生产海鞘素化合物的合成方法 本发明涉及合成的方法，特别是涉及生产海鞘素化合物的合成方法。
【发明背景】
欧洲专利309477涉及海鞘素729，743，745，759A，759B和770。已公开海鞘素化合物具有抗菌的和其他的有用的性质。现在海鞘素743作为抗肿瘤剂正进行临床试验。
海鞘素743具有下式(I)的复合三(四氢异喹啉酚)[tris(tetrahydroisoquinolinephenol)]结构：
它目前是通过分离得自海洋无脊椎动物Ecteinascidin turbinata的提取物制备的。由于得率低，一直在寻找可替代的制备方法。
美国专利号5721362描述生产海鞘素化合物的合成方法，也可参见WO 9812198，该文全文通过引用结合到本文中。该要求保护的方法内容很长且复杂，其中的38个实施例中的每一例都描述在得到海鞘素743的合成序列中的一个或多个步骤。
在已知的合成方法中，使用1-不稳定的、10-羟基、18-保护地羟基、二-6，8-烯-5-酮的稠环化合物形成1，4桥键。如实施例33中所示，将化合物(13)转变为化合物(14)：
然后根据已知的合成方法，通过实施例34至36的步骤在1，4桥键上形成螺喹啉(spiroquinoline)，及除去其18-MOM保护基团得到海鞘素770，然后可将其转变为海鞘素743。
美国专利号5721362的权利要求25涉及给定的式(11)的中间体酚化合物，我们也称其为中间体11或Int-11。它具有以下双(四氢异喹啉酚)的结构(II)：
其中MOM是甲氧基甲基取代基及TBDPS是叔-丁基二苯基甲硅烷基取代基。
由中间体11可以合成另一个令人感兴趣的抗肿瘤制剂Phthalascidin，见Proc.Natl.Acad.Sci.USA，96，3496-3501，1999。Phthalascidin是式(III)的双(四氢异喹啉酚)衍生物：在海鞘素743和770中，所述1，4桥键具有式(IV)的结构：
其它已知的海鞘素包括具有不同桥环的环系化合物，如在海鞘素722和736中所出现的，其中所述桥键具有式(V)的结构：
海鞘素583和597的桥具有式(VI)的结构：
及海鞘素594和596的桥具有式(VII)的结构：
这些化合物及相关化合物的完整结构在J.Am.Chem.Soc.(1996)118，9017-9023中给出。该文通过引用结合到本文中。
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已知其它的化合物缺少桥环的环系。这些化合物包括双(四氢异喹啉醌)抗肿瘤-抗微生物抗生素番红菌素和番红霉素，以及由培养的微生物或海绵分离的海洋天然产物矶海绵素(renieramicins)和锉海绵霉素(xestomycin)。它们都具有共同的二聚四氢异喹啉碳构架。这些化合物根据芳环的氧化形式可以分为四种类型，类型I至IV。
I型，二聚异喹啉醌为在此类化合物中最常见的式(VIII)体系，见下述表I。
表I
I型番红霉素抗生素的结构取代基
化合物 R14a R14b R21 R25a R25b R25c
番红霉素A H H CN O O CH3
番红霉素B H H H O O CH3
番红霉素C H OCH3 H O O CH3
番红霉素G H OH CN O O CH3
番红霉素H H H CN OH CH2COCH CH3
3
番红霉素S H H OH O O CH3
番红霉素Y3 H H CN NH2 H CH3
番红霉素Yd1 H H CN NH2 H C2H5
番红霉素Ad1 H H CN O O C2H5
番红霉素Yd2 H H CN NH2 H H
番红霉素Y2b H Qb CN NH2 H CH3
番红霉素Y2b-d H Qb CN NH2 H C2H5
番红霉素AH2 H H CN Ha OHa CH3
番红霉素AH2Ac H H CN H OAc CH3
番红霉素AH1 H H CN OHa Ha CH3
番红霉素AH1Ac H H CN OAc H CH3
番红霉素AR3 H H H H OH CH3a——排列为可互换的b——其中基团Q具有式(IX)
I型芳环见于由淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)分离的作为微量成分的番红霉素A、B和C；G和H；以及S中。一种由日本公开特许公报(Japenese Kokai)JP-A2 59/225189和60/084288公知的番红霉素A的氰基衍生物称作氰基醌胺(cyanoquinonamine)。番红霉素Y3、Yd1、Ad1和Yd2由淡紫灰链球菌在适当补充的培养基中经直接生物合成产生。由一个结构单元中的C-25上的氮链连接至另一结构单元中的C-14生成的番红霉素Y2b和Y2b-d二聚体也已经由淡紫灰链球菌在补充培养基中生成。由Rhodococcus amidophilus产生的番红霉素A在C-25的微生物还原产物番红霉素AR1(＝AH2)，也由番红霉素A经硼氢化钠非立体选择性化学还原反应制备，为差向异构体的1∶1混合物，接着经层析分离(另一异构体AH1极性较小)。通过相同的微生物转化制得其它的还原产物番红霉素AR3，即21-脱氰基-25-二氢-番红霉素A(＝25-二氢番红霉素B)。另一类型的番红霉素A经使用Nocardia株生物转化生成番红霉素B，并进一步经分枝杆菌属的一个菌株还原生成番红霉素AH1Ac。用于生物学研究的番红霉素AH2和AH1的25-O-乙酸酯也已化学制得。
已由海洋海绵动物中分离到式(X)I型化合物，见表II.
表II
得自海洋海绵动物的I型化合物的结构
取代基
R14a R14b R21 R矶海绵霉素A OH H H -C(CH3)＝CH-CH3矶海绵霉素B OC2H5 H H -C(CH3)＝CH-CH3矶海绵霉素C OH O O -C(CH3)＝CH-CH3矶海绵霉素D OC2H5 O O -C(CH3)＝CH-CH3矶海绵霉素E H H OH -C(CH3)＝CH-CH3矶海绵霉素F OCH3 H OH -C(CH3)＝CH-CH3锉海绵霉素 OCH3 H H -CH3
由在墨西哥采集的Reniera种海绵的抗微生物提取物中分离到矶海绵霉素A-D以及与其生物学相关的单体异喹啉矶海绵酮(renierone)和相关化合物。矶海绵霉素A的结构最初在C-3、C-11及C-13位确定为相反的立体化学。然而，仔细检查在Palau采集的相同海绵分离的新的相关化合物矶海绵霉素E和F的1H NMR数据，揭示矶海绵霉素的环连接形式与番红霉素的环连接相同。这一结果导致这样的结论，即先前认定的矶海绵霉素A至D的立体化学一定与番红霉素的立体化学相同。
在采自斯里兰卡水域的锉海绵属(Xestospongia)的一个海绵种中发现锉海绵霉素。
具有还原的氢醌环的式(XI)的II型化合物包括由淡紫灰链霉菌分离的番红霉素D和F以及由黄色粘球菌(Myxococcus xanthus)分离的番红霉素Mx-1和Mx-2。见表III。
表III
II型化合物
取代基化合物 R14a R14b R21 R25a R25b R25c番红霉素D O O H O O CH3番红霉素F O O CN O O CH3番红霉素Mx-1 H OCH3 OH H CH3 NH2番红霉素Mx-2 H OCH3 H H CH3 NH2
从培养的荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)中分离的抗生素番红菌素A和B中发现类型III构架。这些式(XII)的抗生素由四氢异喹啉-醌亚单位和四氢异喹啉酚亚单位构成。
其中R21在番红菌素A中为-H及在番红菌素B中为-OH。
由淡紫灰链霉菌也分离到番红霉素R，它为分类为类型IV骨架的唯一的化合物。式(XIII)化合物由氢醌环和一个酚性氧原子(phenolicoxygens)上的乙醇酸酯侧链构成，由于它的适度的毒性，该化合物确信为番红霉素A的一个前药。
所有这些已知化合物具有如下式(XIV)结构所示的五环(A)至(E)的稠环体系：
在海鞘素和一些其他化合物中环A和E是酚性环，而在另外的化合物中，特别是在番红霉素中，所述环A和E为醌性环。在已知化合物中，环B和D是四氢环，而环C是全氢环。
发明目的
对于海鞘素化合物及相关化合物的替代合成方法的需求依然存在。这样的合成路径可以提供合成已知抗肿瘤剂的更经济的路线，同时可以制备新的活性化合物。
发明概述
本发明涉及用于制备海鞘素或其他四氢异喹啉酚化合物的中间体、衍生物及相关结构化合物的合成方法。
在一个方面，本发明提供制备带有螺胺(spiroamine)-1，4-桥键的海鞘素产物的方法。所述方法包括使用1-不稳定的、10-羟基、18-保护的羟基、二-6，8-烯-5-酮的稠环化合物形成1，4桥键，其中所述稠环为式(XIV)。在本发明中，所述C-18保护基在引入螺胺前除去。
适用于新的合成方法的起始原料包括涉及天然双(四氢异喹啉)生物碱的化合物。这样的起始原料可以或者由在WO 0069862中介绍的可由不同液体培养基培养得到的不同类的番红霉素和番红菌素抗生素制得，或者由其他合成的或生物化学的方法制得。在此方面，WO0069862通过全文引用结合在本文中。本发明的PCT申请要求作为WO 0069862公开的PCT/GB 00/01852申请的优先权。其公开的而未出现在本说明书中的内容通过引用结合在本文中。
本发明优选的实施方案
在一个特别的方面，本发明涉及化合物中间体21在制备海鞘素743和相关化合物的许多新的合成方法中的用途。
中间体21具有5-烯丙氧基，其中所述烯丙基起作保护5-羟基的作用。可以理解，其他保护基可以易于应用，以及本发明一般延及其他此类5-保护的羟基化合物的用途。海鞘素743和相关化合物的生成
一般而言，中间体21或相关化合物转变成海鞘素产物包括以下重要转化：(a)通过例如在乙酸中与亚硝酸钠反应使NH2转变成OH。(b)E-环酚的保护。(c)通过使用保护的半胱氨酸侧链保护一级1-羟基功能团进行酯化。(d)烯丙基基团的脱保护和氧化。(e)通过环化反应建立桥环。(f)E-环酚和半胱氨酸部分的脱保护。(g)通过反式-胺化和Petter Spengler反应引入喹啉。
所述中间体化合物的高官能度必需使用对E-环酚及对半胱氨酸侧链的保护基团，以防止不需要的付反应。
如此，根据保护基的具体选择可以产生许多可供选择的中间体。
用于结合这些主要取决于对于酚环及半胱氨酸侧链胺所选保护基团的转化的不同可能顺序是可能的。
合成转化的总数也随着所选的保护基团的不同而改变。
通过图示，如下介绍用于从中间体21制备ET-743的六类典型途径的保护基团的不同组合的应用，此处所述中间体21也称作SF21。 方法 酚保护 半胱氨酸保护 步骤数 1 MOM Boc 12 2 MEM Boc 10 3 MEM Cbz 11 4 MOM Allloc 13 5 MEM Alloc 13 6 MOM Cbz 15
作为熟练的技术人员将容易理解，此处所介绍的反应流程可以以不同的方式修改和/或合并，并且可选的步骤顺序及其产生的化合物是本发明的部分。
另外，使用没有详述的其他保护基团的策略，也是本发明的部分。六种典型的合成路径的方法详述
各路径的全部反应流程见下述流程1至6。流程1-ET-743：半合成替代路径1流程2-ET-743：半合成替代路径2流程3-ET-743：半合成替代路径3流程4-ET-743：半合成替代路径4流程5-ET-743：半合成替代路径5流程6-ET-743：半合成替代路径6
在路径1中，通过包括用Troc使SF21胺被保护/脱保护的三个步骤完成E-环酚的保护。
对于路径1和2，使用Boc保护半胱氨酸侧链，使得酚和半胱氨酸基团在一步而不是两个分开的步骤中脱保护。对于其他路径，需要另外的脱保护步骤。
对于路径2，通过使用直接酯化方法及接着用MEM基团保护所述酚而避免中间体25。
在路径2和3中，E-环酚的保护推迟到重氮化和酯化步骤后进行，由此使所述酚不经路径1的三个步骤顺序而在单一步骤中得到保护。
对于路径1、2和3，用半胱氨酸衍生物直接酯化伯醇排除了使用甲硅烷基(路径4和5)对伯醇的非生产性保护/脱保护步骤，因而缩短了原顺序中的两步。
路径6仅在此设计了从中间体161起始的最后一步，该中间体可容易的由中间体21得到。
在路径4和5中，通过先前重氮化步骤生成的伯醇用硅保护，允许选择性的保护E-环酚并避免中间体25。在A-环修饰后(脱保护/氧化)除去该硅基团并且用半胱氨酸衍生物酯化所述伯醇。
这些变化是在WO 006982中给出路径的放大中发现的问题的直接结果。作为这些变化的结果，整个路径2缩短至三步并因而对于常规生产更适合和/或更便宜。方法总述
因此，鉴于路径1至6，本发明扩展至制备带有螺胺-1，4-桥键的海鞘素产物的方法，该方法包括使用1-不稳定的、10-羟基、18-保护的羟基、二-6，8-烯-5-酮稠环化合物形成1，4桥键，其中C-18保护在引入螺胺前除去。
在所述方法的一种修改中，海鞘素产物具有21-羟基，及所述方法包括转变21-氰基成为21-羟基。
典型的螺胺为螺喹啉，特别是海鞘素743的螺喹啉。
在优选的方法中，1-不稳定的、10-羟基、18-保护的羟基、二-6，8-烯-5-酮稠环化合物的18-保护基团是用MOM，甲氧基甲基保护的；或用MEM，甲氧基乙氧基甲基保护的。
合适的1-不稳定基团是下式的N-保护的半胱氨酰氧基亚甲基：
-CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-H。
在该式中Prot1典型为：Boc，t-丁氧羰基；Troc，2，2，2-三氯乙氧羰基；Cbz，苄氧羰基；或Alloc，烯丙氧基羰基。
在所述方法的一些实施方案中，在C-18保护的同一步骤中除去Prot1。
所述1-不稳定的基团可以由下式的1-取代基产生：
-CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-Prot2。
在本式中Prot2典型为Fm，9-芴基甲基。
下式中的1-取代基：
-CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-Prot2
可由-CH2-O-H取代基的酯化生成。
所述酯化可以在生成10-羟基、二-6，8-烯-5-酮结构之前或之后进行。
在一种变化中，要求保护的方法由1-氨基亚甲基、5-保护的羟基、 7，8-二氧基亚甲基、18-羟基、21-氰基稠环化合物起始。
所述1-氨基亚甲基可以暂时被保护以允许在18-羟基上保护，然后除去该暂时的保护。
或者，可在生成1-酯官能团后保护所述18-羟基。
在另一种变化中，所述1-氨基亚甲基被转化成1-羟基亚甲基以及该1-羟基亚甲基被暂时保护以允许在18-羟基上保护，然后除去该暂时保护。
所述稠环结构适合具有下式：
特别是其中R15是H。余下取代基中的一个或多个或全部可以如同海鞘素743中的取代基。
半合成
本发明允许在半合成的合成中使用已知化合物，番红菌素B，也称作醌胺(quinonamine)。
更通常地，本发明涉及由天然双(四氢异喹啉)生物碱起始用于生成海鞘素或者其他四氢异喹啉酚化合物中间体、衍生物及相关结构化合物的半合成方法。用于半合成方法的合适起始原料包括可得自不同液体培养基培养的各种番红霉素及番红菌素类抗生素以及得自海洋海绵动物的各种矾海绵霉素和锉海绵霉素化合物。
起始化合物的通式(XV)如下：其中：R1是酰胺基亚甲基基团如-CH2-NH-CO-CR25aR25bR25c，其中R25a和R25b形成酮基或者一个是-OH、-NH2或-OCOCH3而另一个是-CH2COCH3、-H、-OH或-OCOCH3，条件是当R25a是-OH或-NH2时，则R25b不是-OH，及R25c是-H、-CH3或-CH2CH3，或者R1是酰氧基亚甲基基团如-CH2-O-CO-R，其中R是-C(CH3)＝CH-CH3或-CH3；R5和R8独立选自-H、-OH或-OCOCH2OH，或者R5和R8都是酮基以及环A是对-苯并醌环；R14a和R14b都是-H或一个是-H而另一个是-OH、-OCH3或-OCH2CH3，或者R14a和R14b一起形成酮基；R15和R18独立选自-H或-OH，或者R5和R8都是酮基以及环A是对-苯并醌环；和R21是-OH或-CN。
此类化合物更常规的通式提供如下：其中，由R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10定义的取代基分别独立选自H、OH、OCH3、CN、＝O、CH3；其中X是包含在所述天然产物中的不同酰胺或酯官能团；其中每个点划线的环表示一个、两个或三个任选的双键。
因此，根据本发明，我们现在提供用于生产包括中间体11或21的中间体的半合成路径和因此用于生产海鞘素化合物以及phthalascidin和另外的化合物的半合成路径。本发明的半合成路径各自包含许多达到所需化合物的转化步骤。各步骤本身即是按照本发明的方法。本发明不限于所举例的路径，在适宜时，例如通过改变转化步骤的顺序，或者通过改变所用的保护基团，可以提供其他的路径。
特别是，本发明涉及提供通式(XVI)的21-氰基起始原料：其中R1、R5、R8、R14a、R14b、R15和R18如本文所定义。
其他在21位带有不同取代基的式(XVI)化合物也可作为可能的起始原料。一般来说，经式(XV)化合物的21-羟基的亲核置换能够生成任一衍生物，其中R21是一与所选化合物顺位的(cis a candidate)羟基。合适的21-取代基的实例包括但不限于：
巯基基团；
烷硫基基团(具有1到6个碳原子的烷基基团)；
芳硫基基团(具有6到10个碳原子并且是未取代的或由1到5个取代基取代的芳基基团，所述取代基选自例如具有1到6个碳原子的烷基基团、具有1到6个碳原子的烷氧基基团、卤原子、巯基基团及硝基基团)；
氨基基团；
一或二烷基氨基(所述烷基或每个烷基具有1到6个碳原子)；
一或二芳基氨基基团(所述芳基或每个芳基如上述涉及芳硫基基团的定义)；
式-C(Ra)(Rb)-C(＝O)Rc的a-羰基烷基基团，其中
Ra和Rb选自氢原子、具有从1到20个碳原子的烷基基团、芳基基团(如上述涉及芳硫基基团的定义)和芳烷基基团(其中具有1到4个碳原子的烷基基团由如上述涉及芳硫基基团的定义的芳基基团取代)，前提是Ra和Rb之一是氢原子；
Rc选自氢原子、具有从1到20个碳原子的烷基基团、芳基基团(如上述涉及芳硫基基团的定义)、芳烷基基团(其中具有1到4个碳原子的烷基基团由如上述涉及芳硫基基团的定义的芳基基团取代)、具有1到6个碳原子的烷氧基基团、氨基基团或者如上定义的一或二烷基氨基基团。
这样，在更常规的方面，本发明涉及其中第一步是用一种亲核试剂生成21-衍生物的方法。我们把这种化合物称作21-Nuc化合物。
21-氰基的存在对于一些终产物，尤其是海鞘素770和phthalascidin是必需的，而对于其他终产物，21-氰基起着可易于转化成另一取代基如海鞘素743的21-羟基或21-羟基phthalascidin的保护基的作用。使用21-氰基化合物作为起始原料有效地稳定了后续的合成步骤过程中产生的分子，直至它任选被除去。其他21-Nuc化合物可以提供此种益处及其他益处。
在一个重要的方面，本发明包括通式(XVI)的21-氰基化合物在制备双-或三-(四氢异喹啉酚)化合物中的用途。可以制备的产物包括诸如中间体11或21，及海鞘素，以及新的和已知的相关结构的化合物。
优选的起始原料包括式(XV)或(XVI)化合物，其中R14a和R14b均为氢。优选的起始原料也包括式(XV)或(XVI)化合物，其中R15为氢。而且，优选的起始原料还包括式(XV)或(XVI)化合物，其中环E是一酚环。优选的起始原料还包括式(XV)或(XVI)化合物，其中R5、R8、R15和R18中的至少一个，最好至少两个或三个不为氢。
本发明合适的起始原料的实例包括番红霉素A、番红霉素B、番红霉素C、番红霉素G、番红霉素H、番红霉素S、番红霉素Y3、番红霉素Yd1、番红霉素Ad1、番红霉素Yd2、番红霉素AH2、番红霉素AH2Ac、番红霉素AH1、番红霉素AH1Ac、番红霉素AR3、矾海绵霉素A、矾海绵霉素B、矾海绵霉素C、矾海绵霉素D、矾海绵霉素E、矾海绵霉素F、锉海绵霉素、番红霉素D、番红霉素F、番红霉素Mx-1、番红霉素Mx-2、番红菌素A、番红菌素B和番红霉素R。对于基团R21，优选起始原料在21位置具有氰基。
在一个特别优选的方面，本发明包括一个半合成方法，其中对番红菌素B使用转化的步骤：
番红菌素B
番红菌素B有一个与海鞘素密切相关的环系。该化合物具有相同的五环结构及在右旋芳环，环E上具有相同的取代形式。番红菌素B对于一些在ET-743的全合成的合成中间体，特别是中间体11或21也有非常密切的相似性。使用已完好建立的方法可将此种中间体转化成ET-743。因此番红菌素B向中间体11或21的合成转化将提供一种得到ET-743的半合成方法。
因此，我们提供由这种化合物番红菌素B制得的中间体11或21，以及由中间体11或21衍生的化合物，特别是海鞘素化合物。我们进一步提供由番红菌素B制得的phthalascidin。本发明也涉及番红菌素B在生产中间体11或21、海鞘素化合物和本发明的其他中间体中的用途。本发明也涉及本文中描述的衍生自其他提及的起始原料的化合物以及那些化合物在此类化合物的生产中的用途。
本发明更优选的起始原料具有21-氰基基团。目前本发明最优选的化合物是式2化合物。该化合物直接得自番红菌素B并被认为是半合成方法的关键中间体。
化合物2
在相关的方面，我们提供经荧光假单胞菌的(Pseudomonasfluorescens)番红菌素B-产生株发酵，并用氰化物离子处理液体培养基得到的氰基番红菌素B。优选的荧光假单胞菌株是A2-2菌株，FERMBP-14，在EP 055299的方法中使用了该菌株。氰化物离子的合适来源是氰化钾。在通常处理中，过滤所述液体培养基并加入过量的氰化物离子。在搅拌适当时间，如搅拌1小时后，pH呈碱性，如pH9.5，接着从有机提取物得到粗提物，它可经进一步纯化得到氰基番红菌素B。
为了避免疑义，在本发明说明书中指出的立体化学是基于我们对于天然产物正确立体化学的理解。对于在已指定的立体化学中发现的某种程度的错误，需要对在本专利说明书全文中给出的结构式中进行适当改正。而且在某种程度上说，可以对于所述合成进行修饰，本发明扩展至立体异构体。
本发明典型的产物具有式(XVIIb)以及衍生物，包括其酰基衍生物，特别是其中R5是乙酰氧基或其它最多可达4个碳原子的酰氧基的衍生物，其中R1和R4一起形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)基团：R5是-H或-OH；R7和R8一起形成基团-O-CH2-O-；R14a和R14b均为-H或一个为-H而另一个为-OH、-OCH3或-OCH2CH3，或者R14a和R14b一起形成酮基；及R15是-H或-OH；R21是-H、-OH或-CN。
在式(XVIIb)中，R1典型地与R4一起形成式(IV)或(V)基团。所述基团R18通常是被保护的。通常R21是氰基。
优选R14a和R14b为氢。优选R15为氢。O-酰基衍生物合适为脂族O-酰基衍生物，特别是1至4个碳原子的酰基衍生物，以及典型为O-乙酰基衍生物，特别是在5-位的O-乙酰基衍生物。
合适的酚基和羟基的保护基包括醚和酯，例如烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、烷氧基甲硅烷基烷氧基烷基、烷硫基烷基、芳硫基烷基、叠氮基烷基、氰基烷基、氯代烷基、杂环基、芳酰基、卤代芳酰基、环烷基烷基、链烯基、环烷基、烷基芳烷基、烷氧基芳烷基、硝基芳烷基、卤代芳烷基、烷基胺基羰基芳烷基、烷基亚磺酰基芳烷基、烷基甲硅烷基的醚及其他醚，及芳基酰基、芳烷基碳酸酯、脂族碳酸酯、烷基亚磺酰基芳烷基碳酸酯、烷基碳酸酯、芳基卤代烷基碳酸酯、芳基链烯基碳酸酯、芳基氨基甲酸酯、烷基氧膦基、烷基硫膦基、芳基硫膦基、芳烷基的磺酸酯及其他酯。此类基团可以任选由先前提及的在R1中的基团取代。
对于胺的合适的保护基包括氨基甲酸酯，酰胺和其他保护基团，例如烷基、芳烷基、磺基或卤代芳烷基、卤代烷基、烷基甲硅烷基烷基、芳烷基、环烷基烷基、烷基芳烷基、杂环基烷基、硝基芳烷基、酰氨基烷基、硝基芳基二硫代芳烷基、二环烷基羧酰胺基烷基、环烷基、链烯基、芳基链烯基、硝基芳基链烯基、杂环基链烯基、杂环基、羟基杂环基、烷基二硫代、烷氧基-或卤代-或烷基亚磺酰基芳烷基、杂环基酰基，及其他氨基甲酸酯，以及链烷酰基、卤代链烷酰基、芳基链烷酰基、链烯酰基、杂环基酰基、芳酰基、芳基芳酰基、卤代芳酰基、硝基芳酰基，及其他酰胺，以及烷基、链烯基、烷基甲硅烷基烷氧基烷基、烷氧基烷基、氰基烷基、杂环基、烷氧基芳烷基、环烷基、硝基芳基、芳烷基、烷氧基-或羟基-芳烷基，及许多其他基团。这些基团可以任选由先前提及的R1中的基团取代。
此类保护基团的例子于下表中给出：
-OH基团的保护
醚 缩写
甲基
甲氧甲基 MOM
苄氧甲基 BOM
甲氧基乙氧甲基 MEM
2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基 SEM
甲硫基甲基 MTM
苯硫基甲基 PTM
叠氮基甲基
氰基甲基
2，2-二氯-1，1-二氟乙基
2-氯乙基
2-溴乙基
四氢吡喃基 THP
1-乙氧基乙基 EE
苯甲酰甲基
4-溴苯甲酰甲基
环丙基甲基
烯丙基
炔丙基
异丙基
环己基
寂丁基
苄基
2，6-二甲基苄基
4-甲氧基苄基 MPM或PMB
邻-硝基苄基
2，6-二氯苄基
3，4-二氯苄基
4-(二甲基氨基)羰基苄基
4-甲基亚磺酰基苄基 Msib
9-蒽基甲基
4-吡啶甲基
七氟-对甲苯基
四氟-4-吡啶基
三甲基甲硅烷基 TMS
叔丁基二甲基甲硅烷基 TBDMS
叔丁基二苯基甲硅烷基 TBDPS
三异丙基甲硅烷基 TIPS
酯
甲酸芳基酯
乙酸芳基酯
乙酰丙酸芳基酯
新戊酸芳基酯 ArOPv
苯甲酸芳基酯
9-氟羧酸芳基酯
碳酸芳基甲基酯
碳酸1-金刚烷基酯
碳酸叔丁基酯 BOC-OAr
4-甲基亚磺酰基苄基碳酸酯 Msz-Oar
2，4-二甲基戊-3-基碳酸酯 Doc-Oar
2，2，2-三氯乙基碳酸芳基酯
芳基乙烯基碳酸酯
碳酸芳基苄酯
氨基甲酸芳基酯
二甲基氧膦基 Dmp-OAr
二甲基硫膦基 Mpt-OAr
二苯基硫膦基 Dpt-Oar
甲磺酸芳基酯
甲苯磺酸芳基酯
2-甲酰基苯磺酸芳基酯
-NH2基团的保护
氨基甲酸酯 缩写
甲基
乙基
9-芴基甲基 Fmoc
9-(2-硫代)芴基甲基
9-(2，7-二溴代)芴基甲基
17-四苯并[a，c，g，i]芴基甲基 Tbfmoc
2-氯-3-茚基甲基 Climoc
苯并[f]茚-3-基甲基 Bimoc
2，7-二-叔丁基[9-(10，10-二氧代-10，10，10，10-
四氢硫代呫吨基)]甲基 DBD-Tmoc
2，2，2-三氯乙基 Troc
2-三甲基甲硅烷基乙基 Teoc
2-苯乙基 hZ
1-(1-金刚烷基)-1-甲基乙基 Adpoc
2-氯乙基
1，1-二甲基-2-氯乙基
1，1-二甲基-2-溴乙基
1，1-二甲基-2，2-二溴乙基 DB-t-BOC
1，1-二甲基-2，2，2-三氯乙基 TCBOC
1-甲基-1-(4-联苯基)乙基 Bpoc
1-(3，5-二叔丁基苯基)-1-1-甲基乙基 t-Burmeoc
2-(2’-和4’-吡啶基)乙基 Pyoc
2，2-双(4’-硝基苯基)乙基 Bnpeoc
n-(2-新戊酰氨基)-1，1-二甲基乙基
2-[(2-硝基苯基)二硫代]-1-苯乙基 NpSSPeoc
2-(n，n-二环己基甲酰胺基)乙基
叔丁基 BOC
1-金刚烷基 1-Adoc
2-金刚烷基 2-Adoc
乙烯基 Voc
烯丙基 Aloc或Alloc
1-异丙基烯丙基 Ipaoc
肉桂基 Coc
4-硝基肉桂基 Noc
3-(3’-吡啶基)丙-2-烯基 Paloc
8-喹啉基
n-羟基哌啶基
烷基二硫代
苄基 Cbz或Z
对-甲氧基苄基 Moz
对-硝基苄基 PNZ
对-溴苄基
对-氯苄基
2，4-二氯苄基
4-甲基亚磺酰基苄基 Msz
9-蒽基甲基
二苯基甲基
吩噻嗪基-(10)-羰基
n’-对-甲苯磺酰基氨基羰基
n’-苯基氨基硫代羰基
酰胺
甲酰胺
乙酰胺
氯乙酰胺
三氟乙酰胺 TFA
苯基乙酰胺
3-苯基丙酰胺
戊-4-烯酰胺
吡啶酰胺
3-吡啶基甲酰胺
苯甲酰胺
对-苯基苯甲酰胺
n-苯邻二甲酰亚胺
n-四氯苯邻二甲酰亚胺 TCP
4-硝基-n-苯邻二甲酰亚胺
n-二硫代琥珀酰亚胺 Dts
n-2，3-二苯基马来酰亚胺
n-2，5-二甲基吡咯
n-2，5-双(三异丙基甲硅烷氧基)吡咯 BIPSOP
n-1，1，4，4-四甲基二硅氮杂环戊烷加合物
(disiliazacyclopentante adduct) STABASE
1，1，3，3-四甲基-1，3-二硅杂异二氢吲哚 BSB
特殊的-NH保护基团
n-甲基胺
n-叔丁基胺
n-烯丙基胺
n-[2-三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基胺 SEM
n-3-乙酰氧基丙基胺
n-氰基甲基胺
n-(1-异丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯啉-3-基)胺
n-2，4-二甲氧基苄基胺 Dmb
2-氮杂降冰片烯
n-2，4-二硝基苯基胺
n-苄基胺 Bn
n-4-甲氧基苄基胺 MPM
n-2，4-二甲氧基苄基胺 DMPM
n-2-羟基苄基胺 Hbn
n-(二苯基甲基)氨基 DPM
n-双(4-甲氧基苯基)甲基胺
n-5-二苯并环庚基胺 DBS
n-三苯基甲基胺 Tr
n-[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]氨基 MMTr
n-9-苯基芴基胺(flurenyl) Pf
n-二茂铁基甲基胺 Fcm
n-2-吡啶甲基胺n’-氧化物
n-1，1-二甲硫基亚甲基胺
n-亚苄基胺(benzylideneamine)
n-对-甲氧基亚苄基胺
n-二苯基亚甲基胺
n-(5，5-二甲基-3-氧代-1-环己烯基)胺
n-硝基胺
n-亚硝基胺
二苯基磷酰胺(-phosphinamide) Dpp
二甲硫基磷酰胺 Mpt
二苯硫基磷酰胺 Ppt
二苄基氨基磷酸酯
2-硝基苯基亚磺酰胺 Nps
n-1-(2，2，2-三氟-1，1-二苯基)乙基亚磺酰胺 TDE
3-硝基-2-吡啶亚磺酰胺 Npys
对-甲苯氨磺酰 Ts
苯氨磺酰
本发明特别的海鞘素产物包括式(XVIII)的化合物和其酰基衍生物，更优选包括5-乙酰基衍生物的5-酰基衍生物。所述式(XVIII)如下：其中，R1和R4形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基团更特别为(IV)或(V)基团；R21是-H、-OH或-CN，特别是-OH或-CN。
通常，由21-氰基起始化合物转化成例如，式(XVIII)的海鞘素产物的步骤包括：
a)如果需要，将环E的醌体系转化成酚体系；
b)如果需要，将环A的醌体系转化成酚体系；
c)将环A的酚体系转化成亚甲基二氧基苯酚环；
d)在环B上形成跨过1-位和4-位的式(IV)、(VI)或(VII)的桥接螺环系；及
e)适当时衍化，如酰化。
步骤(a)，如果需要，将环E的醌体系转化成酚体系，可以通过常规的还原方法实现。尽管可以使用其他的还原体系，合适的试剂体系是氢与钯-碳催化剂。
步骤(b)，如果需要，类似于步骤(a)，将环A的醌体系转化成酚体系，不需要更详细叙述。
步骤(c)，将环A的酚体系转化成亚甲基二氧基苯酚环，可以通过几种方法实现，很可能包括步骤(b)。例如，可以将醌环A在7-位的甲氧基取代基脱甲基，并还原成二氢醌，接着用合适的亲电试剂诸如CH2Br2、BrCH2Cl，或类似的二价试剂捕捉而直接生成亚甲基二氧基环系；或者使用二价试剂如硫代羰基二咪唑捕捉，使产生可转化成所需环的取代的亚甲基二氧基环系。
步骤(d)典型地通过用可帮助生成所需桥键的桥键形成剂在1-位适当取代来实现，在4-位形成一个exendo醌的甲基化物(methide)，并使该甲基化物与1-取代基反应得到桥键结构。优选的桥键形成剂具有式(XIX)：其中，Fu表示保护官能团，诸如基团-NHProt4a，Prot3是保护基，以及虚线显示任选的双键。
合适地，通过首先在环A和B的结合部位10-位引入羟基，生成所述甲基化物，得到式(XX)的部分结构：
或更优选式(XⅪ)的部分结构：
其中，基团R”是为所需的式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基团进行选择的。对于前两个此类基团，基团R”一般取-CHFu-CH2-SProt3的形式。然后可以除去保护基并且适宜时可加以修饰得到所需的化合物。
在通过引用结合到本文中的美国专利5721362中提供了用于步骤(d)的典型方法。具体的参考见该美国专利中的栏目8、步骤(1)及实施例33以及相关内容。
在步骤(e)的衍生化可以包括例如使用Ra-CO-基团酰化，其中Ra可以是各种基团，诸如烷基、烷氧基、链烯基、芳烷基、芳基亚烷基、氨基酸酰基，或杂环基，各基团任选由卤代基、氰基、硝基、羧基烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、杂环基、杂环氧基、烷基、氨基或取代的氨基取代。其它酰化剂包括异硫氰酸酯，例如异硫氰酸芳酯，特别是异硫氰酸苯酯。Ra的烷基、烷氧基或亚烷基基团具有1至6或12个碳原子并可以是线性的、分支的或环状的。芳基典型为苯基、联苯基或萘基。杂环基团可以是芳族的或部分未饱和的或完全未饱和的并适合具有4至8个环原子，更优选具有5或6个环原子及一个或多个选自氮、硫和氧的杂原子。
并非穷举，典型的Ra基团包括烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、卤代烷氧基烷基、芳基亚烷基、卤代烷基芳基亚烷基、酰基、卤代酰基、芳烷基、链烯基及氨基酸。例如，Ra-CO-可以是乙酰基、三氟乙酰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、异戊酰羰基、反式-3-(三氟甲基)肉桂酰基羰基、七氟丁酰羰基、癸酰羰基、反式-肉桂酰羰基、丁酰羰基、3-氯丙酰羰基、肉桂酰羰基、4-甲基肉桂酰羰基、氢化肉桂酰(hydrocinnamoyl)羰基，或反式-己烯酰羰基，或者丙氨酰基、精氨酰基、天冬氨酰基、天冬酰基、胱氨酰基、谷氨酰基、谷氨酰胺酰基、甘氨酰基、组氨酰基、羟脯氨酰基、异亮氨酰基、亮氨酰基、赖氨酰基、甲硫氨酰基、苯丙氨酰基、脯氨酰基、丝氨酰基、苏氨酰基、甲状腺原氨酰基、色氨酰基、酪氨酰基、缬氨酰基，以及其它非常少见的氨基酸酰基基团，还有苯二酰亚氨基及其它环酰胺。在所列的保护基团中可发现其它例子。其中-CO-Ra衍生自氨基酸及包括氨基的化合物可以自身形成酰基衍生物。合适的N-酰基化合物包括可以依次形成N-酰基衍生物的二肽类。
通过图示方法，目前将式2氰基番红菌素B化合物转化成ET-743是可行的，结果产生了比先前介绍的制备ET-743的方法更短及更直接的方法。
使用化合物29制备ET-743的逆合成分析在流程I中描述。流程I
按照上述流程I，可以按21的线性步骤得到ET-743。该方法经一系列反应将氰基番红菌素B转化成中间体25，所述反应主要包括(1)除去置于环A上的甲氧基，(2)还原环A并经一釜法形成亚甲基二氧基，(3)水解位于碳1上的酰胺官能团，(4)将所得胺基转化成为羟基。而且，所述方法直接使用半胱氨酸残基29生成中间体27，避免在化合物25的环B的1位的伯醇官能团的保护和脱保护。为了具有与已存在的烯丙基和MOM基团相容的能力，用β-β-β-三氯乙氧基羰基保护基基团在半胱氨酸衍生物Int-29的氨基上进行保护。中间体27被直接氧化及环化。这些情况与在合成的后面阶段使用的不同脱保护策略一起形成新的路径，并且该路径比US 5721362中的方法更易于修改以适于工业化生产。
