地来西坦在治疗慢性疼痛中的应用.pdf

本发明公开了地来西坦在治疗慢性疼痛中的应用。在剂量高于先前所公开的关于其认知增强活性(即改善学习和记忆)的剂量下，地来西坦能够完全反转与若干个慢性疼痛动物模型有关的痛觉过敏或异常性疼痛。地来西坦在与抗病毒药和化疗药治疗有关的医源性神经病变中和在由骨关节炎引起的疼痛性病况中显示高活性。另外，地来西坦在比最高治疗剂量高10倍的剂量下没有毒性。因此公开了使用高效的和基本上无毒的化合物来治疗这种致虚弱性病变的可能性。

1.  地来西坦或其药学可接受的溶剂合物，其单独或与其它活性成分联合，在制备用于治疗和/或预防慢性疼痛的药物中的应用。2.权利要求1的应用，其中与地来西坦联合给药的药物是抗肿瘤药或抗病毒药。

3.  权利要求2的应用，其中与地来西坦联合给药的药物选自：紫杉醇，长春新碱，顺铂，奥沙利铂，核苷反转录酶抑制剂抗病毒药及其衍生物。

4.  权利要求1-3的应用，其用于治疗：由化疗剂、其它抑制生长治疗和/或抗病毒药诱导的疼痛。

5.  权利要求1的应用，其用于治疗复杂性局部疼痛综合症。

6.  权利要求1的应用，其用于治疗幻肢痛。

7.  权利要求1的应用，其用于治疗丘脑综合征和脊椎综合征。

8.  权利要求1的应用，其用于治疗由骨关节炎、类风湿性关节炎、自身免疫骨关节炎形式诱导的疼痛。

9.  权利要求1的应用，其用于治疗头痛。

10.  权利要求1的应用，其用于治疗纤维肌痛。

11.  权利要求1-10的应用，其用于制备剂量单位：对于口服，可用于给予10到300毫克/千克的地来西坦，对于肌肉内，可用于给予5到150毫克/千克的地来西坦；对于静脉内，可用于给予2到60毫克/千克的地来西坦。

12.  权利要求1-11的应用，其用于制备剂量单位：对于口服，其中地来西坦的含量为500到15000毫克；对于肌肉内，其中地来西坦的含量为250到7500毫克；对于静脉内，其中地来西坦的含量为100到3000毫克。

13.  用于治疗和/或预防慢性疼痛的药物组合物，包含单独的或与其它活性成分联合的地来西坦或其药学可接受的溶剂合物。

14.  权利要求13的药物组合物，其为剂量单位的形式：对于口服，可用于给予10到300毫克/千克的地来西坦，对于肌肉内，可用于给予5到150毫克/千克的地来西坦；对于静脉内，可用于给予2到60毫克/千克的地来西坦。

15.  权利要求13-14的药物组合物，其用于制备剂量单位：对于口服，其中地来西坦的含量为500到15000毫克；对于肌肉内，其中地来西坦的含量为250到7500毫克；对于静脉内，其中地来西坦的含量为100到3000毫克。

16.  权利要求13-15的药物组合物，其选自片剂，胶囊，经口制备物，粉剂，颗粒剂，小球，用于注射或输注的液体溶液，悬浮剂，乳剂，糖浆剂，酏剂，干粉剂或粒子，持续释放制剂，膏剂，霜剂，洗剂，凝胶剂，糊剂，用于透皮施用的膜剂或加药贴剂。

