填充胶囊)或液体形式(诸如溶液、悬浮液、乳液、酏剂、凝胶或填充有所述物质的胶囊)；经直肠投药的栓剂形式；供局部使用的液体、凝胶、洗液或油膏形式；或供不经肠(包括皮下)使用的无菌注射溶液形式。在有或没有其它活性化合物或成分的情况下，这些医药组合物和其单位剂型都可包含常规比例的常规成分，且所述单位剂型可含有与打算使用的每日剂量范围相称的任何适当有效量的活性成分。 对于由本发明的化合物制备医药组合物而言，医药学上可接受的载剂可为固体或液体。固体形式的制剂包括散剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒剂。固体载剂可为一种或一种以上也可充当稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或封装材料的物质。对于散剂而言，载剂可为与细粉状活性组分混合的细粉状固体。对于片剂而言，可将活性组分与具有必需粘合能力的载剂以适当比例混合，并压制成所需形状和尺寸。 散剂和片剂可含有不同百分比数量的活性化合物。散剂或片剂中的代表性量可含有0.5％到约90％活性化合物；然而，所属领域技术人员将了解何时需要所述范围以外的量。散剂和片剂的适当载剂为碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”旨在包括活性化合物与作为载剂的封装材料的调配物，从而提供其中含有或不含载剂的活性组分由载剂包围且因此互相缔合的胶囊。类似地，包括扁囊剂和糖锭。片剂、散剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和糖锭都可用作适于经口投与的固体形式。 对于制备栓剂而言，首先将低熔点蜡(诸如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物)熔融，并通过搅拌使活性组分均匀分散于其中。随后，可将熔融的均匀混合物倒入适宜尺寸的模具中，使其冷却，并由此使其固化。适于经阴道投与的调配物可以子宫托、棉塞、乳膏、凝胶、糊状物、泡沫或喷雾形式提供，除活性成分外其还含有诸如所属领域中已知适当的载剂。 液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳液，例如水或水-丙二醇溶液。举例来说，可将不经肠注射用液体制剂调配成聚乙二醇水溶液中的溶液。可根据已知技术使用适当的分散剂或润湿剂和悬浮剂调配可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可为无毒不经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如1，3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受的媒剂和溶剂为水、林格氏溶液(Ringer′s solution)和等渗氯化钠溶液。此外，通常将无菌的不挥发性油用作溶剂或悬浮介质。出于这一目的，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成甘油单酯或甘油二酯。此外，诸如油酸的脂肪酸也可用于制备可注射物。 因此，可调配用于不经肠投与(即，通过注射，例如团注或连续输注)的本发明的组合物，且其可以添加有防腐剂的安瓿、预填充注射器、小容量输注液或多剂量容器中的单位剂型提供。所述组合物可采用诸如油性或水性媒剂中的悬浮液、溶液或乳液的形式，且可含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂的调配剂。或者，活性成分可为通过无菌分离无菌固体或通过由溶液冻干而获得的粉末形式，其在使用前用适当媒剂(例如无菌无热原质水)复水。 适于经口使用的水溶液可通过将活性组分溶解于水中并视需要加入适当着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。适于经口使用的水性悬浮液可通过将细粉状活性组分分散于含有粘性材料的水中而制得，所述粘性材料诸如为天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其它众所周知的悬浮剂。还包括打算在即将使用前转化成用于经口投与的液体形式制剂的固体形式制剂。所述液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。这些制剂除活性组分外还可含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。 对于向表皮局部投药而言，可将本发明的组合物调配成油膏、乳膏或洗液，或调配成经皮贴片。举例来说，可以水性或油性基质调配油膏和乳膏，同时加入适当的增稠剂和/或胶凝剂。可以水性或油性基质调配洗液，且其通常也含有一种或一种以上的乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。 适于在口中局部投与的调配物包括糖锭，其包含调味基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶)中的活性剂；锭剂，其包含惰性基质(诸如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中的活性成分；和漱口液，其包含适当液体载剂中的活性成分。 溶液或悬浮液是通过常规方式、例如用滴管、吸液管或喷雾器直接施加到鼻腔中。调配物可以单剂量或多剂量形式提供。在用滴管或吸液管的后一情况下，这可通过个别投与适当的预定体积的溶液或悬浮液实现。在喷雾器的情况下，这可例如借助于计量雾化喷雾泵实现。也可借助于在具有适当推进剂的加压包装中提供活性成分的气雾剂调配物实现向呼吸道投药。如果以气雾剂形式(例如鼻气雾剂)或通过吸入投与医药组合物，那么这可例如使用喷雾器、雾化器、雾化泵(pump nebulizer)、吸入设备、计量式吸入器(metered inhaler)或干粉吸入器进行。可通过所属领域技术人员众所周知的方法制备用于投与本发明组合物的医药形式(如气雾剂形式)。就其制备而言，例如，本发明化合物于水、水/醇混合物或适当食盐水溶液中的溶液或分散液中可使用常用添加剂(例如苯甲醇)或其它适当的防腐剂、用于增加生物利用度的吸收增强剂、增溶剂、分散剂等，且适当时可使用常用推进剂，其例如包括二氧化碳、CFC(诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷)等。气雾剂也可适宜地含有表面活性剂，诸如卵磷脂。药物的剂量可通过提供量阀进行控制。 在打算用于向呼吸道投与的调配物(包括鼻内调配物)中，化合物一般将具有例如约10微米或10微米以下的小粒度。可通过此项技术中已知的方式、例如通过微粉化获得所述粒度。需要时，可使用适于提供活性成分的持续释放的调配物。 或者，活性成分可以干粉形式提供，例如化合物于适当粉末基质中的粉末混合物，所述粉末基质诸如为乳糖、淀粉、淀粉衍生物(诸如羟丙基甲基纤维素)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。适宜地，粉末载剂可于鼻腔内形成凝胶。粉末组合物可以单位剂型提供，例如明胶胶囊或药包或可借助于吸入器从其中投与粉末的发泡包装。 除上文所述的调配物外，还可将化合物调配为储槽式制剂(depot preparation)。此类长效调配物可通过植入(例如经皮下或经肌内植入)或通过肌内注射投与。因此，例如可将化合物与适当聚合或疏水材料(例如，调配为可接受的油中的乳液)或离子交换树脂一起调配，或调配为难溶衍生物，例如难溶盐。此外，可通过控制释放系统(诸如泵)传递组合物。 另外，可使用持续释放系统(诸如含有治疗剂的固态疏水性聚合物的半渗透性基质)传递组合物。已产生多种持续释放材料且为所属领域技术人员众所周知。持续释放胶囊可视其化学性质而经数周到100多天的时间释放化合物。视治疗试剂的化学性质和生物稳定性而定，可使用使调节剂稳定的其它策略。 向个体投药的适当途径包括使用此项技术中已知的方法经口、局部、经鼻、经直肠、经粘膜或经肠投与；不经肠传递，包括肌内、皮下、髓内注射，和鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、肺内(吸入)或眼内注射。其它投药途径为气雾剂和储槽式调配物。在一实施例，投药途径为口服。 本发明提供一种预防或治疗个体中脂质相关病症的方法，其包含向所述个体投与有效改变脂质的量的经以下方法鉴别的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用：测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。举例来说，本发明提供一种预防或治疗个体中脂质相关病症的方法，其包含向所述个体投与有效改变脂质的量的经以下方法鉴别的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸相比，具有减弱的潮红作用：测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。本发明还公开一种预防或治疗个体中脂质相关病症的方法，其包含向所述个体投与有效改变脂质的量的经以下方法鉴别的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。 在一实施例中，所述脂质相关病症为血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、代谢综合症、心脏病、中风或外周血管疾病。在另一实施例中，所述脂质相关病症为血脂异常。在另一实施例中，所述脂质相关病症为动脉粥样硬化。 如本文关于病症所使用的术语“治疗”意谓一种或一种以上与特定病症相关的症状的严重程度的降低。因此，治疗病症未必意谓与病症相关的所有症状的严重程度的降低，且未必意谓一种或一种以上与病症相关的症状的严重程度的完全降低。类似地，术语“预防”意谓预防一种或一种以上与特定病症相关的症状的出现或发作且未必意谓对于病症的完全预防。本发明的方法可用于治疗烟酸反应性病症，包括例如如本文所述的脂质相关病症。 如本文所使用的“个体”意谓任何动物，包括哺乳动物，例如小鼠、大鼠、其它啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物(例如人类)。在一实施例中，个体为哺乳动物。在另一实施例中，个体为人类。 如本文关于烟酸受体调节剂的量所使用的术语“有效改变脂质的量”意谓足以可检测地改变个体体内与动脉粥样硬化相关的血清脂质的量的调节剂的量，所述改变例如为减少LDL-胆固醇、VLDL-胆固醇、血清脂蛋白(a)(Lp(a))或甘油三酯的量，或增加HDL-胆固醇的量。举例来说，有效改变脂质的量的烟酸调节剂可增加HDL-胆固醇的量或减少LDL-胆固醇的量。此外，例如，有效改变脂质的量的烟酸调节剂可同时增加HDL-胆固醇的量和减少LDL-胆固醇的量。此项技术中众所周知用于测量血液中这些脂质的量的标准实验室检定。 胆固醇在血液中是通过脂蛋白复合物转运，所述脂蛋白复合物诸如VLDL-胆固醇、LDL-胆固醇和高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-胆固醇)。LDL将血液中的胆固醇载运到血管壁的内皮下间隙中。