红枣提取物的提取方法及提取物.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103330157 A (43)申请公布日 2013.10.02 CN 103330157 A *CN103330157A* (21)申请号 201310143640.3 (22)申请日 2013.04.23 A23L 1/212(2006.01) A23L 1/308(2006.01) A23L 1/30(2006.01) C08B 37/00(2006.01) (71)申请人 申琳 地址 100083 北京市海淀区清华东路 17 号 申请人 重庆市科学技术研究院 (72)发明人 申琳 万丽 生吉萍 石聚彬 (74)专利代理机构 北京同立钧成知识产权代理 有限公司 。

2、11205 代理人 王庆龙 (54) 发明名称 红枣提取物的提取方法及提取物 (57) 摘要 本发明提供一种红枣提取物的提取方法及提 取物， 该方法包括 ： 在残次干红枣制得的原料碎 粒中加入 60%-95% 的乙醇溶液， 进行微波浸提 ； 对 微波浸提后的产物进行过滤得到溶液 A1 和沉淀 B1 ； 将溶液 A1 浓缩后加入絮凝剂， 过滤后得到溶 液 A2 和沉淀 B2， 浓缩溶液 A2 得到枣黄酮类提取 物 ； 将沉淀 B2 用无水乙醇溶解， 过滤除去不溶物 得到溶液 A3， 浓缩溶液 A3 得到枣三萜类提取物 ； 向沉淀 B1 中加入溶剂进行加热浸提， 对加热浸提 后的产物过滤， 得到溶。

3、液 A4 和沉淀 B4 ； 将沉淀 B4 烘干后得到枣膳食纤维提取物 ； 将溶液 A4 进行有 机溶剂除杂后得到枣多糖提取物。本发明通过一 个流程将多种红枣提取物分别分流提取利用， 可 以简化工艺， 拓宽残次红枣的综合利用途径。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 8 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书8页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103330157 A CN 103330157 A *CN103330157A* 1/1 页 2 1. 一种红枣提取物的提取方法， 其特征在于， 包括 ： 将红枣去核， 。

4、破碎， 得到原料碎粒 ； 在所述原料碎粒中加入体积浓度为 60%-95% 的乙醇溶液， 然后进行微波浸提 ； 所述乙 醇溶液与所述原料碎粒的质量比为 10-18:1， 微波功率为 70 瓦 -490 瓦， 微波加热时间为 90 秒 -150 秒 ； 对微波浸提后的产物进行过滤， 得到溶液 A1 和沉淀 B1 ； 将溶液 A1 浓缩、 除去溶剂， 再加入絮凝剂， 过滤后得到溶液 A2 和沉淀 B2， 浓缩溶液 A2 得到枣黄酮类提取物 ； 将沉淀B2用无水乙醇溶解， 过滤除去不溶物得到溶液A3， 浓缩溶液A3得到枣三萜类提 取物 ； 向沉淀 B1 中加入溶剂进行加热浸提， 调整 pH 值为 8.。

5、0-9.2， 加热温度为 75-85， 加热 时间为 2.5-3.5 小时 ； 对所述加热浸提后的产物过滤， 得到溶液 A4 和沉淀 B4 ； 所述溶剂为 水， 所述溶剂与沉淀 B1 的质量比为 12-18:1 ； 将沉淀 B4 烘干后得到不溶性的枣膳食纤维提取物 ； 将溶液 A4 进行有机溶剂除杂后， 得到枣多糖提取物。 2. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述乙醇溶液与所述原料碎粒的质量比 为 12-16:1。 3. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述微波功率为 140 瓦 -420 瓦。 4. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于， 所述微波加热时间。

6、为 100 秒 -140 秒。 5. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 所述絮凝剂为 1% 壳聚糖溶液， 所述絮凝 剂的添加量为 0.006g/L。 6. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 在所述向沉淀 B1 中加入溶剂进行加热浸 提的过程中， 调整 pH 值为 8.6。 7. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 在所述向沉淀 B1 中加入溶剂进行加热浸 提的过程中， 所述溶剂与沉淀 B1 的质量比为 15:1。 8. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 在所述向沉淀 B1 中加入溶剂进行加热浸 提的过程中， 加热温度为 80， 加热时间为 。

