胶原和透明质酸的产生促进剂.pdf

本发明提供具有胶原产生促进作用或/和透明质酸产生促进作用的药剂(胶原/透明质酸产生促进剂)、以及具有胶原产生促进作用或/和透明质酸产生促进作用的皮肤外用剂或食品。作为胶原产生促进剂或/和透明质酸产生促进剂的有效成分，使用选自由花粉、花粉团以及它们的提取物组成的组中的至少一种。另外，作为皮肤外用剂、以及胶原和/或透明质酸产生促进用食品的有效成分，使用上述产生抑制剂。

权利要求书
1.  一种胶原或透明质酸中至少一个的产生促进剂，其特征在于，包含选自由花粉、花粉团以及它们的提取物组成的组中的至少一种。

2.  根据权利要求1所述的产生促进剂，其中，所述花粉或花粉团来自属于选自由十字花科、蓼科、茶科和半日花科组成的组中的至少一个科的植物。

3.  根据权利要求2所述的产生促进剂，其中，所述植物是选自由岩蔷薇、茶、油菜和荞麦组成的组中的至少一种。

4.  根据权利要求1所述的产生促进剂，其中，所述提取物是选自由岩蔷薇、茶、油菜和荞麦组成的组中的至少一种植物的花粉或花粉团的水、乙醇或它们的混合物的提取物。

5.  一种皮肤外用剂，其中混合有权利要求1～4中任一项所述的产生抑制剂。

6.  一种食品，其中混合有含有权利要求4中所述的提取物的产生抑制剂。

7.  根据权利要求6所述的食品，其为促进胶原或透明质酸中至少一个的产生的功能食品。

说明书胶原和透明质酸的产生促进剂
技术领域
本发明涉及胶原和/或透明质酸的产生促进剂。而且本发明涉及含有上述产生促进剂的皮肤外用剂和食品。
背景技术
由于柳衫、豚草等各种花粉成为花粉病的起因，目前认为花粉是变态反应原。而且，由于花粉刺激免疫系统，所以也在研究花粉对免疫系统的药理作用。
专利文献1中公开了将花粉通过乳酸菌、双歧杆菌或酵母等发酵而得到的培养物具有皮肤再生作用、抗皱作用等，将其混合到医药品、化妆品中。
专利文献2中公开了可以获得来自油菜花粉的油体。
专利文献3中公开了以牧草、玉米、榛树、黑麦、细柱柳、白杨、法国菊或松树的花粉为原料的花粉提取物软胶囊，该胶囊对前列腺炎、前列腺增生症有抑制效果。
专利文献1：日本特表2001-504510号公报
专利文献2：日本特表2002-503268号公报
专利文献3：日本特开平9-278665号公报
非专利文献1：《蜜蜂科学》7(1)：9-12 Honeybee Science(1986)
发明内容
本发明的目的在于，基于针对花粉、花粉团(花粉荷)或它们的提取物新发现的生理活性，提供它们的新用途。特别是，其目的在于，提供作为胶原或/和透明质酸的产生促进剂的用途、以及含有该产生促进剂的化妆材料或食品。
本发明人对于花粉、花粉团或它们的提取物的生理活性作用进行了研究，结果发现在岩蔷薇、茶、油菜以及荞麦的花粉团的提取物，特别是水或醇等极性溶剂的提取物中，具有强胶原产生促进作用或透明质酸产生促进作用。
本发明是以上述发现为基础而完成的，提供以下的胶原产生促进剂、透明质酸产生促进剂、皮肤外用剂及食品。
I.胶原或/和透明质酸的产生促进剂
(I-1)一种胶原或透明质酸中至少一个的产生促进剂，其特征在于，包含选自由花粉、花粉团和它们的提取物组成的组中的至少一种。
(I-2)根据(I-1)所述的产生促进剂，其中，上述花粉或花粉团来自属于选自由十字花科、蓼科、茶科和半日花科组成的组中的至少一个科的植物。
(I-3)根据(I-2)所述的产生促进剂，其中，上述植物是选自由岩蔷薇、茶、油菜和荞麦组成的组中的至少一种。
(I-4)根据(I-1)～(I-3)中任一项所述的产生促进剂，其中，上述提取物是选自由岩蔷薇、茶、油菜和荞麦组成的组中的至少一种植物的花粉或花粉团的水、乙醇或它们的混合物的提取物。
(I-5)一种胶原产生促进剂，其特征在于，包含选自由岩蔷薇、茶、和油菜组成的组中的至少一种植物的花粉或花粉团、或它们中任一种的提取物。
(I-6)一种透明质酸促进剂，其特征在于，包含选自由油菜和荞麦组成的组中的至少一种植物的花粉或花粉团、或它们中任一种的提取物。
II.皮肤外用剂
(II-1)一种皮肤外用剂，其中混合了上述(I-1)～(I-4)中任一项所述的产生抑制剂。
另外，该皮肤外用剂也可以如下所述。
