说明书肝X受体调节剂
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本申请要求2012年3月16日提交的第61/612,063号美国临时专利申请的权益，其全部内容通过引用结合到本文中。
技术领域
本发明涉及调节肝X受体活性的化合物。
发明背景
动脉粥样硬化是发达国家中死亡的主要原因，而且预测动脉粥样硬化将是21世纪发展中国家中的死亡主要原因。肝X受体(LXR)是在调节涉及酯类基因的表达和细胞胆固醇体内平衡中起重要作用的配体激活转录因。LXR激动剂已经表现出提高胆固醇逆转运(RCT)，所述胆固醇逆转运促进胆固醇从周围运回肝脏以处理和排泄。RCT通过上调在周围巨噬细胞中的胆固醇转运蛋白(三磷酸腺苷结合盒：ABCA1和ABCG1)实现。活化的RCT具有抑制动脉粥样硬化进展的潜能。
LXR有两个同种型：由单独的基因编码的LXRα(NR1H3)和LXRβ(NR1H2)。LXRα表达有组织选择性，在肝脏、肠、肾、脂肪组织和肾上腺中可检测到，所有这些组织对脂质体内平衡很重要，而LXRβ表达广泛。两种LXR都需要维甲类X受体(RXR)作为必须的异源二聚体伴侣以识别并合作地结合至LXR反应元件(LXRE)，所述LXR反应元件由被四个核苷酸(DR4)隔开的核心六核苷酸序列的两个直接重复组成。两种LXR的配体结合区域是相当保守的(约78％的氨基酸同源)并对由胆固醇(羟固醇)的氧化衍生物组成的内源性配体反应，所述胆固醇的氧化衍生物用作甾类激素和胆酸合成中的中间体。其中，22(R)-羟基胆固醇、24(S)-羟基胆固醇和24(S)，25-环氧胆固醇是最有效的。这些数据显示LXR有可能在胆固醇调节中起重要作用，其随后通过小鼠中基因敲除研究得以证实。非甾体类配体也已经被鉴定，然后利用这些作为化学探针已经发现了很多LXR调节基因。多个含有LXRE的基因涉及胆固醇代谢、胆固醇逆转运(RCT)和脂肪生成。涉及炎症和糖类代谢的其他基因缺乏 LXRE，但以配体依赖的方式被LXR抑制。基于这些发现，肝X受体最近已经成为用作细胞内胆固醇感受器的空前的标靶，提供了治疗多种疾病的基础，包括动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、皮肤失调、生殖失调和癌症(Viennois等人，2011年，Expert Opin.Ther.Targets,15(2):219-232)。另外，已经确定LXR激动剂调节肠和肾的磷酸钠(NaPi)转运蛋白并相继地调节血清磷酸盐水平(Caldas等人，2011年，Kidney International，80：535-544)。因此，LXR也是用于肾失调的标靶，特别是用于防止高磷血症和相关的心血管并发症。最近，已经将LXRs鉴别为骨质酥松症及相关疾病治疗中的标靶(Kleyer等人,2012,J.Bone Miner.Res.,27(12):2442-51)。
阿尔茨海默病是痴呆症的最常见形式，其特征为在大脑中淀粉样β(Aβ)多肽的积累和沉淀，导致受感染个体的大脑中突触功能扰乱和神经元缺失。大脑中的神经元通过裂解淀粉样前体蛋白(APP)产生Aβ多肽，Aβ多肽通常通过流出至外周循环并被大脑中的蛋白酶降解而清除。
载脂蛋白E(apoE)与年龄相关的阿尔茨海默病风险有关并在Aβ体内平衡重起重要作用。LXR增加apoE的表达并增加apoE的脂化。通过脂化apoE提高了细胞内和细胞外的Aβ降解。LXR激动剂治疗促进了Aβ的蛋白质降解、减少斑块病理学、提高在APP表达的转基因小鼠中的记忆(Jiang等人，2008年，Neuron,58:681-693)。
在皮肤中，角质细胞是表皮的重要组成。外层角质层是对水和电解质转运的渗透屏障的主要原因。表皮中的角质细经历导致角质细胞角质化(“砖”)和在角质层中形成细胞外脂质-强化层状膜(“灰浆”)的分化。LXRα和LXRβ均在角质细胞中表达，LXR表达和激活促进表皮屏障作用。LXR的激活涉及角质细胞分化、层状膜的形成和表皮屏障作用的整体提高。因此，期望LXR激活引起增加的角质细胞分化、增加的脂质分泌(通过ABCA1、ABCA12)、和增加的层状体形成，导致健康表皮(光滑皮肤)。
LXR激动剂的潜在治疗效用已经导致开发了针对两种受体亚型的具有有效激动的多个高亲和LXR配体。LXR激动剂的治疗效用受它们诱导包括甾醇反应元件结合蛋白-1c(SREBP1c)和脂肪酸合成酶的脂肪基因的约束。临床前研究已经证明LXR的合成调节剂减少了动脉粥样硬化的鼠科模型中的病变进展，并具有有限的肝脏脂肪生成。对新的LXR化学型有一个明确的需求，即保持 当前LXR激动剂的抗-动脉粥样硬化效力但不具有脂肪生成活性。显示具有对RCT有积极作用而对脂肪生成基因成中性或抑制的药理学性质的化合物将是在患有动脉粥样硬化性血脂障碍的患者中有价值的治疗剂。
本发明提供作为肝X受体激动剂并作为治疗剂有用的化合物，所述治疗剂用于促进胆固醇逆转运和抑制肝脏的脂肪生成，并用于防止、改善或治疗患者中的包括动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、皮炎及血脂障碍的疾病或失调。
发明内容
公开了作为治疗剂用于促进胆固醇逆转运和抑制肝脏的脂肪生成并用于防止、改善或治疗患者中的包括动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、皮炎及血脂障碍的疾病或失调有效的LXR调节剂。所公开的LXR调节剂对LXRβ亚型的选择性超过LXRα亚型(参见实施例6，同分异构体1；实施例7，同分异构体1；和实施例13，同分异构体1)
本发明的一个实施方案是由结构式I表示的化合物：
或为其药学上可接受的盐。
X是N或CRc。
R1是烷基或-NRaRb。
R2是H；卤素；-CN；-NRC(O)R；-C(O)OR；-C(O)NRaRb；任选地用选自烷基、-CN、-NRC(O)R、-C(O)OR、-C(O)NRaRb和卤素的一个或更多个基团取代的单环杂芳基；任选地用选自烷基、卤素、-CN和＝O的一个或更多个基团取代的单环非芳香族杂环；或任选地用选自卤素、羟基、烷氧基、-NRaRb、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-NRC(O)N(R)2、-C(O)OR、巯基、烷 基巯基、硝基、-CN、＝O、-OC(O)H、-OC(O)(烷基)、-OC(O)O(烷基)、-OC(O)N(R)2和-C(O)NRaRb的一个或更多个基团取代的烷基。
R3是烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧烷基、环烷基、单环非芳香族杂环、单环杂芳基或苯基，其中由R3表示的苯基、单环非芳香族杂环和单环的杂芳基团任选地是用选自烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、硝基和-CN的一个或更多个基团取代。
R4和R5独立地为卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)O(烷基)、-C(O)O(卤代烷基)、-OC(O)R、-C(O)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-S(O)R、-SO2R、-SO2N(R)2、-NRS(O)R、-NRSO2R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2N(R)2、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷氧基、环烷基、单环非芳香族杂环、单环杂芳基或烷基，其中由R4或R5表示的烷基、单环非芳香族杂环和单环杂芳基基团任选地用选自-CN、-OR、-SR、-N(R)2、＝O、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)O(卤代烷基)、-OC(O)R、-OC(O)O(烷基)、-C(O)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-S(O)R、-SO2R、-SO2N(R)2、-NRS(O)R、-NRSO2R、-NRC(O)N(R)2和-NRSO2N(R)2的一个或更多个基团取代。
R6是H、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)O(烷基)、-C(O)O(卤代烷基)、-OC(O)R、-C(O)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-S(O)R、-SO2R、-SO2N(R)2、-NRS(O)R、-NRSO2R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2N(R)2、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷氧基、环烷基、或烷基，其中由R6表示的所述烷基基团用选自-CN、-OR、-SR、-N(R)2、＝O、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)O(卤代烷基)、-OC(O)R、-OC(O)O(烷基)、-C(O)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-S(O)R、-SO2R、-SO2N(R)2、-NRS(O)R、-NRSO2R、-NRC(O)N(R)2和-NRSO2N(R)2的一个或更多个基团取代；或者R5和R6连同它们所键合的碳原子一起形成一个单环非芳香族杂环，其任选地用选自烷基、卤素、羟烷基、烷氧烷基、卤代烷基和＝O的一个或更多个基团取代。
各R独立地是H或烷基。
Ra和Rb独立地是H、烷基，或Ra和Rb可以用它们所连接至的氮原子连在 一起以形成单环非芳香族杂环。
Rc是H、烷基、或卤素。
本发明的另一方面是包含本发明的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。
本发明的另一方面还提供一种治疗患有通过上调LXR活性可治疗的疾病或失调的对象的方法。该方法包括施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐至有其需要的对象。
本发明中还提供本发明化合物用于制造用于治疗患有通过上调有其需要的对象中LXR活性而可治疗的疾病或失调的对象的药剂的用途。
本文中还公开了用于治疗通过上调有其需要的对象中LXR活性而可治疗的疾病或失调的本发明的化合物。
本发明的另一个实施方案是在制备LXR调节剂中使用的中间体化合物，其由结构式Ia表示：
或其盐。
X是N或CRc。
R10是烷基或-NRaRb。
R20是H；卤素；-CN；-NRC(O)R；-C(O)OR；-C(O)NRaRb；任选地用选自烷基、-CN、-NRC(O)R、-C(O)OR、-C(O)NRaRb和卤素的一个或更多个基团取代的单环杂芳基；任选地用选自烷基、卤素、-CN和＝O一个或更多个基团取代的单环非芳香族杂环；或任选地用选自卤素、羟基、烷氧基、-NRaRb、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-NRC(O)N(R)2、-C(O)OR、巯基、烷基巯基、 硝基、-CN、＝O、-OC(O)H、-OC(O)(烷基)、-OC(O)O(烷基)、-OC(O)N(R)2、-C(O)NRaRb、和-O(保护基团)的一个或更多个基团取代的烷基。
R30是烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧烷基、环烷基或苯基，其中由R30表示的苯基基团任选地用选自烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、硝基和-CN的一个或更多个基团取代。
各R独立地是H或烷基。
Ra和Rb独立地是H、烷基，或Ra和Rb可以连同它们所连接的氮原子一起形成单环的非芳香族杂环。
Rc是H、烷基、或卤素。
具体实施方式
A.化合物
本文中所提供的本发明的化合物(或在其制备中使用的中间体)包括中性形式和其药学上可接受的盐二者。
在一个实施方案中，该化合物由结构式II、III、IV、V、VI或VII或其药学上可接受的盐表示，其中变量的值如以上对式I的限定。
在式I至式VII的任一化合物的第一替代实施方案中，变量限定如下：
R3是烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基烷基、环烷基、或苯基，其中由R3表示的苯基基团任选地用选自烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、硝基和-CN的一个或更多个基团取代；
R4和R5独立地是卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、OC(O)O(烷基)、-C(O)O(卤代烷基)、-OC(O)R、-C(O)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-S(O)R、-SO2R、-SO2N(R)2、-NRS(O)R、-NRSO2R、-NRC(O)N(R)2、-NRSO2N(R)2、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷氧基、环烷基或烷基，其中由R4或R5表示的所述烷基任选地用选自-CN、-OR、-SR、-N(R)2、＝O、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)O(卤代烷基)、-OC(O)R、-OC(O)O(烷基)、-C(O)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-S(O)R、 -SO2R、-SO2N(R)2、-NRS(O)R、-NRSO2R、-NRC(O)N(R)2和-NRSO2N(R)2的一个或更多个基团取代；
R6是H、卤素、-CN、-OR、-SR、-N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、OC(O)O(烷基)、-C(O)O(卤代烷基)、-OC(O)R、-C(O)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-S(O)R、-SO2R、-SO2N(R)2、-NRS(O)R、-NRSO2R、NRC(O)N(R)2、-NRSO2N(R)2、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷氧基、环烷基或烷基，其中由R6表示的所述烷基基团任选地用选自-CN、-OR、-SR、-N(R)2、＝O、-C(O)R、-C(O)OR、-C(O)O(卤代烷基)、-OC(O)R、-OC(O)O(烷基)、-C(O)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-S(O)R、-SO2R、-SO2N(R)2、-NRS(O)R、-NRSO2R、-NRC(O)N(R)2和-NRSO2N(R)2的一个或更多个基团取代。
在式I至式VII的任一化合物的第二替代实施方案中，变量限定如下。
R1是甲基或-NH2。
R2是H或甲基，其中用R2表示的甲基基团任选地用选自卤代羟基、烷氧基、-NRaRb、-NRC(O)R、-NRC(O)O(烷基)、-NRC(O)N(R)2、-C(O)OR、巯基、烷基巯基、硝基、-CN、＝O、-OC(O)H、-OC(O)(烷基)、-OC(O)O(烷基)、-C(O)NRaRb和-OC(O)N(R)2的一个或更多个基团取代。优选地，R2是H或-CH2OH。
R3是甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、仲丁基、异丁基、-CH2CF3、-CH(CH2F)2、-CH(CHF2)2、-CH(CF3)2、-CF(CH3)2、-CF3、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、-C(OH)(CH3)2、-CH(OH)(CH3)、或苯基，其中由R3表示的苯基基团任选地用选自烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、硝基和-CN的一个或更多个基团取代。
在存在的情况下，Rc是H。
剩余变量的值如对式I或第一替代实施方案中所限定的。
在式I至式VII的任一化合物的第三替代实施方案中，R1是甲基；R2是-CH2OH；R3是异丙基。剩余变量的值如对式I或对第一或第二替代实施方案所限定的。
在式I至式VII的任一化合物的第四替代实施方案中，R4和R5独立地为卤 素、羟基、烷基、环烷基、环烷氧基、烷氧基、卤代烷氧基、卤代烷基、-N(R)2、-C(O)OH、-C(O)O(烷基)、-C(O)O(卤代烷基)、-C(O)(烷基)、-C(O)N(R)2、-NRC(O)R、-SO2N(R)2、-OC(O)N(R)2、-CN、羟烷基或二羟烷基。剩余变量的值如对式I或对第一或第二或第三替代实施方案所限定的。
在式I至式VII的任一化合物的第五替代实施方案中，R4是烷基、卤代烷基、环烷基、烷氧基或卤代烷氧基。剩余变量的值如对式I或对第一或第二或第三或第四替代实施方案所限定的。
在式I至式VII的任一化合物的第六替代实施方案中，R4和R5独立地为甲基、乙基、羟基、-CF3、异丙基、环丙基、-CH2OH、-CH(OH)(CH2)(OH)、-C(OH)(CH3)2、-CH(OH)(CH3)、-CH(OH)(CH2)(CH3)、-CH(OH)(CH2)2(CH3)、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2、-C(O)OH、-C(O)NH(CH3)、-C(O)CH3、-C(O)CH2CH3、-C(O)O(CH2)(CH3)、-C(O)O(叔丁基)、-C(O)O(C)(CH3)2(CF3)、-NHC(O)CH3、-OCHF2、-OCF3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2或-OCH3。优选地，R4如刚才所描述的，R5是-C(OH)(CH3)2。剩余变量的值如对式I或对第一、第二、第三、第四或第五替代实施方案所限定的。
在式I至式VII的任一化合物的第七替代实施方案中，R4是甲基、卤代甲基、环丙基、-OCHF2或-OCH3。优选地，R4是CF3。剩余变量的值如对式I或对第一、第二、第三、第四、第五或第六替代实施方案所限定的。
本发明的另一实施方案是由式I、II、III、IV、V、VI或VII代表的化合物或其药学上可接受的盐，其中变量如对式I或在第一、第二、第三、第四、第五、第六、或第七替代实施方案中所限定的，条件是该化合物包含由-C(O)OR代表的至少一个基团。
本发明的另一实施方案是由式I、II、III、IV、V、VI或VII代表的化合物或其药学上可接受的盐，其中变量如对式(I)或在第一、第二、第三、第四、第五、第六或第七替代实施方案中所限定的，条件是该化合物不包含由-C(O)OR代表的基团。
本发明的化合物(或在其制备过程中使用的中间体)含有至少一个手性中心，因此以对应异构体存在。当在没有指示立体化学的情况下描述或命名本发明的化合物时，应理解为涵盖对应异构体纯的形式和对应异构体的混合物，包 括外消旋混合物。
当化合物被指定为表示单一对映异构体的名称或结构时，除非另有指示，化合物是至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、99.5％、或99.9％光学纯(也被称为“对映异构体纯”)。光学纯度是所命名的或描述的对映异构体的混合物重量除以两种对映异构体的混合物重量。
当化合物用表示手性中心的特定立体化学的名称或结构来指定时，除非另有指示，化合物是至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、99.5％、或99.9％立体异构纯。立体异构纯度是所命名的或描述的立体异构体的混合物重量除以所有立体异构体的混合物重量。
在第八替代实施方案中，本发明的化合物用表1中的结构式或其药学上可接受的盐描述。在第八替代实施方案中，本发明的化合物选自化合物E6a、E7a、13a、E18和E27a中的任意一个或其药学上可接受的盐。
表1：
在一个实施方案中，在制备LXR调节剂中使用的中间体化合物由结构式VIII、IX、X或其盐表示，其中变量的值如以上对式Ia的限定。
在式VIII至X的中间体化合物的第一替代实施方案中，R10是-CH3。剩余变量的值如对式Ia所限定的。
在式VIII至X的中间体化合物的第二替代实施方案中，R20是-CH2OH、-CH2O(保护基团)、-COOH、或-C(O)O(烷基)。剩余变量的值如对式Ia或第一替代实施方案中对式VIII至X的限定。
在式VIII至X的中间体化合物的第三替代实施方案中，R30是异丙基。剩余变量的值如对式Ia或第一或第二替代实施方案中对式VIII至X的限定。
在式VIII至X的中间体化合物的第四替代实施方案中，R20是CH2O(TBDPS)或-C(O)OCH3。剩余变量的值如对式Ia或对第一或第三替代实施方案的式VIII至X的任一化合物的限定。
在式VIII至X的中间体化合物的第五替代实施方案中，中间体化合物选自：
和或其盐。
在式VIII至X的中间体化合物的第六替代实施方案中，中间体化合物为或其盐。
B.定义
除非另有说明，本文中所使用的以下术语定义如下：
“对象”、“患者”、“哺乳动物”在本文中可交换地使用。在一个实施方案中，对象是非人类动物，如非人类的灵长目动物(例如，猴子、黑猩猩)、家畜(例如，马、牛、猪、鸡或羊)、实验动物(例如，大鼠或小鼠)、或宠物(例如，狗、猫、豚鼠或兔子)。在一个优选的实施方案中，对象为人类。
“本发明的化合物”指的是由结构式I、II、III、IV、V、VI、VII表示的化合物；表1中所描述的化合物；作为实施例的最终化合物在本文实施例中所命名或描述的化合物；或其药学上可接受的盐。“本发明的化合物”还包括如本文中所描述的化合物的中性形式。
“药学上可接受的”指的是在合理的医学判断范围内，适合用在与对象如人类和其他哺乳动物的组织接触，不具有异常毒性、刺激性、过敏反应等，并与合理的收益/风险比相称的组分。
本发明中所包括的是本文所公开化合物的药学上可接受的盐。该公开的化合物具有碱性胺基基团，因此可以与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。本发明化合物的合适的药学上可接受的酸加成盐包括无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸)的盐和有机酸(例如，乙酸、苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸、乙烷磺酸、反丁二烯酸、葡萄糖酸、乙醇酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、马来酸、苹果酸、甲基磺酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、和酒石酸)的盐。具有酸性基团的本发明的化合物可以与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的碱性盐包括铵盐、碱金属盐(例如钠盐和钾盐)和碱土金属盐(例如镁盐和钙盐)。合适的盐的列表在Remington's Pharmaceutical Sciences(第18版，Mack出版公司，宾夕法尼亚州伊斯顿，1990年，第1445页)中找到，其公开内容通过引用并入本文。