认为血管壁内皮下间隙内LDL-胆固醇的过氧化将导致形成动脉粥样硬化斑块。另一方面，认为HDL-胆固醇抵抗斑块形成并且延缓或防止心血管疾病和动脉粥样硬化症状的发作。迄今为止，已鉴别出数种HDL-胆固醇亚类，诸如HDL1-胆固醇、HDL2-胆固醇和HDL3-胆固醇。 HDL可阻止动脉粥样硬化发展可存在多种机制。活体外研究证实，HDL能够将胆固醇自细胞中移除[Picardo等人，(1986)Arteriosclerosis，6，434-441]。有关这一性质的数据表明，HDL的一个抗导致动脉粥样硬化的特性可归因于其使具有过量游离胆固醇的组织衰竭且最终引起此胆固醇传递到肝中的能力[Glomset，(1968)J.Lipid Res.，9，155-167]。这已得到证实胆固醇由HDL有效转移到肝中的实验的支持[Glass等人，(1983)J.Biol.Chem.，2587161-7167；McKinnon等人，(1986)J.Biol.Chem.，26，2548-2552]。此外，HDL可用作快速代谢富集甘油三酯的脂蛋白所必需的载脂蛋白循环中的储集器[Grow和Fried，(1978)J.Biol.Chem.，253，1834-1841；Lagocki和Scanu，(1980)J.Biol.Chem.，255，3701-3706；Schaefer等人，J.Lipid Res.，(1982)23，1259-1273]。 一般来说，总胆固醇/HDL-胆固醇(即TC/HDL)比率可表示关于个体发展诸如动脉粥样硬化、代谢综合症、心脏病或中风的病况的风险的有用预测因子。目前有关血浆脂质水平的分类展示于表B中，但这些类别可随新颖风险数据分析的改变而改变： 表B 血浆脂质水平的分类 来自：2001National Cholesterol Education Program Guidelines 因此，总胆固醇/HDL-C(即TC/HDL)的推荐比率表明，小于或等于3.5的比率是理想的，且大于4.5的比率被认为是“危险”的。在个体呈现“正常”LDL和总胆固醇但具有低HDL-胆固醇的情况下，测定TC/HDL比率的价值是极为明显的。基于LDL和总胆固醇，个体可能不适合于进行治疗，然而，当对HDL-胆固醇水平进行因子分解时，可获得更为精确的风险评定。因此，如果个体的HDL-胆固醇水平使得所述比率大于4.5，那么就可有理由采用治疗或预防干预。 对于LDL-胆固醇水平而言，美国心脏协会(American HeartAssociation)认为，LDL-胆固醇水平小于100mg/dL是最佳的，100-129mg/dL较为理想，130-159mg/dL为边际值，160-189mg/dL较高且190mg/dL被认为是极高的LDL-胆固醇水平。对于甘油三酯水平而言，美国心脏协会认为，低于150mg/L为正常，150-199mg/dL为边际值，200-499mg/dL较高且500mg/dL被认为是极高的甘油三酯水平。 改变与动脉粥样硬化相关的血清脂质的量所需的烟酸调节剂的量将随化合物调配物和个体的变化而变化。具体来说，改变与动脉粥样硬化相关的血清脂质的量所需的烟酸调节剂的量可例如视个体的体重、个体的遗传组成或个体的一般健康状况而定。可改变与动脉粥样硬化相关的血清脂质的量的烟酸调节剂的量可例如包括每天至少500mg、每天至少750mg、每天至少1g、每天至少1.5g、每天至少2g、每天至少2.5g、每天至少3g、每天至少3.5g、每天至少4g、每天至少4.5g、每天至少5g、每天至少5.5g、每天至少6g、每天至少6.5g、每天至少7g、每天至少7.5g、每天至少8g或更多。在一实施例中，所述改变脂质的烟酸调节剂的量为每天至少500mg。在另一实施例中，所述改变脂质的烟酸调节剂的量为每天1到3克。 如本文所使用的术语“脂质相关病症”意谓个体中与动脉粥样硬化相关血清脂质(例如，LDL-胆固醇、VLDL-胆固醇、HDL-胆固醇、Lp(a)或甘油三酯)的非最佳水平相关的任何病症。因此，脂质相关病症可例如为高LDL-胆固醇水平、低HDL-胆固醇水平，或至少部分由动脉粥样硬化相关血清脂质的非最佳水平引起的病症，诸如动脉粥样硬化、代谢综合症、心脏病发作(心肌梗死)或中风。上文已对动脉粥样硬化相关血清脂质的最佳水平进行论述，且认为非最佳水平的这些脂质或低于最佳比率的这些脂质都将引起脂质相关病症。 动脉粥样硬化是指血管疾病的一种形式，其以大尺寸和中等尺寸动脉壁最内层上沉积含有胆固醇和脂质的动脉粥样化斑块为特征。动脉粥样硬化涵盖从业于相关医药领域的医师所认知和了解的血管疾病和病况。动脉粥样硬化性心血管疾病(包括血管再形成术后再狭窄、冠状动脉性心脏病)、脑血管疾病(包括多发性梗死性痴呆)和外周血管疾病(包括勃起功能障碍)为动脉粥样硬化的所有临床表现，且因此涵盖在术语动脉粥样硬化中。 血脂异常为用于异常血清脂质浓度的通用术语，所述血清脂质诸如HDL(低)、LDL(高)、VLDL(高)、甘油三酯(高)、脂蛋白(a)(高)、游离脂肪酸(高)和其它血清脂质或其组合。举例来说，患有血脂异常的个体与最佳总胆固醇水平相比，具有较高的总胆固醇水平(高胆固醇血症)。此外，例如，患有血脂异常的个体可具有高的血清脂质(诸如低密度脂蛋白(LDL)或甘油三酯)水平(高甘油三酯血症)。另外，例如，患有血脂异常的个体可具有低的血清脂质(诸如高密度脂蛋白(HDL))水平。患有血脂异常的个体中一种或一种以上血清脂质(诸如，总胆固醇、LDL、甘油三酯或HDL)的水平可变化。 高脂血症是血浆中任何脂质或所有脂质(诸如胆固醇、甘油三酯和脂蛋白)的浓度升高的通用术语，其也是一种脂质相关病症。高脂血症可为后天性的或可为先天性的。高脂血症的特定形式可例如包括高胆固醇血症、家族性异常β脂蛋白血症、糖尿病性血脂异常、肾病性血脂异常和家族性混合型高脂血症。高胆固醇血症是以血清低密度脂蛋白-胆固醇和血清总胆固醇升高为特征。家族性异常β脂蛋白血症(也称为III型高脂血症)是以血清中积累极低密度脂蛋白-胆固醇(VLDL-胆固醇)颗粒(称为β-VLDL)为特征。正常载脂蛋白E3经异常同功异型载脂蛋白E2替换也与这一病况有关。糖尿病性血脂异常是以多种脂蛋白异常(诸如，VLDL-胆固醇过量产生、异常VLDL甘油三酯脂解、LDL-胆固醇受体活性降低且有时III型高脂血症)为特征。肾病性血脂异常极难治疗且通常包括高胆固醇血症和高甘油三酯血症。家族性混合型高脂血症是以多种显型高脂血症(即IIa型、IIb型、IV型、V型或高载脂蛋白β脂蛋白血症)为特征。 脂质相关病症的定义中还包括至少部分由动脉粥样硬化相关血清脂质的非最佳水平引起的病症。这些病症例如包括冠状动脉疾病(CAD)或冠状动脉性心脏病、充血性心力衰竭、绞痛、动脉瘤、缺血性心脏病、心肌梗死和中风。脂质相关病症可包括心脏病，诸如冠状动脉性心脏病，其为包含将血液供应到心脏的小血管变窄和心脏丧失其有效泵送血液的能力的充血性心力衰竭的病症。脂质相关病症可包括因血管部分或完全堵塞而使流到组织或器官的血液减少所引起的病症。这些病症例如包括绞痛、缺血性心脏病、心肌梗死和中风。脂质相关病症可包括由变弱的血管所引起的病症，诸如动脉瘤，其为血管中通常由动脉粥样硬化引起的变弱区域。 心脏病包括(但不限于)心机能不全、冠状动脉机能不全、冠状动脉疾病和高血压。外周血管疾病是指心脏和脑部外侧血管的疾病。器质性外周血管疾病是由血管结构改变(诸如发炎和组织损伤)引起。外周动脉疾病为一个实例。外周动脉疾病(PAD)是与冠状动脉疾病和颈动脉疾病类似的病况。在PAD中，脂肪沉积物沿动脉壁积聚，并且影响血液循环，主要影响通向腿和脚的动脉中的血液循环。在PAD早期，常见症状为活动时腿和臀部抽筋或疲劳。当人站立不动时，所述抽筋症状将减退。这被称为“间歇性跛行(intermittent claudication)”。患有PAD的人具有较高的因中风和心脏病发作而死亡的风险，这是因为形成血凝块的风险。 代谢综合症(也称为综合症X)是以一个人体内的一组代谢风险因素为特征。这些风险因素包括：中心性肥胖(腹部中和腹部周围脂肪组织过多)、致动脉粥样硬化的血脂异常(血清脂质病症，主要是高甘油三酯和低HDL胆固醇)、血压升高(130/85mmHg或更高)、胰岛素抵抗或葡萄糖不耐受、血栓前状态(prothrombotic state)(例如，血液中高水平的血纤维蛋白原或血纤维蛋白溶酶原活化因子抑制剂)和促发炎状态(proinflammatory state)(例如，血液中高敏感性C反应蛋白水平升高)。 本发明的方法和组合物可用于预防或治疗个体的脂质相关病症。当用于预防脂质相关病症时，个体可具有最佳脂质水平，但可能出于另一原因(例如脂质相关病症的家族史)而有患脂质相关病症的风险。可预防性地使用本发明的方法和组合物预防处于任何年龄的个体(例如患有肥胖症或糖尿病的儿童或成人，所述肥胖症或糖尿病为发展脂质相关病症的风险因素)的脂质相关病症。 本发明提供一种降低有需要的个体体内LDL水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的所述调节剂是根据以下方法鉴别：测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。本发明公开一种降低有需要的个体体内LDL水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的所述调节剂是根据以下方法鉴别：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。 本发明还提供一种降低有需要的个体体内甘油三酯水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的所述调节剂是根据以下方法鉴别：测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。本发明还公开一种降低有需要的个体体内甘油三酯水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的所述调节剂是根据以下方法鉴别：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。 本发明另外提供一种增加有需要的个体体内HDL水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的所述调节剂是根据以下方法鉴别：测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。本发明另外公开一种增加有需要的个体体内HDL水平的方法，其包含向所述个体投与有效量的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的所述调节剂是根据以下方法鉴别：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。 本发明提供一种制备用作脂质改变剂的包含烟酸受体调节剂的药物的方法，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的所述调节剂是根据以下方法鉴别：测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。本发明公开一种制备用作脂质改变剂的包含烟酸受体调节剂的药物的方法，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的所述调节剂是根据以下方法鉴别：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。 