新的嘧啶并[1，2-a]吲吲哚类化合物 本发明涉及嘧啶并[1，2-a]吲哚类化合物、它们的制法及它们作为药物、尤其是抗动脉粥样硬化药物的应用。
已经知道，甘油三酯的血液水平升高(高甘油三酯血症)和胆固醇的血液水平升高(高胆固醇血症)与血管壁的动脉硬化变化和冠状心脏病的产生有关。
此外，当这两种危险因素同时发生时，产生冠状心脏病的危险便明显增加，而所述的两种危险因素同时发生又与载脂蛋白B-100的过度产生有关。因此，不断急需提供有效地控制动脉硬化和冠状心脏病的药物。
本发明涉及通式(I)的嘧啶并[1，2-a]吲哚类化合物、适当的话其异构形式及其盐：
式中
A、D、E、G、L和M相同或不同，代表氢、卤素、三氟甲基、羧基、羟基、在每种情况下各具有最多6个碳原子的直链或支链烷氧基或烷氧羰基或具有最多6个碳原子的直链或支链烷基，该烷基又可以被羟基或被具有最多4个碳原子的直链或支链烷氧基取代，
R1和R2相同或不同，代表氢、具有3-8个碳原子的环烷基或具有最多10个碳原子的直链或支链烷基，该烷基可任选地被具有3-6个碳原子的环烷基取代，或者代表可任选被卤素或三氟甲基取代的苯基，或
R1和R2与碳原子一起形成4-8元环烷基，以及
R3代表苯基，它可任选地被下列取代基相同或不同地取代最多三次：硝基，羧基，卤素，氰基，在每种情况下各具有最多6个碳原子的直链或支链链烯基或烷氧羰基，可任选地被羟基、羧基或被在每种情况下各具有最多6个碳原子的直链或支链烷氧基或烷氧羰基取代的具有最多6个碳原子的直链或支链烷基，和/或任选地被式-OR4或NR5R6基团取代，其中
R4是氢或在每种情况下各具有最多6个碳原子的直链或支链烷基或链烯基，
R5和R6相同或不同，代表苯基、氢或具有最多6个碳原子地直链或支链烷基，或代表具有最多8个碳原子的直链或支链酰基，它可任选地被式-NR7R8基团取代，
其中
R7和R8相同或不同，代表氢或具有最多8个碳原子的直链或支链酰基。
本发明的嘧啶并[1，2-a]吲哚类化合物也可以以盐形式存在。通常，这里可提及的是与有机或无机碱或酸形成的盐。
对于本发明，优选生理上可接受的盐。本发明化合物的生理上可接受的盐是本发明的物质与无机酸、羧酸或磺酸形成的盐。特别优选的盐是例如与下列酸形成的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、富马酸、马来酸或苯甲酸。
生理上可接受的盐也可以是具有游离羧基的本发明化合物的金属盐或铵盐。特别优选的盐是例如钠、钾、镁或钙盐，还有由氨或有机胺诸如乙胺、二乙胺、三乙胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二甲氨基乙醇、精氨酸、赖氨酸、乙二胺或2-苯基乙胺衍生得到的铵盐。
本发明化合物可以以立体化学异构形式存在，它们或表现为像和镜像(对映体)或不表现为像和镜像(非对映体)。本发明涉及对映体、非对映体以及它们各自的混合物。对映体和非对映体的这些混合物可以用本身已知方法分离成立体化学均一的组分。
优选的通式(I)化合物是下列化合物，适当的话其异构形式及其盐，其中
A、D、E、G、L和M相同或不同，代表氢、氟、氯、溴、三氟甲基、羧基、羟基、在每种情况下各具有最多4个碳原子的直链或支链烷氧基或烷氧羰基或具有最多4个碳原子的直链或支链烷基，该烷基又可以被羟基或被具有最多3个碳原子的直链或支链烷氧基取代，
R1和R2相同或不同，代表氢、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基或具有最多8个碳原子的直链或支链烷基，该烷基可任选地被环丙基、环戊基或环己基取代，或者代表可任选被氟、氯或溴取代的苯基，或R1和R2与碳原子一起形成4-7元环烷基，以及R3代表苯基，它可任选地被下列取代基相同或不同地取代最多三次：硝基，羧基，氟，氯，溴，氰基，在每种情况下各具有最多4个碳原子的直链或支链链烯基或烷氧羰基，可任选地被羟基、羧基或被在每种情况下各具有最多5个碳原子的直链或支链烷氧基或烷氧羰基取代的具有最多5个碳原子的直链或支链烷基，和/或任选地被式-OR4或NR5R6基团取代，
其中
R4是氢或在每种情况下各具有最多4个碳原子的直链或支链烷基或链烯基，
R5和R6相同或不同，代表苯基、氢或具有最多5个碳原子的直链或支链烷基，或代表具有最多6个碳原子的直链或支链酰基，它可任选地被式-NR7R8基团取代，
其中
R7和R8相同或不同，代表氢或具有最多6个碳原子的直链或支链酰基。
特别优选的通式(I)化合物是下列化合物，适当的话其异构形式及其盐，其中
A、D、E、G、L和M相同或不同，代表氢、氟、氯、溴、三氟甲基、羧基、羟基、在每种情况下各具有最多3个碳原子的直链或支链烷氧基或烷氧羰基或具有最多3个碳原子的直链或支链烷基，
R1和R2相同或不同，代表氢、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基或具有最多6个碳原子的直链或支链烷基，该烷基可任选地被环戊基或环己基取代，或者代表可任选被氟、氯或溴取代的苯基，或
R1和R2与碳原子一起形成5-7元环烷基，以及
R3代表苯基，它可任选地被下列取代基相同或不同地取代最多三次：羟基，三氟甲基，三氟甲氧基，羧基或在每种情况下各具有最多3个碳原子的直链或支链烷氧基、烷基或烷氧羰基。
也已发现了制备本发明的通式(I)化合物的方法，其特征在于：在惰性溶剂中，适当时在碱和/或辅助物质存在下用通式(III)的苯基甘氨醇对通式(II)的外消旋的或已经是对映异构纯的羧酸或其活化衍生物进行酰胺化反应：
外消旋的或对映异构纯的
式中
A、D、E、G、L、M、R1和R2具有前述的意义，而R9代表羟基或代表活化基团，优选氯，
式中
R3具有前述的意义。
本发明的方法可以以举例方式通过下述反应式具体说明：
在该种情况下用于酰胺化反应的合适的溶剂是在反应条件下不发生变化的惰性有机溶剂。这些溶剂包括醚类如乙醚或四氢呋喃，卤代烃类如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1，2-二氯乙烷、三氯乙烷、四氯乙烷、1，2-二氯乙烯或三氯乙烯，烃类如苯、二甲苯、甲苯、己烷、环己烷，或石油馏分，硝基甲烷，二甲基甲酰胺，丙酮，乙腈或六甲基磷酸三酰胺。也可以使用这些溶剂的混合物。特别优选的是二氯甲烷、四氢呋喃、丙酮或二甲基甲酰胺。
可用于本发明方法的碱一般是无机或有机碱。它们优选包括碱金属氢氧化物诸如氢氧化钠或氢氧化钾，碱土金属氢氧化物诸如氢氧化钡、碱金属碳酸盐诸如碳酸钠或碳酸钾，碱土金属碳酸盐诸如碳酸钙或碱金属或碱土金属醇盐如甲醇钠或钾、乙醇钠或钾或叔丁醇钾，或有机胺(三烷基(C1-6)胺)诸如三乙胺或杂环如1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)、1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)、吡啶、二甲氨基吡啶、甲基哌啶或吗啉。也可以使用碱金属如钠及其氢化物如氢化钠作为碱。优选碳酸钠和钾和三乙胺。
碱的用量基于1摩尔通式(II)化合物计为1-5摩尔，优选1-3摩尔。
所述反应通常在0℃-150℃、优选+20℃-+110℃的温度下进行。
所述反应可以在常压、加压或减压(例如0.5-5巴)下进行。通常使用大气压力。
所述反应适当时也可以经过酰卤的活化阶段，所述的酰卤可以通过相应的酸与亚硫酰氯、三氯化磷、五氯化磷、三溴化磷或草酰氯反应而从相应的酸制备。
上面所列的碱也可以用作为酰胺化反应的酸结合助剂。
同样适于作为辅助物质的是脱水剂。它们包括例如碳二亚胺类如二异丙基碳二亚胺、二环己基碳二亚胺或N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基二亚胺盐酸盐或羰基化合物如羰基二咪唑或1，2-噁唑鎓(oxazolium)化合物如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3′-磺酸盐或丙烷膦酸酐或氯甲酸异丁酯或六氟磷酸苯并三唑基氧基(二甲氨基)鏻或二苯基磷酰叠氮或甲磺酰氯，适当的话在碱如三乙胺或N-乙基吗啉或N-甲基哌啶或二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺存在下使用。
