新的7，12-二氧杂苯并[a]蒽、 其制法和含它们的药物 本发明涉及新的取代的7，12-二氧杂苯并[a]蒽化合物、制备它们的方法和含有它们的药物组合物。本发明的化合物具有优良的抗肿瘤活性和优良的治疗用途。
在文献中，叙述了与人胎盘的Ah(芳香烃)受体相互作用的化合物7，12-二氧杂-9，10-二氯苯并[a]蒽(生物化学药理学，1990，40(4)，737-741页)。然而，没有报道此化合物的治疗活性。
本发明化合物的新颖性在于其结构和作为抗肿瘤剂的用途。
更具体地，本发明涉及式(I)的化合物、其异构体和它与药用酸或碱的加成盐：其中：R1代表氢原子或式O-R的基团，其中R代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，它任选地被芳基或杂芳基取代，R2代表氢原子，卤原子，羟基，直链或支链(C1-C6)烷氧基，甲酰基，CF3SO3基，氰基，直链或支链(C1-C6)烷氧羰基或芳氧基羰基，NR′aR′b基，其中R′a代表(C1-C6)二烷基氨基烷基，其中各个烷基部分相互独立地相同或不同，为含有1至6个碳原子的直链或支链，而R′b代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，或基团BN R″aR″b，其中B代表羰基或亚甲基，R″a和R″b分别与R′a和R′b相同的定义，或R″a代表被至少一个羟基取代的直链或支链(C1-C6)烷基X代表氮原子，它任选地被直链或支链(C1-C6)烷基Rc取代，或其中R3代表氢原子，直链或支链(C1-C6)烷氧羰基地基团C-R3，或基团BN R″aR″b，其中B代表羰基或亚甲基，R″a和R″b与上面相同的定义，或，当X代表基团C-R3时，R2和X与它们所连接的碳原子一起形成式(II)的环：其中R′a具有与上面相同的定义，Y代表氮原子或C-R4，其中R4代表氢原子，或其中R″代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基，它任选被羟基取代，或芳基或杂芳基的基团O-R″，应理解，当X代表氮原子和Y代表CH基，或当X代表CH基而Y代表氮原子，或当X和Y同时代表CH基时，则R1和R2不能同时代表氢原子，应理解，术语“芳基”意思是以相同或不同的方式被一个或多个卤原子或直链或支链(C1-C6)烷基，羟基，直链或支链(C1-C6)烷氧基或三氟甲基任选取代的苯基或萘基，而术语“杂芳基”意思是含有1或2个选自O，S和N的杂原子的单或双环芳香基，它以相同或不同的方式被一个或多个卤原子或直链或支链(C1-C6)烷基，羟基，直链或支链(C1-C6)烷氧基或三氟甲基取代。
在药用酸中，非限制性地可被提到的有，盐酸，氢溴酸，硫酸，磷酸，乙酸，三氟乙酸，乳酸，丙酮酸，丙二酸，丁二酸，戊二酸，富马酸，酒石酸，马来酸，柠檬酸，抗坏血酸，草酸，甲磺酸，樟脑酸，等等。
在药用碱中，非限制性地可被提到的有，氢氧化钠，氢氧化钾，三乙胺，叔丁基胺，等等。
更具体地，本发明涉及：
式(I)化合物，其中R2代表基团NR′aR′b，其中R′a代表(直链或支链(C1-C6)二烷基氨基(直链或支链(C1-C6))烷基，各个烷基部分相互独立地相同或不同，而R′b代表氢原子或直链或支链(C1-C6))烷基，
或式(I)化合物，其中当X由C-R3组成时，R2或X代表基团BNR″aR″b，其中B如上定义而分别对应于R′a和R′b的R″a和R″b如上定义，
或式(I)化合物，其中当X由C-R3组成时，R2或X与其所连接的碳原子一起形成式(II)的环：其中R′a具有如上的意义，和更具体地，式(I)化合物，其中当X由C-R3组成时，R2或X与其所连接的碳原子一起形成式(II)的环，其中Ra代表二甲基氨基乙基。
本发明更具体地涉及为N2-(7，12-二氧杂-3-羟基苯并[a]蒽-5，6-马来酰亚胺基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐的式(I)化合物。
本发明也涉及制备式(I)化合物的方法，其中用作原料的有：
对于其中X代表氮原子或CH基团的化合物，有式(III)化合物：它—或者被二溴化然后用间-氯过氧化苯甲酸处理，与碘化钾作用得到化合物(IIIa)：
-或者根据Fiedel-Crafts反应酰化，二溴化然后用间氯过氧化苯甲酸处理产生式(IV)化合物：它与碘化钠作用然后与诸如乙基钠的碱作用，以得到化合物(V)：它与其中R代表任选被芳基或杂芳基取代的直链或支链(C1-C6))烷基的式R-卤素的亲电试剂缩合，产生式(VI)化合物：其中R具有与上面相同的意义，集合的化合物(IIIa)和(VI)形成式(VII)化合物：其中R′1代表氢原子或任选被芳基或杂芳基取代的直链或支链(C1-C6))烷氧基，它在例如用氢氧化钠水溶液皂化后，在偶合剂如1，3-二甲基氨基丙基-3-乙基碳化二亚胺的存在下与二乙胺缩合产生式(VIII)化合物：其中R′1具有与上面相同的意义，它与强碱作用然后与三甲基氯化锡作用产生式(IX)化合物：其中R′1具有与上面相同的意义，它在碘化铜和过渡金属配合物如钯配合物存在下：
或者与叔丁氧羰基-2-碘代苯胺缩合得到式(X)化合物：其中R′1具有与上面相同的意义，它水解后产生式(XI)化合物：其中R′1具有与上面相同的意义，它与POCl3反应得到式(I/a)化合物，式(I)化合物的一种特定情况：其中R′1具有与上面相同的意义，它在其中R′1代表直链或支链(C1-C6))烷氧基的情况下，与脱烷基化剂如三溴化硼作用，例如产生式(I/b)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：集合的化合物(I/a)和(I/b)形成式(I/c)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R1具有与上面相同的意义，该式(I/c)化合物：
*与还原剂如锌作用产生式(I/d)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R1具有与上面相同的意义，将其通过与烷基化剂如甲基碘作用进行N-烷基化产生式(I/e)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：R′c代表直链或支链(C1-C6))烷基而Hal为卤素。
*或与其中R′a代表(直链或支链(C1-C6)二烷基)氨基(直链或支链(C1-C6))烷基，各个烷基部分相互独立地相同或不同，而R′b代表氢原子或直链或支链(C1-C6))烷基的式NR′aR′b二胺缩合，产生式(I/f)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R1，R′a和R′b具有与上面相同的意义，
或者与2-碘代甲苯作用，得到式(XII)化合物：其中R′1具有与上面相同的意义，它在与强碱如二异丙基胺化锂作用后，产生式(I/g)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R′1具有与上面相同的意义，该式(I/g)化合物进行：