2-氰基化合物转化成中间体25通常包括下述步骤(见流程II)：通过使2与叔丁氧羰基酸酐反应生成式14保护的化合物；通过在乙腈中的溴甲基甲基醚与二异丙基乙胺反应将14转变为式15的二-保护的化合物；通过与氢氧化钠的甲醇溶液反应选择性地消除15中醌系统的甲氧基，得到式16化合物；
接着通过采用下面的优选程序将16转化为式18的亚甲基-二氧基化合物：(1)在氢气压下用10％Pd/C还原16化合物的醌基；(2)通过与溴代氯甲烷和碳酸铯在氢气压下反应使氢醌中间体转化成式17的亚甲基二氧基化合物；(3)通过将自由羟基保护为OCH2R基团，将17转变成式18化合物。此反应使用BrCH2R和碳酸铯进行，其中R可以是芳基、CH＝CH2、OR’等；
通过与HCl的二氧六环的溶液反应消除18的叔丁氧基羰基和甲氧基甲基保护基得到式19化合物。该反应通过使18与三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液混合也可以完成；
通过19与异硫氰酸苯酯反应生成式20的硫脲化合物；
通过与HCl的二氧六环的溶液反应将式20化合物转变为式21的胺化合物；
通过与氯甲酸三氯乙基酯和吡啶反应将式21化合物转变为N-Troc衍生物22；
通过22与溴甲基甲基醚和二异丙基乙胺反应生成式23的保护的羟基化合物；
通过与乙酸和锌反应将式23化合物转变为N-H衍生物24；
通过与在乙酸中的亚硝酸钠反应将式24化合物转变为式25的羟基化合物。或者，可以使用在乙酸和乙腈混合物中氮的四氧化物，接着用氢氧化钠处理。也可以在乙酸酐-乙酸混合物中使用亚硝酸钠，然后用氢氧化钠处理。流程II
使用半胱氨酸衍生物29使中间体25化合物转化为ET-743，通常包括下述步骤(见流程III)：流程III
通过用(S)-N-2，2，2-三氯乙氧羰基-S-(9H-芴-9基甲基)半胱氨酸29保护伯羟基官能团将式24化合物转变为衍生物30；
经用氢化三丁基锡和二氯化钯-双(三苯基膦)裂解烯丙基将式30的保护的化合物转变为酚衍生物31；
经在低温下用苯亚硒酸酐氧化将式31酚化合物转变为式32化合物；通过下述顺序将式32羟基化合物转变为内酯33：(1)使式32化合物与2当量的三氯甲磺酸(triflic)酐和5当量DMSO反应；(2)接着与8当量二异丙基乙胺反应；(3)然后与4当量叔丁基醇反应；(4)接着与7当量2-叔-丁基-1，1，3，3-四甲基胍反应；(5)然后与10当量乙酸酐反应；
通过用TMSI除去MOM保护基将33内酯化合物转变为羟基化合物34；
通过与Zn/AcOH反应消去式34化合物的N-三氯乙氧羰基基团生成化合物35；
经与N-甲基吡啶鎓甲醛(carboxaldehyde)氯化物反应，然后与DBU反应将氨基化合物35转变为相应的式36的a-酮基内酯化合物；
通过将式36化合物与3-羟基-4-甲氧基苯基乙胺反应生成ET-770；通过与AcN/H2O混合物中的硝酸银反应，将ET-770转化为ET-743。
中间体11和相关中间体的生成
所述逆合成分析在下述顺序中描述。
在本发明中，关键的一类中间体包括中间体11和具有通式(XXI)的化合物：其中Prot1和Prot2是羟基保护基，优选为不同的保护基。对于中间体11自身，基团Prot1是甲氧基甲基，而基团Prot2是叔丁基二苯基甲硅烷基团。
将21-氰基化合物转变为中间体11或式(XXI)的相关中间体通常包括下述步骤：
a)如果需要，将环E的醌体系转变成酚体系；
b)在E环的18-位形成-OProt1基团；
c)在B环的1-位形成-CH2-OProt2基团；及
d)如果需要，将环A的醌体系转变成酚体系；
e)将环A的酚体系转变成亚甲基二氧基酚环。
无须特殊说明，步骤(b)，在E环的18-位形成-OProt1基团，是对于酚基团的典型保护反应。根据保护基团的性质选择合适的条件。其他步骤类似其他的反应。
步骤(b)，在B环的1-位形成-CH2-OProt2基团，通常是通过在1-位形成-CH2NH2基团并接着将胺官能团转化成羟基官能团并加以保护而完成。因此当所述起始原料的R1基团是-CH2NH-CO-CR25aR25bR25c时，则可除去N-酰基基团。当起始原料的R1基团是-CH2-O-CO-R时，则其中取代基R1相同的海鞘素产物无需任何变化。对于其他产物，需除去O-酰基基团。多种方法可以用于进行此种脱酰作用。在一种变化中，所述脱酰作用和转化成羟基官能团可一步完成。此后，可以将该羟基酰化或者另外转化得到适当的R1基团。
美国专利号5721362描述通过一个长且多步骤的合成方法制备ET-743的合成方法。该合成的中间体之一是中间体11。使用氰基番红菌素B作为起始原料能够得到中间体11，同时提供更短的路径制备此种化合物并因而改进制备ET-743的方法。
经上述方法可以将氰基番红菌素B转化成中间体25。使用下述见于流程VII的步骤可以由中间体25得到中间体11。
在碱存在下，通过使25与叔-丁基二苯基甲硅烷基氯反应生成式26的保护的羟基化合物；
最后用氢化三丁基锡和二氯化钯-双(三苯基膦)分解26的烯丙基基团，导致生成中间体11。流程VII
本发明将番红菌素B转化为中间体11的合成方法的一个实施方案是修改和扩展流程VIII并包括以下的系列步骤：
通过与KCN在酸性介质中反应由CN选择性替换OH，将番红菌素B化合物立体选择性地转化为式2化合物；
通过式2化合物与异氰酸苯酯反应生成式3硫脲化合物；
通过经在酸性介质中水解，接着加入乙酸酐将式3的硫脲化合物转化成式5的乙酰胺；经在酸介质中用碳酸氢钠猝灭所述水解，可以分离式4的中间体胺化合物，但该中间体是高度不稳定的，并迅速转化成称作化合物6的五元环亚胺；
经与溴代甲基甲基醚和二异丙基乙胺在二氯甲烷中反应生成保护的式7化合物；
经与氢氧化钠的甲醇溶液反应，对式7化合物的醌体系的甲氧基选择性脱去甲基成为式8化合物；
经优选的下述顺序将式8化合物转化为式9亚甲基二氧基化合物：(1)在氢气压下用10％Pd/C还原化合物8的醌基团；(2)在氢气压下与溴代氯甲烷和碳酸铯反应将所述氢醌中间体转化成式9的亚甲基二氧基化合物；(3)经与BrCH2R和碳酸铯反应将自由羟基保护为OCH2R基团，使式9化合物转化成式10化合物，其中R可以是芳基、CH＝CH2、OR’等；
通过与氮的四氧化物在乙酸和乙酸的乙酸乙酯(乙酸酐)的混合物中反应，接着用氢氧化钠处理将式10化合物的乙酰胺基团转化为相应的式25的羟基；或者可以使用亚硝酸钠在乙酸酐乙酸的混合物中反应，接着用氢氧化钠处理；或者经与肼反应或者与Boc2O、DMAP反应，接着经肼处理可以将式10化合物的乙酰胺基转化成伯胺基团；可以将此伯胺转化成相应的羟基(式25化合物)，即通过用苯磺酸4-甲酰基-1-甲基吡啶鎓或其他吡啶鎓离子将该伯胺经氧化转化为相应的醛，接着经DBU或其他碱处理并进一步水解，并接着用氢化锂铝或其他还原剂将该醛还原为相应的羟基；
通过与叔-丁基二苯基甲硅烷基氯和二甲基氨基吡啶在二氯甲烷中反应生成式26的保护的化合物(流程VII)；
经在还原性条件或酸性条件下反应的OCH2R保护基团的脱保护，将式26的甲硅烷基化化合物转化成为中间体11。典型的方法是在氢气氛下使用钯黑，或TFA水溶液或者氢化三丁基锡和二氯双(三苯基膦钯)。流程VIII
在另外的优选的修饰方案中，使用扩展的流程II的方法可以将式2氰基化合物转化为中间体11，该方法包括进一步的步骤：
通过25与叔-丁基二苯基甲硅烷基氯在碱存在下反应生成式26的保护的羟基化合物；
最后用氢化三丁基锡和二氯化钯-双(三苯基膦)分解26上的烯丙基基团导致生成中间体11。
因此，经这些或其他路径，有可能将氰基番红菌素B转化成许多具有强效抗肿瘤治疗活性的中间体和衍生物。这些中间体可以由已经介绍的化合物起始制备或者使用其它的路径制备。新的中间体化合物
按照前述解释，可以看到本发明提供新的中间体化合物。根据环A，所述中间体具有式(XXIIa)：或具有式(XXIIb)：其中：R1是-CH2NH2或-CH2OH，或者是此基团的保护的或衍生的形式以及R4是-H；或R1a和R4一起形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基团：R5是-OH，或者是此基团的保护的或衍生的形式；R14a和R14b都是-H或一个是-H而另一个是-OH，或者是此基团的保护的或衍生的形式、-OCH3或-OCH2CH3，或R14a和R14b一起形成酮基基团；R12是-H、-CH3、-CH2CH3；R15是-H、-OH，或此基团的保护的或衍生的形式；以及R18是-OH，或此基团的保护的或衍生的形式。
在一个实施方案中，优选至少R1、R5、R14a、R14b、R15或R18是保护的或衍生的基团。
在本发明的一个不同方案中，基团R1不是叔-丁基二苯基甲硅烷基取代基和/或基团R18不是甲氧基甲基。
优选R1是-CH2NH2或-CH2OH，或者是此基团的保护的或衍生的形式以及R4是-H；或R1a和R4一起形成下式基团：优选R14a和R14b均为-H。一类优选的中间体包括确定为化合物25的下式化合物：
因此该类优选的化合物具有所述通式，其中基团MOM由任一其他保护基团替换。
其他优选的中间体包括确定为化合物45和43的化合物(流程IX)。流程(IX)
其他N-酰基衍生物可以容易地由化合物45制得并是本发明的重要部分。合适的酰基包括前述的酰基。相应的21-羟基化合物也是有用的并且是在我们发现的活性化合物之中的化合物。新的活性化合物
我们另外发现，本发明中我们最初制备用作中间体的一些的化合物具有另外的治疗癌症，诸如白血病、肺癌、结肠癌、肾癌和黑色素瘤的活性。
因此，本发明提供治疗任何哺乳动物，特别是治疗患有癌症的人类的方法，该方法包括给予患病的个体治疗有效量的本发明的化合物，或其药用组合物。
本发明也涉及药物制剂，所述制剂包含作为活性成分的本发明的一种或多种化合物及其制备方法。
药用组合物的实例包括任何固体(片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂等)或液体(溶液剂，悬浮剂或乳剂)与合适的组分，或口服、局部或胃肠外给药，并且它们可以含有纯的化合物或与任何载体或其他药理学活性化合物联合给予。当胃肠外给药时，这些组合物可能需要灭菌。
本发明的化合物或组合物的给药可以是任何适宜的方法，例如静脉输注、口服制剂、腹腔及静脉制剂。我们优选使用输注时间多达24小时，更优选2至12小时，最优选2至6小时。在医院不经过夜住院即允许治疗的短时间输注是特别优选的。然而如果需要，输注可能长达12至24小时或甚至更长时间。输注可以在适当的间隔，例如2-4周时进行。含有本发明的化合物的药用组合物可以通过脂质体或微球(nanosphere)包囊、以缓释制剂或其他标准传递方式传递。
正确的化合物剂量将根据具体的剂型、应用的方法、特定的位置、治疗的对象和治疗的肿瘤而变化。其他因素如年龄、体重、性别、饮食、给药时间、排泄速率、宿主的状态、联合用药的情况、反应敏感性和疾病的严重程度都应予以考虑。可以在最大耐受剂量范围内连续进行或者周期性进行给药。
本发明的化合物和组合物可以与其他药物合用以提供联合治疗。其他药物可以成为同一组合物的部分，或者作为分开的组合物提供以便在相同时间或不同时间给药。所述其他药物的特性并未特殊限定，合适的备选药物包括：
a)具有抗有丝分裂作用的药物，特别是靶向细胞骨架成分的药物，包括微血管调节剂诸如紫杉烷药物(例如紫杉醇、红豆杉醇(paclitaxel)、紫杉替勒(Taxotere)、多西紫杉醇(docetaxel)、鬼臼毒素(podophylotoxins)或长春花生物碱(长春碱、长春新碱)；
b)抗代谢药物诸如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨、嘌呤类似物如喷司他丁、甲氨碟呤；
c)烷化剂诸如氮芥(例如环磷酰胺或异环磷酰胺)；
d)靶向DNA的药物诸如蒽环霉素类(antracycline)药物阿霉素、多柔比星、表阿霉素(Pharmorubicin)或表柔比星；
e)靶向拓扑异构酶的药物诸如依托泊苷；
f)激素或激素激动剂或拮抗剂诸如雌激素、雌激素拮抗剂(他莫昔芬及相关化合物)和雄激素、氟他胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林、环丙孕酮或奥曲肽；
g)靶向肿瘤细胞中的信号转导的药物包括抗体衍生物例如赫赛汀(herceptin)；
h)烷基化药物诸如铂制剂(顺铂、碳铂(carbonplatin)、奥沙利铂、伯尔定(paraplatin))或亚硝基脲(nitrosoureas)；
i)有效影响肿瘤代谢的药物诸如基质金属蛋白酶抑制剂；
j)基因治疗和反义药物；
k)抗体治疗；
1)海洋来源的其他生物活性化合物，特别是didemnins诸如aplidine；
m)类固醇类似物，特别是地塞米松；
n)抗炎药物。特别是地塞米松；以及
o)抗催吐药物，特别是地塞米松。
本发明也扩展至本发明的化合物在治疗方法中的用途，及所述化合物在制备治疗癌症的组合物中的用途。细胞毒活性
细胞培养。使细胞在伊格尔极限必需培养基(Eagle’s MinimumEssential Medium)中保持对数期增长，该培养基加有Earle’s平衡盐、2.0mM L-谷氨酸、非必需氨基酸，但不加碳酸氢钠(EMEM/neaa)；补充10％胎牛血清(FCS)、10-2M碳酸钠和0.1g/l青霉素G+硫酸链霉素。
为确定和比较这些化合物的抗肿瘤活性，已经使用Bergeron(1984)等介绍的已采用的方法进行样品筛选步骤。使用的肿瘤细胞系是P-388(得自DBA/2小鼠淋巴瘤的悬浮培养物)、A-549(人肺癌的单细胞层培养物)、HT-29(人结肠癌的单细胞层培养物)和MEL-28(人黑色素瘤的单细胞层培养物)。
将P-388细胞用1ml含有指定浓度药物的MEM 5FCS的等分试样以1×104个细胞/孔接种在16mm孔板上。另一份不含药物的培养物作为确保细胞保持指数生长期的对照生长接种。全部测定都重复进行。在37℃、10％CO2及在98％湿度气氛下培养三天，通过比较含有药物的孔中的生长情况和对照孔中的生长情况确定近似IC50。
将A-549、HT-29和MEL-28用1ml含有指定浓度药物的MEM10FCS的等分试样，以2×104个细胞/孔接种在16mm孔板上。另一份不含药物的培养物作为确保细胞保持指数期生长的对照生长接种。全部测定都重复进行。在37℃、10％CO2及在98％湿度气氛下培养三天后，用0.1％结晶紫对孔中内容物染色。通过比较含有药物的孔中的生长情况和对照孔中的生长情况确定近似的IC50。
1.Raymond J.Bergeron，Paul F.Cavanaugh，Jr.，Steven J.Kline.RobertG.Hughes，Jr.，Gary T.Elliot和Carl W.Porter.亚精氨儿茶酚酰胺铁螯合物的抗肿瘤和抗疱疹活性(Antineoplastic and antiherpetic activityof spermidine catecholamide iron chelators)。Biochem.Bioph.Res.Comm.1984，121(3)，848-854。
2.Alan C.Schroeder，Robert G.Hughes，Jr.和Alexander Bloch。无环嘧啶核苷类似物的作用(Effects of Acyclic Pyrimidine NucleosideAnaloges)。J.Med.Chem.1981，24 1078-1083。细胞毒活性：
因此本发明的活性化合物包括具有10-羟基和1-不稳定基团的化合物。
本发明的一个重要方法包括下面的反应：
本发明的另一个重要方法包括下面的反应：
本发明的又一个重要方法包括其中R1基团是氨基亚甲基，被转化成羟基亚甲基的反应。
本发明的再一个重要方法包括其中带有是羟基亚甲基的R1基团的化合物与式(XIX)试剂反应：
其中Fu是指保护的官能团，Prot3是保护基，及点划线表示任选的双键。
本发明的又一个重要方法包括用于制备式(XVI)的21-氰基化合物的反应，该方法包括使式(XV)化合物：其中，R1、R5、R8、R14a、R14b、R15及R18如本文所定义以及R21是羟基，与氰离子源反应，得到所需的21-氰基化合物。
另外，也应该理解，使用其他含有亲核基团的化合物，生产其中21-位由另一个亲核基团，即21-Nuc基团保护的式(XVI)的相似的化合物。例如，在21-位有烷基氨基取代基的式(XVI)的21-Nuc化合物可以通过由R21为羟基的式(XV)化合物与合适的烷基胺反应来制备。在21-位有烷硫基取代基的式(XVI)的21-Nuc化合物也可以通过其中R21为羟基的式(XV)化合物与合适的烷硫醇反应来制备。或者，在21-位有□-羰基烷基取代基的式(XVI)的21-Nuc化合物可以通过其中R21为羟基的式(XV)化合物与合适的羰基化合物(通常在碱存在下)反应来制备。用于其他21-Nuc化合物的其他合成路径是可以利用的。
本发明另外的另一个重要反应包括处理本发明的21-氰基产物生成21-羟基化合物。此种化合物具有重要体内活性。
实施例
本发明通过以下实施例加以说明。
实施例1
向在乙醇(200ml)中的2(21.53g，39.17mmol)的溶液中加入叔-丁氧羰基酸酐(butoxycarbonyl anhydride)(7.7g，35.25mmol)并将该混合物在23℃搅拌7小时。然后将所得反应物真空浓缩并将残留物经快速柱层析(SiO2，己烷/乙酸乙酯6∶4)纯化得到14(20.6g，81％)，为黄色固体。Rf：0.52(乙酸乙酯：CHCl3 5∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.49(s，1H)，6.32(bs，1H)，5.26(bs，1H)，4.60(bs，1H)，4.14(d，J＝2.4Hz，1H)，4.05，(d，J＝2.4Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.81(d，J＝4.8Hz，1H)，3.7(s，3H)，3.34(br d，J＝7.2Hz，1H)，3.18-3.00(m，5H)，2.44(d，J＝18.3Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.24(s，3H)，1.82(s，3H)，1.80-1.65(m，1H)，1.48(s，9H)，0.86(d，J＝5.7Hz，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ185.5，180.8，172.7，155.9，154.5，147.3，143.3，141.5，135.3，130.4，129.2，127.5，120.2，117.4，116.9，80.2，60.7，60.3，58.5，55.9，55.8，54.9，54.4，50.0，41.6，40.3，28.0，25.3，24.0，18.1，15.6，8.5.ESI-MS m/z：计算值C34H43N5O8：649.7。实测值(M+H)+：650.3。实施例2
于0℃搅拌下，向在CH3CN(159ml)中的14(20.6g，31.75mmol)的溶液中加入二异丙基乙胺(82.96ml，476.2mmol)、甲氧基亚甲基溴(25.9ml，317.5mmol)和二甲基氨基吡啶(155mg，1.27mmol)。于23℃搅拌该混合物24小时。所得反应物于0℃用0.1N HCl(750ml)(pH＝5)猝灭，并用CH2Cl2(2×400ml)提取。干燥(硫酸钠)有机层并真空浓缩。所得残留物经快速柱层析(SiO2，己烷/乙酸乙酯4∶1至己烷/乙酸乙酯3∶2梯度液)纯化得到15(17.6g，83％)，为黄色固体。Rf：0.38(己烷∶乙酸乙酯3∶7)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.73(s，1H)，5.35(bs，1H)，5.13(s，2H)，4.50(bs，1H)，4.25(d，J＝2.7Hz，1H)，4.03(d，J＝2.7Hz，1H)，3.97(s，3H)，3.84(bs，1H)，3.82-3.65(m，1H)，3.69(s，3H)，3.56(s，3H)，3.39-3.37(m，1H)，3.20-3.00(m，5H)，2.46(d，J＝18Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.23(s，3H)，1.85(s，3H)，1.73-1.63(m，1H)，1.29(s，9H)，0.93(d，J＝5.1Hz，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ185.4，180.9，172.4，155.9，154.5，149.0，148.4，141.6，135.1，131.0，129.9，127.6，124.4，123.7，117.3，99.1，79.3，60.7，59.7，58.4，57.5，56.2，55.9，55.0，54.2，50.0，41.5，39.9，28.0，25.2，24.0，18.1，15.6，8.5。ESI-MS m/z：计算值C36H47N5O9：693.8。实测值(M+H)+：694.3。
实施例3
于0℃向含有在甲醇(1.6L)中的15(8g，1.5ml)的烧瓶中加入1M氢氧化钠(3.21)水溶液。在此温度下搅拌该反应物2小时，然后用6MHCl猝灭至pH＝5。混合物用乙酸乙酯(3×1L)提取并将合并的有机层用硫酸钠干燥及真空浓缩。所得残留物经快速柱层析(SiO2，CHCl3至CHCl3/乙酸乙酯2∶1梯度液)纯化得到16(5.3mg，68％)。Rf:0.48(CH3CN∶H2O 7∶3，RP-C18)1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.73(s，1H)，5.43(bs，1H)，5.16(s，2H)，4.54(bs，1H)，4.26(d，J＝1.8Hz，1H)，4.04(d，J＝2.7Hz 1H)，3.84(bs，1H)，3.80-3.64(m，1H)，3.58(s，3H)，3.41-3.39(m，1H)，3.22-3.06(m，5H)，2.49(d，J＝18.6Hz 1H)，2.35(s，3H)，2.30-2.25(m，1H)，2.24(s，3H)，1.87(s，3H)，1.45-1.33(m，1H)，1.19(s，9H)，1.00(br d，J＝6.6Hz3H)13C NMR(75MHz，□CDCl3)：δ184.9，180.9，172.6，154.7，151.3，149.1，148.6，144.7，132.9，131.3，129.8，124.5，123.7，117.3，116.8，99.1，79.4，59.8，58.6，57.7，56.2，55.6，54.9，54.5，50.1，41.6，40.1，28.0，25.3，24.4，18.1，15.7，8.0ESI-MS m/z：计算值C35H45N5O9：679.7。实测值(M+H)+：680.3实施例4
向在DMF(221ml)中的化合物16(1.8g，2.64mmol)的脱气溶液中加入10％Pd/C(360mg)并在H2(大气压)搅拌45分钟。在氩气下将反应物用硅藻土过滤至含有无水Cs2CO3(2.58g，7.92mmol)的烧瓶中。然后加入溴代氯甲烷(3.40ml，52.8mmol)并封闭瓶口及于100℃搅拌2小时。冷却反应物，通过硅藻土垫过滤并用CH2Cl2洗涤。将有机层浓缩及干燥(硫酸钠)得到17，为棕色油状物，该油状物可不经进一步纯化直接用于下一步反应。Rf：0.36(己烷∶乙酸乙酯：1∶5，SiO2).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.68(s，1H)，6.05(bs，1H)，5.90(s，1H)，5.79(s，1H)，5.40(bs，1H)，5.31-5.24(m，2H)，4.67(d，J＝8.1Hz，1H)，4.19(d，J＝2.7Hz，1H)，4.07(bs，1H)，4.01(bs，1H)，3.70(s，3H)，3.67(s，3H)，3.64-2.96(m，5H)，2.65(d，J＝18.3Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.21(s，3H)，2.04(s，3H)，2.01-1.95(m，1H)，1.28(s，9H)，0.87(d，J＝6.3Hz，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ172.1，162.6，154.9，149.1，145.7，135.9，130.8，130.7，125.1，123.1，117.8，100.8，99.8，76.6，59.8，59.2，57.7，57.0，56.7，55.8，55.2，49.5，41.6，40.1，36.5，31.9，31.6，29.7，28.2，26.3，25.0，22.6，18.2，15.8，14.1，8.8。ESI-MS m/z：计算值C36H47N5O9：693.34。实测值(M+H)+：694.3。实施例5
于0℃向含有在DMF(13ml)中的17(1.83g，2.65mmol)溶液的烧瓶中加入Cs2CO3(2.6g，7.97mmol)和烯丙基溴(1.15ml，13.28mmol)。所得混合物在23℃搅拌1小时。使反应物通过硅藻土垫过滤并用CH2Cl2洗涤。干燥及浓缩(硫酸钠)有机层。所得残留物经快速柱层析(SiO2，CHCl3：乙酸乙酯1∶4)纯化得到18(1.08mg，56％)，为白色固体。Rf:0.36(CHCl3：乙酸乙酯1∶3)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.70(s，1H)，6.27-6.02(m，1H)，5.94(s，lH)，5.83(s，1H)，5.37(dd，J1＝1.01Hz，J2＝16.8Hz，1H)，5.40(bs，1H)，5.25(dd，J1＝1.0Hz，J2＝10.5Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.91(bs，1H)，4.25-4.22(m，1H)，4.21(d，J＝2.4Hz，1H)，4.14-4.10(m，1H)，4.08(d，J＝2.4Hz，1H)，4.00(bs，1H)，3.70(s，3H)，3.59(s，3H)，3.56-3.35(m，2H)，3.26-3.20(m，2H)，3.05-2.96(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.63(d，J＝18Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.21(s，3H)，2.09(s，3H)，1.91-1.80(m，1H)，1.24(s，9H)，0.94(d，J＝6.6Hz，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ172.0，154.8，148.8，148.6，148.4，144.4，138.8，133.7，130.9，130.3，125.1，124.0，120.9，117.8，117.4，112.8，112.6，101.1，99.2，73.9，59.7，59.3，57.7，56.9，56.8，56.2，55.2，40.1，34.6，31.5，28.1，26.4，25.1，22.6，18.5，15.7，14.0，9.2ESI-MS m/z：计算值C39H51N5O9：733.4。实测值(M+H)+：734.4。实施例6
向在二氧六环(2ml)中的18(0.1g，0.137mmol)的溶液中加入4.2M HCl/二氧六环(1.46ml)并将该混合物在23℃搅拌1.2小时。所得反应物于0℃用饱和碳酸氢钠水溶液(60ml)猝灭并用乙酸乙酯(2×70ml)提取。干燥(硫酸钠)有机层并真空浓缩。得到19(267mg，95％)，为白色固体，该固体可不经进一步纯化直接用于下一步反应。Rf：0.17(乙酸乙酯∶甲醇10∶1，SiO2).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.49(s，1H)，6.12-6.00(m，1H)，5.94(s，1H)，5.86(s，1H)，5.34(dd，J＝1.0Hz，J＝17.4Hz，1H)，5.25(dd，J＝1.0Hz，J＝10.2Hz，1H)，4.18-3.76(m，5H)，3.74(s，3H)，3.71-3.59(m，1H)，3.36-3.20(m，4H)，3.01-2.90(m，1H)，2.60(d，J＝18.0Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.24(s，3H)，2.11(s，3H)，1.97-1.86(m，1H)，0.93(d，J＝8.7Hz，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ175.5，148.4，146.7，144.4，142.4，138.9，133.7，131.3，128.3，120.8，117.9，117.4，113.8，112.4，101.1，74.2，60.5，59.1，56.5，56.1，56.3，56.0，55.0，50.5，41.6，39.5，29.5，26.4，24.9，21.1，15.5，9.33。ESI-MS m/z：计算值C32H39N5O6：589。实测值(M+H)+：590。实施例7
向在CH2Cl2(1.5mmol)中的19(250mg，0.42mmol)的溶液中加入异硫氰酸苯酯(0.3ml，2.51mmol)并将该混合物在23℃搅拌1小时。将反应物真空浓缩并将残留物经快速柱层析(SiO2，己烷至5∶1的己烷/乙酸乙酯梯度液)纯化得到20(270mg，87％)，为白色固体。Rf:0.56(CHCl3∶乙酸乙酯1∶4).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.00(bs，1H)，7.45-6.97(m，4H)，6.10(s，1H)，6.08-6.00(m，1H)，5.92(s，1H)，5.89(s，1H)，5.82(s，1H)，5.40(dd，J＝1.5Hz，J＝17.1Hz，1H)，3.38(bs，1H)，5.23(dd，J＝1.5Hz，J＝10.5Hz，1H)，4.42-4.36(m，1H)，4.19-4.03(m，5H)，3.71(s，3H)，3.68-3.17(m，4H)，2.90(dd，J＝7.8Hz，J＝18.3Hz，1H)，2.57(d，J＝18.3Hz，1H)，2.25(s，3H)，2.12(s，3H)，2.10(s，3H)，1.90(dd，J＝12.3Hz，J＝16.5Hz，1H)，0.81(d，J＝6.9Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ178.4，171.6，148.6，146.8，144.3，142.7，138.7，136.2，133.6，130.7，129.8，126.6，124.2，124.1，120.9，120.5，117.7，117.4，116.7，112.6，112.5，101.0，74.0，60.6，59.0，57.0，56.2，56.1，55.0，53.3，41.4，39.7，26.3，24.8，18.3，15.5，9.2ESI-MS m/z：计算值C39H44N6O6S：724.8。实测值(M+H)+：725.3。实施例8
向在二氧六环(1ml)中的20(270mg，0.37mmol)的溶液中加入4.2N HCl/二氧六环(3.5ml)并将该反应物在23℃搅拌30分钟。然后加入乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)并将有机层倾出。所得水相于0℃用饱和碳酸氢钠水溶液(60ml)(pH＝8)碱化，然后用CH2Cl2(2×50ml)提取。将合并的有机提取物干燥(硫酸钠)及真空浓缩。将所得残留物经快速柱层析(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇5∶1)纯化得到化合物21(158mg，82％)，为白色固体。Rf：0.3(乙酸乙酯∶甲醇1∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.45(s，1H)，6.12-6.03(m，1H)，5.91(s，1H)，5.85(s，1H)，5.38(dd，J1＝1.2Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.24(dd，J1＝1.2Hz，J2＝10.5Hz，1H)，4.23-4.09(m，4H)，3.98(d，J＝2.1Hz，1H)，3.90(bs，1H)，3.72(s，3H)，3.36-3.02(m，5H)，2.72-2.71(m，2H)，2.48(d，J＝18.0Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.22(s，3H)，2.11(s，3H)，1.85(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)).13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ148.4，146.7，144.4，142.8，138.8，133.8，130.5，128.8，121.5，120.8，118.0，117.5，116.9，113.6，112.2，101.1，74.3，60.7，59.9，58.8，56.6，56.5，55.3，44.2，41.8，29.7，26.5，25.7，15.7，9.4。ESI-MSm/z：计算值C29H34N4O5：518.3。实测值(M+H)+：519.2。实施例9
于-10℃向在CH2Cl2(6.13ml)中的21(0.64g，1.22mmol)的溶液中加入吡啶(0.104ml，1.28mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯乙基酯(0.177ml，1.28mmol)。将该混合物于此温度搅拌1小时，然后反应物通过加入0.1N HCl(10ml)猝灭，并用CH2Cl2(2×10ml)提取。将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。所得残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)纯化得到22(0.84g，98％)，为白色泡沫状固体。Rf：0.57(乙酸乙酯∶甲醇5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.50(s，1H)，6.10-6.00(m，1H)，6.94(d，J＝1.5Hz，1H)，5.87(d，J＝1.5Hz，1H)，5.73(bs，1H)，5.37(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.26(dq，J1＝1.8Hz，J2＝10.2Hz，1H)，4.60(d，J＝12Hz，1H)，4.22-4.10(m，4H)，4.19(d，J＝12Hz，1H)，4.02(m，2H)，3.75(s，3H)，3.37-3.18(m，5H)，3.04(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.63(d，J＝18Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.26(s，3H)，2.11(s，3H)，1.85(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ154.3，148.5，146.7，144.5，142.8，139.0，133.8，130.7，128.7，121.3，120.8，117.8，117.7，116.8，112.7，101.2，77.2，74.3，60.7，59.9，57.0，56.4，55.3，43.3，41.7，31.6，26.4，25.3，22.6，15.9，14.1，9.4。ESI-MS m/z：计算值C32H35Cl3N4O7：694.17。实测值(M+H)+：695.2。实施例10