(II-a)一种皮肤外用剂，其特征在于，包含选自由花粉、花粉团和它们的提取物组成的组中的至少一种。
(II-b)根据(II-a)所述的皮肤外用剂，其中，上述花粉或花粉团来自属于选自由十字花科、蓼科、茶科和半日花科组成的组中的至少一个科的植物。
(II-c)根据(II-b)所述的皮肤外用剂，其中，上述植物是选自由岩蔷薇、茶、油菜和荞麦组成的组中的至少一种。
(II-d)根据(II-a)～(II-c)中任一项所述的皮肤外用剂，其中，上述提取物是选自由岩蔷薇、茶、油菜和荞麦组成的组中的至少一种植物的花粉或花粉团的水、乙醇或它们的混合物的提取物。
III.食品
(III-1)一种食品，其中混合了含有上述(I-4)所述的提取物的产生抑制剂。
另外，该食品也可如下所述。
(III-a)一种食品，其特征在于，包含花粉或花粉团的提取物。
(III-b)根据(III-a)所述的食品，其中，上述花粉或花粉团来自属于选自由十字花科、蓼科、茶科和半日花科组成的组中的至少一个科的植物。
(III-c)根据(III-b)所述的食品，其中，上述植物是选自由岩蔷薇、茶、油菜和荞麦组成的组中的至少一种。
(III-d)根据(III-a)～(III-c)中任一项所述的食品，其中，上述提取物是选自由岩蔷薇、茶、油菜和荞麦组成的组中的至少一种植物的花粉或花粉团的水、乙醇或它们的混合物的提取物。
这些食品的任一种在专门用于促进胶原或透明质酸中的至少一种产生的方面，能够和通常的食品相区别。特别是含有油菜等属于十字花科的植物的花粉或花粉团的提取物的食品，在用于促进胶原和透明质酸两者的产生方面，能够和通常的食品相区别。
发明效果
如后述试验例所示，由于花粉、花粉团或它们的提取物增加胶原和透明质酸的产生，具有赋予肌肤张力与润泽、保湿、美化肌肤、抗老化(改善皱纹等)、美白(改善肌肤暗淡)等作用，可以明确得知其可以作为皮肤外用剂(特别是化妆材料)和食品的原料使用。特别是油菜花粉团的水提取物同时强力促进胶原和透明质酸的产生，因此作为皮肤外用剂(特别是化妆材料)的有效成分，或者是作为食品原料极为优良。
具体实施方式
(I)胶原或/和透明质酸的产生促进剂
本发明的胶原或/和透明质酸的产生促进剂的特征在于，以花粉、花粉团或它们的提取物作为有效成分。
其中，花粉团是蜜蜂用蜜固化花粉而得到的，也被称为花粉团子(花粉だんご)。该花粉团与蜂蜜一同储存于蜂窝中。此花粉团易于回收。
本发明中，可以使用花粉和花粉团中的任何一种，但由于上述方便得到的原因，优选使用花粉团。而且，花粉和花粉团不但可以各自单独使用，也可以混合两者使用。
作为本发明的花粉或/和花粉团(以下仅记为“花粉/花粉团”)的来源，优选植物的科名、属·种名、中文名(名称)如下表1～表3所示。
【表1】
科属·种中文名茜草科(Rubiaceae)Gardenia jasminoides栀子Coffea arabica L.C.benghalensis RoxbC.canephora Pierr ex FroehC.congensis FroehC.liberica Bull ex Hiem.C.stenophylla G.Don咖啡柳叶菜科(Oenotheraceae(Onagraceae))Oenothera biennis月见草Epilobium angustifolium L.柳兰十字花科(Cruciferae)Matthiola incana R.Br.紫罗兰Brassica campestris L.油菜Orychophragmus violaceus二月兰荨麻科(Uruticaceae)Urtica thunbergiana咬人荨麻五加科(Araliaceae)Panax Ginseng人参Fatsia japonica Decne.et Planch.八角金盘葫芦科(Cucurbitaceae)Cucurbita pepo西葫芦Cucumis sativus L.黄瓜Cucumis melo var.conomon菜瓜Citrullus lanatus(＝C.vulgaris)西瓜Momordica charantia苦瓜Sechim edule佛手瓜Lagenaria siceraria var.gourda葫芦Luffa aegyptiaca水瓜Lagenaria siceraria var.hispida瓠瓜漆树科(Anacardiaceae)Rhus succedanea L.