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1、(10)申请公布号 CN 102671017 A (43)申请公布日 2012.09.19 CN 102671017 A *CN102671017A* (21)申请号 201210128161.X (22)申请日 2012.04.27 A61K 36/899(2006.01) C11B 9/02(2006.01) A61P 1/04(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 127/00(2006.01) (71)申请人 湖北长友现代农业股份有限公司 地址 445800 湖北省恩施土家族苗族自治州 鹤峰县容美镇中坝路 45 号 。
2、(72)发明人 陈新 张长友 易继斌 高跃生 谭遵伟 (74)专利代理机构 武汉开元知识产权代理有限 公司 42104 代理人 杨柳林 (54) 发明名称 同时制备箬叶挥发油、 总黄酮和总多糖的方 法 (57) 摘要 本发明公开了一种同时制备箬叶挥发油、 总 黄酮和总多糖的方法。 取箬叶粉末加5-12倍重量 的水， 浸泡 0-4h， 水蒸气蒸馏法提取 2-12h， 用有 机溶剂萃取得挥发油 ； 提取后的药液留用， 药渣 加入以生药量计6-12倍重量20-50乙醇回流提 取 2-3 次， 每次 0.5-1.5h， 滤过， 合并各提取液和 提取挥发油后药液， 减压浓缩， 得提取物， 加水分 散溶解。
3、， 以生药量计使上样液浓度为 0.4-1.0g/ ml， 通过大孔树脂， 吸附流速 1-3BV/h， 树脂柱径 高比为 1 5-8， 先用水洗脱 2-4BV， 洗脱液乙醇 沉淀， 干燥， 得总多糖 ； 然后用 40-90乙醇洗脱 3-6BV， 洗脱流速为 0.8-2BV/h， 此洗脱液浓缩， 干 燥， 得总黄酮。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 1/1 页 2 1. 一种同时制备箬叶挥发油、 总黄酮和总多糖的方法， 其特征在于工艺按以下步骤进 行 ： 取箬叶粉末加 5-1。
4、2 倍重量的水， 浸泡 0-4h， 水蒸气蒸馏法提取 2-12h， 用有机溶剂萃取 得箬叶挥发油 ； 提取挥发油后药液留用， 药渣加入以生药量计 6-12 倍重量的 20-50乙醇 回流提取 2-3 次， 每次 0.5-1.5h， 滤过， 合并各提取液和提取挥发油后药液， 减压浓缩， 得 提取物， 加水分散溶解， 以生药量计使上样液浓度为 0.4-1.0g/ml， 通过大孔树脂， 吸附流速 1-3BV/h， 树脂柱径高比为 1 5-8， 先用水洗脱 2-4BV， 洗脱液乙醇沉淀， 干燥， 得箬叶总多 糖提取物 ； 然后用 40-90乙醇洗脱 3-6BV， 洗脱流速为 0.8-2BV/h， 此洗。
5、脱液浓缩， 干燥， 得 箬叶总黄酮提取物。 2. 如权利要求 1 所述的同时制备箬叶挥发油、 总黄酮和总多糖的方法， 其特征在于 ： 所 述原料箬叶为野生箬竹叶， 包括有柔毛箬竹、 湖南箬竹、 阔叶箬竹、 箬叶竹、 南岳箬竹、 益阳 箬竹、 方脉箬竹、 箬竹和鄂西箬竹中的任意一种。 3. 如权利要求 1 所述的同时制备箬叶挥发油、 总黄酮和总多糖的方法， 其特征在于 ： 所 述萃取用的有机溶剂是石油醚、 乙醚、 乙酸乙酯低极性或中等极性溶剂中的任意一种或一 种以上组合。 4. 如权利要求 1 所述的同时制备箬叶挥发油、 总黄酮和总多糖的方法， 其特征在于 ： 所 述的大孔树脂是非极性、 弱极性。
