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1、10申请公布号CN104177332A43申请公布日20141203CN104177332A21申请号201310187705422申请日20130520C07D401/12200601C07D487/04200601C07D403/12200601A61K31/5377200601A61K31/454200601A61K31/4985200601A61K31/407200601A61K31/403200601A61P35/00200601A61P35/0420060171申请人中国科学院上海药物研究所地址201203上海市浦东新区张江祖冲之路555号72发明人张翱耿美玉丁健宋子兰艾菁李晓刚彭。
2、霞74专利代理机构北京金信知识产权代理有限公司11225代理人朱梅王荣54发明名称酰胺基取代的吲哚并萘酮衍生物及其医药用途57摘要本发明涉及酰胺基取代的吲哚并萘酮衍生物及其医药用途。具体地，本发明涉及一类具有酪氨酸激酶ALK选择性抑制活性的化合物及其药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物，其制备方法、包含该化合物的药物组合物，以及这些化合物在制备用于预防或治疗与生物体内的渐变性淋巴瘤酶相关的伴随细胞异常增殖、形态变化和/或运动功能亢进等的疾病的药物中的用途，以及在制备用于治疗或预防与血管新生或癌转移相关的疾病的药物中的用途，尤其是在制备用于治疗或预防肿瘤生长与转移的药物中的用途。51INTC。
3、L权利要求书4页说明书12页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书4页说明书12页10申请公布号CN104177332ACN104177332A1/4页21一种如下通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物通式I其中R1为氢原子、卤素或C1C4烷基；T为CH2M，其中M为0、1或2；R2为取代或未取代的含有14个杂原子的4元至10元的饱和或不饱和杂环基，所述取代的饱和或不饱和杂环基的取代基为含有12个杂原子的4元至10元的饱和杂环基、羟基取代的C1C4烷基、卤素取代的C1C4烷基、C1C4烷基、卤素、C1C4烷氧基C1C4亚烷基羰基氧基C1C4亚烷基或。
4、C1C4烷氧基羰基，其中，所述杂原子为N、O或S；其中，所述C1C4烷基为C1C4直链或支链烷基；所述卤素为F、CL、BR或I。2根据权利要求1所述的通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物，其中，R2为取代或未取代的含有12个杂原子的4元至8元的饱和杂环基或者为取代或未取代的含有14个杂原子的9元不饱和杂环基，所述取代的饱和杂环基的取代基为含有12个杂原子的6元饱和杂环基、羟基取代的C1C4烷基、C1C4烷基或C1C4烷氧基C1C4亚烷基羰基氧基C1C4亚烷基，所述取代的不饱和杂环基的取代基为卤素取代的C1C4烷基、卤素或C1C4烷氧基羰基，其中，所述杂原子为N、O或。
5、S。3根据权利要求2所述的通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物，其中，R2为取代或未取代的含有12个氮原子的4元、6元或8元的饱和杂环基或者为取代或未取代的含有4个氮原子的9元不饱和杂环基，所述取代的饱和杂环基的取代基为含有12个杂原子的6元饱和杂环基、羟基取代的C1C4烷基、C1C4烷基或C1C4烷氧基C1C4亚烷基羰基氧基C1C4亚烷基，所述取代的不饱和杂环基的取代基为卤素取代的C1C4烷基、卤素或C1C4烷氧基羰基，其中，所述杂原子为N或O。4根据权利要求3所述的通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物，其中，R2为取代的或未取代的或或。