木蜡树Mangifera indica L.芒果柿科(Ebenaceae)Diospyros kaki Thunb.柿Betula platyphylla var.japonica白桦菊科(Compositae)Cirsium蓟Cosmos bipinnatus Cav.波斯菊Taraxacum platycarpum Dahlst.蒲公英Farfugium japonicum Kitam.活血莲Helianthus annuus L.向日葵Carthamus tinctorius红花Centaurea cyanus矢车菊鼠李科(Rhamnaceae)Ziziphus jujube枣玄参科(Scrophulariaceae)Veronica persica Poir.波斯婆婆纳唇形科(Labiatae)Salvia splendensS.officinalisS.verbenacea鼠尾草Perilla frutescens紫苏Salvia officinalis凤梨鼠草Mentha x piperita薄荷Lavandula angustifolia Mill.薰衣草
【表2】
科属·种中文名唇形科(Labiatae)Rosmarinus officinalis迷迭香Thymus serpyllum百里香椴树科(Tiliceae)Tilia maximowicziana Shirasawa辽椴Tilia japonica Simk.菩提树Tilia miqueliana Maxim.南京椴忍冬科(Caprifoliaceae)Lonicera japonica金银花Weigela coraeensis Thunb.海仙花堇菜科(Violaceae)Viola mandshurica W.Becker堇菜楝科(Meliaceae)Melia azedarach楝树蓼科(Polygonaceae)Fagopyrum esculerrtum Moench荞麦杜鹃花科(Ericaceae)V.angustifolium Ait.V.corymbosum L.V.australe SmallV.ashei Reade蓝莓茶科(Theaceae)Camellia sasanqua Thunb.茶梅Camellia sinensis(L.)O.Kuntze茶Stewartia pseudo-camellia夏椿Camellia japonica L.山茶七叶树科(Hippocastanaceae)Aesculus turbinata Blume七叶树Aesculus hippocastanum欧洲七叶树蔷薇科(Rosaceae)Pruns armeniaca杏Fragaria ananassa Duch.草莓Prunus mume Sieb.Et Zucc.梅Prunus x yedoensis樱Crataegus cuneata山楂Pyrus pyrifolia var.culta Rehder日本梨Pyrus ussuriensis Mayim var.sinensis Kikuchi中国梨Pyrus communis L.var.sativa DC.西洋梨Prunus zippeliana Miq.大叶樱Eriobotrya japonica Lindl.蓖麻Rubus fruticosus黑莓Prunus persica Batsch桃Rubus idaeus树莓Malus pumila var.domestica苹果半日花科(Cistaceae)Cistus X purpureus(C.creticus XC.ladanifer)岩蔷薇牻牛儿苗科(Geraniaceae)Geranium nepalense Sweet尼泊尔老鹳草葡萄科(Vitaceae)Vitis spp.葡萄Cayratia japonica(Thunb.)Gagnep.乌蔹梅桃金娘科(Myrtaceae)Leptospermum scoparium松红梅Eucalyptus桉Eucalyptus marginata赤桉Eucalyptus camaldulensis美国红桉木壳斗科(Fagaceae)Castanea crenata Sieb.Et Zucc.日本栗猕猴桃科(Actinidiaceae)Actinidia chinensis Planch.猕猴桃