6、和中等极性任意一种。 5. 如权利要求 1 或 4 所述的同时制备箬叶挥发油、 总黄酮和总多糖的方法， 其特征在 于 ： 所述大孔树脂的型号是 HP20、 HPD100A、 D101、 D201、 AB-8 中的任意一种。 6. 如权利要求 1 所述的同时制备箬叶挥发油、 总黄酮和总多糖的方法， 其特征在于 ： 所 述工艺按以下条件操作 ： 取箬叶粉末 2-5kg， 加 5-12 倍重量的水， 浸泡 0-4h， 水蒸气蒸馏法 提取 4-12h， 得挥发油 ； 提取挥发油后药液留用， 药渣加入以生药计 6-12 倍重量的 20-50 乙醇回流提取 2-3 次， 每次 0.5-1.5h， 滤过， 。
7、合并提取液和挥发油提取后药液， 减压浓缩， 得 提取物， 加水分散溶解， 以生药量计使上样液浓度为 0.4-1.0g/ml， 通过大孔吸附树脂， 吸附 流速 1-3BV/h， 树脂柱径高比为 1 5-8， 先用纯水洗脱 2-4BV， 多糖洗脱流速为 3-5BV/h， 得 箬叶总多糖提取物 ； 然后用 70乙醇洗脱 3-6BV， 洗脱流速为 0.8-2.0BV/h， 70乙醇洗脱 液浓缩， 干燥， 得箬叶总黄酮提取物。 权 利 要 求 书 CN 102671017 A 2 1/5 页 3 同时制备箬叶挥发油、 总黄酮和总多糖的方法 技术领域 0001 本发明涉及农产品的深加工技术领域， 特别是一。
8、种同时从箬叶中提取挥发油、 黄 酮和多糖等生物活性成分的方法。 该方法涉及集成水蒸气蒸馏、 大孔树脂技术， 以及真空浓 缩技术等提取箬叶生物活性成分的方法。 背景技术 0002 箬叶为禾本科 (Graminales) 竹亚科 (BambusoideaeNees) 箬竹属 (Indocal.mus) 植物的叶。主要分布于长江以南各省区。用箬叶可包裹糯米煮成食品， 该食品是中华民族 的传统美食之一， 在我国南方地区具有悠久的历史， 具有特殊的清香气味， 食用方便， 并且 耐贮藏， 深受人民群众喜爱。 现代医学表明箬叶具有清热止血、 解毒消肿、 利尿抗癌等功效。 现代科学研究证明， 箬叶中含有挥发油。
9、、 黄酮和多糖等功效成分。 箬叶特有的棕香味是一种 令人愉悦的天然香味， 从中提取的挥发油可再开发天然香精、 食品添加剂等产品 ； 药理试验 证明， 箬竹叶提取液具有良好的抗肿瘤、 抗炎症、 抗溃疡等作用。目前， 关于箬叶挥发油、 总 黄酮和总多糖制备方法的专利申请有申请号为 03142883.5、 01111117.8 等申请， 但这些方 法都是单一提取， 资源利用率较低， 提取成本较高， 不适宜工业化大生产。 发明内容 0003 本发明的目的在于提供一种同时从箬叶中提取制备挥发油、 总黄酮和总多糖的方 法， 从而可避免单一提取所带来的资源浪费， 提高了箬叶的资源利用率， 降低了成本， 并且。
