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1、10申请公布号CN104220598A43申请公布日20141217CN104220598A21申请号201380018264322申请日20130329201207811420120329JPC12N15/09200601A61K31/7088200601A61K48/00200601A61P27/02200601A61P43/00200601C12N15/11320060171申请人国立大学法人九州大学地址日本福冈县申请人AQUA疗法股份有限公司72发明人吉田茂生滨崎智洋石川桂二郎水谷隆之石桥达朗大木忠明中间崇仁74专利代理机构北京林达刘知识产权代理事务所普通合伙11277代理人刘新宇李茂。
2、家54发明名称骨膜素基因的表达抑制核酸分子、骨膜素基因的表达抑制方法及其用途57摘要本发明提供抑制骨膜素基因的表达的新分子。骨膜素基因的表达抑制核酸分子的特征在于，包含由序列号119中的任一个碱基序列构成的核苷酸作为骨膜素基因的表达抑制序列。利用本发明的表达抑制核酸分子，能够抑制骨膜素基因的表达，因此能够用于例如起因于骨膜素基因的表达的眼病，具体来说能够用于增殖性糖尿病视网膜病变或黄斑变性等的治疗。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014092986PCT国际申请的申请数据PCT/JP2013/0594942013032987PCT国际申请的公布数据WO2013/147140JA。
3、2013100351INTCL权利要求书4页说明书42页序列表34页附图8页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书4页说明书42页序列表34页附图8页10申请公布号CN104220598ACN104220598A1/4页21一种骨膜素基因的表达抑制核酸分子，其特征在于，包含下述AS1、AS2或AS3的核苷酸作为骨膜素基因的表达抑制序列，AS1由序列号119中的任一个碱基序列构成的核苷酸；AS2由所述AS1的碱基序列中缺失、置换和/或添加了一个或多个碱基的碱基序列构成的、具有骨膜素基因的表达抑制功能的核苷酸；AS3由与所述AS1的碱基序列具有90以上的同源性的碱基序列构成的、。
4、具有骨膜素基因的表达抑制功能的核苷酸。2根据权利要求1所述的表达抑制核酸分子，其特征在于，所述表达抑制核酸分子为单链核酸分子，从5侧至3侧依次包含5侧区域XC、内部区域Z和3侧区域YC，所述内部区域Z由内部5侧区域X和内部3侧区域Y连结而构成，所述5侧区域XC与所述内部5侧区域X互补，所述3侧区域YC与所述内部3侧区域Y互补，所述内部区域Z包含所述表达抑制序列。3根据权利要求2所述的表达抑制核酸分子，其中，在所述5侧区域XC与所述内部5侧区域X之间具有连接子区域LX，介由所述连接子区域LX连结所述5侧区域XC和所述内部5侧区域X，在所述3侧区域YC和所述内部3侧区域Y之间具有连接子区域LY，介。
5、由所述连接子区域LY连结所述3侧区域YC和所述内部3侧区域Y。4根据权利要求3所述的表达抑制核酸分子，其中，所述连接子区域LX和所述连接子区域LY由核苷酸残基构成。5根据权利要求3或4所述的表达抑制核酸分子，其中，所述连接子区域LX和所述连接子区域LY由非核苷酸残基构成。6根据权利要求5所述的表达抑制核酸分子，其中，所述非核苷酸残基包含吡咯烷骨架和哌啶骨架中的至少一种。7根据权利要求5或6所述的表达抑制核酸分子，其中，所述连接子区域LX和所述连接子区域LY由下述式I表示，所述式中，X1和X2各自独立地为H2、O、S或NH；Y1和Y2各自独立地为单键、CH2、NH、O或S；R3为与环A上的C3、。
6、C4、C5或C6键合的氢原子或取代基；L1为由N个原子构成的亚烷基链，此处，亚烷基碳原子上的氢原子任选被OH、ORA、NH2、NHRA、NRARB、SH、或者SRA取代或不被取代，或者，权利要求书CN104220598A2/4页3L1为所述亚烷基链的一个以上碳原子被氧原子取代的聚醚链，其中，Y1为NH、O或S的情况下，与Y1键合的L1的原子为碳，与OR1键合的L1的原子为碳，氧原子彼此不相邻；L2为由M个原子构成的亚烷基链，此处，亚烷基碳原子上的氢原子任选被OH、ORC、NH2、NHRC、NRCRD、SH或者SRC取代或者不被取代，或者，L2为所述亚烷基链的一个以上碳原子被氧原子取代的聚醚链，。