于0℃向在CH3CN(2.33ml)中的22(0.32g，0.46mmol)的溶液中加入二异丙基乙胺(1.62ml，9.34mmol)、溴甲基甲醚(0.57ml，7.0mmol)和二甲基氨基吡啶(6mg，0.046mmol)。该混合物于30℃加热10小时。然后用二氯甲烷(30ml)稀释该反应物并倒至pH＝5的HCl水溶液(10ml)中。将有机层用硫酸钠干燥并减压除去溶剂得到残留物，该残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯2∶1)纯化得到23(0.304g，88％)，为白色泡沫状固体。Rf：0.62(己烷∶乙酸乙酯1∶3).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.73(s，1H)，6.10(m，1H)，5.94(d，J＝1.5Hz，1H)，5.88(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.26(dq，J1＝1.8Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.12(s，2H)，4.61(d，J＝12Hz，1H)，4.55(t，J＝6.6Hz，1H)，4.25(d，J＝12Hz，1H)，4.22-4.11(m，4H)，4.03(m，2H)，3.72(s，3H)，3.58(s，3H)，3.38-3.21(m，5H)，3.05(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.65(d，J＝18Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.23(s，3H)，2.12(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ154.3，148.6，148.4，144.5，139.0，133.6，130.6，130.1，125.07，124.7，124.0，121.1，117.7，112.6，101.2，99.2，77.2，74.4，74.1，59.8，59.8，57.7，57.0，56.8，56.68，55.3，43.2，41.5，26.4，25.2，15.9，9.3.ESI-MS m/z：计算值C34H39Cl3N4O8：738.20.实测值(M+H)+：739.0.实施例11
向在90％乙酸水溶液(4ml)中的23(0.304g，0.41mmol)的悬浮液中加入锌粉(0.2g，6.17mmol)，并于23℃将该反应物搅拌7小时。所得混合物通过硅藻土垫过滤并用CH2Cl2洗涤。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(pH＝9)(15ml))洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂得到24(0.191g，83％)，为白色固体。Rf:0.3(乙酸乙酯∶甲醇5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.68(s，1H)，6.09(m，1H)，5.90(d，J＝1.5Hz，1H)，5.83(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.25(dq，J1＝1.5Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.22-4.09(m，3H)，3.98(d，J＝2.4Hz，1H)，3.89(m，1H)，3.69(s，3H)，3.57(s，3H)，3.37-3.17(m，3H)，3.07(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.71(m，2H)，2.48(d，J＝18Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.19(s，3H)，2.17(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H)13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ148.5，148.2，144.3，138.7，133.7，130.7，129.9，125.0，123.9，121.3，117.9，117.5，113.6，112.0，101.0，99.2，74.0，59.8，59.7，58.8，57.6，57.0，56.2，55.2，44.2，41.5，31.5，26.4，25.6，22.5，16.7，14.0，9.2。ESI-MS m/z：计算值C31H38N4O6：562.66。实测值(M+H)+：563.1。实施例12
于0℃向在水(0.7mmol)和THF(0.7mmol)中的24(20mg，0.035mmol)的溶液中加入NaNO2(12mg，0.17mmol)和90％AcOH水溶液(0.06ml)并将该混合物于0℃搅拌3小时。用CH2Cl2(5ml)稀释后。将有机层用水(1ml)洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩。所得残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯2∶1)纯化得到25(9.8mg，50％)，为白色固体。Rf:0.34(己烷∶乙酸乙酯1∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.71(s，1H)，6.11(m，1H)，5.92□(d，J＝1.5Hz，1H)，5.87(d，J＝1.5Hz，1H)，5.42(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.28(dq，J1＝1.5Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.12(s，2H)，4.26-4.09(m，3H)，4.05(d，J＝2.4Hz，1H)，3.97(t，J＝3.0Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.67-3.32(m，4H)，3.58(s，3H)，3.24(dd，J1＝2.7Hz，J2＝15.9Hz，1H)，3.12(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.51(d，J＝18Hz，1H)，2.36(s，3H)，2.21(s，3H)，2.12(s，3H)，1.83(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.7，148.4，138.9，133.7，131.1，129.4，125.1，123.9，120.7，117.6，117.5，113.2，112.3，101.1，99.2，74.0，63.2，59.8，59.7，57.9，57.7，57.0，56.5，55.2，41.6，29.6，26.1，25.6，22.6，15.7，9.2。ESI-MS m/z：计算值C31H37N3O7：563.64。实测值(M+H)+：564.1。实施例13
于23℃将起始物质(2.0g，5.90mmol)加至在THF(40ml)中的氢化钠(354mg，8.86mmol)的悬浮液中，并于23℃将此悬浮液用氯甲酸烯丙基酯(1.135ml，8.25mmol)处理，然后回流3小时。冷却所得悬浮液，过滤，所得固体用乙酸乙酯(100ml)洗涤，并浓缩滤液。用己烷(100ml)碾磨所得油状粗产物并在于4℃保持过夜。然后，倾除溶剂并用CH2Cl2(20ml)处理所得的浅黄色浆状物，并用己烷(100ml)沉淀。10分钟后，再次倾除溶剂。重复操作直至出现白色固体。滤出该白色固体并干燥得到化合物29(1.80g，65％)，为白色固体。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.74(d，J＝7.5Hz，2H)，7.62(d，J＝6.9Hz，2H)，7.33(t，J＝7.5Hz，2H)，7.30(t，J＝6.3Hz，2H)，5.71(d，J＝7.8Hz，1H)，4.73(d，J＝7.8Hz，2H)，4.59(m，1H)，4.11(t，J＝6.0Hz，1H)，3.17(dd，J＝6.0Hz，J＝2.7Hz，2H)，3.20(dd，J＝5.4Hz，J＝2.1Hz，2H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)：δ173.6，152.7，144.0，139.7，137.8，126.0，125.6，123.4，118.3，73.4，52.4，45.5，35.8，33.7.ESI-MS m/z：计算值C20H18Cl3NO4S：474.8。实测值(M+Na)+：497.8。实施例14
将化合物25(585mg，1.03mmol)与化合物29(1.47mg，3.11mmol)的混合物与无水甲苯(3×10ml)共沸。于23℃向在无水CH2Cl2(40ml)中的25和29的溶液中加入DMAP(633mg，5.18mmol)和EDC.HCl(994mg，5.18mmol)。于23℃搅拌反应混合物3小时。所得混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)分配并分层。所得水层用CH2Cl2(50ml)洗涤。合并有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得粗品经快速柱层析(乙酸乙酯/己烷1∶3)纯化得到30(1.00g，95％)，为淡乳黄色固体。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.72(m，2H)，7.52(m，2H)，7.38(m，2H)，7.28(m，2H)，6.65(s，1H)，6.03(m，1H)，5.92(d，J＝1.5Hz，1H)，5.79(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(m，1H)，5.29(dq，J＝10.3Hz，J＝1.5Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.73(d，J＝11.9Hz，1H)，4.66(d，J＝11.9Hz，1H)，4.53(m，1H)，4.36-3.96(m，9H)，3.89(t，J＝6.4Hz，1H)，3.71(s，3H)，3.55(s，3H)，3.33(m，1H)，3.20(m，2H)，2.94(m，3H)，2.59(m，1H)，2.29(s，3H)，2.23(s，3H)，2.02(s，3H)，1.83(dd，J＝16.0Hz，J＝11.9Hz，1H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)：δ169.7，154.0，148.8，148.4，145.7，144.5，140.9，139.0，133.7，130.9，130.6，127.6，127.0，124.8，124.6，124.1，120.8，119.9，118.2，117.7，117.3，112.7，112.1，101.3，99.2，74.7，73.9，64.4，59.8，57.7，57.0，56.8，55.4，53.3，46.7，41.4，36.5，34.7，31.5，26.4，24.9，22.6，15.7，14.0，9.1。ESI-MS m/z：计算值C51H53Cl3N4O10S：1020.4。实测值(M+H)+：1021.2。实施例15
于23℃向在无水CH2Cl2(20ml)中的30(845mg，0.82mmol)、乙酸(500mg，8.28mmol)和(PPh3)2PdCl2(29mg，0.04mmol)的溶液中滴加Bu3SnH(650mg，2.23mmol)。于该温度搅拌该反应混合物15分钟，鼓泡。粗产物用水(50ml)猝灭并用CH2Cl2(3×50ml)提取。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得粗产物经快速柱层析(乙酸乙酯/己烷的1∶5至1∶3梯度液)纯化得到化合物31，为淡乳黄色固体(730mg，90％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.72(m，2H)，7.56(m，2H)，7.37(m，2H)，7.30(m，2H)，6.65(s，1H)，5.89(s，1H)，5.77(s，1H)，5.74(s，1H)，5.36(d，J＝5.9Hz，1H)，5.32(d，J＝5.9Hz，1H)，5.20(d，J＝9.0，1H)，4.75(d，J＝12.0Hz，1H)，4.73(m，1H)，4.48(d，J＝11.9Hz，1H)，4.08(m，4H)，3.89(m，1H)，3.86，(t，J＝6.2Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.69(s，3H)，3.38(m，1H)，3.25(m，1H)，3.02-2.89(m，4H)，2.67(s，1H)，2.61(s，1H)，2.51(dd，J＝14.3Hz，J＝4.5Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.23(s，3H)，1.95(s，3H)，1.83(m，1H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)：δ168.2，152.5，148.1，146.2，144.4，144.3，143.3，139.6，134.6，129.7，129.6，126.2，125.6，123.4，123.3，121.6，118.5，116.3，110.7，110.2，105.1，99.4，98.5，75.2，73.3，61.7，58.4，57.9，56.3，56.1，55.1，54.7，53.9，51.9，45.2，40.1，35.6，33.3，24.8，23.3.，14.5，7.3ESI-MS m/z：计算值C48H49Cl3N4O10S：980.3；实测值(M+H)+：981.2。
实施例16
于-10℃向在无水CH2Cl2(15ml)中的31(310mg，0.32mmol)的溶液中经套管加入在无水CH2Cl2(7ml)中的70％苯亚硒酸酐(165mg，0.32mmol)的溶液，保持温度在-10℃。于-10℃搅拌该反应混合物5分钟。在此温度加入饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)。所得水层再用CH2Cl2(40ml)洗涤。将所得有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得粗产物经快速柱层析(乙酸乙酯/己烷的1∶5至1∶1梯度液)纯化得到32淡乳黄色固体(287mg，91％，HPLC：91.3％)，为用于下一步骤的两个异构体的混合物(65∶35)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ(异构体混合物)7.76(m，4H)，7.65(m，4H)，7.39(m，4H)，7.29(m，4H)，6.62(S，1H)，6.55(s，1H)，5.79-5.63(m，6H)，5.09(s，1H)，5.02(d，J＝6.0Hz，1H)，4.99(d，J＝6.0Hz，1H)，4.80-4.63(m，6H)，4.60(m，1H)，4.50(m，1H)，4.38(d，J＝12.8Hz，J＝7.5Hz，1H)，4.27(dd，J＝12.8Hz，J＝7.5Hz，1H)，4.16-3.90(m，10H)，3.84(s，3H)，3.62(s，3H)，3.50(s，3H)，3.49 (s，3H)，3.33-2.83(m，14H)，2.45-2.18(m，2H)，2.21(s，6H)，2.17(s，6H)，1.77(s，6H)，1.67(m，2H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)：δ(异构体混合物)168.6，168.4，158.6，154.8，152.8，152.5，147.3，147.2，146.8，144.1，144.0，140.8，139.7，137.1，129.8，129.3，128.4，128.7，126.5，125.5，123.7，123.6，123.5，123.4，122.2，121.3，118.3，115.8，115.5，110.2，106.9，103.5，103.2，100.1，99.6，97.9，97.7，93.8，73.4，70.9，69.2，64.9，62.5，59.3，58.9，58.4，56.7，56.3，56.2，55.4，55.2，55.1，54.9，54.7，54.3，54.1，53.8，52.8，45.5，40.5，40.0，39.8，35.8，35.5，33.9，33.7，30.1，28.8，24.2，24.1，21.2，14.5，14.4，12.7，6.0，5.7。ESI-MS m/z：计算值C48H49Cl3N4O11S：996.3。实测值(M+H)+：997.2。
实施例17
将反应烧瓶火焰加热两次，真空/氩气排空数次并维持在氩气下以备反应。于-78℃向在无水CH2Cl2(4.5ml)中的DMSO(39.1ml，0.55mmol，5当量)的溶液中滴加三氟甲磺酸酐(37.3ml，0.22mmol，2当量)。于-78℃搅拌反应混合物20分钟，然后于-78℃经套管加入在无水CH2Cl2(1ml用于主要滴加，0.5ml用于洗涤)中的32(110mg，0.11mmol，HPLC：91.3％)的溶液。在滴加过程中该溶液温度通过外浴保持在-78℃，颜色由黄色变成棕色。于-40℃搅拌该反应混合物35分钟。在此时间内该溶液从黄色变成暗绿色。然后，滴加iPr2NEt(153ml，0.88mmol，8当量)并将该反应混合物保持在0℃45分钟，在此期间该溶液的颜色变成棕色。然后滴加叔丁醇(41.6ml，0.44mmol，4当量)和2-叔丁基-1，1，3，3-四甲基胍(132.8ml，0.77mmol，7当量)并将该反应混合物于23℃搅拌40分钟。然后滴加入乙酸酐(104.3ml，1.10mmol，10当量)并保持该反应混合物在23℃1小时。然后将该反应混合物用CH2Cl2(20ml)稀释并用饱和NH4Cl(50ml)、碳酸氢钠(50ml)和氯化钠(50ml)水溶液洗涤。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物经快速柱层析(洗脱液：乙酸乙酯/己烷的1∶3至1∶2梯度液)纯化得到化合物33淡黄色固体(54mg，58％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.85(s，1H)，6.09(s，1H)，5.99(s，1H)，5.20(d，J＝5.8Hz，1H)，5.14(d，J＝5.3Hz，1H)，5.03(m，1H)，4.82(d，J＝12.2，1H)，4.63(d，J＝12.0Hz，1H)，4.52(m，1H)，4.35-4.17(m，4H)，3.76(s，3H)，3.56(s，3H)，3.45(m，2H)，2.91(m，2H)，2.32(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.12(m，2H)，2.03(s，3H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)：δ168.5，167.2，152.7，148.1，147.1，144.5，139.6，139.1，130.5，129.0，123.7，123.5，123.3，118.8，116.5，112.1，100.6，97.8，73.3，60.5，59.4，59.2，58.3，57.6，57.4，56.1，53.3，53.1，40.6，40.0，31.0，22.2，18.9，14.4，8.1；ESI-MS m/z：计算值C36H39Cl3N4O11S：842.1；实测值(M+H)+：843.1。
实施例18
于23℃向在干燥的二氯甲烷(1.2ml)和HPLC级的乙腈(1.2ml)中的33(12mg，0.014mmol)的溶液中加入碘化钠(21mg，0.14mmol)和新蒸馏(经氢化钙，常压)的三甲基甲硅烷基氯(15.4mg，0.14mmol)。所得反应混合物变成桔黄色。15分钟后用二氯甲烷(10ml)稀释该溶液并用新制备的饱和Na2S2O4水溶液(3×10ml)洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。得到化合物34淡黄色固体(13mg，定量)，该固体可不经进一步纯化直接使用。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.85(s，1H)，6.09(s，1H)，5.99(s，1H)，5.27(d，J＝5.8Hz，1H)，5.14(d，J＝5.3Hz，1H)，5.03(d，J＝11.9Hz，1H)，4.82(d，J＝12.2，1H)，4.63(d，J＝13.0Hz，1H)，4.52(m，1H)，4.34(m，1H)，4.27(bs，1H)，4.18(m，2H)，3.76(s，3H)，3.56(s，3H)，3.44(m，1H)，3.42(m，1H)，2.91(m，2H)，2.32(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.03(s，3H).ESI-MS m/z：计算值C34H35N4O10S：798.1；实测值(M+H)+：799.1。实施例19
于23℃向在乙酸/水(90∶10，1ml)混合物中的34(13mg，0.016mmol)的溶液中加入锌粉(5.3mg，0.081mmol)。在70℃加热该反应混合物6小时。然后，冷至23℃，用CH2Cl2(20ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(15ml)和Et3N水溶液(15ml)洗涤。所得有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物经使用Silica-NH2的快速柱层析(洗脱液∶乙酸乙酯/己烷的0∶100至50∶50梯度液)纯化得到化合物35淡黄色固体(6.8mg，两步骤77％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.51(s，1H)，6.03(dd，J＝1.3Hz，J＝26.5Hz，2H)，5.75(bs，1H)，5.02(d，J＝11.6Hz，1H)，4.52(m，1H)，4.25(m，2H)，4.18(d，J＝2.5Hz，1H)，4.12(dd，J＝1.9Hz，J＝11.5Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.40(m，2H)，3.26(t，J＝6.4Hz，1H)，2.88(m，2H)，2.30-2.10(m，2H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.18(s，3H)，2.02(s，3H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)：δ174.1，168.4，147.8，145.4，142.9，140.8，140.1，131.7，130.2，129.1，128.3，120.4，118.3，117.9，113.8，111.7，101.7，61.2，59.8，59.2，58.9，54.4，53.8，54.4，41.3，41.5，34.1，23.6，20.3，15.5，9.4；ESI-MS m/z：计算值C31H34N4O8S：622.7；实测值(M+H)+：623.2。实施例20
用无水甲苯(2×10ml)处理在无水DMF(5.8ml)中的碘化N-甲基吡啶-4-甲醛(378mg，1.5mmol)的溶液，通过共沸带走甲苯除去相当量的水。于23℃经套管向该橙色溶液中加入在无水CH2Cl2(经氢化钙蒸馏，7.2ml)中预先经无水甲苯(2×10ml)处理的35(134mg，0.21mmol)的溶液。于23℃搅拌反应混合物4小时。然后于23℃滴加入DBU(32.2□L，0.21mmol)并于23℃搅拌15分钟。将新制备的饱和草酸水溶液(5.8ml)加至将该反应混合物中并在23℃搅拌30分钟。然后将该反应混合物冷至0℃并分次加入NaHCO3，接着加入NaHCO3的饱和水溶液。该混合物用Et2O提取。将K2CO3加至水层并用Et2O提取。合并的有机层用MgSO4干燥并减压除去溶剂。将所得粗产物经快速柱层析(乙酸乙酯/己烷从1∶3至1∶1)纯化得到化合物36淡黄色固体(77mg，57％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.48(s，1H)，6.11(d，J＝1.3Hz，1H)，6.02(d，J＝1.3Hz，1H)，5.70(bs，1H)，5.09(d，J＝11.3Hz，1H)，4.66(bs，1H)，4.39(m，1H)，4.27(d，J＝5.6Hz，1H)，4.21(d，J＝10.5Hz，1H)，4.16(d，J＝2.6Hz，1H)，3.76(s，3H)，3.54(d，J＝5.1Hz，1H)，3.42(d，J＝8.5Hz，1H)，2.88-2.54(m，3H)，2.32(s，3H)，2.24(s，3H)，2.14(s，3H)，2.04(s，3H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)：δ186.7，168.5，160.5，147.1，146.4，142.9，141.6，140.7，130.4，129.8，121.7(2C)，120.0，117.8，117.1，113.5，102.2，61.7，61.4，60.3，59.8，58.9，54.6，41.6，36.9，29.7，24.1，20.3，15.8，14.1，9.6。ESI-MS m/z：计算值C31H31N3O9S：621.7；实测值(M+H)+：622.2。
实施例21
于23℃向在乙醇(2.5ml)中的36(49mg，0.08mmol)和2-[3-羟基-4-甲氧基苯基]乙胺(46.2mg，0.27mmol)的溶液中加入硅胶(105mg)。在23℃搅拌反应混合物14小时。用己烷稀释该反应混合物并倒入层析柱(乙酸乙酯/己烷从1/3至1/1)中得到Et-770淡黄色固体(55mg，90％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.60(s，1H)，6.47(s，1H)，6.45(s，1H)，6.05(s，1H)，5.98(s，1H)，5.02(d，J＝11.4Hz，1H)，4.57(bs，1H)，4.32(bs，1H)，4.28(d，J＝5.3Hz，1H)，4.18(d，J＝2.5Hz，1H)，4.12(dd，J＝2.1Hz，J＝11.5Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.62(s，3H)，3.50(d，J＝5.0Hz，1H)，3.42(m，1H)，3.10(ddd，J1＝4.0Hz，J2＝10.0Hz，J3＝11.0Hz，1H)，2.94(m，2H)，2.79(m，1H)，2.61(m，1H)，2.47(m，1H)，2.35(m，1H)，2.32(s，3H)，2.27(s，3H)，2.20(s，3H)，2.09(m，1H)，2.04(s，3H)。ESI-MS m/z：计算值C40H42N4O10S：770.7；实测值(M+H)+：771.2。实施例22
向在CH2Cl2(0.8ml)中的21(22mg，0.042mmol)的溶液中加入邻苯二甲酸酐(6.44mg，0.042mmol)并将该反应混合物在23℃搅拌2小时。然后加入羰基二咪唑(1mg，0.006mmol)并将该混合物在23℃搅拌7小时。然后加入羰基二咪唑(5.86mg，0.035ml)并将该反应物于23℃再搅拌17小时。所得溶液用CH2Cl2(15ml)稀释并用0.1NHCl(15ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，己烷/乙酸乙酯2∶1)纯化得到27(26.4mg，96％)，为白色固体。Rf:0.58(乙酸乙酯).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.73-7.64(m，4H)，6.40(s，1H)，6.12-6.01(m，1H)，5.63(s，1H)，5.58(d，J＝1.5Hz，1H)，5.37(dd，J1＝1.8Hz，J2＝17.4Hz)，5.23(dd，J1＝1.8Hz，J2＝10.5Hz，1H)，5.12(d，J＝1.5Hz，1H)，4.22-4.15(m，3H)，4.08(d，J＝1.8Hz，1H)，3.68(s，3H)，3.59-3.55(m2H)，3.35(d，J＝8.1Hz，1H)，3.27-3.16(m，2H)，3.05(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.64(d，J＝18.0Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.24(s，3H)，2.09(s，3H)，1.80(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ167.7，148.9，146.4，144.2，142.6，139.5，134.0，133.5，132.0，131.0，128.3，123.0，121.3，120.9，118.1，117.5，116.8，113.6，112.4，100.8，74.5，60.6，60.5，57.7，56.6，55.6，55.5，42.3，41.7，26.6，25.5，15.9，9.46.ESI-MS m/z：计算值C37H35N4O7：648.79；实测值(M+H)+：649.3。
实施例23
于23℃向在CH2Cl2(11ml)中的27(26mg，0.041mmol)的溶液中加入乙酸(11ml)、(PPh3)2PdCl2(2.36mg)和Bu3SnH(28ml，0.10mmol)。于该温度搅拌该反应混合物2小时后，将反应混合物倒入快速柱的垫中。(SiO2，己烷至己烷：乙酸乙酯2∶1的梯度液)得到28(24.7mg，99％)，为白色固体。Rf：0.33(己烷∶乙酸乙酯2∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.75-7.70(m，2H)，7.69-7.65(m，2H)，6.39(s，1H)，5.82(bs，1H)，5.50(d，J＝1.5Hz，1H)，5.0(d，J＝1.5Hz，1H)，4.45(bs，1H)，4.23-4.19(m，2H)，4.10-4.09(m，1H)，3.73(s，3H)，3.60-3.48(m，2H)，3.36-3.33(m，1H)，3.26-3.20(m，1H)，3.14-3.08(m，1H)，3.98(d，J＝14.4Hz，1H)，2.61(d，J＝18.3Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.23(s，3H)，2.06(s，3H)，1.85(dd，J1＝12Hz，J2＝15.3Hz)；13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ167.8，146.4，145.1，143.9，142.7，137.1，133.5，131.9，130.8，128.4，122.9，120.8，118.0，116.8，114.0，113.4，106.4，100.4，60.6，60.5，57.8，56.6，55.5，55.2，42.6，41.5，25.6，25.5，15.8，8.9。ESI-MS m/z：计算值C34H32N4O7：608.6；实测值(M+H)+：609.2。实施例24
于0℃向在CH2Cl2(3ml)中的28(357mg，0.058mmol)的溶液中加入乙酰氯(41.58ml，0.58mmol)和吡啶(47.3ml，0.58ml)，并将该反应混合物搅拌1小时，然后用CH2Cl2(15ml)稀释该反应溶液并用0.1NHCl(15ml)洗涤。将所得有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(RP-18，CH3CN∶H2O 60∶40)纯化得到phthalascidin(354mg，94％)，为白色固体。Rf：0.37(CH3CN：H2O 7∶3，RP-18)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.72-7.68(m，2H)，7.67-7.63(m，2H)，6.38(s，1H)，5.69(d，J＝1.2Hz，1H)，5.64(d，J＝1.2Hz，1H)，5.30(bs，1H)，4.25-4.21(m，2H)，4.02(d，J＝2.1Hz，1H)，3.64-3.62(m，5H)，3.33(d，J＝8.4Hz，1H)，3.21-3.16(m，1H)，3.02(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.76(dd，J1＝1.8Hz，J2＝15.6Hz，1H)，2.63(d，J＝17.7Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.0(s，3H)，1.73(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.3Hz，1H))13C NMR(75MHz，CDCl3))：δ168.5，167.6，146.2，144.2，142.5，141.0，140.5，133.4，131.8，130.7，128.2，120.9，120.8，117.9，116.4，113.6，101.1，60.4，60.0，57.0，56.3，55.6，55.4，41.6，41.5，26.5，25.2，20.2，15.7，9.4。ESI-MS m/z：计算值C36H34N4O8：650；实测值(M+H)+：651.2。实施例25