“肝X受体或LXR”包括肝X受体的α和β亚型二者。在一个实施方案中，所公开的化合物选择性地结合并上调LXRα亚型的活性超过LXRβ亚型。“调节”受体意思是在所关注分子的活性中存在变化或改变，例如，肝X受体的生物学活性。调节可以是上调(增加)或下调(减少)特定活性的量或所关注分子的功能。示例的分子活性和功能包括但不限于：结合特性、酶活性、细胞受体活化、转录活性、和信号转导。在一个实施方案中，本发明的化合物是LXR激动剂，所述LXR激动剂例如上调或下调作为LXR的转录标靶的基因(即，“LXR靶基因”)。
“治疗”包括治疗和预防性治疗二者并意味着改善、减少、抑制、减弱、降低、阻止或稳定疾病的发展或进展(例如，本文所描述的疾病或失调)，减轻疾病严重程度或改善与疾病相关的症状。
“疾病”或“失调”意思是受LXR活性调节的或受LXR活性影响或其中涉及LXR活性的任何状况。疾病或失调包括与以下过程相关的那些或由以下过程的并发症引起的症状：改变的胆固醇转运、胆固醇逆转运、脂肪酸代谢、胆固醇吸收、胆固醇再吸收、胆固醇分泌、胆固醇排泄、或胆固醇代谢。
“有效量”是足够以治疗(治疗地或预防地)标靶失调的化合物的量，或是在适当的给药方案中当化合物被施用至的对象时获得有益的临床结果的化合物的量。如本领域技术人员所公认的，根据被治疗的疾病，疾病的严重程度，给药途径，患者的性别、年龄和总的健康状况，赋形剂的使用、与其他治疗处理如使用其他药剂和治疗医生或其他医疗提供者的判断联合使用的可能性，有效剂量也会不同。例如，有效量是足够以降低或改善所治疗失调的严重程度、持续时间或进展，防止所治疗失调发展、引起所治疗失调复原、或增强或提高另一个治疗的预防或治疗作用。例如，当本发明的化合物被施用至患有癌症的对象，“有益的临床结果”包括肿瘤体积减小、转移减少、与癌症相关的症状的严重程度降低和/或对象的寿命与没有治疗相比增加。当本发明的化合物被施用至患有失调例如动脉粥样硬化的对象时，“有益的临床结果”包括与失调相关的症状的严重程度的降低或数量的减少、降低胆固醇、或与没有治疗相比增加对象的寿命。目前用于治疗失调的药剂的推荐剂量可以从本领域的多种参考文献中获得，所述本领域的多种参考文献包括但不限于：Hardman等人,编辑，1996年，Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis Of Basis Of Therapeutics9thEd,Mc-Graw-Hill,New York；Physician’s Desk Reference(PDR)57thEd.,2003,Medical Economics Co.,Inc.,Montvale,NJ，其各自通过引用其整体并入本文。在某些实施方案中，本发明化合物的有效量是在每次治疗为0.5mg至2000mg、或0.5mg至1000mg、或0.5mg至500mg、或0.5mg至100mg、或100mg至1000mg、或20mg至2000mg的范围内。通常，治疗每天施用一至三次。
“卤代”或“卤素”意思是氯代、溴代、氟代、或碘代。在一个实施方案中，卤代是氟代。
“烷基”意思是在分子链中具有1至15各碳原子的直链或带支链的基团。在 一个实施方案中，烷基基团在分子链中具有1至12个碳原子。在另一个实施方案中，烷基基团具有1至6个碳原子。示例的烷基基团包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、3-戊烷基、庚基、辛基、壬基、癸基、十二烷基。
“烷氧基”是通过氧键(-O(烷基))连接到另一部分的烷基基团。非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基。
“卤代烷基”或“卤代的烷基”意思是其中一个或更多个(包括所有)的氢自由基被卤代基团取代的烷基基团，其中各卤代基团独立地选自：-F、-Cl、-Br和-I。例如，术语“卤代甲基”或“卤代的甲基”意思是其中一至三个氢自由基已经被卤代基团取代的甲基。代表性的卤代烷基基团包括：氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、溴代甲基、1,2-二氯乙基、4-碘代丁基、2-氟代戊基等。其他实例包括例如但不限于-CH2CF3、-CH(CH2F)2、-CH(CHF2)2、-CH(CF3)2、-CF(CH3)2、-CF3的基团。
“卤代烷氧基”是通过例如但不限于-OCHCF2或-OCF3的氧键连接至另一部分的卤代烷基基团。
“烷氧烷基”是通过烷基键连接到另一部分的烷氧基基团。“羟烷基”或“二羟烷基”分别是通过烷基键连接至另一部分的一个或两个羟基基团。代表性的“羟烷基”或“二羟烷基”包括-CH2OH、-CH(OH)(CH2)(OH)、-C(OH)(CH3)2、-CH(OH)(CH3)、-CH(OH)(CH2)(CH3)、-CH(OH)(CH2)2(CH3)、-C(CH3)2(OH)等。
“环烷基”意思是具有3至10个碳原子的非芳香族单环的环状系统。在一个实施方案中，环烷基基团具有3至6个碳原子。示例的环烷基环包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
“环烷氧基”意思是通过氧键(-O(环烷基))连接到另一部分的环烷基基团。
“单环非芳香族杂环”意思是单一的饱和杂环，其在环中通常地具有3至10个成员和更通常地具有3至7个成员，其中环中至少一个原子是杂原子，例如氮、氧、硫，硫包括亚砜和砜。3至4元单环非芳香族杂环可以含有多达2个杂原子；5至6元单环非芳香族杂环可以含有多达3个杂原子而7至10元单环非芳香族杂环可以含有多达4个杂原子。单环非芳香族杂环可以通过单环非芳香族杂环的任意杂原子或碳原子连接至另一个基团。代表性地单环非芳香族杂 环包括吗啉基、硫代吗啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、吡唑啶基、唑烷基、异噻唑烷基、乙内酰脲基、戊内酸胺基、环氧乙烷基、环氧丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、四氢噻喃基等等。在一个实施方案中，单环非芳香族杂环是具有4、5、6、或7个成员的杂环。
“单环杂芳基”包括碳原子环成员和一个或更多个杂原子环成员。各个杂原子独立地选自氮、氧、硫，硫包括亚砜和砜。单环杂芳环与另一个环的连接点可以或在碳原子或在杂芳环的杂原子。在一个实施方案中，单环杂芳环选自5至8元的单环杂芳环。代表性的单环杂芳基包括吡啶基、1-氧代-吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基、咪唑基、噻唑基、异唑基、吡唑基、异噻唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、三唑基、噻二唑基、四唑基。
保护基团是这样一种基团：其键合至化合物中的活性功能基团以使活性功能基团转换成另一个非活性基团，以允许例如在分子的另一部分反应而没有来自该活性功能基团的干扰。在分子其他部分的反应已经完成后，将保护基团除去以再生成最初的活性功能基团。用于羟基基团的保护基团和用于保护和去保护羟基基团的反应和条件是本领域中众所周知的，并公开于例如Greene和Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis”，John Wiley & Sons(2007)，第二章以及其中引用的参考文献。例如，保护基团可以作为酯来保护羟基。这种保护基团包括但不限于：甲基、甲氧甲基、甲硫甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧甲基、苯甲氧基甲基、对-甲氧基苯甲氧基甲基、[3,4-二甲氧苯甲基)氧代]甲基、对-硝基苯甲氧基甲基、邻-硝基苯甲氧甲基、[(R)-1-(2-硝基苯基)乙氧基]甲基、(4-甲氧苯氧基)甲基、愈创木酚甲基、[(对-苯基苯)氧基]甲基、叔丁氧甲基、4-戊烯基氧甲基、硅氧基甲基、2-甲氧基乙氧甲基、2-氰基乙氧甲基、双(2-氯乙氧基)甲基、2,2,2-三氯乙氧甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基、薄荷氧甲基、氧-双(2-乙酰氧乙氧基)甲基、四氢吡喃、氟代四氢吡喃、3-溴代四氢吡喃、四氢硫代吡喃、1-甲氧环己基、4-甲氧四氢吡喃、4-甲氧四氢硫代吡喃、4-甲氧四氢硫代吡喃、S,S-二氧化物、1-[(2-氯代-4-甲基)苯基]-4-甲氧哌啶-4-基、1-(2-氟代苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基、1-(4-氯代苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基、1,4-二烷-2-基、四氢呋喃、四氢硫代呋喃、2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢-7,8,8-三甲基-4,7-甲醇苯并呋喃-2-基、1-乙氧乙基、1-(2-氯代乙氧基)乙基、2-羟乙基、2- 溴代甲基、1-[2-(三甲硅烷基)乙氧基]乙基、1-甲基-1-甲氧乙基、1-甲基-1-苯甲氧乙基、1-甲基-1-苯甲氧基-2-氟乙基、1-甲基-1-苯氧乙基、2,2,2-三氯乙基、1,1,-二甲氧苯基-2,2,2,-三氯乙基、1,1,1,3,3,3-六氟代-2-苯基异丙基、1-(2-氰基乙氧基)乙基、2-三甲硅烷基乙基、2-(苯甲硫代)乙基、2-(苯硒酰)乙基、叔丁基、环己基、1-甲基-1’-环丙基甲基、烯丙基、异戊二烯基、桂酰基、2-苯烯丙基、丙炔基、对-氯苯基、对-甲氧苯基、对-硝基苯基、2,4-二硝基苯基、2,3,5,6-四氟-4-(三氟甲基)苯基、苯甲基、对-甲氧苯甲基、3,4-二甲氧苯甲基、2,6-二甲氧苯甲基、邻-硝基苯甲基、对-硝基苯甲基、烯丙基硝基苯甲基、烯丙基硝基胡椒基、卤代苯甲基、2,6-二氯苯甲基、2,4-二氯苯甲基、2,6-二氟苯甲基、对-氰基苯甲基、氟代苯甲基、4-氟代烷氧苯甲基、三甲基硅烷二甲苯基、对-苯基苯甲基、2-苯基-2-丙基(异丙苯基)、对-酰氨苯基、对-叠氮苯基、4-叠氮-3-氯代苯甲基、2-三氟甲基苯甲基和4-三氟甲基苯甲基、对-(甲基亚磺酰)苯甲基、对-硅杂环丁基苯甲基(p-siletanylbenzyl)、4-乙酰氧基苯甲基、4-(2-三甲基甲硅烷基)乙氧基甲氧基苯甲基、2-萘基甲基、2-甲基吡啶和4-甲基吡啶、3-甲基-2-甲基吡啶N-环氧、2-喹啉基甲基、6-甲氧基-2-(4-甲基苯基)-4-喹啉甲基、1-芘基甲基、二苯基甲基、4-甲氧基二苯基甲基、4-苯基二苯基甲基、p,p’-二硝基二苯甲基、5-二苯并环庚基、三苯基甲基、三(4-叔丁基苯基)甲基、α-萘基二苯基甲基、对-甲氧基苯基二苯基甲基、二(对-甲氧基苯基)苯基甲基、三(对-甲氧基苯基)甲基、4-(4’-溴苯酰氧基)苯基二苯基甲基、4,4’,4”-三(4,5-二氯苯二酰亚氨基苯基)甲基、4,4’,4”-三(氧代戊酰氧基苯基)甲基、4,4’,4”三(苯甲酰氧基苯基)甲基、4,4’-二甲氧基-3”-[N-(咪唑基甲基)三苯甲基、4,4’-二甲氧基-3”-[N-(咪唑基乙基)氨基甲酰基]三苯甲基、二(4-甲氧基苯基)-1’-芘基甲基、4-(17-四苯并[a，c，g，i]芴基甲基)-4,4”-二甲氧基三苯甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)呫吨基、9-苯硫基呫吨基、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基、1,3-苯并二四氢噻吩-2-基、4,5-二(乙氧基羰基-[1,3]-二烷-2-基、苯并异噻唑基S,S-二环氧、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、二甲基异丙基甲硅烷基、二乙基异丙基甲硅烷基、二甲基1,1,2-三甲基丙基(thexyl)甲硅烷基、2-降莰基二甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)、三苯甲基甲硅烷基、三-对-二甲苯基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基、二-叔丁基甲基甲硅烷基、二(叔丁基)-1-芘基甲氧基甲硅烷基、三(三甲基甲硅烷基)甲硅烷基、三(三甲基甲硅烷基)甲硅烷基(sisyl)、(2-羟基苯乙烯基)二甲基甲硅烷基、 (2-羟基苯乙烯基)二异丙基甲硅烷基、叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基、叔丁氧基二苯基甲硅烷基和1,1,3,3-四异丙基-3-[2-(三苯基甲氧基)乙氧基]二硅氧烷-1-基、氟代甲硅烷基。
替代地，适合的保护基作为酯来保护酚基，例如，甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氯乙酰胺化物、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、对-氯苯氧乙酸酯、苯基乙酸酯、对-苯基乙酸酯、二苯基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、二氟链型丙酰基(Bfp-OR)、4-戊烯酸酯、4-氧代戊酸酯(乙酰丙酸酯)、4,4-(乙烯二硫代)戊酸酯、5-[3-二(4-甲氧基苯基)羟基甲基苯氧基]乙酰丙酸酯、新戊酸酯(pivaloate)、金刚烷酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、对-苯基苯甲酸酯、2，4,6-三甲基苯甲酸酯(莱酸酯(mesitoate))、4-溴苯甲酸酯、2,5-二氟苯甲酸酯、对-硝基苯甲酸酯、吡啶甲酸酯、烟酸酯、2-(叠氮基甲基)苯甲酸酯、4-叠氮基丁酸酯、(2-叠氮基甲基)苯基乙酸酯、2-{[(三苯甲基硫)氧基]甲基}苯甲酸酯、2-{[(4-甲氧基三苯甲基硫)氧基]甲基}苯甲酸酯、2-{[甲基(三苯甲基硫)氨基]甲基}苯甲酸酯、2-{{[4-甲氧基三苯甲基)硫代]甲基氨基}-甲基}苯甲酸酯、2-(烯丙基氧基)苯基乙酸酯、2-(异戊烯氧基甲基)苯甲酸酯、6-(乙酰丙酰氧基甲基)-3-甲氧基-2-和4-硝基苯甲酸酯、4-苄氧基丁酸酯、4-三烷基甲硅烷氧基丁酸酯、4-乙酰氧基-2,2-二甲基丁酸酯、2,2-二甲基-4-戊酸酯、2-碘代苯甲酸酯、4-硝基-4-甲基戊酸酯、邻-(二溴甲基)苯甲酸酯、2-甲酰基苯磺酸酯、4-(甲硫基甲氧基)丁酸酯、2-甲硫基甲氧基甲基)苯甲酸酯、2-(氯乙酰氧基甲基)苯甲酸酯、2-[(2-氯乙酰氧基)乙基]苯甲酸酯、2-[2-(苄氧基)乙基]苯甲酸酯、2-[2-(4-甲氧基苄氧基)乙基]苯甲酸酯、2,6-二氯-4-甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-二(1，1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、异丁酸酯、单琥珀酸酯(monosuccinoate)、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯、顺芷酸酯(tigloate)、邻-(甲氧基羰基)苯甲酸酯、对-苯甲酸酯、α-萘甲酸酯、硝酸酯、烷基N,N,N’,N’-四甲基磷二酰胺化物、2-氯苯甲酸酯、如磺酸酯、次磺酸酯(sulfenate)和亚磺酸酯类，例如硫酸酯、烯丙基磺酸酯、乙磺酸酯(甲磺酸酯)、苯甲基磺酸酯、甲苯磺酸酯、2-[(4-硝基苯基)乙基]磺酸酯、2-三氟甲基磺酸酯、4-单甲氧基三苯甲基次磺酸酯、烷基2,4-二硝基苯基次磺酸酯、2,2,5,5-四甲基吡咯烷-3-酮-1-亚磺酸酯、硼酸酯、二甲基硫膦基，如碳酸酯类，例如烷基甲基碳酸酯、甲氧基甲基碳酸酯、9-芴基甲基碳酸酯、乙基碳酸酯、溴乙基碳酸 酯、2-(甲硫基甲氧基)乙基碳酸酯、2,2,2-三氯乙基碳酸酯、1,1-二甲基-2,2,2-三氯乙基碳酸酯、2-(三甲基甲硅烷基)乙基碳酸酯、2-[二甲基(2-萘基甲基)甲硅烷基]乙基碳酸酯、2-(苯基磺酰基)乙基碳酸酯、2-(三苯基磷基)乙基碳酸酯、顺-[4-[[(-甲氧基三苯甲基)次磺酰基]氧基]四氢呋喃-3-基]氧基碳酸酯、异丁基碳酸酯、叔丁基碳酸酯、乙烯基碳酸酯、烯丙基碳酸酯、肉桂基碳酸酯、炔丙基碳酸酯、对-氯苯基碳酸酯、对-硝基苯基碳酸酯、4-乙氧基-1-萘基碳酸酯、6-溴-7-羟基香豆素-4-基甲基碳酸酯、苯甲基碳酸酯、邻-硝基苯甲基碳酸酯、对-硝基苯甲基碳酸酯、对-甲氧基苯甲基碳酸酯、3,4-二甲氧基苯甲基碳酸酯、蒽醌-2-基甲基碳酸酯、2-丹磺酰基乙基碳酸酯、2-(4-硝基苯基)乙基、2-(2,4-硝基苯基)乙基、2-(2-硝基苯基)丙基、2-(3,4-亚甲二氧基-6-硝基苯基)丙基、2-氰基-1-苯基乙基碳酸酯、2-(2-吡啶基)氨基-1-苯基乙基碳酸酯、2-[N-甲基-N-(2-吡啶基)]氨基-1-苯基乙基碳酸酯、苯甲酰甲基碳酸酯、3’,5’-二甲氧基苯偶姻碳酸酯、甲基二硫代碳酸酯、S-苯甲基硫代碳酸酯和氨基甲酸酯类，例如二甲基硫代氨基甲酸酯、N-苯基氨基甲酸酯和N-甲基-N-(邻-硝基苯基)氨基甲酸酯。
C.药物组合物、剂型和剂量
在一个实施方案中，本文中提供的是包含本发明的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。
在本发明的药物组合物中，本发明的化合物以有效量存在。对人和动物的剂量的相互关系(基于每平方体表面的毫克数)在Freirieich等人(Cancer Chemother.Rep,1966,50:219)中描述。体表面积可以从患者的身高和体重大致地确定。参见，例如，Scientific Tables,Geigy Pharmaceuticals,Ardsley,N.Y.,1970,537。
本文中的LXR调节剂(例如，本发明的化合物)可以以适合所选的施用路径的多种形式被配制为药物组合物并施用至对象，例如人类。通常地，施用这种药物组合物的路径非限制性地包括：口服施用、外用、口腔施用、经皮施用、吸入施用、非消化道施用、舌下施用、直肠施用、阴道施用、鼻内施用。本文中所使用的术语非消化道包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射、鞘内注射、胸腔注射或灌注技术。配制药物组合物的方法是本领域中众所周知的，例如，如“Remington:The Science and Practice of Pharmacy”(University of the Sciences in Philadelphia,ed.,第21版,2005,Lippincott,Williams & Wilkins,Philadelphia,PA) 中所公开的。各个LXR调节剂可以单独使用或作为本发明的药物组合物的一部分结合使用。
本发明的药物组合物可以通过将本发明的化合物与适当的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂结合来制备，并可以被配制成固体、半固体、液体或气体的剂型，例如片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、软膏剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球剂、和气雾剂。因此，本化合物可以全身给药，例如，与药学上可接受的赋形剂如惰性稀释剂或可吸收食用的载体结合的口腔给药。可将它们封装在硬壳的或软壳的明胶胶囊中，或压制成片剂或直接与患者饮食的食物一起摄入。对于口服治疗施用，本活性化合物可以与一种或更多种赋形剂结合，并可以以可吸收片剂、口含片剂、糖锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、圆片剂等形式使用。
合适的片剂可以通过例如将本发明的一种或更多种化合物与已知赋形剂如惰性稀释剂、载体、崩解剂、佐剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂混合来获得。片剂也可以由几个层构成。
可以将本发明的化合物合适地配制成用于施用至对象的药物组合物。本发明的药物组合物任选地包括一种或更多种药学上可接受的载体和/或稀释剂，例如乳糖、淀粉、纤维素和葡萄糖。也可以包括其他赋形剂，例如调味剂、甜味剂；和防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯基酸丁酯。在药物赋形剂手册(Handbook of Pharmaceutical Excipients，第5版，Pharmaceutical Press(2005))中可以找到合适赋形剂的更完整的列表。本领域技术人员应知道怎样制备适于各种施用路径类型的剂型。用于选择和制备合适的剂型的常规程序在，例如在Remington的Pharmaceutical Sciences(2003-第20版)和1999年出版的美国药典:The National Formulary(USP 24NF19)中描述。载体、稀释剂和/或赋形剂从与药物组合物的其他成分相兼容且对其接受者无害的意义上来说是“可接受的”。
通常地，对于口服治疗施用，本发明的化合物可以与赋形剂合并，并以可吸收片剂、口含片剂、糖锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、圆片剂、等形式使用。
通常地，对于非肠道施用，本发明的化合物的溶液可以在水中适当地混合 表面活性剂，如羟丙基纤维素来制备。在甘油、液态聚乙二醇、DMSO和其混合物中含或不含酒精、以及在油中也可以制备分散剂。在储存和使用的常规条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。
通常地，对于注射使用，适合于可注射使用的药物形式包括无菌的水溶液或分散体；包含芝麻油、花生油或水性丙二醇的制剂；以及用于临时制备无菌溶液或分散体的无菌粉末。
对于用于鼻腔施用，本发明的化合物可以配制成气雾剂、滴剂、凝胶剂和散剂。气雾剂剂型一般包含在生理学上可接受的水性或非水性溶剂中的活性物质的溶剂或良好悬浮剂，并通常在密封容器内以无菌形式的单剂量或多剂量存在，所述密封容器可以采取与雾化装置一起使用的药筒或替换物的形式。或者，密闭容器可以是单位调剂装置，如单剂量鼻吸入器或装有计量阀的气雾发生器，所述计量阀在使用后弃除。当剂型包含气雾发生器，其将包含推进剂，所述推进剂可以是经压缩的气体如压缩空气或有机推进剂如氟氯烃。气雾剂型还可以是泵雾化器形式。