17.  地来西坦或其药学可接受的溶剂合物，其单独或与其它活性成分联合，用于治疗和/或预防慢性疼痛。

地来西坦在治疗慢性疼痛中的应用
技术领域
本发明涉及慢性疼痛的药理学治疗领域。
背景技术
与急性疼痛(所述急性疼痛起到提醒有机体关于即将来临的危险或损害的重要生理作用)不同的是，慢性疼痛不牵涉任何的保护作用。
慢性疼痛可被分成两个主要类别：慢性炎性疼痛和慢性神经性疼痛。后者起因于神经通路上由病害引起的直接病变，其可由感染、代谢、血管或其它因素所致。在慢性炎性疼痛中，病变组织释放产生疼痛的因子，该因子又损伤神经末端，产生恶性机制，该恶性机制维持和加强疼痛感觉(痛觉过敏)或将其它类型的感觉转化成疼痛(异常性疼痛)。
慢性疼痛，无论是神经性来源的还是炎性来源的，都是高度的未被满足的医学需要状况的重要流行病学方面；实际上，目前存在以有效性有限和耐受性差的治疗为特征的治疗范围。越来越多的患者遭受由在现代肿瘤学中使用的抗肿瘤治疗所诱导的医源性神经性疼痛的困扰。特别是紫杉醇衍生药物，顺铂和长春新碱是更经常诱导疼痛的神经病变的药物。目前，对于这种疼痛没有有效的和/或被充分耐受的治疗。实际上，被成功用于其它形式的神经性疼痛的经典的抗癫痫药或抗抑郁药诸如拉莫三嗪(Renno S.I.2006，J.Clin.Oncol.ASCOAnnual Meeting Proceeding Part I vol.24，No 18S：8530)，加巴喷丁(Wong G.Y.2005，J.Clin.Oncol.ASCO Annual MeetingProceeding Part I vol.23，No 16S：8001)或去甲替林(Hammack J.E.2002，Pain 98：195-203)基于它们的治疗指数，是绝对令人不满意的。
核苷类似物反转录酶抑制剂(ddC，d4T，AZT)通常在AIDS治疗中被用作抗病毒药物。这些药物通常在延长的治疗后引发严重程度不同的周围神经病变。正如在化疗剂的情况中，这些症状可能如此之强，从而导致这些救生治疗被缩短或中止。这些神经病变的模式显然不同于由AIDS进展所诱导的那些；它们实际上以在大约治疗第十周时在双手和双脚中有非常强烈的灼热不适感的突然发作为特征。相反地，HIV导致的神经病变具有非常缓慢的进展(Dubinsky R.M.1989，MuscleNerve 12：856-860)。就化疗诱导的神经病变而言，很难治疗这种疼痛。
三环类抗抑郁药阿米替林和钠通道阻断剂美西律，对各种形式的疼痛性周围神经病变是有效的，但对这种神经性疼痛不显示任何显著的影响(Kieburtz K.1998 Neurology 51：1682-1688)。加巴喷丁显示出一些效力，尽管具有严重综合征的患者很少达到令人满意的结果并且需要另外给予麻醉剂(McArthur J.C.2001，The Hopkins HIVreport，http://www.hopkins-aids.edu/publications/report/may01_2.html)。
其它形式的神经性疼痛可由病毒感染引起。例如，带状疱疹神经痛由在感染之后很久的水痘-带状疱疹病毒的再活化所引起。这种神经病变的特征在于强烈的机械异常性疼痛，对热刺激通常丧失敏感性和自发的间歇性疼痛。疼痛强度损及罹患这一病况的患者的生命质量。