所述的辅助物质的用量基于1摩尔适当的羧酸计一般为0.5-3mol，优选1-1.5摩尔。
通式(II)的羧酸是新的，可以通过下述方法制备，即，在惰性溶剂中，适当的话在碱存在下，先通过使通式(IV)化合物与通式(V)化合物反应制备通式(VI)化合物，
式中
R1和R2具有所指明的意义，
T代表一般的离去基团如氯、溴、碘、甲苯磺酸酯基团或甲磺酸酯基团，优选代表溴，及
R10代表(C1-C4)-烷基，
式中
A、D、E、G、L和M具有指明的意义，
式中
A、D、E、G、L、M、R1、R2和R10具有指明的意义，随后通过常规方法水解所述酯。
所述的对映异构纯的酸即其中R1和R2必须是不同的通式(II)化合物也可以通过下述方法制得，即，使通式(VII)的D-或L-_基酯与通式(VIIIa)和(VIIIb)化合物反应制备通式(IXa)和(IXb)的对映异构纯的_酯，
R11代表D-或L-_基，
R1-Z (VIIIa)
R2-Z (VIIIb)
式中
R1和R2是不同的，否则具有所指明的意义，以及Z代表卤素，优选溴，
式中
R1、R2和R11具有指明的意义，
在下一步中通过卤化将通式(IXa)和(IXb)的对映异构纯的_酯转化成通式(Xa)和(Xb)化合物：
式中
R1、R2、T和R11具有指明的意义，然后通过与通式(V)化合物反应制备通式(XIa)和(XIb)的对映异构纯的化合物：
式中
A、D、E、G、L、M、R1、R2和R11具有指明的意义，再通过水解将后者转化成通式(IIa)和(IIb)的对映异构纯的酸。
也可以通过下述方法制备通式(II)的对映异构纯的酸，即，通过与(R)-或(S)-苯乙胺在惰性溶剂中反应，接着使苯乙胺盐环化，再接着使所述盐水解由此先将通式(XII)的外消旋羧酸转化成通式(XIIIa，b)的对映异构纯的化合物：在另一步中用异丁烯在惰性溶剂中在酸存在下从后者制备通式(XIVa，b)的对映异构纯的酯：通过卤化反应将上述后者转化成通式(XVa，b)的对映异构纯的化合物：再通过与通式(V)化合物反应将后者转化成通式(XVIa，b)的对映异构纯的酯：在如上所述的最后各步中，制备相应的对映异构纯的酸和活化的衍生物。
用于这些方法的合适的溶剂是常规的在反应条件下不发生变化的有机溶剂。它们优选包括醚类如乙醚、二噁烷、四氢呋喃、乙二醇二甲醚，或烃类如苯、甲苯、二甲苯、己烷、环己烷或石油馏分，或卤代烃类如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、二氯乙烯、三氯乙烯或氯苯，或乙酸乙酯、三乙胺、吡啶、二甲亚砜、二甲基甲酰胺、六甲基磷酸三酰胺、乙腈、丙酮或硝基甲烷。也可以使用所述的这些溶剂的混合物。优选二甲基甲酰胺、甲苯和四氢呋喃。
可用于本发明方法的碱一般是无机或有机碱。它们优选包括碱金属氢氧化物诸如氢氧化钠或氢氧化钾，碱土金属氢氧化物诸如氢氧化钡、碱金属碳酸盐和碳酸氢盐诸如碳酸钠、碳酸氢钠或碳酸钾，碱土金属碳酸盐诸如碳酸钙或碱金属或碱土金属醇盐如甲醇钠或钾、乙醇钠或钾或叔丁醇钾，或有机胺(三烷基(C1-6)胺)诸如三乙胺或杂环如1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)、1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)、吡啶、二甲氨基吡啶、甲基哌啶或吗啉。也可以使用碱金属如钠及其氢化物如氢化钠作为碱。优选碳酸氢钠、碳酸钾和叔丁醇钾、DBU或DABCO。
适用于所述水解反应的溶剂是水或常用于水解反应的有机溶剂。它们优选包括醇类如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇或丁醇，或醚类如四氢呋喃或二噁烷，或二甲基甲酰胺，或二甲亚砜。特别优选的是醇类如甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。同样，也可以使用所述溶剂的混合物。
适当的话，水解也可以用酸诸如三氟乙酸、乙酸、盐酸、氢溴酸、甲磺酸、硫酸或过氯酸，优选三氟乙酸进行。
所述的水解反应一般在0℃-+100℃、优选+20℃-+80℃的温度下进行。
所述的水解反应一般在大气压力下进行。然而，它也可以在加压或减压下(例如0.5-5巴)进行。
当进行所述的水解反应时，碱的用量基于1摩尔所述酯一般为1-3摩尔，优选1-1.5摩尔。特别优选使用等摩尔量的反应物。
叔丁基酯的水解一般用酸如盐酸或三氟乙酸在上述溶剂之一和/或水或其混合物存在下优选用二噁烷或四氢呋喃进行。
本发明的一般方法[A]一般在-30℃-+150℃、优选80℃-150℃的温度下进行。
合适的和优选的用于制备对映异构纯的酸的各步的条件如下：
通式(IX)化合物优选在二甲基甲酰胺和叔丁醇钾中在-10℃-+10℃的温度下进行制备。
通式(X)化合物的卤化反应在氯苯中用1，3-二溴-5，5-二甲基乙内酰脲在偶氮二异丁腈存在下于0℃-110℃的温度下进行。
给出通式(XI)化合物的反应在保护气体气氛下在二甲基甲酰胺和叔丁醇钾中在0℃-30℃的温度下进行。
通式(XI)化合物的水解反应可以如上所述那样进行。特别优选用HBr/甲酸体系进行。所述的水解反应在20℃-100℃的温度下进行。
通式(XII)化合物的反应用二氯甲烷在回流下进行。
合适的和优选的活化剂是三氟甲磺酰氯、甲磺酰氯、草酰氯和亚硫酰氯。特别优选亚硫酰氯。
给出通式(XIVa)化合物的反应在第一步中优选在四氢呋喃和三乙胺中，而在第二步中在水/盐酸体系中进行。该反应在30℃-70℃的温度下进行。
特别优选用浓硫酸作为制备本发明通式(XV)化合物的酸。该制备反应用二氯甲烷进行。
在进一步的后处理步骤中，用碳酸钾作为碱。该反应在0℃-+20℃、特别优选在10℃温度下进行。
通式(XV)化合物用N-溴代琥珀酰亚胺在二氯甲烷中在偶氮二异丁腈存在下进行。
所述碱的用量在每种情况下基于1摩尔通式(IV)、(VIII)、(XI)和(XIVa)化合物一般为0.05-10摩尔，优选1-2摩尔。
本发明的方法一般在大气压力下进行。然而，也可以在加压或减压下(例如0.5-5巴)进行所述方法。
通式(III)化合物本身是已知的。
通式(IV)、(VIII)和(VIIIa)化合物是已知的或可以以相似于已知方法的方法制备。
通式(V)化合物有些是已知的，一些是新的，它们可以按照相似于已公开的方法制备。
通式(VII)化合物是新的，由相应的酸制备。
通式(IX)的对映异构纯的化合物除了其中X为CH-异丙基的情况外都是新的，可以如上所述那样制备。
通式(X)、(XI)、(XIa)和(XII)化合物是新的，可以如上所述那样制备。
通式(XIV)和(XIVa)化合物在一些情况下是已知的，可以通过常规方法制备。
通式(XV)和(XVI)的对映异构纯的化合物是新的，可以如上所述那样制备。
通式(VI)化合物是新的，可以如上所述那样制备。
本发明的通式(I)化合物具有不可预见的药理作用谱。
它们可以用作为用于减小血管壁变化和用于治疗冠状心脏病、心力衰竭、脑机能障碍、脑局部缺血疾病、中风、血流紊乱、微循环障碍和血栓形成的药物中的活性化合物。
此外，平滑肌细胞的增生在血管闭塞中起着重要的作用。本发明的化合物适于用来抑制该增生并因此防止动脉硬化过程。
本发明化合的区别特征是降低ApoB 100有关的脂蛋白(VLDL及其分解产物如LDL)和ApoB 100、甘油三酯和胆固醇。因此，它们具有优于先有技术的有价值的药理学性质。
令人惊奇的是，本发明化合物的作用最初包括降低或完全抑制ApoB 100有关的脂蛋白从肝细胞的形成和/或释放，这导致了VLDL血浆水平的降低。该VLDL降低必定与ApoB 100、LDL、甘油三酯和胆固醇的血浆水平的降低有关；所以血管壁变化中涉及的许多上述危险因素同时被降低了。
因此，本发明的化合物可用于预防和治疗动脉硬化、肥胖、胰腺炎和便秘。1.ApoB 100有关的脂蛋白释放的抑制
检测ApoB 100有关的脂蛋白从肝细胞释放的抑制试验在体外用培养的肝细胞、优选用人细胞系HepG2的细胞进行。将这些细胞在标准条件下在用于培养真核细胞的培养基、优选在具有10％胎牛血清的RPMI 1640中进行培养。HepG2细胞合成并分泌ApoB 100有关的脂蛋白颗粒到培养物上清液中，所述颗粒大体上具有与在血浆中发现的VLDL和LDL颗粒相似的结构。