本发明还提供一种制备用于治疗脂质相关病症的包含烟酸受体调节剂的药物的方法，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的所述调节剂是根据以下方法鉴别：测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明：当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。本发明还公开一种制备用于治疗脂质相关病症的包含烟酸受体调节剂的药物的方法，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用，其中与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的所述调节剂是根据以下方法鉴别：a)鉴别烟酸受体调节剂；和b)测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明，当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。 本发明还公开组合治疗方法，其包括除烟酸受体调节剂外的另一治疗化合物或其它治疗化合物。其它治疗化合物可例如包括可用于进一步减少潮红的化合物，或可用于进一步减少个体的动脉粥样硬化相关血清脂质的量的化合物。 可与烟酸受体调节剂组合的治疗化合物可(例如)包括降低前列腺素合成(诸如PGD2合成)的化合物。这类化合物可(例如)包括特异性PGD2拮抗剂，或更常见的药剂，诸如非甾族消炎药(NSAID)。NSAID的实例包括：阿斯匹灵、水杨酸盐(salicylate salts)、布洛芬(ibuprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、萘普生(naproxen)、萘普生钠(sodiumnaproxen)、酮洛芬(ketoprofen)、非诺洛芬(fenoprofen)、奥沙普秦(oxaprozin)、舒林酸(sulindac)、氟洛芬(flurbiprofen)、依托度酸(etodolac)、双氯芬酸(diclofenac)、酮咯酸(ketorolac)、托美丁(tolmetin)、萘丁美酮(nabumetone)、舒洛芬(suprofen)、苯噁洛芬(benoxaprofen)、卡洛芬(carprofen)、阿芬那酸(aclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、佐美酸(zomepirac)、甲氯芬那酸盐(meclofenamate)、甲芬那酸(mefanamic acid)、羟基保泰松(oxyphenbutazone)、保泰松(phenylbutazone)和吡罗昔康(piroxicam)。除与COX-1抑制剂组合外，治疗化合物还可与选择性COX-2抑制剂(诸如塞来昔布(Celecoxib)或罗非昔布(Rofecoxib))组合。 可与烟酸受体调节剂组合的治疗化合物可例如包括降低个体体内动脉粥样硬化相关血清脂质的量的化合物。此类化合物例如包括α-葡糖苷酶抑制剂、醛糖还原酶抑制剂、双胍、HMG-CoA还原酶抑制剂、角鲨烯合成抑制剂、贝特类(fibrate)、LDL分解代谢增强剂、血管收缩素转化酶(ACE)抑制剂、胰岛素分泌增强剂和噻唑烷二酮。 α-葡糖苷酶抑制剂属于竞争性抑制胰腺和/或小肠内的消化酶的一类药物，所述消化酶诸如为α-淀粉酶、麦芽糖酶、α-糊精酶、蔗糖酶等。α-葡糖苷酶抑制剂的可逆抑制将通过延缓淀粉和糖的消化来阻碍、减少或降低血糖水平。α-葡糖苷酶抑制剂的一些代表性实例包括阿卡波糖(acarbose)、N-(1，3-二羟基-2-丙基)井岗霉醇胺(通用名：伏格列波糖(voglibose))、米格列醇(miglitol)和所属领域中已知的α-葡糖苷酶抑制剂。 醛糖还原酶抑制剂为抑制多元醇路径中的第一阶段限速酶的药物。醛糖还原酶抑制剂的实例包括托勒司他(tolurestat)、依帕司他(epalrestat)、3，4-二氢-2，8-二异丙基-3-硫代-2H-1，4-苯并噁嗪-4-乙酸、2，7-二氟螺(9H-芴-9，4′-咪唑烷)-2′，5′-二酮(通用名：咪瑞司他(imirestat))、3-[(4-溴-2-氟苯基)甲基]-7-氯-3，4-二氢-2，4-二氧代-1(2H)-喹唑啉乙酸(通用名：折那司他(zenarestat))、6-氟-2，3-二氢-2′，5′-二氧代-螺[4H-1-苯并吡喃-4，4′-咪唑烷]-2-甲酰胺(SNK-860)、唑泊司他(zopolrestat)、索比尼尔(sorbinil)和1-[(3-溴-2-苯并呋喃基)磺酰基]-2，4-咪唑烷二酮(M-16209)和所属领域中已知的醛糖还原酶抑制剂。 双胍为刺激无氧糖酵解、增加周围组织对胰岛素的敏感性、抑制葡萄糖从肠的吸收、抑制肝糖原异生和抑制脂肪酸氧化的一类药物。双胍的实例包括苯乙双胍(phenformin)、美氟明(metformin)、丁福明(buformin)和所属领域中已知的双胍。 他汀(statin)化合物属于通过抑制羟甲基戊二酰基辅酶A(HMG-CoA)还原酶来降低血液胆固醇水平的一类药物。HMG-CoA还原酶为胆固醇生物合成中的限速酶。抑制这种还原酶的他汀通过上调LDL受体活性和负责将LDL从血液中清除来降低血清LDL浓度。他汀化合物的实例包括罗苏伐他汀(rosuvastatin)、普伐他汀(pravastatin)和其钠盐、辛伐他汀(simvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、阿伐他汀(atorvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)和所属领域中已知的HMG-CoA还原酶抑制剂。 角鲨烯合成抑制剂属于通过抑制角鲨烯合成来降低血液胆固醇水平的一类药物。角鲨烯合成抑制剂的实例包括(S)-α-[双[2，2-二甲基-1-氧代丙氧基)甲氧基]氧膦基(phosphinyl)]-3-苯氧基苯丁烷磺酸单钾盐(BMS-188494)和所属领域中已知的角鲨烯合成抑制剂。 贝特类化合物属于通过抑制肝脏中甘油三酯合成和分泌并活化脂蛋白脂肪酶来降低血液胆固醇水平的一类药物。已知贝特类活化过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisomeproliferators-activated receptor)并诱导脂蛋白脂肪酶的表达。贝特类化合物的实例包括苯扎贝特(bezafibrate)、贝罗贝特(beclobrate)、比尼贝特(binifibrate)、西罗贝特(ciplofibrate)、克利贝特(clinofibrate)、氯贝特(clofibrate)、氯贝酸(clofibric acid)、依托贝特(etofibrate)、非诺贝特(fenofibrate)、吉非贝齐(gemfibrozil)、尼可贝特(nicofibrate)、吡贝特(pirifibrate)、氯烟贝特(ronifibrate)、双贝特(simfibrate)、益多脂(theofibrate)和所属领域中已知的贝特类。 LDL(低密度脂蛋白)分解代谢增强剂属于通过增加LDL受体的数量来降低血液胆固醇水平的一类药物，实例包括所属领域中已知的LDL分解代谢增强剂。 血管收缩素转化酶(ACE)抑制剂属于通过抑制血管收缩素转化酶来部分降低血糖水平同时降低血压的一类药物。血管收缩素转化酶抑制剂的实例包括卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)、阿拉普利(alacepril)、地拉普利(delapril)、雷米普利(ramipril)、赖诺普利(lisinopriL)、咪哒普利(imidapril)、贝那普利(benazepril)、西罗普利(ceronapril)、西拉普利(cilazapril)、依那普利拉(enalaprilat)、福辛普利(fosinopril)、莫夫普利(moveltopril)、培多普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、螺普利(spirapril)、替莫普利(temocapril)、雷多普利(randolapril)和所属领域中已知的血管收缩素转化酶抑制剂。 本发明提供一种预防或治疗个体中脂质相关病症的方法，其包含向所述个体投与有效改变脂质的量的烟酸受体调节剂，经以下方法鉴别，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用：测定所述调节剂的MAP激酶活性，所述方法另外包含向所述个体投与有效量的用于治疗肥胖症或糖尿病的药剂与有效量烟酸受体调节剂的组合，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用。 脂肪酶抑制剂例如包括抗肥胖化合物，诸如奥利司他(Orlistat)(XENICALTM)。奥利司他直接抑制脂肪吸收，并且还倾向于产生高发生率的使胃部不适的副作用，诸如腹泻和肠胃胀气。 另一类抗肥胖药物包括血清素和/或去甲肾上腺素释放剂或再摄取抑制剂。举例来说，西布曲明(sibutramine)(MeridiaTM)为混合5-HT/去甲肾上腺素再摄取抑制剂。西布曲明的主要副作用可为使一些患者的血压和心率增加。已报导血清素释放剂/再摄取抑制剂芬氟拉明(fenfluramine)(PondiminTM)和右旋氟苯丙胺(dexfenfluramine)(ReduxTM)可长时间(大于6个月)降低食物摄入和体重。然而，在报导与使用这两种产品有关的心脏瓣膜畸形的初步证据后，已不再使用这两种产品。 胰岛素分泌增强剂属于具有促进胰腺β细胞分泌胰岛素的特性的一类药物。胰岛素分泌增强剂的实例包括磺酰脲(SU)。磺酰脲(SU)为通过经由细胞膜中的SU受体传输胰岛素分泌信号来促进胰腺β细胞分泌胰岛素的药物。磺酰脲的实例包括甲苯磺丁脲(tolbutamide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、乙酸磺环己脲(acetohexamide)、4-氯-N-[(1-吡咯烷基氨基)羰基]-苯磺酰胺(通用名：格列克比脲(glycopyramide))或其铵盐、格列本脲(glibenclamide)(格列本脲(glyburide))、格列齐特(gliclazide)、1-丁基-3-间氨基苯磺酰脲、氨磺丁脲(carbutamide)、格列波脲(glibonuride)、格列吡嗪(glipizide)、格列喹酮(gliquidone)、格列派特(glisoxepid)、格列噻唑(glybuthiazole)、格列布唑(glibuzole)、格列己脲(glyhexamide)、格列嘧啶(glymidine)、格列平脲(glypinamide)、苯磺丁脲(phenbutamide)、甲磺环己脲(tolcyclamide)、格列美脲(glimepiride)和所属领域中已知的其它胰岛素分泌增强剂。其它胰岛素分泌增强剂包括N-[[4-(1-甲基乙基)环己基)羰基]-D-苯丙氨酸(那格列奈(Nateglinide))、(2S)-2-苯甲基-3-(顺-六氢-2-异吲哚啉基羰基)丙酸钙二水合物(米格列奈(Mitiglinide)，KAD-1229)和所属领域中已知的其它胰岛素分泌增强剂。 