7、其中，Y2为NH、O或S的情况下，与Y2键合的L2的原子为碳，与OR2键合的L2的原子为碳，氧原子彼此不相邻；RA、RB、RC和RD各自独立地为取代基或保护基；L为1或2；M为030的范围的整数；N为030的范围的整数；环A中，所述环A上的C2以外的1个碳原子任选被氮、氧或硫取代，所述环A内任选包含碳碳双键或碳氮双键，所述区域XC和所述区域X分别介由OR1或OR2与所述连接子区域LX结合，此处，R1和R2任选存在或不存在，在存在的情况下，R1和R2各自独立地为核苷酸残基或所述结构I。8根据权利要求27的任一项所述的表达抑制核酸分子，其中，所述内部区域Z的碱基数Z、所述内部5侧区域X的碱基数X、。
8、所述内部3侧区域Y的碱基数Y、所述5侧区域XC的碱基数XC和所述3侧区域YC的碱基数YC满足下述式1和2的条件，ZXY1ZXCYC2。9根据权利要求8所述的表达抑制核酸分子，其中，所述内部5侧区域X的碱基数X与所述5侧区域XC的碱基数XC之差、所述内部3侧区域Y的碱基数Y与所述3侧区域YC的碱基数YC之差满足下述条件，A满足下述式11和12的条件，XXC1、2或311YYC012B满足下述式13和14的条件，XXC013YYC1、2或314C满足下述式15和16的条件，XXC1、2或315YYC1、2或316D满足下述式17和18的条件，XXC017YYC018。10根据权利要求19的任一项所。
9、述的表达抑制核酸分子，其中，所述表达抑制序列权利要求书CN104220598A3/4页4的长度为1832碱基长。11根据权利要求19的任一项所述的表达抑制核酸分子，其中，所述表达抑制核酸分子的序列为选自由序列号8397组成的组中的至少一个碱基序列。12根据权利要求1所述的表达抑制核酸分子，其中，所述表达抑制序列进一步具有突出序列，在所述核苷酸的3端附加有所述突出序列。13根据权利要求1或12所述的表达抑制核酸分子，其中，所述表达抑制序列为包含所述AS1的核苷酸的、序列号2038中的任一个碱基序列构成的核苷酸，其中，N为正整数。14根据权利要求1、12和13的任一项所述的表达抑制核酸分子，其中，。
10、所述表达抑制序列的长度为1832碱基长。15根据权利要求1和1214的任一项所述的表达抑制核酸分子，其进一步具有与所述表达抑制序列退火的互补序列，所述互补序列包含与所述表达抑制序列中的所述AS1、AS2或AS3的核苷酸互补的核苷酸。16根据权利要求15所述的表达抑制核酸分子，其中，所述互补序列中的所述核苷酸为下述S1、S2或S3的核苷酸，S1由与所述AS1的碱基序列互补的碱基序列构成的核苷酸；S2由与所述AS2的碱基序列互补的碱基序列构成的核苷酸；S3由与所述AS3的碱基序列互补的碱基序列构成的核苷酸。17根据权利要求16所述的表达抑制核酸分子，其中，所述S1的核苷酸为由序列号3957中的任一。
11、个碱基序列构成的核苷酸。18根据权利要求1517的任一项所述的表达抑制核酸分子，其中，所述互补序列进一步具有突出序列，在所述核苷酸的5端附加有所述突出序列。19根据权利要求1518的任一项所述的表达抑制核酸分子，其中，所述互补序列为包含所述S1的核苷酸的、序列号5876中的任一个碱基序列构成的核苷酸，其中，N为正整数。20根据权利要求1219的任一项所述的表达抑制核酸分子，其中，所述突出序列为13碱基长。21根据权利要求1220的任一项所述的表达抑制核酸分子，其中，所述表达抑制核酸分子为由两条单链构成的双链核酸分子，其反义链具有所述表达抑制序列，其有义链具有所述互补序列。22一种组合物，其特征。
12、在于，其包含权利要求121的任一项所述的表达抑制核酸分子。23一种眼病用药物，其特征在于，其包含权利要求121的任一项所述的表达抑制核酸分子。24根据权利要求23所述的眼病用药物，其中，所述眼病为选自由视网膜病变、黄斑变性、翼状胬肉、结膜炎、眼内新生血管和眼的纤维瘢痕组成的组中的至少1种疾病。权利要求书CN104220598A4/4页525根据权利要求24所述的眼病用药物，其中，所述视网膜病变为增殖型糖尿病视网膜病变或增殖性玻璃体视网膜病变。26一种抑制方法，其特征在于，其为抑制骨膜素基因的表达的方法，使用权利要求121的任一项所述的表达抑制核酸分子。27根据权利要求26所述的抑制方法，其中，。