于0℃向在CH2Cl2(2ml)中的17(300mg，0.432mmol)的溶液中加入乙酰氯(30.7ml，0.432mmol)和吡啶(34.9ml，0.432mmol)，并在此温度下将该反应混合物搅拌2小时，然后用CH2Cl2(15ml)稀释溶液并用0.1N HCl(15ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。得到42(318mg，100％)，为白色固体，该固体可不经进一步纯化用于随后的反应。Rf：0.5(乙酸乙酯∶甲醇51).1H NMR(300MHz，CDCl3).δ6.66(s，1H)，5.93(d，J＝1.2Hz，1H)，5.83(d，J＝1.2Hz，1H)，5.42(t，J＝6.6Hz，1H)，5.07(d，J＝5.7Hz，1H)，4.98(d，J＝5.7Hz，1H)，4.16(d，J＝1.8Hz，1H)，4.11(d，J＝2.7Hz，1H)，3.98(bs，1H)，3.73-3.61(m，2H)，3.64(s，3H)，3.52-3.48(m，1H)，3.50(s，3H)，3.33(d，J＝9.6Hz，1H)，3.17-3.14(m，1H)，2.97-2.87(m，1H)，2.75-2.70(d，J＝16.8Hz，1H)，2.26(s，6H)，2.16(s，3H)，1.96(s，3H)，1.70(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)，1.33(s，9H)，0.59(d，J＝6.0Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3))：δ172.0，168.3，162.3，148.2，144.4，140.4，140.2，130.9，130.5，125.3，123.4，120.8，117.6，112.7，111.7，101.4，99.1，79.2，59.5，58.8，57.5，57.4，56.4，55.5，55.0，41.3，39.0，28.2，26.4，24.6，19.9，18.4，15.4，9.1.ESI-MS m/z：计算值C38H49N5O10：735.82.实测值(M+H)+：736.3.
实施例26
向在CH2Cl2(2.16mmol)中的42(318mg，0.432mmol)的溶液中加入三氟乙酸(1.33ml，17.30mmol)并将该反应混合物在23℃搅拌3.5小时。所得反应物于0℃用饱和碳酸氢钠水溶液(60ml)猝灭，并用CH2Cl2(2×70ml)提取。干燥(硫酸钠)有机层并真空浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇20∶1)纯化得到43(154mg，60％)，为白色固体。Rf：0.22(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3).δ6.47(s，1H)，6.22(bs，1H)，5.95(d，J＝1.2Hz，1H)，5.88(d，J＝1.2Hz，1H)，4.08-4.06(m，2H)，4.01(bs，1H)，3.69(s，3H)，3.49(d，J＝3.6Hz，1H)，3.33(d，J＝8.1Hz，1H)，3.26-3.22(m，1H)，2.95(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.80-2.76(m，2H)，2.58(d，J＝18Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.27(s，3H)，2.21(s，3H)，1.96(s，3H)，1.77(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.90(d，J＝6.9Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3))：δ174.8，169.0，146.8，144.4，142.8，140.5，140.2，131.1，128.8，120.8，120.5，117.1，112.9，111.6，101.5，60.3，59.0，56.5，56.3，55.6，55.1，50.2，41.6，39.5，26.8，26.3，24.9，20.2，15.4，9.2。ESI-MS m/z：计算值C31H37N5O7：591.65；实测值(M+H)+：592.3。
实施例27
向在CH2Cl2(1.3ml)中的43(154mg，0.26mmol)的溶液中加入异硫氰酸苯酯(186ml，1.56mmol)并将该混合物在23℃搅拌2小时。将所得反应物真空浓缩，残留物经快速柱层析(SiO2，己烷至己烷∶乙酸乙酯1∶1梯度液)纯化得到44(120mg，63％)，为白色固体。Rf：0.41(乙酸乙酯∶甲醇5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3).δ8.17(s，1H)，7.49-7.44(m，3H)，7.31-7.24(m，3H)，7.05(d，J＝6.9Hz，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.87(d，J＝1.2Hz，1H)，5.52(bs，1H)，4.54(t，J＝6.6Hz，1H)，4.15(d，J＝2.1Hz，1H)，4.03(d，J＝2.7Hz，2H)，3.80(bs，1H)，3.66(s，3H)，3.40(bs，1H)，3.32(d，J＝7.8Hz，1H)，3.16(d，J＝11.7Hz，1H)，2.82-2.61(m，3H)，2.29(s，3H)，2.20(s，3H)，2.01(s，3H)，1.99(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，0.62(d，J＝6.0Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ178.5，171.9，168.7，146.7，144.5，142.6，140.6，140.3，136.3，131.0，129.9，128.9，126.7，124.4，120.9，120.6，117.7，116.6，112.7，111.9，101.4，60.4，58.7，57.5，56.1，55.7，55.1，53.3，41.4，38.8，26.3，24.4，20.2，18.1，15.3，9.2。ESI-MS m/z：计算值C38H42N6O7S：726.3；实测值(M+H)+；727.3。
实施例28
向在二氧六环(0.9ml)中44(120mg，0.165mmol)的溶液中加入5.3N HCl/二氧六环(1.8ml)，在23℃搅拌该反应物2.5小时。然后将CH2Cl2(10ml)和H2O(5ml)加至该反应物中并将有机层倾出。将水相在0℃用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)碱化(pH＝8)，然后用CH2Cl2(2×15ml)提取。干燥(硫酸钠)合并的有机提取物，并真空浓缩得到无需进一步纯化即可以用于后续反应的45(75mg，87％)的白色固体。Rf：0.23(乙酸乙酯∶甲醇5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.43(s，1H)，5.94(d，J＝1.2Hz，1H)，5.87(d，J＝1.2Hz，1H)，4.10(d，J＝2.1Hz，1H)，3.98(d，J＝2.4Hz，1H)，3.91(bs，1H)，3.69(s，3H)，3.34-3.25(m，2H)，3.05(dd，J1＝1.8Hz，J2＝8.1Hz，1H)，2.80-2.73(m，3H)，2.46(d，J＝18Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.20(s，3H)，1.98(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.6Hz，J2＝16.2Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3))：δ168.7，146.7，144.4，142.9，140.4，130.4，128.9，121.1，120.8，117.8，116.8，113.6，111.5，101.4，67.6，60.5，59.8，58.4，56.6，55.8，55.3，43.6，41.8，31.3，25.6，20.2，15.6，9.2。ESI-MS m/z：计算值C28H32N4O6：520.58；实测值(M+H)+：521.3。
实施例29
向在CH2Cl2(0.4ml)中的45(10mg，0.02mmol)的溶液中加入邻苯二甲酸酐(2.84mg，0.02mmol)，并将该反应混合物在23℃搅拌2小时，然后加入羰基二咪唑(0.5mg，0.003mmol)并将该混合物在23℃搅拌7小时。然后加入羰基二咪唑(2.61mg，0.016mmol)并将该反应物在23℃再搅拌17小时。然后用CH2Cl2(10ml)稀释该溶液并用0.1N HCl(5ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(RP-18，CH3CN∶H2O 60∶40)纯化得到phthalascidin白色固体(11.7mg，93％)。Rf:0.37(CH3CN：H2O 7∶3，RP-18)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.72-7.68(m，2H)，7.67-7.63(m，2H)，6.38(s，1H)，5.69(d，J＝1.2Hz，1H)，5.64(d，J＝1.2Hz，1H)，5.30(bs，1H)，4.25-4.21(m，2h)，4.02(d，J＝2.1Hz，1H)，3.64-3.62(m，5H)，3.33(d，J＝8.4Hz，1H)，3.21-3.16(m，1H)，3.02(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.76(dd，J1＝1.8Hz，J2＝15.6Hz，1H)，2.63(d，J＝17.7Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.0(s，3H)，1.73(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.3Hz，1H))。13C NMR(75 MHz，CDCl3))：δ168.5，167.6，146.2，144.2，142.5，141.0，140.5，133.4，131.8，130.7，128.2，120.9，120.8，117.9，116.4，113.6，101.1，60.4，60.0，57.0，56.3，55.6，55.4，41.6，41.5，26.5，25.2，20.2，15.7，9.4。ESI-MS m/z：计算值C36H34N4O8：650；实测值(M+H)+：651.2。
实施例30
于0℃向在DMF(0.05ml)中的25(18mg，0.032mmol)的溶液中加入催化量的DMAP(0.5mg，0.004mmol)、咪唑(5mg，0.08mmol)和叔-丁基二苯基甲硅烷基氯(12.5ml，0.048mmol)，所得反应混合物在23℃搅拌6小时。于0℃加入水(10ml)，水相用己烷∶乙酸乙酯1∶10(2×10mmol)提取。将有机层干燥(硫酸钠)、过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯3∶1)纯化得到26白色固体(27mg，88％)。Rf：0.29(己烷∶乙酸乙酯3∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.61-7.58(m，2h)，7.42-7.28(m，8H)，6.71(s，1H)，6.19-6.02(m，1H)，5.78(d，J＝1.2Hz，1H)，5.64(d，J＝1.2Hz，1H)，5.40(dd，J1＝1.2Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.27(dd，J1＝1.2Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.13(s，2h)，4.45(d，J＝2.4Hz，1H)，4.24(d，J＝2.1Hz，1H)，4.17-4.06(m，3H)，3.75(s，3H)，3.64(dd，J1＝2.4Hz，J2＝9.9Hz，1H)，3.59(s，3H)，3.42-3.21(m，4H)，3.10(dd，J1＝8.1Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.70(d，J＝17.7Hz，1H)，2.33(s，3H)，2，26(s，3H)，2.11(s，3H)，2.08-1.89(m，1H)，0.87(s，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ148.5，148.3，148.1，144.0，139.0，135.6，135.4，133.8，133.1，132.6，130.5，130.3，129.6，129.4，127.5，127.4，125.1，124.3，121.6，118.5，117.5，112.9，111.7，100.8，99.2，74.0，67.7，61.5，59.6，59.0，57.7，57.1，55.4，41.6，29.6，26.6，25.5，18.8，15.8，9.2。ESI-MS m/z：计算值C47H55N3O7Si：801.3；实测值(M+H)+：802.3。
实施例31
于23℃向在CH2Cl2(0.15ml)中的26(7mg，0.0087mmol)的溶液中加入乙酸(2.5ml，0.044mmol)、(PPh3)2PdCl2(0.5 mg，6.96×10-4mmol)和Bu3SnH(3.5ml，0.013mmol)。于该温度搅拌该反应混合物1小时，所得溶液用己烷∶乙酸乙酯5∶1(0.5ml)的混合物稀释并倒入快速柱的垫中(SiO2，5∶1至1∶1己烷∶乙酸乙酯梯度液)得到ET-11(5mg，75％)，为白色固体。Rf:0.36(己烷∶乙酸乙酯1∶5，硅胶)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.56(m，2h)，7.41-7.25(m，8H)，6.67(s，1H)，5.72(d，J＝1.0Hz，1H)，5.58(d，J＝1.0Hz，1H)，5.51(s，1H)，5.38(d，J＝5.75Hz，1H)，5.16(d，J＝5.7Hz，1H)，4.57(d，J＝2.9Hz，1H)，4.21(m，1H)，4.09(m，1H)，3.72(s，3H)，3.71(s，3H)，3.68(dd，J1＝2.1Hz，J2＝10.4Hz，1H)，3.38-3.26(m，3H)，3.11(dd，J1＝2.5Hz，J2＝15.7Hz，1H)，3.01(dd，J1＝8.9Hz，J2-17.9Hz，1H)，2.70(d，J＝17.9Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.25(s，3H)，2.06(s，3H)，1.89(dd，J1＝12.1Hz，J2＝15.7Hz，1H)，0.9(s，9H).)；13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ149.0，147.4，145.3，144.3，136.3，135.7，135.4，133.2，130.9，130.5，129.6，129.5，127.5，125.0，118.6，112.5，112.1，105.7，100.5，99.8，68.5，61.5，59.7，58.8，57.7，56.9，56.5，55.4，41.7，26.6，26.2，25.5，18.9，15.8，14.2，8.7。ESI-MS m/z：计算值C44H51N3O7Si：761；实测值(M+H)+：762。
实施例32
于23℃搅拌在CH2Cl2(27ml)中的2(3.0g，5.46mmol)和异硫氰酸苯酯(3.92ml，32.76mmol)的溶液1.5小时。使该反应混合物在CH2Cl2(10ml)和水(5ml)之间分配。用硫酸钠干燥有机层，过滤并浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，己烷至2∶3己烷∶乙酸乙酯梯度液)纯化得到3(3.29g，88％)，为黄色固体。Rf:0.27(ACN∶H2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.77(bs，1H)，7.42-7.11(m，5H)，6.65(d，1H)，6.29(s，1H)，5.6-5.5(m，1H)，4.19-4.14(m，2h)，4.08(d，1H)，3.92(s，3H)，3.87-3.65(m，6H)，3.77(s，3H)，3.37-2.98(m，8H)，2.50(d，1H)，2.31(s，3H)，2.20(s，3H)，1.96(d，1H)，1.87(s，3H)，1.81-l.75(m，1H)，0.96(d，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ185.7，180.9，178.9，172.0，155.7，147.1，143.2，142.4，136.0，135.1，130.5，129.9，129.3，128.5，126.9，124.4，120.2，117.4，116.3，77.1，60.9，58.6，56.2，55.8，55.0，54.6，53.5，41.7，40.3，25.1，24.5，18.4，15.8，8.7ESI-MS m/z：计算值C36H40N6O6S：684.8；实测值(M+H)+：685.2。
实施例33
于23℃搅拌在6.5M HCl/二氧六环(150ml)中的3(0.143g，0.208mmol)的溶液6小时。然后，向该反应物中加入甲苯(3ml)及倾出有机层。所得残留物在饱和的碳酸氢钠水溶液(3ml)和CHCl3(3×3ml)之间分配。将所得有机层用干燥并浓缩，得到标题化合物4和6的混合物(4∶6 90∶10)，该混合物静置缓慢环化成6。Rf：0.4(乙酸乙酯∶甲醇5∶1，硅胶).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.45(s，1H)，4.16(m，1H)，4.02(d，1H)，3.96(s，3H)，3.79(m，2h)，3.75(s，3H)，3.35(m，1H)，3.20-3.00(m，3H)，2.87(d，1H)，2.75(d，1H)，2.43(d，1H)，2.34(s，3H)，2.30(s，3H)，1.93(s，3H)，1.72-1.5(m，3H)。ESI-MS m/z：计算值C26H30N4O5：478.5；实测值(M+H)+：479.2。
实施例34
于23℃搅拌在6.5M HCl/二氧六环(150ml)中的3(0.143g，0.208mmol)的溶液1小时。溶剂蒸发得到残留物，该残留物经快速柱层析(乙酸乙酯/甲醇/三乙胺100∶25∶0.1)纯化得到6(80mg，83％)，为黄色固体。Rf：0.26(ACN∶H2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ6.46(s，1H)，5.9(bs，1H)4.67(dd，J＝18.3Hz，J＝7.8Hz，1H)，4.24(d，1H)，4.16(s，3H)，3.93(d，J＝2.7Hz，1H)，3.8(m，2h)，3.77(s，3H)，3.45(m，2h)，3.08(dd，J＝17.9Hz，J＝3.6Hz，1H)，2.78(m，1H)，2.55(d，1H)，2.3(m，1H)，2.3(s，3H)，2.28(s，3H)，1.90(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ186.2，162.1，154.9，146.9，145.3，143.0，130.1，129.4，128.1，125.0，121.4，116.4，116.2，66.6，60.7，60.7，60.1，59.6，58.8，55.6，54.9，41.9，25.3，24.7，15.7，8.9。ESI-MS m/z：计算值C26H28N4O4：460.5；实测值(M+H)+：461.1。
实施例35
向在二氧六环(5ml)中的3(2.38g，3.47mmol)的溶液中加入在二氧六环(34ml)中的5.3M HCl，在23℃搅拌该反应物45分钟。然后加入Ac2O(51ml，539.5mmol)并将该混合物搅拌4小时。将反应物冷至0℃并于此温度下在饱和碳酸钠水溶液(300ml)和乙酸乙酯(300ml)之间分配。用硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，CH2Cl2至CH2Cl2∶乙酸乙酯1∶2梯度液)纯化得到5(1.75g，97％)，为黄色固体。Rf：0.53(ACN∶H2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.51(s，1H)，5.98(bs，1H)，4.84(dd，1H)，4.17(d，1H)，4.00(d，1H)，3.99(s，3H)，3.85(bs，1H)，3.81(m，1H)，3.74(s，3H)，3.70(d，1H)，3.23(m，1H)，3.11(dd，1H)，3.09(m，1H)，2.93(m，2 h)，2.44(d，1H)，3.67(s，3H)，2.25(s，3H)，1.70(s，3H)，1.60-1.50(m，2 h)，1.29(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ185.9，180.8，169.9，160.2，156.2，147.0，143.1，140.4，136.1，130.6，129.6，127.9，120.4，117.2，61.0，60.7，58.6，56.1，55.7，55.1，54.3，41.8，41.1，25.7，23.9，22.2，15.7，8.7。ESI-MS m/z：计算值C28H32N4O6：520.6；实测值(M+H)+：521.1。
实施例36
于0℃向在CH2Cl2(17ml)中的5(1.75g，3.36mmol)的溶液中加入二异丙基乙胺(11.71ml，67.23mmol)、DMAP(20mg，0.17mmol)和溴甲基甲醚(4.11ml，50.42mmol)。在23℃6小时后，使该反应物在CH2Cl2(50ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(25ml)之间分配。用硫酸钠干燥有机层，并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(RP-18，CH3CN/H2O1/1)纯化得到7黄色固体(1.32g，70％)。Rf：0.34(ACN：H2O 2∶3，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.74(s，1H)，5.14(s，2h)，4.82(m，1H)，4.22(d，1H)，4.00(s，3H)，4.0(m，1H)，3.83(m，2h)，3.7(s，3H)，3.58(s，3H)，3.4(m，1H)，3.2-2.95(m，6H)，2.43(d，1H)，2.37(s，3H)，2.22(s，3H)，1.89(s，3H)，1.5-1.4(m，2h)，1.31(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ185.9，180.7，169.6，156.2，148.9，148.5，140.3，136.2，131.3，130.1，127.7，124.6，123.7，117.3，99.5，99.2，60.9，59.7，58.8，57.7，56.4，55.7，55.0，54.2，51.0，41.6，41.0，40.5，25.5，23.9，22.3，19.3，15.6，14.6，8.6。ESI-MS m/z：计算值C30H36N4O7：564.6；实测值(M+H)+：565.3。
实施例37
于0℃向在甲醇(74ml)中的7(0.37g，0.65mmol)的溶液中加入1M氢氧化钠(130ml)。搅拌该反应物15分钟后，在0℃用6M HCl猝灭至pH＝5。将所得混合物用乙酸乙酯(3×50ml)提取并将合并的有机层用硫酸钠干燥及真空浓缩。残留物经快速柱层析(RP-C18，CH3CN/H2O 1/∶1)纯化得到8的黄色油状物(232mg，65％)。Rf：0.5(ACN：H2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.75(s，1H)，5.15(s，2h)，4.86(m，1H)，4.96(d，1H)，)，4.01(d，1H)，3.88-3.81(m，2h)，3.70(s，3H)，3.58(s，3H)，3.39(m，1H)，3.27-3.21(m，1H)，3.18-3.08(m，2 h)，3.03-2.97(m，1H)2.47(d，1H)，2.37(s，3H)，2.22(s，3H)，1.90(s，3H)，1.57-1.46(m，2h)，1.33(s，3H)；13C NMR(75 MHz，□CDCl3)：δ185.3，180.6，175.9，170.1，151.5，148.9，148.6，143.3，133.7，131.5，129.9，124.7，123.5，117.1，117.0，99.2，59.8，58.7，57.8，56.3，55.3，54.9，54.3，41.5，40.7，29.6，25.5，24.4，22.2，20.7，15.7，8.0。ESI-MS m/z：计算值C29H34N4O7：550.6；实测值(M+H)+：551.2。
实施例38
向在DMF(30ml)中的化合物8(240mg，0.435mmol)的脱气溶液中加入10％Pd/C(48mg)并在H2(大气压)搅拌反应物1小时。在氩气下该反应物以无色溶液通过硅藻土垫过滤至含有无水Cs2CO3(240mg，0.739mmol)的Schlenk管中。然后加入溴代氯甲烷(0.566ml，8.71mmol)。封闭管口，于90℃搅拌3小时。冷却反应物，通过硅藻土过滤并用CH2Cl2洗涤。将有机层浓缩及干燥(硫酸钠)得到9，为棕色油状物，该油状物可不经进一步纯化直接用于下一步反应。Rf：0.36(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶5).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.71(s，3H)，5.89(d，1H)，5.81(d，1H)，5.63(bs，1H)，5.33(d，1H)，5.17(d，1H)，4.97(m，1H)，4.20(d，1H)，4.09(m，1H)，3.99(m，1H)，3.68(m，1H)，3.65(s，6H)，3.59-3.47(m，4H)，3.37-3.27(m，2h)，3.14-2.97(m，2h)，2.62(d，1H)，2.32(s，3H)，2.20(s，3H)，2.08(s，3H)，1.72(m，1H)，1.36(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ169.8，149.1，147.4，145.5，136.2，130.9，130.8，125.0，122.9，117.7，112.6，111.8，106.4，100.8，99.8，59.8，58.9，57.7，56.6，56.4，55.5，55.2，41.6，40.1，29.6，25.9，25.0，22.6，15.6，8.8。ESI-MS m/z：计算值C30H36SiN4O7：564.6；实测值(M+H)+：565.3。
实施例39
于0℃向含有在DMF(4ml)中的9(245mg，0.435mmol)的溶液的烧瓶中加入碳酸铯(425mg，1.30mmol)和烯丙基溴(376ml，4.35mmol)，在23℃搅拌混合物1小时。所得反应物通过硅藻土垫过滤并在CH2Cl2(25ml)和水(10ml)之间分配。将有机相干燥(硫酸钠)并减压浓缩，得到残留物，使其经快速柱层析(SiO2，CHCl3∶乙酸乙酯1∶2)纯化得到10的黄色油状物(113mg，43％)。Rf：0.36(己烷∶乙酸乙酯1∶5)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.74(s，1H)，6.3-6.0(m，1H)，5.94(d，1H)，5.87(d，1H)，5.43-5.36(m，2h)，5.22(s，2h)，5.00(m，1H)，4.22(m，1H)，4.17-4.01(m，1H)，3.98(m，2h)，3.71-3.67(m，1H)，3.69(s，3H)，3.62-3.51(m，3H)，3.58(s，3H)，3.39-3.37(m，1H)，3.31-3.26(m，3H)，3.09(dd，1H)，2.56(d，1H)，2.36(s，3H)，2.21(s，3H)，2.11(s，3H)，2.24-2.10(m，1H)，1.82-1.73(m，1H)，1.24(bs，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ169.4，148.8，148.3，139.1，133.7，130.9，130.3，125.2，120.2，117.7，113.1，112.6，101.3，99.3，74.1，59.7，59.3，57.8，57.0，56.1，56.1，55.2，41.6，41.0，40.9，29.7，26.3，22.5，15.6，9.3ESI-MS m/z：计算值C33H40N4O7：604.7；实测值(M+H)+：605.3。
实施例40
于0℃向在CH2Cl2(0.2ml)中的9(22mg，0.039mmol)的溶液中加入乙酰氯(2.79ml，0.039mmol)和吡啶(3.2ml，0.039mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后该反应液用CH2Cl2(10ml)稀释并用0.1NHCl(5ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂得到46(22mg，93％)，为白色固体。Rf：0.4(己烷∶乙酸乙酯1∶5)。1H NMR(300MHz，CDCl3).δ6.74(s，1H)，5.97(d，J＝0.9Hz，1H)，5.91(d，J＝0.9Hz，1H)，5.12(d，J＝5.7Hz，2 h)，5.04(d，J＝5.7Hz，1H)4.90(t，J＝6Hz，1H)，4.17(d，J＝2.7Hz，1H)，4.05(d，J＝2.7Hz，1H)，4.01(bs，1H)，3.71(s，3H)，3.57(s，3H)，3.50-3.44(m，2h)，3.38-3.36(m，1H)，3.30-3.26(m，1H)，3.00(dd，J1＝7.8Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.79(d，J＝12.9Hz，1H)，2.60(d，J＝18.0Hz，1H)，2.35(s，3H)，2.32(s，3H)，2.21(s，3H)，2.00(s，3H)，1.68(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)。ESI-MS m/z：计算值C32H38N4O8：606.67；实测值(M+H)+：607.3。
实施例41
向在二氧六环(0.1ml)中的46(8mg，0.013mmol)的溶液中加入5.3N HCl/二氧六环(0.5ml)。将该反应物在23℃搅拌1小时。然后，该溶液用CH2Cl2(5ml)稀释并用0.1N HCl(3ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂得到47(5mg，70％)，为白色固体。Rf：0.4(己烷∶乙酸乙酯1∶5)。1H NMR(300MHz，CDCl3).δ6.51(s，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，4.97(bs，1H)，4.11(bs，1H)，4.04-4.02(m，2h)，3.75(s，3H)，)，3.65(d，J＝2.1Hz，2h)，3.56-3.30(m，2h)，3.04(dd，J1＝7.5Hz，J2＝18Hz，1H)，2.80(d，J＝14.4Hz，1H)，2.59(d，J＝18.3Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.24(s，3H)，2.00(s，3H)，1.76(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.33(s，3H)，1.25(s，3H)。ESI-MS m/z：计算值C30H34N4O7：562.61。实测值(M+H)+：563.3。
实施例42
于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的45(10mg，0.0192mmol)的溶液中加入异戊酰氯(2.34ml，0.0192mmol)和吡啶(1.55ml，0.0192mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该溶液用CH2Cl2(5ml)稀释并用0.1N HCl(3ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)纯化得到48(11mg，95％)，为白色固体。Rf：0.12(己烷∶乙酸乙酯1∶2).1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.50(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.75(s，1H)，5.02(t，J＝5.4Hz，1H)，4.10(d，J＝1.5Hz，1H)，4.06(d，J＝2.7Hz，1H)，4.02(d，J＝2.7Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.76-3.71(m，1H)，3.86-3.28(m，3H)，3.04(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.78(d，J＝15.9Hz，1H)，2.55(d，J＝18Hz，1H)，2.32(s，6H)，2.26(s，3H)，1.98(s，3H)，1.84-1.68(m，2h)，1.36(d，J＝7.2Hz，2h)，0.69(d，J＝6.6Hz，3H)，0.62(d，J＝6.6Hz，3H).ESI-MS m/z：计算值C33H40N4O7：604.69.实测值(M+H)+：605.3.