在高的流行病学相关事件中，是被称为头痛的疼痛。其局部发生于头、脸和颈。当头疼以突发方式发生时，具有持续数小时到数天的反复发作，并且与普通病态有关，其被称作偏头痛。已经认可了几种形式的偏头痛，诸如普通型偏头痛，典型偏头痛，偏瘫型偏头痛，椎基底偏头痛等等。
目前对于偏头痛的治疗，需要使用各种止痛药，从非甾体抗炎药(NSAID)到鸦片样物质、抗组胺药和麦角胺衍生物不等。在最近十年中，已经使用曲坦类5HT2拮抗剂；如果它们被迅速给予的话，通常能够阻断偏头痛发作。所有这些治疗在效力和耐受性两方面都显示出严重的局限性。在最严重的情况中一周发生多次的疼痛事件的病例中，采用抗癫痫药、β阻断剂和抗抑郁药进行超前治疗。使用这些超前治疗实现的最大结果是疼痛事件的频率和强度降低50％，但是它们不实现确定的症状缓解。
炎性疼痛是另一种形式的慢性疼痛。其由直接激活局部位于初级感觉神经元上的伤害感受器或降低它们的激活阈的递质释放所引起，从而增加它们对不同性质的疼痛刺激或非疼痛刺激的敏感性。被激发的初级感觉神经元又可释放神经递质，该神经递质可以刺激由炎性过程所募集的免疫细胞，导致另外的炎症介质的释放。
这一现象，被称为“神经源性炎症”，导致患者症状学的自放大。骨关节炎是这种病变的特别严重的和疼痛的形式。骨关节炎是变性关节炎的一种形式，引起一个或多个关节的软骨的破坏和最终丧失。与这一病变有关的大多数共同症状是在受影响的关节中在重复使用或在长期不活动后的疼痛(夜晚痛和静息痛)。即使已经阐明了在疼痛和关节处的损害扩展之间的关联，但是这种疼痛的确切的病因仍是含糊的；实际上，在关节处具有相对小的损害的患者遭受非常强烈的疼痛，并且反之亦然；这一发现暗示了，其不仅仅是炎性疼痛，而且还存在神经性因素。被推荐的治疗包括NSAID，甾族化合物和鸦片样物质，但是这些药物的使用与严重的副作用的发生有关；另外，它们在许多情况中不显现完全的效力(Altman R.D.2000 Arthritis Rheum.43：1905-1915)。
纤维肌痛综合征是慢性的、普遍存在的疼痛的最频繁的原因，与辅助性症状诸如睡眠失调和慢性疲劳有关(Rao S.G.2007，Psychopharmacol.Bull.40：24-67)。美国总人群的几乎2％遭受纤维肌痛的困扰，中年女性处在增加的风险下。罹患纤维肌痛的患者在实验条件下，在异常性疼痛和痛觉过敏两种形式中，显示出疼痛感觉的定量异常；这些数据使人联想到敏化的疼痛感觉的状态。
最近，普瑞巴林和度洛西汀在用于治疗纤维肌痛中的肌肉疼痛的临床试验中显示出一些效力(Crofford L.J.2005，Arthritis Rheum.52：1264-1273；Maizels M.2005，Am.Fam.Physician 71：483-490)。然而，目前，对于在纤维肌痛中的疼痛缓解的医学治疗是令人不满意的(Offenbaecher M.2005，CNS Spectr.10：285-297)并且纤维肌痛代表了一类高度的未被满足的医学需要。
地来西坦(2，5-二氧代六氢-1H-吡咯并[1，2-a]咪唑)是下式(I)所示的二环的吡咯烷酮类衍生物，