13、所述方法包括将所述表达抑制核酸分子投与细胞、组织或器官的步骤。28根据权利要求26或27所述的抑制方法，其中，在体内或体外投与所述表达抑制核酸分子。29一种眼病的治疗方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求121的任一项所述的表达抑制核酸分子投与患者的步骤。30根据权利要求29所述的治疗方法，其中，所述眼病为选自由视网膜病变、黄斑变性、翼状胬肉、结膜炎、眼内新生血管和眼的纤维瘢痕组成的组的至少1种疾病。31根据权利要求30所述的治疗方法，其中，所述视网膜病变为增殖型糖尿病视网膜病变或增殖性玻璃体视网膜病变。32根据权利要求121的任一项所述的表达抑制核酸分子，其用于眼病的治疗。33根据权利要求。
14、32所述的表达抑制核酸分子，其中，所述眼病为选自由视网膜病变、黄斑变性、翼状胬肉、结膜炎、眼内新生血管和眼的纤维瘢痕组成的组的至少1种疾病。34根据权利要求33所述的表达抑制核酸分子，其中，所述视网膜病变为增殖型糖尿病视网膜病变或增殖性玻璃体视网膜病变。权利要求书CN104220598A1/42页6骨膜素基因的表达抑制核酸分子、骨膜素基因的表达抑制方法及其用途技术领域0001本发明涉及成为眼病的原因的骨膜素PERIOSTIN基因的表达抑制核酸分子、骨膜素基因的表达抑制方法及其用途。背景技术0002近年来，伴随着糖尿病患者的增加，作为并发症之一的糖尿病视网膜病变DIABETICRETINOPAT。
15、HYDR患者正在增加。糖尿病视网膜病变根据疾病分期而分类为单纯糖尿病视网膜病变、前增殖型糖尿病视网膜病变和增殖型糖尿病视网膜病变PROLIFERATIVEDIABETICRETINOPATHYPDR。其中，增殖型糖尿病视网膜病变不仅存在视力降低，而且有可能会失明。0003另外，作为眼病，老年性黄斑变性AGERELATEDMACULARDEGENERATIONAMD等黄斑变性也同样地成为问题。黄斑变性是因年龄增长或压力等原因而出现黄斑变性、视力降低的疾病。该疾病在严重时也有可能导致失明。0004这些眼病的起因是，脉络膜视网膜陷于缺氧状态等，为了补充氧，在视网膜上下形成新生血管。由于新生血管脆弱，。
16、因而容易破裂出血，所出的血液会遮蔽光程，因而视力降低。另外，所述新生血管发展为被称作增殖组织的纤维膜，由于该原因，还有可能产生牵引性视网膜脱离。并且，若该状态持续、反复而严重化，则有可能导致失明专利文献1。因此，关于这些眼病，要求提供能够成为治疗药的新的候补物质。0005有文献报道，这些眼病与骨膜素基因的表达有关非专利文献1。0006现有技术文献0007专利文献0008专利文献1日本特开2011220969号公报0009非专利文献0010非专利文献1SYOSHIDAETAL,INVESTIGATIVEOPHTHALMOLOGYVISUALSCIENCE,2011,VOL52,NO8发明内容00。
17、11发明要解决的问题0012因此，本发明的目的在于提供可抑制骨膜素基因的表达的新分子、以及提供使用了该分子的表达抑制方法和眼病的治疗方法等用途。0013用于解决问题的方案0014为了达到上述目的，本发明的骨膜素基因的表达抑制核酸分子的特征在于，包含下述AS1、AS2或AS3的核苷酸作为骨膜素基因的表达抑制序列。0015AS1由序列号119中的任一个碱基序列构成的核苷酸；0016AS2由所述AS1的碱基序列中缺失、置换和/或添加了一个或多个碱基的碱基说明书CN104220598A2/42页7序列构成的、具有骨膜素基因的表达抑制功能的核苷酸；0017AS3由与所述AS1的碱基序列具有90以上的同源。
18、性的碱基序列构成的、具有骨膜素基因的表达抑制功能的核苷酸。0018本发明的组合物的特征在于，其包含本发明的所述表达抑制核酸分子。0019本发明的眼病用药物的特征在于，其包含本发明的所述表达抑制核酸分子。0020本发明的抑制方法的特征在于，其为骨膜素基因的表达抑制方法，其使用本发明的所述表达抑制核酸分子。0021本发明的眼病的治疗方法的特征在于，其包括将本发明的所述表达抑制核酸分子投与患者的步骤。0022发明的效果0023利用本发明的表达抑制核酸分子，能够进行骨膜素基因的表达抑制。因此，本发明对于骨膜素基因的表达成为原因的眼病、例如增殖型糖尿病视网膜病变或黄斑变性等各种眼病的治疗有效。附图说明0。