这些颗粒可以用用于人LDL的免疫测定法检测。该免疫测定法用已在标准条件下在兔体内对人LDL诱导过的抗体进行。在具有人LDL的免疫吸附剂上通过亲和层析纯化抗LDL抗体(兔抗LDL抗体)。将这些纯化后的兔抗LDL抗体吸附到塑料的表面。该吸附有利地是发生在96孔微滴板的塑料表面、优选在MaxiSorp板上。如果ApoB 100有关的颗粒存在在来自HepG2细胞的上清液中，那么这些颗粒可以与不溶解的兔抗LDL抗体结合，产生与所述塑料表面结合的免疫复合物。通过洗涤除去未结合的蛋白质。用已对人LDL诱导的、并已在标准条件下纯化过的单克隆抗体检测存在在塑料表面上的免疫复合物。这些抗体与过氧化物酶结合。过氧化物酶在H2O2存在下转化无色底物TMB成有色产物。用H2SO4酸化反应混合物后，测定在450nm处的比吸光度，它是由HepG2细胞分泌到培养物上清液中的ApoB 100有关的颗粒的量的一种量度。
令人惊奇的是，本发明的化合物抑制ApoB 100有关的颗粒的释放。IC50表明的是物质在与对照(不含物质的溶剂对照)相比时抑制50％吸光度时的浓度。实施例编号 Apo B IC50[nM] 2 1.3 18 1.9 24 0.6 36 1.1 54 0.7 57 2.72.在仓鼠体内VLDL分泌的测定
用仓鼠研究试验物质对VLDL在体内分泌的影响。为此，将金色仓鼠先用阿托品(83mg/kg s.c.)进行处理，然后用Ketavet(83mg/kg s.c.)和Nembutal(50mg/kg i.p.)进行麻醉。当动物的反射消失后，暴露颈静脉，进行插管。然后，给予0.25ml/kg 20％的Triton WR-1339在生理盐水中的溶液。该洗涤剂(detergent)抑制脂蛋白脂酶，因此由于没有所分泌的VLDL颗粒的分解代谢而导致甘油三酯水平的升高。该甘油三酯增加可以用作为VLDL分泌速率的一种量度。在给予洗涤剂前和给予洗涤剂后1和2小时时通过眼窝后静脉丛穿刺从动物体内取血。将血在室温下保温培养2小时，然后在4℃下培养过夜以完成凝固。然后在10,000g下离心5分钟。用改进的商业上可用的酶测定法法(Merckotest_Triglyceride No.14354)测定用这种方法获得的血清中的甘油三酯浓度。将100μl血清与100μl试验试剂在96孔板中混合，在室温下保温培养10分钟。然后，在自动读板仪(SLT Spectra)中测定在492nm波长处的光密度。具有太高的甘油三酯浓度的血清样本用生理盐水稀释。用平行测定的标准曲线测定样本中存在的甘油三酯的浓度。在该模型中，试验物质或者在给予洗涤剂前直接通过静脉给予或者在诱导麻醉前通过口服或皮下给予。3.体内(鼠)肠道甘油三酯吸收的抑制
将待研究其对甘油三酯在体内吸收的影响的物质口服给予体重为170-230克之间的雄性Wistar鼠。为此，在给予所述物质前18小时将动物分成数组，每组6只，然后禁食。动物可以任意饮水。对照组动物接受西黄蓍胶水悬浮液或含有橄榄油的西黄蓍胶悬浮液。用Ultra-Turrax制备西黄蓍胶/橄榄油悬浮液。临在给予所述物质之前，同样用Ultra-Turrax将待试物质悬浮在相应的西黄蓍胶/橄榄油悬浮液中。
在通过管饲法给药前通过眼窝后静脉丛穿刺从各只鼠体内取血以测定基线血清甘油三酯含量。然后，通过管饲法给予禁食动物西黄蓍胶悬浮液、不含物质的西黄蓍胶/橄榄油悬浮液(对照动物)或悬浮在相应的西黄蓍胶/橄榄油悬浮液中的物质。通常在通过管饲法给药后1、2和3小时再次取血以测定膳食后血清甘油三酯增加。
将血样离心，得到血清后，通过用EPOS分析仪5060的光度测定法(Eppendorf Ger_tebau，Netheler&Hinz GmbH，Hamburg)测定甘油三酯。用商业上可得到的UV检测法全酶促地测定甘油三酯。
对每只动物从其相应的膳食后甘油三酯浓度(给药后1、2和3小时)减去初始甘油三酯浓度来计算膳食后血清甘油三酯增加。
对每组动物平均各时间时(1、2和3小时)的差别(用mmol/l表示)，将用试验物质处理过的动物的血清甘油三酯增加的平均值(ΔTG)与只接受了西黄蓍/油悬浮液的动物进行比较。
以同样的方法计算只接受了西黄蓍胶的对照动物的血清甘油三酯的变化。如下计算试验物质在各时间点(1、2或3小时)时的效果并以接受油的对照的Δ％报告。
在禁食鼠的血清中甘油三酯吸收后2小时时口服1、3或10mg试验物质/kg体重对甘油三酯增加(Δ％)的影响。相对于西黄蓍胶对照动物的血清甘油三酯水平的脂肪吸收后对照动物中的血清甘油三酯增加相应于100％。n＝6只动物/组血清甘油三酯增加％(2h pp) 甘油三酯吸收 100 西黄蓍胶对照 0
在预先检查同种性的变化之后用Student′s t试验进行统计学分析。
与未处理的对照组相比较在一个时间时减小膳食后血清甘油三酯的增加至少30％的统计学上显著(p＜0.05)的物质被认为是药理学上活性的。4.VLDL体内(鼠)分泌抑制
同样对鼠研究试验物质对VLDL分泌的作用。为此，将溶在生理盐水中的500mg/kg体重(2.5mg/kg)的Triton WR-1339静脉给予鼠尾静脉。Triton WR-1339抑制脂蛋白脂酶，并因此通过抑制VLDL分解代谢导致了甘油三酯和胆固醇水平的增加。这些增加可作为VLDL分泌速度的一个量度。
在给予洗涤剂之前和之后2小时通过眼窝后静脉丛穿刺从动物体内取血。将血液在室温下保温培养1小时以凝固，通过在10,000g下离心20秒钟得到血清。随后在540nm浓长下通过光度测定法用商业上偶联的酶测定法(Sigma Diagnostics_，No.339)测定甘油三酯。借助于同样的偶联酶测定法(Boehringer Mannheim_，No.1442350)在546nm波长进行测定。具有甘油三酯和胆固醇浓度超过方法测量范围的样品用生理盐水稀释。在每种情况下用平行测定的标准系列得到血清浓度。试验物质在注射Triton后立即通过口服、静脉或皮下给予。
本发明还涉及用于治疗家族的高脂血、肥胖(脂肪过多)和糖尿病的通式(I)的新的嘧啶并[1，2-a]吲哚类化合物与葡糖苷酶和/或淀粉酶抑制剂的结合物。用于本发明此目的葡糖苷酶和/或淀粉酶抑制剂是，例如，阿卡波糖、脂解素、Voglibose、miglitol、emiglitate、MDL-25637、camiglibose(MDL-73945)、tendamistat、AL-3688、trestatin、pradimicin-Q和salbostatin。
阿卡波糖、miglitol、emiglitate或voglibose与上述的本发明的通式(I)化合物之一的结合物是优选的。
本发明的新的活性化合物可以按已知方法用惰性的、无毒的、药物学上适用的赋形剂或溶剂转化成常规制剂，诸如，片剂、包衣片剂、丸剂、粒剂、气雾剂、糖浆、乳液、混悬剂和溶液。在该种情况下，治疗活性化合物应该在每种情况下以最终混合物的大约0.5-90％重量的浓度存在，即，其存在的量足以达到所指明的剂量范围。
所述的制剂通过例如用溶剂和/或赋形剂，适当的话用乳化剂和/或分散剂，其中，例如，如果水用作稀释剂，适当的话可用有机溶剂作辅助溶剂，来扩充活性化合物进行制备。
给药按常规的方法进行，优选口服或非经胃肠，特别是经舌或静脉给药。
在非经胃肠给药的情况下，可以使用用合适的液体载体的活性化合物溶液。
通常，已证明有利的是，在静脉给药的情况下给予大约0.001-1mg/kg、优选大约0.01-0.5mg/kg体重的量以实现有效的结果，而在口服给药的情况下，剂量为大约0.01-20mg/kg、优选0.1-10mg/kg体重。
尽管如此，适当的话，可能必需偏离上述用量，这具体取决于体重或给药途径的类型，取决于个体对药物的反应、制剂性质以及给药的时间或间隔。这样，在一些情况下，可能少于上述最低用量的量已足够，而在另一些情况下，必须使用超出上述上限的量。在给予较大量的情况下，建议将其分成数个分剂量在全天内给药。
缩写：
Ac＝乙酰基
AIBN＝偶氮二异丁腈
Bn＝苄基
Bz＝苯甲酰基
cDec＝环癸基
CDI＝N′-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐
cDodec＝环十二烷基
cHept＝环庚基
cHex＝环己基