噻唑烷二酮属于更常称为TZD的一类药物。噻唑烷二酮的实例包括罗格列酮(rosiglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)和所属领域中已知的噻唑烷二酮。 此外，可向个体投与烟酸受体调节剂，例如以便预防或治疗烟酸反应性病症。烟酸反应性病症为可通过受体调节剂预防或治疗的病症或疾病。烟酸反应性病症可例如包括如本文所述的脂质相关病症。举例来说，脂质相关病症可为低的高密度脂蛋白(HDL)-胆固醇量、高的低密度脂蛋白(LDL)-胆固醇量、高的甘油三酯量，或至少部分由动脉粥样硬化相关血清脂质的非最佳水平引起的病症，诸如动脉粥样硬化、心脏病或中风。 烟酸反应性病症的另一实例为痛经。在一项报导中，使一组80名经受痛经折磨的女性每天两次补充100mg烟酸，开始为月经开始前7到10天补充，且随后在痛经期间每隔2到3小时补充烟酸[Hudgins，(1952)Am Pract Dig Treat 3：892-893；Hudgins(1954)WestJ Surg Obstet Gynecol 62：610-611]。约90％的个体的症状明显减轻。痛经期间所需的剂量(每隔2到3小时100mg)足够高从而在某些女性中引起潮红。在这种情况下，本发明的方法和组合物可用于治疗烟酸反应性病症而不会引起潮红副作用。 本发明公开供消费者使用以预防或治疗脂质相关病症的试剂盒。试剂盒可包含本发明的医药组合物和描述使用所述医药组合物预防或治疗脂质相关病症的方法的说明。举例来说，试剂盒可含有至少一个剂量单位与烟酸或烟酸类似物相比具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂。此外，试剂盒可包括与本发明组合物组合使用的其它治疗剂。 本发明的组合物可以多种经口、局部或不经肠剂型投与。所属领域技术人员将了解，所述剂型可包含本发明化合物或本发明化合物的医药学上可接受的盐作为活性组分。 预防或治疗用所需的活性成分或其活性盐或衍生物的剂量不仅将随所选择的特定盐变化，而且也随投药途径、所治疗的病况的性质和个体的年龄和情况变化，且最终将取决于主治医师或临床医师的判断。一般来说，所属领域技术人员了解怎样由模型系统、通常为动物模型中获得的活体内数据外推至另一模型，诸如人类。在一些情况下，这些外推可仅基于动物模型与另一动物模型(诸如哺乳动物，例如人类)的体重比较，然而，更常见的是，这些外推并非简单地基于体重，而是并入多种因素。代表性因素包括个体的类型、年龄、体重、性别、饮食和健康情况、疾病的严重程度、投药途径、所使用的特定化合物的药理学考虑(诸如活性、功效、药物动力学和毒理学概况)、是否利用药物传递系统、进行治疗或预防的病状为急性或慢性或是否使用组合疗法。用本发明的化合物和/或组合物预防或治疗疾病病况的剂量方案是根据上文所述的多种因素选择。因此，所用的实际剂量方案可广泛变化，且因此可偏离优选剂量方案，且所属领域技术人员将认识到可对这些典型范围以外的剂量和剂量方案进行测试，且适当时，可将其用于本发明的方法中。 所需剂量可方便地以单剂量形式或以经适当间隔投与的分剂量形式(例如，每天2次、3次、4次或更多分剂量)提供。举例而言，分剂量本身可进一步细分成多个不连续的松散间隔的投药。尤其当认为投与相对大量适当时，可将每日剂量细分成若干份投药，例如2、3或4份。适当时，视个体行为而定，可能需要自所指定的每日剂量上调或下调。 试剂盒可包括容纳本发明的医药组合物的容器，且还可包括分开的容器，诸如分开的瓶子或分开的箔包装。所述容器可为所属领域中已知的任何常规形状或形式，其是由医药学上可接受的材料制成，例如纸盒或硬纸盒、玻璃或塑料瓶或广口瓶、可再密封的袋子(例如，用于保存放入不同容器中的片剂“新填充物”)，或具有个别剂量以根据治疗时间表压出包装外的发泡包装。所使用的容器可视所涉及的确切剂型而定，例如常规硬纸盒一般不用于保存液体悬浮液。可在单一包装中同时使用一个以上容器来销售单一剂型是可行的。举例来说，可将片剂装于瓶中，接着将所述瓶装于盒内。 所述试剂盒的实例为所谓的发泡包装。包装工业中众所周知发泡包装，且其广泛用于包装医药单位剂型(片剂、胶囊等)。发泡包装一般是由经优选透明塑料材料的箔覆盖的相对坚硬材料的薄片组成。在包装过程中，塑料箔中形成凹槽。所述凹槽具有个别待包装片剂或胶囊的尺寸和形状，或可具有容纳多个待包装片剂和/或胶囊的尺寸和形状。接下来，将片剂或胶囊相应地放入凹槽中，并且在面向塑料箔(与形成凹槽的方向相对)处对所述箔密封所述相对坚硬的材料薄片。结果，视需要将片剂或胶囊独立地密封或整体地密封于塑料箔与薄片之间的凹槽中。一般来说，所述薄片的强度为可通过人工向凹槽施加压力由此在薄片中凹槽位置处形成开口从而将片剂或胶囊自发泡包装中移出的强度。随后可经由所述开口将片剂或胶囊移出。 可合意地提供书面记忆辅助物，其中所述书面记忆辅助物为例如以数字形式注于片剂或胶囊附近的含有用于医师、药师或个体的信息和/或说明的类型(其中所述数字与应摄取指定片剂或胶囊的方案的天数相对应)，或含有同类信息的卡片。所述记忆辅助物的另一实例为印刷于卡片上的日历，例如，如下所述“第一周，星期一、星期二”等，“第二周，星期一、星期二”等。记忆辅助物的其它变化形式将易于了解。 试剂盒的另一特定实施例为经设计以一次分配一剂每日剂量的分配器。所述分配器可装备有记忆辅助物，从而进一步便利与方案相符。所述记忆辅助物的实例为指示已分配的每日剂量数的机械计数器。所述记忆辅助物的另一实例为与液晶读出器或可闻提示信号耦合的电池供电微芯片记忆体，所述液晶读出器或可闻提示信号例如会读出已服用前一次每日剂量的日期和/或对何时服用下一剂作出提示。 本发明一方面涉及一种用于通过疗法治疗人体或动物体的方法中的如本文所述的烟酸受体调节剂。 本发明另一方面涉及一种如本文所述的与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂，其是用于通过疗法治疗人体或动物体的脂质相关病症的方法中。本发明另一方面涉及一种治疗脂质相关病症的方法，其包含向受所述病况折磨的个体投与治疗有效量的如本文所述的优选为医药组合物形式的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用。 本发明一方面涉及一种治疗脂质相关病症的方法，其包含向受所述病况折磨的个体投与治疗有效量的如本文所述的优选为医药组合物形式的烟酸受体调节剂，所述调节剂与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用。本发明另一方面涉及一种如本文所述的与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用的烟酸受体调节剂，其是用于通过疗法治疗人体或动物体的脂质相关病症的方法中。 本申请案中所示的化合物为市售或可使用此项技术中已知的方法合成，例如，如vanHerk等人，J Med Chem.46：3945-3951(2003)或PCT/US2004/038920中所述的方法。 实例 出于说明而非限制的目的提供以下实例。所属领域技术人员将能够基于本文的公开内容设计相当的检定和方法，其都形成本发明的部分。 实例1 用于测定MAP激酶诱导作用的基于抗体的检定 本实例展示可用于测定由烟酸(参看图1)或烟酸和烟酸受体调节剂化合物8(参看图2)所诱导的MAP激酶活性的ELISA和免疫印迹检定。 MAP激酶ELISA： 根据以下方案使用来自Biosource的试剂盒(磷酸化ERK1/2pT185pY187ELISA，目录号KHO-0091)。 在用化合物刺激细胞之前，使细胞血清饥饿整夜。 1.化合物制备和细胞处理： A.将化合物溶解于DMSO中。由于较高的DMSO浓度将使细胞应激并活化MAPK，故不应超过1％DMSO。将PMA(100ng/ml)用作阳性对照。 B.将细胞盘从恒温箱中取出，并且将其放在设置为轻微震荡(设置为速度4)的震荡器上。小心加入化合物，并且将细胞放回到恒温箱中培育5分钟。4.5分钟时，从盘中抽吸培养基以便加入化合物。接着，加入2ml冷PBS并且通过轻微旋转移除过量培养基。抽吸PBS并且加入1ml PBS(对于长满的6cm培养皿而言为1ml)。 2.细胞收集和提取：冰上： A.用橡胶铲将细胞自盘中刮下，并且将其转移到微量离心管中，随后在4℃下以3000rpm离心5分钟。 B.抽吸PBS并且在以10分钟为间隔进行涡旋的同时于冰上历时30分钟将细胞小球溶解于细胞提取缓冲液(0.1％SDS)(对于长满的6cm培养皿而言为250-300μl)中。 C.随后在4℃下以最大速度(16,000×G)离心混合物15分钟。 D.将经净化的溶解产物转移到新的微量离心管中并测量蛋白质浓度。为测量蛋白质，用细胞提取缓冲液将样本稀释到1mg/ml的浓度，且随后将其煮沸5分钟。冷却后，在室温下以最大速度将其离心5分钟。用标准稀释剂缓冲液以1∶10的比率将溶解产物稀释到0.1mg/ml(最终0.01％SDS)的浓度，并一式两份将100μl所述溶解产物装载于样本孔(每孔10微克)中。可在-80℃下储存溶解产物。 3.试剂制备和储存： A.磷酸化ERK1/2标准品的复水和稀释： 1.用1.2ml标准稀释剂缓冲液使磷酸化ERK1/2标准品复水，小心混合并使其静置10分钟以确保完全复水。这一储备液为100U/ml。 2.一式两份，将125μl标准稀释剂缓冲液加到母板(非ELISA板)的孔B-H中。将250μl 100U/ml储备液加到孔A中。 3.通过将125μl100U/ml储备液由孔A中转移到孔B中，混合且将125μl孔B中的物质转移到孔C中，如此反复直到转移到孔G，来进行连续稀释(1∶2)。孔H未经稀释(0U/ml)。 B.α兔IgG HRP的储存和最终稀释： 1.使α兔IgG HRP浓缩物达到室温并小心混合。随后，将10μl浓缩物与1ml HRP稀释剂混合以用于检定中所使用的各8孔条带。 C.洗涤缓冲液的稀释： 1.使25×洗涤缓冲液浓缩物达到室温并混合以确保完全复水。用去离子水(40ml25X/960ml H2O)稀释洗涤缓冲液浓缩物。 4.检定方法：程序和计算： 标准品和样本应用： A.所有试剂都处于室温下并且在使用前混合。 B.在打开箔袋之前微量滴定盘处于室温下。确定检定所需的8孔条带的数量，并且将袋密封并使其返回到4℃。 C.一式两份(2个8孔条带)加入100μl标准品(3A2中所制备)。 D.使两个孔保持空置以用作色原空白。 E.一式两份将100μl样本加到样本孔中。 F.用培养板盖覆盖培养板并且小心轻敲培养板侧以进行混合。 G.在室温下培育培养板2小时。(可在4℃下培育培养板整夜)。 洗涤 A.用吸出器将液体自孔中吸出。 B.用200μl经稀释的洗涤缓冲液填充各孔。培育30秒后，抽吸液体。重复这一操作4次。 检测抗体 A.将100μl α磷酸化ERK1/2溶液移液到各孔中，但色原空白除外。更换板盖并小心轻敲以进行混合。 B.在室温下培育1小时。 洗涤 A.如上所述洗涤各孔4次。 α兔IgG HRP A.将100μl α兔IgG HRP工作溶液加到各孔中，但色原空白除外。更换板盖并小心轻敲以进行混合。 B.在室温下培育30分钟。 洗涤 A.如上所述洗涤各孔4次。 色原 A.将100μl稳定色原加到各孔中。 B.在室温下于暗处培育20分钟。(不要使用箔或金属。) 终止溶液 A.将100μl终止溶液加到各孔中并轻敲以混合培养板。 读取培养板 A.在450nm的吸光率下读取培养板。 