10、 该制备方法适宜工业化大生产。 0004 本发明的目的通过以下技术方案来实现 ： 0005 一种同时制备箬叶挥发油、 总黄酮和总多糖的方法， 其工艺步骤为 ： 取箬叶粉末 加 5-12 倍重量 (L/kg) 的水， 浸泡 0-4h， 水蒸气蒸馏法提取 2-12h， 得挥发油 ； 提取挥发油 后药液留用， 药渣加入以生药量计 6-12 倍重量 (L/kg) 的 20-50乙醇回流提取 2-3 次， 每 次 0.5-1.5h， 滤过， 减压回收乙醇后， 合并各提取液和提取挥发油后药液， 减压浓缩， 得提 取物， 加水分散溶解， 以生药量计使上样液浓度为 0.4-1.0g/ml， 通过大孔树脂， 吸。
11、附流速 1-3BV/h， 树脂柱径高比为 1 5-8， 先用水洗脱 2-3BV， 洗脱液乙醇沉淀， 干燥， 得箬叶总多 糖提取物 ； 然后用 40-90乙醇洗脱 3-5BV， 洗脱流速为 0.8-2BV/h， 此洗脱液浓缩， 干燥， 得 箬叶总黄酮提取物。 0006 本发明所述原料箬叶， 来源于禾本科 (Graminales) 竹亚科 (BambusoideaeNees) 箬竹属 (Indocal.mus) 其中任意一种植物的叶。 0007 所述提取箬叶挥发油、 总黄酮和总多糖的原料， 箬叶为野生箬竹叶， 其中包括有柔 毛箬竹、 湖南箬竹、 阔叶箬竹、 箬叶竹、 南岳箬竹、 益阳箬竹、 方脉箬。
12、竹、 箬竹和鄂西箬竹等中 的任意一种。 0008 所述萃取所用有机溶剂是石油醚、 乙醚、 乙酸乙酯等低极性或中等极性溶剂中的 任意一种或一种以上组合。 说 明 书 CN 102671017 A 3 2/5 页 4 0009 所述利用大孔树脂法进行制备时， 所用大孔树脂可以是非极性、 弱极性和中等极 性等任意一种类型， 0010 所述大孔树脂型号是 HP20、 HPD100A、 D101、 D201、 AB-8 等中的任意一种。 0011 所述工艺可按以下条件操作 ： 取箬叶粉末 2-5kg， 加 5-12 倍重量的水， 浸泡 0-4h， 水蒸气蒸馏法提取 4-12h， 得挥发油 ； 提取挥发油。
13、后药液留用， 药渣加入以生药计 6-12 倍重 量的20-50乙醇回流提取2-3次， 每次0.5-1.5h， 滤过， 合并提取液和挥发油提取后药液， 减压浓缩， 得提取物， 加水分散溶解， 以生药量计使上样液浓度为 0.4-1.0g/ml， 通过大孔吸 附树脂， 吸附流速 1-3BV/h， 树脂柱径高比为 1 5-8， 先用纯水洗脱 2-4BV， 多糖洗脱流速 为 3-5BV/h， 得箬叶总多糖提取物 ； 然后用 70乙醇洗脱 3-6BV， 洗脱流速为 0.8-2.0BV/h， 70乙醇洗脱液浓缩， 干燥， 得箬叶总黄酮提取物。 0012 本发明中BV和BV/h的含义是 ： 通常将树脂装于圆筒。
14、性的树脂柱中， 溶液连续地通 过。 树脂柱内装载树脂的体积称为床体积(BV)， 工作时的各种物料量都与BV为单位。 例如， 溶液通过树脂的流量速度为 2-4BV/h， 即， 每小时通过溶液的体积为树脂床容积的 2-4 倍。 0013 本发明质量控制方法， 可包括以下一种或几种含量测定方法 ： 0014 1、 挥发油 ： 0015 挥发油采用直接称重法计算得到 ： 0016 0017 2、 总黄酮 0018 精密称取橙皮苷对照品适量， 加甲醇溶解制成每 1ml 含橙皮苷 0.22mg 的溶液。分 别精密吸取橙皮苷对照品溶液1， 2， 3， 4， 5ml， 于5ml量瓶中， 加甲醇定容， 摇匀。 。
