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1、(10)申请公布号 CN 102391282 A (43)申请公布日 2012.03.28 C N 1 0 2 3 9 1 2 8 2 A *CN102391282A* (21)申请号 201110303715.0 (22)申请日 2011.10.10 C07D 493/20(2006.01) (71)申请人南京泽朗医药科技有限公司 地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道 甘家边108号05幢6楼 (72)发明人刘东锋 万冬梅 (54) 发明名称 一种纯化紫穗槐螺酮的方法 (57) 摘要 本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及 一种纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于：取紫 穗槐叶粉碎，加。
2、7-10倍量70-80%乙醇回流提取 2-3次，提取液静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶 解，过滤，滤液浓缩，注入高速逆流色谱仪，根据紫 外检测器图谱收集目标成分，浓缩，放置过夜，析 出结晶，滤出结晶，干燥即得紫穗槐螺酮。采用本 发明制备紫穗槐螺酮，工艺简单易操作，收率高， 产品含量高，适合规模化制备。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 CN 102391289 A 1/1页 2 1.一种纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于：取紫穗槐叶粉碎，加7-10倍量70-80%乙 醇回流提取2-3次，提取液静置沉淀，滤出沉淀用。
3、乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩，注入高速 逆流色谱仪，根据紫外检测器图谱收集目标成分，浓缩，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干 燥即得紫穗槐螺酮。 2.根据权利要求1所述纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于所述的回流温度为 70-100。 3.根据权利要求1所述纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于所述的正己烷-乙酸乙 酯-甲醇-水溶剂系统体积比为3-5:2-4:4-7:2-5，上相为固定相，下相为流动相。 权 利 要 求 书CN 102391282 A CN 102391289 A 1/2页 3 一种纯化紫穗槐螺酮的方法 技术领域 0001 本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种采用高速逆流色谱技术纯。
4、化紫穗 槐螺酮方法。 背景技术 0002 紫穗槐螺酮来源于豆科紫穗槐（Amorpha fruticosa L.）的干燥叶。紫穗槐原产 美国。广布于中国东北、华北、河南、华东、湖北、四川等省（区），是黄河和长江流域很好的水 土保持植物。 0003 紫穗槐叶主要有效成分为黄酮类化合物，以紫穗槐螺酮单体为主要活性成分。紫 穗槐螺酮具有细胞毒活性，有显著的选择性细胞毒活性，对KB和RPMI-7951细胞的ED 50 分 别为（g/ml）0.58和0.61。对TPA诱导的EB病毒早期抗原（EBV-EA）有显著抑制作用，其 活性于VA酸和甘草次酸相当。 0004 目前，尚未发现制备高含量紫穗槐螺酮的方法报。
5、道。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种纯化紫穗槐螺酮方法。 0006 为了实现上述目的，本发明的技术方案如下： 一种纯化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于：取紫穗槐叶粉碎，加7-10倍量70-80%乙醇 回流提取2-3次，提取液静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩，注入高速逆 流色谱仪，根据紫外检测器图谱收集目标成分，浓缩，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥 即得紫穗槐螺酮。 0007 所述的回流温度为70-100。 0008 所述的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统体积比为3-5:2-4:4-7:2-5，上相为 固定相，下相为流动相。 0009 本发明优势在于：采用高速逆流。
6、色谱分离，分离过程无产品损失，制备周期短，制 备量大，易操作，克服了传统填充柱分离过程中样品死吸附、工艺繁琐、重现性差的技术缺 陷。 0010 下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。 具体实施方式 0011 实施例1： 取紫穗槐叶粉碎，取5kg，加7倍量80%乙醇溶液，在70温度下回流提取3次，合并两 次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、 乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为3:2:4:2混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动相， 取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为700rpm，同。
7、时以10ml/min 说 明 书CN 102391282 A CN 102391289 A 2/2页 4 的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为2ml/min，注入样品溶液，紫外 检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗槐 螺酮6.6g，经HPLC检测，含量为95.4%。 0012 实施例2： 取紫穗槐叶粉碎，取5kg，加8倍量75%乙醇溶液，在80温度下回流提取3次，合并两 次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、 乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为5:4:7:5混合，静置分层，以上相为固定相，下相为。
8、流动相， 取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为800 rpm，同时以10ml/min 的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为3ml/min，注入样品溶液，紫外 检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗槐 螺酮6.8g，经HPLC检测，含量95.1%。 0013 实施例3： 取紫穗槐叶粉碎，取5kg，加8倍量75%乙醇溶液，在100温度下回流提取2次，合并两 次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己烷、 乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为3:4:7:2混合，静置分层，以上相为固定相，下相为。
9、流动相， 取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为750rpm，同时以10ml/min 的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为1.5ml/min，注入样品溶液，紫 外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫穗 槐螺酮7.2g，经HPLC检测，含量93.8%。 0014 实施例4： 取紫穗槐叶粉碎，取10kg，加10倍量75%乙醇溶液，在70温度下回流提取3次，合 并两次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己 烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为3:4:6:3混合，静置分层，以上相为固定相，下。
10、相为流动 相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为800rpm，同时以10ml/ min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为2.5ml/min，注入样品溶 液，紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到 紫穗槐螺酮13.7g，经HPLC检测，含量97.8%。 0015 实施例5： 取紫穗槐叶粉碎，取15kg，加10倍量70%乙醇溶液，在100温度下回流提取2次，合 并两次提取液，静置沉淀，滤出沉淀用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液浓缩作为样品溶液，取正己 烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比为4:3:5:2混合，静置分层，以上相为固定相，下相为流动 相，取上相注入高速逆流色谱柱，开启高速逆流色谱仪，调整转速为700rpm，同时以10ml/ min的流速泵入下相，待整个系统动态平衡后，流动相流速调节为2ml/min，注入样品溶液， 紫外检测器监测，收集目标流分，减压浓缩后，放置过夜，析出结晶，滤出结晶，干燥得到紫 穗槐螺酮20.3g，经HPLC检测，含量为94.4%。 说 明 书CN 102391282 A 。