6、者为取代的或未取代其中，所述取代的或的权利要求书CN104177332A2/4页3取代基为羟基取代的C1C4烷基、C1C4烷基或C1C4烷氧基C1C4亚烷基羰基氧基C1C4亚烷基，所述取代的的取代基为13个卤素取代的C1C4烷基、卤素或C1C4烷氧基羰基。5根据权利要求1所述的通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物，所述通式I所示的化合物为以下化合物权利要求书CN104177332A3/4页46根据权利要求1所述的通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物，其中，所述药学上可接受的盐为无机酸盐或有机酸盐，其中，所述无机酸盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸。
7、盐、硫酸盐或磷酸盐，所述有机酸盐为甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、苯甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、烷基磺酸盐或苯磺酸盐；优选地，所述烷基磺酸盐为甲基磺酸盐或乙基磺酸盐；所述芳基磺酸盐为苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐；权利要求书CN104177332A4/4页5所述药学上可接受的溶剂合物为所述通式I所示的化合物与水、乙醇、异丙醇、乙醚或丙酮的溶剂合物。7一种药物组合物，其包含选自权利要求1所述的通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物中一种或多种；和药学上可接受的辅料。8根据权利要求1所述化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物在制备用于预防或治疗。
8、与生物体内渐变性淋巴瘤酶相关的疾病的药物中的用途，其中，所述疾病伴随细胞异常增殖、形态变化和/或运动功能亢进症状。9根据权利要求1所述的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物在制备用于预防或治疗与血管新生或癌转移相关的疾病的药物中的用途，优选地为所述化合物在制备用于预防或治疗肿瘤生长与转移的药物中的用途。权利要求书CN104177332A1/12页6酰胺基取代的吲哚并萘酮衍生物及其医药用途技术领域0001本发明涉及药物化合物合成领域，具体地，涉及一类具有酪氨酸激酶选择性抑制活性的化合物及其药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物，其制备方法、包含该化合物的药物组合物，以及这些化合。
9、物在制备用于预防或治疗与生物体内渐变性淋巴瘤酶相关的伴随细胞异常增殖、形态变化以及运动功能亢进等的疾病的药物中的用途，以及在制备用于预防或治疗与血管新生或癌转移相关的疾病的药物中的用途，尤其是在制备用于预防或治疗肿瘤生长与转移的药物中的用途。背景技术0002渐变性淋巴瘤酶ALK是一种受体酪氨酸激酶，隶属于胰岛素受体超家族。最早发现于渐变性大细胞淋巴瘤ALCL中，约6085的ALCL中有ALK的表达，而正常的ALK专一表达于神经系统中，尤其是新生儿的脑中。人体中ALK基因表达水平随着脑的发育成熟而下降，成熟脑组织中的量很低，表达存在一定的区域性；其他系统尤其是造血系统中未发现ALK的表达。ALK。
10、基因在绝大多数非造血系统肿瘤和正常组织中缺乏表达，表明ALK蛋白的分布范围是极其狭窄的。0003ALK基因位于染色体2P23位点，正常情况下人源的ALK可转录产生大小为6222BP的MRNA，由29个外显子构成，编码1620个氨基酸序列200KDA的I型穿膜蛋白ALK。ALK基因通常处于休眠状态，由于与其他基因发生融合而导致细胞恶化发展为恶性肿瘤。然而能和它发生融合的基因有很多，在非小细胞肺癌NONSMALLCELLLUNGCANCER，NSCLC中主要是与EML4基因棘皮动物微管相关蛋白样4发生融合，棘皮动物微管相关蛋白样4间变淋巴瘤激酶EML4ALK融合基因在NSCLC的发生率为27。00。