细胞提取缓冲液： 10mM Tris pH7.4 5ml(1M) 100mM NaCl 10ml(5M) 1mM EDTA pH 8.0 1ml(0.5M) 20mM Na4P2O7 100ml(100mM) 1％TX-100 5ml(100％) 10％甘油 50ml(100％) 0.1％SDS 5ml(10％) 0.5％脱氧胆酸盐 2.5g 500ml最终体积 加入新制的： 2mM Na3VO4 1ml(100mM) 1mM PMSF 250μl(200mM) 25ug/ml亮抑酶肽(Leupeptin) 125μl(10μg/μl) 25ug/ml抑肽酶(Aprotinin) 125μl(10μg/ml) 50ml最终体积 MAP激酶免疫印迹： 1.样本制备： A.以下步骤是在冰上进行。将培养基从细胞中吸出并且用PBS冲洗细胞。 B.以适当体积的1％NP-40溶解缓冲液(体积视培养皿尺寸、细胞密度等而定)采集细胞。通常，对长满的6cm培养皿而言使用500μl体积。 C.将溶解产物转移到微量离心管中。涡旋所述管并且在冰上培育30分钟，随后在4℃下以最大速度离心10分钟。 2.蛋白质检定： A.以每微升水1.41μl制备储备蛋白标准品BSA。 B.将14.2μl储备标准品加到485.8μl水中达到40μg/ml的浓度。 C.将200μl 40μg/ml的标准品加到孔9A和9B中。 D.将100μl水加到第A和B行1-8中。 E.通过加入100μl 40μg/ml以使各孔达到20μg/ml，混合并将100μl转移到下一孔中来进行连续稀释直到各孔达到0.31μg/ml。将来自0.31μg/ml孔的最后100μl丢弃。 F.将99μl加到尚未命名的孔中。 G.一式三份将1μl未知样本加到各孔中。 H.将25μl 5×Bradford染料试剂加到标准品和未知物中。 I.在室温下培育至少5分钟。 J.在595λ下读取吸光率。 3.供装载的样本的稀释和制备： A.用水或溶解缓冲液将样本稀释到1μg/μl的最终浓度。 B.加入5×Laemmli样本缓冲液，并且使样本涡旋并煮沸5分钟。 4.NOVEX凝胶的制备： A.将凝胶底部的白色胶带撕下。 B.小心将梳状物拉出。 C.用水冲洗凝胶并将其放入凝胶盒中。 D.用跑胶缓冲液填充内部储集器，并且在凝胶开口上方(白色胶带所在之处)填充外部储集器。 E.用注射器吹拂各孔。 5.装载样本： A.装载样本，但应小心不要使其溢流到相邻孔中。 B.装载标准标记且用1×样本缓冲液装载空置的孔。 6.跑胶： A.在150V下跑胶1.5小时。 7.转移到硝化纤维素(0.2μm孔径)： A.制备1×转移缓冲液。 B.将凝胶、海绵、Whatman纸和硝化纤维素膜浸入转移缓冲液中。 C.以下列次序进行分层：正电极、海绵、膜、凝胶、海绵、负电极。 D.用转移缓冲液填充外部腔室和内部腔室。 E.在25V下转移1.5小时。 8.膜的阻断： A.拆去转移机。 B.将硝化纤维素膜放入BLOCKO中，并且在4℃下于震荡器中培育整夜。 9.初级抗体： A.在震荡器中，用TBS/tween洗涤膜1次历时10分钟。 B.在BLOCKO中稀释初级抗体。 C.室温下，在震荡器中培育2小时。 10.次级抗体： A.在震荡器中用TBS/tween洗涤膜2次，每次历时15分钟。 B.在TBS/tween中稀释次级抗体。 C.室温下，在震荡器中培育1小时。 11.检测： A.在震荡器中用TBS/tween洗涤膜3次，每次历时15分钟。 B.用水冲洗膜1次。 C.加入化学发光检测试剂(每片膜10ml ECL试剂+5μl H2O2(30％))并且震荡2分钟。 D.将膜放入塑料板保护器中并挤出过量的检测试剂和气泡。 E.将膜暴露至薄膜。 1％NP-40溶解缓冲液： 1％NP-40 20mM Tris(pH 8.0) 100mM NaCl 1mM EDTA 1mM PMSF 200μM Na3VO4 10U/ml抑肽酶 10μg/ml亮抑酶肽 5×Laemmli样本缓冲液： 300mM Tris pH6.8 25％甘油 10％SDS 0.05％溴酚蓝 每毫升最终体积120μl储备液2-βME SDS-PAGE跑胶缓冲液： 14.4g甘氨酸 3.03g Tris碱 1g或5ml(20％)SDS 用水补足到1升 10×转移缓冲液： 0.2M Tris碱 1.92M甘氨酸 1×转移缓冲液： 100ml 10×转移缓冲液 200ml MeOH 700ml水 10×TBS： 60.5g Tris碱 87.5g NaCl 用水补足到1升 TBS/Tween： 100ml 10×TBS 900ml水 500μl Tween20(100％) BLOCKO： TBS/Tween中的4％BSA 实例2 MAP激酶活性与烟酸受体调节剂的活体内潮红作用之间的相关性 本实例证实，在活体内具有已知的潮红作用的化合物比已知未在活体内引起显著潮红的化合物具有更高的MAP激酶活性水平(参看图3和图4)。应注意图3中的化合物1为烟酸。 对于图3中的表格而言，基本上测量活体内潮红和cAMP如下。使用实例1中的ELISA方案测量MAP激酶。 使用激光多普勒仪测量小鼠的潮红反应： 使用10mg/ml/kg戊巴比妥钠(Nembutal sodium)(Abbott labs)使雄性C57B16小鼠(约25g)麻醉。10分钟后，将动物放于激光下并且将耳朵折叠以暴露腹侧。将激光定位于耳朵中间并且集中至8.4-9.0V的强度(一般在耳朵上方约4.5cm处)。在3分钟内记录基线读数。以15乘15的影像格式、自动间隔、60帧影像和20秒的时间延迟和中等分辨率起始数据获取。第10帧影像后，通过注射将测试化合物投与腹膜间隙中。认为影像1-10为动物的基线，并且将数据标准化为基线平均强度的平均值。所使用的激光多普勒仪为Pirimed PimII。 环AMP检定 使用来自Perkin Elmer的96孔腺苷酰基环化酶活化试剂盒(目录编号SMP004B)。用于CHO细胞的细胞培养基为具有10％胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠和400μg/ml G418的F-12凯基氏经修饰细胞培养基(F-12Kaighn′s Modified Cell CultureMedium)。 试剂制备 ○制成50/50检定缓冲液(刺激缓冲液/PBS；应注意刺激缓冲液包括于Flashplate试剂盒中)。 ○制成PBS中的2％DMSO。 ○通过将1瓶cAMP粉末溶解于1mL刺激缓冲液中来制成10000pmol/ml(10μM)cAMP标准储备溶液。如下表所述进行连续稀释以产生八种标准浓度： 移液10μM cAMP储备液 (ml) 来自各管 加入PBS 中的2％ DMSO (ml) 加入各管 中 浓度(pmol/ml) (nM) 最终(皮摩尔/孔) 1 储备液 4 A 2000 50 2 A 2 B 1000 25 2 B 2 C 500 12.5 2 C 3 D 200 5 2 D 2 E 100 2.5 2 E 2 F 50 1.25 2 F 3 G 20 0.5○通过在刺激缓冲液中以1∶500稀释10mM储备液(冷冻储存)来制成20μM弗斯可林(forskolin)。 ○在2％DMSO/PBS中制成40μM烟酸。 制备化合物的连续5倍稀释液(在96孔板中) ○将5μL 20mM化合物放入第2列的100％DMSO中，一块培养板最多可具有8种化合物。 ○将245μl PBS加到含有化合物的第2列孔中并且通过向上/向下移液进行混合。将200μl 2％DMSO/PBS放入各列(第3列到第11列)中。 ○将来自第2列的50μl化合物转移到第3列中，如上所述进行混合，并重复连续稀释直到第11列(对每次稀释都更换移液管头)。现第2列到第11列都具有浓度在2％DMSO中400μM到204.8pM范围内(其为4×最终检定浓度100μM到51.2pM)的化合物。 采集细胞 ○自T-185细胞培养瓶中抽吸培养基。用10mL PBS洗涤细胞1次，并且每瓶加入5mL温(37℃)细胞解离溶液。分离细胞后，将5mL温(37℃)50/50缓冲液加到各瓶中，并且将细胞从瓶中转移到50mL锥形管中。 ○在室温下以1100rpm离心细胞6分钟。抽吸上清液并且将细胞再悬浮于50/50检定缓冲液中。对细胞进行计数并且用温(37℃)50/50检定缓冲液将其稀释到每毫升1×106个细胞的密度。 加入试剂 ○将200μL 2％DMSO/PBS加到第1列前4行中，将200μL 40μM烟酸加到第1列后4行中，并且将cAMP标准品加到化合物板上第12列中。 ○将25μL从化合物板转移到三个单独检定板的所有孔中。 ○将50μl 50/50(刺激缓冲液/PBS)加到检定板第12列中。 ○将50μL细胞加到第1-11列中，最终密度为每孔50,000个细胞。 ○将25μl 20μM弗斯可林加到(最终浓度5μM)含有表达烟酸受体的细胞的所有孔中，且由于第1列含有表达阴性对照受体的细胞，故除第1列第E-H行外其余所有孔都加有25μl刺激缓冲液。 ○在室温下，将培养板放于振荡器上历时1小时，用箔覆盖培养板的顶部。 ○用11ml检测缓冲液稀释50μl[125I]-cAMP(在试剂盒中)并且将100μl经稀释的示踪剂加到各孔中。 ○用塑料盖覆盖培养板并且在室温下将其放到振荡器中历时2小时。 ○以Wallac Microbeta计数器1450通过125I FlashPlate方案检测125I来对培养板进行计数。 实例3 MAP激酶检定的预测能力 本实例展示，测试基于cAMP检定所选择的化合物相比烟酸诱导MAP激酶的能力，所述化合物在活体内引起潮红的能力尚未可知。已发现，化合物(化合物11)与烟酸相比，具有降低的诱导MAP激酶的能力，且因此使用实例2中所述的激光多普勒检定在小鼠中测试其活体内潮红活性。如本发明的方法所预测，所述化合物不会在活体内引起潮红。因此，MAP激酶检定能够预测当在活体内进行测试时，所述化合物是否会引起潮红。此外，还测试化合物减少游离脂肪酸(FFA)的能力。 在本实例中，使用实例1所述的MAP激酶ELISA测量MAP激酶活性。使用ELISA检定，所述检定使用表达人类烟酸受体(参看图5，左上图)或小鼠烟酸受体(参看右上图)的CHO细胞。于小鼠中进行的激光多普勒仪潮红检定的结果展示于图5右下图中。如下文所述进行游离脂肪酸释放检定。 FFA检定 使小鼠服用媒剂或各种剂量的化合物11。10分钟后，对小鼠实施安乐死并且收集血液。处理血液样本并使用非酯化脂肪酸(NEFA)检定(来自Waco Chemicals USA，Richmond，VA的NEFA-C检定试剂盒)测试其游离脂肪酸的释放情况。遵照制造商所提出的方案进行NEFA检定。所测量的媒剂样本中游离脂肪酸的浓度比化合物11中的浓度高，这表明用化合物11进行治疗将引起游离脂肪酸释放减少。因此，可认为化合物11为抗脂解化合物。 实例4 化合物12，烟酸类似物 本实例展示例如可用于替代本发明方法中的烟酸的烟酸类似物(化合物12)的实例。 在本实例中，使用实例1所述的MAP激酶ELISA测量化合物12的MAP激酶活性。使用ELISA检定，所述检定使用表达人类烟酸受体(参看图6，左图)或小鼠烟酸受体(参看右图)的CHO细胞。如图6所示，在MAP激酶活化检定中，化合物12与烟酸曲线密切匹配。 实例5 大鼠体内游离脂肪酸水平的测量和人类脂肪细胞中的脂解 本实例展示可对大鼠体内的游离脂肪酸水平进行测量。本实例还展示可对人类脂肪细胞中游离脂肪酸水平进行测量。 大鼠检定 经手术将导管植入雄性Sprague Dawley大鼠的颈静脉中。