【表3】
 科属·种中文名豆科(Leguminosae)Acacia赤槐Medicago sativa L.紫花苜蓿Pisum sativum豌豆Pueraria lobata(Willd.)Ohwi葛Trifolium pratense L.T.repens L.T.hybridum L.三叶草Robinia pseudo-Acacia L.刺槐Astragalus sinicus L.紫云英芸香科(Rutaceae)Citrus sinensis Osbeck甜橙Evodia danielli Hemsl.臭檀Zanthoxylum ailanthoides食茱萸Phellodendron amurense Ruprecht黄檗Cirus aurantium L.酸橙Citrus unshiu Marc.温州密柑Citrus limon Burm.f.柠檬Citrus paradisi Macf.葡萄柚Citrus kinokuni Hort.ex Tanaka金钱桔Citrus tachibana Tanaka立花桔Poncirus trifoliata Raf.枸桔千屈莱科(Lythraceae)Lagerstroemia indica L.紫薇无患子科(Sapindaceae)Sapindus mukorossi Gaertn.无患子Litchi chinensis荔枝Euphonia longana Lam.龙眼水犀科(Oleaceae)Ligustrum japonicum Thunb.日本女贞木兰科(Magnoliaceae)Liriodendron tulipifera L.鹅掌楸冬青科(Aquifoliaceae)Ilex rotunda Thunb.铁冬青Ilex pedunculosa具柄冬青杨柳科(Salicaceae)Salix gracilistyla银芽柳Salix柳Salix bakko山猫柳龙胆科(Gentianaceae)Swertia japonica日本獐芽菜
作为本发明中所使用的花粉/花粉团由来的优选植物，可以列举十字花科、蓼科、茶科和半日花科。具体来说，作为十字花科植物，优选列举紫罗兰、油菜和二月兰，特别优选油菜。作为蓼科植物，优选列举荞麦。作为茶科植物，优选列举茶梅、茶、夏椿和山茶，特别优选茶。作为半日花科植物，优选列举岩蔷薇。
而且，作为胶原产生促进剂的有效成分，可以优选列举半日花科植物岩蔷薇、茶科植物茶和十字花科植物油菜。另外，作为透明质酸产生促进剂的有效成分，可以优选列举十字花科植物油菜和蓼科植物荞麦。
花粉/花粉团能够以其原形态使用，也能够以适当的溶剂制备成提取物的形态使用。
其中，花粉/花粉团的提取可以通过水、含水溶剂、有机溶剂等溶剂进行。具体来说，可以列举水、低级醇(甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇等)、酮类(丙酮、甲乙酮、甲基丁基酮等)、酯类(乙酸甲酯、乙酸乙酯等)、醚类(二甲基醚、二异丙基醚等)、芳香烃(甲苯、二甲苯等)、卤代烃(二氯甲烷、氯仿等)、二醇类(乙二醇、丙二醇)、二醇醚类(甲基溶纤剂、1，2-二甲氧基乙烷等)、甘油、四氢呋喃、乙腈、乙酸、丙酸、乙酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜。另外，提取溶剂可以使用这些中的一种，也可以使用2种以上任意组合的混合液。混合液可优选列举含水有机溶剂、特别是含水乙醇、含水甲醇、以及含水丙醇等的含水醇。作为提取溶剂，优选水、乙醇、和它们的混合液(含水乙醇)。
提取可以容易地如下进行：将花粉/花粉团加入溶剂中，在0℃到溶剂的沸腾温度、通常为100℃以下的温度下，经约30分钟到约24小时的浸渍提取，去除不溶物。