对于口腔或舌下施用，本发明的化合物可以与载体如糖、阿拉伯胶、黄芪胶、或明胶和甘油配制成片剂、锭剂或糖果锭剂。
对于直肠施用，本发明的化合物可以以含有常规栓剂基质如可可豆脂的栓剂的形式。
本发明化合物的外用和/或局部施用可以通过多种方式实现，所述方式包括但不限于软膏剂、洗剂、糊剂、乳剂、凝胶剂、散剂、滴剂、喷雾剂、溶液剂、吸入剂、贴剂、栓剂、保留灌肠剂、可咀嚼或可吮吸的片剂或微丸和气雾剂。外用和/或局部施用也可以涉及利用经皮施用，例如经皮贴剂或离子渗透设备。对于外用和/或局部施用，本发明的化合物可以配制成软膏剂、乳剂、乳剂、药膏、散剂、浸渍垫、洗涤剂、溶液剂、凝胶剂、喷雾剂、泡沫剂、混悬剂、洗剂、粘贴剂、洗发剂或清洗基质。本发明的化合物也可以以脂质混悬剂或聚合物囊或纳米微球或微球或聚合物贴剂和水凝胶的形式施用以用于控释。
D.治疗方法和LXR调节剂的用途
本文中提供了一种治疗患有通过调节LXR可治疗的疾病或失调的对象的方法。在一个实施方案中，LXR是通过上调LXR活性调节的。该方法包括施 用有效量的本发明化合物。此外，本文中提供了本发明的化合物用于制造治疗患有通过上调有其需要的对象中LXR活性而可治疗的疾病或失调的对象的药剂的用途。
本文中提供的方法可用于利用LXR调节、特别是LXR激动可治疗的失调。
本发明的化合物可用于治疗或预防与以下过程相关的疾病或失调：改变的胆固醇转运、胆固醇逆转运、脂肪酸代谢、胆固醇吸收、胆固醇再吸收、胆固醇分泌、胆固醇排泄、或胆固醇代谢。代表性疾病或失调包括但不限于：血脂异常；癌症，特别是激素依赖的癌症，包括卵巢癌、乳腺癌和前列腺癌；痤疮样皮肤病；皮肤炎性疾病；免疫失调；以表皮屏障功能异常为特征的疾病；表皮或粘膜分化异常或过度增殖的疾病；心血管疾病；生殖系统失调；视神经和视网膜病理；疾病中发生的退行性神经病变；自身免疫病；对中枢或周围神经系统的创伤性损伤；神经退行性疾病；由于老化引起的退变过程；肾病或肾失调；和骨质酥松症及相关疾病。
在另一个实施方案中，疾病或失调是高血脂、高胆固醇血症、高脂蛋白血症、高甘油三酯血症、脂肪代谢障碍、肝脂肪变性、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝(NAFLD)、高血糖症、胰岛素抗性、糖尿病、血脂障碍、动脉粥样硬化、胆石病、寻常痤疮、皮炎(包括但不限于牛皮癣、接触性皮炎、过敏性皮炎和湿疹)、皮肤伤口、皮肤老化、光老化、皱纹、糖尿病、尼曼匹克病C型、帕金森病、阿尔茨海默病、炎症、黄瘤、肥胖症、代谢综合症、X综合症、卒中、外周闭塞性疾病、失忆症、糖尿病性神经病变、蛋白尿症、肾小球疾病(包括但不限于糖尿病性肾病、高血压性肾病、IGA肾病、局灶节段性肾小球硬化症)、高磷血症、高磷血症的心血管并发症、癌症、多发性硬化症、骨质酥松症。
在另一个实施方案中，疾病或失调是普通痤疮；黑头粉刺；多型粉刺；红斑痤疮；结节囊肿型痤疮；聚合性痤疮；老年性粉刺；继发性粉刺，包括但不限于日光性、药物性和职业性粉刺；鱼鳞癣；鱼鳞病样疾病；毛囊角化病；掌跖角化病；粘膜白斑病；粘膜白斑样疾病；皮肤或粘膜(口腔的)苔藓病；伴随或不伴随细胞增殖失调的具有炎症性免疫过敏成分的皮肤病学疾病或苦恼，包括但不限于皮肤牛皮癣、粘膜牛皮癣、指甲牛皮癣、牛皮癣性风湿病、皮肤的特异反应性包括湿疹、呼吸特异反应性和齿龈肥大；病毒性或非病毒性起源的 良性或恶性的真皮增殖或表皮增殖，包括但不限于寻常疣、扁平疣、疣状表皮发育不良、口腔的或菜花样乳头瘤病、和T淋巴瘤或皮肤T细胞淋巴瘤；可能由紫外光诱发的增殖，包括但不限于基底细胞上皮瘤和棘细胞上皮瘤；癌前皮肤病变，包括但不限于角化棘皮瘤；免疫皮炎，包括但不限于红斑狼疮；大疱性免疫病；胶原病，包括但不限于硬皮病；具有免疫学成分的皮肤病学或系统的疾病或苦恼；由于暴露于UV辐射的皮肤失调；皮肤的光诱导老化或自然老化；光化性色素沉着；角化病；与自然老化或日光性老化有关的病理学，包括但不限于干燥病；脂肪功能失调，包括但不限于痤疮的皮脂溢过度、简单皮脂溢和脂溢性皮炎；愈合障碍，包括但不限于妊娠纹；色素沉着异常，包括但不限于色素沉着过度、黄褐斑、色素减退和白癜风；和脱发，包括但不限于化疗相关的脱发和辐射相关的脱发。
在一个实施方案中，疾病或失调是高胆固醇血症、动脉粥样硬化或血脂障碍。在另一个实施方案中，疾病或失调是动脉粥样硬化或血脂障碍。在另一个实施方案中，疾病或失调是动脉粥样硬化、阿尔茨海默病或皮炎。
本发明还提供用于增加胆固醇逆转运和/或抑制动脉粥样硬化进展或促进动脉粥样硬化退化的方法。
本发明还提供治疗与需要增加高密度脂蛋白(HDL)-胆固醇水平有关的疾病或失调的方法，所述方法包括施用有效量的本发明的化合物至有其需要的哺乳动物(特别是人类)。
本发明还提供治疗与需要降低低密度脂蛋白(HDL)-胆固醇水平有关的疾病或失调的方法，所述方法包括施用有效量的本发明的化合物至有其需要的哺乳动物(特别是人类)。
另外，本文中提供了一种方法：利用本发明的化合物和本文中所提供的组合物，增加在对象的细胞中ATP-结合盒蛋白的表达，由此增加对象的胆固醇逆转运。
标准的生理学、药理学和生物化学步骤是现有技术已知的，且可用于评价本发明的化合物调节LXR活性的能力。例如，这种分析包括结合分析、荧光偏振分析、基于FRET的共激活因子聚集分析、基于细胞的共转染分析。可以对本发明化合物的调节已知受LXR调节的基因表达的能力进行评估。可以 使用已建立的动物模型来研究本发明化合物的性质，所述性质涉及与疾病或失调直接相关的参数，所述疾病或失调包括动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、和皮肤病。因此，可以在动物模型体内通过多种施用途径，例如口腔喂食来检测本发明的化合物。通常地，体内的化合物暴露可以在关注的血浆和组织中检测。LXR活性(如通过LXR应答基因的基因表达检测的)可以在关注的全血和组织中检测。脂质可以在血浆和肝脏中定量。
特别地，可以检测本发明化合物对ATP结合盒(ABC)胆固醇转运蛋白例如ABCA1和ABCG1的活性，和对脂肪生成标记例如在基因和蛋白质表达水平的SREBP1c的活性。ABC转运蛋白诱导的功能性后果可以在用于胆固醇流出的细胞模型中和用于反向胆固醇途径和动脉粥样硬化的动物模型中进行检测。脂肪生成标记可以在动物模型中通过测量血浆和肝脏甘油三酯水平来检测。
本发明的化合物可以单独使用(即，作为单一治疗)或与对治疗上述适应症的任一种有效的一种或更多种其他治疗剂联用。药物组合物可以只包含所公开的化合物作为唯一的药物活性剂或可以包含一种或更多种其他药物活性剂。
本发明还提供用于治疗或改善本文中描述的疾病或失调的联合治疗。在一些实施方案中，联合治疗包括联合用于治疗或改善本文描述的疾病或失调的一种或更多种药剂，施用至少一种由结构式I、II、III、IV、V或VI表示的化合物。在一些实施方案中，联合治疗包括联合用于治疗疾病的一种或更多种药剂，施用至少一种由结构式I、II、III、IV、V或VI表示的化合物，所述疾病包括高血脂、高胆固醇血症、高脂蛋白血症、高甘油三酯血症、脂肪代谢障碍、肝脂肪变性、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝(NAFLD)、高血糖症、胰岛素抗性、糖尿病、血脂障碍、动脉粥样硬化、胆石病、寻常痤疮、皮炎(包括但不限于牛皮癣、接触性皮炎、过敏性皮炎和湿疹)、皮肤伤口、皮肤老化、光老化、皱纹、糖尿病、尼曼匹克病C型、帕金森病、阿尔茨海默病、炎症、黄瘤、肥胖症、代谢综合症、X综合症、卒中、外周闭塞性疾病、失忆症、糖尿病性神经病变、蛋白尿症、肾小球疾病(包括但不限于糖尿病性肾病、高血压性肾病、IGA肾病、局灶节段性肾小球硬化症)、高磷血症、高磷血症的关联心血管并发症、癌症、多发性硬化症、骨质酥松症。
在一些实施方案中，本发明的化合物与用于治疗糖尿病、心血管疾病、高血压或肥胖症的一种或更多种其他药剂联合使用。用于治疗糖尿病的药剂包括胰岛素，例如(Eli Lilly)、(Sanofi Aventis)、(Novo Nordisk)、和(Pfizer)；PPARγ激动剂，例如(马来酸罗格列酮,GSK)和(盐酸吡格列酮，Takeda/Eli Lilly)；磺酰脲类药物，例如(格列美脲，Sanofi Aventis)、(格列苯脲，Sanofi Aventis)、(格列苯脲,Pfizer)、和和(格列吡嗪,Pfizer)；氯茴苯酸类药物，例如(瑞格列奈,Novo Nordisk)、(那格列奈,Novartis)、和(米格列奈，Takeda)；双胍类药物，例如(盐酸二甲双胍，Bristol Myers Squibb)和(盐酸二甲双胍缓释片，Depomed)；噻唑烷二酮类药物；胰淀素类似物，GLP-1类似物或GLP-1激动剂(包括(艾塞那肽,Amylin/Eli Lilly)和(重组利拉鲁肽，Novo Nordisk))；DPP-IV抑制剂，包括TradjentaTM(Eli Lilly/Boehringer Ingelheim)、(Merck)、(Novartis)、和(Bristol-Myers Squibb/AstraZeneca)；PTB-1B抑制剂；蛋白激酶抑制剂(包括AMP-激活的蛋白激酶抑制剂)；胰高血糖素拮抗剂、糖原合成酶激酶-3β抑制剂；葡萄糖-6磷酸酶抑制剂；糖原磷酸化酶抑制剂；钠葡萄糖协同转运蛋白抑制剂、和α-葡糖苷酶抑制剂，例如(阿卡波糖,Bayer)和(米格列醇，Pfizer)。用于治疗血脂障碍和心血管疾病的药剂包括他汀类药物、贝特类药物和依泽替米贝。用于治疗高血压的药剂包括α-受体阻滞剂、β-受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、利尿剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、ACE和中性肽链内切酶(NEP)双重抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂(ARBs)、醛固酮合酶抑制剂、醛固酮受体拮抗剂、或内皮素受体拮抗剂。用于治疗肥胖症的药剂包括奥利司他(arlistat)、苯丁胺(phentermine)、西布曲明(sibutramine)和利莫那班(rimonabant)。
本发明的一个实施方案包括在联合治疗中与联合产品一起施用本发明的LXR调节剂化合物或其组合物，所述联合产品例如(盐酸二甲双胍和马来酸罗格列酮，GSK)；(格列美脲和马来酸罗格列酮，GSK)；(格列吡嗪和盐酸二甲双胍，Bristol Myers Squibb)；和(格列苯脲和盐酸二甲双胍，Bristol Myers Squibb)。
在一些实施方案中，联合治疗包括联合一种或更多种选自以下的化合物来施用至少一种本发明的化合物：例如，β分泌酶(BACE1)抑制剂；γ分泌酶抑制剂；淀粉样肽聚集抑制剂(例如，ELND-005)；直接或间接表现神经保护的和/或疾病调节的物质；抗氧化剂(例如，维他命E或银杏内酯)；抗炎物质(例如，Cox抑制剂，NASIDs)；HMG-CoA还原酶抑制剂(他丁类)；乙酰胆碱酯酶抑制剂(例如，多奈哌齐、卡巴拉汀、他克林、加兰他敏、美金刚、他克林)；NMDA受体拮抗剂(例如，美金刚)；AMPA受体激动剂；AMPA受体正调节剂、AMPAkines、单胺受体再摄取抑制剂、调节神经传递介质的浓缩和释放的物质；诱导生长激素分泌的物质(例如，伊布莫仑甲磺酸盐和卡莫瑞林)；CB-1受体拮抗剂或反向激动剂；抗生素(例如，盐酸米诺环素或利福平)；PDE2抑制剂、PDE4抑制剂、PDE5抑制剂、PDE9抑制剂、PDE10抑制剂抑制剂、GABAA受体反向激动剂、GABAA受体拮抗剂、烟碱受体激动剂或部分激动剂或正向调节剂、α4β2烟碱受体激动剂或部分激动剂或正向调节剂、α7盐碱受体激动剂或部分激动剂或正向调节剂；组胺H3拮抗剂、5Ht-4激动剂或部分激动剂、5HT-6拮抗剂、α2-肾上腺素受体拮抗剂、钙拮抗剂、毒蕈碱受体M1激动剂或部分激动剂或正向调节剂、毒蕈碱受体M2拮抗剂、毒蕈碱受体M3拮抗剂、毒蕈碱受体M4拮抗剂、代谢性谷氨酸受体5正向调节剂、抗抑郁剂如西酞普兰、氟西汀、帕罗西汀、舍曲林和曲唑酮；抗焦虑剂，如氯羟去甲安定和去甲羟基安定；抗精神病药物，如阿立哌唑、氯氮平、氟哌啶醇、奥氮平、奎硫平、利培酮和齐拉西酮，和以增加根据本发明的化合的功效和/或安全性和/或减少不需要的副作用的方式以调节受体的其他物质。根据本发明的化合物还可以与用于治疗本文描述的疾病或失调的免疫疗法联合使用。
联合治疗包括联合施用本发明的化合物与一种或更多种其他药剂、相继施用本发明的化合物与一种或更多种其他药剂、施用含有本发明的化合物与一种或更多种其他药剂的组合物、或同时施用含有本发明的化合物和含有一种或更多种其他药剂的单独组合物。
E.示例性合成
合成方法概述
根据以下反应方案和实施例，利用现成的起始材料、试剂和常规合成步骤可以立即制备本发明的化合物，或其修饰物。许多反应也可以在微波条件下或使用常规加热或利用其它技术如固相试剂/清除剂或流动化学进行。在这些反应中，也可以利用变化方案，所述变化方案其自身是本领域普通技术人员已知的，但没有更详细的描述。另外，用于制备本发明的其他方法鉴于以下反应方案和实施例对于本领域普通技术人员将是显而易见的。在其中合成中间体和最终产物含有可能干扰期望的反应的潜在活性功能基团如氨基、羟基、巯基和羧酸基团的情况下，采用中间体的保护形式可能是有利的。用于保护基团的选择、引入及后续移除的方法是本领域技术人员已知的。在以下的讨论中，除非另有指示，X、R1、R2、R3、R4、R5和R6具有以上指示的含义。以下列出在这些实验细节中使用的缩写，而其他缩写应是合成领域的技术人员已知的。另外，可以参考在以下文献中描述的合适的合成方法参考文献：March,Advanced Organic Chemistry,Advanced Organic Chemistry，第3版,John Wiley & Sons，1985，Greene and Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第二版，John Wiley & Sons，1991，和Richard Larock，Comprehensive Organic Transformations，第4版,VCH publishers Inc.,1989。
一般地，反应方案中的试剂以等摩尔量使用；然而，在特定情况中，可能期望使用过量的一种试剂以驱动反应完成。尤其是当过量试剂可以通过蒸发或萃取容易地移除时的情况下如此。用于中和反应混合物中的HCl的碱一般是以少量或大量的过量使用(1.05至5当量)。
当提供NMR数据时，在Varian400(400MHz)或300(300MHz)上获得波谱，并报道为来自四甲基硅烷的ppm低磁场，同时标明质子数量、峰多重性和偶联常数及附带地相关氘化溶剂。
通过利用以下色谱条件获得LC-MS数据：
方法1(10-80，2分钟)
方法2(30-90，2分钟)
方法3(0-60，2分钟)
方法4：
HPLC系统：Waters ACQUITY；色谱柱:Waters ACQUITY CSHTM C181.7μM
保护住：Waters Assy.Frit,0.2μM,2.1mm；柱温:40℃
流动相A:TFA:Water(1:1000,v:v)流动相B:TFA:ACN(1:1000,v:v)；流速:0.65mL/min；进样体积:2μL；采集时间：约1.5分钟。
梯度程序
质谱仪参数
质谱仪：Waters SQD；离子化:正离子的电喷雾电离(ESI)；扫描方式(每0.2秒100-1400m/z)；ES毛细管电压：3.5kv；ES锥孔电压:25v离子源温度:120℃；去溶剂温度:500℃；去溶剂气流量：氮气设置650(L/hr)；锥孔气流量：氮气设置50(L/hr)。
本发明化合物的SFC分离在以下方法下进行。
方法A：
仪器：Thar SFC80；色谱柱:AD250mm*30mm,5μm；流动相:A:超临界CO2，B:IPA(0.05％DEA)，A:B＝80:20，60ml/min；柱温:38℃；喷嘴压力:100Bar；喷嘴温度:60℃；蒸发器温度:20℃；调整器温度:25℃；波长:220nm。
方法B：
仪器：SFC MG2；色谱柱:OJ 250mm*30mm,5μm；流动相:A:超临界CO2，B:甲醇(0.05％DEA)，A:B＝90:10，70ml/min；柱温:38℃；喷嘴压力:100Bar；喷嘴温度:60℃；蒸发器温度:20℃；调整器温度:25℃；波长:220nm
手性分析HPLC
通过手性分析HPLC确定本发明化合物的手性纯度，所述手性分析HPLC在以下条件下进行：使用或色谱柱，使用CO2和含有0.05％DEA的5％至40％甲醇、乙醇或异丙醇作为洗脱液。
本发明通过以下实施例的方式来说明，其中会采用以下缩写。
在第一个过程中，通过SNAr或钯催化反应物1与式2中间体的反应可以制备式I的化合物，其中G1是Cl、Br、I、OTf或OTs。反应物1是或者市场可购得的或者可以根据文献先例从市场可购得的前体容易地制备。
中间体2可以通过以下描述的几种不同的方法之一制备。
当X＝N时，式2的中间体可以通过环化式3a的中间体和随后当G2不为氢时移除G2来制备。G2是胺保护基团，例如为Boc、Cbz和三氟乙酰胺等。
式3a的中间体可以通过以下两种方法之一制备：1)铜调节的哌嗪酮4a与苯胺5a的偶联，其中G3是Br、I、Cl或OTf；2)4a与氟硝基苯6a之间的SNAr反应以产生式7a的中间体，随后还原硝基。中间体7a也可以从式8a的中间体通过以下步骤制备：用烷基磺酸钠(R1SO2Na)或烷基硫化钠(R1SNa)取代氟，随后氧化所产生的硫醚。而中间体8a可以从哌嗪酮4a和二氟硝基苯9a制备，后二者是市场可购得或者可以根据文献先例从市场可购得的前体容易地制备，这是本领域普通技术人员所熟知的。
例如，当R3＝异丙基时，哌嗪酮4a可以通过以下提供的方法之一制备：
当X＝CH时，式2的中间体可以从式3a的中间体通过G2的去保护和随后的还原胺化反应来制备。G2是胺保护基团，例如为Boc、Cbz和三氟乙酰胺等。
式3b的中间体可以通过吲哚4b与市场可购得的烷基卤5b的N-烷基化反 应制备，其中G3是Br或I。式4b的中间体可以通过从式6b的中间体移除G4来制备，其中G4是甲基磺盐或苯磺酸盐。
式6b的中间体可以通过以下步骤制备：卤代芳烃7b(其中G5是Br或I)与炔丙醇8b之间的顺序薗头偶合反应，随后环化以产生9b的中间体，随后将醇氧化。
式7b的中间体可以从市场可购得的苯胺10b通过以下转化制备：1)用烷基硫化钠R1SNa取代氟(产生11b)；2)卤化反应(产生12b)；3)保护苯胺(产生13b)；4)氧化硫化物(产生7b)。
在第二过程中，式I的化合物可以通过氧化式1c的中间体中的硫醚基团来制备，其中R1＝烷基、R2＝H、X＝C。而中间体1c可以由反应物1与式2c的中间体通过SNAr或钯催化反应的偶联制备。
中间体2c可以根据以下方案制备。
本说明书所引用的所有专利、专利申请、书和文献在此都通过引用其整体并入。在不一致的情况下，以本公开、包括其中的任何定义为准。
通过参考以下详细的实施例将进一步描述本发明，给出所述实施例以说明本发明，但不意在对其限制。
制备1
1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-羧酸叔丁酯
步骤1：
在N2中，将2-(苯甲基氨基)乙醇(1.3g，8.80毫摩尔)、HATU(5.30g，13.8毫摩尔)和Et3N(2.80g，27.6毫摩尔)加至(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酸(2.0g，9.20毫摩尔)的CH2Cl2(40mL)溶液中。在室温搅拌该混合物过夜。用水(20mL)稀释混合物并用EtOAc萃取(3×30mL)。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，浓缩，然后通过硅胶柱层析纯化以提供为白色固体的(R)-(1-(苯甲基(2-羟乙基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.80g，88％产出率)。LC-MS m/z351.2[M+H]+。
步骤2
在-10℃，在N2中，将Et3N(1.60g，16毫摩尔)和MsCl(1.40g，12.0毫摩尔)逐滴加至(R)-(1-(苯甲基(2-羟乙基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.80g，8.0毫摩尔)的CH2Cl2(20mL)溶液。在室温搅拌该混合物过夜。水(20mL)急冷混合物并用CH2CI2萃取(3×20mL)。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，浓缩以提供为黄色固体的(R)-(1-(苯甲基(2-氯乙基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3.0g，100％产出率)，将该黄色固体用于下一步骤而不用进一步纯化。LC-MS m/z369.2[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ7.37-7.28(m,3H),7.22-7.20(m,2H),5.27-5.18(m,1H),4.93-4.86(m,1H),4.64-4.39(m,2H),3.85-3.66(m,2H),3.61-3.39(m,2H),2.03-1.97(m,1H),1.45(s,9H),0.98(d,J＝6.8Hz,3H),0.93(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤3
在0℃，在N2中，将NaH(1.0g，27.0毫摩尔，60％的油矿物溶液)加至(R)-(1-(苯甲基(2-氯乙基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.0g，5.40毫摩尔)的DMF(30mL)溶液。在室温搅拌混合物2小时。用水(20mL)急冷混合物并用EtOAc萃取(3×20mL)。用盐水(20mL)洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，浓缩，然后通过柱层析纯化以提供为白色固体的(R)-4-苯甲基-2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.13g，63％产出率)。LC-MS m/z277.1[M-56+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ7.38-7.29(m,3H),7.29-7.22(m,2H),5.02-4.86(m,1H),4.49-4.39(m,1H),4.31-4.06(m,2H),3.41-3.18(m,3H),2.42-2.31(m,1H),1.46(s,9H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H),1.00(d,J＝6.8Hz,3H).