11、04随着非小细胞肺癌NSCLC分子生物学研究的不断深入，基于分子标记物的个体化治疗已经从实验室走到了临床，并在晚期NSCLC患者的治疗上取得了显著的临床进展。同样重要的是，除了传统的病理组织学分类之外，NSCLC还可以根据各种分子标记物表达的不同，进行分子表型分类，并以与肿瘤发生、发展相关的驱动性基因为靶点，研发新的药物，进行有针对性的个体化分子靶向治疗，改善患者预后。在理想状态下，所有NSCLC患者应该在治疗前进行相关分子标记物的检测，在充分了解患者肿瘤分子表达特征的情况下实施有针对性的治疗，提高治疗效果。在这样的背景下，酪氨酸激酶已成为近年来炙手可热的分子靶点，其选择性抑制剂或围绕ALK的。
12、多靶点小分子抑制剂已成为抗肿瘤药物研究的热点。0005目前，PFIZER公司开发的小分子抑制剂CRIZOTINIB已经被美国FDA于2011年8月26日批准上市，这也是是唯一一个已经上市的ALK的小分子抑制剂。但是，已有临床研究表明对CRIZOTINIB已经出现了耐药性，同时CRIZOTINIB在体内的生物利用度有待提高。现并没有一种单一的靶向ALK的抑制剂上市，处于临床2期的ALECTINIB又名CH5424802为ALK选择性抑制剂，其独特的四环结构引起大家广泛关注BIOORGANICMEDICINALCHEMISTRY20201212711280；JMEDCHEM2011,54,6286。
13、6294。为了提高ALECTINIB在体内的生物利用度及代谢稳定性，并获得具有自主知识产权的新ALK抑制剂，我们设计说明书CN104177332A2/12页7在保留其主体骨架的基础上，采用不同的措施对ALECTINIB进行改造，尤其是在侧链上引入水溶性基团和代谢稳定性基团，获得了一类新的衍生物，具有较好ALK的抑制活性。0006发明内容0007本发明人设计合成了一类以四环为母核结构的化合物，其药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物。所述化合物为一类酪氨酸激酶抑制剂，对ALK具有较好的抑制作用。0008本发明的一个目的为提供如下通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物0。
14、0090010通式I0011其中0012R1为氢原子、卤素或C1C4烷基；T为CH2M，其中M为0、1或2；0013R2为取代或未取代的含有14个杂原子的4元至10元的饱和或不饱和杂环基，所述取代的饱和或不饱和杂环基的取代基为含有12个杂原子的4元至10元的饱和杂环基、羟基取代的C1C4烷基、卤素取代的C1C4烷基、C1C4烷基、卤素、C1C4烷氧基C1C4亚烷基羰基氧基C1C4亚烷基或C1C4烷氧基羰基，其中，所述杂原子为N、O或S；0014优选地，R2为取代或未取代的含有12个杂原子的4元至8元的饱和杂环基或者为取代或未取代的含有14个杂原子的9元不饱和杂环基，所述取代的饱和杂环基的取代基。
15、为含有12个杂原子的6元饱和杂环基、羟基取代的C1C4烷基、C1C4烷基或C1C4烷氧基C1C4亚烷基羰基氧基C1C4亚烷基，所述取代的不饱和杂环基的取代基为卤素取代的C1C4烷基、卤素或C1C4烷氧基羰基，其中，所述杂原子为N、O或S；0015更优选地，R2为取代或未取代的含有12个氮原子的4元、6元或8元的饱和杂环基或者为取代或未取代的含有4个氮原子的9元不饱和杂环基，所述取代的饱和杂环基的取代基为含有12个杂原子的6元饱和杂环基、羟基取代的C1C4烷基、C1C4烷基或C1C4烷氧基C1C4亚烷基羰基氧基C1C4亚烷基，所述取代的不饱和杂环基的取代基为卤素取代的C1C4烷基、卤素或C1C4。
16、烷氧基羰基，其中，所述杂原子为N或O；说明书CN104177332A3/12页80016最优选地，R2为取代的或未取代的或或者为取代的或未取代其中，所述取代的或的取代基为羟基取代的C1C4烷基、C1C4烷基或C1C4烷氧基C1C4亚烷基羰基氧基C1C4亚烷基，所述取代的的取代基为13个卤素取代的C1C4烷基、卤素或C1C4烷氧基羰基。0017其中，所述C1C4烷基为C1C4直链或支链烷基；所述卤素为F、CL、BR或I。0018所述通式I表示的化合物的药学上可接受的盐非限制性地包括无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；有机酸盐，如甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、苯甲酸盐、马来酸盐、富马。