实施例43
于0℃向在CH2C12(0.3ml)中的45(10mg，0.0192mmol)的溶液中加入异戊酰氯(3.98ml，0.0192mmol)和吡啶(1.55ml，0.0192mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该溶液用CH2Cl2(5ml)稀释并用0.1N HCl(3ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)纯化得到49(12.4mg，96％)，为白色固体。Rf:0.7(乙酸乙酯∶甲醇10∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.50(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.73(s，1H)，5.08(t，J＝5.4Hz，1H1，4.10(d，J＝1.5Hz，1H)，4.05(m.，1H)，4.01(m，1H)，3.76(s，3H)，3.65-3.61(m，1H)，3.40-3.27(m，3H)，3.03(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.6Hz，1H)，2.78(d，J＝13.2Hz，1H)，2.57(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.31(s，3H)，2.25(s，3H)，1.99(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.0Hz，J2＝16.5Hz，1H)，1.73-1.42(m，4H)，1.33-1.18(m，10H)，1.03(m，2h)，0.87(t，J＝6.6Hz，3H)。ESI-MS m/z：计算值C38H50N4O7：674.83；实测值(M+H)+：675.5。
实施例44
于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的45(14.5mg，0.0278mmol)的溶液中加入反式-3-三氟甲基肉桂酰氯(4.76ml，0.0278mmol)和吡啶(2.25ml，0.0278mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该反应液用CH2Cl2(5ml)稀释并用0.1N HCl(3ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶1)纯化得到50(18.7mg，94％)，为白色固体。Rf：0.64(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CH3OD).δ7.74-7.55(m，4H)，7.23(d，J＝16.0Hz，1H)，6.34(s，1H)，6.12(d，J＝16.0Hz，1H)，6.07(d，J＝0.9Hz，1H)，5.96(d，J＝0.9Hz，1H)，4.39(d，J＝2.4Hz，1H)，4.07-4.05(m，1H)，3.81(bs，1H)，3.46-3.51(m，3H)，3.42(s，3H)，3.09(br d，J＝12.0Hz，1H)，2.94-2.85(m，2h)，2.74(d，J＝18.3Hz，1H)，2.38(s，3H)，2.23(s，3H)，2.02(s，3H)，1.80(s，3H)，1.84-1.75(m，1H)。13C NMR(75MHz，CDCl3))：δ168.7，165.3，146.5，144.7，142.6，140.6，138.0，135.9，131.0，130.9，129.1，128.6，125.8，125.7，124.5，124.4，122.7，121.2，117.8，116.5，113.0，112.0，101.7，60.4，59.1，56.5，56.4，55.6，55.3，41.8，40.3，26.6，25.1，20.3，15.4，9.3。ESI-MS m/z：计算值C38H37F3N4O7：718.72；实测值(M+H)+：719.3。
实施例45
于0℃向在CH2Cl2(0.4ml)中的43(33mg，0.0557mmol)的溶液中加入异戊酰氯(6.79ml，0.0557mmol)和吡啶(4.5ml，0.0557mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该溶液用CH2Cl2(5ml)稀释并用0.1N HCl(3ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)纯化得到51(34mg，91％)，为白色固体。Rf：0.09(己烷∶乙酸乙酯1∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ6.46(s，1H)，6.10(bs，1H)，5.99(d，J＝0.9Hz，1H)，5.90(d，J＝0.9Hz，1H)，5.30(t，J＝6.0Hz，1H)，4.10-4.05(m，3H)，3.81(bs，1H)，3.74(s，3H)，3.54(bs，1H)，3.38-3.36(m，1H)，3.29-3.21(m，1H)，3.00(dd，J1＝8.0Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.25(s，3H)，2.20(s，3H)，2.00(s，3H)，1.95-1.90(m，3H)，0.87(d，J＝6.6Hz，6H)，0.76(d，J＝6.0Hz，3H).ESI-MS m/z：计算值C36H45N5O8：675.77.实测值(M+H)+：676.3.
实施例46
于0℃向在CH2Cl2(0.4ml)中的43(33mg，0.0557mmol)的溶液中加入反式-3-三氟甲基肉桂酰氯(9.52ml，0.0557mmol)和吡啶(4.5ml，0.0557mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该溶液用CH2Cl2(5ml)稀释并用0.1N HCl(3ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)纯化得到52(40mg，92％)，为白色固体。Rf：0.21(己烷∶乙酸乙酯1∶2)。1H NMR(300MHz，CD3OD).δ7.74-7.47(m，4H)，6.49(s，1H)，6.40(d，J＝15.6Hz，1H)，6.00(d，J＝1.5Hz，1H)，5.90(d，J＝1.5Hz，1H)，5.47(t，J＝6Hz，1H)，4.12-4.09(m，3H)，3.93(bs，1H)，3.71(s，3H)，3.59-3.58(m，1H)，3.38(d，J＝7.8Hz，1H)，3.29(d，J＝12.0Hz，1H)，3.00(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.79-2.78(m，1H)，2.65(d，J＝18.3Hz，1H)2.29(s，6H)，2.28(s，3H)，2.22(s，3H)，1.84-1.80(m，1H)，0.85-0.84(m，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ171.9，168.8，164.4，146.9，144.6，143.0，140.5，140.5，139.3，135.7，131.1，131.0，129.4，129.1，126.0，124.1，124.0，122.4，121.1，120.7，120.6，117.7，116.9，112.8，112.0，101.6，60.6，59.3，57.1，56.3，55.9，55.2，49.0，41.7，49.9，26.5，25.1，20.2，18.4，15.7，9.3ESI-MS m/z：计算值C41H42F3N5O8：789.8；实测值(M+H)+：790.3。
实施例47
于23℃向在CH2Cl2(0.2ml)中的43(10mg，0.0169mmol)的溶液中加入三氟乙酸酐(2.38μl，0.0169mmol)。将该反应混合物搅拌5小时，然后，该溶液用CH2Cl2(5ml)稀释并用0.1N HCl(3ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯3∶2)纯化得到53(10.7mg，93％)，为白色固体。Rf：0.57(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.45(s，1H)，6.00(d，J＝1.2Hz，1H)，5.90(d，J＝1.2Hz，1H)，5.87(bs，1H)，5.32(bs，1H)，4.12(d，J＝2.1Hz，1H)，4.08(d，J＝1.8Hz，1H)，3.78-3.56(m，3H)，3.72(s，3H)，3.40(d，J＝8.1Hz，1H)，3.25(d，J＝9.3Hz，1H)，3.00(dd，J1＝8.4Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.77(dd，J1＝2.1Hz，J2＝15.9Hz，1H)，2.68(d，J＝18.6Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.22(s，3H)，2.00(s，3H)，1.75(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.9Hz，1H)，0.69(d，J＝6.3Hz，3H)，13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.1，168.6，156.0，147.0，144.6，143.0，140.6，140.4，131.0，129.4，120.9，120.7，117.6，116.8，112.4，112.1，101.6，60.5，59.0，57.1，56.3，55.6，55.2，48.7，41.6，39.4，26.5，24.9，20.2，17.8，15.4，9.2；ESI-MS m/z：计算值C33H36F3N5O8：687.63；实测值(M+H)+：688.66。
实施例48
于23℃向在CH2Cl2(0.2ml)中的19(11mg，0.0169mmol)的溶液中加入三氟乙酸酐(2.38ml，0.0169mmol)。将该反应混合物搅拌5小时，然后，该溶液用CH2Cl2(5ml)稀释并用0.1N HCl(3ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯3∶2)纯化得到54(10.7mg，93％)，为白色固体。Rf:0.6(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.33(d，J＝6.3Hz，1H)，6.45(s，1H)，6.04(m，1H)，5.95(d，J＝1.5Hz，1H)，5.84(d，J＝1.5Hz，1H)，5.32(m，2h)，5.21(m，1H)，4.11(m，4H)，3.73(s，3H)，3.64(m，2 h)，3.51(m，1H)，3.37(d，J＝7.8Hz，1H)，3.22(m，2 h)，3.03(dd，1H，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.60 (d，J＝18.3Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.24(s，3H)，2.08(s，3H)，1.86(dd，J1＝12Hz，J2＝16.2Hz，1H)，0.82 (d，J＝7.2Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.0，156.0，148.4，147.1，144.3，143.0，138.7，133.8，130.5，129.4，120.6，120.4，117.6，117.5，117.0，113.5，112.5，112.4，101.1，74.1，66.8，60.4，59.3，56.9，56.6，56.3，55.4，48.7，41.6，40.1，26.2，25.0，17.6，15.4，9.1.ESI-MS m/z：计算值C35H39F3N5O7：685.69；实测值(M+H)+：686.3。
实施例49
于23℃向在CH2Cl2(4ml)中的54(100mg，0.415mmol)的溶液中加入乙酸(40ml)、(PPh3)2PdCl2(8.4mg，0.012mmol)和Bu3SnH(157ml，0.56mmol)。于此温度搅拌2小时后，将反应物倒入快速柱的垫中(SiO2，己烷至己烷∶乙酸乙酯2∶1梯度液)得到55(90mg，96％)，为白色固体。Rf：0.6(己烷∶乙酸乙酯1∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.55(d，J＝7.2Hz，1H)，6.45(s，1H)，5.90(d，J＝1.2Hz，1H)，5.82(d，J＝1.2Hz，1H)，5.37(t，J＝6.0Hz，1H)，4.15(d，J＝2.1Hz，1H)，4.04(d，J＝1.8Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.66-3.53(m，2h)，3.37-3.31(m，2h)，3.19-3.15(d，J＝11.7Hz，1H)，3.08-3.00(m，2h)，2.56(d，J＝18.3Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.24(s，3H)，2.04(s，3H)，1.91(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.84(d，J＝6.9Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.1，156.3，147.3，144.9，144.4，143.3，136.7，130.7，129.3，120.6，117.6，117.4，114.4，112.1，107.7，101.0，85.8，60.5，59.3，56.5，56.4，56.2，55.2，48.9，41.6，40.9，25.7，25.3，18.0，15.6，8.7。ESI-MS m/z：计算值C32H35F3N5O7：645.63；实测值(M+H)+：646.2。
实施例50
向在CH2Cl2(1.44ml)中的17(200mg，0.288mmol)的溶液中加入三氟乙酸(888ml，11.53mmol)，并将该反应混合物在23℃搅拌4小时，所得反应物于0℃用饱和碳酸氢钠水溶液(60ml)猝灭，并用乙酸乙酯(2×70ml)提取。干燥(硫酸钠)有机层并真空浓缩，得到56(147mg，93％)，该白色固体可不经进一步纯化直接用于下一步的反应。Rf：0.19(乙酸乙酯∶甲醇5∶1).1H NMR(300MHz，CD3OD).δ 6.48(s，1H)，5.88，d，J＝0.9Hz，1H)，5.81(d，J＝0.9Hz，1H)，4.35(d，J＝2.4Hz，1H)，4.15(d，J＝1.8Hz，1H)，3.99-3.98(m，1H)，3.70(s，3H)，3.52-2.96(m，7H)，2.68(d，J＝18.3Hz，1H)，2.24(s，3H)，2.23(s，3H)，2.06(s，3H)，1.85(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.91(d，J＝6.6Hz，3H).13C NMR(75MHz，CD3OD)：δ173.2，149.1，145.6，144.9，138.0，132.2，130.6，121.4，119.6，117.4，114.3，109.2，102.5，82.3，60.4，58.4，58.3，57.8，56.6，50.1，42.3，41.6，27.8，26.2，19.5，15.5，9.8。ESI-MS m/z：计算值C29H35N5O6：549.62；实测值(M+H)+：550.3。
实施例51
向在CH2Cl2(0.4ml)中的56(10mg，0.018mmol)的溶液中加入异硫氰酸苯酯(13ml，0.109mmol)，并将该反应物在23℃搅拌1.5小时，真空浓缩该混合物，残留物经快速柱层析(SiO2，己烷至1∶1己烷∶乙酸乙酯梯度液)纯化得到57(8mg，65％)，为白色固体。Rf：0.57(乙酸乙酯∶甲醇10∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.88(bs，1H)，7.41-7.36(m，2h)，7.27-7.22(m，1H)，7.02-7.00(d，J＝7.8Hz，2h)，6.71(d，J＝7.2Hz，1H)，6.31(s，1H)，6.17(bs，1H)，5.93 (d，J＝1.2Hz，1H)，5.83(d，J＝1.2Hz，1H)，5.55(bs，1H)，5.20-5.17(m，1H)，4.16(d，J＝1.8Hz，1H)，4.05(bs，1H)，4.02(d，J＝2.4Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.75-3.71(m，1H)，3.35(d，J＝7.8Hz，1H)，3.28-3.19(m，2h)，3.12-2.97(m，2h)，2.50(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.21(s，3H)，2.15-2.09(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.95(s，3H)，0.88(d，J＝6.9Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)：δ178.5，171.7，147.2，145.0，144.3，143.3，137.0，135.7，130.6，130.4，129.6，127.5，124.3，120.6，117.7，117.2，115.3，112.1，108.3，100.9，60.9，59.5，56.7，56.5，56.2，55.2，54.1，41.7，41.1，26.3，25.4，18.5，15.8，9.0.ESI-MS m/z：计算值C36H40N6O6S：684.81.实测值(M+H)+：685.3.
实施例52
于0℃向在CH2Cl2(0.5ml)中的57(45mg，0.065mmol)的溶液中加入乙酰氯(4.67ml，0.065mmol)和吡啶(5.3ml，0.065mmol)。搅拌该反应混合物3小时后，该溶液用CH2Cl2(10ml)稀释并用0.1N HCl(5ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(RP-18，CH3CN∶H2O 40∶60)纯化得到58(14mg，28％)，为白色固体。Rf：0.34(CH3CN∶H2O 7∶15).1H NMR(300MHz，CDCl3).δ11.90(d，J＝6.6Hz，1H)，7.45-7.40(m，3H)，7.18-7.15(m，2h)，6.58(s，1H)，6.00(d，J＝1.2Hz，1H)，5.89(d，J＝1.2Hz，1H)，5.70(s，1H)，5.37(t，J＝4.8Hz，1H)，4.48(m，1H)，4.23(bs，1H)，4.07(bs，2h)，3.85-3.75(m，1H)，3.70(s，3H)，3.46-3.41(m，2h)，3.24-3.20(m，1H)，3.00-2.95(m，1H)，2.87-2.75(m，1H)，2.31(s，3H)，2.28(s，3H)，2.24(s，3H)，2.00(s，3H)，1.85(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.6Hz，1H)，1.66(s，3H)，0.82(d，J＝6.0Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3))：δ182.6，174.3，171.0，146.6，144.6，142.7，142.3，140.7，140.2，131.3，129.8，129.3，128.9，128.8，121.5，120.4，117.3，116.6，112.8，112.0，111.3，101.5，60.5，59.0，57.6，56.2，55.9，55.3，55.1，41.6，39.4，27.8，26.5，24.8，20.2，17.1，15.5，9.3.ESI-MS m/z：计算值C40H44N6O8S：768.88：实测值(M+H)+：769.2。
实施例53
向在二氧六环(1ml)中57(130mg，0.189mmol)的溶液中加入5.3N HCl/二氧六环(1.87ml)，在23℃搅拌该反应物4小时。然后将CH2Cl2(15ml)和H2O(10ml)加至该反应物中并将有机层倾出。所得水相在0℃用饱和碳酸氢钠水溶液(60ml)碱化(pH＝8)，然后用乙酸乙酯(2×50ml)提取。将合并的有机提取物干燥(硫酸钠)，并真空浓缩得到59(63mg，70％)，为白色固体。Rf：0.15(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3).δ6.67(s，1H)，5.99(d，J＝0.9Hz，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，5.10(bs，1H)，4.32(d，J＝7.2Hz，1H)，4.25(dd，J1＝3.6Hz，J2＝9.3Hz，1H)，3.7(s，3H)，3.71-3.64(m，2h)，3.50(dd，J1＝2.4Hz，J2＝15.9Hz，1H)，3.42-3.37(m，2h)，3.16(dd，J1＝3.6Hz，J2＝12.9Hz，1H)，2.57(dd，J1＝9.3Hz，J2＝12.9Hz，1H)，2.27(s，3H)，2.11(s，3H)，1.91(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H).ESI-MS m/z：计算值C26H30N4O5：478.5；实测值(M+H)+：479.3。
实施例54
于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的43(20mg，0.0338mmol)的溶液中加入肉桂酰氯(5.63mg，0.0338mmol)和吡啶(2.73ml，0.0338mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该溶液用CH2Cl2(10ml)稀释并用0.1N HCl(5ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)纯化得到60(22mg，90％)，为白色固体。Rf：0.56(EtOAc∶MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3).δ7.51(s，1H)，7.50-7.47(m，2H)，7.36-7.35(m，2H)，6.43(s，1H)，6.36(brd，J＝15.9Hz，2H)，6.01(d，J＝1.5Hz，1H)，5.90(brd，J＝1.5Hz，2H)，5.42(t，J＝6.0Hz 1H)，4.12-4.07(m，3H)，3.96-3.95(m，1H)，3.73(bs，3H)，3.58(bs，2H)，3.39(d，J＝8.7Hz，1H)，3.25(d，J＝11.7Hz，1H)，3.0(dd，J1＝7.5Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.78(d，J＝15.9Hz，1H)，2.67(d，J＝16.5Hz，1H)，2.29(s，6H)，2.23(s，3H)，1.99(s，3H)，1.82(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.83(d，J＝6.0Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3))：δ172.0，165.0，146.9，144.6，143.1，141.0，140.5，134.8，131.0，129.7，129.1，128.8，127.8，125.5，123.8，123.0，121.1，120.5，117.7，116.9，112.8，112.0，101.9，60.6，59.2，57.1，56.4，55.9，55.3，48.8，41.7，40.0，26.5，25.1，20.3，18.5，15.7，9.3.ESI-MS m/z：计算值C40H43N5O8：721.8.实测值(M+H)+：722.3。
实施例55
于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的45(19mg，0.0364mmol)的溶液中加入七氟丁酰氯(5.44ml，0.0364mmol)和吡啶(2.95ml，0.0364mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该溶液用CH2Cl2(10ml)稀释并用0.1N HCl(5ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)纯化得到61(11.7mg，45％)，为白色固体。Rf：0.76(EtOAc∶MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.46(s，1H)，6.12(bs，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.93(d，J＝1.2Hz，1H)，5.72(bs，1H)，4.13-4.11(m，2H)，4.0(d，J＝2.4Hz，1H)，3.98-3.96(m，1H)，3.73(s，3H)，3.39(d，J＝7.5Hz，1H)，3.39-3.28(m，2H)，3.09(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.80(d，J＝16.2Hz，1H)，2.46(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，6H)，2.21(s，3H)，1.99(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.0Hz，J2＝16.2Hz，1H).ESI-MS m/z：计算值C32H31F7N4O7：716.6：实测值(M+H)+：717.2。
实施例56
于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的43(24mg，0.04mmol)的溶液中加入丁酰氯(4.15ml，0.04mmol)和吡啶(3.28ml，0.04mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该溶液用CH2Cl2(10ml)稀释并用0.1NHCl(5ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc：MeOH 20∶1)纯化得到62(24mg，90％)，为白色固体。Rf：0.35(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.47(s，1H)，6.10(d，J＝6.5Hz，1H)，6.0(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.86(bs，1H)，5.31(d，J＝6.9Hz，1H)，4.11-4.06(m，3H)，3.85-3.81(m，1H)，3.75(s，3H)，3.59-3.53(m，2H)，3.38(d，J＝7.5Hz，1H)，3.27-3.22(m，1H)，3.0(dd，J1＝7.8Hz，J2＝17.4Hz，1H)，2.79(d，J＝15.3Hz，1H)，2.63(d，J＝17.7Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.0(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.58(q，J＝7.2Hz，2H)，0.89(t，J＝7.2Hz，3H)，0.76(d，J＝6.6Hz，3H).ESI-MS m/z：计算值C35H43N5O8：661.64；实测值(M+H)+：662.3。
实施例57
于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的43(19mg，0.0364mmol)的溶液中加入肉桂酰氯(6.06mg，0.0364mmol)和吡啶(2.95ml，0.0364mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该溶液用CH2Cl2(10ml)稀释并用0.1N HCl(5ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)纯化得到63(20.1mg，85％)，为白色固体。Rf：0.65(EtOAc∶MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.39-7.29(m，5H)，6.42，(s，1H)，6.01(d，J＝1.5Hz，1H)，5.92(d，J＝1.5Hz，1H)，5.73(bs，1H)，5.24(t，J＝6.8Hz，1H)，4.12-4.08(m，3H)，3.66-3.64(m，2H)，3.58(bs，3H)，3.36(d，J＝8.7Hz，1H)，3.29(d，J＝12.0Hz，1H)，2.98 (dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.33(s，6H)，2.29(s，3H)，2.01(s，3H)，1.84(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H).ESI-MS m/z：计算值C37H38N4O7：650.72；实测值(M+H)+：651.2。
实施例58
于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的43(20mg，0.0338mmol)的溶液中加入3-氯丙酰氯(3.22ml，0.0338mmol)和吡啶(2.73ml，0.0338mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该溶液用CH2Cl2(10ml)稀释并用0.1N HCl(5ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)纯化得到64(20.5mg，89％)，为白色固体。Rf:0.32(EtOAc∶己烷5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.48(s，3H)，6.28(m，1H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，5.86(bs，1H)，5.31(m，1H)，4.08-4.07(m，3H)，3.75(s，3H)，3.72-3.53(m，5H)，3.39(d，J＝8.1Hz，1H)，3.24(d，J＝12.0Hz，1H)，3.00(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.79(d，J＝13.5Hz，1H)，2.50(t，J＝6.3Hz，2H)，2.32(s，3H)，2.28(s，3H)，2.25(s，3H)，2.0(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.3Hz，J2＝14.8Hz，1H)，0.81(d，J＝6.3Hz，3H)。
实施例59
于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的43(19mg，0.0364mmol)的溶液中加入丁酰氯(3.78ml，0.0364mmol)和吡啶(2.95ml，0.0364mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后，该溶液用CH2Cl2(10ml)稀释并用0.1N HCl(5ml)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)纯化得到64(19mg，87％)，为白色固体。Rf：0.60(EtOAc∶MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.75(s，1H)，5.01(t，J＝6.4Hz，1H)，4.10-4.09(m，1H)，4.06(d，J＝2.1Hz，1H)，4.03-4.02(m，1H)，3.76(s，3H)，3.67-3.60(m，1H)，3.42-3.35(m，2H)，3.29(d，J＝12.0Hz，1H)，3.02(dd，J1＝7.8Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.79(d，J＝14.1Hz，1H)，2.56(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.31(s，3H)，2.25(s，3H)，1.78(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.63(s，3H)，1.53-1.46(m，2H)，1.28-1.16(m，2H)，0.68(t，J＝7.2Hz，3H).ESI-MS m/z：计算值C32H38N4O7：590.67；实测值(M+H)+：591.2。
实施例60
向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的50(31.7mg，0.044mmol)的溶液中加入AgNO3(225mg，1.32mmol)，并将该反应物在23℃搅拌17小时，然后，于0℃加入盐水(10ml)和饱和的碳酸氢钠水溶液(10ml)，并将混合物搅拌15分钟，通过硅藻土垫过滤并用CH2Cl2(20ml)洗涤，倾出溶液，干燥有机层并真空浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶1)纯化得到66(16mg，51％)，为白色固体。Rf：0.26(EtOAc：MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.66-7.42(m，4H)，7.20(bs，1H)，6.44(s，1H)，5.97(b，J＝1.2Hz，1H)，5.90(d，J＝1.2Hz，1H)，5.76(bs，1H)，5.28(bs，1H)，4.54(bs，1H)，4.43(bs，1H)，4.00(bs，1H)，3.68-3.57(m，4H)，3.47(d，J＝3.3Hz，1H)，3.40(d，J＝11.7Hz，1H)，3.17(d，J＝6.9Hz，1H)，2.92(dd，J1＝8.1Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.74(d，J＝17.1Hz，1H)，2.48(d，J＝18.6Hz，1H)，2.32(s，6H)，2.28(s，3H)，1.99(s，3H)，1.76(dd，J1＝12.0Hz，J2＝16.2Hz，1H).ESI-MS m/z：计算值C37H38F3N3O8：709；实测值(M+H)+：692.3。
实施例61
向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的53(57mg，0.0828mmol)的溶液中加入AgNO3(650mg，3.81mmol)，并将该反应物在23℃搅拌24小时，然后，于0℃加入盐水(10ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)，并将混合物搅拌15分钟，通过硅藻土垫过滤并用CH2Cl2(20ml)洗涤，倾出溶液，干燥有机层并真空浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc：MeOH 5∶1)纯化得到67(28mg，50％)，为白色固体。Rf：0.28(EtOAc：MeOH 10∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.47(s，1H)，5.97(s，1H)，5.88(s，1H)，5.35(bs，1H)，4.51(bs，1H)，4.41(bs，1H)，4.12-4.05(m，1H)，4.00(d，J＝2.7Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.64(bs，1H)，3.46(d，J＝3.3Hz，1H)，3.34(d，J＝11.4Hz，1H)，3.18(d，J＝7.5Hz，1H)，2.95(dd，J1＝8.4Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.70(d，J＝15.6Hz，1H)，2.48(d，J＝17.7Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.27(s，3H)，2.26(s，3H)，1.98(s，3H)，1.68(dd，J1＝12Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.86(d，J＝6.3Hz，3H)；ESI-MS m/z：计算值C32H37F3N4O9：678.66；实测值(M+-17)：661.2。
实施例62
向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的48(32mg，0.0529mmol)的溶液中加入AgNO3(270mg，1.58mmol)，并将该反应物在23℃搅拌24小时，然后，于0℃加入盐水(10ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)，并将混合物搅拌15分钟，通过硅藻土垫过滤并用CH2Cl2(20ml)洗涤，倾出溶液，干燥有机层并真空浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc：MeOH 5∶1)纯化得到68(18mg，56％)，为白色固体。Rf:0.40(EtOAc：MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.95(d，J＝1.2Hz，1H)，5.88(d，J＝1.2Hz，1H)，5.23(d，J＝6.9Hz，1H)，4.45(d，J＝3.3Hz，1H)，4.38(s，1H)，4.01(d，J＝2.4Hz，1H)，3.78(m，1H)，3.77(s，3H)，3.41-3.37(m，1H)，3.17-3.15(m，1H)，2.96(dd，J1＝7.8Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.70(d，J＝15.3Hz，1H)，2.40(d，J＝18.0Hz，1H)，2.30(s，6H)，2.27(s，3H)，1.76-1.65(m，1H)，1.35-1.25(m，2H)，0.89-0.82(m，1H)，0.69(d，J＝6.6Hz，3H)，0.58(d，J＝6.6Hz，3H)
实施例63
向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的51(27mg，0.04mmol)的溶液中加入AgNO3(204mg，1.19mmol)，并将该反应物在23℃搅拌24小时，然后，于0℃加入盐水(10ml)和饱和的碳酸氢钠水溶液(10ml)，并将混合物搅拌15分钟，通过硅藻土垫过滤并用CH2Cl2(20ml)洗涤，倾出溶液，干燥有机层并真空浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶1)纯化得到69(10mg，38％)，为白色固体。Rf：0.38(EtOAc：MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.48s，1H)，6.16(bs，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.89(d，J＝1.5Hz，1H)，5.33(t，J＝6.0Hz，1H)，4.50(m，1H)，4.40(m，1H)，4.11-4.09(m，1H)，4.00(d，J＝2.6Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.41-3.32(m，3H)，3.18(d，J＝8.4Hz，1H)，2.94(dd，J1＝8.4Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.70(d，J＝14.4Hz，1H)，4.45(d，J＝18.3Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.28(s，3H)，2.27(s，3H)，2.04(s，3H)，2.00-1.86(m，3H)，1.73(m，1H)，0.87(d，J＝6.3Hz，6H).