*在其中R′1代表直链或支链(C1-C6)烷氧基的情况下，它与脱烷基化剂如三溴化硼作用，例如，产生式(I/h)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：
*或在过渡金属配合物如钯配合物和还原剂如二异丁基氢化铝存在下与三氟甲磺酸酐，氰化物接着作用，得到式(I/i)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R′1具有与上面相同的意义，该化合物通过在甲醇存在下与氧化剂如二氧化锰作用，被氧化为甲基酯，产生式(I/j)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R′1具有与上面相同的意义，在其中R1代表直链或支链(C1-C6)烷氧基的情况下，它与脱烷基化剂如三溴化硼作用，例如，产生式(I/k)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：集合的化合物(I/j)和(I/k)形成式(I/l)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R1具有与上面相同的意义，与其中R′a代表(直链或支链(C1-C6)二烷基氨基(直链或支链(C1-C6))烷基，各个烷基部分相互独立地相同或不同，而R′b代表氢原子或直链或支链(C1-C6))烷基的式NR′aR′b二胺缩合，产生式(I/m)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R1，R′a和R′b具有与上面相同的意义，应理解，化合物(I/m)可以通过化合物(I/k)与其中R′1具有与上面相同的意义的式R′1-卤素的亲电试剂在碱性介质中作用而得到，
-对于其中X不代表氮原子的化合物，式(XIII)化合物：将其：- 或者二溴化然后用间氯过氧化苯甲酸处理并与碘化钾作用得到化合物(XIIIa)：- 或者根据Fiedel-Crafts反应酰化，二溴化然后用间氯过氧化苯甲酸处理并与碘化钠作用然后与碱作用，产生式(XIV)化合物：它与其中R代表任选地被芳基或杂芳基取代的直链或支链(C1-C6)烷基的式R-卤素的亲电试剂缩合，产生式(XV)化合物：其中R具有与上面相同的意义，集合的化合物(XIIIa)和(XV)形成式(XVI)化合物：其中R′1代表氢原子或任选地被芳基或杂芳基取代的直链或支链(C1-C6)烷氧基，在与诸如丁基锂的强碱作用后，例如，与式(XVII)的亲电试剂缩合：其中Z代表NCOOEt基团或基团CR5R6其中R5和R6同时代表氢原子或一起形成环其中m等于2或3，产生式(XVIII)化合物：其中R′1和Z具有与上面相同的定义，它在甲磺酰氯存在下，脱水得到例如式(XIX)化合物：其中R′1和Z具有与上面相同的定义，它与乙炔二羧酸甲酯或丙炔酸甲酯缩合得到式(XX)化合物：其中R′1和Z具有与上面相同的定义，而n等于1或2，将其与氧化剂如邻氯醌或2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯并醌作用，产生- 式(I/n)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R′1具有与上面相同的定义，而Z′代表氮原子或C-R7，其中R7代表氢原子或基团O-(CH2)m-OH其中m等于2或3，- 或式(XXI)化合物：其中R′1，n和m如上面定义，它接着在酸性介质中开环乙缩醛，形成甲硅烷基醚，用2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯并醌氧化，并用氟化剂解封甲硅烷基醚，产生式(I/o)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R′1和n如上面相同定义，它与其中R8代表任选地被芳基或杂芳基取代的直链或支链(C1-C6)烷基的各种亲电试剂R8-卤素缩合，得到式(I/p)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R′1，n和R8如上面定义，式(I/n)，(I/o)和(I/p)化合物形成集合的式(I/q)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中其中R′1和n如上面定义而Y具有与式(I)相同的定义，该化合物(I/q)：
当n等于1或2时，与其中R″a代表(直链或支链(C1-C6)二烷基)氨基(直链或支链(C1-C6))烷基，其各个烷基部分相互独立地相同或不同，或被至少一个羟基取代的直链或支链(C1-C6)烷基，而R″b代表氢原子或直链或支链(C1-C6))烷基的式HNR″aR″b二胺缩合，产生式(I/r)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R′1，R″a，R″b，n和Y具有与上面相同的定义，
*或者，当n等于1或2时，在还原条件下产生相应的醇，将其在二氧化锰存在下氧化为醛，产生式(XXII)化合物：其中R′1，Y和n如上定义，将其在氯化锌和氰基硼氢化钠存在下与其中R″a代表(直链或支链(C1-C6)二烷基)氨基(直链或支链(C1-C6))烷基，其各个烷基部分相互独立地相同或不同，或被至少一个羟基取代的直链或支链(C1-C6)烷基，而R″b代表氢原子或直链或支链(C1-C6))烷基的式HNR″aR″b二胺缩合，产生式(I/s)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R′1，R″a，R″b，Y和n具有与上面相同的定义，
*或者，当n等于2时，产生式(I/t)化合物，是式(I)化合物的一种特定情况：其中R′1，R′a和Y具有与上面相同的定义，化合物(I/a-t)形成本发明的集合化合物，若适当，根据标准纯化技术将它们纯化，如果需要，可以将它们分离为其不同的光学或几何异构体，或与药用酸或碱成盐。
用于上述方法的原料是商品或本专业熟练的技术人员根据在文献，例如，J.Koo，S.Avakian，G.J.Martin，美国化学协会期刊，77，1955，5373页中所述的公知方法容易理解的。
式(I)化合物具有有利的药理性质。它们具有优良的体外细胞毒性，不仅对白血病系，而且也对固体肿瘤系；它们也对细胞周期具有作用，并在白血病模型上具有体内活性。这些性质使它们能作为抗肿瘤剂用于治疗。
本发明的主题也是含有式(I)产品，其光学异构体或其与药用酸或碱的加成盐之一，单独或与一种或多种无毒性，惰性赋形剂或载体混合的药物组合物。
在本发明的药物组合物中，更具体地，可被提到的有，适于口服，非肠胃内，鼻内，直肠内，舌上，眼内或呼吸道给药的那些，和以特别简单或糖衣片剂，舌下片剂，香囊或急救包，硬明胶囊，在舌下溶解的制剂，含片，拴剂，乳膏，软膏，皮肤凝胶，用于注射或口服的制剂，气雾剂和眼或鼻的滴剂。
适合的剂量根据患者的年龄和体重，给药途径，治疗适应症和任何相关治疗的性质变化，在每天一次或几次给药0.1-400mg之间的范围。