cNon＝环壬基
cOct＝环辛基
cPent＝环戊基
cPr＝环丙基
18-crown-6＝1，4，7，10，13，16-六氧杂环十八烷
cUndec＝环十一烷基
DCC＝二环己基碳二亚胺
DDQ＝2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌
dia＝非对映体
diaA＝有较大Rf的非对映体
diaB＝有较小Rf的非对映体
DMAP＝4-(N，N-二甲氨基)吡啶
DME＝1，2-二甲氧基乙烷
DMF＝N，N-二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲基亚砜
ent＝对映体
Et＝乙基
HOBT＝1-羟基-1H-苯并三唑
iBu＝异丁基
iPent＝异戊基
ipr＝异丙基
Me＝甲基
Ment＝(L)-_基
Mes＝甲磺酰基
NBS＝N-溴代琥珀酰亚胺
nBu＝正丁基
nHex＝正己基
nPent＝正戊基
nPr＝正丙基
Ph＝苯基
PPA＝多磷酸
pTol＝对甲苯基
pTos＝对甲苯磺酰基
rac＝外消旋体
sBu＝仲丁基
tBu＝叔丁基
TFA＝三氟乙酸
THF＝四氢呋喃
TMS＝四甲基硅烷制备移动相BABA的方法：
将87.9ml0.06667M的磷酸二氢钾水溶液和12.1ml0.06667M的磷酸氢二钠水溶液混合。将由此制得的60ml溶液与200ml乙酸正丁酯、36ml正丁醇和100ml冰乙酸一起振摇，分出水相。有机相是移动相BABA。所用的溶剂混合物：溶剂 代号石油醚∶ 乙酸乙酯＝20∶1 A石油醚∶ 乙酸乙酯＝2∶1 B石油醚∶ 乙酸乙酯＝5∶1 C二氯甲烷∶乙醇＝20∶1 D石油醚∶ 乙酸乙酯＝1∶1 E二氯甲烷∶乙醇＝50∶1 F二氯甲烷 G石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1 H二氯甲烷∶甲醇＝19∶1 I石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1 J二氯甲烷∶甲醇＝100∶1 K二氯甲烷∶甲醇＝100∶3 L甲苯 M甲苯∶乙酸乙酯＝9∶1 N甲苯∶乙酸乙酯＝2∶1 O石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1 P石油醚∶乙酸乙酯＝20∶1 Q石油醚 R石油醚∶乙酸乙酯＝6∶1 XA
起始化合物
实施例I
4-甲苯基乙酸甲酯
将300g(1.998mol)4-甲苯基乙酸溶于2.5升甲醇中，与100ml浓硫酸一起搅拌并煮沸回流2.5h。然后将总量430g(5.1mol)碳酸氢钠逐渐地搅拌加入(放出CO2)，真空下大体上蒸掉甲醇，残留物在水和二氯甲烷之间分配，用二氯甲烷回洗水相。合并有机相，用硫酸钠干燥，真空下除去溶剂。残留物在高真空下蒸馏。收率： 336g沸点： 65℃(0.5mbar)Rf＝0.81(甲苯：乙酸乙酯＝2∶1)实施例II4-甲苯基乙酸乙酯
按照相似于实施例I的方法从4-甲苯基乙酸开始制备4-甲苯基乙酸乙酯。Rf＝0.43(A)。实施例III4-甲基苯乙酸叔丁酯
将450g(3mol)4-甲基苯乙酸、1.13e(12mol)叔丁醇和90g(0.74mol)二甲氨基吡啶溶于2e二氯甲烷中。加入680g(3.3mol)溶解在400ml二氯甲烷中的二环己基碳二亚胺，然后在25℃下搅拌20小时，吸滤出沉淀的脲，用200ml二氯甲烷洗，有机相用500ml 2M盐酸和水各洗两次，然后用硫酸钠干燥，浓缩，蒸馏。收率： 408(66％)。沸点： 73-78℃(0.2torr)。实施例IV(2R/2S)-2-环戊基-2-(4-甲基苯基)乙酸叔丁酯在0℃和排湿条件下将33.5g(0.3mol)叔丁醇钾引入到100ml DMF中，滴加溶在250ml DMF中的51.6g(0.25mol)得自实施例III的化合物。将混合物在0℃下搅拌30分钟，在5-15℃下滴加在150ml DMF中的32.2ml(0.3mol)环戊基溴，并将混合物在25℃搅拌20小时。浓缩后，残留物在水和乙醚之间分配，醚相用硫酸钠干燥，浓缩。产物结晶析出。收率： 67g(97.5％)。固化点： 51-53℃。
表I中的外消旋化合物按照相似于实施例IV中的方法制备表I：
表I续
表I续
表II中的化合物按照相似于实施例IV中的方法制备；只是使用2.5当量的碱和2.5当量的卤代烃(在环烷基情况下使用1.2当量α，ω-二卤代烷)。表II
表II续
实施例XXXII(2R/2S)-2-(4-溴甲基苯基)-2-环戊基乙酸叔丁酯
将27.4g(0.1mol)得自实施例IV的化合物溶于200ml四氯甲烷中，加热至沸。加入0.82g偶氮二异丁腈后，分批加入18.7g(0.105mol)N-溴代琥珀酰亚胺，再将混合物回流1h，冷却至0℃，过滤除去琥珀酰胺。浓缩滤液后产物沉出。用石油醚(40/60)洗后，干燥。收率：20g(57％)。沸点：73-76℃
表III中所列的外消旋化合物按相似于实施例XXXII的方法制备：
表III
表III续
表IV中的化合物按照相似于实施例XXXII中的方法制备：表IV
表IV续
实施例LXII(2R/2S)-2-(2-硝基苯基)-2-氰基乙酸乙酯
在大约20℃将93.4g(832mmol)叔丁醇钾和92.4ml(868mmol)氰乙酸乙酯与680ml叔丁醇一起搅拌[比较C.A.Grob和0.Weissbach，Helv.Chim.Acta 44，1748(1961)]。30分钟后，加入已预热至大约60℃的63g(400mmol)2-氯硝基苯在1 50ml叔丁醇中的溶液，并将混合物煮沸回流10小时。将反应液冷却至大约20℃，用2M盐酸将pH调至3，然后在40℃的水浴中蒸发(30mbar)。残留物倒入1l乙醚和500ml水中，分出有机相，用碳酸氢钠水溶液洗数次后用水洗。溶液用硫酸镁干燥，蒸发，粗产物在硅胶60上层析纯化(Merck/40-63μm/石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)。收率：67.7g(289mmol)，理论量的72％。TLC：Rf＝0.46(B)1H-NMR(CDCl3，250MHz，TMS)：δ＝1.33(t，3H)；4.31(q，2H)；5.68(s，1H)；7.65(m，1H)；7.73-7.81(m，2H)；8.23(m，1H)ppm。
表V中的外消旋化合物按相似于实施例LXII的方法制备：表V：
实施例编号 Aa)m.p.(℃)b)Rf(溶剂)光谱起始原料来自的实施例编号LXIII 4-Cl MS(CI，NH3)：286([M+NH4]+；73％)LXIV 5-OMeb)0.53(G)LXV 4-OMeb)0.47(G)实施例LXVI2-氨基-3-乙氧羰基吲哚
将20g(85.4mmol)得自实施例LXII的化合物在300ml乙酸中加热至100℃，在剧烈搅拌下分批加入总量15g(268mmol)的铁粉，将混合物煮沸回流45分钟[比较C.A.Grob和O.Weissbach，Helv.Chem.Acta，44，1748(1961)]。冷却至大约20℃后，通过Seitz滤器吸滤混合物，用100ml乙酸洗涤。大体蒸发滤液，再加入乙醚和水，有机相用碳酸氢钾水溶液提取。合并水相，用2M盐酸调至pH3-4，用乙醚一起振摇提取。最后，合并有机相，用硫酸镁干燥，蒸发。粗产物通过在硅胶60上层析纯化(Merck/40-63μm/石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1→1∶1)。收率：9.9g(48.5mmol)，理论量的57％。TLC：Rf＝0.35(E)1H-NMR(d6-DMSO，200MHz，TMS)：δ＝1.32(t，3H)；4.21(q，2H)；6.68(s，br，2H)；6.82-6.92(m，2H)；7.10(m，1H)；7.54(m，1H)；10.64(s，br，1H)ppm。实施例LXVII2-氨基吲哚盐酸盐