7、3 小时。 9. 根据权利要求 1-8 任一所述的方法， 其特征在于， 所述将溶液 A4 进行有机溶剂除杂 的过程包括 ： 将溶液 A4 浓缩、 冷却后， 加入无水乙醇 ； 将加入无水乙醇得到的絮状沉淀过滤得到沉淀 B5 ； 将沉淀 B5 烘干、 加入水复溶， 再加入氯仿分层后， 得到水溶液层 ； 将所述水溶液层脱色、 浓缩、 烘干。 10. 一种红枣提取物， 按照权利要求 1-9 任一所述的方法制得。 权 利 要 求 书 CN 103330157 A 2 1/8 页 3 红枣提取物的提取方法及提取物 技术领域 0001 本发明涉及食品加工技术， 尤其涉及一种红枣提取物的提取方法及提取物。 背。

8、景技术 0002 枣是鼠李科 （Rhamnaceae） 落叶乔木枣树的果实。红枣香甜味美， 营养丰富， 深受 人们喜爱。 0003 枣果中含有人体必需的氨基酸。 其中包括成人体内不能合成的丙氨酸、 苏氨酸、 色 氨酸、 蛋氨酸、 赖氨酸和缬氨酸， 以及儿童体内必需又不能合成的组氨酸、 精氨酸等。 并且枣 果富含多种维生素， Vc 含量尤其高， 100g 鲜枣中 Vc 含量高达 500-800mg， 比猕猴桃高出 1-2 倍， 比柑橘高 7-10 倍， 是苹果的 100 倍。鲜红枣制成干枣后， 维生素也有较高的保存率， 每 100g干枣中含Vc15-67mg， 胡萝卜素0.4mg， 维生素B10。

9、.05mg， 维生素B220.15mg， 尼克酸(维 生素 PP)1.1mg,， 枣中的 Vp 含量也是百果之冠。枣果中还含有丰富的矿质元素， 主要有氮、 磷、 钾、 钙、 铁、 铜、 锌等， 这些人体内不可缺少的矿质元素， 对成人保健及促进儿童发育和提 高智力尤为重要。枣果除了具有很高的营养价值外， 还有多种功能成分， 例如黄酮类、 三萜 类、 环核苷酸、 枣多糖等。 0004 目前从枣中提取功能成分的方法只针对其中某一种成分， 并且提取工艺复杂。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种红枣提取物的提取方法及提取物， 以简化红枣提取物 的提取工艺， 并实现从红枣中提取多种提取物。 00。

10、06 本发明提供一种红枣提取物的提取方法， 该方法包括 ： 0007 将红枣去核， 破碎， 得到原料碎粒 ； 0008 在所述原料碎粒中加入体积浓度为 60%-95% 的乙醇溶液， 然后进行微波浸提 ； 所 述乙醇溶液的体积浓度优选为 85%-95%， 更优为 90% ； 所述乙醇溶液与所述原料碎粒的质量 比为 10-18:1， 优选为 12-16:1， 更优为 14:1 ； 微波功率为 70 瓦 -490 瓦， 优选为 140 瓦 -420 瓦， 更优为 210 瓦 ； 微波加热时间为 90 秒 -150 秒， 优选为 100 秒 -140 秒， 更优为 120 秒 ； 0009 对微波浸提。

11、后的产物进行过滤， 得到溶液 A1 和沉淀 B1 ； 0010 将溶液 A1 浓缩、 除去溶剂， 再加入絮凝剂， 过滤后得到溶液 A2 和沉淀 B2， 浓缩溶 液 A2 得到枣黄酮类提取物 ； 其中， 所述絮凝剂为 1% 壳聚糖溶液， 所述絮凝剂的添加量为 0.006g/L ； 0011 将沉淀B2用无水乙醇溶解， 过滤除去不溶物得到溶液A3， 浓缩溶液A3得到枣三萜 类提取物 ； 0012 向沉淀 B1 中加入溶剂进行加热浸提， 调整 pH 值为 8.0-9.2， 优选为 8.6， 加热温度 为75-85， 优选为80， 加热时间为2.5-3.5小时， 优选为3小时 ； 对所述加热浸提后的产。