实施例64
向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的63(15mg，0.023mmol)的溶液中加入AgNO3(118mg，0.691mmol)，并将该反应物在23℃搅拌24小时，然后，于0℃加入盐水(10ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)，并将混合物搅拌15分钟，通过硅藻土垫过滤并用CH2Cl2(20ml)洗涤，倾出溶液，干燥有机层并真空浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc：MeOH 5∶1)纯化得到70(20.1mg，85％)，为白色固体。Rf：0.43(EtOAc∶MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.28(m，5H)，6.48(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.75(bs，1H)，5.38(brd，1H)，5.30(bs，1H)，4.53(m，1H)，4.42(m，1H)，4.02(d，J＝2.7Hz，1H)，3.78-3.65(m，5H)，3.46-3.40(m，2H)，3.17(d，J＝7.8Hz，1H)，2.94(dd，J1＝7.8Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.73 (d，J＝16.8Hz，1H)，2.45(d，J＝18.0Hz，1H)，2.31(s，6H)，2.28(s，3H)，1.97(s，3H)，1.77(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.3Hz，1H).
实施例65
向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的65(25mg，0.042mmol)的溶液中加入AgNO3(215.56mg，1.269mmol)，在23℃搅拌该反应物24小时。然后在0℃加入盐水(10ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)，将反应混合物搅拌15分钟，通过硅藻土垫过滤并用CH2Cl2(20ml)洗涤。倾出该溶液并干燥有机层，真空浓缩。将残留物经快速柱层析纯化(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶2)得到71(16mg，65％)，为白色固体。Rf：0.0.5(EtOAc：MeOH 5∶2).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.95(d，J＝1.5Hz，1H)，5.78(s，1H)，5.19(bs，1H)，4.45(d，J＝3.3Hz，1H)，4.37(bs，1H)，4.11(brd，J＝4.8Hz，1H)，4.01(d，J＝2.1Hz，1H)，3.76(s，1H)，3.71-3.69(m，1H)，3.49-3.35(m，1H)，3.24(d，J＝13.5Hz，1H)，3.15(d，J＝9.3Hz，1H)，2.95(dd，J1＝8.1Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.70(d，J＝15.6Hz，1H)，2.40(d，J＝18.0Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.29(s，3H)，2.26 (s，3H)，1.96(s，3H)，1.75-1.66(m，1H)，1.52-1.17(m，2H)，0.66(t，J＝7.2Hz，3H).
发酵方法
实施例A
将含有1％葡萄糖、0.25％牛肉膏、0.5％细菌培养蛋白胨(bacto-peptone)、0.25％NaCl、0.8％CaCO3的接种培养基(Seed medium)YMP3与0.1％的微生物，荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)的A2-2菌株的冷冻营养原液接种，并于27℃在旋转摇瓶(250rpm)中培养。培养30小时后，将接种的培养物加至装有包括2％葡萄糖；4％甘露醇、2％干酿造酵母(brewer’s yeast)(VitalevorBiolux，Belgium)；1％(NH4)2SO4；0.04％K2HPO4；0.8％KCl；0.001％FeCl3；0.1％L-Tyr；0.8％CaCO3；0.05％PPG-2000；0.2％消泡剂硅氧烷(anti-foam silicone)(ASSAF-100，RHODIA UK)的生产培养基的带搅拌器的发酵容器中。于122℃灭菌30分钟。培养体积是2％(v/v)。温度为27℃(0至16h)和从16h至最后步骤(41小时)为24℃。溶解氧压高达25％。从28小时至最后步骤其pH用稀硫酸控制在6.0。过压为0.5巴。从16小时至最后步骤(进行两天时间)加入1％甘露醇或山梨醇并在三天的发酵过程中达2％。
41或64小时后，必须提取发酵的液体培养物回收番红菌素B或者用KCN处理所述净化的液体培养液回收氰基-番红菌素B(safracin B-cyano)。
实施例B
从粗提物中获得氰基-番红菌素B
于pH6净化或过滤所得发酵液体培养液以除去固体。将净化的液体培养液用稀氢氧化钠调节至pH9.5并用2∶1(v/v)乙酸乙酯、二氯甲烷或乙酸丁酯提取两次。所得提取物在20分钟时间加至搅拌容器中，保持该混合物的温度在8-10℃。经液-液离心分离两相。将有机层用无水硫酸钠干燥，或冷冻干燥然后过滤除去冰。将此有机层(乙酸乙酯层)蒸发直至获得油状粗提物。
实施例C
由所得净化的液体培养液获得氰基番红菌素B
于pH6净化或过滤所得发酵液体培养液以除去固体。将净化的液体培养液用浓乙酸调节至pH3.9。将每升0.5克的KCN加至净化的液体培养液并在搅拌下于20℃培养1小时。然后将温度降至15℃，用稀氢氧化钠调节pH至9.5并用2∶1.5(v/v)乙酸乙酯提取。将提取物在20分钟时间加至搅拌容器中，保持该混合物的温度在8-10℃。经液-液离心分离两相。有机层用无水硫酸钠干燥。将该有机层(乙酸乙酯层)蒸发直至获得油状粗提物。该提取物经快速柱层析(SiO2，20∶1至10∶至5∶1，乙酸乙酯∶甲醇梯度液)纯化定量得到化合物2，为浅黄色固体。Rf：0.55(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)；.tR＝19.9min[HPLC，Delta PackC4，5μm，300A，150×3mm，λ＝215nm，flow＝0.7ml/min，temp＝50℃，grad.：CH3CN-aq.NaOAc(10mM) 85％-70％(20′)]；1H NMR(300Mhz，CDCl3)：δ6.54(dd，J1＝4.4Hz，J2＝8.4Hz，1H)，6.44(s，1H)，4.12(d，J＝2.4Hz，1H)，4.04(d，J＝2.4Hz，1H)，4.00(s，3H)，3.87(bs，1H)，3.65(ddd，J1＝1.5Hz，J2＝8.7Hz，J3＝9.9Hz，1H)，3.35(br.D，J＝8.4Hz，1H)，3.15-2.96(m，4H)，2.92(q，J＝7.2Hz，1H)，2.47(d，J＝18.3Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.18(s，3H)1.83(s，3H)，1.64(ddd，J1＝2.7Hz，J2＝11.1Hz，J3＝14.1Hz，1H)，0.79(d，J＝7.2Hz，3H)；13C NMR(75Mhz，CDCl3)：δ186.0(q)，175.9(q)，156.2(q)，146.8(q)，142.8(q)，140.7(q)，136.6(q)，130.5(q)，128.8(q)，127.0(q)，120.5(s)，117.4(q)，116.5(q)，60.8(t)，60.4(s)，58.7(t)，56.2(s)，55.7(s)，54.8(s)，54.8(s)，54.4(s)，50.0(s)，41.6(t)，39.8(d)，25.2(d)，24.4(d)，21.2(t)，15.5(t)，8.4(t).ESI-MS m/z：计算值C29H35N5O6：549.6实测值(M+Na)+：572.3.
实施例D
将包括葡萄糖(2％)、甘露醇(4％)、干酿造酵母(2％)、硫酸铵(1％)；磷酸氢钾(potassium secondary phosphate)(0.04％)、氯化钾(0.8％)；氯化铁(III)-六水合物(0.001％)、L-酪氨酸(0.1％)、碳酸钙(0.8％)、聚-(丙二醇)2000(0.05％)和消泡剂ASSAF 1000(0.2％)的培养基(501)加至75升总体积容量的罐式-发酵容器中，灭菌后用A2-2菌株(FERM BP-14)接种的培养物(2％)培养，在搅拌下于27℃至24℃进行通气培养64小时(每分钟通气75L并以350至500rpm搅拌)。其pH通过从27小时至最终步骤自动加稀硫酸控制。从16小时至最终步骤加入2％的甘露醇。这样得到培养基(451)，经离心分离除去细胞后，用稀氢氧化钠调节至pH至9.5，用251乙酸乙酯提取两次。将混合物于8℃用20分钟加至搅拌容器中。经液-液离心分离两相。将所得有机层在-20℃冷冻并过滤除去冰，蒸掉冰并蒸发直至得到40g深色油状-粗提物。引入氰化物基团后纯化，得到3.0克氰基番红菌素B。
实施例E
将包括葡萄糖(2％)、甘露醇(4％)、干酿造酵母(2％)、硫酸铵(1％)；磷酸氢钾(0.02％)、氯化钾(0.2％)；氯化铁(III)-六水合物(0.00 1％)、L-酪氨酸(0.1％)、碳酸钙(0.8％)、聚(丙二醇)2000(0.05％)和抗泡沫(antifoam)ASSAF 1000(0.2％)的培养基(501)加至75升总体积容量的罐式-发酵容器中，灭菌后用A2-2菌株(FERM BP-14)的接种培养物(2％)培养，并在搅拌下于27℃至24℃进行通气培养41小时(每分钟通气75L并以350至500rpm搅拌)。其pH通过从28小时至最终步骤自动加入稀硫酸控制。从16小时至最终步骤加入1％的甘露醇。这样得到培养基(451)，经离心除去细胞后，用200ml浓乙酸调节至pH3.9。加入25克97％的氰化钾，于20℃搅拌1小时后，用1500ml的10％氢氧化钠溶液调节pH至9.5。然后用35升乙酸乙酯提取。将混合物于8℃用20分钟加至搅拌容器中。经液-液离心分离两相。将有机层用无水硫酸钠干燥并蒸发直至获得60g深色油状粗提物。
层析后，得到4.9克氰基番红菌素B。
实施例66
于23℃，在氩气下向搅拌的在二氯甲烷(535ml)中的25(7.83g，0.0139mol)和商业可得到的Boc-Cys(Fm)衍生物(Bachem)(8.33g，35.04mmol)的溶液中加入二甲基氨基吡啶(4.28g，35.04mmol)和1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(6.66g，35.04mmol)。然后于23℃搅拌混合物2.5小时。通过加入饱和碳酸氢钠水溶液(500ml)猝灭反应，分离有机层并用二氯甲烷(250ml)回提水层。将合并的有机提取物用硫酸钠干燥，过滤并减压下蒸发至干。所得粗产物经快速柱层析纯化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以从1∶4至2∶1梯度方式洗脱，得到142(12.21g，93％)，为浅黄色固体。Rf＝0.35 Hex：EtOAc1∶1。1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.72(d，J＝7.3，2.7Hz 2H)，7.55(dd，J1＝14.6，J2＝7.62H)，7.40-7.34(m，2H)，7.30-7.24(m，2H)，6.63(s，1H)，6.08-5.99(m，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.80(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(dd，J1＝17.3，J2＝1.7Hz 1H)，5.24(dd，J1＝10.5，J2＝1.7Hz，1H)，5.09(AB，J＝4.48Hz，2H)，5.07(t，J＝7.8Hz，1H)，4.34-4.29(m，2H)，4.17(d，J＝1.9Hz，1H)，4.16-4.04(m，4H)，4.02-3.96(m，2H)，3.93(t，J＝5.3Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.56(s，3H)，3.32(d，J＝8.0，1H)，3.23-3.17(m，2H)，3.0-2.89(m，3H)，2.65-2.57(m，2H)，2.29(s，3H)，2.20(s，3H)，2.03(s，3H)，1.76(dd，J1＝16.3，J2＝12.7Hz，1H)，1.45，1.44(s，9H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)：δ170.9，155.3，148.9，148.6，146.1，146.0，144.7，141.2，141.1，139.4，134.0，131.0，130.1，127.8，127.2，125.2，125.0，124.3，121.3，121.2，120.1，118.1，117.6，112.9，101.4，99.5，80.3，74.2，65.6，60.4，60.1，57.9，57.4，57.2，57.1，56.9，55.6，53.2，47.0，41.8，41.7，36.7，35.3，28.5，26.6，25.3，15.9，9.4。ESI-MS m/z：计算值C53H60N4O10S：945.13 ；实测值(M+H)+：946.3。
实施例67
于23℃，在氩气下向搅拌的在二氯甲烷(318ml)中142(12.01g，0.0127mol)的溶液中加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(0.71g，1.015mmol)和乙酸(3.6ml，0.176mol)。然后搅拌下滴加入氢化三丁基锡(10.27ml，0.037mol)。将所得混合物于23℃搅拌10分钟。然后所得反应物经用己烷压积(compacted)的硅胶柱过滤。经用乙酸乙酯和己烷的混合物以1∶4、1∶1至7∶3的梯度方式随后洗脱得到143(10.89g，95％)黄色固体。Rf＝0.25 Hex∶EtOAc 2∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72(d，J＝7.6Hz，2H)，7.61(d，J＝6.6Hz，1H)，7.52(d，J＝7.3Hz，1H)，7.37(t，J＝7.8Hz，2H)，7.28(m，2H)，6.63(s，1H)，5.87(d，J＝1.5Hz，1H)，5.76(d，J＝1.5Hz，1H)，5.58(bs，1H)，5.31(d，J＝5.8Hz，1H)，5.17(d，J＝5.6Hz，1H)，4.91(d，J＝8.3Hz，1H)，4.17-4.06(m，4-6H)，3.85(t，J＝5.7Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.68(s，3H)，3.34(brd，J＝6.6Hz，1H)，3.23(brd，J＝11.2Hz，1H)，3.06(brd，J＝12.9Hz，1H)，3.04-2.86(m，3H)，2.65-2.54(m，2H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，1.94(s，3H)，1.80(dd，J1＝11.5Hz，J2＝15.8Hz，1H)，1.45(s，9H)。13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ175.3，170.5，154.9，149.1，147.6，145.9，145.8，145.7，144.5，140.9，140.8，136.1，130.9，127.4，126.9，124.3，124.7，122.9，119.7，117.6，112.3，111.4，106.6，100.7，99.7，80.0，64.2，60.3，59.8，57.6，57.0，56.5，56.4，55.2，52.7，46.7，46.5，41.4，41.3，36.9，36.6，34.9，28.2，26.0，24.9，20.9，20.7，15.7，14.1，8.5。ESI-MS m/z：计算值C50H56N4O10S：905.5；实测值(M+H)+：906.3。
实施例68
于-10℃(浴温-15℃)，向在无水二氯甲烷(185ml)中的143(10g，0.011mol)的溶液中加入在无水二氯甲烷(185ml)中的苯亚硒酸酐(5.7g，0.011mol)的溶液，弃掉溶液中的任何白色固体。于相同温度下搅拌混合物10分钟。该反应物用二氯甲烷(200ml)稀释并于-10℃加入饱和碳酸氢钠水溶液(500ml)。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。所得残留物经快速柱层析纯化，用乙酸乙酯和己烷的混合物梯度方式(从1∶1，3∶2，7.3至4∶1)洗脱，得到144(9.34g，92％)黄色固体。将层析纯化得到固体溶于二氯甲烷(250ml)，加入木炭(3.3g)并将所得悬浮液于23℃搅拌1小时。将所得混合物经硅藻土过滤并用二氯甲烷(80ml)洗涤该硅藻土。保持温度在25-30℃，减压蒸发溶剂得到144(8.96g，88％)黄色固体。Rf＝0.30和0.25(异构体混合物) Hex：EtOAc 1∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ(异构体混合物)7.73-7.61(m，4H)，7.37-7.30(m，4H)，6.62(s，1H)，6.59(s，1H)，6.53(s，1H)，5.72(s，1H)，5.70(s，1H)，5.61(s，1H)，5.55(bs，1H)，5.34(m，2H)，5.08(AB sist.，JAB＝6.7Hz，1H)，5.00(AB sist.，JAB＝5.9Hz，1H)，4.67(m，1H)，4.50(m，1H)，4.38(dd，J1＝4.9Hz，J2＝12.9Hz，1H)，4.21(dd，J1＝6.3Hz，J2＝12.9Hz，1H)，4.11(t，J＝5.9Hz，1H)，4.02(m，3H)，3.87(m，1H)，3.83(s，3H)，3.72(m，1H)，3.61(s，3H)，3.49(s，3H)，3.27(m，1H)，3.1 5(dd，J1＝1.8Hz，J2＝6.2Hz，2H)，3.07(d，J＝6.3Hz，1H)，2.94(m，4H)，2.86(m，2H)，2.42(m，2H)，2.25(s，3H)，2.20(s，3H)，2.15 (s，3H)，2.08(dd，J1＝2.4Hz，J2＝13.9Hz，1H)，1.77(s，3H)，1.76(s，3H)，1.43(s，9H).13C NMR(75MHz，CDCl3)(异构体混合物)δ200.6，171.2，160.4，155.6，148.9，148.8，148.3，145.9，145.8，141.3，141.2，138.7，130.9，127.9，127.4，127.3，127.3，125.3，125.1，124.2，120.1，117.1，111.9，108.5，105.0，104.7，101.7，101.3，99.5，99.4，80.5，72.5，70.8，60.5，60.1，58.4，58.0，57.9，56.9，56.8，56.3，55.9，55.5，55.4，53.8，53.7，47.1，42.0，41.8，41.5，37.4，37.3，35.6，35.5，28.5，25.8，25.7，16.1，16.0，7.7，7.3.ESI-MS m/z：计算值C50H56N4O11S：921.3；实测值(M+1)+：922.3。
实施例69
于-78℃，在氩气下向在无水二氯甲烷(396ml)中的DMSO(3.44ml)的溶液中加入三氟甲磺酸酐(3.27ml，19.45mmol)并将该混合物于该温度下搅拌20分钟。然后于-78℃加入在无水二氯甲烷(124ml)中的144(8.92g，9.6mmol)的溶液并在氩气下于-40℃搅拌该混合物35分钟。加入二异丙基乙胺(13.5ml，73.43mmol)并在氩气下于0℃搅拌该混合物45分钟。加入叔丁醇(3.65ml，38.6mmol)和叔丁基三甲基胍(11.6ml，67.46mmol)并在氩气下于23℃搅拌该混合物40分钟。然后加入乙酸酐(9.15ml，96.78mmol)并将该反应物于23℃再搅拌1小时。然后该反应物用二氯甲烷(250ml)稀释并加入饱和氯化铵水溶液(500ml)。分离有机层并用饱和碳酸氢钠水溶液(500ml)和饱和氯化钠水溶液(500ml)顺序洗涤。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干，保持温度在25-30℃。然后将粗品固体经快速柱层析纯化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(从1∶4至2∶3)洗脱，得到145(4.99g，68％)黄色固体。Rf＝0.44Hex：EtOAc 3∶2。1H NMR(300MHz，CDCl3)(异构体混合物)δ6.79(s，1H)，6.09(s，1H)，6.00(s，1H)，5.20(d，J＝5.4Hz，1H)，5.14(d，J＝5.6Hz，1H)，5.02(d，J＝11.7Hz，1H)，4.63(d，J＝9.0Hz，1H)，4.50(m，1H)，4.33(d，J＝5.4Hz，1H)，4.30(m，1H)，4.25(bs，1H)，4.18(d，J＝2.4Hz，1H)，4.17(dd，J1＝1.3Hz，J2＝11.7Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.57(s，3H)，3.42(m，2H)，2.93(m，2H)，2.35(m，1H)，2.31(s，3H)，2.29(s，3H)，2.22(s，3H)，2.09(m，1H)，2.05(s，3H)，1.45(s，9H).)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ207.3，170.9，68.8，155.4，149.8，148.6，146.0，141.1，140.7，131.7，130.6，125.1，120.6，118.3，113.7，102.2，99.4，80.0，61.6，60.4，59.8，59.4，59.2，57.7，55.0，54.7，54.0，41.9，41.6，33.1，31.8，28.7，23.9，20.6，16.1，14.3，9.8；ESI-MS m/z：计算值C38H46N4O11S：766.86；实测值(M+1)+：767.3。
实施例70
于23℃，向在乙腈(50ml)和二氯甲烷(25ml)中的145(1.0g，1.3mmol)的溶液中加入碘化钠(1.52g，10.01mmol)。然后将该混合物冷至0℃，分次加入三氯化铝(1.33g，10.01mmol)并保持温度在0℃。然后于0℃搅拌该混合物2.5小时。该反应物用二氯甲烷(25ml)稀释并加入饱和酒石酸钠钾水溶液(100ml)。分离所得水相并用二氯甲烷(2×75ml)提取。然后将饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)加至该水层并用二氯甲烷(2×50ml)进一步提取。合并的有机提取物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干，保持温度低于25℃。然后将粗品固体经在氨基-硅胶柱上层析纯化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式洗脱，得到35(487mg，60％)黄色固体。35的实验数据先前已在PCT/GB00/01852中介绍。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介绍的相同的方法制备36，ET-770和ET-743。
路径2
实施例71
将在THF(569ml)和水(285ml)中的21(9.84g，18.97mmol)的溶液用冰浴冷至0℃。然后于0℃加入NaNO2(1.96g，28.45mmol)和90％AcOH水溶液(18.97ml，0.33mol)并于23℃搅拌该混合物18小时。在将该反应物冷至0℃后，加入饱和碳酸氢钠水溶液(300ml，碱性pH)和二氯甲烷(500ml)。提取后，水相进一步用二氯甲烷(2×300ml)提取。合并的有机提取物经硫酸钠干燥并减压蒸发至干。然后，使所得粗品固体溶于甲醇(379ml)，并于0℃加入1M NaOH(38ml)。于23℃搅拌混合物4小时。于0℃用EtOAC(600ml)稀释后，有机层用水(400ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(100ml，碱性pH)的混合物洗涤。提取后，该水相进一步用EtOAC(3×300ml)提取。将合并的有机提取物用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，Hex∶EtOAc从3∶1至2∶1的梯度液)纯化得到146(4.55g，46％)，为白色固体。Rf：0.33(Hex∶EtOAc 1∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.48(s，1H)，6.15-6.02(m，1H)，5.92(d，J＝1.5Hz，1H)，5.86(d，J＝1.5Hz，1H)，5.77(s，1H)，5.39(dd，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.26(dd，J1＝1.5Hz，J2＝10.5Hz，1H)，4.24-4.15(m，3H)，4.04(d，J＝2.4Hz，1H)，3.97(t，J＝3.3Hz，1H)，3.74(s，3H)，3.64(dt，，J1＝3.3Hz，，J2＝11.1Hz，1H)，3.43(dd，J1＝3.3Hz，J2＝10.5Hz，1H)，3.38-3.34(m，2H)，3.31(t，J＝2.7Hz，1H)，3.22(dd，J1＝2.4Hz，J2＝15.6Hz，1H)，3.10(dd，J1＝8.1Hz，，J2＝18.3Hz，1H)，2.49(d，J＝18.3Hz，1H)，2.34(s，3H)，2.24(s，3H)，2.11(s，3H)，1.88(dd，J1＝12Hz，J2＝15.9Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.6，146.7，144.4，143.0，138.9，133.9，130.2，129.1，121.1，120.9，117.7，117.4，116.8，113.3，112.3，101.1，74.3，63.7，60.6，60.1，58.1，56.9，56.7，55.4，41.7，26.2，25.7，15.7，9.3；ESI-MS m/z：计算值C29H33N3O6：519.59；实测值(M+1)+：520.5。
实施例72
在氩气下，于23℃向搅拌的在二氯甲烷(2.8L)中的146(47.35g，0.091mol)和商业可得到的Boc-Cys(Fm)衍生物(54.6g，0.137mol)的溶液中用1.5小时的时间滴加入二甲基氨基吡啶(5.6g，0.046mol)和1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(43.6g，0.227mol)。然后将混合物于23℃再搅拌1小时。通过加入饱和碳酸氢钠水溶液(1L)猝灭反应并分离有机层。用二氯甲烷(2×500ml)回提水层。将合并的有机提取物用硫酸钠干燥，并减压下蒸发至干。粗产物经快速柱层析纯化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(从1∶4至3∶1)洗脱，得到147(74.3g，93％)，为白色固体。Rf＝0.5Hex∶EtOAc 1∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.73(d，J＝7.8Hz，2H)，7.63-7.55(m，2H)，7.39-7.35(m，2H)，7.29-7.25(m，2H)，6.41(s，1H)，6.07-5.97(m，1H)，5.92(d，J＝1.2Hz，1H)，5.80(d，J＝1.2Hz，1H)，5.67(s，1H)，5.34(dd，J1＝1.8Hz，J2＝17.4Hz，1H)，5.23(dd，J1＝1.8Hz，J2＝10.5Hz，1H)，5.04(d，J＝9.3Hz，1H)，4.32-4.29(m，1H)，4.13-3.91(m，9H)，3.72(s，3H)，3.31(d，J＝7.2Hz，1H)，3.26-3.17(m，2H)，2.96-2.87(m，3H)，2.68-2.54(m，2H)，2.27(s，3H)，2.24(s，3H)，2.05(s，3H)，1.83(dd，J1＝12.6Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.45(s，9H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.9，155.4，149.0，147.1，146.2，146.0，144.7，143.0，141.1，139.4，134.1，131.5，129.1，127.8，127.2，125.0，121.3，120.9，120.1，118.2，117.6，117.2，112.9，112.4，101.4，80.3，76.6，74.4，65.3，61.0，60.4，57.4，56.9，56.7，55.6，53.0，46.9，41.8，36.7，35.3，31.8，28.5，26.6，25.2，22.9，16.0，14.4，9.5.ESI-MS m/z：计算值C51H56N4O9S：900.3；实测值(M+1)+：901.3。
实施例73
于0℃，向在CH3CN(3.12ml)中的147(0.562g，0.624mol)溶液中加入MEMCl(1.07ml，9.36mmol)、DIPEA(2.17ml，12.48mmol)和DMAP(0.0076g，0.06mmol)。将该混合物于23℃搅拌5.5小时。该反应物用二氯甲烷(50ml)稀释并用0.1N HCl(50ml)提取。将水相再用二氯甲烷(50ml)提取。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤并真空浓缩得到残留物，经快速柱层析纯化(CH2Cl2∶EtOAc 10∶1，5∶1)得到148(539mg，87％)，为白色固体。Rf＝0.50 CH2Cl2∶AcOEt 6∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.73-7.71(m，2H)，7.57(dd，J1＝7.2Hz，J2＝15.3Hz，2H)，7.40-7.34(m，2H)，7.29-7.26(m，2H)，6.62(s，1H)，6.08-5.99(m，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，5.79(d，J＝1.2Hz，1H)，5.35(dd，J1＝1.2Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.23(d，J＝6.3Hz，1H)，5.21(bs，1H)，5.13(d，J＝6.3Hz，1H)，5.04(brd，J＝9Hz，1H)，4.33-4.29(m，2H)，4.16-3.90(m，8H)，3.85-3.78(m，1H)，3.69(s，3H)，3.60-3.55(m，2H)，3.38(s，3H)，3.31(brd，J＝8.1Hz，1H)，3.21-3.17(m，2H)，2.98-2.88(m，3H)，2.64-2.56(m，2H)，2.29(s，3H)，2.20(s，3H)，2.02(s，3H)，1.75(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)，1.47(s，9H).13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ170.5，155.0，148.6，148.5，148.2，145.77，145.6，144.4，140.8，140.7，139.0，133.6，130.7，130.5，127.4，126.9，124.8，124.6，123.8，120.8，119.7，117.8，117.2，122.5，111.9，101.0，98.1，80.0，77.4，77.0，76.6，73.8，71.6，69.2，65.0，60.2，60.0，59.8，59.0，56.8，56.7，56.6，552，52.7，46.6，41.3，36.2，34.9，29.6，28.2，26.3，24.9，15.6，14.1，9.0.ESI-MS m/z：计算值C55H64N4O11S：988.4；实测值(M+1)+：989.3。
实施例74