19、024图1是示出本发明的核酸分子的一例的示意图。0025图2是示出本发明的核酸分子的另一例的示意图。0026图3是示出本发明的核酸分子的另一例的示意图。0027图4是示出本发明的核酸分子的另一例的示意图。0028图5是示出本发明的实施例1中的体外的骨膜素基因表达量的相对值的图。0029图6是本发明的实施例2的结果，A是示出小鼠的眼的纤维性增殖组织的体积的图，B是示出小鼠的眼的新生血管的体积的图。0030图7是示出本发明的实施例3中的体外的骨膜素基因表达量的相对值的图。0031图8是示出本发明的实施例4中的体外的骨膜素基因表达量的相对值的图。0032图9是示出本发明的实施例4中的体外的骨膜素基因。
20、表达量的相对值的图。0033图10是示出本发明的实施例5中的体外的骨膜素基因表达量的相对值的图。具体实施方式0034只要没有特别提及，则本说明书中使用的用语能够以该技术领域中通常所用的含义使用。00350036如前所述，本发明的表达抑制核酸分子下文中也称为“本发明的核酸分子”的特征在于，其为表达抑制用的核酸分子，包括下述AS1、AS2或AS3的核苷酸作为骨膜素基因的表达抑制序列。0037AS1由序列号119中的任一个碱基序列构成的核苷酸；0038AS2由所述AS1的碱基序列中缺失、置换和/或添加了一个或多个碱基的碱基序列构成的、具有骨膜素基因的表达抑制功能的核苷酸；0039AS3由与所述AS1。
21、的碱基序列具有90以上的同源性的碱基序列构成的、具有骨膜素基因的表达抑制功能的核苷酸。说明书CN104220598A3/42页80040下文中，将所述AS1、AS2或AS3的核苷酸称为AS核苷酸，分别称为AS1核苷酸、AS2核苷酸、AS3核苷酸。0041本发明中，对骨膜素基因的表达的抑制没有特别限制，例如，可以为基因转录自身的抑制，也可以为通过分解基因的转录产物而进行的抑制。另外，骨膜素基因的表达的抑制例如可以为具有本来的功能的骨膜素蛋白质的表达的抑制，在蛋白质被表达的情况下，所述蛋白质例如可以为所述功能被抑制的蛋白质，也可以为所述功能缺失的蛋白质。0042所述表达抑制序列例如可以为由所述AS。
22、核苷酸构成的序列，也可以为包含所述AS核苷酸的序列。0043对所述表达抑制序列的长度没有特别限制，例如，为1832碱基长、优选为1930碱基长、更优选为19、20、21碱基长。本发明中，例如，碱基数的数值范围公开了属于该范围的全部正整数，例如“14碱基”的记载是指公开了“1、2、3、4碱基”的全部以下相同。0044下面示出所述AS1核苷酸的序列。需要说明的是，由所述序列号119的碱基序列构成的核苷酸、由所述核苷酸构成的表达抑制序列、包含所述核苷酸的表达抑制序列、和包含所述核苷酸的核酸分子分别还有时用以下所示的名称序列号前的名称表示。0045NI0079序列号100465AAGUAUUUCUUU。
23、UUGGUGC30047NI0080序列号200485GAAGUAUUUCUUUUUGGUG30049NI0081序列号300505AAUCUGGUUCCCAUGGAUG30051NI0082序列号400525UUUCUAGGACACCUCGUGG30053NI0083序列号500545UUGUUUGGCAGAAUCAGGA30055NI0084序列号600565UCAAUAACUUGUUUGGCAG30057NI0085序列号700585AGCUCAAUAACUUGUUUGG30059NI0086序列号800605UUGCUGUUUUCCAGCCAGC30061NI0087序列号900625。
24、UGGUUUGCUGUUUUCCAGC30063NI0088序列号1000645GAUGCCAAGCCUAAUUGGG30065NI0091序列号1100665UGAUUCGAGCACAAUUAAC30067NI0092序列号1200685UACUGUUAUACUGUCACCG3说明书CN104220598A4/42页90069NI0093序列号1300705UAAGCACACGGUCAAUGAC30071NI0094序列号1400725UAAUUGGGCUACCAGGUCG30073NI0095序列号1500745AUCAGAUCGUUGAUUUAGG30075NI0096序列号160076。