12、 物过滤， 得到溶液A4和沉淀B4 ； 所述溶剂为水， 所述溶剂与沉淀B1的质量比为12-18:1， 优 选为 15:1 ； 说 明 书 CN 103330157 A 3 2/8 页 4 0013 将沉淀 B4 烘干后得到不溶性的枣膳食纤维提取物 ； 0014 将溶液 A4 进行有机溶剂除杂后， 得到枣多糖提取物。 0015 在本发明的方案中， 所述红枣为残次干红枣。 0016 进一步的， 所述的将溶液 A4 进行有机溶剂除杂的过程包括 ： 将溶液 A4 浓缩、 冷却 后， 加入无水乙醇 ； 将加入无水乙醇得到的絮状沉淀过滤得到沉淀B5 ； 将沉淀B5烘干、 加入 水复溶， 再加入氯仿分层后，。

13、 得到水溶液层 ； 将所述水溶液层脱色、 浓缩、 烘干。 0017 其中， 将溶液 A4 浓缩的过程中， 将所述溶液 A4 浓缩至原体积的 1/3-1/5 ； 加入浓 缩后的溶液 A4 中的所述无水乙醇与浓缩后的溶液的体积比为 3-6:1。 0018 本发明还提供一种由本发明提供的红枣提取物的提取方法制得的提取物， 所述的 提取物包括以下组分中的任意一种或多种 ： 枣多糖提取物、 枣膳食纤维提取物、 枣三萜类提 取物和枣黄酮类提取物。 0019 本发明提供的一种红枣提取物的提取方法及提取物， 该方法采用微波提取和絮凝 分离的技术， 通过一个流程， 将黄酮类、 三萜类化合物、 枣多糖及膳食纤维等。

14、多种成分分别 分流提取利用， 工艺流程操作简单， 成本低廉， 全面保留了枣中的各种功能成分及其特性。 0020 再者， 由于我国的地理、 土壤和大部分地区受副热带季风影响的气候， 很适合枣树 的生长， 我国枣产区分布极为广阔。 但是由于枣树结果的多子特性和管理、 采收、 晾晒、 气候 等难以控制的因素， 每年都会产生大量的小枣、 落枣、 裂枣等残次枣果， 这些残次枣果无法 直接作为商品出售， 由此造成极大的损失。 本发明方法可以残次干红枣为原料实施， 拓宽了 残次枣的综合利用途径。通过本发明人的研究发现， 残次红枣中的枣多糖含量和外观品质 优良的商品枣无显著差异。 0021 本发明的提取方法，。

15、 能使枣资源得到充分利用， 并且能以较高的得率获得枣的各 种提取物， 提取方法简便高效， 成本低， 特别适合工业化生产。 附图说明 0022 图 1 为本发明定量测定时的枣黄酮标准曲线图 ； 0023 图 2 是本发明定量测定时的齐墩果酸标准曲线图 ； 0024 图 3 为本发明定量测定时的多糖标准曲线图。 具体实施方式 0025 为使本发明实施例的目的、 技术方案和优点更加清楚， 下面对本发明实施例中的 技术方案进行清楚、 完整地描述， 显然， 所描述的实施例是本发明一部分实施例， 而不是全 部的实施例。 0026 实施例一 0027 本发明提供的红枣提取物的提取方法实施例一可以包括以下步骤。

16、 ： 0028 步骤 101、 对残次干红枣进行清洗， 晾干表面水分， 去核得到枣肉， 并将去核后得到 的果肉破碎至 0.5mm-1.0mm。 0029 其中， 本发明中的残次干红枣是指风干后的残次红枣， 其中的水分含量一般小于 25%。 0030 本发明采用残次红枣作为原料。 说 明 书 CN 103330157 A 4 3/8 页 5 0031 其中， 本步骤中得到产物 （破碎后的果肉） 即为本发明所述的原料碎粒。 0032 步骤 102、 将步骤 101 得到的产物装入容器中， 加入体积浓度为 90% 的乙醇溶液 ； 加入 90% 乙醇的质量为步骤 101 得到的产物质量的 14 倍。 。