17、酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐等；烷基磺酸盐，如甲基磺酸盐、乙基磺酸盐等；芳基磺酸盐，如苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等。0019所述通式I表示的化合物的药学上可接受的溶剂合物非限制性地包括通式I表示的化合物与水、乙醇、异丙醇、乙醚、丙酮等的溶剂合物。0020本发明的典型化合物包括但不限于表一所示的化合物0021表一0022说明书CN104177332A4/12页900230024本发明的另一目的为提供通式I表示的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物的制备方法，所述制备方法包括以下两种制备路线0025路线一当T为CH2M，其中M为0时，该路线包括如下步骤说明书CN104177332。
18、A5/12页1000260027其中，R1和R2的定义与通式I化合物中的相同，0028化合物I的合成可参考CN102459172。化合物I通过与氨水发生铜催化的氨化反应得到化合物II，化合物II与三光气和由HR2表示的含氮杂环反应得到化合物III；0029路线二当T为CH2M，其中M为1或2时，该路线包括如下步骤00300031其中，R1和R2的定义与通式I化合物中的相同，0032化合物I的合成可参考CN102459172。化合物II的合成是通过化合物I与氨水发生铜催化的氨化反应得到，化合物II与取代酰氯反应生成化合物IV后再与由HR2表示的含氮杂环的化合物进行取代反应得到化合物V。0033本。
19、发明的又一目的为提供一种药物组合物，其包含选自通式I所示的化合物、其药学上可接受的盐及其药学上可接受的溶剂合物中一种或多种；和药学上可接受的辅料。0034本发明的另一目的为提供所述化合物在制备用于预防或治疗与生物体内渐变性淋巴瘤酶相关的的疾病的药物中的用途，其中，所述疾病伴随细胞异常增殖、形态变化以及运动功能亢进等症状。优选地，提供所述化合物在制备用于预防或治疗与血管新生或癌转移相关的疾病的药物中的用途。更优选地，提供所述化合物在制备用于预防或治疗肿瘤生长与转移的药物中的用途。具体实施方式0035下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述。这些实施例仅是出于解释说明的目的，而不限制本发明的范围和实。
20、质。说明书CN104177332A106/12页1100361HNMR用VARIANMERCURYAMX300型仪测定；三乙酰丙酮铁FEACAC3、碘化亚铜CUI，购于JKCHEMICA百灵威化学试剂公司，氨水NH3H2O购于ALFAAESAR，其余试剂由中国医药试剂有限公司生产。所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得；除特别说明外，所有反应均是在氮气保护下进行并TLC跟踪，后处理时均经饱和氯化钠水溶液洗涤和无水硫酸钠干燥过程；产品的纯化除特别说明外均使用硅胶200300目柱色谱法；其中硅胶200300目由青岛海洋化工厂生产，GF254薄层硅胶板由烟台江友硅。
21、胶开发有限公司生产。0037制备实施例1化合物S1的制备00380039化合物11的合成参考CN102459172。0040化合物12的合成0041将化合物11溶解于乙醇中，氮气保护下加入02EQ碘化亚铜CUI及02EQ三乙酰基丙酮铁FEACAC3加毕配置氢氧化钠氨水溶液，将2EQ氢氧化钠溶解于10EQ氨水中，将此氢氧化钠氨水溶液加入反应液中，封管90反应48H。反应完成后将反应液过滤，用氯仿及水萃取，有机相硅胶拌样上柱，CHCL3MEOHNH3H2O10011100201体积比得化合物12。00421HNMR300MHZ,CDCL31019S,1H,851D,J81HZ,1H,814S,1H。