于23℃，在氩气下向搅拌的在二氯甲烷(1L)中的148(38.32g，0.039mol)的溶液中加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(2.17g，0.0031mol)和乙酸(11.1ml，0.195mol)。然后滴加入氢化三丁基锡(36.5ml，0.136mol)。将混合物于23℃搅拌15分钟。然后将反应物经用己烷压积的硅胶柱过滤。经用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(从0∶100，1∶4，1∶3，2∶5，2∶3，1∶1，2∶1，3∶1至100∶0)洗脱得到149(35.07 g，95％)，为白色固体。Rf＝0.25 Hex∶EtOAc 2∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.74(d，J＝7.2Hz，2H)，7.63-7.53(m，2H)，7.39-7.34(m，2H)，7.30-7.27(m，2H)，6.62 (s，1H)，5.87(m，1H)，5.75(s，1H)，5.69(bs，1H)，5.37(d，J＝6Hz，1H)，5.23(d，J＝5.7Hz，1H)，4.96(d，J＝8.1Hz，1H)，4.44(brd，J＝8.7Hz，1H)，4.18-3.70(m，11H)，3.69(s，3H)，3.38(s，3H)，3.34-3.18(m，3H)，2.99-2.88(m，3H)，2.63-2.58(m，2H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.05(s，3H)，1.78(dd，J1＝12.9 Hz，J2＝15.6.3Hz，1H)，1.41(s，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.8，155.2，149.0，148.0，146.2，146.0，144.8，141.1，136.4，131.3，131.2，127.8，127.2，125.1，125.0，123.2，120.0，118.1，112.6，111.6，107.2，101.0，98.9，98.8，80.3，71.8，69.8，64.9，60.6，60.2，59.2，57.1，56.9，55.5，53.0，47.0，46.9，41.8，37.0，35.3，28.5，26.2，25.2，21.9，21.3，16.1，14.4，9.0.ESI-MS m/z：计算值C52H60N4O11S：948.4；实测值(M+1)+：949.3。
实施例75
于-10℃(浴温-15℃)，向在无水二氯甲烷(265ml)中的149(15g，0.0158mol)的溶液中在30分钟时间内滴加入在无水二氯甲烷(265ml)中的苯亚硒酸酐(7.4g，0.0143mol)的溶液，弃掉溶液中存在的任何白色固体。于相同温度下搅拌混合物10分钟。该反应物用二氯甲烷(200ml)稀释并于-10℃加入饱和碳酸氢钠水溶液(500ml)。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。所得残留物经快速柱层析纯化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(从1∶2至100∶0)洗脱，得到150(14.20g，89％)黄色固体。将层析纯化得到固体溶于二氯甲烷(250ml)，加入木炭(4.95g)。然后于23℃搅拌所得悬浮液1小时。将混合物经硅藻土垫过滤并用二氯甲烷(80ml)洗涤该硅藻土。减压蒸发溶剂得到150(13.72g，86％)，为白色固体。Rf＝0.37 Hex∶EtOAc1∶2。1H NMR(300MHz，CDCl3)(异构体混合物)δ7.73(t，J＝6.7Hz，4H)，7.63(m，2H)，7.54(d，J＝7.6Hz，2H)，7.40-7.34(m，4H)，7.31-7.27(m，4H)，6.62(s，2H)，5.86(s，1H)，5.81(s，1H)，5.75(s，1H)，5.72(s，1H)，5.70(s，1H)，5.35(d，J＝5.9Hz，1H)，5.30(d，J＝8.4Hz，1H)，5.23(d，J＝5.9Hz，1H)，5.22(d，J＝5.9Hz，1H)，5.13(d，J＝5.9Hz，1H)，4.97(d，J＝8.8Hz，1H)，4.43(m，2H)，4.20-4.01(m，8H)，3.97-3.86(m，4H)，3.82(s，3H)，3.80-3.74(m，1H)，3.69(s，3H)，3.66-3.64(m，4H)，3.54(m，2H)，3.38(s，3H)，3.35(s，3H)，3.34-2.90(m，8H)，2.60-2.31(m，4H)，2.27(s，3H)，2.25(s，3H)，2.21(s，3H)，1.97(s，3H)，1.94-1.81(m，2H)，1.77(s，3H)，1.43(s，9H)，1.41(s，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)(异构体混合物)δ200.2，198.3，170.7，170.5，160.0，155.2，154.9，148.5，148.4，145.5，142.1，140.9，138.3，130.9，130.5，130.0，129.8，127.5，126.9，125.0，124.9，124.7，123.8，122.5，119.8，117.2，116.7，111.5，108.1，104.6，104.3，101.3，100.9，98.0，80.1，72.1，71.5，70.5，69.2，69.0，66.4，63.5，60.7，60.1，59.6，58.9，58.8，58.0，56.7，56.4，56.2，55.9，55.5，55.0，53.5，46.7，41.7，41.3，41.1，36.9，35.2，35.1，31.4，28.1，25.4，25.3，22.5，15.7，15.6，14.0，7.2；ESI-MS m/z：计算值C52H60N4O12S：964.4；实测值：965.3(M+1)+，987.3(M+23)+。
实施例76
将反应烧瓶火焰加热两次，真空/氩气排空数次并维持在氩气氛下以备反应。于-78℃向在无水CH2Cl2(42ml)中的DMSO(385.0ul)的溶液中滴加三氟甲磺酸酐(366.5ul，2.16mmol)。于-78℃搅拌反应混合物20分钟，然后于-78℃经套管加入(滴加时间：5分钟)在无水CH2Cl2(10ml用于主要滴加，5ml用于洗涤)中的150(1g，1.03mmol)的溶液。在滴加过程中，将该溶液温度通过外浴保持在-78℃，颜色由黄色变成棕色。于-40℃搅拌该反应混合物35分钟。在此时间内该溶液从黄色变成暗绿色。然后，滴加iPr2NEt(1.51ml，9.55mmol)并将该反应混合物保持在0℃45分钟，在此期间该溶液的颜色变成棕色。然后滴加tBuOH(409.5μl，4.33mmol)和叔丁基四甲基胍(1.31ml，7.61mmol)并将该反应混合物于23℃搅拌40分钟。然后滴加乙酸酐(1.03ml，10.89mmol)并再保持该反应混合物在23℃1小时。然后将该反应混合物用CH2Cl2(25ml)稀释并用饱和NH4Cl(50ml)、碳酸氢钠(50ml)和氯化钠(50ml)水溶液洗涤。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物经快速柱层析(柱内径：2.0cm，硅胶柱高度：9cm，洗脱液：乙酸乙酯/己烷的梯度液，从20∶80，30∶70至40∶60)纯化得到151(832.6mg，99％)，为白色固体。Rf＝0.48 Hex∶EtOAc 3∶2。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.78(s，1H)，6.09(d，J＝1.2Hz，1H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.32(d，J＝5.8Hz，1H)，5.19(d，J＝5.6Hz，1H)，5.01(d，J＝11.7Hz，1H)，4.62(d，J＝9.8Hz，1H)，4.50(bs，1H)，4.34(d，J＝5.1Hz，1H)，4.28(dd，J1＝2.4Hz，J2＝6.8Hz，1H)，4.24(s，1H)，4.17(m，2H)，3.90(m，2H)，3.76(s，3H)，3.58(t，J＝4.8Hz，2H)，3.42-3.37(m，2H)，3.37(s，3H)，2.91(m，2H)，2.36-2.08(m，2H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.04(s，3H)，1.44(s，9H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.9，168.9，168.0，155.4，149.8，148.6，146.0，141.1，140.6，131.6，131.1，130.6，129.0，125.1，120.6，118.3，102.2，98.4，79.9，71.9，69.4，61.6，60.4，59.8，59.4，59.2，54.9，54.7，54.0，41.6，30.6，29.1，28.7，23.9，23.2，20.6，16.1，14.2，11.2，9.8.ESI-MS m/z：计算值C40H50N4O12S：810.91.实测值(M+1)+：811.3。
实施例77
于23℃，向在CH2Cl2(120ml)中的151(2.9g，3.57mmol)的溶液中加入MeSO3H(1.4ml，21.46mmol)。于23℃搅拌该反应物30分钟后，于0℃加入饱和碳酸氢钠水溶液(200ml)。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。所得残留物经快速柱层析纯化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(从0∶1至1∶0)洗脱，得到35(1.43g，64％)淡黄色固体。
35的实验数据先前已在PCT/GB00/01852中介绍。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介绍的相同的方法制备36，ET-770和ET-743。
路径3
本路径的第一步(21转化成146)已在上述实施例71中介绍。
实施例78
于0℃向在丙酮(500ml)和水(500ml)中的商业可得到的HO.Cys(Fm)-HHCl(Bachem)(40g，0.119mol)的溶液中加入1MNa2CO3溶液(238ml)和BnCO2Cl(18.7ml，0.131mol)。于60℃搅拌反应物30分钟后，该混合物用1N HCl(pH01)猝灭，用乙醚(3×400ml)提取。分离有机层，用硫酸镁干燥，过滤并减压下浓缩至于。将粗产物溶于EtOAc/CH2Cl21∶1的混合物中，用己烷沉淀并保持于4℃放置过夜。然后，滤去悬浮液，所得固体用己烷洗涤(200ml)，真空干燥滤液，得到152(50.16g，97％)，为白色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.66(bs，1H)，7.74(d，J＝7.5Hz，2H)，7.69-7.64(m，2H)，7.62-7.29(m，9H)，5.67(d，J＝7.5Hz，1H)，5.14(bs，2H)，4.70-4.64(m，1H)，4.09-4.05(m，1H)，3.12-3.09(m，2H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ175.2，155.9，145.5，141.0，135.8，128.5，128.2，128.1，127.5，127.0，124.7，119.8，84.8，67.3，46.8，37.0.ESI-MS m/z：计算值C25H23NO4S：433.52；实测值(M+1)+：434.4。
实施例79
在氩气下，于0℃向搅拌的在二氯甲烷(800ml)中的146(10g，19.2mmol)和152(12.5g，28.8mmol)的溶液中在1小时的时间内滴加入二甲基氨基吡啶(705mg，5.77mmol)、1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(9.2g，48.1mmol)和二异丙基乙胺(7.4ml，42.3mmol)。然后于23℃再搅拌混合物1.5小时。通过加入饱和碳酸氢钠水溶液(600ml)猝灭反应。分离有机层并再用饱和氯化铵水溶液(500ml)和饱和氯化钠溶液(500ml)洗涤。将有机提取物用硫酸钠干燥，过滤并减压下蒸发至干。粗产物经快速柱层析纯化(RP18，CH3CN∶H2O 4∶1)得到153(13.89g，77％)淡黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.74-7.72(m，2H)，7.61-7.53(m，2H)，7.37-7.24(m，9H)，6.39(s，1H)，6.09-5.96(m，1H)，5.90(s，1H)，5.84(s，1H)，5.78(s，1H)，5.34(dd，J1＝1.5Hz，J2＝17.4Hz，1H)，5.32(bs，1H)，5.24(dd，J1＝1.5Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.17-5.07(m，2H)，4.40(dd，J1＝3.6Hz，J2＝10.8Hz，1H)，4.30(m，1H)，4.18-4.01(m，6H)，3.92 (brt，J＝6.3Hz，1H)，3.71(s，3H)，3.30-3.19(m，3H)，2.99-2.85(m，3H)，2.65(dd，J1＝4.5Hz，J2＝14.4Hz，1H)，2.55(d，J＝18.3Hz，1H)，2.26(s，3H)，2.21(s，3H)，2.06(s，3H)，1.86(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.9Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.2，155.6，148.6，146.8，145.7，145.6，144.3，142.6，140.7，139.0，133.7，131.1，128.8，128.4，128.1，128.0，127.4，126.9，124.7，124.6，121.0，120.5，119.7，117.8，117.3，116.8，112.5，112.0，101.0，74.1，67.0，64.7，60.7，59.9，57.0，56.6，56.3，55.2，53.1，46.5，41.4，36.4，34.8，26.2，24.8，15.6，9.2；ESI-MS m/z：计算值C54H54N4O9S：934.36；实测值(M+1)+：935.4。
实施例80
于0℃，向在CH3CN(74.3ml)中的153(13.89g，14.85mmol)溶液中加入MEMCl(25.4ml，223mmol)、DIPEA(52ml，297mmol)和DMAP(0.181g，0.15mmol)。将该反应物于23℃搅拌5小时。该反应物用二氯甲烷(400ml)稀释并用0.1N HCl(300ml)和3N HCl(pH＝3)提取。将所得水相再用二氯甲烷(2×50ml)提取。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩得到残留物，经快速柱层析纯化(SiO2，CH2Cl2∶EtOAc10∶1，5∶1)得到154(13.47g，88％)，为白色固体。Rf＝0.27 CH2Cl2∶AcOEt 6∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.73-7.70(m，2H)，7.58-7.50(m，2H)，7.38-7.22(m，9H)，6.59(s，1H)，6.08-5.98(m，1H)，5.89(s，1H)，5.77(s，1H)，5.35(d，J＝17.1Hz，1H)，5.31-5.28(m，1H)，5.23(d，J＝6.9Hz，1H)，5.13(d，J＝6.9Hz，1H)，5.12-5.05(m，2H)，4.37-4.29(m，2H)，4.15-3.77(m，9H)，3.68(s，3H)，3.58-3.55(m，2H)，3.37(s，3H)，3.30-3.27(m，1H)，3.21-3.16(m，2H)，2.96-2.84(m，4H)，2.64-2.58(m，1H)，2.55(d，J＝18Hz，1H)，2.27(s，3H)，2.16(s，3H)，2.02(s，3H)，1.75(dd，J1＝12.3Hz，J2＝16.2Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ171.9，170.2，155.5，148.7，148.6，148.3，145.8，145.7，144.5，142.1，140.9，139.1，136.1，133.8，130.8，130.5，128.5，128.3，128.1，127.6，127.0，124.9，124.7，123.9，122.2，120.9，119.8，117.8，117.3，112.6，112.0，101.1，98.2，74.0，71.7，69.3，67.1，65.1，60.1，59.8，59.0，56.9，56.8，56.7，55.3，53.3，46.7，41.4，36.5，35.0，31.6，29.7，26.4，25.0，22.6，15.7，14.1，9.2.ESI-MS m/z：计算值C58H62N4O11S：1023.2；实测值(M+23)+：1046.3。
实施例81
于23℃，在氩气下向在二氯甲烷(530ml)中的154(20.84g，0.02mol)的搅拌溶液中加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(1.14g，1.63mmol)和乙酸(11.64ml，0.2mol)。然后滴加入氢化三丁基锡(27.44ml，0.1mol)。于23℃搅拌混合物15分钟。然后将反应物经用己烷压积的硅胶柱过滤。经用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(从1∶4，1∶1，3∶2至7∶3)顺序洗脱得到155(18.78g，94％)淡黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.71(d，J＝7.2Hz，2H)，7.59(d，J＝7.5Hz，1H)，7.53(d，J＝7.5Hz，1H)，7.41-7，23(m，9H)，6.60(s，1H)，5.87(bs，2H)，5.74(s，1H)，5.40(d，J＝6.3Hz，1H)，5.33(d，J＝5.8Hz，1H)，5.18(d，J＝9Hz，1H)，5.09(d，J＝12Hz，1H)，4.97(d，J＝12Hz，1H)，4.56(dd，J1＝3Hz，J2＝11.1Hz，1H)4.19(d，J＝2.1Hz，1H)，4.16-3.87(m，9H)，3.66(s，3H)，3.38(s，3H)，3.32-3.20(m，3H)，2.96-2.87(m，3H)，2.62-2.54(m，2H)，2.28(s，3H)，2.19(s，3H)，1.97(s，3H)，1.82(dd，J1＝13.2Hz，J2＝15.6Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.0，155.4，149.0，147.5，145.7，145.6，144.4，140.8，135.9，130.9，128.4，128.1，128.0，127.4，126.9，124.7，124.6，122.7，119.7，117.7，112.4，111.4，100.6，98.7，71.5，69.4，67.0，64.9，63.9，59.7，59.6，58.8，57.0，56.5，56.4，55.1，54.9，53.1，52.5，46.5，41.4，36.8，34.9，25.8，24.7，15.7，8.7。
实施例82
于-10℃(浴温-15℃)，向在无水二氯甲烷(530ml)中的155(18.5g，18.82mmol)的溶液中滴加入在无水二氯甲烷(290ml)中的苯亚硒酸酐(9.68g，18.82mmol)的溶液，弃掉溶液中的任何白色固体。所得混合物于相同温度下搅拌10分钟。然后用饱和碳酸氢钠水溶液(600ml)猝灭该反应。分离有机层，将所得水相用二氯甲烷(2×300ml)提取。用硫酸钠干燥合并的有机提取物，过滤并减压浓缩至干。残留物经快速柱层析纯化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(从1∶1，3∶2，7∶3至4∶1)洗脱，得到156(17.62g，88％)淡黄色固体。1H NMR(300VHz，CDCl3)(异构体混合物)δ7.73(d，J＝7.5Hz，2H)，7.63(d，J＝7.5Hz，2H)，7.40-7.29(m，9H)，6.59(s，1H)，6.52(s，1H)，5.68(s，1H)，5.66(s，1H)，5.58(s，1H)，5.56(s，1H)，5.23(d，J＝6Hz，1H)，5.15-5.05(m，4H)，4.76-4.68(m，1H)，4.64-4.55(m，1H)，4.40-4.37(m，1H)，4.15-3.68(m，8H)，3.60(s，3H)，3.57(s，3H)，3.39(s，3H)，3.36(s，3H)，3.25-2.78(m，7H)，2.38-2.24(m，2H)，2.20(s，3H)，2.18(s，3H)，2.15(s，3H)，2.09(m，1H)，2.04(s，3H)，1.77(s，3H)，1.58(s，3H)；ESI-MS m/z：计算值C55H58N4O12S：999.13；实测值(M+1)+：1000.0。
实施例83
在氩气氛下，将反应烧瓶火焰加热两次，真空/氩气排空数次以备反应。于-78℃向在无水CH2Cl2(20ml)中的DMSO(178μl)的溶液中滴加三氟乙磺酸酐(169μl，1mmol)。于-78℃搅拌反应混合物20分钟，然后于-78℃经套管加入(滴加时间：5分钟)在无水CH2Cl2(4ml用于主要滴加，1.5ml用于洗涤)中的156(0.5g，0.5mmol)的溶液。在滴加过程中通过外浴保持温度在-78℃，颜色由黄色变成棕色。于-40℃搅拌该反应混合物35分钟。在此时间内该溶液从黄色变成暗绿色。然后，滴加iPr2NEt(0.7ml，4.42mmol)并将该反应混合物保持在0℃45分钟，在此期间该溶液的颜色变成棕色。然后滴加tBuOH(189μl，2mmol)和叔丁基四甲基胍(0.6ml，3.49mmol)并将该反应混合物于23℃搅拌40分钟。然后滴加乙酸酐(0.47ml，4.97mmol)并再保持该反应混合物在23℃1小时。然后将该反应混合物用CH2Cl2(15ml)稀释并用饱和NH4Cl(25ml)、碳酸氢钠(25ml)和氯化钠(25ml)水溶液洗涤。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物经快速柱层析(柱内径：2.0cm，硅胶柱高度：9cm，洗脱：乙酸乙酯/己烷的梯度液(从1∶4，1∶3，1∶2至1∶1))纯化得到化合物157(128mg，30％)，为淡黄色固体。Rf＝0.37 Hex∶EtOAc 3∶2。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37(bs，5H)，6.66(s，1H)，6.09(s，1H)，5.99(s，1H)，5.30(d，J＝5.4Hz，1H1，5.17(d，J＝6Hz，1H)，5.06(d，J＝7.8Hz，1H)，5.00(s，1H)，4.83(d，J＝9.3Hz，1H)，4.50(s，1H)，4.34-4.17(m，7H)，3.90-3.87(m，2H)，3.66(s，3H)，3.65-3.56(m，2H)，3.37(s，3H)，2.89-2.90(m，2H)，2.28(s，3H)，2.18(s，3H)，2.15-2.04(m，2H)，2.03(s，3H)，1.99(s，3H).ESI-MS m/z：计算值C43H48N4O12S：844.93；实测值(M+1)+：845.8。
实施例84
在0℃向在CH2Cl2(2ml)和CH3CN(2ml)中157(100mg，0.118mmol)的溶液中加入Nal(71mg，0.472mmol)和TMSCl(60μl，0.472mmol)。所得反应物于23℃搅拌50分钟，用水(30ml)猝灭反应混合物并用CH2Cl2(2×20ml)提取。将合并的有机层顺序用饱和NaCl水溶液(20ml)和饱和连二亚硫酸钠(sodium ditionite)溶液(20ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物经快速柱层析纯化(洗脱：乙酸乙酯/己烷的1∶4，1∶2至1∶1梯度液)得到化合物158(62mg，70％)，为白色固体。Rf＝0.21 Hex∶EtOAc 1∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36(bs，5H)，6.44(s，1H)，6.07(d，J＝1.2Hz，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.81(bs，1H)，5.10-5.00(m，3H)，4.82(d，J＝9.3Hz，1H)，4.49(bs，1H)，4.35-4.30(m，1H)，4.21-4.17(m，2H)，4.16-4.14(m，2H)，3.65(s，3H)，3.41-3.36(m，2H)，2.88-2.85(m，2H)，2.28(s，3H)，2.24-2.03(m，2H)，2.17(s，3H)，2.02(s，3H)，2.00(s，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.5，168.8，155.9，148.3，146.0，143.1，141.2，140.6，136.6，130.6，130.0，128.8，128.7，128.5，121.0，120.3，118.3，118.2，113.7，113.6，102.2，67.2，61.5，60.8，60.3，59.6，59.5，54.8，54.7，54.1，41.9，41.6，32.9，23.9，20.8，15.5，9.8； ESI-MS m/z：计算值C39H40N4O10S：756.82；实测值(M+1)+：757.3。
实施例85
于23℃向在MeOH(6.8ml)中的158(100mg，0.132mmol)的溶液中加入HCO2H(360μl)和10％Pd/C(140mg，0.132mmol)，搅拌该混合物15分钟。向该反应物中加入甲苯(7ml)并减压蒸除溶剂。与甲苯的共沸蒸馏重复三次。然后残留物用二氯甲烷(15ml)稀释并加入饱和碳酸氢钠水溶液(15ml)。分离水相并用二氯甲烷(2×10ml)提取。用硫酸钠干燥合并的有机提取物，过滤并减压蒸发至干。然后将所得残留物经在氨基-硅胶柱上快速柱层析纯化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(从1∶2，1∶1至2∶1)洗脱，得到35(57mg，70％)，为黄色固体。35的实验数据先前已在PCT/GB00/01852中介绍。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介绍的相同方法制备36，ET-770和ET-743。
路径4
本路径的第一步(21转化成146)已在上述实施例71中介绍
实施例86
于0℃，向在DMF(0.05ml)中的146(18mg，0.032mmol)、催化量的(cat.)DMAP和咪唑(5mg，0.08mmol)的溶液中加入叔丁基二苯基甲硅烷基氯(12.5μl，0.048mmol)并将该反应物于23℃搅拌4小时。然后于0℃加入水(30ml)并将该混合物用Hex∶EtOAc 1∶10(2×40ml)提取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析纯化(SiO2，Hex∶EtOAc 3∶1)得到159(27mg，88％)，为白色固体。Rf＝0.29 Hex∶EtOAc 3∶1.1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72-7.41(m，2H)，7.40-7.20(m，8H)，6.46(s，1H)，6.16-6.00(m，1H)，5.77(d，J＝1.5Hz，1H)，5.71(s，1H)，5.63(d，J＝1.5Hz，1H)，5.24(dd，J2＝1.2Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.23(dd，J1＝1.2Hz，J2＝10.2Hz，1H)，4.18(d，J＝2.4Hz，1H)，4.13-4.00(m，4H)，3.77(s，3H)，3.63(dd，J1＝2.4Hz，J2＝7.5Hz，1H)，3.39-3.19(m，4H)，2.99(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.68(d，J＝17.7Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.08(s，3H)，1.99(dd，J1＝12.6Hz，J2＝16.3Hz，1H)，0.89(s，9H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.3，146.6，144.0，142.5，139.0，135.7，135.4，133.9，133.6，132.2，131.2，129.5，129.4，128.3，127.5，127.4，121.8，120.9，118.7，117.3，117.2，112.9，111.7，100.8，74.2，68.0，61.6，60.6，60.3，59.0，57.4，56.7，55.4，41.7，29.6，26.6，26.5，25.5，18.9，15.8，9.3。ESI-MS m/z：计算值C45H51N3O6Si：757.9；实测值(M+1)+：758.4。
实施例87
于0℃，向在CH3CN(16ml)中159(2.4g，3.17mmol)溶液中加入MOMBr(2.6ml，31.75mmol)、DIPEA(8.3ml，47.6mmol)和DMAP(16mg，0.127mmol)。将该混合物于23℃搅拌6小时。该反应物用CH2Cl2(50ml)稀释并用0.1N HCl(50ml)提取。将水相再用CH2Cl2(50ml)提取。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤并真空浓缩得到残留物，经快速柱层析纯化(SiO2，CH2Cl2∶EtOAc 15∶1，5∶1)得到26(1.78g，70％)，为白色固体。26的实验数据先前已在PCT/GB00/01852中介绍。
对于Int.11，160，161，162和163的实验方法先前已在美国专利号5721362中介绍。
实施例88
于23℃，在氩气氛下向在无水CH2Cl2(250ml)和乙腈(300ml)中的163(15.8g，O.02mol)的溶液中加入NaI(31.5g，0.21mol)和ClTMS(经CaH2新蒸馏的26.7ml，0.21mol)。于23℃搅拌反应物40分钟。然后使反应物在CH2Cl2(200ml)和水(300ml)之间分配。将所得有机层用饱和NaCl水溶液(2×300ml)洗涤。用Na2SO4干燥有机相，过滤并减压除去溶剂。将所得粗品经快速柱层析纯化，使用乙酸乙酯/己烷2∶3作为洗脱剂，得到淡黄色固体化合物164(10.74g，76％)。Rf＝0.25 Hex∶EtOAc 3∶2。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.57(s，1H)，6.08(d，J＝1.5Hz，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.96-5.85(m，1H)，5.76(bs，1H)，5.30(dd，J1＝1.5，J2＝17.3Hz，1H)，5.23(dd，J1＝1.5，J2＝10.2Hz，1H)，5.00(d，J＝12.1Hz，1H)，4.81(d，J＝9.8Hz，1H)，4.58-4.45(m，3H)，4.34-4.28(m，1H)，4.23(m，2H)，4.17-4.00(m，2H)，3.76(s，3H)，3.40-3.38(m，2H)，2.91-2.85(m，2H)，2.30(s，3H)，2.29(s，3H)，2.24-2.23(m，2H)，2.19(s，3H)，2.02(s，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.1，168.4，155.2，148.0，145.5，142.8，140.7，140.1，132.7，130.2，129.6，120.7，119.9，117.8，113.3，101.9，65.6，61.0，60.4，59.9，59.2，59.0，54.3，53.6，41.5，41.2，32.6，29.5，23.5，20.4，15.6，9.4。ESI-MS m/z：计算值C35H38N4O10S：706.76；实测值(M+1)+：707.2。
实施例89
于23℃，在氩气下向在二氯甲烷(142ml)中的164(2g，2.85mmol)的搅拌溶液中加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(0.2g，0.28mmol)和乙酸(0.65ml，11.4mmol)。然后在25分钟时间内滴加入氢化三丁基锡(4.51ml，17.02mmol)。加入HsnBu3后，将混合物于23℃再搅拌20分钟。将反应物经用己烷压积的硅胶柱过滤。经用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式从1∶2至15∶1顺序洗脱得到35(1.38g，78％)，为白色固体。35的实验数据先前已在PCT/GB00/01852中介绍。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介绍的相同方法制备36，ET-770和ET-743。
路径5
本路径的第一步(21转化成146)已在上述实施例71中介绍