在100℃将30g(147mmol)得自实施例LXVI的化合物在350ml浓盐酸中搅拌2小时(放出CO2)[比较R.A.Glennon和M.von Strandtmann，J.Heterocycl.Chem.12，135(1975)]。将混合物蒸发至干，通过与混合溶剂乙醇∶乙醚＝1∶1一起搅拌进行提取。吸滤出第一批沉淀物，如前那样通过搅拌提取滤液，但现在用少量的溶剂，再次吸滤(第二批沉淀)。在高真空下干燥(P2O5)各批产物。收率：第一批沉淀：19.96g(118mmol)，理论量的81％，
第二批沉淀：2.28g(14mmol)，理论量的9％，TLC：Rf＝0.33(BABA)1H-NMR(d6-DMSO，300MHz，TMS)：δ＝4.19(s，2H)；7.13(m，1H)；7.2(m，1H)；7.31(m，1H)；7.42(m，1H)；9.95(s，br，1H)；10.17(s，br，1H)；12.39(s，br，1H)ppm。实施例LXVIII 2-硝基-5-氯苯乙腈
搅拌下将在125ml乙醚中的20g(0.13mol)对氯硝基苯和25g(0.65mol)氢氧化钠粉末加到300ml液氨中。在大约-35℃搅拌大约10分钟后，在该温度下用40分钟时间向该悬浮液中滴加在25ml乙醚中的10.5(0.14mol)氯乙腈。2.5h后，加入25g固体氯化铵停止反应，蒸发掉氨，加入四氯甲烷保持体积基本恒定。然后通过蒸馏基本上除去醚，趁热过滤反应混合物。残留物用各300ml热四氯甲烷提取两次，合并滤液，浓缩。残留物用各125ml热的环己烷提取三次，残留物在硅胶上层析纯化。收率：5g(20％，Lit.75％)Rf＝0.32(石油醚：乙酸乙酯10：1)1H-NMR(250MHz，CDCl3)：δ＝4.22(s，2H)；7.56(dd，1H)；7.76(d，1H)；8.19(d，1H)ppm。MS(CI，NH3)：214([M+NH4]+，100％)实施例LXIX2-硝基-5-甲氧基苯乙腈
在50℃将44.0g(0.167mol)得自实施例LXIV的化合物在450ml 1N碳酸钠溶液中搅拌18小时。冷却至室温后，吸滤出沉淀，在50℃真空干燥(0.1torr)。收率：21.6g(67％)溶点：78℃1H-NMR(200MHz，CDCl3)：δ＝3.95(s，3H)；4.26(s，2H)；6.98(dd，1H)；7.18(d，1H)；8.27(d，1H)ppm。MS(CI，NH3)：210([M+NH4]+，100％)
表VI中的化合物按相似于实施例LXIX的方法制备：
表VI实施例编号 Aa)m.p.(℃)b)Rf(溶剂)光谱起始原料来自的实施例编号LXX 4-ClMS(CI，NH3)：214([M+NH4]+；100％)LXIIILXXI 4-OMea)62℃LXV实施例LXXII2-氨基-5-氯苯乙腈
将5.0g(0.025mol)实施例LXVIII化合物和4.6g(0.039mol)锡悬浮在40ml异丙醇中，并在10℃于氩气下缓慢地加入21ml浓盐酸。加完后，撤去冷浴使内温达到35-40℃。锡实际上在大约1.5h后溶解，向反应液的样品中加入1N氢氧化钠溶液至兰色不变。将反应混合物浓缩至大约15ml，过滤，残留物溶于50ml水中，再次过滤。用大约20ml30％氢氧化钠溶液在5℃下将滤液调至pH8.0，然后滤出沉淀，用各25ml水洗两次。滤饼用各25ml沸异丙醇提取三次，真空下浓缩滤液，干燥。收率2.5g(60％)1H-NMR(200MHz，CDCl3)：δ＝3.55(s，2H)；3.70(s，宽，2H)；6.69(d，1H)；7.14(dd，1H)；7.21(d，1H)ppm。MS(EI)：166([M+，74％)
表VII中化合物按相似于实施例LXXII中的方法制备：
表VII实施例编号 Aa)m.p.(℃)b)Rf(溶剂)光谱起始原料来自的实施例编号LXXIII 4-Cla)85℃LXXLXXIV 5-OMeMS(CI，NH3)：163([M+H]+；100％)LXIXLXXV 4-OMeMS(CI，NH3)：163([M+H]+；100％)LXXI实施例LXXVI
2-氨基-5-氯吲哚盐酸盐
将1.2g(0.053mol)钠溶于30ml异丙醇中。在大约80℃向此溶液中加入在15ml异丙醇中的2.5g(0.015mol)实施例LXXII化合物，然后将混合物煮沸回流1.5h。在60℃向反应液中加入15ml水，真空下基本上除去异丙醇，滤出沉淀。然后将沉淀溶于12ml异丙醇中，加入1ml水，用盐酸乙醇溶液将pH调到2.0。重新浓缩后，用水/丙酮重结晶，真空干燥。收率：1.6g(53％)1H-NMR(200MHz，CDCl3)：δ＝4.22(s，2H)；7.24(d，1H)；7.37(d，1H)；7.51(d，1H)；10.18(s，1H)；10，40(s，1H)；12.58(s，1H)ppm。MS(EI)：166([M+，100％)表VIII中的化合物按相似于实施例LXXVI的方法制备：
表VIII实施例编号 Aa)m.p.(℃)b)Rf(溶剂)光谱起始原料来自的实施例编号LXXVII 6-Cla)＞200℃MS(CI，NH3)：167([M+H]+；100％)LXXIIILXXVIII 5-0Mea)＞200℃MS(CI，NH3)：163([M+H]+；100％)LXXIVLXXIX 6-OMea)＞200℃MS(CI，NH3)：163([M+H]+；100％)LXXV实施例LXXX2，4-二甲基嘧啶并[1，2-d]吲哚使22g(131mmol)实施例LXVII化合物在200ml吡啶中与16.7ml(196mmol)2，4-戊二酮在大约20℃反应[比较A.N.Kost，R.S.Sagitullin，V.I.Gorbunov和N.N.Modyanov，Khim.Geterosikl.Soedin 6，359-363(1970)；英文译文334-337]。20小时后，将反应混合物倒入1.2l水中，吸滤出产生的沉淀。固体粗品用水洗数次，吸干，在高真空下用P2O5干燥。收率：22.5g(115mmol)，理论量的88％TLC：Rf＝0.31(B)1H-NIR(CDCl3，300MHz，TMS)：δ＝2.51(s，3H)；2.93(s，3H)；6.19(s，1H)；6.77(s，1H)；7.25(m，1H)；7.38(m，1H)；7.83(m，1H)；8.05(m，1H)ppm。
表IX中化合物按相似于实施例LXXX中的方法制备：
表IX实施例编号 A G L M a)m.p.(℃) b)Rf(溶剂)光谱起始原料来自的实施例编号LXXXI H Me H Et b)0.39(L) LXVIILXXXII H Et H Me b)0.31(L) IXVIILXXXIIII H Et H Et MS(CI)：224(M+， 100％) LXVIILXXXIV H Me Me Me b)0.60(B) LXVIILXXXV H Me Et Me b)0.48(B) LXVIILXXXVI H Et Me Me b)0.75(B) LXVIILXXXVII H Me Me Et b)0.60(B) LXVIILXXXVIII 6-CI Me H Me a)155℃ LXXVILXXXIX 7-CI Me H Me MS (CI，NH2)：231 ([M+H]+，100％) LXXVII XC 6-OMe Me H Me b)0.85(I) LXXVIII XCI 7-OMe Me H Me a) 76℃ LXXIX实施例XCII2(R/S)-环戊基-2-[4-(2，4-二甲基嘧啶并[1，2-a]吲哚-9-基甲基)苯基]乙酸叔丁酯
将6.57g(33.5mmol)实施例LXXX化合物、26.1g(50.2mmol)实施例XXXII化合物和10.9g(33.46mmol)碳酸铯在氩气下于大约20℃混合在70ml无水N，N-二甲基甲酰胺中并在120℃于油浴中搅拌45分钟。将冷却后的反应混合物倒入冷水中，用乙醚提取。有机相用硫酸镁干燥，蒸发。由此得到的初产物通过与甲醇一起搅拌进行提取，吸滤，用甲醇洗涤，在高真空下用P2O5干燥。第一批收率：8.02g(17.1mmol)，理论量的51％
蒸发滤液，在硅胶60上层析纯化(Merck/40-63μm/石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1→5∶1)。第二批收率：1.40g(3.0mmol)，理论量的9％。TLC：Rf＝0.44(C)。1H-NMR(CDCl3，200MHz，TMS)：δ＝0.93(m，1H)；1.36(s，9H)；1.14-1.71(m，6H)；1.85(m，1H)；2.38(m，1H)；2.51(s，3H)；2.92(s，3H)；3.06(d，1H)；4.46(s，2H)；6.15(s，1H)；7.12-7.34(m，6H)；7.63(m，1H)，8.05(m，1H)ppm。