专利申请EP-A-335483要求保护其作为益智(nootropic)药的药物用途，即能够改善人和动物的学习和记忆。剂量-应答数据表明地来西坦的益智活性在口服剂量大于10mg/kg时倾向于降低(J.Med.Chem.，1993，36：4214-4220)。专利申请WO-A-93/09120要求保护用于制备地来西坦及其对映体的方法。
WO-A-2004/085438要求保护2，5-二氧代六氢-1H-吡咯并[1，2-a]咪唑的一组衍生物；这些化合物的典型特征是在咪唑环的3位存在芳族碳环或杂环；这些化合物，尽管应用于疼痛病况的治疗中，但是显示了不完全令人满意的治疗指数。
考虑到上述的背景，仍需要新的药物，其就慢性疼痛而言具有高的抗痛觉过敏和抗异常性疼痛活性，并且以高治疗指数为特征。还需要对于特性形式的用传统的抗痛觉过敏药不能充分治疗的神经性疼痛的治疗。
发明概述
本发明人已经研究了在不同剂量下的地来西坦相对于先前关于该化合物所述的行为，还考虑了与新剂量有关的可能的毒性变化。在这些研究期间，发现了新的药理学窗，在该药理学窗中，地来西坦对神经性或炎性来源的慢性疼痛现象具有强的消退效果，不显示任何毒性效果。因此，公开了使用有效的和基本上无毒的化合物来治疗这些致虚弱性病变的可能性。
附图说明
图1：由奥沙利铂诱导的神经病变
^*p＜0.01对用奥沙利铂/媒介物治疗的组。各值代表8-11大鼠的平均数±S.E.M.。在奥沙利铂治疗前三天开始给予化合物。
图2：由ddC诱导的神经病变
^*p＜0.01，^Λp＜0.05对ddC/媒介物组。各值代表用克表示的机械阈的平均数±S.E.M.，每组总共具有10只大鼠。图3：由ddC诱导的神经病变
^*p＜0.01对ddC/媒介物组。各值(除了对照组之外)代表在两个实验中的18只大鼠的平均数±S.E.M.。图4：在大鼠中由MIA诱导的骨关节疼痛。
^*p＜0.01对MIA/媒介物组。各值代表在两个实验中的18只大鼠的平均数±S.E.M.。
图5：在大鼠中的运动协调(转棒仪(rotarod))
各值代表在8只大鼠的组中在30秒内掉落次数的平均数±S.E.M.。
图6：在大鼠中的运动协调(转棒仪)
各值代表在8只大鼠的组中在30秒内掉落次数的平均数±S.E.M.。^*p＜0.01对用媒介物处理的动物。
图7：在小鼠中的运动活动(洞板)
^*p＜0.01对用媒介物处理的组。各值代表18只小鼠的平均数±S.E.M.。实验在口服给药后进行30分钟。
发明详述
本发明的第一目的是地来西坦或其药学可接受的溶剂合物在制备可用于治疗和/或预防慢性疼痛的药物中的应用。本发明还涉及用于治疗和/或预防慢性疼痛的地来西坦或其药学可接受的溶剂合物。
本发明的另一个目的是用于治疗和/或预防慢性疼痛的方法，包括对有需要的患者给予药学有效剂量的地来西坦。
地来西坦是手性化合物。对于本发明的范围，术语“地来西坦”是指地来西坦的被分离的(R)或(S)对映体，或其中两种对映体以等量或不同量存在的混合物。因此，作为本发明的目的的所述应用、方法和药物组合物延伸到这些混合物或地来西坦的单一对映体。
根据本发明，地来西坦可单独被给药或者与任何其它的可用于治疗或预防慢性疼痛或引起该慢性疼痛的疾病的活性成分联合给药。本发明的一部分还在于给予与引起作为副作用的慢性疼痛事件的活性成分联合使用的、特别是与抗肿瘤药和抗病毒药联合使用的地来西坦；这些药物的非限制性实例是紫杉醇，长春新碱，顺铂，奥沙利铂，核苷反转录酶抑制剂抗病毒药(ddC，d4T，AZT)，它们中的许多在HIV感染治疗中是金标准抗病毒药
通过要求保护的应用和方法，有可能有效地和高度安全地治疗各类慢性疼痛，无论是神经性来源还是炎性来源。根据本发明被治疗的慢性疼痛的优选实例如下所示：1.由化疗剂或其它抑制生长治疗(例如放疗)诱导的疼痛；在造成神经病变的化疗剂中，可提及紫杉醇、长春新碱、顺铂、奥沙利铂；
2.由抗病毒药诸如核苷反转录酶抑制剂(ddC、d4T、AZT)诱导的疼痛；3.复杂性局部疼痛综合症，幻肢痛，丘脑综合征，脊椎综合征；