使大鼠在数天内从导管植入手术中恢复，且随后在次日使大鼠禁食，并于约16小时后经腹膜内(DP)注射媒剂或每千克体重15毫克、30毫克或45毫克烟酸[NA]。可以类似方式测试烟酸类似物。在各个时间点时抽取血液(约200ml)并于离心后分离血浆。随后，根据制造商的说明书经由NEFA-C试剂盒(Wako Chemicals USA，Inc)测量血浆FFA。 人类脂肪细胞脂解检定： 从ZenBio(Research Triangle，North Carolina)获得脂肪细胞，并且根据制造商的方案进行脂解检定。使用凭经验确定的浓度的异丙肾上腺素和时间实现胞内cAMP水平的升高和通过激素敏感性脂肪酶进行的脂解的伴随活化。在存在或不存在相关化合物(例如，烟酸或烟酸类似物)的情况下持续脂解一段所需的时间。测试至少五种化合物浓度，以允许进行非线性回归分析并测定EC50值。以比色法测量甘油产量的百分比并将其与标准品(ZenBio)相比较。 实例6 小鼠动脉粥样硬化模型 已证实，通过基因敲除脂联素基因所产生的脂联素缺陷型小鼠易患动脉粥样硬化和胰岛素抵抗。所述小鼠也为缺血性心脏病的适当模型[Matsuda，M等人J Biol Chem(2002)7月和其中所引用的参考文献，所述文献的公开内容是以其全文引用的方式并入本文]。 在标准实验室条件下，在22℃和50％相对湿度下圈养脂联素基因敲除小鼠(每笼7-9只小鼠)。通过使用异氟烷麻醉插入的微渗透压泵对小鼠给药以对所述小鼠皮下(s.c)提供本发明的化合物、食盐水或不相关的化合物。测定以不同时间间隔处死的不同组小鼠的内膜增厚和缺血性心脏病情况。使用Student t检定评估各组(将本发明的化合物与食盐水治疗组相比较)之间的显著差异。 前述小鼠动脉粥样硬化模型是出于说明而非限制的目的提供。举例来说，也已证实，载脂蛋白E缺陷型小鼠易患动脉粥样硬化[Plump AS等人.，Cell(1992)71：343-353；所述文献的公开内容是以其全文引用的方式并入本文]。 可使用的另一模型为C57BL/6J小鼠(已知易于经饮食诱发形成动脉粥样硬化病变的近交系)中饮食诱发的动脉粥样硬化的模型。所属领域技术人员众所周知这一模型[Kamada N等人，J Atheroscler Thromb(2001)8：1-6；Garber DW等人，J Lipid Res(2001)42：545-52；Smith JD等人，J Intern Med(1997)242：99-109；所述文献中每一者的公开内容都是以其全文引用的方式并入本文]。 实例7 HDL-胆固醇和动脉粥样硬化的活体内猪模型 例如，通过活体内猪模型中本发明化合物降低总胆固醇比HDL-胆固醇的比率、升高HDL-胆固醇或预防动脉粥样硬化的活性来证实本发明化合物作为医药剂预防或治疗脂质相关病症的效用。将猪用作动物模型，这是因为其比大部分其它动物模型更能够反映人类生理学、尤其是脂质代谢情况。本文所呈现的活体内猪模型是出于说明而非限制的目的。 在50天内，向约克夏白化猪(Yorkshire albino pig)(体重25.5±4kg)喂以富含饱和脂肪酸和富含胆固醇(SFA-CHO)的食物(每35kg猪体重1kg食物)，所述食物是由补充有2％胆固醇和20％牛脂的标准食物构成[Royo T等人，European Journal of ClinicalInvestigation(2000)30：843-52；所述公开内容是以其全文引用的方式并入本文]。将饱和比不饱和脂肪酸的比率从正常猪食物中的0.6改变成SFA-CHO饮食中的1.12。将动物分成2组，一组(n＝8)喂以SFA-CHO饮食并且用安慰剂进行治疗，且一组(n＝8)喂以SFA-CHO饮食并且用调节剂(3.0mg/kg)治疗。在50天的时间内向对照动物喂以标准食物。在基线时(动物接受后2天)和起始饮食后50天收集血液样本。分析血脂。处死动物并验尸。 或者，前述分析包含多个各自经不同剂量的相关化合物治疗的组。剂量例如包括：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。或者，前述分析是在多个时间点时进行，例如10周、20周、30周、40周和50周。 HDL-胆固醇 将血液收集于柠檬酸三钠(3.8％，1∶10)中。离心后(1200g 15min)获得血浆并立即进行处理。使用自动分析仪Kodak Ektachem DT系统(Eastman Kodak Company，Rochester，NY，USA)测量总胆固醇、HDL-胆固醇和LDL-胆固醇。用制造商提供的溶液稀释参数值高于所述范围的样本且随后再进行分析。测定总胆固醇/HDL-胆固醇比率。对各组之间HDL-胆固醇水平进行比较。对各组之间总胆固醇/HDL-胆固醇比率进行比较。 将投与相关化合物时HDL-胆固醇的升高或总胆固醇/HDL-胆固醇比率的降低视作所述化合物具有前述效用的指示。 动脉粥样硬化 沿腹面纵向打开，移出完整的胸腹部大动脉，并且在从胸腹部大动脉中的标准部位切除样本之后将其固定于中性缓冲的福尔马林(neutral-buffered formalin)中，以用于组织学检验和脂质组成和合成研究。固定后，用苏丹IV(Sudan IV)对完整的大动脉进行染色且将其钉住放平，且用与计算机化影像分析系统(Image Pro Plus；Media Cybernetics，Silver Spring，MD)连接的TV摄影机获得数字影像以测定动脉粥样硬化病变所涉及的大动脉表面百分比[Gerrity RG等人，Diabetes(2001)50：1654-65；Cornhill JF等人，Arteriosclerosis，Thrombosis，and Vascular Biology(1985)5：415-26；所述公开内容是以其全文引用的方式并入本文]。对各组之间动脉粥样硬化病变所涉及的大动脉表面百分比进行比较。 将投与相关化合物时动脉粥样硬化病变所涉及的大动脉表面百分比的降低视作化合物具有前述效用的指示。 血浆游离脂肪酸 所属领域技术人员将显而易见，易于对前述活体内猪模型进行修改以便确定(无限制性)所述化合物减少血浆游离脂肪酸的活性。 实例8 用于确定GPCR活化的检定 可用多种方法评定人类GPCR的活化。下文具有说明性；相信所属领域技术人员将有能力确定那些优选有益于技术人员的需要的技术。 1.膜结合检定：[35S]GTPγS检定 当G蛋白偶合受体处于其活性状态时，由于配体结合或组成性活化，受体与G蛋白偶合并且刺激GDP释放和随后GTP与G蛋白的结合。G蛋白-受体复合物中的α亚单元充当GTP酶，并且缓慢地将GTP水解成GDP，此时受体通常失活。活化受体继续以GTP交换GDP。可利用不可水解的GTP类似物[35S]GTPγS来证实[35S]GTPγS与表达活化受体的膜的结合的增强。使用[35S]GTPγS结合测量活化的优势在于：(a)其一般适用于所有G蛋白偶合受体；(b)其接近膜表面从而使其不太可能提取影响胞内级联的分子。 所述检定利用G蛋白偶合受体刺激[35S]GTPγS与表达相关受体的膜结合的能力。因此，所述检定可用于直接鉴别方法中以筛选内源GPCR和非内源组成性活化GPCR的候选化合物。所述检定为通用检定，并且可用于有关所有G蛋白偶合受体的药物发现中。 将[35S]GTPγS检定物于20mM HEPES和1mM与约20mM之间的MgCl2(为优化结果，可对所述量进行调节，但优选20mM)(pH 7.4)、具有约0.3nM与约1.2nM之间的[35S]GTPγS(为优化结果，可对所述量进行调节，但优选1.2nM)和12.5至75μg膜蛋白(例如表达GPR35的293细胞；为优化结果，可对所述量进行调节)和10μM GDP(为优化结果，可对所述量进行调节)的结合缓冲液中培育1小时。随后加入麦芽凝集素珠粒(25μl；Amersham)并且在室温下再培育混合物30分钟。随后在室温下以1500×g使管离心5分钟，且随后于闪烁计数器中进行计数。 2.腺苷酰基环化酶 可修饰针对基于细胞的检定而设计的Flash PlateTM腺苷酰基环化酶试剂盒(NewEngland Nuclear；目录号SMP004A)以与粗原生质膜一起使用。Flash Plate的孔中可含有闪烁体涂层，所述涂层还含有识别cAMP的特异性抗体。可通过对放射性cAMP示踪剂与cAMP抗体的结合的直接竞争来量化所述孔中所产生的cAMP。下文是用作有关测量表达受体的全细胞中cAMP水平改变的简要方案。 瞬时转染后大约24小时，采集经转染的细胞。小心抽吸培养基并丢弃。小心地将10ml PBS加入每一盘细胞中，随后小心抽吸。将1ml Sigma细胞解离缓冲液和3ml PBS加入每一培养板中。将细胞从培养板中吸出，并且将细胞悬浮液收集于50ml锥形离心管中。随后在室温下以1,100rpm离心细胞5分钟。小心地将细胞小球再悬浮于适当体积的PBS(每培养板约3ml)中。随后使用血球计对细胞进行计数，并且加入额外的PBS以得到适当数量的细胞(最终体积为每孔约50μl)。 根据制造商的说明制备cAMP标准品和检测缓冲液(包含1μCi示踪剂[125I]cAMP(50μl)和11ml检测缓冲液)并加以保存。新鲜制备检定缓冲液以供筛选，且其含有50μl刺激缓冲液、3μl候选化合物(12μM最终检定浓度)和50μl细胞。将检定缓冲液储存于冰上待用。通过将50μl cAMP标准品加入适当的孔中随后将50μl PBSA加入孔H11和H12中来起始优选在例如96孔板中进行的检定。将50μl刺激缓冲液加入所有孔中。使用能够分配3μl化合物溶液的针头工具(pin tool)将DMSO(或所选候选化合物)加入适当孔中，其中具有12μM候选化合物的最终检定浓度和100μl的总检定体积。随后将细胞加入孔中，并在室温下培育60分钟。随后将100μl含有示踪剂cAMP的检测混合物加入孔中。然后再培育培养板2小时，随后于Wallac MicroBeta闪烁计数器中进行计数。接着由标准cAMP曲线外推每一检定培养板中所含的每孔cAMP值。 3.有关Gi偶合目标GPCR的基于细胞的cAMP检定 TSHR为活化时引起cAMP积累的Gs偶合GPCR。可通过使氨基酸残基623突变(即，将丙氨酸残基改变成异亮氨酸残基)来组成性活化TSHR。预期Gi偶合受体将抑制腺苷酰基环化酶，且因此降低cAMP产生水平，可由此对cAMP水平激发进行评定。通过使作为“信号增强子”的非内源组成性活化TSHR(TSHR-A623I)(或内源性组成性活性Gs偶合受体)与Gi连接的目标GPCR共转染以建立cAMP的基线水平，来实现用于测量作为Gi偶合受体活化的指标的cAMP产量降低的有效技术。产生内源或非内源型式的Gi偶合受体后，然后使目标GPCR与信号增强子共转染，并且可将所述材料用于筛选。在一些实施例中，优选将这一方法用于直接鉴别Gi偶合受体的候选化合物。应注意，对于Gi偶合GPCR而言，当使用本方法时，目标GPCR的反向激动剂将增加cAMP信号，而激动剂将减少cAMP信号。 第一天时，将培养板涂成每孔2×104个293细胞。第二天时，制备两个反应管(每一管遵循的比例是对于每一培养板而言)：管A是通过在1.2ml无血清DMEM(IrvineScientific，Irvine，CA)中混合2μg转染到哺乳动物细胞中的每一受体的DNA(共4μgDNA(例如，pCMV载体；具有突变THSR(TSHR-A623I)的pCMV载体；TSHR-A623I和GPCR等))来制备；管B是通过在1.2ml无血清DMEM中混合120μl Lipofectamine(Gibco BRL)来制备。随后通过倒转(数次)使管A和B混合，随后在室温下培育30-45分钟。