15、分别精密吸 取上述对照品溶液 0.5ml， 置 25ml 量瓶中， 准确加入 10 AlCl3 溶液 1.0ml， 再用蒸馏水定 容至刻度， 摇匀， 室温放置 15min， 于 310nm 处测定吸光度， 以橙皮苷浓度为横坐标， 吸光度 为纵坐标， 绘制曲线。 0019 精密称取箬叶黄酮提取物样品各3份， 每份5mg， 加甲醇溶解并定容于25ml容量瓶 中， 摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液 0.5ml， 置 25ml 量瓶中， 准确加入 10 AlCl3 溶液 1.0ml， 再用蒸馏水定容至刻度， 摇匀， 室温放置 15min， 于 310nm 处测定吸光度， 计算含量。 0020 3、 总。
16、多糖 0021 精确称取 105干燥恒重的葡萄糖 20mg， 置 500ml 容量瓶中， 定容， 摇匀 ( 含葡 萄糖 40mg/L)。分别吸取葡萄糖标准溶液 0.4， 0.6， 0.8， 1.0， 1.2， 1.4， 1.6， 1.8mL， 用蒸馏 水补充至 2.0mL， 加入 5的苯酚溶液 lmL， 摇匀， 吸取 5m1 浓硫酸大力冲入大试管中， 静止 l0min， 摇匀， 室温下放置20min， 于490hm处测定吸光度。 (以2.0mL蒸馏水作为空白对照)。 0022 精密称取箬叶多糖提取物样品各 3 份， 每份 5mg， 加水溶解并定容于 25ml 容量瓶 中， 摇匀。精确取待测多糖。
17、稀释液 1.0mL， 加苯酚试液 1.0mL， 摇匀， 放置 10min 后， 快速加入 5.0mL 浓硫酸， 摇匀， 放置 20min， 于 490nm 测定吸光值， 根据回归方程计算各待测液中多糖 浓度， 计算多糖含量。 0023 本发明的有益效果 ： 说 明 书 CN 102671017 A 4 3/5 页 5 0024 本发明是一种同时提取分离箬叶中挥发油、 总黄酮和总多糖的制备方法， 采用该 方法可以将箬叶中三类有效成分同时提取， 有效地避免了单一提取所带来的资源浪费， 提 高了箬叶的资源利用率， 降低了成本， 并且该制备方法适宜工业化大生产。 具体实施方式 0025 下面结合实施例。
18、对本发明作进一步描述， 但实施例并不对本发明有任何限制。 0026 实施例 1 ： 0027 取箬叶粉 2kg， 加 8 倍量水， 浸泡 2h， 水蒸气蒸馏法提取 7h， 得挥发油 ； 提取挥发油 后药液留用， 药渣加入以生药量计 9 倍量计， 30乙醇回流提取 3 次， 每次 1.0h， 滤过， 提取 液减压回收乙醇后， 合并各提取液和提取挥发油后药液， 减压浓缩， 得提取物， 加水分散溶 解， 以生药量计使上样液浓度为0.7g/ml， 通过AB-8大孔树脂， 吸附流速2BV/h， 树脂柱径高 比为16， 先用水洗脱3BV， 洗脱流速为3BV/h， 洗脱液浓缩， 乙醇沉淀， 干燥， 得箬叶总。
19、多糖 提取物 ； 然后用 70乙醇洗脱 3BV， 洗脱流速为 1.5BV/h， 此洗脱液浓缩， 干燥， 得箬叶总黄 酮提取物。 0028 实施例 2 ： 0029 取箬叶粉 5kg， 加 5 倍量水， 浸泡 4h， 水蒸气蒸馏法提取 12h， 得挥发油 ； 提取挥发 油后药液留用， 药渣加入以生药量计12倍量计， 40乙醇回流提取3次， 每次1.5h， 滤过， 提 取液减压回收乙醇后， 合并各提取液和提取挥发油后药液， 减压浓缩， 得提取物， 加水分散 溶解， 以生药量计使上样液浓度为 1.0g/ml， 通过 HP-20 大孔树脂， 吸附流速 3BV/h， 树脂柱 径高比为18， 先用水洗脱4。