25、5UUCAGGAUAUUAGUGACUC30077NI0097序列号1700785UCCUUUCUAGGACACCUCG30079NI0098序列号1800805AUCCUUUCUAGGACACCUC30081NI0099序列号1900825UUUGCUGUUUUCCAGCCAG30083所述AS2核苷酸中，对“一个或多个”没有特别限制。“一个或多个”例如为17个、优选为15个、更优选为14个、进一步优选为1个、2个或3个。所述AS2核苷酸例如具有与所述AS1核苷酸同样的功能即可，更详细来说，具有骨膜素基因的表达抑制功能即可。“和/或”是指至少任一个的含义，还可以表示“选自由组成的组中的至少1。
26、种”以下相同。0084所述AS3核苷酸中，同源性例如为90以上、优选为93、94、95、96、97、98、99以上。所述AS3核苷酸例如具有与所述AS1核苷酸同样的功能即可，更详细来说，具有骨膜素基因的表达抑制功能即可。所述同源性例如可以使用BLAST、FASTA等解析软件通过缺省参数算出以下相同。0085如前所述，所述表达抑制序列可以为由所述AS核苷酸构成的序列，也可以为包含所述AS核苷酸的序列。在后者的情况下，所述表达抑制序列可以举出例如进一步具有突出的形态。所述表达抑制序列中，所述突出例如可以附加在所述AS核苷酸的3端和5端中的至少一者，优选附加在所述3端。0086对所述突出没有特别限制。
27、，例如，对长度和序列也没有特别限制。所述突出例如可以用NN表示。N为碱基，例如可以为天然的碱基，也可以为人工碱基。所述天然碱基可以举出例如A、C、G、U和T。所述N为正整数，表示突出的碱基长。所述突出NN的长度N例如为1、2、3碱基长，优选为1或2碱基长、更优选为2碱基长。所述突出NN的长度为2碱基长以上的情况下N2，连续的碱基N例如可以为相同的碱基，也可以为不同的碱基。所述突出NN的序列例如可以适用SIRNA的反义的突出。所述NN例如从3侧或5侧可以例示出UU、CU、UC、GA、AG、GC、UA、AA、CC、GU、UG、CG、AU、TT等。0087所述表达抑制序列具有所述突出的情况下，所述表。
28、达抑制序列可以举出例如所述AS1核苷酸和所述突出连结而成的序列。作为具体例，可以举出所述AS1核苷酸和所述突出连结而成的序列号2038中的任一个碱基序列N为正整数所构成的核苷酸。在以下序列中，NN为突出，没有特别限制，如前所述，其长度N优选为2碱基长。另外，在各序列的旁边示出突出的一例以53方向记载，但本发明不限定于此。另外，在下述序列说明书CN104220598A5/42页10中，除去NN外的区域可以为所述AS2核苷酸或所述AS3核苷酸。0088NI0079序列号200089TT5AAGUAUUUCUUUUUGGUGCNN30090NI0080序列号210091TT5GAAGUAUUUCUU。
29、UUUGGUGNN30092NI0081序列号220093TT5AAUCUGGUUCCCAUGGAUGNN30094NI0082序列号230095TT5UUUCUAGGACACCUCGUGGNN30096NI0083序列号240097TT5UUGUUUGGCAGAAUCAGGANN30098NI0084序列号250099TT5UCAAUAACUUGUUUGGCAGNN30100NI0085序列号260101TT5AGCUCAAUAACUUGUUUGGNN30102NI0086序列号270103TT5UUGCUGUUUUCCAGCCAGCNN30104NI0087序列号280105TT5UGGU。
30、UUGCUGUUUUCCAGCNN30106NI0088序列号290107TT5GAUGCCAAGCCUAAUUGGGNN30108NI0091序列号300109AG5UGAUUCGAGCACAAUUAACNN30110NI0092序列号310111UC5UACUGUUAUACUGUCACCGNN30112NI0093序列号320113AU5UAAGCACACGGUCAAUGACNN30114NI0094序列号330115GU5UAAUUGGGCUACCAGGUCGNN30116NI0095序列号340117AU5AUCAGAUCGUUGAUUUAGGNN30118NI0096序列号35011。