17、0033 步骤103、 将步骤102得到的产物采用微波加热浸提除杂 ； 其中， 微波功率为210W ； 微波加热时间为 120 秒。 0034 步骤 104、 将步骤 103 得到的产物进行过滤， 得到上清液和沉淀两部分 ； 其中该步 骤得到的上清液即为本发明所述的溶液 A1， 该步骤得到的沉淀即为本发明所述的沉淀 B1。 0035 具体的过滤的步骤可以为 ： 先用纱布粗滤， 再抽滤。 经过该步骤， 枣多糖、 膳食纤维 成分被保留在沉淀中， 而枣黄酮类、 三萜类成分存在于上清液中。 0036 步骤 105、 将步骤 104 得到的上清液浓缩、 除去溶剂， 再加入絮凝剂， 过滤后得到上 清液和沉。

18、淀 ； 本步骤得到的上清液即为本发明所述的溶液 A2， 本步骤得到的沉淀即为本发 明所述的沉淀 B2。 0037 具体的， 将步骤 104 得到的上清液真空浓缩至原体积 1/10， 去除乙醇， 然后加入 3 倍体积蒸馏水 ； 再加入絮凝剂， 添加量为 0.006g/L， 该絮凝剂例如可以 1% 壳聚糖溶液， 还可 以为现有的其他絮凝剂 ； 加入絮凝剂后会产生大量沉淀， 此时三萜类成分被沉淀， 而枣黄酮 类存在于上清液中。 0038 步骤 106、 将步骤 105 中得到的上清液进行浓缩， 得到枣黄酮类提取物。 0039 步骤 107、 将步骤 105 得到的沉淀 B2 用无水乙醇溶解， 过滤除。

19、去不溶物得到溶液 A3， 浓缩溶液 A3 得到枣三萜类提取物。 0040 例如 ： 将步骤 105 得到的沉淀 B2 用 3 倍体积无水乙醇溶解， 过滤， 除去不溶物质， 保留溶液， 并浓缩至溶剂完全除去， 即制得所述的枣三萜类提取物。 0041 步骤 108、 向步骤 104 得到的沉淀 B1 中加入溶剂进行加热浸提。 0042 具体的， 本步骤中的溶剂可以为水， 溶剂的加入质量为沉淀 B1 的 12 倍， 调整 pH 值 为 9.2， 加热温度为 85， 加热时间为 2.5 小时。 0043 步骤 109、 对步骤 108 中得到的加热浸提后的产物进行过滤， 得到上清液和沉淀， 将沉淀烘干。

20、后得到不溶性的枣膳食纤维提取物。 0044 本步骤得到的上清液即为本发明所述的溶液 A4， 本步骤得到的沉淀即为本发明所 述的沉淀 B4。此时， 枣多糖存在于上清液 （即溶液 A4） 中。 0045 步骤 110、 将步骤 109 中得到的上清液浓缩、 冷却 ； 例如将该上清液浓缩至原体积 的 1/3。 0046 步骤 111、 向步骤 110 得到的产物中加入无水乙醇， 例如加入的无水乙醇与步骤 110 的产物的体积比可以为 6:1 ； 然后有絮状沉淀产生， 过滤得到沉淀 B5。 0047 步骤 112、 将步骤 111 得到的沉淀 B5 烘干、 加入水复溶 ； 例如加入水的质量为烘干 后沉。

21、淀 B5 质量的 10 倍。 0048 步骤 113、 向步骤 112 得到的产物中加入氯仿， 剧烈震荡后， 静置分层后除去蛋白， 然后回收水溶液层。 0049 具体的， 加入氯仿的体积为步骤 112 得到产物体积的 1/3 ； 剧烈震荡的时间为 10 分钟。 0050 步骤 114、 将步骤 113 中得到的水溶液层进行脱色、 浓缩、 烘干， 得到枣多糖提取 说 明 书 CN 103330157 A 5 4/8 页 6 物。 0051 具体的， 脱色的步骤例如可以为 ： 在该水溶液层中加入 0.1% 质量的活性炭， 置于 沸水浴中 10min， 并不断搅拌， 冷却后过滤， 弃去活性炭滤渣， 。