本发明中的上述花粉/花粉团的提取液，可以直接作为胶原产生促进剂或/和透明质酸产生促进剂使用，但根据需要，也可以使用浓缩提取液所得液(浓缩液)、或者提取液的冷冻干燥物、喷雾干燥物等的干燥品。
为了除去颜色、味道或臭味，根据需要，也可以对上述得到的提取物进行脱色、掩蔽、或除臭等处理。作为这样的处理，可以列举利用活性碳等的吸附处理、利用柱色谱以及离子交换色谱等的纯化处理。
在各种植物(表1～3)的花粉团的提取物中，半日花科植物岩蔷薇的花粉团的提取物(优选水或乙醇提取物)、茶科植物茶的花粉团的提取物(优选水或乙醇提取物)、以及十字花科植物油菜的花粉团的提取物(优选水提取物)具有优良的胶原产生促进作用，可以适合作为胶原产生促进剂的有效成分使用。
另外，在各种植物(表1～3)的花粉团的提取物中，十字花科植物油菜的花粉团提取物(优选水提取物)、和蓼科植物荞麦的花粉团的提取物(优选乙醇提取物)具有良好的透明质酸产生促进作用，可以适合作为透明质酸产生促进剂的有效成分使用。
在本发明的胶原产生促进剂或/和透明质酸产生促进剂中，花粉/花粉团或它们的提取物的混合量，以干燥物计，可以列举0.0001～100重量％、优选0.001～50重量％、更优选0.01～25重量％。
本发明的胶原产生促进剂或/和透明质酸产生促进剂，可以优选作为化妆品的添加剂，或者作为具有胶原或/和透明质酸产生促进作用的美容用或能减轻关节炎、牙龈炎、风湿症等症状的医疗用或功能性食品使用。
作为本发明对象的透明质酸是由存在于真皮成纤维细胞的膜中的透明质酸合成酶(HAS)合成的酸性粘多糖(Y.Sugiyama等J.Invest.Dermatol.，110，116(1998))。透明质酸有助于细胞间隙的水分维持、基于组织内胶状基质形成的细胞的维持、组织的润滑性和柔软性(BIOINDUSTRY，Vol 8，346(1991))。公开了透明质酸随年龄增加而减少(K.Matsuoka等Aging，1，47(1989))，或变性(L.A.M.Meyer等J.Invest.Dermatol.，102，385(1994))，这样的变化是引起皮肤干燥、皱纹、松弛等的一个原因。
另外，作为本发明对象的胶原是构成真皮基质的重要成分。胶原分子由成纤维细胞合成并被分泌到细胞外后，规则交联，维持结缔组织的硬度，赋予皮肤张力和弹性。公开了皮肤由于长年暴露于紫外线中，真皮上层的胶原减少(L.H.Kligman等J.Invest.Dermatol.，84，272(1985))。另外，也公开了由于紫外线暴露，真皮的胶原纤维变性(Y.Nishimori等Abstract，20th IFSCC Congress Cannus，1，117(1998))。
(2)皮肤外用剂、优选化妆材料
含有本发明的胶原产生促进剂或/和透明质酸产生促进剂的皮肤外用剂，基于该胶原产生促进剂的胶原产生促进作用或/和透明质酸产生促进剂的透明质酸促进作用，分别对人的皮肤有良好的胶原产生促进作用或/和透明质酸产生促进作用，因而能赋予肌肤张力和润泽、防治肌肤老化、消除或减轻皱纹、使肌肤水嫩、使斑、暗淡不明显、具有美化皮肤的效果、能维持健康的肌肤。因此，该皮肤外用剂，特别是作为美白化妆材料、抗老化化妆材料、美化肌肤化妆材料、或皮肤护理化妆材料等的化妆材料有用。故而，本发明所说的皮肤外用剂中，包含作为这些化妆材料的用途。
该皮肤外用剂中的花粉/花粉团或它们的提取物的混合量，在皮肤外用剂总量中，以干燥物计为0.0005～20重量％，优选0.001～10重量％。如果低于0.0005重量％很多，有本发明的效果不能充分发挥的倾向，如果超过20重量％很多，则有制剂化变难的倾向。另外，特别优选花粉/花粉团或它们的提取物以0.01～约1重量％的浓度进行配合并应用于皮肤。
本发明的皮肤外用剂中，除了花粉/花粉团或它们的提取物，可以根据需要适当混合通常用于皮肤外用剂，特别是化妆品的成分，例如，美白剂、保湿剂、防氧化剂、油性成分、紫外线吸收剂、表面活性剂、增稠剂、醇类、粉末成分、色素、水性成分、水、各种皮肤营养剂等。