31、9CG5UUCAGGAUAUUAGUGACUCNN30120NI0097序列号360121UG5UCCUUUCUAGGACACCUCGNN30122NI0098序列号370123GU5AUCCUUUCUAGGACACCUCNN30124NI0099序列号380125CU5UUUGCUGUUUUCCAGCCAGNN3说明书CN104220598A106/42页110126本发明的核酸分子优选进一步具有与所述表达抑制序列退火的互补序列。所述互补序列例如包含与所述表达抑制序列中的所述AS核苷酸互补的核苷酸下文中称为互补核苷酸。所述互补序列可以为包含所述互补核苷酸的序列，也可以为由所述互补核苷酸构成的。
32、序列。0127所述互补序列例如能够与所述表达抑制序列退火即可。关于所述互补序列中的所述互补核苷酸与所述表达抑制序列中的所述AS核苷酸，其互补性例如为90以上，优选为93以上、94以上、95以上、96以上、97以上、98以上、99以上，更优选为100。需要说明的是，所述表达抑制序列与所述互补序列优选例如前者的AS核苷酸与后者的互补核苷酸显示出前述那样的互补性，前者的AS核苷酸以外的区域和后者的互补核苷酸以外的区域可以互补，也可以非互补。在将所述表达抑制序列和所述互补序列比对时，前者的AS核苷酸以外的区域和后者的互补核苷酸以外的区域例如可以存在对应的序列，也可以不存在对应的序列。作为具体例，前者的。
33、AS核苷酸以外的区域和后者的互补核苷酸以外的区域可以举出例如所述突出。即，在将所述表达抑制序列与所述互补序列比对时，所述表达抑制序列可以为突出在3侧或5侧突出的形状，所述互补序列可以为突出在5侧或3侧突出的形状。0128所述互补核苷酸可以举出例如下述S1、S2或S3的核苷酸。0129S1由与所述AS1的碱基序列互补的碱基序列构成的核苷酸；0130S2由与所述AS2的碱基序列互补的碱基序列构成的核苷酸；0131S3由与所述AS3的碱基序列互补的碱基序列构成的核苷酸。0132下面，将所述S1、S2或S3的核苷酸称为S核苷酸，分别称为S1核苷酸、S2核苷酸、S3核苷酸。0133所述互补序列例如可以为。
34、由所述S核苷酸构成的序列，也可以为包含所述S核苷酸的序列。0134对所述互补序列的长度没有特别限制，例如为1832碱基长、优选为1930碱基长、更优选为19、20、21碱基长。0135下面示出所述S1核苷酸的序列的具体例。所述序列号3957的序列分别与由所述序列号119的碱基序列构成的AS1核苷酸完全互补。需要说明的是，由所述序列号3957的碱基序列构成的核苷酸、由所述核苷酸构成的表达抑制序列、包含所述核苷酸的表达抑制序列、和包含所述核苷酸的核酸分子分别还有时用以下所示的名称序列号前的名称表示。0136NI0079序列号3901375GCACCAAAAAGAAAUACUU30138NI0080。
35、序列号4001395CACCAAAAAGAAAUACUUC30140NI0081序列号4101415CAUCCAUGGGAACCAGAUU30142NI0082序列号4201435CCACGAGGUGUCCUAGAAA30144NI0083序列号43说明书CN104220598A117/42页1201455UCCUGAUUCUGCCAAACAA30146NI0084序列号4401475CUGCCAAACAAGUUAUUGA30148NI0085序列号4501495CCAAACAAGUUAUUGAGCU30150NI0086序列号4601515GCUGGCUGGAAAACAGCAA30152NI。
36、0087序列号4701535GCUGGAAAACAGCAAACCA30154NI0088序列号4801555CCCAAUUAGGCUUGGCAUC30156NI0091序列号4901575GUUAAUUGUGCUCGAAUCA30158NI0092序列号5001595CGGUGACAGUAUAACAGUA30160NI0093序列号5101615GUCAUUGACCGUGUGCUUA30162NI0094序列号5201635CGACCUGGUAGCCCAAUUA30164NI0095序列号5301655CCUAAAUCAACGAUCUGAU30166NI0096序列号5401675GAGUCA。
37、CUAAUAUCCUGAA30168NI0097序列号5501695CGAGGUGUCCUAGAAAGGA30170NI0098序列号5601715GAGGUGUCCUAGAAAGGAU30172NI0099序列号5701735CUGGCUGGAAAACAGCAAA30174如前所述，所述互补序列可以为由所述互补核苷酸构成的序列，也可以为包含所述互补核苷酸的序列。在后者的情况下，所述互补序列可以举出例如进一步具有突出的形态。所述互补序列中，所述突出例如可以附加在所述互补核苷酸的3端和5端中的至少一者，优选附加在所述3端。0175对所述突出没有特别限制，可以援引所述表达抑制序列中的记载。所述互补。