22、得到澄清溶液。 0052 实施例二 0053 实施例二与上述实施例一的步骤相同， 其区别在于， 在实施例二中 ： 0054 步骤 102 中的乙醇的体积浓度为 85%， 质量为步骤 101 得到的产物质量的 12 倍 ； 0055 步骤 103 中， 微波功率为 280W ； 微波加热时间为 100 秒 ； 0056 步骤 108 中， 加入溶剂的质量为沉淀 B1 质量的 18 倍， 调整 pH 值至 8.0， 加热温度 为 80， 加热时间 3.5 小时 ； 0057 步骤 110 中， 将步骤 109 得到的产物浓缩至原体积的 1/4 ； 0058 步骤 111 中， 向步骤 110 得到。

23、的产物中加入 5 倍体积无水乙醇 ； 0059 步骤 112 中， 将步骤 111 得到的产物烘干， 用 12 倍质量水复溶 ； 0060 步骤 113 中， 加入氯仿的体积为步骤 112 得到产物体积的 1/2 ； 剧烈震荡的时间为 15 分钟。 0061 实施例三 0062 实施例三与上述实施例一的步骤相同， 其区别在于， 在实施例三中 ： 0063 步骤 102 中的乙醇的体积浓度为 80%， 质量为步骤 101 得到的产物质量的 16 倍 ； 0064 步骤 103 中， 微波功率为 420W ； 微波加热时间为 140 秒 ； 0065 步骤 108 中， 加入溶剂的质量为沉淀 B1。

24、 质量的 15 倍， 调整 pH 值至 8.8， 加热温度 为 83， 加热时间 3 小时 ； 0066 步骤 110 中， 将步骤 109 得到的产物浓缩至原体积的 1/5 ； 0067 步骤 111 中， 向步骤 110 得到的产物中加入 4 倍体积无水乙醇 ； 0068 步骤 112 中， 将步骤 111 得到的产物烘干， 用 9 倍质量水复溶 ； 0069 步骤 113 中， 加入氯仿的体积为步骤 112 得到产物体积的 1/4 ； 剧烈震荡的时间为 12 分钟。 0070 实施例四 0071 实施例四与上述实施例一的步骤相同， 其区别在于， 在实施例四中 ： 0072 步骤 102 。

25、中的乙醇的体积浓度为 95%， 质量为步骤 101 得到的产物质量的 15 倍 ； 0073 步骤 103 中， 微波功率为 140W ； 微波加热时间为 110 秒 ； 0074 步骤 108 中， 加入溶剂的质量为沉淀 B1 质量的 16 倍， 调整 pH 值至 8.6， 加热温度 为 78， 加热时间 2.8 小时 ； 0075 步骤 110 中， 将步骤 109 得到的产物浓缩至原体积的 1/3 ； 0076 步骤 111 中， 向步骤 110 得到的产物中加入 4.5 倍体积无水乙醇 ； 0077 步骤 112 中， 将步骤 111 得到的产物烘干， 用 11 倍质量水复溶 ； 00。

26、78 步骤 113 中， 加入氯仿的体积为步骤 112 得到产物体积的 1/4 ； 剧烈震荡的时间为 8 分钟。 0079 实施例五 0080 实施例五与上述实施例一的步骤相同， 其区别在于， 在实施例五中 ： 0081 步骤 102 中的乙醇的体积浓度为 65%， 质量为步骤 101 得到的产物质量的 13 倍 ； 说 明 书 CN 103330157 A 6 5/8 页 7 0082 步骤 103 中， 微波功率为 300W ； 微波加热时间为 130 秒 ； 0083 步骤 108 中， 加入溶剂的质量为沉淀 B1 质量的 14 倍， 调整 pH 值至 8.5， 加热温度 为 82， 加。

27、热时间 3.2 小时 ； 0084 步骤 110 中， 将步骤 109 得到的产物浓缩至原体积的 1/5 ； 0085 步骤 111 中， 向步骤 110 得到的产物中加入 3.5 倍体积无水乙醇 ； 0086 步骤 112 中， 将步骤 111 得到的产物烘干， 用 12 倍质量水复溶 ； 0087 步骤 113 中， 加入氯仿的体积为步骤 112 得到产物体积的 1/2 ； 剧烈震荡的时间为 9 分钟。 0088 对实施例一到实施例五中得到的枣黄酮类提取物、 枣三萜类提取物、 枣膳食纤维 提取物和枣多糖提取物分别进行检测， 测得实施例一到实施例五中得到的枣黄酮类提取物 的含量分别为 ： 2。