步骤4
在-78℃，用NH3(气体)向含有THF(10mL)的三颈烧瓶中鼓泡5分钟。然后在-78℃下将Na(300mg，13.0毫摩尔)缓慢地加至混合物。搅拌30分钟后，在-78℃下逐滴加入(R)-4-苯甲基-2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(700mg，2.11毫摩尔)。在-78℃下搅拌混合物30分钟。用NH4Cl饱和水溶液(10mL)急冷混合物并用EtOAc萃取(3×10mL)。用盐水(10mL)洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，浓缩，然后用PE/EtOAc(1/1)通过制备TLC纯化以提供为白色固体的2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，59％产出率)。发现该产物是外消旋混合物。没有研究外消旋的原因。LC-MS m/z187.1[M-56+H]+，265.1[M+Na]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ6.29(s,1H),4.55-3.99(m,2H),3.51-3.36(m,1H),3.32-3.12(m,2H),2.34-2.29(m,1H),1.46(s,9H),1.09(d,J＝6.8Hz,3H),0.99(d,J＝7.2Hz,3H).
步骤5
将2-溴代-4-(甲磺酰基)苯胺(207mg，0.83毫摩尔)、(1R，2S)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(12.0mg，0.08毫摩尔)、K3PO4.3H2O(660mg，2.48毫摩尔)和Cul(16mg，0.08毫摩尔)加至2-异丙基-3-氧代吡嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.83毫摩尔)的NMP(3mL)溶液。在150℃下，在微波中将混合物搅拌1小时。用水(10mL)稀释混合物并用EtOAc萃取(3×10mL)。用盐水(10mL)洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，浓缩，然后用CH2CI2/MeOH(35/1)通过制备TLC纯化以提供为白色固体的1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-羧酸叔丁酯(110mg，34％产出率)。LC-MS m/z394.1[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ7.94(s,1H),7.83-7.76(m,2H),5.35-5.17(m,1H),4.73-4.42(m,1H),4.22-4.12(m,1H),4.11-3.99(m,1H),3.53-3.37(m,1H),3.03(s,3H),2.38-2.27(m,1H),1.42(s,9H),1.19(d,J＝6.8Hz,3H),0.97(d,J＝6.8Hz,3H)。
制备2
(R)1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2,8(1H)-2-二羧酸叔丁基8-甲基酯
步骤1：
将Cbz-D-缬氨酸(500g，1.99摩尔)和N-甲基吗啉(201.8,1.99摩尔)的无水THF(8L)溶液冷却至-15℃并在搅拌下逐滴加入氯甲酸异丁酯(299g，2.19摩尔)。30分钟后，缓慢加入1-氨基-2,2-二甲氧基丙烷(209.5，1.99摩尔)的THF(1L)溶液并将温度在-15℃维持2小时。用盐水(2L)洗涤反应混合物，然后浓缩有机相以除去THF。用EtOAc(4L)稀释残渣，用1N的HCl水溶液(2×2L)洗涤，用NaHCO3饱和水溶液(2L)和Na2CO3饱和水溶液(2L)洗涤，和用盐水洗涤残渣。在Na2SO4上干燥后，在减压下除去有机溶剂以提供为白色固体的(R)-(1-((2,2-二甲氧乙基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸苯甲酯(670g，产出率99.5％)，所述固体用于下一步骤而不用进一步纯化。LC-MS m/z360.9[M+Na]+。
1H NMR(CD3OD300MHz):δ7.35-7.30(m,5H),5.08(s,2H),4.45-4.35(m,1H),3.95-3.85(m,1H),3.34-3.25(m,8H),2.10-1.90(m,1H),0.94-0.91(m,6H).
步骤2
将(R)-(1-((2,2-二甲氧乙基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸苯甲酯(335g，0.99mol)分批加至经冷却的TFA-H2O(温度＜5℃，VTFA/VH2O＝7/3，2L)，在室温搅拌溶液12小时。将该溶液缓慢地加入搅拌冷却的Na2CO3饱和水溶液(2.5L)以保持pH＞8。用EtOAc(5×2L)萃取混合物。用盐水(2L)洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空中蒸发以产生为白色固体的(R)-2-异丙基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-1(2H)-羧酸苯甲酯(259g，95.4％)，所述白色固体用于下一步骤而不用进一步纯化。LC-MS m/z274.9[M+H]+.1H NMR(CD3OD300MHz):δ7.36-7.34(m,5H),6.33-6.30(m,1H),5.79-5.68(m,1H),5.26-5.13(m,2H),4.38-4.29(m,1H),2.01-1.96(m,1H),1.00-0.84(m,6H)。
步骤3
在室温下，将Et3SiH(424g,3.65mol)和TFA(665g,5.8mol)加至(R)-2-异丙基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-1(2H)-羧酸苯甲酯(400g，1.46mol)的DCE(2L)搅拌溶液。在回流下搅拌反应36小时。冷却至室温后，将溶液浓缩以除去溶剂。用EtOAc(2L)稀释残渣，然后缓慢加至搅拌冷却的NaHCO3饱和水溶液(2L)以确保pH＞8。用EtOAc(2×2.5L)萃取混合物。用盐水(2L)洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并浓缩以产生(R)-2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸苯甲酯(402g，产出率99.75％)，其用于下一步骤而不用进一步纯化。LC-MS m/z276.9[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6400MHz):δ7.93(s,1H),7.39-7.31(m,5H),5.09(s,2H),4.06-4.01(m,1H),3.99-3.92(m,1H),3.23-3.14(m,3H),2.20-2.12(m,1H),0.96-0.94(m,3H),0.85(d,J＝6.0Hz,3H)。
步骤4
将Pd/C(干燥，w/w15％，5g)加至含有(R)-2-异丙基-3-氧代吡嗪-1-羧酸苯甲酯(50g，0.181mol)的MeOH(800mL)溶液的1L圆底烧瓶。在室温，在H2中搅拌该混合物过夜。当TLC和LC-MS显示起始材料消耗完时，将(Boc)2O(76.74g,0.352mol)加至反应混合物，并在室温下搅拌混合物过夜直至消耗完中间体(R)-3-异丙基哌嗪-2-酮。将混合物过滤并在真空下浓缩以得到残渣。通过硅胶柱层析纯化残渣(用石油：EtOAc＝3:1洗脱)以产生为白色固体的(R)-2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(26g，产出率61％)。
对于(R)-3-异丙基哌嗪-2-酮：
LC-MS m/z143.2[M+H]+.1H NMR(HCl salt,CD3OD400MHz):δ3.95(d,J＝3.6Hz,1H),3.65-3.39(m,4H),2.63-2.54(m,1H),1.15(d,J＝6.8Hz,3H),1.09(d,J＝7.2Hz,3H)。
对于(R)-2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯：
LC-MS m/z186.9[M-56+H]+.1H NMR(DMSO-d6400MHz):δ7.93(s,1H),4.02-3.82(m,2H),3.17-3.15(m,3H),2.16(s,1H),1.41(s,9H),0.98(d,J＝6.8Hz,3H),0.89(d,J＝6.4Hz,3H).
步骤5
在N2气环境下，将NaHb(8.8g，0.22mol，60％的矿物油溶液，1.1eq)在-10℃下分批加至含有(R)-2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(26.7g，0.11mol)的DMF(300mL)溶液的1L三颈烧瓶。在-10℃搅拌混合物30分钟。然后在-20℃下10分钟内将混合物逐滴加至含有2,4-二氟代-5-硝基苯甲酸甲酯(26.3g,0.121mol，1.1eq)的DMF(200mL)溶液的1L三颈烧瓶。加入后，将产生的混合物在-20℃和-30℃之间搅拌另外10分钟。用氯化铵饱和水溶液(200mL)和随后用水(800mL)急冷反应。用EtOAc(3×1L)萃取水层。用水(3×1L)和盐水洗涤合并的有机层，并在无水Na2SO4上干燥。在将混合物过滤并将滤液在真空下蒸发之后，通过硅胶柱层析，用PE:EtOAc＝8:1至4:1洗脱来纯化残渣以产生为黄色固体的(R)-4-(5-氟代-4-(甲氧羰基)-2-硝基苯基)-2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(32g，66.3％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z384.1[M-56+H]+,462.1[M+Na]+.1H NMR(CDCl3300MHz):δ8.63(d,J＝6.9Hz,1H),7.16(d,J＝10.2Hz,1H),4.61-4.30(m,2H),3.97-3.89(m,4H),3.62-3.48(m,2H),2.40-2.34(m,1H),1.49(s,9H),1.08(d,J＝6.9Hz,3H),1.01(d,J＝6.9Hz,3H).
步骤6
将NaSMe(14.3g，0.204毫摩尔，3eq.)加至含有(R)-4-(5-氟代-4-(甲氧羰基)-2-硝基苯基)-2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯的1L圆底烧瓶。在室温搅拌混合物1小时。加水(500mL)并在真空下浓缩混合物以除去THF。用EtOAc(3×800mL)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤 并在真空下浓缩以产生为黄色固体的(R)-2-异丙基-4-(4-甲氧羰基)-5-(甲硫基)-2-硝基苯基)-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(31.9g，100％产出率)。该残渣不用进一步纯化而直接用于下一步骤。LC-MS MS(ESI)m/z412.1[M-56+H]+,490.2[M+Na]+。
步骤7
将m-CPBA(84.6g,0.49毫摩尔,2.5eq)加至含有(R)-2-异丙基-4-(4-甲氧羰基)-5-(甲硫基)-2-硝基苯基)-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(粗品91.7g，0.196mol)的CH2Cl2(1L)溶液的2L圆底烧瓶。在室温搅拌该混合物过夜。将饱和的Na2S2O3溶液缓慢加入以急冷反应。用CH2Cl2(4×3L)萃取混合物。依次用Na2S2O3溶液(500mL)、NaHCO3溶液(500mL)和盐水洗涤合并的有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶柱层析，用二氯甲烷洗脱纯化残渣以产生为黄色固体的(R)-2-异丙基-4-(4-甲氧羰基)-5-(甲磺酰基)-2-硝基苯基)-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(83.7g，85.4％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z444.0[M–56+H]+,522.1[M+Na]+.1H NMR(CDCl3300MHz):δ8.29(s,1H),8.12(s,1H),4.61-4.17(m,2H),4.00-3.94(m,4H),3.70-3.60(m,1H),3.51-3.43(m,4H),2.39-2.32(m,1H),1.50(s,9H),1.07(d,J＝6.9Hz,3H),1.01(d,J＝6.9Hz,3H).
步骤8
将雷尼镍(在H2O中，4g)加至含有(R)-2-异丙基-4-(4-甲氧羰基)-5-(甲磺酰基)-2-硝基苯基)-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(26.3g，0.0526mol)的THF(200mL)和甲醇(200mL)溶液的1L圆底烧瓶。在室温，在H2下(30Psi)搅拌该混合物过夜。将混合物过滤并在真空下浓缩以产生为黄色固体的(R)-4-(2-氨基-4-(甲氧羰基)-5-(甲硫酰)苯基)-2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(24.7g，100％产出率)。该残渣不用进一步纯化而直接用于下一步骤。
LC-MS MS(ESI)m/z414.0[M–56+H]+,492.0[M+Na]+.1H NMR(CDCl3300MHz):δ7.77(brs,1H),7.04(s,1H),4.68-4.45(m,1H),4.45-4.38(m,2H),3.92(s,3H),3.70-3.58(m,1H),3.58-3.41(m,1H),3.30(s,3H),2.49-2.25(m,1H),1.50(s,9H),1.12(d,J＝6.9Hz,3H),1.05(d,J＝6.9Hz,3H).
步骤9
将Et3N(64.5g,0.638mol,12eq.)和SiCl4(27.1g,0.160mol,3eq.)加至含有(R)-4-(2-氨基-4-(甲氧羰基)-5-(甲硫酰)苯基)-2-异丙基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25g，0.0532mol)的二氯甲烷(500mL)溶液的1L圆底烧瓶。在室温搅拌该混合物过夜。在0℃，将混合物缓慢地逐滴加至NaHCO3水溶液(54.1g于1L水中，0.644mol,12.1eq.)并调节至pH＝8。将混合物过滤并用二氯甲烷(3×600mL)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，然后在无水Na2SO4上干燥。将混合物过滤并在真空下浓缩以产生残渣。通过硅胶柱层析，用PE:EtOAc＝2:1洗脱来纯化残渣以产生为淡黄色固体的(R)-8-甲基-1异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2,8(1H)-二羧酸2-叔丁酯。手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝9.03分钟(方法：OD-3_3_5_40_2.5ML)。LC-MS MS(ESI)m/z452.2[M+H]+.1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.31(s,1H),8.01(s,1H),5.30-5.18(m,1H),4.70-4.52(m,1H),4.47(dd,J＝3.2and12.4Hz,1H),4.18(dt,J＝5.2and11.6Hz,1H),3.98(s,3H),3.70-3.52(m,1H),3.44(s,3H),2.50-2.38(m,1H),1.53(s,9H),1.25(d,J＝6.8Hz,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H).
制备3
1-异丙基-7-(甲硫基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚
步骤1：
将KH(6.80g,51.00毫摩尔,矿物油中30重量％)加至0℃的6-溴代-1H-吲哚(5g,25.50毫摩尔)的无水THF(60mL)溶液。在搅拌30分钟和冷却至-78℃之后，在氮气中加入t-BuLi(39.23mL,51.0毫摩尔,1.3M)以形成混合物。30分钟后，将1,2-二甲基二硫(4.80g,51.0毫摩尔)加至所形成的混合物。在-78℃下搅拌反应混合物1小时。在-78℃下用NH4Cl的饱和水溶液(30mL)缓慢急冷混合物，用1N磷酸水溶液调节pH＝7，然后用EtOAc(50mL X3)萃取。在无水硫酸钠上干燥合并的有机层，过滤，浓缩并通过硅胶柱层析纯化，用(PE/EtOAc10:1)洗脱，得到为灰色固体的6-(甲硫基)-1H-吲哚(3.9g，93.67％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z164.1[M+H]+.1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.14(brs,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(s,1H),7.18-7.11(m,1H),6.56-6.51(m,1H),2.52(s,3H).
步骤2：
将氯化苯磺酰(1.29g,7.36毫摩尔)加至6-(甲硫基)-1H-吲哚(1g,6.13毫摩尔)、NaOH(4.90g,122.6毫摩尔)和Bu4NHSO4(207.8mg,0.613毫摩尔)的二氯 甲烷(20mL)溶液。在室温搅拌该混合物过夜。用水(30mL)急冷混合物并用二氯甲烷萃取(30mL×3)。在无水硫酸钠上干燥合并的有机层，过滤，浓缩并通过硅胶柱层析纯化，用(PE/EtOAc10:1)洗脱，得到为白色固体的6-(甲硫基)-1-(苯磺酰)-1H-吲哚(1.1g，59.18％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z304.0[M+H]+.1H NMR(CDCl3400MHz):δ7.93-7.75(m,3H),7.58-7.41(m,5H),7.17(dd,J1＝8.0Hz,J2＝1.6Hz,1H),6.63-6.60(m,1H),2.53(s,3H).
步骤3：
将n-BuLi(5.86mL,14.65毫摩尔,2.5M)加至氮气中的6-(甲硫基)-1-(苯磺酰)-1H-吲哚(890mg,2.93毫摩尔)的无水THF(10mL)溶液。搅拌30分钟后，向所得混合物加入异丁醛(1.05g,14.65毫摩尔)。在0℃下搅拌反应混合物1小时。在0℃下用饱和NH4Cl(10mL)急冷混合物，然后用EtOAc(20mL X3)萃取。在无水硫酸钠上干燥合并的有机层，过滤，浓缩并通过硅胶柱层析纯化，用(PE/EtOAc20:1)洗脱，得到为无色油状的2-甲基-1-(6-(甲硫基)-1H-吲哚-2-基)丙酮(440mg，64.28％产出率)。
LC-MS MS(ESI)m/z234.1[M+H]+.1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.86(brs,1H),7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.19(s,1H),7.14-7.11(m,1H),7.01(dd,J1＝8.4Hz,J2＝1.6,1H),3.42-3.38(m,1H),2.47(s,3H),1.20(d,J＝6.8Hz,6H).
步骤4：
将2-溴乙基氨基甲酸叔丁酯(2.87g,12.85毫摩尔)加至2-甲基-1-(6-(甲硫基)-1H-吲哚-2-基)丙酮(600mg,2.57毫摩尔)和Bu4NBr(4.12g,12.85毫摩尔)的9N NaOH(10mL，经冷却的)溶液。在室温搅拌混合物72小时。在0℃下用水(20mL)急冷混合物并用EtOAc萃取(20×3mL)。在无水硫酸钠上干燥合并的有机层，过滤，浓缩并通过硅胶柱层析纯化，用(PE/EtOAc10:1)洗脱，得到为无 色油状的(2-(2-异丁酰)-6-(甲硫基)-1H-吲哚-1-基乙基)氨基甲酸叔丁酯(200mg,20.66％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z321.1[M-56+H]+,277.1[M-100+H]+.1H NMR(CDCl3400MHz):δ7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.38(s,1H),7.29(s,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,1H),4.80(brs,1H),4.62(t,J＝6.4Hz,2H),3.58-3.42(m,3H),2.58(s,3H),1.38(s,9H),1.24(d,J＝6.8Hz,6H).