表X中的外消旋化合物按相似于实施例XCII中的方法制备：
表X实施例编号 A G L M X Y a)m.P.(℃) b)Rf(溶剂) 光谱起始原料来自的实施例编号XCIII H Me H Me H tBu b)0.63(J)LXXX和XXXIVXCIV H Me H Me Me tBu b)0.28(C)LXXX和XXXVXCV H Me H Me Et tBu b)0.34(C)LXXX和XXXVIXCVI H Me H Me nPr tBu b)0.49(C)LXXX和XXXVIIXCVII H Me H Me nBu tBu b)0.35(C)LXXX和XLXCVIII H Me H Me iBu tBu b)0.57(B)LXXX和XLI IC H Me H Me nPent tBu MS(CI，NH3)： 4J1([M+H]+)， 100％)LXXX和XLII
表X续
表X续实施例 编号 A G L M X Y a)m.p.(℃) b)Rf(溶剂)光谱起始原料来自的实施例编号CXIV H Me Et Me cPent Ment b)0.50(C) LXXXV和 CLXXIICXV H Et Me Me cPent Ment b)0.54(C) LXXXVI和 CLXXIICXVI H Me Me Et cPent Ment b)0.50(C) LXXXVI和 CLXXIICXVII 6-CI Me H Me cPent tBu a)181℃ LXXXVIII 和XXXIICXVIII 7-Cl Me H Me cPent tBu MS(CI，NH3)： 503(M+，100％) LXXXLX和 XXXIICXIX 6-OMe Me H Me cPent tBu b)0.87(L) XC和 XXXIICXX 7-OMe Me H Me cPent tBu b)0.84(L) XCI和 XXXII实施例CXXI2(R/S)-2-环戊基-2-[4-(2，4-二甲基嘧啶并[1，2-a]吲哚-9-基甲基)苯基]乙酸
在70℃的浴温下使8.00g(17.1mmol)实施例XCII化合物与14ml浓盐酸在60二噁烷中反应1.5h。冷却反应液，用600ml水稀释，用2M氢氧化钠水溶液调pH到2.5。吸滤由此产生的沉淀，用水洗数次，在高真空下用P2O5干燥。收率：6.89g(16.7mmol)，理论量的98％TLC：Rf＝0.41(D)1H-NMR(D6-DMSO，200MHz，TMS)：δ＝0.89(m，1H)；1.08-1.61(m，6H)；1.78(m，1H)；2.37(m，1H)；2.46(s，3H)；2.96(s，3H)；4.32(s，2H)；6.46(s，1H)；7.11-7.37(m，6H)；7.70(m，1H)；8.19(m，1H)；12.15(s，br，1H)ppm。
表XI中的外消旋化合物按相似于实施例CXXI中的方法制备：
表XI实施例编号 A G L M X a)m.p.(℃) b)Rf(溶剂) 光谱 起始原料来自 的实施例编号 CXXII H Me H Me H MS (CI，NH3)：345 (JM+H]+，20％) XCIII CXXIII H Me H Me Me b)0.23(D) XCIV CXXIV H Me H Me Et b)0.38(D) XCV CXXV H Me H Me nPr b)0.29(D) XCVI CXXVI H Me H Me nBu b)0.17(B) XCVII CXXVII H Me H Me iBu b)0.25(B) XCVIII CXXVIII H Me H Me nPent MS (CI，NH3：415 ([M+H]+，100％) IC CXXIX H Me I Me iPent Ms(CI，NH3)：414(M+， 100％) C CXXX H Me H Me CH(Et)2 MS (CI，NH3)：415 ([M+H]+，100％) CI
表XI续实施例 编号 A G L M X a)n.p.(℃) b)Rf(溶剂) 光谱 起始原料来自 的实施例编号 CXXXI H Me H Me nHex b)0 20(B) CII CXXXII H Me H Me -CH2CH(Et)2 MS(CI，NH3)：429 ([M+H]+，100％) CIII CXXXIII H Me H Me cHex b)0.16(B) CIV CXXXIV H Me H Me cHept b)0.52(D) CVI CXXXV H Me H Me cOct b)0.45(D) CVII CXXXVI H Me H Me -CH2cPent b)0.22(D) CVIII CXXXVII H Me H Et cPent b)0.13(L) CX CXXXVIII H Et H Me cPent b)0.26(L) CXI CXXXIX H Et H Et cPent MS (CI，NH3)441 ([M+H}+，100％ CXII CXL H Me Me Me cPent MS(CI，NH3)427 (IM+H}+，100％ CXIII CXLI 6-Cl Me H Me cPent MS(CI，NH3)447 ([M+H}+，100％ CXVII CXLII 7-Cl Me H Me cPent MS(CI，NH3)447 ([M+H}+，100％ CXXVIII CXLIII 6-OMe Me H Me cPent Ms(CI，NH3)443 ([M+H}+，100％ CXIX CXLIV 7-OMe Me H Me cPent MS(CI，NH3)442(M+， 100％ CXX实施例CXLV2-(S)-2-环戊基-2-[4-{(2，4-二甲基-3-乙基嘧啶并[1，2-a]吲哚-9-基)甲基}苯基乙酸
将445mg(0.769mmol)实施例CXIV化合物在6ml甲酸和3ml 48％氢溴酸中煮沸回流4h，然后倒入水中，用碳酸氢钠调至pH2。吸滤出产生的沉淀，用水洗涤，吸干，用石油醚洗涤后再次吸干。真空下用P2O5干燥后的粗收率为242mg。将从此后处理得到的母液吸收到乙醚和水中，水相用乙醚回洗，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，在真空下-最后在高真空下除去溶剂。粗收率：50mg
合并各批产物，在硅胶60上层析纯化(Merck/二氯甲烷∶乙醇＝100∶1)收率：259mgRf＝0.30(B)
表XII中的化合物按相似于实施例CXLV中的方法制备：
表XII实施例编号 A G L M X a)n.p.(℃C) b)Rf(溶剂) 光谱 起始原料来自 的实施例编号 CXLVI H Et Me Me cPent b)0.27(B) CXV CXLVII H Me Me Et cPent b)0.18(B) CXVI实施例CXLVIII2(R/S)-2-环戊基-2-[4-{(2，4-二甲基嘧啶并[1，2-a]吲哚-9-基)甲基}苯基]乙酸
在60℃使4.16g(9.45mmol)实施例CV化合物在132ml 1M氢氢化钠水溶液和200ml 1，4-二噁烷中反应72h。将反应混合物蒸发至大约150ml，加入400ml水，用2M盐酸水溶液在0℃将pH调至2.5。吸滤由此产生的沉淀，用水洗涤，吸干，真空下用P2O5干燥。收率：3.5gRf＝0.20(B)
表XIII中的外消旋化合物按相似于实施例CXLVIII的方法制备：
表XIII
表XIV中的化合物按相似于实施例XCII中的方法制备：表XIV
表XIV续表XV中的化合物按照相似于实施例CXXI中的方法制备：
表XV
表XV续实施例CLXIV2(R/S)-2-环戊基-2-(3-甲苯基)乙酸甲酯
按照相似于实施例IV中的方法从2-(3-甲苯基)乙酸甲酯制备标题化合物。Rf＝0.56(P)。实施例CLXV2(R/S)-2-(3-溴甲基苯基)-2-环戊基乙酸甲酯