22、,767S,1H,750DD,J82,14HZ,1H,681S,1H,415S,2H,255Q,J74HZ,3H,180S,6H,137125M,3H。0043化合物S1的合成0044将化合物12溶解在二氯甲烷DCM中，加入15EQ三乙胺ET3N及06EQ三光气BTC，15MIN后加入5EQ的44哌啶基吗啉DCM溶液，室温搅拌。反应完全后直接加入硅胶拌样上柱，CHCL3MEOHNH3H2O10011100201得化合物S1。00451HNMR300MHZ,CDCL31102S,1H,842D,J81HZ,1H,821S,1H,816S,1H,758S,1H,745D,J82HZ,1H,673S。
23、,1H,415D,J134HZ,2H,381368M,4H,305T,J116HZ,2H,267T,J75HZ,2H,263252M,4H,245S,1H,198D,J110HZ,2H,157M,8H,131T,J75HZ,3H。0046制备实施例2化合物S2的制备0047说明书CN104177332A117/12页120048化合物S2的合成0049除了使用化合物24哌啶基2丙醇替换44哌啶基吗啉外，化合物S2的合成与化合物S1相同。00501HNMR300MHZ,CDCL3MEOD830DD,J82,07HZ,1H,804S,1H,797S,1H,765DD,J14,07HZ,1H,738。
24、DD,J82,14HZ,1H,406D,J131HZ,2H,279T,J118HZ,2H,257Q,J75HZ,2H,176D,J116HZ,2H,163S,6H,122M,5H,106S,6H。0051制备实施例3化合物S3的制备00520053化合物S3的合成0054除了使用化合物3三氟甲基5,6,7,8四氢1,2,4三唑并4,3A吡嗪替换44哌啶基吗啉外，化合物S3的合成与化合物S1相同。00551HNMR300MHZ,CDCL3MEOD836D,J82HZ,1H,816S,1H,773S,1H,772S,1H,742DD,J82,14HZ,1H,499S,2H,423T,J52HZ,2。
25、H,402T,J53HZ,2H,265Q,J75HZ,2H,168S,6H,123T,J75HZ,3H。0056制备实施例4化合物S4的制备00570058化合物S4的合成0059除了使用化合物4氮杂环丁烷3基吗啉替换44哌啶基吗啉外，化合物S4的合成与化合物S1相同。00601HNMR400MHZ,CDCL31139S,1H,849D,J82HZ,1H,841S,1H,823S,1H,788S,1H,752DD,J82,14HZ,1H,625S,1H,415T,J76HZ,2H,403DD,J80,52HZ,2H,382372M,4H,329S,1H,267Q,J75HZ,2H,244S,4。
26、H,179S,6H,134T,J75HZ,3H。0061制备实施例5化合物S5的制备说明书CN104177332A128/12页1300620063化合物S5的合成0064除了使用化合物3氮杂双环310辛烷6基甲醇替换44哌啶基吗啉外，化合物S5的合成与化合物S1相同。00651HNMR300MHZ,CDCL3MEOD841D,J82HZ,1H,832S,1H,813S,1H,771S,1H,746D,J82HZ,1H,368D,J97HZ,2H,358D,J94HZ,2H,349D,J68HZ,2H,262Q,J75HZ,2H,168D,J90HZ,6H,161S,2H,130T,J75HZ。
27、,3H,100DD,J66,33HZ,1H。0066制备实施例6化合物S6的制备00670068化合物61的合成0069将化合物11溶解在DCM中，加入3EQ三乙胺，冰浴下缓慢滴加15EQ氯乙酰氯的DCM溶液，加毕缓慢升至室温进行反应。反应完全后，将反应液加压蒸除后用乙酸乙酯和1N盐酸萃取，再用饱和碳酸氢钠洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得粗品61。0070化合物S6的合成0071将化合物61溶解在乙腈中，加入15EQ2甲基八氢吡咯3,4C吡咯及3EQ碳酸钾，加毕加热回流过夜。反应完全后将不溶物滤除，滤液加硅胶拌样上柱，CHCL3MEOHNH3H2O10011100201得化合物S6。
