抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物及其合成方法.pdf

一种抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物及其合成方法，化学通式为：其中，R1为芳磺酸酯基，R2为OR3、芳磺酸酯基，R3为C1～C2的烷基。本发明的化合物酯溶性相对与大豆苷元而言，极大改善。

权利要求书
1.  一种抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物及其合成方法，其特征是化学通式为：

其中，R1为芳磺酸酯基，R2为OR3、芳磺酸酯基，R3为C1～C2的烷基。

2.  一种权利要求1所述的抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物的合成方法，其特征是4’，7-二羟基异黄酮在有机溶剂里以有机碱或无机碱作催化剂与芳磺酰氯选择性反应，或4’，7-二羟基异黄酮选择性烷基化后再酰化，所得化合物再经重结晶与柱层析纯化。

3.  根据权利要求2所述的抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物的合成方法，其特征是有机溶剂为二氯甲烷，三氯甲烷，四氯化碳，二甲基甲酰胺，二甲亚砜，四氢呋喃，吡啶，丙酮，二氧六环等，苯，乙醚，乙睛，乙酸乙酯。

4.  根据权利要求2所述的抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物的合成方法，其特征是催化剂为氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠等无机碱，有机碱为叔丁醇钠，叔丁醇钾，三乙胺，三乙醇胺，吡啶，2-甲吡啶等有机碱。

5.  根据权利要求2所述的抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物的合成方法，其特征是酰基化反应所用的试剂为酰氯，酸酐及相应方法。

6.  根据权利要求2所述的抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物的合成方法，其特征是重结晶与柱层析纯化所使用的溶剂是极性与非极性溶剂的混合溶剂。

说明书抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物及其合成方法
技术领域
本发明涉及一种抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物及其合成方法。
背景技术
异黄酮化合物大豆苷元(Daidzein，4’，7-二羟基异黄酮)具有抑制癌细胞生长的生理活性(Sarhyyamoonhy N.Wang T.T.Y.1997.14：2384).但是，大豆苷元在处理HL-60细胞时，对细胞生长诱导分化作用较弱，NBT阳性细胞数低于10％(焦鹭，中华血液学杂志，1990，11，83)。以其为原料药制成的片剂或胶囊主要用于治疗冠心病、脑血栓形成、脑梗塞、脑出血后遗症，亦可用于高血压引起的颈项强痛、头痛、头晕及早期突发性耳聋.由于大豆苷元水溶性和脂溶性都很差，导致在临床应用中仅能制成口服剂型且存在生物利用度低，制成的片剂或胶囊体内吸收缓慢，1～2周才能显效(汤丽娟，乔培香，张凌云.药学学报.1989，24，778.)。目前国内外报道其衍生物有50多种，但还未见有在抗癌方面有较为成功改造的例子。为了提高大豆苷元类化合物的抗癌活性，扩大抗癌谱，改善大豆苷元的溶解性，解决临床应用中存在的生物利用度低、吸收差、显效慢、活性低的缺点，以大豆苷元为先导化合物，对其进行修饰，寻找更有效的抗癌药物具有十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物，其抑制癌细胞生长能力强，生物利用度高。
本发明的另一目的是提供抗血癌的异黄酮磺酸酯衍生物的合成方法。
本发明是这样来实现的，其化学通式为：