按照相似于实施例XXXII的方法从实施例CLXIV化合物制备标题化合物。Rf＝0.40(P)。实施例CLXVI2(R/S)-2-环戊基-2-(4-甲基苯基)乙酸
在带有搅拌器和连有洗涤塔的40l反应器中将2.0kg(7.2mol)实施例IV化合物溶于4l二噁烷中。加入4.5l浓盐酸，在50℃下搅拌直至转化完全(3h)。向反应混合物中加入冰，用浓氢氧化钠溶液将pH调至12。加入水使固体完全溶解，然后用乙酸洗涤，有机相用稀的氢氧化钠溶液洗涤，合并水相，冷却下用浓盐酸调至pH1。用乙酸乙酯洗涤两次，然后用Na2SO4干燥，浓缩。收率：1.27kg，理论量的81％熔点：92℃。Rf＝0.20(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)1H-NMR(CDCl3，200MHz，TMS)：δ＝0.98(m，1H)；1.20-1.71(m，6H)；1.82-2.05(m，1H)；2.31(s，3H)；2.52(m，1H)；321(d，1H)；7.10(m，2H)；7.21(m，2H)；11.90(br，s，1H)ppm。实施例CLXVII(S)-(+)-2-环戊基-2-(4-甲基苯基)乙酸
将2.4lTHF和129.7g(1.28mol)三乙胺在搅拌下加到560g(2.57mol)实施例CLXVI化合物在4.8l水中的悬浮液中。所得溶液加热至60℃，加入155.4g(1.28mol)(S)-(-)-苯乙胺，所得悬浮液在60℃搅拌2小时。将反应混合物冷却到20℃，吸滤出沉淀，用24l水/THF(2∶1)洗涤，真空干燥。收率：360g苯乙铵盐；基于实施例CLXVI的外消旋体计占理论量的41.3％。
将745g(2.2mol)苯乙铵盐悬浮在3l水中，用稀盐酸(1∶1)酸化(pH＝1)，搅拌30分钟，油状悬浮液用各1l二氯甲烷洗三次，合并有机相，用水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，残留物结晶。收率：475g；基于实施例CLXVI的外消旋体计占理论量的37.3％。ee：96.3％(HPLC)熔点：66℃。通过用THF对苯乙铵盐进行结晶并如上所述那样释放实施例CLXVII，得到了纯的对映体：ee：＞99.5％(HPLC)旋光度：[α]D20＝+59.55(乙醇/c＝0.85)
测定ee的HPLC方法如下(得自实施例CLXVI的外消旋化合物用作比较)：柱： Chiracel OJ(Daicel)粒度： 10μ填料： 250×2mm(得自Grom)移动相： 正庚烷∶2-丙醇＝97∶3流速： 0.2ml/min入口压力：22bar实施例CLXVIII(S)-(+)-2-环戊基-2-(4-甲基苯基)乙酸叔丁酯
将温度设置在大约10℃，将6ml浓硫酸加到465g(2.13mol)实施例CLXVII化合物在1.4l二氯甲烷中的溶液中。将550ml(5mol)异丁烯冷凝到Dewar容器中，一次性地加到前体溶液中。将反应混合物搅拌过夜。转化完全后，再次加入6ml浓硫酸和500ml异丁烯，搅拌过夜。加入40ml碳酸钾，搅拌3小时，然后加入2l水，加入时最初冒出大量气体。用各2l二氯甲烷洗涤三次后，合并有机相，用5l氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩得到油状物，油状物缓慢结晶。收率：480g，理论量的82％熔点：45℃Rf＝0.90(甲苯∶乙酸乙酯＝8∶2)。实施例CLXIX(S)-(+)-2-(4-溴甲基苯基)-2-环戊基乙酸叔丁酯
在回流下在10l烧瓶中将480g(1.75mol)实施例CLXVIII化合物溶于3.4l四氯甲烷中，加入总量311g(1.75mol)NBS中的70g和14g(0.085mol)AIBN。在回流大约1h后反应开始；平息后，再按每份50g加入NBS。回流5小时后，在室温下放置过夜，为了后处理，将混合物冷却到0℃，吸滤出琥珀酰亚胺，用600ml四氯甲烷洗涤。合并滤液，浓缩，真空下除去残留溶剂至恒量。粗收率：570g；占理论量的大约100％HPLC： 68.8％(15.5％前体，10.1％二溴化合物)。通过柱层析得到纯物质。Rf＝0.42(Q)1H-NMR(CDCl3，200MHz，TMS)：δ＝0.98(m，1H)；1.22-1.71(m，6H)；1.40(s，9H)；1.90(m，1H)；2.47(m，1H)；3.16(d，1H)；4.49(s，2H)；7.32(m，4H)ppm。实施例CLXX2-(4-甲基苯基)乙酸(L)-_酯
将3.15kg对甲苯基乙酸引入到9.45l甲苯中，搅拌和冷却下，加入3.115kgL-_醇和21.4ml甲磺酸。然后将混合物加热到回流温度，在16-20小时时间内用脱水器除去适量的水。冷却至室温，通过与4.41l饱和碳酸氢钠溶液搅拌一次和与各4.41l水搅拌两次进行提取。从有机相中除去溶剂，得到5.725kg所需化合物(GC99.9％，保留时间19.49min)。1H-NMR(CDCl3，ppm)：7.05-7.15(4H，m)；4.55(1H，txd)；3.5(2H，s)；2.8(3H，s)；0.65(3H，s)。实施例CLXXI2-(S)-2-环戊基-2-(4-甲基苯基)乙酸(L)-_酯
在室温下将1.575kg叔丁醇钾溶于3.75l DMF中。将溶液冷却到10℃，在此温度下，用45分钟加入2.678kg实施例CLXX化合物，用0.375l DMF洗涤，然后，充分冷却，用1-2小时时间泵入1.658kg环戊基溴。在无冷却下将悬浮液再搅拌1小时，然后冷却到-7℃。达到-10℃时，用正确的非对映体接种，继续在-7℃冷却。达到-7℃后，将混合物在此温度下搅拌3-4小时。将反应悬浮液引入到1.5kg冰和6kg水的混合物中进行后处理。然后将混合物在0℃-2℃搅拌过夜。吸滤悬浮液并用总量2.5l水洗涤结晶进行后处理，在真空炉中于45℃真空干燥结晶物。得到3.289kg 85∶15非对映体混合物。
将4.345kg上面制得的混合物在30-35℃下溶于21.75l甲醇中。用正确的非对映体接种并冷却到室温后，将混合物搅拌过夜，次日早上冷却到0-5℃。在该温度下1-2小时后，吸滤出结晶，干燥，或者再次重结晶。重复甲醇结晶一到两次，制备非对映体纯度≥99.5％的物质(GC保留时间22.61min)。
非对映异构纯的标题化合物的收率在环戊烷基化和通过数个结晶阶段纯化后是65-70％，通过重结晶或在DMF中用叔丁醇钾使母液差向异构化以及非对映异构体混合物粗品重新结晶可以增加到75-80％。13C-NMR(CDCl3，CH信号，ppm)128.90；128.92；73.96；57.85；46.92；43.13；31.28；25.96ppm。实施例CLXXII2-(S)-2-(4-溴甲基苯基)-2-环戊基乙酸(L)-_酯
将1.40kg实施例CLXXI化合物在13.74l氯苯中加热到80℃。然后加入0.618kg 1，3-溴-5，5-二甲基乙内酰脲，再将混合物加热到85℃。然后在该温度下，加入20.4g AIBN开始反应。反应开始后，温度升到90-105℃，然后回落到大约85℃。反应继续大约2小时。将容器中的内容物冷却到室温，搅拌1小时。吸滤出沉淀的结晶，从滤液中除去溶剂。根据HPLC分析剩余的油状物纯度为61.2％(保留时间16.48min)。得到1.69kg。将混合物粗品用于下列烷基化反应中。层析和随后的结晶提供了具有正确CH分析的熔点57-58℃的白色粉末。1H-NMR(CDCl3，ppm)：7.3(4H，s)；4.65(1H，txd)；4.45(2H，s)；3.35(1H，d)；0.65(3H，d)。实施例CLXXIII2-(R/S)-2-苯基-2-(4-甲基苯基)乙酸甲酯
将21.0g(100mmol)2-苯基-1-(4-甲基苯基)-1-氧乙烷和38.8g(120mmol)碘苯二乙酸酯溶于300ml原甲酸三甲酯中。向该溶液中加入19.6g浓硫酸，然后在60℃搅拌6小时。将溶液冷却到室温，用水稀释，用乙醚提取。合并有机相，用硫酸钠干燥，在旋转蒸发器上蒸发。残留物通过柱层析纯化。收率：13.1g(55％)Rf＝0.33(Q)MS(FAB)：241(25％)，181(100％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3，TMS)：δ＝7.3-7.10(m，9H)；4.99(s，1H)；3.73(s，3H)；231(s，3H)ppm。实施例CLXXIV 2-(R/S)-2-(4-氯苯基)-2-(4-甲基苯基)乙酸甲酯