20、BV， 洗脱流速为4BV/h， 洗脱液浓缩， 乙醇沉淀， 干燥， 得箬叶总 多糖提取物 ； 然后用 70乙醇洗脱 4BV， 洗脱流速为 2BV/h， 此洗脱液浓缩， 干燥， 得箬叶总 黄酮提取物。 0030 实施例 3 ： 0031 取箬叶粉 2kg， 加 12 倍量水， 浸泡 0h， 水蒸气蒸馏法提取 4h， 得挥发油 ； 提取挥发 油后药液留用， 药渣加入以生药量计 6 倍量计， 40乙醇回流提取 3 次， 每次 1.0h， 滤过， 提 取液减压回收乙醇后， 合并各提取液和提取挥发油后药液， 减压浓缩， 得提取物， 加水分散 溶解， 以生药量计使上样液浓度为 0.8g/ml， 通过 D-1。
21、01 大孔树脂， 吸附流速 2BV/h， 树脂柱 径高比为17， 先用水洗脱2BV， 洗脱流速为2BV/h， 洗脱液浓缩， 乙醇沉淀， 干燥， 得箬叶总 多糖提取物 ； 然后用 70乙醇洗脱 3BV， 洗脱流速为 1BV/h， 此洗脱液浓缩， 干燥， 得箬叶总 黄酮提取物。 0032 实施例 4 ： 0033 取箬叶粉 3kg， 加 5 倍量水， 浸泡 3h， 水蒸气蒸馏法提取 6h， 得挥发油 ； 提取挥发油 后药液留用， 药渣加入以生药量计 8 倍量计， 40乙醇回流提取 3 次， 每次 1.5h， 滤过， 提取 液减压回收乙醇后， 合并各提取液和提取挥发油后药液， 减压浓缩， 得提取物，。
22、 加水分散溶 解， 以生药量计使上样液浓度为1.6g/ml， 通过HPD-100A大孔树脂， 吸附流速3BV/h， 树脂柱 径高比为18， 先用水洗脱3BV， 洗脱流速为2BV/h， 洗脱液浓缩， 乙醇沉淀， 干燥， 得箬叶总 多糖提取物 ； 然后用 90乙醇洗脱 4BV， 洗脱流速为 2BV/h， 此洗脱液浓缩， 干燥， 得箬叶总 黄酮提取物。 0034 实施例 5 ： 说 明 书 CN 102671017 A 5 4/5 页 6 0035 取箬叶粉 2kg， 加 4 倍量水， 浸泡 2h， 水蒸气蒸馏法提取 6h， 得挥发油 ； 提取挥发油 后药液留用， 药渣加入以生药量计 7 倍量计， 。
23、50乙醇回流提取 3 次， 每次 1.0h， 滤过， 提取 液减压回收乙醇后， 合并各提取液和提取挥发油后药液， 减压浓缩， 得提取物， 加水分散溶 解， 以生药量计使上样液浓度为 0.8g/ml， 通过 D-201 大孔树脂， 吸附流速 2BV/h， 树脂柱径 高比为16， 先用水洗脱3BV， 洗脱流速为2BV/h， 洗脱液浓缩， 乙醇沉淀， 干燥， 得箬叶总多 糖提取物 ； 然后用 80乙醇洗脱 3BV， 洗脱流速为 1BV/h， 此洗脱液浓缩， 干燥， 得箬叶总黄 酮提取物。 0036 以上实施例利用上述质量检测方法测得挥发油、 总黄酮和总多糖含量如下 ： 0037 0038 显然， 本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精 神和范围。倘若对本发明的这些修改和变型属于本发明的基本构思或等同技术的范围， 则 本发明也应该包含这些改动和变型。 说 明 书 CN 102671017 A 6 5/5 页 7 0039 本说明书中若有未作详细描述的内容， 则属于本领域专业技术人员公知的技术， 此处不再赘述。 说 明 书 CN 102671017 A 7 。