下面的实施例举例说明本发明而不在任何意义上限制它。原料是已知产品或根据已知工艺制备。实施例1：7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽阶段A：1，4-苯并二噁烯-2-羧酸
将1mmol 1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯在25ml 8％氢氧化钠溶液中回流。冷却后，慢慢加入3N盐酸直到苯并二噁烯羧酸沉淀。过滤后，固体在苯中重结晶。熔点：178-180℃阶段B：1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)
在0℃，惰性气氛中，将15.4mmol二乙胺，15.4mmol 1，3-二甲基氨基丙基-3-乙基碳化二亚胺和15.4mmol羟基苯并三唑加入14.04mmol 1，4-苯并二噁烯-2-羧酸在25ml DMF中的溶液中。使混合物成室温并搅拌18小时。蒸发DMF后，残余物用水洗，然后用乙酸乙酯提取。然后将有机层用硫酸镁干燥并真空浓缩。该酰胺通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯)。阶段C：三甲基锡基-1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)
在-78℃，惰性气氛中，将17.4mmol二异丙基氨化锂加入8.58mmol1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)在50ml无水四氢呋喃的溶液中。反应2小时30分钟后，滴加溶于最小量四氢呋喃中的21.4mmol氯化三甲基锡。3小时后将反应混合物水解然后用乙酸乙酯提取。有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩。该锡混合物通过用三乙胺处理过的硅胶快速色谱纯化。熔点：63-65℃阶段D：3-[2-(叔丁氧羰基氨基)苯基]-1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)
在惰性气氛中，将3.93mmol 3-三甲基锡基-1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)和3.94mmol N-叔丁氧羰基-2-碘代苯胺溶于25ml1，4-二噁烷中。在加入5％四(三苯基膦)钯和5％碘化铜后将反应混合物回流。真空蒸发溶剂后，残余物用乙酸乙酯提取然后真空浓缩。该酰胺通过用硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯)。熔点：147-149℃阶段E：[5H]-7，1 2-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-酮
将25ml 6N盐酸加入1.2mmol 3-[2-(叔丁氧羰基氨基)苯基]-1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)在25ml 二噁烷中的溶液中。将混合物在70℃加热8小时。将二噁烷的体积在真空下缩减为一半然后过滤。固体用水洗然后在五氧化磷存在下干燥。熔点：＞300℃阶段F：6-氯-5-氮杂-7，12-二氧杂苯并[a]蒽
在惰性气氛中，[5H]-7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-酮在氯化氧磷中回流6小时。然后在真空下蒸发溶剂(氯化氧磷)，粗混合物通过硅胶快速色谱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯)。熔点：136-138℃阶段G：7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽
在惰性气氛中将1mmol 6-氯-5-氮杂-7，1 2-二氧杂苯并[a]蒽和8mmol粉末状锌在5ml乙酸中在50℃加热8小时。冷却后，反应混合物用甲醇稀释然后滤过Celite。将残余物真空浓缩，然后用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后用氯仿提取。有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩。粗混合物通过硅胶快速色谱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚)。熔点：127-129℃实施例2：N2-(7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基乙烷-1，2-二胺
在惰性气氛中将6-氯-5-氮杂-7，12-二氧杂苯并[a]蒽(实施例1-阶段F的化合物)在N，N-二甲基乙烷-1，2-二胺中回流2小时。过量的二胺在真空下蒸发掉，残余的粗产物通过用三乙胺处理过的硅胶快速色谱层析(洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇)。实施例3：N2-(7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基乙烷-1，2-二胺盐酸盐
将用盐酸蒸汽饱和的醚溶液加入溶于最小量二氯甲烷中的N2-(7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基乙烷-1，2-二胺(实施例2的化合物)中。定量得到的相应盐酸盐被过滤，用乙醚洗涤然后真空干燥。熔点：280-282℃实施例4：N2-(7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二乙基乙烷-1，2-二胺盐酸盐
根据实施例2的方法得到二胺，用N，N-二乙基乙烷-1，2-二胺且反应时间为3小时，根据实施例3的方法得到盐酸盐。熔点：256-258℃实施例5：N2-(7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基丙烷-1，2-二胺盐酸盐
根据实施例2的方法得到二胺，用N，N-二甲基丙烷-1，2-二胺，根据实施例3的方法得到盐酸盐。熔点：238-240℃实施例6：N2-(7，1 2-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二乙基丙烷-1，2-二胺盐酸盐
根据实施例2的方法得到二胺，用N，N-二乙基丙烷-1，2-二胺且反应时间为3小时，根据实施例3的方法得到盐酸盐。熔点：220-222℃实施例7：10-甲氧基-5-氮杂-7，12-二氧杂苯并[a]蒽阶段A：6-乙酰基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯
在0℃，将12.5g三氯化铝加入4.27g乙酰氯和7.5g 1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯在150ml二硫化碳中的混合物中。反应混合物在室温下搅拌14小时。用50ml盐酸(2N)酸性水解后，用二氯甲烷提取水相，有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后硫酸镁干燥。酰化的产物通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，7∶3)。熔点：123-125℃阶段B：6-乙酰基-2，3-二溴-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯
在惰性气氛中，0℃，将1.1ml元素溴在5ml四氯化碳中的溶液在30分钟内滴加到部分溶于50ml四氯化碳中的5g 6-乙酰基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯中，4小时后，反应介质在真空下浓缩，该二溴化物通过硅胶快速色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，8∶2)；油状物阶段C：6-乙酰氧基-2，3-二溴-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯
在惰性气氛中，将6-乙酰基-2，3-二溴-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯在5.6g间氯过氧化苯甲酸存在下在二氯甲烷中回流72小时，滤除形成的氯代苯甲酸，滤液用饱和碳酸氢钾溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩，粗混合物通过硅胶快速色谱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，7∶3)，熔点：58-60℃阶段D：6-乙酰氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯
在惰性气氛中，将6g 6-乙酰氧基-2，3-二溴-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯在100ml丙酮的溶液与7.75g碘化钾混合并搅拌6小时，在减压下蒸发丙酮后，残余物在乙醚中稀释然后用20％硫代硫酸钠溶液洗涤直到混合物脱色，有机相然后用硫酸镁干燥然后真空浓缩，化合物通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，7∶3)，熔点：86-88℃阶段E：6-羟基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯
在惰性气氛中，将5g 6-乙酰氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯在75ml乙醇和3ml乙醇钠(1M)中的溶液搅拌18小时，然后将反应介质用Dowex(X-8酸形式)中和，然后过滤并真空浓缩，残余的粗产物通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯7∶3)，熔点：179-181℃阶段F：6-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯
在惰性气氛中，2.4g 6-羟基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯和540mg氢化钠在25ml二甲基甲酰胺中搅拌，40分钟后，滴加0.84ml碘代甲烷，然后将混合物在室温下搅拌1小时，真空蒸发溶剂，残余物用乙酸乙酯稀释然后用水洗，有机相用硫酸镁干燥然后真空浓缩，该甲基醚通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，7∶3)熔点：98-100℃
实施例7的化合物通过从6-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯开始重复实施例1的阶段A，B，C，D，E，F和G而得到。熔点：132-134℃实施例8：10-苄氧基-5-氮杂-7，12-二氧杂苯并[a]蒽
用实施例7的相同工艺，用苄基氯代替阶段F中的甲基碘。实施例9：N2-(10-甲氧基-7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基乙烷-1，2-二胺
实施例9的化合物通过从6-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯和阶段H(实施例2)开始重复实施例7的阶段A，B，C，D，E和F然后实施例1的A，B，C，D，E和F而得到。熔点：148-150℃实施例10：N2-(10-羟基-7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基乙烷-1，2-二胺盐酸盐阶段A：10-甲氧基6-氯-5-氮杂-7，12-二氧杂苯并[a]蒽
工艺如实施例7的阶段A，B，C，D，E和F然后实施例1的A，B，C，D，E和F起始底物为6-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯，熔点：194-196℃阶段B：10-羟基-6-氯-7，12-5-氮杂-二氧杂苯并[a]蒽
在惰性气氛中，0℃，将1.22ml三溴化硼滴加到80mg 10-甲氧基-6-氯-5-氮杂-7，12-二氧杂苯并[a]蒽在3ml二氯甲烷中的溶液中，2小时后，反应混合物用饱和碳酸钠溶液水解，有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩，该二甲基化的化合物通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，7∶3)，熔点：＞300℃阶段C：N2-(10-羟基-7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基乙烷-1，2-二胺盐酸盐
工艺如从10-羟基-6-氯-7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽得到二胺的实施例2，通过用如实施例3所述的工艺得到相应的盐酸盐。熔点：273-275℃实施例11：6-羟基-10-甲氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽阶段A：3-三甲基锡基-6-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)
工艺如实施例7的阶段A，B，C，D，E和F然后实施例1的A，B和C从6-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯开始。熔点：58-60℃阶段B：3-(2-甲苯基)-6-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)