28、。00721HNMR300MHZ,CDCL31026S,1H,976S,1H,873S,1H,851D,J80HZ,1H,826S,1H,776S,1H,754DD,J82,14HZ,1H,337S,2H,284S,4H,279261M,6H,239M,5H,179S,6H,134T,J75HZ,3H。0073制备实施例7化合物S7的制备0074说明书CN104177332A139/12页140075化合物S7的合成0076除了使用化合物3氮杂双环310辛烷6基甲醇替换2甲基八氢吡咯3,4C吡咯外，化合物S7的合成与化合物S6相同。00771HNMR300MHZ,CDCL3MEOD845S,1。
29、H,824D,J80HZ,1H,800S,1H,762S,1H,733D,J80HZ,1H,327D,J64HZ,2H,316S,2H,305D,J89HZ,2H,254DD,J160,82HZ,4H,160S,6H,129S,2H,118T,J75HZ,3H067D,J81HZ,1H。0078制备实施例8化合物S8的制备00790080化合物81的合成参考CN102459172。0081化合物S8的合成0082除了使用化合物81替换化合物11外，化合物S8的合成与化合物S1相同。00831HNMR300MHZ,CDCL3MEOD852D,J82HZ,1H,835D,J81HZ,1H,775D。
30、,J81HZ,1H,755S,1H,752S,1H,736D,J80HZ,1H,415D,J134HZ,2H,381368M,4H,305T,J116HZ,2H,267T,J75HZ,2H,263252M,2H,245S,1H,198D,J110HZ,2H,157M,8H。0084制备实施例9化合物S9的制备00850086化合物S9的合成0087除了使用化合物3溴5,6,7,8四氢1,2,4三唑并4,3A吡嗪替换化合物44哌啶基吗啉外，化合物S9的合成与化合物S1相同。00881HNMR300MHZ,CDCL3MEOD839D,J82HZ,1H,813S,1H,775S,1H,778S,1H。
31、,741DD,J82,14HZ,1H,497S,2H,425T,J52HZ,2H,408T,J53HZ,2H,263Q,J75HZ,2H,166S,6H,121T,J75HZ,3H。0089制备实施例10化合物S10的制备说明书CN104177332A1410/12页1500900091化合物S10的合成0092除了使用化合物24哌啶基2丙醇替换2甲基八氢吡咯3,4C吡咯外，化合物S10的合成与化合物S6相同。00931HNMR300MHZ,CDCL3MEOD843S,1H,822D,J80HZ,1H,803S,1H,761S,1H,735D,J80HZ,1H,316S,2H,301D,J13。
32、1HZ,2H,257M,4H,176D,J116HZ,2H,163S,6H,121M,5H,104S,6H。0094制备实施例11化合物S11的制备00950096化合物S11的合成0097除了使用化合物CIS2BOC六氢吡咯并3,4C吡咯替换2甲基八氢吡咯3,4C吡咯外，化合物S11的合成与化合物S6相同。00981HNMR300MHZ,CDCL31023S,1H,974S,1H,872S,1H,855D,J80HZ,1H,821S,1H,775S,1H,753DD,J82,14HZ,1H,332S,2H,281S,4H,279261M,6H,236M,2H,171S,6H,132T,J75。
33、HZ,3H。0099制备实施例12化合物S12的制备01000101化合物S12的合成0102将甲氧基乙酸溶解于干燥的DCM中，加入二氯亚砜，室温搅拌过夜，反应完全后将反应液减压蒸除，再加入干燥的DCM，再将溶剂蒸除，此步骤重复三次后，得油状物备用。0103将化合物S7溶解在干燥氯仿中，加入4EQ三乙胺，冰浴下缓慢滴加上步油状物的DCM溶液，加毕放置室温反应。反应完全后将反应液减压蒸除，加入水，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥后硅胶拌样上柱，CHCL3MEOH1001301得化合物S12。说明书CN104177332A1511/12页1601041HNMR300MHZ,CDCL3MEOD842S,。