实施例90
于0℃，向在DMF(20.1ml)中的146(8.72g，16.78mmol)的溶液中加入咪唑(3.43g，50.34mmol)、叔丁基二甲基氯代硅烷(7.58ml，50.34mmol)和DMAP(0.2g，1.7mmol)。于23℃搅拌3.5小时后，将反应混合物用水(100ml)猝灭并用EtOAc/Hex 1∶3(2×75ml)提取。合并的有机层用0.1M HCl(50ml)洗涤，水相再用EtOAc/Hex 1∶3(40ml)提取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。所得到残留物经快速柱层析纯化(Hex∶EtOAc 10∶1，3∶1)得到165(9.85g，93％)，为白色固体。Rf＝0.39 Hex∶AcOEt 2∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)□6.43(s，1H)，6.15-6.03(m，1H)，5.92(d，J＝1.2Hz，1H)，5.84(d，J＝1.2Hz，1H)，5.67(s，1H)，5.41(dd，J1＝1.5，J2＝17.1Hz，1H)，5.26(dd，J1＝1.5，J2＝10.5Hz，1H)，4.44(d，J＝2.7Hz，1H)，4.20-4.08(m，3H)，3.97(dd，J1＝2.7，J2＝8.1Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.61(dd，J1＝2.71，J2＝9.9Hz，1H)，3.18(brd，J＝8.7Hz，1H)，3.22-3.16(m，2H)，2.99(dd，J1＝8.1，J2＝17.4Hz，1H)，2.65(d，J＝17.4Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.25(s，3H)，2.11(s，3H)，1.89(dd，J1＝12，J2＝15.6Hz，1H)，0.8(s，9H)，-0.05(s，3H)，-0.09(s.3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)□148.2，146.5，143.8，142.4，138.9，133.8，131.0，128.0，121.5，120.4，118.4，117.1，112.8，111.6，100.7，74.0，68.2，61.5，60.2，58.6，57.1，56.5，55.2，41.3，26.2，25.4，25.2，20.6，17.8，15.3，13.8，9.0，-3.9，-6.0；ESI-MS m/z：计算值C35H47N30O6Si：633.85；实测值(M+1)+：634.2。
实施例91
于-6℃，向在THF(87.64ml)和水(0.24ml)中的165(7.62g，12.02mmol)的溶液中加入MEMCl(2.33ml，20.43mmol)。用45分钟分次加入60％NaH(0.72g，18.03mmol)后，于该温度下搅拌反应物1.5小时。将该反应物用水(150ml)猝灭并用CH2Cl2(2×100ml)提取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩得到166(8.69g，100％)，为白色固体，该固体可不经进一步纯化用于其后的步骤。Rf＝0.24Hex∶AcOEt 2∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.64(s，1H)，6.16-6.05(m，1H)，5.92(d，J＝1.2Hz，1H)，5.85(d，J＝1.2Hz，1H)，5.4 1(dd，J1＝1.51，J2＝17.1Hz，1H)，5.29-5.24(m，2H)，5.14(d，J＝6Hz，1H)，4.42(d，J＝2.7Hz，1H)，4.21-4.06(m，3H)，4.01-3.95(m，2H)，3.88-3.82(m，1H)，3.72(s，3H)，3.64-3.57(m，3H)，3.39(s，3H)， 3.29(brd J＝7.5Hz，1H)，3.25-3.15(m，2H)，3.00(dd，J1＝8.1，J2＝17.4Hz，1H)，2.65(d，J＝18Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.21(s，3H)，2.11(s，3H)，1.82(dd J1＝12，J2＝15.6Hz，1H)，0.79(s，9H)，-0.06(s，3H)，-0.11(s，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.4，148.1，144.1，139.2，133.9，130.9，130.8，130.2，128.8，125.1，124.2，121.5，118.8，117.45，113.0，111.9，101.0，98.2，74.1，71.7，69.3，68.3，61.7，59.6，59.0，58.9，57.3，57.1，55.5，41.6，29.7，26.4，25.8，25.5，25.4，15.7，9.2，-5.6，-5.6；ESI-MS m/z：计算值C39H55N3O8Si：721.3；实测值(M+1)+：722.3。
实施例92
于23℃，在氩气下向在无水二氯甲烷(275ml)中的166(10.76g，14.90mmol)的溶液中加入Pd(PPh3P)2Cl2(837mg，1.19mmol)、乙酸(4.26ml，74.5mmol)和氢化三丁基锡(11.85ml，44.7mmol)。将所得反应混合物于23℃搅拌15分钟(TLC AcOEt/己烷1∶1显示没有起始原料)。加入己烷(100ml)并将该混合物倾入快速柱中层析纯化(SiO2，EtOAc/己烷梯度液方式(0∶100，1∶4，2∶3至1∶1))得到167(9.95 g，98％)，为黄色固体。Rf＝0.42 Hex∶EtOAc 3∶7。1H-RMN(300MHz，CDCl3)：δ6.63(s，1H)，5.89(d，J＝1.4Hz，1H)，5.79(d，J＝1.4Hz，1H)，5.76(m，1H)，5.38(d，J＝5.6Hz，1H)，5.23(d，J＝5.9Hz，1H)，4.53(d，J＝2.7Hz，1H)，4.17(dd，J1＝1.95Hz，J2＝6.05Hz，1H)，4.11(dd，J1＝7.0Hz，J2＝12.5Hz，1H)，4.01-3.92(m，2H)，3.70(s，3H)，3.67(m，3H)，3.40(s，3H)，3.29(m，1H)，3.24-3.13(m，3H)，2.99(dd，J1＝8.0Hz J2＝17.5Hz，1H)，2.67(d，J＝17.5Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.09(s，3H)，2.05(s，3H)，1.80(dd，J1＝11.2Hz，J2＝14.9Hz，1H)，0.82(s，9H)，-0.03(s，3H)，-0.07(s，3H).13C-RMN(75MHz，CDCl3)：δ148.4，147.3，145.5，144.1，136.2，134.9，134.8，130.9，130.2，124.8，123.1，118.6，112.8，112.1，106.2，100.4，98.4，71.5，69.2，68.9，61.7，59.6，58.7，58.6，56.9，56.6，55.3，41.5，29.5，25.7，25.3，17.9，15.5，8.7，-5.7，-5.8.ESI-MS m/z：计算值C36H51N3O8Si：681.89；实测值(M+1)+：682.3。
HPLC：条件：柱：Symmetry C18；流动相：AcN-磷酸盐缓冲液25mM，pH＝5，AcN(65％)的等度洗脱5分钟及在AcN中的65-92％梯度洗脱31分钟，Φ：0.6ml/分钟，ta：40℃。保留时间：27.89分钟。HPLC以面积计纯度：89.62％。
实施例93
于-15℃，氩气下向在无水CH2Cl2(300ml)中的167(9.95g，14.6mmol)的溶液中滴加入在无水CH2Cl2(120ml)中的苯亚硒酸酐(7.51g，14.6mmol，试剂纯度70％)的溶液(弃掉溶液中剩余的白色固体)。然后于-15℃搅拌溶液15分钟(TLC EtOAc/己烷2∶3，显示没有起始原料)。于此温度下向该反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(500ml)。分离有机层，水相用CH2Cl2(500ml)提取。将合并的有机提取物用硫酸钠干燥，过滤并减压除去溶剂。反应物经快速硅胶柱层析纯化(SiO2，EtOAc∶己烷2∶3至3∶1梯度液)得到168(9.86g，97％)，为黄色固体。Rf＝0.33 Hex∶EtOAc 3∶7。1H-RMN(300MHz，CDCl3)(异构体比率：≈3∶2)：δ6.59(s，1H)，6.57(s，1H)，5.77(s，1H)，5.76(s，1H)，5.68(s，1H)，5.63(s，1H)，5.19(d，J＝6.0Hz，1H)，5.09(d，J＝6.0Hz，1H)，5.07(d，J＝6.1Hz，1H)，5.00(d，J＝6.1Hz，1H)，4.40(d，J＝2.7Hz，1H)，4.27(d，J＝2.44Hz，1H)，4.22(d，J＝10.5Hz，1H)，3.95(d，J＝1.7Hz，1H)，3.86-3.75(m，2H)，3.81(s，3H)，3.72-3.68(m，2H)，3.65(m，2H)，3.54(s，3H)，3.50(m，3H)，3.31(s，3H)，3.29(s，3H)；3.24(m，1H)，3.09(dt，J＝3.2Hz，J＝7.6Hz，1H)，3.02(d，J＝11.2Hz，1H)，2.92(m，2H)，2.48(d，J＝9.5Hz，1H)，2.43 (d，J＝9.3Hz，1H)，2.21(s，3H)，2.14(s，3H)，2.13(s，3H)，2.03(m，2H)，1.73(s，3H)，1.71(s，3H)，0.86(s，9H)，0.77(s，9H)，0.04(s，3H)，0.02(s，3H).13C-RMN(75MHz，CDCl3)：200.5，197.2，159.8，157.7，148.4，148.2，147.7，140.0，137.6，130.5，130.2，129.9，129.4，124.9，124.7，124.0，122.7，117.1，116.9，113.4，110.8，103.9，103.8，101.0，100.4，97.8，72.8，71.3，69.7，68.9，68.8，65.4，64.1，60.2，59.9，59.3，59.1，59.0，58.6，58.5，56.8，56.5，56.2，55.5，54.9，54.8，42.5，41.1，40.9，35.8，25.6，25.5，25.4，25.3，20.6，17.9，17.8，15.5，15.3，13.8，7.0，6.7，-5.7，-6.0，-6.1。ESI-MS m/z：计算值C36H51N3O9Si：697.89；实测值(M+1)+：698.8。
HPLC：条件：柱：Symmetry C18；流动相：can，磷酸盐缓冲液25mM，pH＝5，在AcN中的30-100％梯度50分钟，Φ：1.2ml/分钟，ta：40℃。保留时间：30.70和30.95分钟(两个异构体)。HPLC以面积计纯度：60.77％和31.99％。
实施例94
于23℃向在无水THF(727ml(0.03M))中的168(16.38g，23.47mmol)的溶液中滴加入TBAF在1M THF(59ml，59mmol)中的溶液。将该反应混合物于23℃搅拌45分钟。然后再将该混合物在饱和NaCl水溶液(850ml)和CH2Cl2(950ml)之间分配。分离两相并将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残留物经快速柱层析纯化(SiO2，EtOAc：己烷以梯度方式(从40∶60，50∶50，70∶30，90∶10至100∶0)洗脱)得到169(12.17g，89％)，为浅黄色固体。Rf＝0.1 Hex∶EtOAc 3∶7。1H-RMN(300MHz，CDCl3)(异构体比率：3∶2)：δ6.63(s，1H)，6.57(s，1H)，5.79(s，1H)，5.77(s，1H)，5.75(s，1H)，5.62(s，1H)，5.23(s，1H)，5.18(d，J＝6.1Hz，1H)，5.08(d，J＝6.1Hz，1H)，5.01(d，J＝6.1Hz，1H)，4.22(d，J＝2.7Hz，1H)，4.09(d，J＝2.4Hz，1H)，4.00(m，4H)，3.82(s，3H)，3.87-3.64(m，6H)，3.55(s，3H)，3.51-3.44(m，2H)，3.30(s，3H)，3.29(s，3H)，3.26(m，1H)，3.18(dt，J1＝2.9Hz，J2＝7.3Hz，1H)，2.94(m，4H)2.50(m，4H)，2.22(s，3H)，2.16(s，3H)，2.15(s，3H)，2.11(s，3H)，2.02(d，J＝7.3Hz，2H)，1.72(s，3H)，1.69(s，3H).13C-RMN(75MHz，CDCl3)：200.2，200.1，159.6，158.5，148.5，148.4，148.1，147.9，140.5，137.4，130.9，130.4，130.1，130.0，125.1，124.9，123.8，122.7，116.9，116.6，113.3，110.7，104.5，103.9，101.4，100.7，98.1，97.9，71.9，71.5，71.4，70.1，69.0，69.0，62.0，60.1，59.5，58.7，58.5，58.1，57.4，56.9，56.8，56.4，55.9，55.1，55.0，41.3，41.0，36.1，31.3，25.3，25.2，22.4，15.6，15.5，13.8，7.0，6.8.ESI-MS m/z：计算值C30H37N3O9：583.63；实测值(M+1)+：584.2。
实施例95
于23℃，向在无水CH2Cl2(688ml)中的169(11.49g，19.69mmol)和Alloc-Cys-(Fm)(11.32g，29.53mmol)(其制备见Kruse，C.H；Holden，K.G.，J.Org.Chem，1985，50，pp.2792-2794)的溶液中加入DMAP(2.4g，19.69mmol)和EDC.HCl(9.44g，49.22mmol)。然后于0℃加入DIPEA(5.14ml，29.53mmol)并将该反应物于23℃搅拌3小时。该混合物顺序用饱和的NaHCO3(500ml)、NaCl(400ml)和NH4Cl(2×300ml)水溶液洗涤。用Na2SO4干燥有机层，过滤并减压浓缩。残留物经快速柱层析纯化(SiO2，EtOAc∶Hex的从1∶1，6∶4至7∶3的梯度液)得到170(14.76g，79％)，为浅黄色固体。Rf＝0.31和0.40 Hex∶EtOc 3∶7(异构体的混合物)。1H-RMN(300MHz，CDCl3)：7.74(d，J＝7.6Hz，4H)，7.63(dd，J＝7.0Hz，J＝15.3Hz，4H)，7.38(t，J＝7.3Hz，4H)，7.29(m，4H)，6.61(s，1H)，6.54(s，1H)，5.89(m，2H)；5.73(s，1H)，5.70(s，1H)，5.69(s，1H)，5.62(s，1H)，5.55(m，1H)，5.32(d，J＝15.1Hz，1H)，5.23(d，J＝6.1Hz，1H)，5.22(d，J＝10.6Hz，1H)，5.14(d，J＝5.9Hz，1H)，5.13(d，J＝6.0Hz，1H)，5.07(d，J＝6.3Hz，1H)，4.68(m，1H)，4.56(m，4H)，4.51(m，2H)，4.38(dd，J1＝4.5Hz，J2＝12.6Hz，1H)，4.22(dd，J1＝6.2Hz，J2＝11.1Hz，1H)，4.14-3.88(m，12H)，3.83(s，3H)，3.79-3.69(m，4H)，3.61(s，3H)，3.56(m，4H)，3.39(s，3H)，3.36(s，3H)，3.23(m，2H)，3.16(d，J＝6.0Hz，2H)，3.07(d，J＝6.1Hz，2H)，3.00-2.81(m，6H)，2.46-2.34(m，4H)，2.25(s，3H)，2.20(s，3H)，2.16(s，3H)，2.07(m，1H)，1.83(dd，J1＝9.5Hz，J2＝15.1Hz，1H)，1.78(s，3H)，1.77(s，3H)。13C-RMN(75MHz，CDCl3)：δ200.3，198.4，170.3，160.0，158.1，148.7，148.7，148.5，148.2，145.6，145.6，145.5，142.2，141.1，141.0，141.0，138.5，132.4，132.3，131.1，130.6，130.1，129.8，128.8，127.6，127.1，127.1，125.1，125.0，124.8，124.7，124.7，124.0，122.7，119.9，118.1，118.0，117.2，116.8，111.6，108.3，104.8，104.5，101.5，101.0，98.2，98.2，72.3，71.7，71.7，70.6，69.3，69.2，66.4，66.0，66.0，65.5，63.8，60.8，60.2，59.8，59.0，58.9，58.1，56.8.56.6，56.5，56.3，56.1，55.7，55.3，55.2，53.9，46.9，41.9，41.4，41.2，37.2，36.9，35.4，31.5，29.6，25.6，25.4，22.6，1 5.8，15.7，14.1，7.3，7.0。ESI-MS m/z：计算值C51H56N4O12S：948.36；实测值(M+1)+：949.3。
实施例96
将反应烧瓶火焰加热两次，真空/氩气排空数次并置于氩气下以备反应。于-78℃向在无水CH2Cl2(554ml)中的DMSO(5.4ml)的溶液中滴加三氟乙磺酸酐(5.11ml，30.4mmol)。所得反应混合物于-78℃搅拌20分钟，然后于-78℃经套管加入在无水CH2Cl2(188ml)中的170(14.43g，15.2mmol)的溶液。在滴加过程中通过外浴保持温度在-78℃，反应物的颜色为黄色。于-40℃搅拌该反应混合物35分钟。在此时间该溶液从黄色变成暗绿色。然后，滴加iPr2NEt(21.2ml，121.6mmol)并将该反应混合物保持在0℃45分钟。在此期间该溶液的颜色变成淡棕色。然后滴加tBuOH(5.8ml，60.8mmol)和叔丁基四甲基胍(18.3ml，106.4mmol)并将该反应混合物于23℃搅拌40分钟。然后滴加乙酸酐(14.34ml，152mmol)并再保持该反应混合物在23℃1小时。然后将该反应混合物用CH2Cl2(38ml)稀释并用饱和的NH4Cl(500ml)、NaHCO3(500ml)和NaCl(500ml)水溶液洗涤。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc∶Hex的梯度液，从3∶7至4∶6)纯化得到171(6.24g，52％)，为浅黄色固体。Rf＝0.38 Hex∶EtOAc1∶1。1H-RMN(CDCl3)：6.78(s，1H)，6.07(d，J＝1.2Hz，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.92(m，1H)，5.32(d，J＝5.9Hz，1H)，5.31(dd，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.23(dd，J1＝1.5Hz，J2＝10.4Hz，1H)，5.19(d，J＝5.6Hz，1H)，5.01(d，J＝11.5Hz，1H)，4.81(d，J＝9.8Hz，1H)，4.53-4.51(m，3H)，4.35-4.27(m，2H)，4.24(s，1H)，4.18-4.13(m，2H)，3.94-3.84(m，2H)，3.73(s，3H)，3.58(t，J＝4.7Hz，2H)，3.43-3.37(m，2H)，3.36(s，3H)，2.91(m，2H)，2.27(s，3H)，2.26(s，3H)，2.20(s，3H)，2.36-2.06(m，2H)，2.02(s，3H)。13C-RMN(CDCl3)：170.23，168.49，155.26，149.62，148.26，145.63，140.85，140.24，132.74，131.60，130.11，124.89，124.70，120.14，117.89，117.84，113.21，101.89，98.03，92.67，71.60，69.04，65.70，61.20，60.35，59.36，59.01，58.89，54.7 1，54.42，53.79，41.53，41.19，32.68，29.53，23.57，20.26，15.62，9.45。ESI-MS m/z：计算值C39H46N4O12S：794.87；实测值796(M+1)+：817(M+23)+。HPLC：条件：柱：Simmetry C18，流动相：AcN/磷酸缓冲液(pH：5)在15分钟内梯度从45-65％，在36分钟内梯度在65-90％。＝0.8亳升/分钟，ta＝40℃。保留时间：19.734分钟。HPLC纯度的面积：83.17％。
实施例97
在0℃向在无水CH2Cl2(74ml)和乙腈(74ml)中的171(2.26g，2.85mmol)的溶液中加入NaI(3.42g，22.8mmol)和TMSCl(经CaH2新蒸馏)(2.6ml，22.8mmol)并搅拌所得反应物35分钟。于此温度向该反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液150ml)。分离有机层并用CH2Cl2(2×100ml)提取水相。将合并的有机提取物用硫酸钠干燥，过滤并减压除去溶剂。得到淡黄色固体164(2.4g，100％)。该固体不经进一步纯化可用于后续的反应。164的实验数据先前已在实施例88中介绍。
164向35的转化先前已在实施例89中介绍。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介绍的相同的方法制备中间体35，36，ET-770和ET-743。
路径6
实施例98
向在MeOH(140ml)中的144(7g，7.6mmol)的溶液中加入1MNaOH(15.1ml)，将反应物于23℃搅拌10分钟。将饱和NH4Cl水溶液(100ml)加至该反应混合物中。分离有机相并用5％HCl洗涤直至颜色转成黄色。将所得有机提取物用硫酸钠干燥，过滤并减压除去溶剂。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc∶己烷的梯度液，从0∶1，1∶3，1∶21∶1，1∶1至3∶1)得到161(3.76g，85％)。161的实验数据先前已在美国专利号5721362中介绍。
实施例99
于23℃，向在无水CH2Cl2(20ml)中的161(200mg，0.37mmol)和半胱氨酸152(240mg，0.55mmol)的溶液中加入DMAP(110mg，0.925mmol)和EDC.HCl(170mg，0.925mmol)，将该反应物于该温度下搅拌1.5小时。然后顺序用饱和的NaHCO3(15ml)、NaCl(15ml)和NH4Cl(2×10ml)水溶液洗涤混合物。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压浓缩。残留物经硅胶快速柱层析纯化(SiO2，EtOAc：己烷1∶4至1∶2)得到172(285mg，80％)，为白色固体。Rf＝0.3 Hex∶EtOAc 2∶1。1H RMN(CDCl3)δ7.73(d，J＝7.5Hz，2H)，7.59-7.57(m，2H)，7.40-7.28(m，9H)，6.60(s，1H)，5.69(s，1H)，5.65(s，1H)，5.54(d，J＝7.8Hz，1H)，5.11-5.08(m，4H)，4.52-4.49(m，1H)，4.21-3.90(m，6H)，3.83(s，3H)，3.49(s，3H)，3.21(d，J＝6.6Hz，1H)，3.09-2.90(m，6H)，2.41(d，J＝18Hz，1H)，2.34-2.31(m，1H)，2.25(s，3H)，2.19(s，3H)，1.88-1.83(m，1H)，1.77(s，3H)。13C-RMN(CDCl3)δ198.7，170.5，158.4，155.9，148.9，148.8，145.8，142.5，141.3，136.2，131.4，130.0，128.8，128.6，128.4，127.9，127.3，125.3，125.0，124.9，123.0，120.1，117.5，108.5，104.8，101.7，99.5，70.8，67.4，60.5，57.8，57.0，56.5，56.0，55.5，47.1，41.6，37.4，37.1，31.8，25.8，22.8，15.9，14.3，7.6。ESI-MS m/z：计算值C53H54N4O11S：954.35；实测值(M+23)+：977.8。
实施例100
将反应烧瓶火焰加热两次，真空/氩气排空数次并置于氩气下以备反应。于-78℃向在无水CH2Cl2(118ml)中的DMSO(977μl)的溶液中滴加三氟乙磺酸酐(930μl，5.5mmol)。于-78℃搅拌反应混合物20分钟，然后于-78℃经套管加入(滴加时间：5分钟)在无水CH2Cl2(26ml用于主要滴加，13ml用于洗涤)中的172(2.63g，2.75mmol)的溶液。在滴加过程中通过外浴保持温度在-78℃，溶液的颜色由黄色变为棕色。于-40℃搅拌该反应混合物35分钟。在此时间内该溶液从黄色变成暗绿色。然后，滴加iPr2NEt(3.48ml，22mmol)并将该反应混合物保持在0℃ 45分钟。在此期间该溶液的颜色变成棕色。然后滴加tBuOH(1.04ml，11mmol)和叔丁基四甲基胍(3.31ml，19.25mmol)并将该反应混合物于23℃搅拌40分钟。然后滴加乙酸酐(2.6ml，27.5mmol)并再保持该反应混合物在23℃1小时。然后将该反应混合物用CH2Cl2(70ml)稀释并顺序用饱和的NH4Cl(180ml)、NaHCO3(180ml)和NaCl(180ml)水溶液洗涤。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残留物经快速柱层析(SiO2，EtOAc∶Hex的梯度液，从4∶1，3∶1至2∶1)得到173(1.145g，52％)，为白色固体。Rf＝0.31 Hex∶EtOAc 3∶2。1H RMN(CDCl3)δ7.37(bs，5H)，6.67(s，1H)，6.08(d，J＝1.2Hz，1H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.19-5.00(m，4H)，4.82(d，J＝9.3Hz，1H)，4.49(bs，1H)，4.32-4.15(m，5H)，3.67(s，3H1，3.55(s，3H)，3.44(d，J＝4.8Hz，1H)，3.39(d，J＝6Hz，1H)，2.90-2.87(m，2H)，2.28(s，3H)，2.19(s，3H)，2.15-2.07(m，2H)，2.03(s，3H)，2.00(s，3H)；13C-RMN(CDCl3)δ170.6，168.8，155.8，149.9，148.5，146.0，141.2，140.6，136.6，132.0，130.4，128.8，128.7，128.5，125.2，124.9，120.5，118.2，113.7，113.6，102.2，99.4，67.2，61.6，60.7，59.7，59.3，57.6，55.1，54.8，54.2，41.9，41.6，33.0，29.9，23.9，20.6，15.6，9.8.ESI-MS m/z：计算值C41H44N4O11S：800.87；实测值(M+23)+：823.7。
实施例101
在0℃向在CH2Cl2(2ml)和CH3CN(2ml)中的173(100mg，0.125mmol)的溶液中加入NaI(75mg，0.5mmol)和TMSCl(63μl,0.5mmol)。将该反应物于23℃搅拌50分钟后，用水(30ml)猝灭混合物并用CH2Cl2(2×20ml)提取。将合并的有机层顺序用饱和NaCl水溶液(20ml)和饱和连二亚硫酸钠溶液(20ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残留物经快速柱层析纯化((SiO2，EtOAc∶己烷的梯度液，从1∶4，1∶2至1∶1)得到化合物158(66mg，70％)，为白色固体。Rf＝0.21 Hex∶EtOAc 1∶1。158的实验数据已在上面的实施例19中介绍。
158向35的转化已在上面的实施例85中介绍。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介绍的相同的方法制备中间体36，ET-770和ET-743。参考文献欧洲专利309，477美国专利5,721,362Sakai，R.，Jares-Erijman，E.A.，Manzanares，I.，Elipe，M.V.S.，andRinehart，K.L.J.Am.Chem.Soc.(1996)118，9017-9023Martinez，E.J.，Owa，T.，Schreiber，S.L.and Corey，E.J.Proc.Natl.Acad.Sci USA，1999，96，3496-3501.Japanese Kokai JP-A2 59/225189.Japanese Kokai JP-A2 60/084288.Arai，T，；Kubo，A.In The Alkaloids， Chemistry and Pharmacology；Brossi，A.Ed.；Academic：NewYork，1983，Vol 21；pp 56-110.Remers，W.A.：In The Chemistry of Antitumor AntibiotiCs；Vo1.2；Wiley；New York，1988，pp 93-118.Gulavita N.K.；Scheuer，P.J.：Desilva，E.D.Abst.Indo-United StatesSymp.on Bioactive Compounds from Marine Organisms，Goa，India，Feb.23-27，1989，p 28.Arai，T；Takahashi，K；Kubo，A.J.Antibiot，1977，30，1015-1018.Arai.T.；Takahashi，K.；Nakahara，S.；Kubo，A.Experientia 1980，36，1025-1028.Mikami，Y.；Takahashi，K；Yazawa，K.；Hour-Young，C.；Arai，T.；Saito，N.；Kubo，A.J.Antibiot.1988，41，734-740.Arai，T.；Takahashi，K.；Ishiguro，K.；Yazawa，K.J.Antibiot.1980，33，951-960.Yazawa，K.；Takahashi，K.；Mikami，Y.；Arai，T.；Saito，N.；Kubo，A.J.Antibiot.1986，39，1639-1650.Arai，T.；Yazawa，K.；Takahashi，K.；Maeda，A.；Mikami，Y.Antimicrob.Agent Chemother.1985，28，5-11.Takahashi，K.；Yazawa，K.；Kishi，K.；Mikami，Y.；Arai，T.；Kubo，A.J.Antibiot.1982，35，196-201.Yazawa，K.；Asaoka，T.；Takahashi，K.；Mikami，Y.；Arai，T.J.Antibiot。1982，35，915-917.Frincke，J.M.；Faulkner，D.J.J.Am.Chem.Soc.1982，104，265-269.He，H.-Y.；Faulkner，D.J.J.Org.Chem.1989，54，5822-5824.Kubo，A.；Saito，N.；Kitahara，Y.；Takahashi，K.；Tazawa，K.；Arai，T.Chem Pharm.Bull.1987，35，440-442.Trowitzsch-Kienast，W.；Irschik，H.；Reichenback，H.；Wray，V.；Hfle，G.Liebigs Ann.Chem.1988，475-481.Ikeda，Y.；Idemoto，H.；Hirayana，F.；Yanamoto，K.；lwao，K.；Asano，T.；Munakata，T.J.Antibiot.1983，36，1279-1283.Asaoka，T.；Yazawa，K.；Mikani，Y.Arai，T.；Takahashi，K.J.Antibiot.1982，35，1708-1710.Lown，J.W.；Hanstock，C.C.；Joshua，A.V.；Arai，T；Takahashi，K.J.Antibiot.1983，36，1184-1194.Munakata et al.United States Patent 4，400，752，1984.Y.Ikeda et al.The Journal of Antibiotics.VOL XXXVI，N°10，1284，1983.R.Cooper，S.Unger.The Journal of Antibiotics.VOL XXXVIII，N°1，1985.Corey et al.United States Patent 5，721，362.1998.Corey et al.J.Am.Chem.Soc.vol 118 pp 9202-92034，1996.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.Vol.96，pp 3496-3501，1999.