所述混合物被称为“转染混合物”。用1×PBS洗涤所接种的293细胞，随后加入10ml无血清DMEM。然后将2.4ml转染混合物加到细胞中，随后在37℃/5％CO2下培育4小时。然后通过抽吸移除转染混合物，随后加入25ml DMEM/10％胎牛血清。随后在37℃/5％CO2下培育细胞。24小时培育后，采集细胞并将其用于分析。 设计Flash PlateTM腺苷酰基环化酶试剂盒(New England Nuclear；目录号SMP004A)以供基于细胞的检定用，但视所属领域技术人员的需要可对其进行修饰以与粗原生质膜一起使用。Flash Plate的孔中含有闪烁体涂层，所述涂层还含有识别cAMP的特异性抗体。可通过对放射性cAMP示踪剂与cAMP抗体的结合的直接竞争来量化所述孔中所产生的cAMP。下文是用作有关测量表达相关受体的全细胞中cAMP水平改变的简要方案。 瞬时转染后大约24小时，采集经转染的细胞。小心抽吸培养基并丢弃。小心地将10ml PBS加入每一盘细胞中，随后小心抽吸。将1ml Sigma细胞解离缓冲液和3ml PBS加入每一培养板中。将细胞从培养板中吸出，并且将细胞悬浮液收集于50ml锥形离心管中。随后在室温下以1,100rpm离心细胞5分钟。小心地将细胞小球再悬浮于适当体积的PBS(每培养板约3ml)中。随后使用血球计对细胞进行计数，并且加入额外的PBS以得到适当数量的细胞(最终体积为每孔约50μl)。 根据制造商的说明制备cAMP标准品和检测缓冲液(包含1μCi示踪剂[125I]cAMP(50μl)和11ml检测缓冲液)并加以保存。应新鲜制备检定缓冲液以供筛选，且其含有50μl刺激缓冲液、3μl候选化合物(12μM最终检定浓度)和50μl细胞。将检定缓冲液储存于冰上待用。可通过将50μl cAMP标准品加入适当孔中随后将50μl PBSA加入孔H11和H12中来起始检定。将50μl刺激缓冲液加入所有孔中。使用能够分配3μl化合物溶液的针头工具将所选化合物(例如TSH)加入适当孔中，其中具有12μM候选化合物的最终检定浓度和100μl的总检定体积。随后将细胞加入孔中，并在室温下培育60分钟。随后将100μl含有示踪剂cAMP的检测混合物加入孔中。随后再培育培养板2小时，随后于Wallac MicroBeta闪烁计数器中进行计数。接着由标准cAMP曲线外推每一检定培养板中所含的每孔cAMP值。 4.基于报告基因的检定 a.CRE-LUC报告基因检定(Gs相关受体) 以每孔2×104个细胞的密度将293或293T细胞接种于96孔板上，并且根据制造商的说明于次日使用Lipofectamine试剂(BRL)进行转染。如下制备用于每六孔转染的DNA/脂质混合物：小心地使100μl DMEM中的260ng质粒DNA与100μl DMEM中的2μl脂质混合(260ng质粒DNA是由200ng 8×CRE-Luc报告基因质粒、50ng包含内源受体或非内源受体的pCMV或单独pCMV和10ng GPRS表达质粒(pcDNA3中的GPRS(Invitrogen))组成)。如下制备8×CRE-Luc报告基因质粒：通过在pβgal-Basic载体(Clontech)中的BglV-HindIII位点处克隆大鼠生长激素抑制素启动子(-71/+51)来获得载体SRIF-β-gal。通过PCR由腺病毒模板AdpCF126CCRE8获得八(8)个cAMP反应元件的拷贝(参看Suzuki等人，Hum Gene Ther7：1883-1893(1996)，其公开内容以全文引用的方式并入本文中)，并且将其克隆至SRIF-β-gal载体的Kpn-BglV位点处，从而产生8×CRE-β-gal报告基因载体。通过用自pGL3-basic载体(Promega)获得的荧光素酶基因在HindIII-BamHI位点处置换8×CRE-β-gal报告基因载体中的β-半乳糖苷酶基因来产生8×CRE-Luc报告基因质粒。室温下培育30分钟后，用400μl DMEM稀释DNA/脂质混合物，并且将100μl经稀释的混合物加入每一孔中。在细胞培养恒温箱中培育4小时后，将100μl具有10％FCS的DMEM加入每一孔中。次日，用每孔200μl具有10％FCS的DMEM交换经转染细胞。八(8)小时后，用PBS洗涤一次，随后将孔换成每孔100μl无酚红的DMEM。次日，遵循制造商的说明，使用LucLiteTM报告基因检定试剂盒(Packard)测量荧光素酶活性，且于1450MicroBetaTM闪烁和发光计数器(Wallac)上读取。 b.AP1报告基因检定(Gq相关受体) 检测Gq刺激的方法取决于Gq依赖性磷脂酶C使在启动子中含有AP1元件的基因活化的已知特性。遵循上文关于CREB报告基因检定所述的方案，可利用PathdetectTMAP-1cis报告系统(Stratagene，目录号219073)，但是磷酸钙沉淀物的组分为410ngpAP1-Luc、80ng pCMV受体表达质粒和20ng CMV-SEAP。 c.SRF-LUC报告基因检定(Gq相关受体) 一种检测Gq刺激的方法取决于Gq依赖性磷脂酶C使在启动子中含有血清反应因子的基因活化的已知特性。可利用PathdetectTM SKF-Luc-报告系统(Stratagene)分析例如COS7细胞中的Gq偶合活性。根据制造商的说明，使用Mammalian TransfectionTM试剂盒(Stratagene，目录号200285)以系统的质粒组分和编码内源或非内源GPCR的指定表达质粒转染细胞。简言之，根据制造商的说明，使410ng SRF-Luc、80ng pCMV受体表达质粒和20ng CMV-SEAP(经分泌的碱性磷酸酶表达质粒；测量经转染细胞的培养基中的碱性磷酸酶活性以控制样本之间的转染效率变化)组合于磷酸钙沉淀物中。将一半沉淀物均等地分布于96孔板中的3个孔上，并且在无血清培养基中的细胞上保持24小时。在最后5小时将细胞与例如1μM候选化合物一起培育。随后溶解细胞，并根据制造商的说明使用LucliteTM试剂盒(Packard，目录号6016911)和“Trilux 1450Microbeta”液体闪烁和发光计数器(Wallac)检定荧光素酶活性。可使用GraphPad PrismTM 2.0a(GraphPadSoftware Inc.)分析数据。 d.胞内IP3积累检定(Gq相关受体) 第1天时，可将包含相关受体(内源或非内源)的细胞涂于24孔板上，通常为每孔1×105个细胞(但可以使这一数量优化)。第2天时，通过首先使每孔50μl无血清DMEM中的25μgDNA与每孔50μl无血清DMEM中的2μl Lipofectamine混合来转染细胞。小心地混合溶液，且在室温下培育15-30分钟。用0.5ml PBS洗涤细胞，并使400μl无血清培养基与转染培养基混合，且将其加入细胞中。随后在37℃/5％CO2下培育细胞3-4小时，且随后移除转染培养基并以每孔1ml常规生长培养基替换。第3天时，以3H-肌醇标记细胞。简言之，移除培养基，并用0.5ml PBS洗涤细胞。随后，每孔加入0.5ml无肌醇/无血清培养基(GIBCO BRL)和每孔0.25μCi 3H-肌醇，并且在37℃/5％CO2下培育细胞16-18小时整夜。第4天时，如果使用含有血清素受体的对照构筑体，那么用0.5ml PBS洗涤细胞，并加入0.45ml含有无肌醇/无血清培养基、10μM帕吉林(pargyline)、10mM氯化锂的检定培养基，或0.4ml检定培养基和50μl 10×酮舍林(ketanserin，ket)至10μM的最终浓度。随后在37℃下培育细胞30分钟。随后用0.5mlPBS洗涤细胞，并且每孔加入200μl新制/冰冷的终止溶液(1M KOH；18mM硼酸钠；3.8mM EDTA)。在冰上保持溶液5-10分钟或直到细胞溶解，且接着以200μl新制/冰冷的中和溶液(7.5％HCl)中和。随后将溶解产物转移到1.5ml eppendorf管中，并且每管加入1ml氯仿/甲醇(1∶2)。涡旋溶液15秒，并将上层相施加至BioradAG1-X8TM阴离子交换树脂(100-200目)中。首先，用水以1∶1.25W/V洗涤树脂，并将0.9ml上层相装载于柱上。用10ml 5mM肌醇和10ml 5mM硼酸钠/60mM甲酸钠洗涤柱。将三磷酸肌醇洗提到含有10ml闪烁混合液(scintillation cocktail)的闪烁瓶中，所述闪烁混合液含有2ml 0.1M甲酸/1M甲酸铵。通过用10ml 0.1M甲酸/3M甲酸铵洗涤使柱再生，并用双蒸水冲洗两次，并且在4℃下储存于水中。 e.测量胞内钙浓度的荧光成像读板仪(FLIPR)检定 将来自个别克隆系的经目标受体(实验性)和pCMV(阴性对照)稳定转染的细胞以每孔5.5×104个细胞接种至经聚-D-赖氨酸预处理的具有完全培养基(具有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠的DMEM)的96孔板(Becton-Dickinson，#356640)中。由于烟酸受体与Gi偶合，故包含烟酸受体的细胞可另外包含Gα15、Gα16或嵌合Gq/Gi α亚单元。为制备Fluo4-AM(Molecular Probe，#F14202)培育缓冲液储备液，将1mg Fluo4-AM溶解于467μl DMSO和467μl泊洛尼克酸(Pluoronic acid)(MolecularProbe，#P3000)中以得到1mM储备溶液，其可在-20℃下储存一个月。Fluo4-AM为荧光钙指示剂染料。 于洗涤缓冲液(1×HBSS/2.5mM丙磺舒(Probenicid)/20mM HEPES(pH 7.4))中制备候选化合物。 检定时，将培养基从孔中移除，并以100μl的4μM Fluo4-AM/2.5mM丙磺舒(Sigma，#P8761)/20mM HEPES/完全培养基(pH 7.4)装载细胞。在37℃/5％CO2下进行培育60分钟。 培育1小时后，移除Fluo4-AM培育缓冲液，并用100μl洗涤缓冲液洗涤细胞2次。于每一孔中留下100μl洗涤缓冲液。将培养板放回37℃/5％CO2下的恒温箱中培育60分钟。 对FLIPR(荧光成像读板仪；Molecular Device)设定程序以于第30秒时加入50μl候选化合物，并且记录由候选化合物所引起的胞内钙浓度([Ca2+])瞬时改变，再历时150秒。使用FLIPR软件，使用总荧光改变数来确定激动剂活性。仪器软件使荧光读数标准化以得到零点处的等效初始读数。 尽管上文提供使用经稳定转染的细胞进行的有关激动剂活性的FLIPR分析，但所属领域技术人员将能够容易地对所述分析进行修改以便表征拮抗剂活性。所述所属领域技术人员也将容易地了解，可替代性地使用经瞬时转染的细胞。 实例9 受体结合分析 除本文所述的方法外，另一种用于评估候选化合物的方式是通过测定与烟酸受体的结合亲和性。这类检定一般需要烟酸受体的经放射性标记的配体。 可在筛选分析中使用经放射性标记的化合物(诸如经放射性标记的烟酸)以鉴别/评估化合物。一般地说，可评估新近合成或鉴别的化合物(即，候选化合物)降低经放射性标记的烟酸与烟酸受体结合的能力。因此，与经放射性标记的烟酸竞争结合烟酸受体的能力与候选化合物与烟酸受体的结合亲和性直接相关。 有关测定烟酸受体的受体结合的检定方案： A.烟酸受体制备 举例来说，可用如本文所述的烟酸受体瞬时或稳定转染HEK293细胞(人肾细胞，ATCC)。举例来说，可用10μg人类烟酸受体和60μl Lipofectamine(每15cm盘)瞬时转染293细胞，并且随着培养基的改变使其在所述盘中生长24小时(75％长满)。