38、序列中的所述突出NN的序列例如可以适用SIRNA的有义的突出。所述NN例如从5侧或3侧可以例示出UU、CU、UC、CA、AC、GA、AG、GC、UA、AA、CC、UG、GU、CG、AU、TT、GG等。0176所述互补序列具有所述突出的情况下，所述互补序列可以举出例如所述S1核苷酸和所述突出连结而成的序列。作为具体例，可以举出所述S核苷酸和所述突出连结而成的序列号5876中的任一个碱基序列N为正整数所构成的核苷酸。在以下序列中，N说明书CN104220598A128/42页13N为突出，没有特别限制，如前所述，其长度N优选为2碱基长。另外，在各序列的旁边示出突出的一例，但本发明不限定于此。另外，。
39、在下述序列中，除去NN外的区域可以为所述S2核苷酸或所述S3核苷酸。0177NI0079序列号5801785GCACCAAAAAGAAAUACUUNN3TT0179NI0080序列号5901805CACCAAAAAGAAAUACUUCNN3TT0181NI0081序列号6001825CAUCCAUGGGAACCAGAUUNN3TT0183NI0082序列号6101845CCACGAGGUGUCCUAGAAANN3TT0185NI0083序列号6201865UCCUGAUUCUGCCAAACAANN3TT0187NI0084序列号6301885CUGCCAAACAAGUUAUUGANN3TT01。
40、89NI0085序列号6401905CCAAACAAGUUAUUGAGCUNN3TT0191NI0086序列号6501925GCUGGCUGGAAAACAGCAANN3TT0193NI0087序列号6601945GCUGGAAAACAGCAAACCANN3TT0195NI0088序列号6701965CCCAAUUAGGCUUGGCAUCNN3TT0197NI0091序列号6801985GUUAAUUGUGCUCGAAUCANN3UC0199NI0092序列号6902005CGGUGACAGUAUAACAGUANN3AA0201NI0093序列号7002025GUCAUUGACCGUGUGCUU。
41、ANN3CA0203NI0094序列号7102045CGACCUGGUAGCCCAAUUANN3GG0205NI0095序列号7202065CCUAAAUCAACGAUCUGAUNN3UU0207NI0096序列号7302085GAGUCACUAAUAUCCUGAANN3GA0209NI0097序列号7402105CGAGGUGUCCUAGAAAGGANN3UC0211NI0098序列号7502125GAGGUGUCCUAGAAAGGAUNN3CA说明书CN104220598A139/42页140213NI0099序列号7602145CUGGCUGGAAAACAGCAAANN3CC0215下述。
42、表1和表2中例示出所述AS核苷酸与所述S核苷酸的组合。本发明不限定于这些例示。另外，在下述序列中，AS核苷酸和S核苷酸分别可以在3端具有NN的突出，或者可以在5端具有NN的突出，所述NN优选为2碱基长。0216表10217说明书CN104220598A1410/42页150218表20219说明书CN104220598A1511/42页160220对本发明的核酸分子的结构单元没有特别限制，可以举出例如核苷酸残基。所述核苷酸残基可以举出例如核糖核苷酸残基和脱氧核糖核苷酸残基。所述核苷酸残基可以举出例如未经修饰的非修饰核苷酸残基和经修饰的修饰核苷酸残基。0221本发明的核酸分子例如为RNA分子。本。
43、发明的核酸分子例如可以为仅由核糖核苷酸残基构成的RNA分子，也可以为除核糖核苷酸残基外还包含脱氧核糖核苷酸残基和/或非核苷酸残基的RNA分子。0222本发明的核酸分子例如可以为所述双链核酸分子，也可以为所述单链核酸分子。下面，举出所述双链核酸分子和所述单链核酸分子的例子对本发明的核酸分子进行说明。说明书CN104220598A1612/42页1702231双链核酸分子0224本发明的核酸分子为双链核酸分子的情况下，只要包含两条单链核酸、且一条单链核酸具有所述表达抑制序列即可。所述双链核酸分子可以举出例如所谓的SIRNA、或SIRNA的前体等。所述双链核酸分子例如优选一条单链核酸、即其反义链具有。
