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抗肿瘤活性化合物曲霉菌素P
    技术领域：本发明涉及医药技术领域，确切地说它是以稻瘟霉分生孢子生长抑制和菌丝体形态变化为指标，对土壤真菌泡盛曲霉(Aspergillusawamori Nakazawa)的无性世代代谢产物进行活性追踪分离，从中提取具有新骨架的抗真菌、抗肿瘤活性化合物曲霉菌素P(AspergillinP)。

    背景技术：近年来研究表明，化合物引起稻瘟霉分生孢子和菌丝体形态上的变化与其抗真菌、抗肿瘤活性之间存在很好的相关性[1.HisayoshiKobayashi，Michio Namikoshi，Takeshi Yoshimoto.A screening method forantimitotic and antifungal substances using conidia of Pyricularia oryzaeand application to tropical marine fungal.J Antibiot，1996，49(9)：873～879]，可以以其形态上的特征变化来筛选有特定活性类型的化合物。

    土壤真菌次级代谢产物的研究一直是药物开发的一个热点，并从中开发出很多抗真菌、抗肿瘤药物。有文献报道从曲霉属真菌次级代谢产物中分离得到了一系列与化合物曲霉菌素P结构类似的化合物AspochalasinA-H，其中化合物Aspochalasin F和Aspochalasin G具有对抗HL-60和MH-60癌细胞株活性[2.Fang Fang，Hideaki Ui，Kazuro Shiomi，et al.Twonew components of the aspochalasins produced by Aspergillus sp.JAntibiot，1997，50(11)：919～925]，而且均能使稻瘟霉菌丝体发生中等强度的变形，进一步说明化合物致稻瘟霉菌丝体形态变化和抗癌活性之间存在一定的相关性。文献报道的Aspochalasin F和Aspochalasin G仅占粗提物的0.13‰和0.14‰，而化合物曲霉菌素P占粗提物的8.33‰。因此，可以考虑从菌种改造方面入手对其进行大量的制备，为进一步的活性研究提供物质保障。

    发明内容：本发明的目的就在于利用中国广阔的土壤真菌资源，提出一种以人工发酵生产泡盛曲霉的发酵液为原料，提取分离具有新骨架抗真菌、抗肿瘤活性化合物曲霉菌素P的提取分离方法。

    本发明以中国河北省武安市上团城乡采集的土样样品中分离得到的0288-1号菌株为生产菌[经中国科学院沈阳应用生态研究所王书锦研究员鉴定为泡盛曲霉(Aspergillus awamori Nakazawa)]进行大批发酵，发酵液用乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸膏。经过硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱，合并100∶2洗脱部分，用氯仿-甲醇(1∶10)进行重结晶，得到一无色透明方晶，命名为曲霉菌素P。该化合物难溶于甲醇中，易溶于氯仿。分子量：EI-MS m/z：401(M+)。分子式：C24H35NO4。核磁共振光谱数据见附图1。结合EI-MS、1H-NMR(300MHz，DMSO)、13C-NMR(75MHz，DMSO)、1H-1H COSY、HMQC和HMBC图谱鉴定了其结构，并用X-ray单晶衍射进行了证实见附图2、3、4。

    体外抗稻瘟霉实验表明，该化合物在8.90×10-5mol/L浓度下能诱导稻瘟霉分生孢子发生严重变形，推测可能具有抗癌活性。本发明提供了一种以发酵生产泡盛曲霉的发酵液为原料，提取分离具有新骨架抗真菌、抗肿瘤活性化合物曲霉菌素P的提取分离方法，为将来开发新的抗真菌药物提供天然药物化学研究基础。

    附图说明：

    图1是化合物曲霉菌素P的核磁共振图谱数据。

    图2是化合物曲霉菌素P地分子相对构型图。

    图3是化合物曲霉菌素P的分子立体结构投影图。

    图4是晶胞沿A轴方向的投影图。

    图1中a：C-2’-Me和C-3’碳谱数据可以相互交换

    具体实施方式：

    实施例：

    人工方法生产的泡盛曲霉(Aspergillus awamori Nakazawa)过滤发酵液7L过滤，上清液用乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯层浸膏15g，经过硅胶柱色谱(300g)，氯仿-甲醇梯度洗脱，合并100∶2部分，氯仿∶甲醇(1∶10)重结晶，得化合物曲霉菌素P100mg。