本发明的皮肤外用剂的剂型，可以采用水溶液型、增溶型、乳化型、粉末型、油液型、凝胶型、软膏型、气雾剂型、水-油2相型、以及水-油-粉末3相型等广泛的剂型。例如在皮肤外用剂为基础化妆品的情况下，作为其形态，可以列举洗面奶、化妆水、乳液、膏剂、凝胶、精油、美容液、剥撕式面膜(パツク)、面膜等。另外，皮肤外用剂为脸部化妆用化妆品(メ一クアツプ)也可，其形态可以列举粉底、口红、腮红、眼影、眼线膏、睫毛膏等。其它形态可以列举洗面奶、按摩用剂、洁肤用剂、胡后水、剃须水、剃须膏、沐浴露、肥皂、洗发剂、润发素、护发素、定型膏、生发油、毛发生长剂、止汗剂、卫生用品等。
(3)食品
本发明的食品的特征为，混合(1)中所记载的具有胶原产生促进作用或/和透明质酸产生促进作用的花粉/花粉团的提取物作为胶原产生促进剂或/和透明质酸产生促进剂。因此，本发明的食物中，基于它们的作用，包含了以美白、美化肌肤、保湿、抗老化等为目的的美容用饮食品、或以减轻关节、牙龈等的由于胶原/透明质酸减少而导致的功能低下疾病(例如关节炎、牙龈炎、龈齿溃疡、风湿症等)的症状为目的而使用的食品。
该食品中，具体来说，可以列举饮剂类(drink)、饮料类(清凉饮料、乳饮料、乳酸菌饮料、酸奶饮料、碳酸饮料、酒类等)、涂抹食品、酱、蛋糕、日式糕点、冰淇淋、罐头食品、方便食品、瓶装及罐装食品、胶状食品、调味料、肉汤、蜂产品(蜂蜜、蜂王浆、蜂胶等)、乳制品、加工水果、加工蔬菜、谷类加工食品、腌渍品、腌渍品原料、鱼肉制品、畜肉制品、珍味、干菜、预加工食品、冷冻食品、油脂食品等。另外，本发明的食品也可以为，添加、混合作为胶原产生促进剂或/和透明质酸产生促进剂的(1)中所述花粉/花粉团的提取物后所能制得的，所谓健康食品、功能性食品、营养辅助食品、添加剂、特定保健食品、患者食品和患者组合食品(厚生劳动省，一种特殊用途的食品)或老年人食品(厚生劳动省，一种特殊用途的食品)的形式，这种情况下，可以是未包衣片、薄膜衣片、糖衣片、颗粒、粉末、片剂、胶囊(硬胶囊和软胶囊均包括)、咀嚼型、糖浆型、饮剂型等。添加和混合本发明所涉及的花粉/花粉团的提取物作为胶原产生促进剂或/和透明质酸产生促进剂的食品的制备能够使用公知的方法进行。
实施例
下面，利用实施例、试验例以及配方例对本发明作详细说明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1：花粉团的乙醇提取物的制备
花粉团(岩蔷薇、茶、油菜、荞麦)各10克中加入30ml乙醇，乳钵研磨，移入其他容器，并在室温振荡混合16～20小时。转速为1500rpm下离心分离5分钟，得到上清液和沉淀。于所得沉淀物中加入2倍量的乙醇，再次用乳钵研磨，移入其他容器，并在室温振荡混合2小时。转速为1500rpm下离心分离5分钟，得到上清液。将此与之前得到的上清液合并，使用旋转蒸发机(EYELA制)浓缩，得到各植物(岩蔷薇、茶、油菜、荞麦)的花粉团的乙醇提取物。
实施例2：花粉团的水提取物的制备
向实施例1的乙醇提取所得到的最终沉淀物中加入3倍量的水，研碎，并在室温下振荡16～20小时。然后，在转速为2000rpm下离心分离10分钟，并冷冻干燥所得上清液。将其作为各植物(岩蔷薇、茶、油菜、荞麦)的花粉团的水提取物，用于下述试验例。
试验例
对于实施例1和2所得到的提取物中，实验中得到充分量的提取物的岩蔷薇花粉团的水提取物以及乙醇提取物、茶花粉团的水提取物和乙醇提取物、以及油菜花粉团的水提取物，进行了胶原产生促进试验，另外，对于油菜花粉团的水提取物和荞麦花粉团的乙醇提取物进行透明质酸产生促进试验。
试验例1胶原产生促进试验
在含有10％FCS(胎牛血清)的RPMI-1640培养基中，调节人正常成纤维细胞株化系(樹立株)WI-38细胞为1×105细胞/ml(细胞悬浮液)，每孔中加入100μl细胞悬浮液。然后，将此板于37℃、5％CO2-95％空气中培养过夜，用RPMI-1640培养基150μL与PBS(-)40μL的混合物进行培养基交换，在各孔中添加实施例1和2制备的花粉团提取物，在37℃下在5％CO2-95％空气中培养48小时。然后以1500rpm离心分离所得培养物，得到上清液。
(1)测定用样品的制备
(1-1)培养上清液中的胶原的胃蛋白酶处理
(i)溶解胃蛋白酶(MIKUNI化学工业(株)制)于150mM的醋酸水溶液(关东化学(株)制)中，使其浓度为0.6mg/mL。
(ii)向0.2mL培养细胞上清液中加入0.1mL上述胃蛋白酶溶液，利用颠倒混合充分搅拌。