34、1H,821D,J80HZ,1H,801S,1H,765S,1H,732D,J80HZ,1H,436S,2H,427D,J64HZ,2H,335S,3H,316S,2H,305D,J89HZ,2H,254DD,J160,82HZ,4H,160S,6H,129S,2H,118T,J75HZ,3H066D,J81HZ,1H。0105制备实施例13化合物S13的制备01060107化合物S13的合成0108除了使用化合物3乙氧羰基5,6,7,8四氢1,2,4三唑并4,3A吡嗪替换化合物44哌啶基吗啉外，化合物S13的合成与化合物S1相同。01091HNMR300MHZ,CDCL3MEOD835D,J。
35、82HZ,1H,811S,1H,772S,1H,776S,1H,740DD,J82,14HZ,1H,494S,2H,432Q,J75HZ,2H,423T,J52HZ,2H,404T,J53HZ,2H,261Q,J75HZ,2H,165S,6H,131T,J75HZ,3H,127T,J75HZ,3H。0110制备实施例14化合物S14的制备01110112化合物S14的合成0113除了使用化合物81替换化合物11外，化合物24哌啶基2丙醇替换化合物44哌啶基吗啉外，化合物S14的合成与化合物S1相同。01141HNMR300MHZ,CDCL3MEOD855D,J82HZ,1H,836D,J81H。
36、Z,1H,772D,J81HZ,1H,757S,1H,754S,1H,737D,J80HZ,1H,402D,J131HZ,2H,276T,J118HZ,2H,177D,J116HZ,2H,162S,6H,126M,2H,103S,6H。0115实验实施例分子受体酪氨酸激酶ALK分子水平活性评价01161受体氨酸激酶ALK分子水平酶活抑制初步评价实验01171酶反应底物POLYGLU,TYR按41的比例用无钾离子的PBS磷酸氢钠盐缓冲液10MM磷酸钠缓冲液，150MMNACL，PH7274稀释成20G/ML，125L/孔包被酶标板，置37C反应1216小时。弃去孔中液体。洗板，用200L/孔的T。
37、PBS含01TWEEN20的无钾离子的PBS洗板三次，每次5分钟。于37C烘箱中干燥酶标板12小时。01182每孔加入用反应缓冲液50MMHEPES4羟乙基哌嗪乙磺酸PH74，50MM说明书CN104177332A1612/12页17MGCL2，05MMMNCL2，02MMNA3VO4，1MMDTT二硫苏糖醇稀释的ATP三磷酸腺苷溶液49L，每孔中加入1L化合物，加入待测试化合物，再加入50L用反应缓冲液稀释的各激酶域重组蛋白启动反应，每次实验需设无ATP对照孔两孔。置37C摇床100RPM反应1小时。弃去孔中液体，TPBS洗板三次。01193加入抗体PY99100L/孔抗体用含BSA牛血清白。
38、蛋白5MG/ML的TPBS1500稀释，37C摇床反应05小时。弃去孔中液体，TPBS洗板三次。01204加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗100L/孔抗体用含BSA5MG/ML的TPBS12000稀释，37C摇床反应05小时。弃去孔中液体，TPBS洗板三次。01215加入2MG/ML的OPD邻苯二胺显色液100L/孔用含有003H2O2的01M柠檬酸柠檬酸钠缓冲液PH54稀释，25C避光反应110分钟。01226加入2MH2SO450L/孔中止反应，用可调波长式微孔板酶标仪VERSAMAX读数，波长为490NM。01237结果分析012401252受体酪氨酸激酶ALK酶活抑制IC50评价实验0126表二化合物对受体酪氨酸激酶ALK酶活抑制水平01270128代表性化合物的测试结果显示，本申请的化合物在01M的浓度下，全部化合物对ALK均有抑制作用，大部分化合物IC50小于10NM，因此是非常有潜力的ALK抑制剂。说明书CN104177332A17。