28、.89mg/g、 2.92mg/g、 3.55mg/g、 2.37mg/g、 3.47mg/g， 枣三萜类提取物的含 量分别为 15.23mg/g、 14.26mg/g、 12.17mg/g、 13.95mg/g 和 9.46mg/g， 枣膳食纤维提取物的 含量分别为 40.23mg/g、 47.60mg/g、 42.14mg/g、 43.26mg/g、 44.57mg/g， 枣多糖提取物的含 量分别为128.8mg/g、 130.1mg/g、 129.6mg/g、 129.2mg/g和127.9mg/g。 其中， 上述含量均基 于残次干红枣的总重。 0089 下面对本发明提取出的各种提取物进。

29、行检测。 0090 （1） 本发明采用比色法鉴定枣黄酮类提取物， 该方法如下 ： 0091 A. 枣黄酮标准曲线的绘制 ： 0092 称取黄酮 （芦丁标准品） 0.0114g， 加少量 60% 乙醇， 微热使标准品溶解， 然后 用乙醇定容至 250mL， 摇匀， 静置 5min， 得到芦丁标准液。将配制好的芦丁标准液分别 取 0， 1.0， 2.0， 3.0， 4.0， 5.0， 6.0mL 于 25mL 容量瓶中， 编号 0-6， 并用蒸馏水补至 6mL， 然 后各加 5%NaNO21mL， 摇匀， 静置 6min， 再加 10%Al(NO3)3溶液 1mL， 摇匀， 静置 6min， 再加。

30、 10%NaOH10mL， 15min后， 定容， 摇匀， 静置。 以0号作参比， 于500nm处测定吸光度， 绘制标准 曲线， 见图 1。图 1 为本发明定量测定时的枣黄酮标准曲线图。 0093 B. 枣黄酮类提取物样品测定 ： 0094 按枣黄酮标准曲线绘制的测定方法， 将待测样品 （本发明实施例一到实施例五 提取的枣黄酮类提取物）分别溶于少量 60% 乙醇， 然后用 60% 乙醇定容至 250mL， 摇匀 制成样品溶液， 分别取各样品溶液 3mL 于 25mL 容量瓶中， 分别并用蒸馏水补至 6mL， 然 后各加 5%NaNO21mL， 摇匀， 静置 6min， 再加 10%Al(NO3。

31、)3溶液 1mL， 摇匀， 静置 6min， 再加 10%NaOH10mL， 15min后， 定容， 摇匀， 静置， 以绘制枣黄酮标准曲线时的0号作为参比， 用1cm 比色皿在 500nm 下测定实施例一到实施例五各样品溶液的吸光度值。所得吸光度值代入标 准曲线的回归方程， 计算枣黄酮类提取物的含量。 根据上述方法， 测得实施例一到实施例五 中得到的枣黄酮类提取物的含量分别为 2.89mg/g、 2.92mg/g、 3.55mg/g、 2.37mg/g、 3.47mg/ g。 0095 （2） 本发明采用比色法鉴定枣三萜类提取物， 该方法如下 ： 0096 A、 三萜类物质标准曲线的绘制 00。

32、97 由于红枣中的三萜类物质主要为齐墩果酸， 所以， 通常情况下， 本领域技术人员通 过确定红枣中齐墩果酸的含量来表示红枣中三萜类物质的含量。 0098 精确称取齐墩果酸标准品 0.0116g， 加入少量无水乙醇使标准品溶解， 然后用无水 说 明 书 CN 103330157 A 7 6/8 页 8 乙醇定容至 100mL， 摇匀， 静置 5min， 制成齐墩果酸标准液。分别取 0， 0.1， 0.2， 0.3， 0.4， 0.5， 0.6mL 齐墩果酸标准液于 10mL 试管中， 编号 0-6， 在加热挥发干溶剂后， 在上述 0-6 号 试管中分别加入 5mL 蒸馏水震荡混匀， 然后在 10。