步骤5：
将TFA(1mL)加至0℃的(2-(2-异丁酰基-6-(甲硫基)-1H-吲哚-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.53毫摩尔)的二氯甲烷(9mL)溶液。在室温搅拌混合物1小时。浓缩混合物(T＜25℃)，用水(5mL)处理，用NaHCO3的饱和水溶液调节至pH＝11，并用EtOAc(20mL×3)萃取。在无水硫酸钠上干燥合并的有机层，过滤，浓缩以得到为无色油状的1-(1-(2-氨乙基)-6-(甲硫基)-1H-吲哚-2-基)-2-甲基丙酮(210mg，100％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z258.8[M-18+H]+。
步骤6：
将Et3N(219.3mg,2.172毫摩尔)加至1-(1-(2-氨乙基)-6-(甲硫基)-1H-吲哚-2-基)-2甲基丙酮(200mg,0.724毫摩尔)的MeOH(5mL)溶液。在60℃下再搅拌反应混合物1小时。向所得混合物加入NaBH4(82.53mg,2.172毫摩尔)。在60℃下搅拌反应混合物1小时。将混合物浓缩，用水(10mL)处理并用EtOAc(20mL×3)萃取。在无水硫酸钠上干燥合并的有机层，过滤，浓缩并通过硅胶制备TLC纯化，用(PE/EtOAc1:1)洗脱，得到为无色油状的1-异丙基-7-(甲硫基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚(80mg，42.46％产出率，0℃下储存)。
1-异丙基-7-甲硫基-3,4-二氢-吡嗪[1,2-a]吲哚的LC-MS MS(ESI)m/z259.1[M+H]+的LC-MS。1-异丙基-7-(甲硫基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚的LC-MS MS(ESI)m/z261.2[M+H]+的LC-MS。1H NMR(CDCl3400MHz):δ7.41(d,J＝8.4Hz,1H),7.20(s,1H),7.05(dd,J1＝8.4Hz,J2＝1.6Hz,1H),6.12(s,1H),4.02-3.97(m,2H),3.86-3.80(m,1H),3.46-3.42(m,1H),3.16-3.10(m,1H),2.48(s,3H),2.32-2.27(m,1H),1.09(d,J＝6.8Hz,3H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H)
制备4
8-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚
步骤1：
将NaSMe(9.17g,131毫摩尔)加至4-氨基-2-氟代苯甲酸乙酯(12g，65.5毫摩尔)的DMF(100mL)溶液，在60℃搅拌混合物20小时。冷却至室温后，用水稀释反应，然后用EtOAc(3×100mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空下浓缩，得到4-氨基-2-甲硫基苯甲酸乙酯。
在40分钟内，将ICl/AcOH溶液(1M,72mL,72毫摩尔)逐滴加至预热到60℃的4-氨基-2-甲硫基苯甲酸乙酯(65毫摩尔)的醋酸(150mL)溶液，并将温度在 60℃维持3小时。冷却至室温后，用EtOAc(500mL)稀释反应，并用5％硫代硫酸钠溶液(3×100mL)和盐水(200mL)洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶柱层析纯化粗制品(0-20％EtOAc/己烷)，得到4-氨基-5-碘代-2-(甲硫基)苯甲酸乙酯(13.67g,53％产出率)。
对于4-氨基-2-(甲硫基)苯甲酸乙酯：LC-MS m/z212[M+H]+。对于4-氨基-5-碘代-2-(甲硫基)苯甲酸乙酯：LC-MS m/z338[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.29(s,1H),6.47(s,1H),4.49(brs,2H),4.31(q,J＝7.2Hz,2H),2.38(s,3H),1.37(t,J＝7.2Hz,3H).
步骤2：
在0℃下，将Et3N(13.8mL,100毫摩尔)加至4-氨基-5-吲哚-2-(甲硫基)苯甲酸乙酯(13.6g,40毫摩尔)的DCM(100mL)溶液，然后在0℃添加MsCl(7.7mL，100毫摩尔)。添加后，在室温搅拌混合物2小时。将1N HCl溶液(50mL)加至混合物并用DCM(1×100mL)萃取水相。用盐水洗有机层，在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空中浓缩，得到5-碘代-4-(N-(甲磺酰基)甲磺酰基氨基)-2-(甲硫基)苯甲酸乙酯。
将上述粗反应混合物溶解于100mL THF。将TBAF的THF溶液(1M,100mL)加至该溶液，并将混合物在室温搅拌2小时。将水加至混合物并用EtOAc(3×100mL)萃取水相。用盐水洗有机层，在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空中浓缩，得到5-碘代-4-(甲磺酰基氨基)-2-(甲硫基)苯甲酸乙酯。其不用进一步纯化而用于下一步骤。对于5-碘代-4-(N-(甲磺酰基)甲磺酰基氨基)-2-(甲硫基)苯甲酸乙酯：LC-MSm/z494[M+H]+。对于5-碘代-4-(甲磺酰基氨基)-2-(甲硫基)苯甲酸乙酯：LC-MS m/z415[M+H]+。
步骤3：
将氢化二异丁基铝(1.0M的甲苯溶液，100mL，100毫摩尔)缓慢加至0℃下的5-碘代-4-(甲磺酰基氨基)-2-(甲硫基)苯甲酸乙酯的无水甲苯(200mL)溶液。添加后，在0℃搅拌混合物3小时，然后用甲醇/水(1/1)急冷。将反应混合物倒入剧烈搅拌过的酒石酸钠钾(1M,300mL)溶液并剧烈搅拌2小时，之后其分为2个明显的层。分离有机层，并EtOAc萃取水层(3×200mL)。用盐水洗涤合并的有机层，在无水硫酸钠上干燥，过滤并在真空中浓缩。通过硅胶柱层析纯化粗制品(0-40％EtOAc/己烷)，得到N-(4-(羟甲基)-2-碘代-5-(甲硫基)苯基)甲基磺酰胺(11.9g,对于2个步骤产出率为80％)。LC-MS m/z356[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.82(s,1H),7.49(s,1H),4.67(s,2H),2.99(s,3H),2.50(s,3H).
步骤4：
将氯化叔丁基二苯甲硅烷(5.8mL，22.4毫摩尔)加至搅拌过的0℃下的N-(4-(羟甲基)-2-碘代-5-(甲硫基)苯基)甲基磺酰胺(6.4g，17.2毫摩尔)和咪唑(1.76g，25.8毫摩尔)的CH2Cl2(100mL)和DMF(50mL)溶液。使混合物在室温搅拌过夜。用CH2Cl2(100mL)稀释混合物，用1N的HCl溶液、NaHCO3饱和水溶液和盐水洗，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空中浓缩，得到N-(4-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-2-碘代-5-(甲硫基)苯基)甲基磺酰胺。其不用进一步纯化以用于下一步骤。
将N-(4-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-2-碘代-5-(甲硫基)苯基)甲基磺酰胺与mCPBA(8.96g,51.6毫摩尔)的CH2Cl2(100mL)悬浮液在室温搅拌2小时。加入Na2S2O3(50mL)和NaHCO3(50mL)的饱和水溶液，分层。用CH2Cl2(2×100L)萃取水层。在无水Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤并在减压条件下浓缩。通过在硅胶上的快速柱层析纯化残渣，用EtOAc/己烷(3/7)洗脱， 得到N-(4-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-2-碘代-5-(甲磺酰基)苯基)甲基磺酰胺(8.8g，对两个步骤产率为80％)。对于N-(4-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-2-碘代-5-(甲硫基)苯基)甲基磺酰胺：LC-MS m/z612[M+H]+。对于N-(4-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-2-碘代-5-(甲磺酰基)苯基)甲基磺酰胺：LC-MS m/z644[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.25(s,1H),8.08(s,1H),7.67-7.65(m,4H),7.46-7.37(m,6H),6.77(s,1H),5.05(s,2H),3.11(s,3H),2.83(s,3H),1.12(s,9H).
步骤5：
将PdCl2(PPh3)2(277mg,0.38毫摩尔)和CuI(73mg,0.38毫摩尔)加至N-(4-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-2-碘代-5-(甲磺酰基)苯基)甲基磺酰胺(2.45g，3.8毫摩尔)的THF(20mL)和Et3N(10mL)溶液。将混合物用氮气吹扫10分钟，随后加入4-甲基戊-1-炔-3醇(745mg，7.6毫摩尔)并在65℃搅拌8小时。用EtOAc(50mL)稀释反应并用1N HCl(50mL)洗涤。分离有机层，并EtOAc萃取水层(3×50mL)。用盐水洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压条件下浓缩。通过在硅胶上的快速柱层析纯化残渣，用EtOAc/己烷(3/7)洗脱，得到1-(5-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-1,6-双(甲磺酰基)-1H-吲哚-2-基)-2-甲基丙烷-1-醇(2.1g，产率为90％)。LC-MS m/z614[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.68(s,1H),7.90(s,1H),7.71-7.67(s,4H),7.46-7.35(m,6H),6.77(s,1H),5.21(d,J＝3.2Hz,2H),6.94(t,J＝6.8Hz,1H),3.22(s,3H),2.90(s,3H),2.61(d,J＝6.8Hz,1H),2.37-2.32(m,1H),1.12(s,9H),1.05(d,J＝6.8Hz,3H),1.03(d,J＝6.8Hz,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ147.25,135.54,135.28,135.00,133.66,133.00,132.89,129.96,127.85,121.68,115.96,108.69,72.30,62.98,44.33,41.59,32.88,26.89,20.23,19.30,17.61.
步骤6：
将戴斯－马丁高价碘烷(1.94g,4.56毫摩尔)一次性加至经搅拌的1-(5-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-1,6-双(甲磺酰基)-1H-吲哚-2-基)-2-甲基丙烷-1-醇(2.3g,3.8毫摩尔)的无水CH2Cl2(25mL)溶液。使混合物在室温搅拌2小时。用Na2S2O3(5g，30mL H2O中)溶液和NaHCO3(40mL)饱和溶液急冷反应。用EtOAc(3×80L)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压条件下浓缩。通过在硅胶上的快速柱层析纯化残渣，用EtOAc/己烷(2/8)洗脱，得到1-(5-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-1,6-双(甲磺酰基)-1H-吲哚-2-基)-2-甲基丙酮(2.0g，产率为86％)。LC-MS m/z612[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.69(s,1H),8.03(s,1H),7.70-7.68(m,4H),7.46-7.36(m,6H),7.22(s,1H),5.20(s,2H),3.80(s,3H),3.36(m,1H),2.89(s,3H),1.29(d,J＝6.8Hz,6H),1.13(s,9H)。13C NMR(100MHz,CDCl3):δ197.83,141.53,136.69,136.05,135.50,135.04,132.81,131.14,129.99,127.88,123.17,117.12,114.21,62.87,44.19,44.03,39.09,26.88,19.30,18.41。
步骤7：
将Cs2CO3(1.25g,3.83毫摩尔)一次性加至经搅拌的1-(5-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-1,6-双(甲磺酰基)-1H-吲哚-2-基)-2-甲基丙酮(780mg,1.27毫摩尔)的THF/甲醇(15mL/15mL)溶液。使混合物在室温搅拌4小时，并在真空中浓缩，得到1-(5-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-6-(甲磺酰基)-1H-吲哚-2-基)-2-甲基丙酮粗制品。其不用进一步纯化以用于下一步骤。将40％NaOH水溶液(20mL)加至1-(5-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-6-(甲磺酰基)-1H-吲哚-2-基)-2-甲基丙酮粗品、2-(Boc-氨基)乙基溴化物(2.8g，12毫摩尔)、四丁基碘化铵(235mg，0.63毫摩尔)的CH2Cl2/甲苯(2mL/4mL)溶液。混合物允许在室温搅拌20小时。用CH2Cl2(40mL)稀释反应混合物，并用水(50mL)洗。分离有机 层，并用CH2Cl2(4×50mL)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压条件下浓缩。通过在硅胶上的快速柱层析纯化残渣，用CH2Cl2/甲醇(95/5)洗脱，得到2-(5-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-2-异丁酰-6-(甲磺酰基)-1H-吲哚-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，对两个步骤产率为35％)。
对于1-(5-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-6-(甲磺酰基)-1-1H-吲哚-2-基)-2-甲基丙酮：LC-MS m/z556[M+Na]+。
对于2-(5-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-2-异丁酰基-6-(甲磺酰基)-1H-吲哚-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯：LC-MS m/z699[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.20(s,1H),7.93(s,1H),7.72(dd,J1＝8.0Hz,J2＝1.6Hz,4H),7.47-7.35(m,7H),5.21(s,2H),4.72(d,J＝6.8Hz,2H),3.55(d,J＝6.8Hz,2H),3.33-3.26(m,1H),3.00(s,3H),1.46(s,9H),1.30(d,J＝6.4Hz,3H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H),1.11(s,9H)。
步骤8：
将三氟乙酸(1.0mL)加至2-(5-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-2-异丁酰基-6-(甲磺酰基)-1H-吲哚-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(250mg，0.37毫摩尔)的CH2Cl2(5.0mL)溶液，并将混合物在室温下搅拌1小时。通过在减压条件下与甲苯共沸蒸发除去多余的TFA。将残渣溶解于CH2Cl2(5mL)，并加入Et3N(0.5mL)。在室温搅拌反应混合物45分钟然后在真空中浓缩。通过在硅胶上的快速柱层析纯化残渣，用CH2Cl2/甲醇(98/2)洗脱，得到8-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚(135mg，产率为65％)。LC-MS m/z559[M+H]+。
步骤9：
在室温，1个氢大气下，将8-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚(140mg,0.25毫摩尔)、10％焦炭上的钯催化剂(37mg,0.025毫摩尔)和甲醇(5mL)的溶液搅拌3小时。通过过滤混合物，并用甲醇彻底清洗在减压条件下除去合并的溶剂，得到8-(((叔丁基二苯甲硅烷基)氧代)甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚。其不用进一步纯化直接使用。将一小部分产物用层析纯化以用于表征。LC-MS m/z561[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.00(s,1H),7.73-7.70(m,5H),7.47-7.40(m,6H),6.36(s,1H),5.20(d,J＝2.0Hz,2H),4.24-4.19(m,1H),4.11-4.00(m,2H),3.52-3.47(m,1H),3.20-3.13(m,1H),3.03(s,3H),2.47-2.39(m,1H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),1.09(s,9H),0.96(d,J＝6.8Hz,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ143.06,135.68,134.04,133.31,131.52,130.26,129.79129.51,127.77,121.39,111.22,97.14,63.76,59.28,45.00,42.94,42.47,31.55,26.94,19.72,19.31,16.49.
制备5
1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮
方法1：
在-78℃下，将MeMgCl的THF溶液(3.0M,4mL,12毫摩尔)缓慢地加至2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-碳酰氯(2.45g,10毫摩尔)的无水THF(50mL)溶液，且使反应混合物在-78℃下搅拌45分钟。加入NH4Cl的饱和水溶液(2mL)和水(4mL)。用EtOAc(2×10mL)萃取水层，然后用Na2SO4干燥合并的有机层，并在减压条件下浓缩。通过在硅胶快速柱层析纯化残渣，用EtOAc/己烷(1/9)洗脱，得到1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(675mg，产出率30％)。LC-MS m/z225[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.86(s,1H),2.65(s,3H)。
方法2：
将尿素(78g，1.30mol)和CH(OEt)3(211.5g,1.43摩尔)加至1,1,1-三氟戊烷-2,4-二酮(200g，1.30摩尔)的乙醇(200mL)溶液。在80℃下搅拌混合物4小时。将产生的浆料过滤。将滤饼悬浮于甲醇(300mL)并加入MeONa(77.2g,1.43摩尔)。在回流下搅拌混合物5小时，随后在室温下缓慢加入HCl(4N)至pH＝3。过滤产生的浆料并将滤饼在真空下干燥，得到为白色固体的化合物(E)-1-(2-乙酰基-4,4-三氟-3-氧代丁烯-1-基)尿素(196g，67.3％产出率)1H NMR(DMSO-d6300MHz):(Z/E)δ10.15-10.13(m,1H),8.64(s,1H),7.69-7.66(m,2H),2.25(s,3H)。LC-MS MS(ESI)m/z206.8[M-18+H]+。
在100℃下将化合物(E)-1-(2-乙酰-4,4-三氟-3-氧代丁烯-1-基)尿素(55g,0.25摩尔)和POCl3(240.7g,1.57摩尔)的混合物搅拌3小时。在室温下将混合物逐滴加至水(1.5L)并用EtOAc萃取(3X500mL)。用盐水(500mL)洗涤合并的有机层，然后在无水Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。通过在柱层析纯化残渣，用PE/EtOAc3/1洗脱，得到为浅黄色油的1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(23.5g，产出率42.7％)。1H NMR(CDCl3300MHz):δ8.80(s,1H),2.58(s,3H)。
19F NMR(920-083-1A CDCl3400MHz):δ-65.5ppm。13C NMR(903-158-1A CDCl3400MHz):δ195.9,162.3,160.1,153.8(dd,J＝50Hz),130.9,119.5(dd,J＝366Hz),30.7。
1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-1-酮和1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丁烷-1-酮
标题化合物是利用合适的Grignard试剂通过方法1制备。
制备6
5-溴代-2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶
标题化合物是利用基于Ondi,L.等人的Eur.J.Org.Chem.2004，3714的修改步骤制备的。
将4-(三氟甲基)嘧啶-2-醇(6.05g，36.9毫摩尔)、KOAc(10.85g，3eq.)、乙酸(80mL)和溴(5.9g，1eq.)的混合物在80℃加热2小时。冷却至室温后，将混合物浓缩。残渣在EtOAc和水之间分配。用EtOAc(2×)萃取水层。用盐水洗合并的有机层，然后在无水Na2SO4上干燥。过滤并浓缩后，粗制白色固体(9.38g，产量)不用进一步纯化用于下一步骤。
将5-溴代-4-(三氟甲基)嘧啶-2-醇(1.35g，5.56毫摩尔)、POCl3(15mL)和DMF(2滴，计算量)的混合物在80℃加热2小时。通过冰/水浴将混合物降温至0℃。将一些冰丸加至搅拌的混合物(放热)。搅拌20分钟后，(所加的并应已经融化)，小心地加入NaHCO3的饱和水溶液以中和一些酸。用己烷(3X)萃取混合物。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥。过滤并浓缩(仅通过旋转蒸发仪！产物是挥发性的)后，将为清油的5-溴代-2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶作为粗品用于下一步骤不用进一步纯化。
实施例1
1-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮
在N2中，将TFA(0.2mL)加至1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-羧酸叔丁酯(30mg，0.08毫摩尔，来自制备1)的CH2Cl2(1mL)溶液。在室温将混合物搅拌1小时。浓缩混合物以提供为黄色固体的1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪(30mg，TFA盐)，该固体用于下一步骤而不用进一步纯化。
在N2下，将1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(11.5mg，0.05毫摩尔) 和DIEA(9.90mg，0.08毫摩尔)加至1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪(7.5mg，0.03毫摩尔)的DMSO(1mL)溶液。在100℃搅拌混合物2小时。用水(10mL)急冷混合物并用EtOAc萃取(3×10mL)。用盐水(10mL)洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，浓缩，然后通过制备HPLC纯化以得到为白色固体的1-(2-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(2.40mg，20％产出率)的外消旋混合物。LC-MS m/z482.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.76(s,1H),8.02(s,1H),7.91(d,J＝8.4Hz,1H),7.84-7.83(m,1H),6.15(d,J＝8.0Hz,1H),5.45(d,J＝13.6Hz,1H),4.42-4.36(m,1H),4.20(brs,1H),3.91-3.80(m,1H),3.09(s,3H),2.60-2.46(m,4H),1.34(d,J＝6.8Hz,3H),1.09(d,J＝6.0Hz,3H)。
实施例2
2-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇
在N2条件、0℃下，将MeMgBr(0.6mL,0.20毫摩尔)逐滴加至1-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(20mg，0.04毫摩尔，根据实施例1制备)的THF(5mL)溶液。在0℃下搅拌混合物2小时。用NH4Cl的饱和水溶液(10mL)急冷混合物并用CH2CI2萃取(3×10mL)。用盐水(10mL)洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，浓缩，然后通过制备TLC纯化以得到为白色固体的2-(2-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇(6.90mg，33％产出率)的外消旋混合物。LC-MS m/z498.2[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.79(s,1H),7.99(d,J＝1.2Hz,1H),7.90-7.81(m,2H),6.08(d,J＝8..0Hz,1H),5.35(dd,J＝4.4and14.0Hz,1H),4.33-4.27(m,1H),4.25-4.12(m,1H),3.88-3.73(m,1H),3.09(s,3H),2.57-2.48(m,1H),1.99(s,1H),1.66(s,6H),1.32(d,J＝6.8Hz,3H),1.09(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例3
2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯
在N2下，将2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(8.7mg，0.03毫摩尔)和DIEA(6.6mg，0.05毫摩尔)加至1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪(5.0mg，0.02毫摩尔，根据实施例1制备)的DMSO(1mL)溶液。在100℃搅拌混合物2小时。用水(5mL)急冷混合物并用EtOAc萃取(3×5mL)。用盐水(5mL)洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，浓缩，然后通过制备TLC纯化以得到为白色固体的2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(5.6mg，64％产出率)的外消旋混合物。LC-m/z512.2[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.98(s,1H),8.07-7.98(m,1H),7.93-7.83(m,2H),6.16(d,J＝6.4Hz,1H),5.53-5.41(m,1H),4.43-4.32(m,3H),4.28-4.16(m,1H),3.92-3.79(m,1H),3.09(s,3H),2.61-2.46(m,1H),1.40(s,3H),1.38-1.32(m,3H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例4
(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇
在N2条件、-78℃下，将DIBAL-H(0.2mL,0.20毫摩尔,1M于THF中)逐滴加至2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(10mg，0.02毫摩尔，根据实施例3制备)的无水甲苯(0.5mL)溶液。在-78℃下，搅拌混合物2小时。将-78℃的NH4Cl的饱和溶液(5mL)加至混合物，然后用EtOAc(3×5mL)萃取混合物。用盐水(5mL)洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，浓缩，然后通过基础制备HPLC纯化以得到为白色固体的(2-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a] 吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇(5.80mg，63％产出率)的外消旋混合物。LC-MS m/z470.1[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.68(s,1H),8.01(s,1H),7.93-7.81(m,2H),6.11(d,J＝8.0Hz,1H),5.38(dd,J＝5.2Hz,J＝14.4Hz,1H),4.74(s,2H),4.38-4.30(m,1H),4.25-4.15(m,1H),3.86-3.76(m,1H),3.10(s,3H),2.56-2.47(m,1H),1.32(d,J＝6.8Hz,3H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例5
2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺
将NaOH(4.7mg，0.12毫摩尔)加至2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(20mg，0.04毫摩尔，根据实施例3制备)的MeOH(3mL)溶液。在室温搅拌该混合物过夜。用水(10mL)稀释混合物，用1N HCI酸化至pH＝3-4，然后用EtOAc萃取(3×10mL)。用盐水(10mL)洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，然后浓缩以得到为黄色固体的2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸(20mg，100％产出率)，将其用于下一步骤而不用进一步纯化。
在N2中，将HATU(59mg，0.16毫摩尔)、NH4CI(100mg，1.97毫摩尔)、Et3N(30mg，0.31毫摩尔)加至2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸(50mg，0.01毫摩尔)的DMF(10mL)溶液。在室温搅拌混合物2小时。用水(15mL)稀释混合物并用EtOAc萃取(3×15mL)。用盐水(15mL)洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤，浓缩，然后通过基础制备HPLC纯化以得到为白色固体的(2-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺(13.4mg，27％ 产出率)的外消旋混合物。LC-MS m/z483.1[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.77(s,1H),8.02(s,1H),7.92-7.83(m,2H),6.12(d,J＝8.4Hz,1H),8.78(brs,2H),5.48-5.38(m,1H),4.41-4.34(m,1H),4.25-4.12(m,1H),3.87-3.77(m,1H),3.10(s,3H),2.52(brs,1H),1.34(d,J＝6.8Hz,3H),1.10(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例6
(R)-1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮和
(S)-1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮
步骤1：
在N2条件、-78℃下，将DIBAL-H(1.70mL,1.67毫摩尔,1M于甲苯中)逐滴加至含有(R)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2，8(1H)-2-叔丁基8-甲基二羧酸酯(250mg，0.554毫摩尔，来自制备2)的DCM(5mL)溶液。在-78℃下搅拌混合物3小时。在-78℃下用氯化铵饱和水溶液(10mL)急冷反应。用EtOAc(3×20mL)萃取水层。用水(15mL)和盐水洗合并的有机层，然后在无水Na2SO4上干燥。将混合物过滤并将滤液在减压条件下蒸发。通过硅胶柱层析纯化残渣，用PE:EtOAc＝8:1至2:1洗脱，得到为白色固体的(R)-8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-羧酸叔丁酯(175mg，74.1％产出率)。
步骤2：
在N2中，将Et3N(169mg,1.67毫摩尔)和AcCl(87mg,1.12毫摩尔)加至含有CH2Cl2(5mL)中的(R)-8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-羧酸叔丁酯(236mg,0.558毫摩尔)的50mL圆底烧瓶中。在室温搅拌混合物10分钟。用水(20mL)急冷反应。用CH2Cl2(3×20L)萃取水层。用水(25mL)和盐水洗合并的有机层，然后在无水Na2SO4上干燥。将混合物过滤并将滤液在减压条件下蒸发。通过硅胶柱层析纯化残渣，用PE:EtOAc＝8:1至4:1洗脱，得到为黄色固体的(R)-8-(乙酰氧基甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-羧酸叔丁酯(210mg，81.1％产出率)。
步骤3：
在室温下，将TFA(1mL)逐滴加至(R)-8-(乙酰氧基甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-羧酸叔丁酯(210mg，0.452毫摩尔)的DCM(5mL)溶液。在室温搅拌混合物2小时。TLC显示化合物3消耗完全。在30℃减压条件下除去溶剂，然后加入DCM(10mL)。用饱和的NaHCO3溶液中和混合物至pH＝8。用DCM(3×20mL)萃取混合物，然后将合并的有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空下浓缩以得到为白色固体的(R)-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)羧酸甲酯(160mg，97.1％产出率)。其不用进一步纯化直接用于下一步骤。
步骤4：
将1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(306mg,1.37毫摩尔)和 DIEA(353mg,2.74毫摩尔)加至(R)-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)羧酸甲酯(160mg，0.456毫摩尔)的iPrOH(4mL)和DCM(2mL)溶液。在60℃搅拌混合物过夜。将水(5mL)加至混合物并用EtOAc(2×10mL)萃取水层。用水(2×10mL)和盐水洗合并的有机层，然后在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压条件下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为黄色油状的(R)-(2-(5-乙酰基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)羧酸甲酯(150mg,44.4％产出率)。
步骤5：
将LiOH(38mg,0.905毫摩尔)加至(R)-(2-(5-乙酰基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)羧酸甲酯(100mg，0.181毫摩尔)的THF(2mL)溶液。在室温搅拌混合物10分钟。用水EtOAc(3×10mL)萃取混合物。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空下浓缩。通过基础制备HPLC纯化残渣，得到粗制品(53.1mg，55.9％产出率)。通过SFC将粗制品分离，得到为白色固体的(R)-1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(32.90mg，同分异构体1)和为白色固体的(S)-1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(16.90mg，同分异构体2)。同分异构体1：(R)-1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝7.280分钟(Method:AS-H_5_5_40_2.35ML)。LC-MS m/z512.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ9.00(s,1H),8.23(s,1H),7.95(s,1H),6.11-6.07(m,1H),5.49-5.32(m,1H),5.10(s,2H),4.54(dd,J＝3.6Hz and12.4Hz,1H),4.24(dt,J＝4.8and12.0Hz,1H),3.98-3.90(m,1H),3.25(s,3H),2.61-2.57(m,1H),2.56(s,3H),1.29(d,J＝6.8Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。同分异构体2：(S)-1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮
手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝8.485分钟(方法：AS-H_5_5_40_2.35ML)。LC-MS m/z512.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ9.00(s,1H),8.24(s,1H),7.96(s,1H),6.12-6.08(m,1H),5.48-5.31(m,1H),5.11(s,2H),4.56(dd,J＝3.6Hz and12.4Hz,1H),4.24(dt,J＝4.8and12.0Hz,1H),3.98-3.91(m,1H),3.26(s,3H),2.61-2.58(m,1H),2.56(s,3H),1.29(d,J＝6.0Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例7
(R)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇和
(S)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇
在-10℃下，将MeMgCl(3.0M与甲苯中，0.5mL，1.36毫摩尔)加至(R)-(2-(5-乙酰基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)羧酸甲酯(150mg，0.271毫摩尔，部分外消旋)。在-10℃搅拌混合物3小时。在-10℃添加NH4Cl饱和溶液(10mL)，然后将混合物过滤。用DCM(3×20mL)萃取水层。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压条件下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为白色固体的外消旋混合物(65.0mg，45.5％产出率)。通过SFC分离纯化外消旋混合物，得到为白色固体的(R)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇(16.20mg，同分异构体1)和为白色固体的(S)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇(9.10mg，同分异构体2)。
同分异构体1：(R)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇手性分析 HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝8.600分钟(方法：OD-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z528.2[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.87(s,1H),8.20(s,1H),7.93(s,1H),6.02(d,J＝8.0Hz,1H),5.31(dd,J＝5.2and14.4Hz,1H),5.09(s,2H),4.50-4.46(m,1H),4.23-4.16(m,1H),3.90-3.83(m,1H),3.24(s,3H),2.59-2.51(m,1H),1.59(s,6H),1.26(d,J＝6.8Hz,3H),1.05(d,J＝6.8Hz,3H)。
根据以下步骤可以将同分异构体1重结晶为氢氯酸盐：
将乙酰氯(7μL，0.1毫摩尔)加至(R)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇(52mg，0.1毫摩尔)的甲醇(2mL)溶液，在室温下搅拌混合物4小时。在减压条件下除去甲醇。将粗生成物溶解于丙酮和EtOAc(2.5mL/2.5mL)的混合物中，随后过滤。将己烷缓慢加至滤液同时间歇加热。溶液在室温放置直至晶体形成。通过过滤收集晶体。m.p.176-179℃
LC-MS m/z528[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.95(s,1H),8.48(s,1H),8.17(s,1H),6.28(d,J＝8.0Hz,1H),5.43(dd,J1＝14.4Hz,J2＝4.8Hz,1H),5.15(s,2H),4.70(dd,J1＝12.8Hz,J2＝3.6Hz,1H),4.34(td,J1＝12.0Hz,J2＝4.8Hz,1H),3.92(dddd,J1＝14.4Hz,J2＝12.8Hz,J3＝4.8Hz,1H),3.26(s,3H),2.70–2.62(m,1H),1.60(s,6H),1.31(d,J＝6.8Hz,3H),1.13(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2：(S)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.80分钟(方法：OD-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z528.2[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.87(s,1H),8.22(s,1H),7.94(s,1H),6.03(d,J＝8.0Hz,1H),5.31(dd,J＝4.4and14.0Hz,1H),5.09(s,2H),4.51-4.47(m,1H),4.23-4.16(m,1H),3.91-3.83(m,1H),3.25(s,3H),2.60-2.51(m,1H),1.59(s,6H),1.26(d,J＝6.8Hz,3H),1.05(d,J＝6.8Hz,3H)。
替代地，2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇的外消旋混合物通过以 下方法制备。
(外消旋)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇
将(R)-甲基-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸酯(224mg，0.639毫摩尔)和2-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇(192mg，0.799毫摩尔)在小瓶中合并，然后与苯共沸以除去任何残留的水。将二氧六环(1mL)和iPr2NEt(0.22mL,1.28毫摩尔)的混合物用N2脱气10分钟。然后将该混合物加至反应小瓶并包覆的盖子密封，然后用胶带将其包裹。然后将产生的悬浮液放置于165℃硅酮油浴，在该温度下混合物变为均相的。在165℃下搅拌产生的溶液21小时。通过旋蒸除去溶剂后，利用ISCO FCC纯化混合物，用50％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到219mg为白色固体的(R)-甲基-2-(5-(2-羟丙烷-2-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸酯(62％产出率，40％ee)。
LC-MS MS(ESI)m/z556.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD,400MHz):δ8.88(s,1H),8.28(s,1H),7.98(s,1H),6.05(d,J＝8.0Hz,1H),5.32(dd,J＝4.8and14.0Hz,1H),4.53(dd,J＝3.2and12Hz,1H),4.27-4.20(m,1H),3.95(s,3H),3.90-3.83(m,1H),3.41(s,3H),2.61-2.52(m,1H),1.59(s,6H),1.27(d,J＝6.8Hz,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H)。
在-78℃，将DIBAL-H的DCM溶液(0.98mL的1.0M溶液，0.98毫摩尔)逐滴加至(R)-甲基-2-(5-(2-羟丙烷-2-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基 -7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸酯(109mg，0.196毫摩尔)的DCm(4mL)溶液。经过约1小时将反应缓慢回温至-10℃，此时加入1mL MeOH以急冷过量的DIBAL-H。加入罗谢尔盐的饱和水溶液(酒石酸钠钾(KNaC4H4O6))(5mL)和DCM(5mL)并剧烈搅拌混合物15分钟。分离DCM层并用DCM(2×5mL)萃取水层。合并DCM层，用Na2SO4干燥并蒸发以产生粗制品。利用ISCO FCC纯化，用70％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到71mg为外消旋混合物的2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇(69％)。LC-MS MS(ESI)m/z528.25[M+H]+。1H NMR(CDCl3,400MHz):δ8.72(s,1H),8.05(s,1H),7.80(s,1H),6.01(d,J＝7.6Hz,1H),5.27(d,J＝4.4and14.0Hz,1H),5.00-4.86(m,2H),4.26-4.08(m,2H),3.74-3.67(m,1H),3.15(s,3H),3.15-3.10(m,1H),2.47-2.40(m,1H),1.96(b,1H),1.59(s,6H),1.23(d,J＝6.8Hz,3H),1.10(d,J＝6.8Hz,3H)。
2-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇如以下方法制备：
在-78℃下(干冰/丙酮浴)，将1.6MMeLi的Et2O溶液(4.18mL,6.69毫摩尔)逐滴加至1.0M TiCl4的甲苯溶液(6.67mL,6.67毫摩尔)。在-78℃搅拌产生的深色溶液搅拌30分钟。在-78℃逐滴加入1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(500mg，2.23毫摩尔)的Et2O(3mL)溶液。允许反应在15个小时内在杜瓦瓶中缓慢回温至室温。TLC分析显示完全转化为更大极性的叔醇产物。然后将混合物冷却至0℃，并用NH4Cl饱和水溶液(10mL)急冷，随后用EtOAc(10mL)后处理。分离EtOAc层并用EtOAc萃取水层(2×10mL)。合并EtOAc层，用Na2SO4干燥并蒸发以产生粗制品。利用ISCO FCC纯化，用20％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到459mg为无色油状的2-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇(86％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z241.12[M+H]+。1H NMR(CDCl3,400MHz):δ9.05(s,1H),1.99(s,1H),1.67(s,6H)。
实施例8
1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪 -2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙醇(4同分异构体)
将1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(421mg,1.88毫摩尔)和DIEA(485mg,3.76毫摩尔)加至(R)-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(220mg，0.627毫摩尔)的iPrOH(4mL)和DCM(2mL)溶液。在60℃搅拌混合物过夜。将水(5mL)加至混合物并用EtOAc(2×10mL)萃取水层。用水(2×10mL)和盐水洗合并的有机层，然后在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压条件下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为黄色固体的(R)-(2-(5-乙酰基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(150mg,44.4％产出率)。
在N2条件、-78℃下，将DIBAL-H(1.10mL，1.11毫摩尔，1.0M于甲苯中)逐滴加至含有(R)-2-(5-乙酰基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(150mg，0.278毫摩尔)的DCM(3mL)溶液的50mL三颈烧瓶。在-78℃搅拌混合物3小时。在-78℃添加NH4Cl饱和溶液(10mL)，然后将混合物过滤。用DCM(3×20mL)萃取水层。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压条件下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为白色固体的外消旋混合物(81.0mg，56.7％产出率)。通过SFC分离纯化外消旋混合物，得到为白色固体的同分异构体1(10.60mg，47.1％产出率)、为白色固体的同分异构体2(7.10mg，31.6％产出率)、为白色固体的同分异构体3(4.70mg，26.1％产出率)和为白色固体的同分异构体4(6.00mg，33.3％产出率)。
同分异构体1
手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝8.397分钟(方法：OD-H_5_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z514.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.89(s,1H),8.20(s,1H),7.93(s,1H),6.03(d,J＝8.0Hz,1H),5.32(dd,J＝4.4and14.4Hz,1H),5.11-5.08(m,3H),4.50-4.46(m,1H),4.28-4.16(m,1H),3.90-3.83(m,1H),3.24(s,3H),2.72-2.39(m,1H),1.42(d,J＝6.4Hz,3H),1.26(d,J＝6.8Hz,3H),1.04(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2
手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.700分钟(方法：AS-H_5_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z514.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.89(s,1H),8.21(s,1H),7.93(s,1H),6.03(d,J＝8.0Hz,1H),5.32(dd,J＝4.4and14.4Hz,1H),5.11-5.08(m,3H),4.50-4.46(m,1H),4.23-4.16(m,1H),3.95-3.79(m,1H),3.25(s,3H),2.59-2.51(m,1H),1.42(d,J＝6.0Hz,3H),1.26(d,J＝6.4Hz,3H),1.04(d,J＝6.4Hz,3H)。
同分异构体3
手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝7.666分钟(方法：AS-H_5_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z514.2[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.89(s,1H),8.22(s,1H),7.94(s,1H),6.03(d,J＝8.0Hz,1H),5.32(dd,J＝4.0and14.0Hz,1H),5.11-5.08(m,3H),4.51-4.47(m,1H),4.24-4.15(m,1H),3.91-3.84(m,1H),3.25(s,3H),2.61-2.43(m,1H),1.42(d,J＝6.0Hz,3H),1.26(d,J＝6.8Hz,3H),1.05(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体4
手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝9.621分钟(方法：OD-H_5_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z514.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.89(s,1H),8.21(s,1H),7.93(s,1H),6.03(d,J＝8.0Hz,1H),5.32(dd,J＝4.0and14.0Hz,1H),5.11-5.08(m,3H),4.50-4.23(m,1H),4.23-4.15(m,1H),3.91-3.80(m,1H),3.25(s,3H),2.59-2.51(m,1H),1.42(d,J＝6.4Hz,3H),1.26(d,J＝6.8Hz,3H),1.05(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例9
(R)-1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-1(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-1-酮和
(S)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-1-酮
标题化合物通过类似于实施例6中描述的以下步骤制备，其利用1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-1-酮而不是1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮。
同分异构体1：(R)-1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-1-酮手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.87分钟(方法：OJ-H_3_5_40_2.5ML)。LC-MS m/z526.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.94(s,1H),8.24(s,1H),7.96(s,1H),6.17-6.02(m,1H),5.43-5.32(m,1H),5.11(s,2H),4.54(dd,J＝4.0and12.0Hz,1H),4.24(dt,J＝4.8and12.0Hz,1H),3.98-3.90(m,1H),3.27(s,3H),2.93(q,J＝6.8Hz,2H),2.61-2.55(m,1H),1.29(d,J＝6.8Hz,3H),1.15(t,J＝7.2Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2：(S)-1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-1-酮手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝8.40分钟(方法：OJ-H_3_5_40_2.5ML)。LC-MS m/z526.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.93(s,1H),8.21(s,1H),7.93(s,1H),6.15-6.01(m,1H),5.47-5.31(m,1H),5.09(s,2H),4.53(dd,J＝4.0and12.0Hz,1H),4.24(dt,J＝4.8and12.0Hz,1H),3.97-3.90(m,1H),3.24(s,3H),2.92(q,J＝6.8Hz,2H),2.60-2.55(m,1H),1.28(d,J＝6.8Hz,3H),1.14(t,J＝7.2Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例10
1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-1-醇(4同分异构体)
标题化合物通过类似于实施例8中描述的以下步骤制备，其利用1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-1-酮代替1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮。
同分异构体1：白色固体手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.529分钟(方法：OD-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS m/z528.2[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.81(s,1H),8.13(s,1H),7.88(s,1H),6.10(d,J＝7.6Hz,1H),5.38-5.34(m,1H),5.05-5.02(m,2H),4.98-4.90(m,1H),4.34-4.30(m,1H),4.21-4.17(m,1H),3.82-3.74(m,1H),3.23(s,3H),3.06(t,J＝7.2Hz,1H),2.52-2.50(m,1H),1.94-1.93(m,1H),1.80-1.76(m,2H),1.31(d,J＝6.8Hz,3H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H),0.99(t,J＝7.2Hz,3H)。
同分异构体2：白色固体手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝7.502分钟(方法：OD-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS m/z528.2[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.82(s,1H),8.13(s,1H),7.88(s,1H),6.10(d,J＝7.6Hz,1H),5.39-5.34(m,1H),5.05-5.02(m,2H),4.98-4.90(m,1H),4.34-4.30(m,1H),4.21-4.16(m,1H),3.82-3.74(m,1H),3.22(s,3H),3.10(t,J＝6.8Hz,1H),2.52-2.49(m,1H),2.01-2.00(m,1H),1.80-1.75(m,2H),1.30(d,J＝6.8Hz,3H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H),0.99(t,J＝7.2Hz,3H)。
同分异构体3：白色固体手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝5.173分钟(方法：OJ-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS m/z528.2[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.81(s,1H),8.13(s,1H),7.88(s,1H),6.10(d,J＝7.6Hz,1H),5.38-5.34(m,1H),5.05-5.02(m,2H),4.98-4.90(m,1H),4.34-4.30(m,1H),4.21-4.17(m,1H),3.82-3.76(m,1H),3.23(s,3H),3.07(t,J＝6.8Hz,1H),2.52-2.50(m,1H),1.94-1.93(m,1H),1.80-1.75(m,2H),1.31(d,J＝6.8Hz,3H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H),0.99(t,J＝7.2Hz,3H)。
同分异构体4：白色固体手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝5.817分 钟(方法：OJ-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS m/z528.2[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.81(s,1H),8.13(s,1H),7.88(s,1H),6.10(d,J＝8.0Hz,1H),5.38-5.35(m,1H),5.05-5.04(m,2H),4.98-4.90(m,1H),4.34-4.30(m,1H),4.21-4.18(m,1H),3.81-3.76(m,1H),3.23(s,3H),3.06(t,J＝6.4Hz,1H),2.52-2.50(m,1H),1.94-1.93(m,1H),1.81-1.75(m,2H),1.31(d,J＝6.8Hz,3H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H),0.99(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例11
(R)-1-(2-((R)-8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-1(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丁烷-1-醇和
(S)-2-(2-((R)-8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丁烷-1-醇
标题化合物通过类似于实施例8中描述的以下步骤制备，其利用1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丁烷-1-酮代替1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮。
同分异构体1：手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝8.450分钟(方法：OD-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z542.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.87(s,1H),8.26(s,1H),7.98(s,1H),6.06(d,J＝8.0Hz,1H),5.36-5.33(m,1H),5.14(s,2H),4.54-4.51(m,1H),4.27-4.20(m,1H),3.94-3.86(m,1H),3.29(s,3H),2.60-2.52(m,1H),1.78-1.71(m,1H),1.60-1.49(m,2H),1.43-1.26(m,5H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H),0.96(t,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2：手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝10.264分钟(方法：OD-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z542.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.87(s,1H),8.26(s,1H),7.98(s,1H),6.06(d,J＝8.0Hz,1H),5.36-5.33(m,1H),5.14(s,2H),4.54-4.51(m,1H),4.27-4.20(m,1H),3.94-3.86(m,1H),3.29(s,3H),2.60-2.52(m,1H),1.78-1.71(m,1H),1.60-1.49(m,2H),1.43-1.26(m,5H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H),0.96(t,J＝6.8Hz,3H)。
实施例12
(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯
将2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(36mg,0.14毫摩尔)和DIEA(36mg,0.28毫摩尔)加至(R)-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)甲醇(30mg，0.093毫摩尔)的CH2Cl2(0.5mL)和iPrOH(0.5mL)溶液。在70℃搅拌混合物过夜。在减压条件下浓缩混合物。将水(5mL)加至混合物并用EtOAc(3×10mL)萃取水层。用水和盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为白色固体的(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(42.0mg,83.7％产出率)。手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝9.927分钟(方法：OD-H_5_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z542.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD300MHz):δ8.96(s,1H),8.12(s,1H),7.85(s,1H),6.12-6.00(m,1H),5.45-5.29(m,1H),5.01(s,2H),4.51-4.47(m,1H),4.33-4.18(m,3H),3.91(t,J＝10.8Hz,1H),3.18(s,3H),2.63-2.47(m,1H),1.35-1.26(m,6H),1.05(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例13
(R)-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-1(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇和
(S)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇
将2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(174mg,0.684毫摩尔)和DIEA(177mg,1.37毫摩尔)加至(R)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(80mg，0.228毫摩尔)的iPrOH(2mL)和DCM(1mL)溶液。在60℃搅拌混合物过夜。将水(5mL)加至混合物并用EtOAc(2×10mL)萃取水层。用水(2×10mL)和盐水洗合并的有机层，然后在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空条件下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为黄色固体的(R)-(2-(5-(乙氧羰基)-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(75mg,57.8％产出率)。
在-78℃下，将DIBAL-H(1M于甲苯中，0.50mL，0.528毫摩尔)加至(R)-(2-(5-(乙氧羰基)-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(75mg，0.132毫摩尔)的DCM(3mL)溶液。在-78℃搅拌混合物3小时。在-78℃添加NH4Cl饱和溶液(10mL)，然后将混合物过滤。用DCM(3×20mL)萃取水层。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压条件下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为白色固体的外消旋混合物(56.0mg，85.1％产出率)。通过SFC分离来分离外消旋混合物，得到为白色固体的(R)-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇(38.10mg，同分异构体1)和为白色固体的(S)-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇(11.90mg，同分异构体2)。
同分异构体1：(R)-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝10.281分钟(方法：AD-H_5_5_40_2.35ML).LC-MS MS(ESI) m/z500.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.73(s,1H),8.20(s,1H),7.93(s,1H),6.04(d,J＝8.0Hz,1H),5.33(dd,J＝4.4and14.0Hz,1H),5.09(s,2H),4.63(s,2H),4.50-4.46(m,1H),4.28-4.06(m,1H),3.91-3.83(m,1H),3.24(s,3H),2.59-2.47(m,1H),1.26(d,J＝6.8Hz,3H),1.04(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2：(S)-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝8.340分钟(方法：AD-H_5_5_40_2.35ML).LC-MS MS(ESI)m/z500.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.73(s,1H),8.22(s,1H),7.94(s,1H),6.04(d,J＝8.4Hz,1H),5.33(dd,J＝4.8and14.4Hz,1H),5.09(s,2H),4.63(s,2H),4.52-4.45(m,1H),4.24-4.17(m,1H),3.91-3.84(m,1H),3.25(s,3H),2.68-2.46(m,1H),1.26(d,J＝6.8Hz,3H),1.05(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例14
(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-1(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸和
(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸
将(R)-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)乙酸甲酯(284mg，0.8毫摩尔)、2-氯代-4-(四氟甲基)嘧啶-5羧酸乙酯(296mg，1.2毫摩尔，1.5eq.)和DIEA(310mg，2.4毫摩尔，3eq.)在CH2Cl2/i-PrOH(3mL/3mL)中的混合物在80℃搅拌16小时。TLC显示化合物消耗完全，PE:EtOAc＝1:1。在真空下除去溶剂并将残渣溶解于EtOAc(10mL)。将水(10mL)加至混合物。用EtOAc(10mL×3)萃取混合物。在无水Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤并在真 空下浓缩。通过硅胶柱层析纯化残渣，用PE:EtOAc＝5:1洗脱，得到为浅黄色固体的(R)-2-(8-(乙酰氧基甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(0.41g,87％产出率)。
将LiOH.H2O(86mg,2毫摩尔)加入(R)-2-(8-(乙酰氧基甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(0.1g，0.17毫摩尔)的MeOH/H2O(5mL/1mL)溶液。在室温下搅拌混合物16小时。通过40℃下真空移除过量的甲醇。加入水(5mL)，在0℃下用1NHCl中和混合物至pH＝6。用CH2Cl2(4×10mL)萃取水层。在无水Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤并在真空下浓缩以产生粗制品。通过SFC纯化粗制品，得到为白色固体的(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸(34.50mg，40％产出率，同分异构体1)和为白色固体的(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸(6.40mg，7％产出率，同分异构体2)。
同分异构体1：(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.474分钟(方法：OJ-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z514.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ9.05(s,1H),8.20(s,1H),7.91(s,1H),6.20-6.15(m,1H),5.50-5.35(m,1H),5.08(s,2H),4.60-4.50(m,1H),4.35-4.20(m,1H),4.03-3.89(m,1H),3.25(s,3H),2.70-2.53(m,1H),1.30(d,J＝6.8Hz,3H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H).