44、所述表达抑制序列，另一条单链核酸、即其有义链具有所述互补序列。所述反义链例如可以为由所述表达抑制序列构成的单链核酸，也可以为包含所述表达抑制序列的单链核酸。所述有义链例如可以为由所述互补序列构成的单链核酸，也可以为包含所述互补序列的单链核酸。0225所述双链核酸分子中，对各单链核酸的长度没有特别限制。所述反义链例如为1832碱基长、优选为1930碱基长、更优选为19、20、21碱基长。所述有义链例如为1832碱基长、优选为1930碱基长、更优选为19、20、21碱基长。0226所述反义链和所述有义链优选分别在3端和5端的至少一者具有突出。所述突出的长度例如为1、2、3碱基长、优选为1或2碱基长。
45、、更优选为2碱基长。对所述突出的序列没有特别限制，可以举出例如前述例示。02272单链核酸分子0228本发明的核酸分子为单链核酸分子的情况下，只要具有所述表达抑制序列即可，对其它形态没有特别限制。0229所述核酸分子例如为由1条单链构成的单链核酸分子，例如，在能够退火的方向具有所述表达抑制序列和所述互补序列。0230对所述表达抑制序列和所述互补序列的连结顺序没有特别限制，例如，可以是所述表达抑制序列的3端与所述互补序列的5端连结，也可以是所述表达抑制序列的5端与所述互补序列的3端连结，优选为前者。所述单链核酸分子例如可以是所述表达抑制序列与所述互补序列直接连结，也可以间接地连结。所述直接连结可。
46、以举出例如基于磷酸二酯键的连结。所述间接连结可以举出例如介由连接子区域的连结。0231所述连接子区域例如可以由核苷酸残基构成，也可以由非核苷酸残基构成，还可以由所述核苷酸残基和非核苷酸残基构成。所述核苷酸残基可以举出例如核糖核苷酸残基和脱氧核糖核苷酸残基。0232下面，作为所述单链核酸分子的具体例，例示出通过分子内退火而在1处具有环的第1形态和在2处具有环的第2形态。本发明不限定于此。023321第1形态0234作为所述单链核酸分子的第1形态，可以举出5侧区域和3侧区域相互退火而形成双链结构茎结构的分子。这也可称为SHRNASMALLHAIRPINRNA或SHORTHAIRPINRNA短发夹R。
47、NA的形态。SHRNA为发夹结构，一般具有一个茎区域和一个环区域。0235本形态的核酸分子可以举出例如下述结构包含区域X、连接子区域LX和区域XC，且在所述区域X与所述区域XC之间连结有所述连接子区域LX。并且，优选所述区域XC与所述区域X互补，具体来说，优选所述区域X和所述区域XC中的一者包含所述表达抑制序列，另一者包含所述互补序列。所述区域X和所述区域XC分别具有所述表达抑制序列和所述互补序列中的任一者，因此所述核酸分子例如能够通过分子内退火在所述区域X与所述区域XC之间可形成茎结构，所述连接子区域LX形成环结构。说明书CN104220598A1713/42页180236所述核酸分子例如可。
48、以从5侧至3侧依次具有所述区域XC、所述连接子区域LX和所述区域X，也可以从3侧至5侧依次具有所述区域XC、所述连接子区域LX和所述区域X。所述表达抑制序列例如可以配置于所述区域X和所述区域XC中的任一者，优选配置于所述互补序列的上游侧、即所述互补序列的5侧。0237将本形态的核酸分子的一例示于图1的示意图。图1的A为示出所述核酸分子中的各区域的顺序的概要的示意图，图1的B为示出所述核酸分子在所述分子内形成双链的状态的示意图。如图1的B所示，所述核酸分子在所述区域XC与所述区域X之间形成双链，所述LX区域根据其长度形成环结构。图1只不过示出所述区域的连结顺序和形成双链的各区域的位置关系，例如，。
49、各区域的长度、所述连接子区域LX的形状等不限定于此。0238所述核酸分子中，所述区域XC和所述区域X的碱基数没有特别限制。下面例示出各区域的长度，但本发明不限定于此。0239所述核酸分子中，所述区域X的碱基数X与所述区域XC的碱基数XC的关系例如满足下述3或5的条件，在前者的情况下，具体来说例如满足下述11的条件。0240XXC30241XXC110、优选为1、2或3、0242更优选为1或2110243XXC50244所述区域X或所述区域XC包含所述表达抑制序列的情况下，所述区域例如可以为仅由所述表达抑制序列构成的区域，也可以为包含所述表达抑制序列的区域。所述表达抑制序列的碱基数例如如前所述。包含所述表达抑制序列。