33、000 转 / 分离心 5 分钟， 弃去上清液后， 分 别在上述0-6号试管中加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.3mL， 高氯酸0.7mL， 65水浴15min， 立即取出流水冷却至室温， 分别再在上述 0-6 号试管中加入 4mL 乙酸乙酯， 摇匀， 以 0 号作 参比， 在550nm处测定吸光度值， 绘制标准曲线， 见图2。 图2为本发明定量测定时的齐墩果 酸标准曲线图。 0099 B、 样品测定 ： 0100 按标准曲线绘制的测定方法 ： 将待测样品 （本发明实施例一到实施例五提取的枣 三萜类提取物） 分别溶于少量无水乙醇， 然后用无水乙醇定容至 100mL， 摇匀制成样品溶液， 分别取实施。

34、例一到实施例五的各样品溶液 0.1mL 于 10mL 试管中， 加热挥发干溶剂后， 分别 加入 5% 香草醛 - 冰醋酸溶液 0.3mL， 高氯酸 0.7mL， 65水浴 15min， 立即取出流水冷却至 室温， 再分别加入 4mL 乙酸乙酯， 摇匀， 以绘制三萜类物质标准曲线时的 0 号作为参比， 在 550nm 处测定实施例一到实施例五各样品溶液的吸光度值。所得吸光度值代入标准曲线的 回归方程， 计算枣三萜类提取物的含量。测得实施例一到实施例五中得到的枣三萜类提取 物的含量分别为 15.23mg/g、 14.26mg/g、 12.17mg/g、 13.95mg/g 和 9.46mg/g。 。

35、0101 （3） 鉴定枣膳食纤维提取物的含量的方法 ： 0102 由于红枣主要由水， 糖类， 蛋白质， 脂肪四大物质组成， 通过之前的对红枣的提取 步骤， 水溶液和乙醇溶液以及氯仿已经除去了可溶性糖类、 蛋白质、 脂肪， 烘干步骤除去了 水分， 所以剩余物质即为枣膳食纤维提取物， 主要为非水溶性的枣膳食纤维。所以直接称 量沉淀 B4 烘干后得到不溶性的物质即可得到， 测得实施例一到实施例五得到的红枣中不 溶性的枣膳食纤维提取物的含量分别为 40.23mg/g、 47.60mg/g、 42.14mg/g、 43.26mg/g、 44.57mg/g 0103 （4） 对枣多糖提取物的检测方法如下 。

36、： 0104 A、 对提取的枣多糖的定性检测 0105 A1、 样品淀粉的检测 0106 （1） 稀碘液的配制 ： 天平称取0.50g I， 1.00g KI于一烧杯中， 加入10.0mL蒸馏水， 用玻璃棒混匀备用。 0107 （2） 取两个干净白瓷板， 分别加入适量待测样品和适量直链淀粉， 再分别加入 2-3 滴碘液， 观察颜色变化。该待测样品即为上述制的的枣多糖。 0108 实验结果 ： 淀粉溶液组变为蓝色， 而样品组保持碘液原橙黄色。 所以证明样品中不 含淀粉。 0109 A2、 总糖的检测 0110 （1） 莫式试剂的配制 ： 用天平取 0.5g- 萘酚用配置好的 95% 乙醇溶解至 。

37、10mL， 临 用前配制备用。 0111 （2） 在一干净试管中， 加入 2.5mL 样品蒸馏水浸泡液， 加莫式试剂 3 滴， 立即摇匀， 将试管倾斜， 沿管壁慢慢用移液枪加入浓硫酸2.75mL， 不能振摇。 硫酸层沉于试管底部与糖 溶液分成两层， 观察液面交界处有无紫色环出现。 0112 实验结果 ： 样品反应溶液中有紫色环出现， 可知样品中有糖类的检出。 说 明 书 CN 103330157 A 8 7/8 页 9 0113 A3、 单糖的检测 0114 （1） 费琳试剂的配制 ： 天平称取 0.5g NaOH 在烧杯中溶解于 5mL 蒸馏水， 制成费琳 试剂 a 液， 备用 ； 另外称取。