在惰性气氛中，将500mg 3-三甲基锡基-6-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)和0.2ml碘代甲苯在122mg四？钯和22mg碘化铜的存在下在1，4-二噁烷中回流。然后真空蒸发二噁烷，残余物用水洗然后用乙酸乙酯洗涤。有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩。偶合的产物通过硅胶快速色谱(洗脱剂：甲苯/乙酸乙酯，95∶5)纯化。熔点：60-62℃阶段C：6-羟基-10-甲氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽
在惰性气氛中，在-78℃，将1.42ml二异丙基氨化锂滴加到0.95mmol3-(2-甲苯基)-6-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)在7ml THF中的溶液中，反应混合物保持在此温度下2至3小时，将温度调为-10℃然后酸性水解(10％HCl)，水相用二氯甲烷提取，然后将有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩，环合的产物通过硅胶快速色谱纯化(洗脱剂：甲苯/乙酸乙酯，95∶5)。熔点：183-185℃元素分析：
C％ H％ O％计算 72.85 4.32 22.83实测 72.57 4.61 22.86实施例12：6，10-二羟基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽
在惰性气氛中，0℃，将0.1ml三溴化硼滴加到90mg 6-羟基-10-甲氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽在3ml二氯甲烷中的溶液中，4小时后，反应混合物被水解，有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩，该二羟基化的化合物通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯)，熔点：219-221℃实施例13：10-羟基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-[(2-二甲基氨基乙基)甲酰胺]盐酸盐阶段A：6-异丙氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯
工艺如实施例7的阶段A，B，C，D，E和F，用异丙基碘代替甲基碘。阶段B：3-三甲基锡基-6-异丙氧基-1，4-苯并二噁烯-2-(二乙基甲酰胺)
工艺如实施例1的阶段A，B和C，从6-异丙氧基-1，4-苯并二恶烯-2-羧酸乙酯开始。阶段C：6-羟基-10-异丙基氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽
工艺如实施例11的阶段B和C。阶段D：10-异丙基氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-三氟甲烷磺酸酯
在惰性气氛中，0℃，将0.1ml吡啶然后将0.45ml三氟甲磺酸酐滴加到90mg 6-羟基-10-异丙基氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽在10ml二氯甲烷中的溶液中，1小时后，反应混合物用饱和氯化铵溶液水解，用二氯甲烷提取，有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩，通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，9∶1)，熔点：98-100℃阶段E：6-氰基-10-异丙基氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽
在惰性气氛中，将27mg氰化锌和420mg四？钯依次加入三氟甲磺酸化合物在3ml DMF的溶液中，然后将反应混合物加热到80℃ 30分钟。减压蒸发DMF后，残余物用饱和碳酸钠溶液洗涤然后用乙酸乙酯提取。有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，95∶5)，熔点：133-135℃阶段F：10-异丙基氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-甲醛
在惰性气氛中，室温下，将0.8ml二异丁基氢化铝滴加到170mg 6-氰基-10-异丙基氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽在5ml甲苯中的溶液中，15分钟后，反应混合物用5％盐酸溶液水解，水相用二氯甲烷提取，有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩，醛通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，95∶5)，熔点：140-142℃阶段G：10-异丙基氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-羧基甲基酯
在惰性气氛中，将84mg氰化钠，597mg二氧化锰和82mg冰乙酸加入1410mg 10-异丙基氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-甲醛在5ml无水甲醇的溶液中，将反应混合物调至40℃然后过滤，有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩，该甲基酯通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，9∶1)，熔点：128-130℃阶段H：10-羟基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-羧基甲基酯
在惰性气氛中，-10℃，将0.04ml三溴化硼加到50mg异丙基醚(阶段G)在2ml二氯甲烷中的溶液中，15分钟后，反应混合物被水解，水相用二氯甲烷提取，然后用硫酸镁干燥并真空浓缩，该羟基化合物通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，7∶3)，熔点：168-170℃阶段I：10-羟基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-[(2-二甲基氨基乙基)甲酰胺]盐酸盐
工艺如实施例2和3。熔点：从130℃分解实施例14：10-甲氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-[(2-二甲基氨基乙基)甲酰胺]盐酸盐阶段A：10-甲氧基-6-羟基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽
工艺如实施例11。熔点：183-185℃阶段B：10-羟基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-羧基甲基酯
工艺如实施例13的阶段D，E，F和G。熔点：108-110℃阶段C：10-甲氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-[(2-二甲基氨基乙基)甲酰胺]盐酸盐
工艺如实例2和3。熔点：213-215℃实施例15：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-[(2-二甲基氨基乙基)甲酰胺]阶段A：1，4-苯并二噁烯
在惰性气氛中，将57.9g N-溴代丁二酰亚胺和30mg氮杂异丁腈加入20g 1，4-苯并二噁烷在300ml四氯化碳中的溶液中。将反应混合物用一灯加热回流6小时。滤除形成的丁二酰亚胺，真空浓缩滤液。得到的产物溶于丙酮并在108g碘化钠存在下搅拌2小时。蒸发溶剂后，将绿色残余物溶于水/乙醚混合物中，然后将有机相用20％硫代硫酸钠溶液洗涤，硫酸镁干燥。苯并二恶烯通过硅胶色谱纯化。阶段B：2-(1-羟基-1-环己基)-1，4-苯并二噁烯
在惰性气氛中，-78℃，将16.79ml 1.6M正丁基锂的己烷溶液加入50ml无水THE中的1，4-苯并二噁烯溶液中。1小时后，滴加30mmol环己酮。保持在-78℃ 3小时30分钟。用10％盐酸溶液水解和中和反应介质后，水相用乙醚提取，然后将有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩。该醇通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯)，为油的形式。阶段C：2-(1-环己烯基)-1，4-苯并二噁烯
在惰性气氛中，0℃，将14ml三乙胺和3.85ml甲磺酰氯慢慢加入10ml2-(1-羟基-1-环己基)-1，4-苯并二噁烯在75ml二氯甲烷的溶液中。15分钟后将混合物回流1.5小时。水解后，用二氯甲烷提取，然后将有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩。该二烯通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，7∶3)，为油的形式。阶段D：1，2，3，4，4a，6a-六氢-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5-羧酸甲酯
在封管内，将500mg 2-(1-环己烯基)-1，4-苯并二噁烯和1.4ml丙酸甲酯在70℃搅拌22小时30分钟。通过硅胶色谱分离区域异构体(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，98∶2)。熔点：72-74℃阶段E：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5-羧酸甲酯
在惰性气氛中，在986mg DDQ存在下，将370mg 1，2，3，4，4a，6a-六氢-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5-羧酸甲酯在10ml甲苯中的溶液回流6小时。冷却后，反应混合物用8％氢氧化钠溶液洗涤。有机相用硫酸镁干燥然后真空浓缩。通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，95∶5)。熔点：144-146℃阶段F：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5-[(2-二甲基氨基乙基)甲酰胺]
工艺如实施例2。熔点：198-200℃实施例16：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-[(2-二甲基氨基乙基)甲酰胺]
工艺如实施例15，在阶段D选择另一区域异构体。熔点：139-141℃实施例17：N2-(7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5，6-二马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐阶段A：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯
工艺根据实施例15的阶段A，B，C，D和E，在阶段D用乙炔二羧酸甲酯代替丙酸甲酯。熔点：182-184℃阶段B：N2-(7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5，6-二马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺
在惰性气氛中，将600mg 7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯在10ml N，N-二甲基乙二胺中在100℃加热24小时。所得化合物通过根据色谱纯化(洗脱剂：乙酸乙酯∶甲醇，85∶15)，熔点：186-188℃阶段C：N2-(7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5，6-二马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐
工艺如实施例3。熔点：208-210℃实施例18：N2-(7，12-二氧杂-3-氮杂苯并[a]蒽-5，6-二马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐阶段A：1，2，4，4a，6a-五氢-7，12-二氧杂-3-氮杂苯并[a]蒽-3-(羧酸乙酯)5，6-(二羧酸甲酯)
工艺根据实施例15的阶段A，B，C和D，在阶段B用N-乙氧羰基-4-哌啶酮代替环己酮，在阶段D用乙炔二羧酸甲酯代替丙酸甲酯。阶段B：1，2，4-三氢-7，12-二氧杂-3-氮杂苯并[a]蒽-3-(羧酸乙酯)5，6-(二羧酸甲酯)
在惰性气氛中，将1，2，4，4a，6a-五氢-7，12-二氧杂-3-氮杂苯并[a]蒽-3-(羧酸乙酯)5，6-(二羧酸甲酯)溶于25ml甲苯中。加入1.196g邻氯苯并醌之后将溶液调至35℃ 48小时。冷却后，反应混合物用8％氢氧化钠溶液洗涤。有机相用硫酸镁干燥，然后真空浓缩。通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，6∶4)。熔点：153-155℃阶段C：7，12-二氧杂-3-氮杂苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯
在惰性气氛中，将1g 1，2，4-三氢-7，12-二氧杂-3-氮杂苯并[a]蒽-3-(羧酸乙酯)5，6-(二羧酸甲酯)在25ml甲苯中在1.574g邻氯苯并醌存在下回流48小时。后面的工艺如阶段B。熔点：160-162℃阶段D：N2-(7，12-二氧杂-3-氮杂苯并[a]蒽-5，6-二马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐
工艺如实施例17的阶段B和C。熔点：278-280℃实施例19：N2-(7，12-二氧杂-3-(2-羟基乙氧基)苯并[a]蒽-5，6-马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐阶段A：7，12-二氧杂-3-(2-羟基乙氧基)苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯
工艺如实施例15的阶段A，B，C，D和E，在阶段B用1，4-环己二酮单亚乙基缩醛代替环己酮，在阶段D用乙炔二羧酸甲酯代替丙酸甲酯。熔点：182-184℃阶段B：N2-(7，12-二氧杂-3-(2-羟基乙氧基)苯并[a]蒽-5，6-马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐
工艺如实施例17的阶段B和C。熔点：298-300℃实施例20：N2-(7，12-二氧杂-3-羟基苯并[a]蒽-5，6-马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐阶段A：1，2，4-三氢-7，12-二氧杂-3-(亚乙基缩醛)苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯
工艺如实施例19的阶段A。熔点：144-146℃阶段B：1，2，4-三氢-7，12-二氧杂-3-氧代苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯
在惰性气氛中，将1g乙缩醛在丙酮中在609mg对甲苯磺酸酯存在下回流。72小时后，真空蒸发溶剂，反应混合物用水洗涤，然后用乙酸乙酯提取。有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩。该酮通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，6∶4)。熔点：190-192℃阶段C：1，2-二氢-7，12-二氧杂-3-(叔丁基二甲基甲硅烷基醚)苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯
在惰性气氛中，在-78℃，将1ml二异丙基氨化锂和0.3ml四甲基乙二胺连续滴加到溶于10ml四氢呋喃和0.5ml六甲基磷酰胺中的500mg酮(阶段B)中。将混合物保持在-78℃ 2小时，然后加入溶于最小量四氢呋喃中的氯化二甲基叔丁基甲硅烷。3小时后，将反应混合物调至-10℃，然后减压蒸发挥发性产物。该甲硅烷基醚通过用三乙胺处理过的硅胶快速色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，9∶1)。熔点：98-100℃阶段D：7，12-二氧杂-3-(叔丁基二甲基甲硅烷基醚)苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯
工艺如实施例15的阶段E。熔点：68-70℃阶段E：3-羟基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯
在惰性气氛中，将450mg甲硅烷基醚(阶段D)溶于四氢呋喃，然后在室温下加入1.9ml氟化四叔丁基铵。30分钟后，反应混合物用水洗。水相用二氯甲烷提取，有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩。该羟基化合物通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，5∶5)。熔点：198-200℃阶段F：N2-(7，12-二氧杂-3-羟基苯并[a]蒽-5，6-马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐
工艺如实施例17的阶段B和C。熔点：198-300℃实施例21：N2-(7，12-二氧杂-3-甲氧基苯并[a]蒽-5，6-马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐阶段A：3-羟基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯
工艺如实施例20的阶段A，B，C，D和E。阶段B：3-甲氧基-7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5，6-二羧酸甲酯
工艺如实施例7的阶段F。熔点：170-172℃阶段C：N2-(7，12-二氧杂-3-甲氧基苯并[a]蒽-5，6-马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐
工艺如实施例17的阶段B和C。熔点：258-260℃实施例22：N2-(7，12-二氧杂-3-苄氧基苯并[a]蒽-5，6-马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐
工艺如实施例21，用实施例8的工艺代替实施例7的阶段F。实施例23：7，12-二氧杂-3-羟基苯并[a]蒽-5，6-[(2-二甲基氨基乙基)甲酰胺]盐酸盐
工艺如实施例20。熔点：在160℃分解
实施例24：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-[(1，3-二羟基-3-甲基丙基)甲酰胺]阶段A：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-羧酸甲酯
如实施例15直到阶段E的工艺，在阶段D选择另一区域异构体。阶段B：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-[(1，3-二羟基-3-甲基丙基)甲酰胺]
在惰性气氛中，将70mg溶于3ml四氢呋喃中的7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-羧酸甲酯在251mg 2-甲基-2-氨基-1，3-丙二醇存在下回流76小时。该化合物通过用三乙胺中和的硅胶色谱纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇，9∶1)。熔点：136-138℃实施例25：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5-[(2-二甲基氨基乙基)甲胺]盐酸盐阶段A：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5-羧酸甲酯
工艺如实施例15的阶段A，B，C，D和E。阶段B：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5-基甲醇