同分异构体2：(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝8.468分钟(方法:OJ-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z514.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ9.02(s,1H),8.25(s,1H),8.00(s,1H),6.20-6.15(m,1H),5.50-5.35(m,1H),5.12(s,2H),4.60-4.50(m,1H),4.35-4.20(m,1H),4.03-3.89(m,1H),3.28(s,3H),2.70-2.50(m,1H),1.30(d,J＝6.8Hz,3H),1.08(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例15
(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺和
(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺
将HATU(97mg，0.25毫摩尔)和Et3N(52mg,0.51毫摩尔)加至(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸(100mg，0.19毫摩尔，部分外消旋)的DMF(2mL)溶液。在室温搅拌混合物1小时。一次性加入NH4Cl(19mg,0.34毫摩尔)。在室温搅拌混合物6小时。加入水(10mL)然后用EtOAc(4×10mL)萃取水层。用水(3×10mL)和盐水洗合并的有机层，然后在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC和SFC分离纯化残渣，得到为白色固体的(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺(55.2mg，56.7％产出率，同分异构体1)和为白色固体的(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺(10.5mg，10.8％产出率，同分异构体2)。
同分异构体1：(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.084分钟(方法:OJ-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z513.0[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.71(s,1H),8.25(s,1H),7.97(s,1H),6.13-6.01(m,1H),5.45-5.30(m,1H),5.13(s,2H),4.59-4.50(m,1H),4.31-4.18(m,1H),4.00-3.86(m,1H),3.27(s,3H),2.65-2.50(m,1H),1.28(d,J＝6.8Hz,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2：(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺
手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝7.218分钟(方法：OJ-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z513.1[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.71(s,1H),8.25(s,1H),7.97(s,1H),6.13-6.02(m,1H),5.45-5.30(m,1H),5.12(s,2H),4.60-4.50(m,1H),4.32-4.18(m,1H),4.00-3.86(m,1H),3.28(s,3H),2.65-2.50(m,1H),1.28(d,J＝6.8Hz,3H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例16
(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-1(1H)-基)-N-甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺和
(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-N-甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺
标题化合物通过类似于实施例15中描述的以下步骤制备，其利用甲胺盐酸盐代替氯化铵作为反应物。
同分异构体1：(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-N-甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺。手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.355分钟(方法：AS-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z548.9[M+Na]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.68(s,1H),8.27(s,1H),7.99(s,1H),6.14-6.00(m,1H),5.45-5.30(m,1H),5.13(s,2H),4.60-4.50(m,1H),4.30-4.18(m,1H),4.00-3.86(m,1H),3.30(s,3H),2.90(s,3H),2.66-2.51(m,1H),1.31(d,J＝6.8Hz,3H),1.15(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2：(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-N-甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺。手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.486分钟(方法：AS-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z549.0[M+Na]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.68(s,1H),8.29(s,1H),8.00(s,1H),6.14-6.00(m,1H),5.45-5.30(m,1H),5.13(s,2H),4.62-4.52(m,1H),4.32-4.20(m,1H),4.02-3.87(m,1H),3.30(s,3H),2.91(s,3H), 2.67-2.51(m,1H),1.31(d,J＝6.8Hz,3H),1.11(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例17
(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-1(1H)-基)-N,N-二甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺和
(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-N,N-二甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺
标题化合物通过类似于实施例15中描述的以下步骤制备，其利用二甲胺盐酸盐而不是氯化铵作为反应物。
同分异构体1：(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-N，N-二甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺。手性分析HPLC：在8分钟色谱分析中tR＝3.649分钟(方法：AS-H_S_3_5_40_3ML)。LC-MS MS(ESI)m/z563.1[M+Na]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.62(s,1H),8.23(d,J＝6.4Hz,1H),7.95(d,J＝5.2Hz,1H),6.09-5.98(m,1H),5.50-5.26(m,1H),5.10(d,J＝4.4Hz,2H),4.59-4.50(m,1H),4.32-4.20(m,1H),4.03-3.87(m,1H),3.30-3.25(m,3H),3.11(s,3H),2.95(s,3H),2.67-2.51(m,1H),1.31(d,J＝6.8Hz,3H),1.09(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2：(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-N，N-二甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺。手性分析HPLC：在8分钟色谱分析中tR＝4.502分钟(方法：AS-H_S_3_5_40_3ML)。LC-MS MS(ESI)m/z563.1[M+Na]+。
1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.62(s,1H),8.27(s,1H),7.98(s,1H),6.09-5.98(m,1H),5.49-5.28(m,1H),5.13(s,2H),4.59-4.50(m,1H),4.33-4.20(m,1H),4.05-3.90(m,1H),3.30(s,3H),3.12(s,3H),2.95(s,3H),2.68-2.52(m,1H),1.32(d,J＝6.8Hz,3H),1.10(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例18
(R)-(1-异丙基-2-(4-甲氧基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-7-(甲磺酰基)-1，2，3，4-四羟苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)甲醇
在0℃下，将ZnCl2(1M于乙醚,0.2mL,0.2毫摩尔)加至2,4-二氯代-5-(三氟甲基)嘧啶(20.0mg，0.092毫摩尔)的DCE(1mL)和t-BuOH(1mL)溶液。在0℃搅拌混合物1小时。在0℃下通过注射器将(R)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四羟苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(31mg，0.09毫摩尔)的DCE(1mL)和t-BuOH(1mL)溶液加至反应混合物。加入后，在室温搅拌产生的混合物过夜。在真空下浓缩反应混合物。将水(5mL)和EtOAc(5mL)加至混合物。用EtOAc(3×10mL)萃取水相。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为白色固体的(R)-2-(4-氯代-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(20mg,42.6％产出率)。
将NaHCO3(25mg,0.29毫摩尔)加至(R)-2-(4-氯代-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(15mg，0.028毫摩尔)的甲醇(4mL)溶液。在60℃下搅拌混合物20小时。在真空下浓缩混合物。将水(5mL)和EtOAc(5mL)加至混合物。用EtOAc(3×10mL)萃取水相。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为白色固体的(R)-1-异丙基-2-(4-甲氧基-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(13.0mg,87.2％产出率)。
在-78℃下，将DIBAL H(1M于甲苯中，0.1mL，0.1毫摩尔)加至(R)-1-异丙基-2-(4-甲氧基-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并 [4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(15mg，0.028毫摩尔)的CH2Cl2(2mL)溶液。在-78℃搅拌混合物2小时并回温至室温维持6小时。加入NH4Cl饱和溶液(1mL)，然后将混合物过滤。在真空下浓缩滤液。将水(5mL)和EtOAc(5mL)加至混合物。用EtOAc(3×5mL)萃取水层。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为白色固体的(R)-(1-异丙基-2-(4-甲氧基-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)甲醇(3.50mg,24.6％产出率)。手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.598分钟，94.60％ee(方法：OD-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z500.1[M+H]+。1H NMR(CDCl3300MHz):δ8.31(s,1H),8.12(s,1H),7.86(s,1H),6.02-5.98(m,1H),5.43-5.38(m,1H),5.04-4.98(m,2H),4.32-4.28(m,1H),4.16(dt,J＝5.1and12.0Hz,1H),4.01(s,3H),3.77-3.68(m,1H),3.21(s,3H),3.11-3.06(m,1H),2.50-2.47(m,1H),1.30(d,J＝6.6Hz,3H),1.07(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例19
(R)-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇
将2,4-二氯嘧啶-5-羧酸甲酯(27mg，0.13毫摩尔)的二氯乙烷/叔丁醇(1:1,2mL)溶液冷却至0℃。加入ZnCl2溶液(1.0M于乙醚中,0.29mL,0.29毫摩尔,2.2eq.)。搅拌1小时后，在0℃下缓慢加入(R)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(30mg，0.09毫摩尔)的二氯甲烷/叔丁醇(1:1,2mL)溶液。在室温搅拌该混合物过夜。加入水(10mL)然后用EtOAc(10×10mL)萃取混合物。在无水Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为固体的(R)-2-(4-氯代-5-(甲氧羰基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸 甲酯(34mg,77.3％产出率)。
在N2中，在搅拌下将K2CO3(54mg,0.4毫摩尔)加至(R)-2-(4-氯代-5-(甲氧羰基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(20mg，0.04毫摩尔)在5mL二氧六环中的溶液，随后将Pd(PPh3)4(5mg,0.004毫摩尔)加入。将混合物回流2小时直至原料消失。冷却反应混合物至室温。在真空下除去二烷。加入水(10mL)然后用EtOAc(10×10mL)萃取混合物。在无水Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为无色油状的(R)-1-异丙基-2-(5-(甲氧羰基)-4-甲基嘧啶-2-基)-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(15mg,75％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z502.1[M+H]+。
在-78℃下，将DIBAL H(1M于甲苯中，0.3mL，0.3毫摩尔)加至(R)-1-异丙基-2-(5-(甲氧羰基)-4-甲基嘧啶-2-基)-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯的甲苯(2mL)溶液。在-78℃搅拌混合物2小时，然后在室温搅拌30分钟。在0℃缓慢地加入NH4Cl饱和溶液(5mL)，然后将混合物过滤。用EtOAc(3×10mL)萃取水层。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为无色油状的(R)-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇(1.6mg,12.3％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z446.2[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.26(s,1H),8.23(s,1H),7.99(s,1H),6.00(d,J＝8.8Hz,1H),5.17(s,2H),4.90-4.79(m,1H),4.67(s,2H),4.45-4.44(m,1H),4.25-4.18(m,1H),4.15-4.04(m,1H),3.31(s,3H),2.58-2.49(m,1H),2.45(s,3H),1.25(d,J＝6.8Hz,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例20
(R)-(4-环丙基-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)嘧啶-5-基)甲醇和
(S)-(4-环丙基-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)嘧啶-5-基)甲醇
在N2中，将K3PO4(3.1g,12毫摩尔)加至2,4-二氯嘧啶-5-羧酸甲酯(852mg，4毫摩尔)和环丙硼酸(344mg，4毫摩尔)的THF(10mL)溶液，随后将Pd(dppf)Cl2(292mg,0.4毫摩尔)加入。将混合物回流4小时直至原料消失。冷却反应混合物至室温。在真空下除去THF。加入水(20mL)然后用EtOAc(20×10mL)萃取混合物。在无水Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为白色固体的2-氯代-4-环丙基嘧啶-5-羧酸甲酯(220mg，26％产出率)。
将(R)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(77mg，0.22毫摩尔)、2-氯代-4-环丙基嘧啶-5-羧酸甲酯(57mg，0.26毫摩尔，1.2eq.)和DIEA(172mg，1.3毫摩尔，6eq.)在CH2Cl2/i-PrOH(1mL/1mL)中的混合物在120℃搅拌16小时。TLC显示(R)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯消耗完全(PE：EtOAc＝1:1)。加入水(10mL)然后用EtOAc(10mL×3)萃取混合物。在无水Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC纯化残渣，得到为无色油状的(R)-2-(4-环丙基-5-(甲氧羰基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(50mg,43％产出率)。
在-78℃下，将DIBAL H(2M于甲苯中，1mL，1毫摩尔)加至(R)-2-(4-环丙基-5-(甲氧羰基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(50mg，0.1毫摩尔)的CH2Cl2(2mL)溶液。在-78℃搅拌混合物1小时，然后在室温搅拌1小时。加入NH4Cl饱和溶液(5mL)，然后将混合物过滤。用EtOAc(3×5mL)萃取水层。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4 上干燥，过滤并在真空下浓缩。通过制备TLC然后通过SFC分离纯化残渣，得到为无色油状的(R)-(4-环丙基-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪2(1H)-基)嘧啶-5-基)甲醇(11.50mg，24.5％产出率，同分异构体1)和为无色油状的(S)-(4-环丙基-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪2(1H)-基)嘧啶-5-基)甲醇(7.10mg，15.1％产出率，同分异构体2)。
同分异构体1：(R)-(4-环丙基-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪2(1H)-基)嘧啶-5-基)甲醇手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝9.898分钟(方法:OD-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z472.2[M+H]+。1H NMR(CD3OD400MHz):δ8.23(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),6.00(d,J＝8.0Hz,1H),5.27-5.18(m,1H),5.13(s,2H),4.63(s,2H),4.48-4.39(m,1H),4.23-4.11(m,1H),3.85-3.73(m,1H),3.28(s,3H),2.58-2.42(m,1H),2.35-2.22(m,1H),1.28(d,J＝6.8Hz,3H),1.21-1.09(m,4H),1.05(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2：(S)-(4-环丙基-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪2(1H)-基)嘧啶-5-基)甲醇手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝10.770分钟(方法:OD-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS MS(ESI)m/z472.2[M+H]+。1H NMR(G000237343901-086-P1CD3OD400MHz):δ8.23(s,1H),8.18(s,1H),8.00(s,1H),6.02(d,J＝8.0Hz,1H),5.27-5.22(m,1H),5.13(s,2H),4.64(s,2H),4.47-4.40(m,1H),4.23-4.11(m,1H),3.85-3.74(m,1H),3.28(s,3H),2.57-2.44(m,1H),2.32-2.20(m,1H),1.27(d,J＝6.8Hz,3H),1.21-1.09(m,4H),1.05(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例21
(R)-(1-异丙基-2-(5-甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-7-(甲磺酰基)-1，2，3，4-四羟苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)甲醇
将(R)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1，2，3，4-四羟苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(45mg，0.128毫摩尔)、5-溴代-2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶(40mg，1.2eq.)、DIPEA(90μL,4eq.)和DMF(1.5mL)的混合物放进微波炉中并在130℃加热90分钟。混合物在EtOAc和水之间分配。用EtOAc萃取水层两次。用盐水洗合并的有机层，在Na2SO4上干燥。过滤并浓缩后，通过ISCO(12g色谱柱,10-40％EtOAc的己烷溶液)纯化残渣，得到3.4mg(47％产出率)的(R)-2-(4-溴代-3-(三氟甲基)苯基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四羟苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯。
将(R)-2-(5-溴代-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1，2，3，4-四羟苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(7mg，0.012毫摩尔)、Pd(PPh3)4(1mg，计算量)2MK2CO3溶液(100μL，过量)和干燥1,4-二氧六环(700μL)脱气并用氮气再充气3次。加入2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧三硼环(5mg，过量)的1,4-二氧六环(100μL)溶液。将混合物在微波炉中120℃下加热30分钟。浓缩后，过滤残渣并通过Gilson纯化，得到3.5mg(R)-1-异丙基-2-(5-甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-7-(甲磺酰基)-1，2，3，4-四羟苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(56％产出率)。LC-MS：m/z512.3[M+H]+。
将(R)-1-异丙基-2-(5-甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-7-(甲磺酰基)-1，2，3，4-四羟苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-羧酸甲酯(3.5mg，0.007毫摩尔)的无水甲苯(3mL)溶液降温至-78℃。加入DIBAL-H的甲苯溶液(1M,35μL,5equiv.)。将混合物搅拌3小时。LC-MS指示反应是完全的。在被回温至室温前，用饱和的 NH4Cl溶液(200μL)和甲醇(200μL)急冷混合物。浓缩后，过滤残渣并通过Gilson纯化，得到1.53mg(R)-(1-异丙基-2-(5-甲基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-7-(甲磺酰基)-1，2，3，4-四羟苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-8-基)甲醇(46％产出率)。LC-MS：m/z484.3[M+H]+。1H NMR(CD3OD,400MHz):δ8.52(s,1H),8.27(s,1H),7.99(s,1H),6.05(d,J＝8.0Hz,1H),5.30(dd,J＝14.4Hz,4.8Hz,1H),5.12(s,2H),4.51(dd,J＝12.0Hz,3.2Hz,1H),4.22(td,12.0Hz,5.2Hz,1H),3.88(m,1H),3.26(s,1H),2.57(m,1H),2.29(s,3H),1.27(d,6.4Hz,3H),1.06(d,6.4Hz,3H)。
实施例22
(R)-1-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮和
(S)-1-(2-(1-异丙基-7--(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮
将1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(172.50mg，0.76毫摩尔)加至1-异丙基-7-(甲硫基)-1，2，3，4-四羟吡嗪[1,2-a]吲哚(100mg，0.38毫摩尔)和DIPEA(246.72mg，1.91毫摩尔)的i-PrOH(2mL)溶液。在室温搅拌混合物过夜。浓缩混合物并通过硅胶制备TLC纯化，用PE/EtOAc1:1洗脱，得到为无色油状的1-(2-(1-异丙基-7-(甲硫基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(120mg，69.67％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z449.2[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.66(s,1H),7.44-7.40(m,1H),7.06(d,J＝8.4Hz,1H),6.27-6.25(m,1H),5.79-577(m,1H),5.13-5.02(m,1H),4.21-4.16(m,1H),3.97-3.91(m,1H),3.82-3.71(m,1H),2.48(s,3H),2.46(s,3H),2.21-2.15(m,1H),1.12-1.08(m,3H),0.96-0.93(m,3H)。
将NaMoO4-2H2O(107.61mg,0.49毫摩尔)加至0℃下的1-(2-(1-异丙基-7-(甲 硫基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(110mg，0.23毫摩尔)的甲醇(3mL)溶液。将反应混合物在0℃搅拌10分钟，然后将H2O2(5mL,30％重量)加至形成的混合物。将混合物在室温搅拌1小时。用二氯甲烷(30mL)/i-PrOH(10mL)的混合溶剂萃取混合物三次。浓缩合并的有机层，通过硅胶制备TLC纯化，用PE/EtOAc1:1洗脱，然后用SFC分离来纯化，得到为无色油状的(R)-1-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(26.90mg，22.38％产出率，同分异构体1)和为无色油状的(S)-1-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(23.80mg，20.20％产出率，同分异构体2)。
同分异构体1：(S)-1-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝7.972分钟(方法:AD-H_5_5_40_2.35ML).LC-MS(ESI)m/z481.2[M+H]+,503.1[M+Na]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.75-8.73(m,1H),7.95(s,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(d,J1＝8.4Hz,J2＝1.6Hz,1H),6.51-6.48(m,1H),5.94-5.92(m,1H),5.25-5.22(m,1H),4.41-4.36(m,1H),4.15-4.10(m,1H),3.88-3.84(m,1H),3.08(s,3H),2.54(s,3H),2.34-2.27(m,1H),1.21-1.18(m,3H),1.06-1.05(m,3H)。