38、 0.25g 无水硫酸铜溶解于 5mL 蒸馏水， 制成费琳试剂 b 液， 备用。 0115 （2） 取两只试管， 其中一支试管 A 用移液枪加入费琳试剂 a 液 1mL， 再加入费琳试 剂 b 液 1mL， 混匀后立即加入 1mL 配制好备用的葡萄糖溶液 ； 另一只试管 B 同样分别加入费 琳试剂 a 液和 b 液以后混匀加入样品蒸馏水溶液 1mL。试管 A、 B 均放入热水浴中水浴 5 分 钟。观察颜色变化。 0116 实验结果 ： 葡萄糖溶液与费琳试剂反应产生砖红色沉淀， 样品组无砖红色沉淀， 而 产生 Gu(OH)2蓝色沉淀， 故样品中未检出单糖。 0117 A4、 蛋白质的检测 011。

39、8 （1） 茚三酮试剂的配制 ： 天平称取 0.10g 茚三酮， 溶于 100mL 蒸馏水中， 混匀备用。 0119 （2） 取 3 只试管分别为 ： A 加入 2mL 蒸馏水， B 加入 2mL 样品蒸馏水溶液， C 加入 2mL 蛋白胨粉液， 然后分别加入 3、 4 滴配制好的茚三酮试剂， 热水浴 5 分钟， 冷却后观察颜色变 化。 0120 实验结果 ： C 管变成紫色， A 管和 B 管颜色不变， 所以样品中未检出蛋白质。 0121 由定性检测结果可知， 本发明得到的提取物是不含淀粉、 单糖类以及蛋白质的多 糖类物质。 0122 B、 采用苯酚硫酸法对提取的枣多糖进行定量检测 0123。

40、 B1、 多糖标准曲线绘制 ： 0124 葡萄糖标准溶液 ： 取 0.2038g 葡萄糖于 100mL 容量瓶中用蒸馏水定容， 再分别取 0， 1.0， 2.0， 3.0， 4.0， 5.0mL 于 100mL 容量瓶中定容， 配成标准溶液。 0125 将 50mL 浓硫酸缓缓加入 10mL 水中， 冷却至室温后， 加入 0.6g 苯酚晶体， 搅拌使晶 体溶解， 配成显色液。 0126 分别取 1mL 标准溶液于试管中， 加 5mL 显色液， 震荡均匀， 置沸水浴中保温 30min， 取出， 冷却至室温后在 490nm 处测吸光度值。 0127 所得多糖的标准曲线如图 3 所示， 图 3 为本。

41、发明定量测定时的多糖标准曲线图。 0128 B2、 样品测定 ： 0129 将实施例一到实施例五制得的枣多糖提取物， 分别取 1g 溶于 10ml 蒸馏水中， 然 后稀释 250 倍制得样品溶液， 按照上述标准曲线绘制中的方法测定各样品溶液中枣多糖提 取物的含量， 测得的实施例一到实施例五中得到的枣多糖提取物的含量分别为 128.8mg/g、 130.1mg/g、 129.6mg/g、 129.2mg/g 和 127.9mg/g。 0130 本发明提供的提取方法， 采用微波提取和絮凝分离的技术， 通过一个流程， 将黄酮 类、 三萜类化合物、 枣多糖及膳食纤维等多种成分分别分流提取利用， 工艺流。

42、程操作简单， 成本低廉， 保留了各种功能成分的功能特性 ； 并且本发明以残次干红枣为原料制作， 拓宽了 残次枣的综合利用途径。 由此， 本发明采用的提取方法， 原料易得， 产品得率高， 制作过程简 便高效， 成本低， 适合工业化生产。 0131 本发明还提供根据本发明的提取方法制得的红枣提取物， 该红枣提取物包括以下 任意一种或多种 ： 枣黄酮类提取物、 枣三萜类提取物、 枣膳食纤维提取物和枣多糖提取物。 0132 最后应说明的是 ： 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案， 而非对其限制 ； 尽 说 明 书 CN 103330157 A 9 8/8 页 10 管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明， 本领域的普通技术人员应当理解 ： 其依然 可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改， 或者对其中部分技术特征进行等同替 换 ； 而这些修改或者替换， 并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精 神和范围。 说 明 书 CN 103330157 A 10 1/1 页 11 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 103330157 A 11 。