按照相似于实施例CLXXIII中的方法制备标题化合物。Rf＝0.41(Q)。
表XVI中的外消旋化合物按相似于实施例XXXII的方法制备：
表XVI实施例编号Wa)m.p.(℃)b)Rf(溶剂)光谱起始原料来自的实施例编号CLXXVHb)0.74(G)CLXXIIICLXXVIClb)0.28(G)CLXXIV制备实施例实施例1N-{2-(R)-和2(S)-2-环戊基-2-[4-(2，4-二甲基嘧啶并[1，2-a]吲哚-9-基-甲基)苯基]乙酰基}-(R)-苯基甘氨醇
在大约20℃下使1.88g(4.56mmol)实施例CXXII化合物在20ml二氯甲烷中与0.63g(4.56mmol)(R)-苯基甘氨醇、0.68g(5.00mmol)1-羟基-1H-苯并三唑、1.01g(5.02mmol)N′-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐和1.27g(9.12mmol)三乙胺反应20小时。然后将反应液先用pH＝2的缓中液洗涤，再用MgSO4干燥，蒸发。非对映体混合物粗品在硅胶60上纯化(Merck/40-63μm/二氯甲烷∶乙醇＝20∶1)。收率：2.20g(4.14mmol)，理论量的91％。
通过层析分离异构体(实施例2和3)。
将452mg实施例1中所述的产物溶于10ml乙腈、13ml甲醇和2ml水中，经数个注射步骤将所得溶液加到HPLC柱上。固定相： Kromasil 100C185μm温度： 50℃流速： 20ml/min移动相： 乙腈∶水∶甲醇＝37.5∶25∶37.5
在UV检测(230nm)后收集洗脱液，先真空蒸发，然后冷冻干燥除去残留溶剂。非对映异构体A(实施例2)：176mg非对映异构体B(实施例3)：160mg实施例2N-{2(S)-2-环戊基-2-[4-(2，4-二甲基嘧啶并[1，2-a]吲哚-9-基甲基)苯基]乙TLC：Rf＝0.19(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)熔点：208℃(未校正)1H-NMR(CDCl3，300MHz，TMS)：δ＝0.97(m，1H)；1.26(m，1H)；1.38-2.02(m，6H)；2.28(m，1H)；2.51(s，3H)；2.55(m，1H)；2.94(s，3H)；3.03(d，1H)；3.77-3.89(m，2H)；4.48(s，2H)；4.94(m，1H)；5.99(d，1H)；6.17(s，1H)；6.96-7.00(m，2H)；7.10-7.34(m，9H)；7.67(m，1H)；8.07(m，1H)ppm。实施例3N-{2(R)-2-环戊基-2-[4-(2，4-二甲基嘧啶并[1，2-a]吲哚-9-基甲基)苯基]乙酰基}-(R)-苯基甘氨醇TLC：Rf＝0.19(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)熔点：191℃(未校正)1H-NMR(CDCl3，200MHz，TMS)：δ＝0.97(m，1H)；1.22(m，1H)；1.36-1.68(m，6H)；1.86(m，1H)；2.49(m，1H)；2.52(s，3H)；2.94(s，3H)；3.01(d，1H)；3.66-3.81(m，2H)；4.48(s，2H)；4.93(m，1H)；6.07(d，1H)；6.18(s，1H)；7.13-7.37(m，11H)；7.66(m，1H)；8.06(m，1H)ppm。
对映异构纯的羧酸2-(S)-和2-(R)-2-{4-(2-喹啉基甲氧基)苯基}-2-环戊基乙酸的绝对构型[比较EP509359]是已知的，所以按相似于实施例1和2中的方法制备的实施例C1和实施例C2的酰胺的绝对构型可以推出。两个非对映异构的产物的1H-NMR谱(200Mz，d6-DMSO，TMS(实施例C1)和250MHz，d6-DMSO，TMS(实施例C2)/图1)表明了其芳族区的明显不同：实施例C1中的苯基上的氢的信号在大约7.1ppm (3H)和7.3ppm(2H)，而实施例C2中的氢信号在大约7.3ppm(5H)。该发现已经应用到了实施例2和3的化合物(图2)和该类型的其它衍生物，以这种方式发现了所指明的绝对和相对构型。
表1中的化合物按相似于实施例1、2和3的方法制备：
表1实施例 编号 异构体 A G L M X a)m.p.(℃C) b)Rf(溶剂)光谱起始原料来自的实施例编号 4 / H Me I Me H MS(FAB)：464 ([M+H]+，20％) CXXII 5 2 dia H Me H Me Me b)0.28/0.33(D) CXXIII 6 dia A H Me H Me Me b)0.28(D) CXXIII 7 dia B H Me H Me Me b)0.33(D) CXXIII 8 2 dia H Me H Me Et b)0.28/0.31(D) CXXIV 9 dia A H Me H Me Et b)0.28(D) CXXIV 10 dia B H Me H Me Et b)0.31(D) CXXIV 11 2 dia H Me H Me nPr b)0.46/0.63(D) CXXV 12 dia A H Me H Me nPr b)0.63(D) CXXV 13 dia B H Me H Me nPr b)0.46(D) CXXV 14 2 dia H Me H Me nBu b)0.44(D) CXXVI
表1续实施例编号异构体 A G L M X a)m.p.(℃) b)Rf(溶剂)光谱起始原料来自的实施例编号 15 dia A H Me H Me nBu b)0.44(D) CXXVI 16 dia B H Me H Me nBu b)0.44(D) CXXVI 17 2 dia H Me H Me iBu b)0.42(D) CXXVII 18 dia A H Me H Me iBu b)0.42(D) CXXVII 19 dia B H Me H Me iBu b)0.42(D) CXXVII 20 2 dia H Me H Me nPent a)149℃ CXXVIII 21 dia A H Me H Me nPent MS(FAB)533 (M+，100％) CXXVIII 22 dia B H Me H Me nPent a)140℃ CXXVIII 23 2 dia H Me H Me iPent a)174℃ CXXIX 24 dia A H Me H Me iPent a)164℃ CXXIX 25 dia B H Me H Me iPent a) 204℃ CXXIX 26 2 dia H Me H Me -CH(Et)2 a)110℃ CXXX 27 dia A H Me H Me -CH(Et)2 a)112℃ CXXX 28 dia B H Me H Me -CH(Et)2 a)193℃ CXXX 29 2 dia H Me H Me nHex b)0.63/0.58(D) CXXXI 30 dia A H Me H Me nHex b)0.63(D) CXXXI 31 dia B H Me H Me nHex b)0.58(D) CXXXI 32 2 dia H Me H Me -CH2CH(Et)2 a)179℃ CXXXII
表1续
表1续表2中的化合物按照相似于实施例1，2和3中的方法制备：
表2实施例编号异构体 A G L M X a)n.p.(℃) b)Rf(溶剂)光谱起始原料来自的实施例编号 63 2 dia H Me H Me cPent b)0.23(F)CXXI 64 dia A H Me H Me cPent b)0.23(F)CXXI 65 dia B H Me H Me cPent b)0.23(F)CXXI 66 dia A H Me Me Me cPent a)198℃CXL 67 dia B H Me Me Me cPent a＞230℃CXL
表3中的化合物按相似于实施例1中的方法制备：表3
表3续