同分异构体2：(S)-1-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝11.077分钟(方法:AD-H_5_5_40_2.35ML).LC-MS MS(ESI)m/z481.1[M+H]+,503.1[M+Na]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.75-8.73(m,1H),7.95(s,1H),7.73-7.70(m,1H),7.65(d,J1＝8.4Hz,J2＝1.6Hz,1H),6.51-6.48(m,1H),5.94-5.92(m,1H),5.25-5.22(m,1H),4.41-4.36(m,1H),4.15-4.10(m,1H),3.88-3.84(m,1H),3.08(s,3H),2.54(s,3H),2.34-2.27(m,1H),1.21-1.18(m,3H),1.07-1.05(m,3H)。
实施例23
(R)-2-(2-(1-异丙基-7--(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇和
(S)-2-(2-(1-异丙基-7--(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇
在N2中，在0℃下将LaCl3-2LiCl(0.2mL,0.12毫摩尔,0.6M)加至(R)-1-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(5mg，0.01毫摩尔)的THF(1mL)溶液。将反应混合物在0℃搅拌1小时。将MeMgCl(0.3mL,0.9毫摩尔,3M)加至形成的混合物，然后将反应混合物在0℃搅拌1小时。在0℃下用NH4Cl的饱和水溶液(5mL)急冷反应，然后用EtOAc(30mL×3)萃取。在无水Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤并浓缩，通过制备TLC纯化，用PE/EtOAc 1:1洗脱，然后通过SFC分离来纯化，得到为无色油状的(R)-2-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇(1.2mg，24.68％产出率，同分异构体1)。手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.394分钟(方法：OJ-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS m/z497.3[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.75(s,1H),7.93(s,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(d,J1＝8.4Hz,J2＝1.6Hz,1H),6.48(s,1H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),5.16-5.12(m,1H),4.32-4.28(m,1H),4.14-4.07(m,1H),3.86-3.77(m,1H),3.07(s,3H),2.34-2.25(m,1H),1.92(s,1H),1.68(s,6H),1.18(d,J＝7.2Hz,3H),1.06(d,J＝7.2Hz,3H)
(S)-2-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇(同分异构体2)是以和(S)-1-(2-(1-异丙基-7--(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮相似的方式制备的。手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝7.631分钟(方法:AS-H_3_5_40_2.35ML)。LC-MS m/z497.2[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.75(s,1H),7.93(s,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(d,J1＝8.4Hz,J2＝1.6Hz,1H),6.48(s,1H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),5.16-5.12(m,1H), 4.32-4.28(m,1H),4.14-4.07(m,1H),3.86-3.77(m,1H),3.07(s,3H),2.34-2.25(m,1H),1.92(s,1H),1.68(s,6H),1.18(d,J＝7.2Hz,3H),1.06(d,J＝7.2Hz,3H)。
实施例24
1-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙醇(4种同分异构体)
在0℃下，将NaBH4(7.8mg,0.21毫摩尔)加至1-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(10mg，21μmol)的甲醇(2mL)溶液。在回流时搅拌混合物2小时。用水(5mL)急冷混合物并浓缩以除去甲醇，得到粗制品，用EtOAc萃取粗制品(30mL×3)。在无水Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤，浓缩，通过硅胶制备TLC纯化，用PE/EtOAc1:1洗脱，然后用SFC分离来纯化，得到为无色油状的同分异构体1(0.80mg，7.97％产出率)、为无色油状的同分异构体2(0.90mg，8.96％产出率)、为无色油状的同分异构体3(1.20mg，11.95％产出率)。
同分异构体1：手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝3.16分钟(方法：AD-H_3_30％_2.35ML)。LC-MS m/z483.0[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.83(s,1H),7.93(s,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.52(d,J＝7.2Hz,1H),6.47(s,1H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),5.24-5.14(m,2H),4.33-4.31(m,1H),4.16-4.09(m,1H),3.85-3.81(m,1H),3.08(s,3H),2.36-2.29(m,1H),1.53-1.51(m,3H),1.19(d,J＝6.4Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2：手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝4.04分钟(方法：AD-H_3_30％_2.35ML)。LC-MS m/z483.0[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.83(s,1H),7.93(s,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.52(d,J＝7.2Hz,1H),6.47(s,1H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),5.24-5.14(m,2H),4.33-4.31(m,1H), 4.16-4.09(m,1H),3.85-3.81(m,1H),3.08(s,3H),2.36-2.29(m,1H),1.53-1.51(m,3H),1.19(d,J＝6.4Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体3：手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝6.08分钟(方法：AD-H_3_30％_2.35ML)。LC-MS m/z483.0[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.83(s,1H),7.93(s,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.61(d,J＝7.2Hz,1H),6.47(s,1H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),5.24-5.14(m,2H),4.33-4.31(m,1H),4.16-4.09(m,1H),3.85-3.81(m,1H),3.08(s,3H),2.36-2.29(m,1H),1.53-1.51(m,3H),1.19(d,J＝6.4Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体4：手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝10.21分钟(方法：AD-H_3_30％_2.35ML)。LC-MS m/z483.0[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.84(s,1H),7.93(s,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.61(d,J＝7.2Hz,1H),6.47(s,1H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),5.24-5.14(m,2H),4.33-4.31(m,1H),4.16-4.09(m,1H),3.85-3.81(m,1H),3.08(s,3H),2.36-2.29(m,1H),1.53-1.51(m,3H),1.19(d,J＝6.4Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例25
(R)-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇和
(S)-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇
将2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(196mg，0.77毫摩尔)加至1-异丙基-7-(甲硫基)-1,2,3,4-四羟吡嗪[1,2-a]吲哚(100mg，0.38毫摩尔)和DIPEA(248.3mg，1.921毫摩尔)的i-PrOH(3mL)溶液。在室温搅拌混合物过夜。浓缩混合物并通过硅胶制备TLC纯化，用PE/EtOAc1:1洗脱，得到为无色油状 的2-(1-异丙基-7-(甲硫基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(60mg，32.6％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z478.7[M+H]+。
将NaMoO4-2H2O(54mg,0.24毫摩尔)加至0℃下的2-(1-异丙基-7-(甲硫基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(54mg，0.11毫摩尔)的甲醇(2mL)溶液。将反应混合物在0℃搅拌10分钟。将H2O2(2mL,30％重量)加至形成的混合物。将混合物在室温搅拌1小时。用二氯甲烷(30mL)/i-PrOH(10mL)的混合溶剂萃取混合物三次。将合并的有机层浓缩并通过制备TLC纯化，用PE/EtOAc1:1洗脱，得到为白色固体的2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(25mg，43.39％产出率)。LC-MS MS(ESI)m/z511.1[M+H]+。
在N2中，在0℃下，将DIBAL-H(0.25mg,0.25毫摩尔,1M的甲苯溶液)加至2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸酯(25mg，0.05毫摩尔)的二氯甲烷(1mL)溶液。在-78℃下搅拌反应混合物1小时。在-78℃下用NH4Cl的饱和溶液(5mL)急冷反应，然后用二氯甲烷(30mL×3)萃取。浓缩合并的有机层，通过硅胶制备TLC纯化，用PE/EtOAc1:1洗脱，然后用SFC分离来纯化，得到为无色油状的(R)-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇(1.80mg，7.84％产出率，同分异构体1)和为无色油状的(S)-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇(1.60mg，6.97％产出率，同分异构体2)。
同分异构体1：(R)-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝8.1分钟(方法：OD-3_5_5_40_2.5ML)。LC-MS m/z469.0[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.63(s,1H),7.94(s,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.63(d,J1＝8.4Hz,J2＝1.6Hz,1H),6.48(s,1H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),5.19-5.14(m,1H),4.71(d,J＝4.8Hz,2H),3.86-3.82(m,1H),4.14-4.07(m,1H),3.86-3.77(m,1H),3.07(s,3H),2.34-2.25(m,1H),1.82-1.78(m,1H),1.18(d,J＝7.2Hz,3H),1.04(d,J＝7.2Hz,3H)。
同分异构体2：(S)-(2-(1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)甲醇手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR ＝11.33分钟(方法：OD-3_5_5_40_2.5ML)。LC-MS m/z469.1[M+H]+。1H NMR(CDCl3400MHz):δ8.63(s,1H),7.94(s,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.63(d,J1＝8.4Hz,J2＝1.6Hz,1H),6.48(s,1H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),5.19-5.14(m,1H),4.71(s,2H),3.86-3.82(m,1H),4.14-4.07(m,1H),3.86-3.77(m,1H),3.07(s,3H),2.34-2.25(m,1H),1.82-1.78(m,1H),1.18(d,J＝7.2Hz,3H),1.04(d,J＝7.2Hz,3H)。
实施例26
(±)-1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮
中间体8-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧代)甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚是按照类似于制备4中描述的步骤制备的。将化合物8-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧代)甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚(0.22毫摩尔)、1-(2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(100mg，0.44毫摩尔)和DIEA(115μL,0.66毫摩尔)在i-PrOH/CH2Cl2(2mL/1mL)中的混合物在60℃搅拌15小时。在减压条件下除去溶剂，并通过硅胶柱层析纯化残渣，用EtOAc/己烷(1/1)洗脱，得到外消旋的1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮。LC-MS m/z510[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.97(s,1H),8.11(s,1H),7.80(s,1H),6.54(s,1H),6.01–5.90(m,1H),5.25–5.15(m,1H),5.07(s,2H),4.52–4.47(m,1H),4.15–4.04(m,1H),4.00–3.93(m,1H),3.26(s,3H),2.55(s,3H),2.41–2.32(m,1H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),1.03(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例27
(R)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇和
(S)-2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚 -2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇
将吡啶(1mL)和AcCl(130μL,1.3毫摩尔)加至1-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮(132mg，0.26毫摩尔)的CH2Cl2(5mL)溶液。在室温搅拌混合物10小时。用水(5mL)急冷反应。用CH2Cl2(3×10L)萃取水层。用盐水洗合并的有机层，然后在无水Na2SO4上干燥。将混合物过滤并在减压条件下浓缩。通过硅胶柱层析纯化残渣，用己烷/EtOAc(1/1)洗脱，得到(2-(5-乙酰基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚-8-基)乙酸甲酯。LC-MS m/z553[M+H]+。
将LaCl3·2LiCl的THF溶液(0.12mL,70μmol)加至(2-(5-乙酰基-4-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚-8-基)乙酸甲酯(37mg，67μmol)的干燥THF(2mL)溶液.将产生的混合物在室温搅拌20分钟。将反应混合物冷却至0℃，缓慢加入MeMgCl的THF溶液(3.0M,0.15mL)，且使反应混合物在相同的温度下搅拌0.5小时。加入NH4Cl的饱和水溶液(1mL)和水(2mL)。用EtOAc(4×10mL)萃取水层。干燥合并的有机层(Na2SO4)并浓缩。通过硅胶柱层析和SFC分离来纯化粗残渣，得到2-(2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-基)丙烷-2-醇的同分异构体。
同分异构体1：手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝12.31分钟(方法：OD-H_5_5_40_2.35ML)。LC-MS m/z527[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.83(s,1H),8.08(s,1H),7.77(s,1H),6.50(s,1H),5.87(d,J＝8.4Hz,1H),5.10(m,1H),5.06(s,2H),4.44–4.40(m,1H),4.09–4.02(m,1H),3.91–3.84(m,1H),3.26(s,3H),2.36–2.29(m,1H),1.59(s,6H),1.16(d,J＝6.8Hz,3H),1.02(d,J＝ 6.8Hz,3H)。
同分异构体2：手性分析HPLC：在15分钟色谱分析中tR＝8.65分钟(方法：OD-H_5_5_40_2.35ML)。LC-MS m/z527[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.83(s,1H),8.08(s,1H),7.77(s,1H),6.50(s,1H),5.87(d,J＝8.4Hz,1H),5.10(m,1H),5.06(s,2H),4.44–4.40(m,1H),4.09–4.02(m,1H),3.91–3.84(m,1H),3.26(s,3H),2.36–2.29(m,1H),1.59(s,6H),1.16(d,J＝6.8Hz,3H),31.02(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例28
(±)2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯
中间体8-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧代)甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚是按照类似于制备4中描述的步骤制备的。将化合物8-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧代)甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-1,2,3,4-四氢吡嗪[1,2-a]吲哚(0.19毫摩尔)、2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(97mg，0.38毫摩尔)和DIEA(100μL,0.57毫摩尔)在i-PrOH/CH2Cl2(1mL/0.5mL)中的混合物在50℃搅拌8小时。在减压条件下除去溶剂，并通过硅胶柱层析纯化残渣，用EtOAc/己烷(1/1)洗脱，得到外消旋的2-(8-(羟甲基)-1-异丙基)-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯。LC-MS m/z563[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ9.31(s,1H),8.11(s,1H),7.80(s,1H),6.55(s,1H),6.02–5.92(m,1H),5.23–5.17(m,1H),5.07(s,2H),4.52–4.47(m,1H),4.34(q,J＝7.2Hz,2H),4.19–4.06(m,1H),4.00–3.93(m,1H),3.27(s,3H),2.42–2.32(m,1H),1.36(t,J＝7.2Hz,3H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),1.03(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例29
(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺和
(S)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺
将1N NaOH溶液(1mL)加至2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯(30mg，55μmol)的THF(1mL)溶液。将产生的混合物在室温搅拌3小时。用1N HCl溶液(1.5mL)酸化反应混合物。用CH2Cl2(4×5L)萃取混合物。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压条件下浓缩，得到2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸。其不用进一步纯化直接使用。
将HATU(42mg,0.11毫摩尔)、NH4Cl(30mg,0.55毫摩尔)和N,N-二异丙基胺(100μL,0.55毫摩尔)加至经搅拌的2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸(55μmol)的无水DMF(1mL)溶液。将混合物在室温搅拌20小时。用CH2Cl2(10mL)将其稀释，并用水洗。分离有机层，然后用CH2Cl2(3×10mL)萃取水层。用盐水洗合并的有机层，在无水Na2SO4上干燥，过滤并在减压条件下浓缩。通过硅胶柱层析和SFC分离来纯化粗残渣，得到2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢吡嗪[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺的同分异构体。
同分异构体1：手性分析HPLC：在8分钟色谱分析中tR＝2.92分钟(方法：AS-H_S_3_40_3ML)。LC-MS m/z494[M+H-18]+,512[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.68(s,1H),8.12(s,1H),7.80(s,1H),6.54(s,1H),6.00-5.87(m,1H),5.20–5.08(m,1H),5.07(s,2H),4.50–4.46(m,1H),4.14–4.08(m,1H),3.98–3.90(m,1H),3.27(s,3H),2.39–2.32(m,1H),1.29(s,2H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),1.04(d,J＝6.8Hz,3H)。
同分异构体2：手性分析HPLC：在8分钟色谱分析中tR＝4.91分钟(方法：AS-H_S_3_40_3ML)。LC-MS m/z494[M+H-18]+,512[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ8.68(s,1H),8.12(s,1H),7.80(s,1H),6.54(s,1H),6.00-5.87(m,1H),5.20–5.08(m,1H),5.07(s,2H),4.50–4.46(m,1H),4.14–4.08(m,1H),3.98–3.90(m,1H),3.27(s,3H),2.39–2.32(m,1H),1.29(s,2H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),1.04(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例30
(R)-2-(8-(羟甲基)-1-异丙基-7-(甲磺酰基)-3,4-二氢苯并[4,5]咪唑[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸甲酯
标题化合物通过类似于实施例12中描述的步骤制备，其利用2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸甲酯而不是2-氯代-4-(三氟甲基)嘧啶-5-羧酸乙酯作为反应物。LC-MS m/z528[M+H]+。1H NMR(400MHz,CD3OD):δ9.04(s,1H),8.25(s,1H),7.96(s,1H),6.12-6.06(m,1H),5.46–5.34(m,1H),5.11(s,2H),4.54(dd,J1＝12.4Hz,J2＝3.2Hz,1H),4.24(td,J1＝12.0Hz,J2＝5.2Hz,1H),3.95(dddd,J1＝14.4Hz,J2＝12.0Hz,J3＝4.4Hz,1H),3.89(s,3H),3.26(s,3H),2.64–2.54(m,1H),1.29(d,J＝6.8Hz,3H),1.07(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例31
LXRα/β放射性配体结合测试
在结合竞争测试中评估本发明的化合物，其中所述测试中在放射标记的LXR配体[3H]TO901317存在下，将不同浓度的化合物用LXR配体结合域(LBD)孵育。通过闪烁邻近测试法(SPA)测量与[3H]T0901317络合的LXR-LBD的量，所述SPA利用了LXR-LBD对聚赖氨酸包覆的钇硅酸珠的非特异性结合。在96孔板中，在80μL含有2.5％DMSO、1％丙三醇、2mM EDTA、2mM CHAPS和5mM DTT的磷酸盐缓冲液(PBS)中，用15nM[3H]TO901317(25-40Ci/毫摩尔)和不同浓度的测试化合物在室温下孵育部分纯化的LXRα或βLBD蛋白 (15-45nM)30分钟。将聚-赖氨酸SPA珠(50μg)加至每个孔并将总体积调节至120μL。将孔板在定轨摇床上振摇20分钟，室温下再放置10分钟，然后以2000转每分钟短暂离心1分钟。在液体闪烁计数器(Perkin Elmer,Waltham,MA)上测量SPA信号，根据总的结合(DMSO对照)和非特异性结合(5μM未标记的TO901317)对照，将结果用于结算IC50值。根据等式1计算Ki值，其中[RL]是测试中[3H]TO901317的最终浓度，并且通过直接滴定关于这些蛋白的放射性配体来分别测定20nM和10nM的TO901317对LXRα和LXRβ的LBD的Kd值。
Ki=IC50(1+[RL]Kd)---(1)]]>
实施例32
LXR荧光素酶转录的报告基因测试
LXR荧光素酶转录的报告基因测试测量LXR配体通过LXR的配体结合域(LBD)促进转录活性的能力。在5％CO2气氛中，在37℃下，HEK293在含有10％FBS(,#11995-065)和1xPenStrep(,#15140)的培养中生长。将来自150mm盘的90％融合的细胞在六个100mm盘中接种。用表达质粒和荧光素酶质粒pG5-Luc(Promega,Madison,WI)分批转染细胞，所述表达质粒含有融合至LXRα的LBD或LXRβ的LBD的Gal4DNA结合域，所述荧光素酶质粒具有萤火虫荧光素酶基因(luc+)上游的Gal4应答元件。用LipofectamineTM2000()根据制造商建议的方案完成转染。转染5小时后，将15mL10％炭处理的FBS(Hyclone,#SH30070.03)的DMEM溶液加至转染盘而不除去转染培养基，然后在37℃孵育过夜。第二天，胰蛋白酶消化来自转染盘的细胞，用PBS冲洗，重悬于10％焦炭处理的DMEM培养基，装入96孔板，每孔60000细胞/100μL。在加入100μL不同浓度的(最终DMSO浓度为0.2％)测试化合物或对照配体前，将细胞在37℃孵育约4小时。在用物质孵育细胞16小时后，弃除培养基，加入Bright-GloTM荧光素酶试剂(Promega,Cat.#E2610)以溶解细胞并引发荧光素酶反应。在读板器中检测荧光，所述荧光为荧光素酶活性的度量。在测试物质存在下，转录活性表达为与在物质不存在下孵育的细胞的荧光相比 荧光的倍数变化。用XLfitTM程序(IDBS,Guilford,UK)计算EC50值。
实施例33
本发明的化合物如实施例31和32中描述的方法测试。生物学数据在下表中提供。