用每盘10ml Hepes-EDTA缓冲液(20mM Hepes+10mM EDTA(pH 7.4))移除细胞。随后在Beckman Coulter离心机中以17,000rpm(JA-25.50型转子)离心细胞20分钟。随后将离心块再悬浮于20mM Hepes+1mM EDTA(pH 7.4)中，并用50ml Dounce匀浆器进行均质化且再次离心。移除上清液后，将离心块储存于-80℃下直到用于结合检定。当用于检定时，于冰上解冻膜20分钟，且随后加入10mL培育缓冲液(20mM Hepes、1mMMgCl2、100mM NaCl，pH 7.4)。然后涡旋膜以再悬浮粗制膜离心块，并用BrinkmannPT-3100Polytron匀浆器以设置6均质化15秒。使用BRL Bradford蛋白检定测定膜蛋白的浓度。 B.结合检定 对于总结合而言，将50μl总体积的经适当稀释的膜(在含有50mM Tris HCl(pH7.4)、10mM MgCl2和1mM EDTA的检定缓冲液中进行稀释；5-50μg蛋白)加入96孔聚丙烯微量滴定盘中，随后加入100μl检定缓冲液和50μl经放射性标记的烟酸。对于非特异性结合而言，加入50μl而非100μl检定缓冲液，并且再加入50μl 10μM冷烟酸受体，随后加入50μl经放射性标记的烟酸。然后在室温下培育培养板60-120分钟。通过使检定板滤过具有Brandell 96孔板收集器的Microplate Devices GF/C Unifilter过滤板来终止结合反应，随后用含有0.9％NaCl的冷50mM Tris HCl(pH 7.4)洗涤。然后密封过滤板底部，将50μl Optiphase Supermix加入每一孔中，密封板顶部，且于Trilux MicroBeta闪烁计数器中对板进行计数。对于化合物竞争研究而言，将100μl经适当稀释的候选化合物加入适当孔中，而非加入100μl检定缓冲液，随后加入50μl经放射性标记的烟酸。 C.计算 起初检定1μM和0.1μM的候选化合物，且随后检定经选择使得中间剂量引起对经放射性标记的烟酸结合约50％抑制(即，IC50)的浓度范围内的候选化合物。在不存在候选化合物的情况下特异性结合(Bo)为总结合(BT)减去非特异性结合(NSB)的差，且类似地，特异性结合(在存在候选化合物的情况下)(B)为移位结合(displacementbinding)(BD)减去非特异性结合(NSB)的差。由抑制反应曲线(即B/Bo％与候选化合物浓度的logit-log图)确定IC50。 Ki是通过Cheng和Prustoff转换来计算： Ki＝IC50/(1+[L]/KD)， 其中[L]为检定中所使用的经放射性标记的烟酸的浓度，且KD为在相同结合条件下独立测定的经放射性标记的烟酸的解离常数。 申请者保留从本发明的任何实施例中排除任一种或一种以上化合物的权利。申请者还保留排除例如烟酸、烟酸类似物或烟酸受体激动剂的任何调配物或数量、任何烟酸受体部分激动剂或任何组合疗法的权利。 在本申请案中，引用多个公开案、专利和已公开的专利申请案。本申请案中所参考的这些公开案、专利和已公开的专利申请案的公开内容都是以全文引用的方式并入本发明中。公开案、专利或已公开的专利申请案的申请者在本文中所作的引用并不是所述公开案、专利或已公开的专利申请案的申请者对背景技术的认可。 所属领域技术人员的能力范围内对所公开的本发明进行的修改和扩展涵盖于上述公开内容和以下权利要求内。 <110>艾尼纳制药公司 <120>治疗脂质相关病症的方法和组合物 <130>108.wol <160>2 <170>PatentIn version 3.2 <210>1 <211>1092 <212>DNA <213>智人 atgaatcggc accatctgca ggatcacttt ctggaaatag acaagaagaa ctgctgtgtg 60 ttccgagatg acttcattgt caaggtgttg ccgccggtgt tggggctgga gtttatcttc 120 gggcttctgg gcaatggcct tgccctgtgg attttctgtt tccacctcaa gtcctggaaa 180 tccagccgga ttttcctgtt caacctggca gtggctgact ttctactgat catctgcctg 240 cccttcctga tggacaacta tgtgaggcgt tgggactgga agtttgggga catcccttgc 300 cggctgatgc tcttcatgtt ggctatgaac cgccagggca gcatcatctt cctcacggtg 360 gtggcggtag acaggtattt ccgggtggtc catccccacc acgccctgaa caagatctcc 420 aatcggacag cagccatcat ctcttgcctt ctgtggggca tcactattgg cctgacagtc 480 cacctcctga agaagaagat gccgatccag aatggcggtg caaatttgtg cagcagcttc 540 agcatctgcc ataccttcca gtggcacgaa gccatgttcc tcctggagtt cttcctgccc 600 ctgggcatca tcctgttctg ctcagccaga attatctgga gcctgcggca gagacaaatg 660 gaccggcatg ccaagatcaa gagagccatc accttcatca tggtggtggc catcgtcttt 720 gtcatctgct tccttcccag cgtggttgtg cggatccgca tcttctggct cctgcacact 780 tcgggcacgc agaattgtga agtgtaccgc tcggtggacc tggcgttctt tatcactctc 840 agcttcacct acatgaacag catgctggac cccgtggtgt actacttctc cagcccatcc 900 tttcccaact tcttctccac tttgatcaac cgctgcctcc agaggaagat gacaggtgag 960 ccagataata accgcagcac gagcgtcgag ctcacagggg accccaacaa aaccagaggc 1020 gctccagagg cgttaatggc caactccggt gagccatgga gcccctctta tctgggccca 1080 acctctcctt aa 1092 <210>2 <211>363 <212>PRT <213>智人 <400>2 Met Asn Arg His His Leu Gln Asp His Phe Leu Glu Ile Asp Lys Lys 1 5 10 15 Asn Cys Cys Val Phe Arg Asp Asp Phe Ile Val Lys Val Leu Pro Pro 20 25 30 Val Leu Gly Leu Glu Phe Ile Phe Gly Leu Leu Gly Asn Gly Leu Ala 35 40 45 Leu Trp Ile Phe Cys Phe His Leu Lys Ser Trp Lys Ser Ser Arg Ile 50 55 60 Phe Leu Phe Asn Leu Ala Val Ala Asp Phe Leu Leu Ile Ile Cys Leu 65 70 75 80 Pro Phe Leu Met Asp Asn Tyr Val Arg Arg Trp Asp Trp Lys Phe Gly 85 90 95 Asp Ile Pro Cys Arg Leu Met Leu Phe Met Leu Ala Met Asn Arg Gln 100 105 110 Gly Ser Ile Ile Phe Leu Thr Val Val Ala Val Asp Arg Tyr Phe Arg 115 120 125 Val Val His Pro His His Ala Leu Asn Lys Ile Ser Asn Arg Thr Ala 130 135 140 Ala Ile Ile Ser Cys Leu Leu Trp Gly Ile Thr Ile Gly Leu Thr Val 145 150 155 160 His Leu Leu Lys Lys Lys Met Pro Ile Gln Asn Gly Gly Ala Asn Leu 165 170 175 Cys Ser Ser Phe Ser Ile Cys His Thr Phe Gln Trp His Glu Ala Met 180 185 190 Phe Leu Leu Glu Phe Phe Leu Pro Leu Gly Ile Ile Leu Phe Cys Ser 195 200 205 Ala Arg Ile Ile Trp Ser Leu Arg Gln Arg Gln Met Asp Arg His Ala 210 215 220 Lys Ile Lys Arg Ala Ile Thr Phe Ile Met Val Val Ala Ile Val Phe 225 230 235 240 Val Ile Cys Phe Leu Pro Ser Val Val Val Arg Ile Arg Ile Phe Trp 245 250 255 Leu Leu His Thr Ser Gly Thr Gln Asn Cys Glu Val Tyr Arg Ser Val 260 265 270 Asp Leu Ala Phe Phe Ile Thr Leu Ser Phe Thr Tyr Met Asn Ser Met 275 280 285 Leu Asp Pro Val Val Tyr Tyr Phe Ser Ser Pro Ser Phe Pro Asn Phe 290 295 300 Phe Ser Thr Leu Ile Asn Arg Cys Leu Gln Arg Lys Met Thr Gly Glu 305 310 315 320 Pro Asp Asn Asn Arg Ser Thr Ser Val Glu Leu Thr Gly Asp Pro Asn 325 330 335 Lys Thr Arg Gly Ala Pro Glu Ala Leu Met Ala Asn Ser Gly Glu Pro 340 345 350 Trp Ser Pro Ser Tyr Leu Gly Pro Thr Ser Pro 355 360
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本发明提供一种鉴别与烟酸或烟酸类似物相比，具有减弱的潮红作用(flushing effect)的烟酸受体调节剂的方法，所述方法包含测定所述调节剂的MAP激酶活性，其中与由烟酸或烟酸类似物诱导的MAP激酶活性相比，由所述调节剂诱导的MAP激酶活性的降低表明：当与烟酸或烟酸类似物相比时，所述调节剂具有减弱的潮红作用。。
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