其中，R1为芳磺酸酯基，R2为OR3、芳磺酸酯基，R3为C1～C2的烷基。
本发明的一个优选化合物是：

本发明的第二个优选化合物是：

本发明的第三个优选化合物是：

本发明的异黄酮衍生物4’-苯磺酰氧基-7-甲基异黄酮的合成方法是，选择性磺酸酯化时使用的有机溶剂与催化剂的物质的量之比在1000∶1～1∶100)。有机溶剂为二氯甲烷，三氯甲烷，四氯化碳，二甲基甲酰胺，二甲亚砜，四氢呋喃，吡啶，丙酮，二氧六环苯，乙醚，乙睛，乙酸乙酯等。催化剂为氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠等无机碱，有机碱为叔丁醇钠，叔丁醇钾，三乙胺，三乙醇胺，吡啶，2-甲吡啶等有机碱。烷基化反应所用的试剂为卤代烃，硫酸酯，酰基化反应所用的试剂为酰氯，酸酐。
用本发明所合成的化合物可用柱层析，重结晶方法加以分离纯化。如用溶剂重结晶方法，推荐溶剂为极性溶剂与非极性溶剂的混合溶剂。例如：异丙醇-石油醚，三氯甲烷-丙酮，二氯甲烷-丙酮，甲醇-二氯甲烷，乙酸乙酯-石油醚，四氢呋喃-冰醋酸等混合溶剂。用柱层析，可用硅胶，或氧化铝作固定相，推荐的流动相可为异丙醇-石油醚，三氯甲烷-丙酮，二氯甲烷-丙酮，甲醇-二氯甲烷，乙酸乙酯-石油醚等混合溶剂。其体积比极性溶剂∶非极性溶剂＝10-0.1∶1，例如：乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1。
本发明的有益效果是：本发明的化合物酯溶性相对与大豆苷元而言，极大改善。对其中的优选化合物用MTT法进行了抗肿瘤实验，实验结果表明所合成的化合物具有对人白血病细胞HL-60有抑制作用。
具体实施方式
下面通过实例来对本发明作进一步说明，这些实例仅用于对本发明进行举例说明，而不应该理解为对本发明进行限制。
实施例1  化合物4’，7-二苯磺酰氧基异黄酮的合成  
取大豆苷元(0.4mmol，0.1016g)分散于10mL二氯甲烷之中，加入0.01g叔丁醇钾，于-20℃在Ar保护下，慢慢滴加0.96mmol(0.1694g)苯磺酰氯。保温2.5h.将混合物过滤，滤液减压旋干，柱层析纯化(三氯甲烷/丙酮＝10∶1)得纯品。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.21(1H，d，J＝8.8Hz)，7.97(1H，s)，7.90(4H，d，J＝7.6Hz)，7.72(2H，m，)，7.58(4H，t，J＝7.6，8.0Hz)，7.43(2H，d，J＝8.4Hz)，7.29(1H，d，4J＝2.0Hz)，7.07(2H，d，J＝8.4Hz)，6.98(1H，dd，J＝2.0，8.8Hz)；m/z(E1)535.20(M++1，100％).
实施例2  化合物4’-苯磺酰氧基-7-甲基异黄酮的合成
中间体4’-羟基-7-甲基异黄酮的合成：取大豆苷元(0.4mmol，0.1016g)分散于10mL二甲基甲酰胺之中，加入0.1g碳酸钾，在室温下加入0.15mL硫酸二甲酯，在0℃～90℃反应3h。将反应液加入到20mL冷水之中，过滤，将滤饼用水洗，柱层析纯化收集第二带。白色固体，0.040g。熔点：204～206℃m/z(EI)269.23(M++1，100％)。
4’-苯磺酰氧基-7-甲基异黄酮的合成。取中间体4’-羟基-7-甲基异黄酮(0.4mmol，0.1072g)溶于10mL丙酮之中，加入0.01g叔丁醇钾，于-20℃在Ar保护下，慢慢滴加0.96mmol(0.1694g)苯磺酰氯。保温1～24h.将混合物过滤，滤液减压旋干，柱层析纯化(三氯甲烷/丙酮＝8∶1)得纯品。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.20(1H，d，J＝8.7Hz)，7.96(1H，s)，7.90(2H，d，J＝7.8Hz)，7.72(1H，t，J＝7.4Hz，7.8)，7.58(2H，t，J＝7.4，7.8Hz)，7.47(2H，d，J＝8.5Hz)，7.25(1H，d，4J＝1.9Hz)，6.97(2H，d，J＝8.5Hz)，6.95(1H，dd，J＝1.9，8.7Hz)，3.87(3H，s)；m/z(EI)409.33(M++1，100％).
实施例3  化合物4’-苯磺酰氧基-7-乙基异黄酮的合成
中间体4’-羟基-7-乙基异黄酮的合成：取大豆苷元(0.4mmol，0.1016g)分散于10mL二甲基甲酰胺之中，加入0.1g碳酸钾，在室温下加入0.15mL硫酸二乙酯，在-10℃～100℃反应24h。将反应液加入到20mL冷水之中，过滤，将滤饼用水洗，柱层析纯化收集第二带。白色固体，0.040g。熔点：234～236℃m/z(EI)283.33(M++1，100％)。
4’-苯磺酰氧基-7-乙基异黄酮的合成。取中间体4’-羟基-7-乙基异黄酮(0.4mmol，0.1132g)溶于10mL丙酮之中，加入0.01g叔丁醇钾，于-20℃在Ar保护下，慢慢滴加0.96mmol(0.1694g)苯磺酰氯。保温2.5h.将混合物过滤，滤液减压旋干，柱层析纯化(三氯甲烷/丙酮＝10∶1)得纯品。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ 8.24(1H，d，J＝8.7Hz)，7.97(1H，s)，7.90(2H，d，J＝7.8Hz)，7.72(1H，t，J＝7.4Hz)，7.58(2H，t，J＝7.4，7.8Hz)，7.47(2H，d，J＝8.4Hz)，7.27(1H，d，J＝2.0Hz)，6.97(2H，d，J＝8.4Hz)，6.95(1H，dd，J＝2.0，8.7Hz)，4.11(2H，m)，1.49(3H，t)；m/z(EI)423.30(M++1，100％).
实施例4异黄酮衍生物体外对人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡
筛选方法：四氮唑盐(Methyl-Thiazol-Tetrozolium，MTT)还原法
MTT法细胞处理：选择处于对数生长期的细胞，至少有95％的细胞有活性。将RPMI-1640培养液制成4×105/ml细胞的单细胞悬液，并接种于96孔培养板上，每孔加100μl培养液。设实验组、阴性对照组和空白对照组，每组为4个复孔。阴性对照组为含HL-60细胞，但不加实验用药组，空白对照组为不含HL-60细胞组。96孔板放置在37℃，5％CO2、95％空气，饱和湿度条件下培养箱内培养24h后按实验分组加药培养。药物作用往后将平板在500g下离心10分钟去除药物，再加入培养液孵育。
MTT检测：离心去除药物并加入培养液孵育。到检测时间后，每孔加入5mg/ml的MTT液20μl，继续培养4h，随后在每孔中加入10％SDS溶液100μl，溶解12～18小时后用空白对照调零，酶联免疫检测仪测定570nm的光吸收值(OD)，计算不同剂量和时间的阿糖胞苷对HL-60细胞生长的抑制率。实验重复4次。生长抑制率＝[(阴性对照组OD值-实验组OD值)/阴性对照组OD值]×100％。
抗肿瘤生物活性体外筛选试验结果：
细胞株：HL-60人白血病作用时间：72小时结果评定：无效：10-5mol/L＜50％；有效：10-5mol/L＞50％.
4’-苯磺酰氧基-7-甲基异黄酮对肿瘤细胞生长的抑制率％
  浓度(M)  样品编  号  10-4  10-5  10-6  10-7  10-8  评价  备注  化合物  52.8  50.9  12.7  1.5  4.2  有效