在惰性气氛中，将72mg氢化铝锂和170mg溶于四氢呋喃的阶段A的化合物在室温下搅拌45分钟。然后将反应混合物水解，水相用乙酸乙酯提取。有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩。该化合物通过硅胶快速色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，7∶3)。熔点：189-191℃阶段C：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5-甲醛
将溶于10ml二氯甲烷的130mg醇和642mg二氧化锰在室温下搅拌3小时，然后将溶液过滤。滤液被真空浓缩并通过硅胶色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯，9∶1)。熔点：133-135℃阶段D：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5-[(2-二甲基氨基乙基)甲胺]
在惰性气氛中，将溶于1ml甲醇的34mg氯化锌和32mg氰基硼氢化钠加入130mg醛和0.22ml二甲基乙二胺在5ml甲醇中的溶液。在35℃下6小时后，蒸除甲醇。残余物溶于二氯甲烷并用水洗。有机相用硫酸镁干燥并真空浓缩。该化合物通过用三乙胺处理过的硅胶色谱纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/甲醇，9∶1)。阶段E：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-5-[(2-二甲基氨基乙基)甲胺]盐酸盐
如实施例3的过程。熔点：254-256℃实施例26：7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-[(1，3-二羟基-3-甲基丙基)甲胺]
如实施例15阶段A，B，C，D和E的过程得到7，12-二氧杂苯并[a]蒽-6-羧酸甲酯，它根据实施例25阶段B，C和D的方法，用2-甲基-2-氨基-1，3-丙二醇在步骤D中作为胺。熔点：148-150℃实施例27：7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽碘化物
如实施例1中的阶段A，B，C，D，E，F和G的过程，并用1.85ml甲基碘处理140mg 7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽。避光下室温12小时后，通过过滤分离沉淀的产物。熔点：263-265℃实施例28：N2-(8-甲氧基-7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基乙烷-1，2-乙二胺盐酸盐
如实施例7阶段A，B，C，D，E和F，然后如实施例阶段A，B，C，D，E和F的过程，以8-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯作为起始底物产生在位置6氯代的相应化合物，它根据实施例2的过程处理得到二胺，用实施例3所述的过程得到相应的盐酸盐。熔点：256-258℃实施例29：N2-(8-羟基-7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基乙烷-1，2-乙二胺盐酸盐
如实施例10阶段A，B和C的过程，以8-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯作为阶段A的起始底物。熔点：286-288℃实施例30：N2-(11-甲氧基-7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基乙烷-1，2-乙二胺盐酸盐
如实施例28的过程，以5-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯作为起始底物。熔点：271-273℃实施例31：N2-(11-羟基-7，12-二氧杂-5-氮杂苯并[a]蒽-6-基)-N1，N1-二甲基乙烷-1，2-乙二胺盐酸盐
如实施例29的过程以5-甲氧基-1，4-苯并二噁烯-2-羧酸乙酯作为起始底物。熔点：265-267℃
药理研究
下列实施例证明本发明化合物的细胞毒性性质，它们在细胞周期和体内对于白血病模型的作用。实施例A：化合物的细胞毒性
使用三种细胞系：-1鼠白血病，L1210，-1人表皮癌，KB-3-1，-1非小细胞人肺癌，A549。
该细胞在含有10％胎牛血清，2mM葡糖胺，50单位/ml青霉素，50μg/ml链霉素和10mMHEPES的完整RPMI 1640培养基中培养。
将细胞分布在微板中并暴露于细胞毒性化合物。然后将它们温育2天(L1210)和4天(A549，KB-3-1)。存活细胞的数量通过比色分析，即Minoculture Tetrazolium分析(Carmichael J.，De GraffW.G.，Gazdar A.F.，Minna J.D.和Mitchell J.R.，基于四唑翁的半自动比色分析评价法：化学敏感性试验的评估，癌症研究，47，936-942，1987)而定量。结果以IC50，即抑制50％被处理细胞的增生毒性化合物的浓度表达。
所得结果显示对于L1210系具有良好的一般性细胞毒性，IC50值在0.2至1μM之间。而且，分别对于固体肿瘤如KB-3-1系和A549系可以证明细胞毒性。实施例B：对细胞周期的作用
在不同浓度的试验产物存在下，在37℃将L1210温育21小时。该细胞然后用70％(V/V)乙醇固定，在PBS中洗涤两次，并在20℃在含有100μg/ml RNAse和50μg/ml propidium iodide的PBS中温育30分钟。计算在G2+M相的百分数，其结果根据测定的分类表达为在21小时之后积聚在G2+M相的细胞百分数相对于对照(对照：20％)的函数。在产物的浓度范围为0.5至50μM时，21小时后，本发明化合物在G2+M相中的细胞积聚大于70％。实施例C：体内活性：对P388白血病的抗肿瘤活性
P388(鼠的白血病)系由国家癌症研究所(Frederick，USA)提供。将肿瘤细胞(106细胞)在第0天接种到体重为18至20g(8至10动物组)的雌性BDF1鼠(Iffa-Credo，France)的腹膜腔内。将产物在第1天以指定的剂量通过腹膜内的途径给药。抗肿瘤活性被表达为T/C百分数：
获得的结果用，例如，50mg/kg的剂量对P388白血病模型显示优良的体内活性，以及低的化合物的细胞毒性，试验为优良的治疗指数。实施例D：含有10mg剂量N2-(7，12-二氧杂-3-羟基苯并[a]蒽-5，6-马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺盐酸盐(实施例20)的片剂配制1000片的制剂：N2-(7，12-二氧杂-3-羟基苯并[a]蒽-5，6-马来酰亚氨基)-N1，N1-二甲基乙二胺 10g小麦淀粉 15g玉米淀粉 15g乳糖 65g硬脂酸镁 2g二氧化硅 1g羟基丙基纤维素 2g