(iii)4℃下放置一夜。
(iv)加入含有0.1mL的200mM Tris和150mM NaCl的水溶液进行中和，颠倒混合充分搅拌，将所得液体作为测定用胶原液。
(1-2)作为细胞外基质沉淀的胶原的胃蛋白酶处理
(i)溶解胃蛋白酶(MIKUNI化学工业(株)制)于50mM的醋酸水溶液(关东化学(株)制)中，使其浓度为0.1mg/mL。
(ii)从培养皿中除去培养液后，用微细胞刮器剥下细胞，向培养皿中加入与培养液等量的胃蛋白酶溶液。
(iii)4℃下振荡一夜。
(iv)10000×g下离心分离10分钟，回收上清液。
(v)加入所加胃蛋白酶溶液的3分之1量的含有200mM Tris和150mM NaCl的水溶液，利用颠倒混合充分搅拌，将所得液体作为测定用胶原液。
(1-3)测定用样品的制备
混合由上述(1-1)和(1-2)制备的测定用胶原液得到测定样品。
(2)测定
以由上述方法制得的测定样品作为对象，使用人胶原型1ELISA试剂盒(ACBio公司制)测定胶原产生促进率。测定方法根据试剂盒的使用说明书。结果如表4所示。
另外，把加入10μg水代替花粉团的各提取物的情况下的胶原量设定为100％，计算得到胶原产生促进率(增加率)。
表4
胶原产生促进试验结果
         样品样品(μg/ml)胶原浓度(μg/ml)增加率(％)岩蔷薇花粉团水提取物    100    0.301    461岩蔷薇花粉团乙醇提取物    100    0.413    632茶花粉团提取物    100    0.444    680茶花粉团乙醇提取物    200    1.065    1630油菜花粉水提取物    100    0.927    1419
试验例2透明质酸产生促进试验
在含有10％FCS(胎牛血清)的RPMI-1640培养基中，调节人正常成纤维细胞株化系(樹立株)WI-38细胞为1×105细胞/ml(细胞悬浮液)，每孔中加入100μl细胞悬浮液。然后，将此板于37℃、5％CO2-95％空气中培养过夜，用RPMI-1640培养基150μL与PBS(-)40μL的混合物进行培养基交换，在各孔中添加实施例1和2制备的花粉团提取物，在37℃下在5％CO2-95％空气中培养48小时。然后，在1500rpm下离心分离所得培养物15分钟，得到上清液。使用市售透明质酸测定试剂盒(Hyaluronan Assay Kit：生化学工业(株)制)测定所得上清液中的透明质酸量。
把加入10μg水代替花粉团的各提取物的情况下的透明质酸量设定为100％，计算得到透明质酸产生促进率(增加率)。结果如表5所示。
表5
透明质酸产生促进试验结果
样品样品(μg/ml)胶原浓度(μg/ml)增加率(％)油菜花粉团水提取物1000.361131荞麦花粉团乙醇提取物1000.392143
由上述结果可知，作为本发明对象的花粉团提取物，具有良好的胶原产生促进作用或透明质酸产生促进作用。特别是明确知道了，油菜花粉团水提取物的胶原产生促进作用和透明质酸产生促进作用均很强，作为具有美化肌肤作用、抗老化作用、美白作用、保湿作用等各种作用的化妆品材料、以及食品材料有用。
配方例1：化妆水
使用如下表6所示各成分，依常法制造化妆水。
表6
    成分混合率(重量％)  乙醇    5.0  甘油    4.0  1，3-丁二醇    4.0  油菜花粉团水提取物    0.5  柠檬酸    适量  柠檬酸钠    适量  纯化水    残余
配方例2：美容液
使用如下表7所示各成分，依常法制造美容液。
表7
         成分混合率(重量％)  黄原胶    0.4  羟乙基纤维素    0.1  羧基乙烯基聚合物    0.1  1，3-丁二醇    5.0  氢氧化钾    2.5  乙醇    3.0  油菜花粉团水提取物    1.0  纯化水    残余
配方例3：乳液
使用如下表8所示各成分，依常法制造乳液。
表8
        成分混合率(重量％)  角鲨烷    12.0  羧基乙烯基聚合物    0.1  黄原胶    0.2  三乙醇胺    0.1  1，3-丁二醇    5.0  油菜花粉团水提取物    1.0  纯化水    残余