4.由骨关节炎、类风湿性关节炎、自身免疫性骨关节炎形式诱导的疼痛；
5.由头痛(整个头痛和半边头痛；由血管、感染、自身免疫、代谢紊乱和肿瘤因素所致的头痛；源于颅内高压的头痛，源于假性脑瘤的头痛，有和没有先兆的典型偏头痛，偏瘫型偏头痛和其它的运动并发症，儿童和少年偏头痛，Bickerstaff综合征等等)诱导的疼痛。
6.由纤维肌痛诱导的疼痛。
具有突出的效力并因此在本发明的范围内被优选的是由抗病毒药、骨关节炎、类风湿性关节炎和自身免疫骨关节炎诱导的疼痛的治疗。
在本发明的范围内，在目前的治疗中，地来西坦的抗痛觉过敏效果在10到300毫克/千克、优选在100到300毫克/千克的口服剂量范围内被发挥。该抗痛觉过敏效果还可通过与口服途径不同的给药途径即肌肉内或静脉内途径来实现；在这些情况下，地来西坦以允许获得可与在口服给药10-300毫克/千克后所获得的血液水平相比的量被给予。可用于肌肉内给药的参考值为约5到约150毫克/千克；可用于静脉内给药的参考值为约2到约60毫克/千克。
因此，本发明涵盖了可用于上述治疗的地来西坦的药物组合物。这些组合物包含大于先前被推荐用于益智活性的量的量的该活性成分。
活性成分的量是上面所述的那些(用毫克/千克表示)。这些组合物具有可用于给予上述剂量的剂量单位。典型地，在口服组合物中，它们包含500到15000毫克；在肌肉内组合物中，它们包含250到7500毫克；在静脉内组合物中，它们包含100到3000毫克。
地来西坦可根据已知的方法进行药学配制。可根据治疗的需要来选择各种药物组合物。
这些组合物可通过混合并且可适当地进行调整以用于口服给药或非肠道给药被制备，并且照这样，可以片剂、胶囊、经口制备物、粉剂、颗粒剂、小球、用于注射或输注的液体溶液、悬浮剂或栓剂的形式被给予。
用于口服给药的片剂和胶囊通常在剂量单位中被提供并且可包含传统的赋形剂诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、制片剂、润滑剂、去垢剂、崩解剂、着色剂、调味剂和润湿剂。片剂可根据本领域公知的方法被包衣。
适当的填充剂包括例如纤维素，甘露醇，乳糖和类似试剂。适当的崩解剂包括淀粉，聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物诸如淀粉羟基乙酸钠。适当的润滑剂包括例如硬脂酸镁。适当的润湿剂包括例如十二烷基硫酸钠。
这些固体口服组合物可采用传统的混合、填充或压片方法来制备。混合操作可重复进行以使活性剂在包含大量填充剂的组合物中分散。这些操作是传统的。
口服液体组合物可以例如水性或油性悬浮剂，溶液，乳剂，糖浆剂或酏剂的形式被提供，或者以在使用时用水或适当的液体载体进行重构的干燥产品形式被提供。液体组合物可以包含传统的添加剂诸如助悬剂例如山梨醇，糖浆，甲基纤维素，明胶，羟乙基纤维素，羧甲纤维素，硬脂酸铝凝胶或氢化可食用油脂，乳化剂例如卵磷脂，单油酸山梨醇酐酯或阿拉伯胶；非水性载体(其可以包括可食用油)例如杏仁油，分馏椰子油，油性酯诸如甘油酯，丙二醇或乙醇；防腐剂例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，还包含传统的调味剂或着色剂。口服制剂还包括传统的持续释放制剂，诸如具有肠溶包衣的片剂或颗粒剂。
对于非肠道给药，可制备包含活性化合物和无菌载体的流体剂量单位。活性化合物根据载体和浓度的不同可以被悬浮或溶解。非肠道溶液通常通过将化合物溶解在载体中并进行过滤灭菌，然后填充在适当的小瓶或安瓿中并密封来制备。佐剂诸如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂可以有利地被溶于载体中。为了增加稳定性，组合物在填充到小瓶中后经过冷冻并且真空除去水。非肠道悬浮剂可基本上以相同的方式被制备，不同之处在于活性化合物可被悬浮而非溶解在载体中，并且在被悬浮在无菌载体之前可通过暴露于环氧乙烷下进行灭菌。表面活性剂或湿润剂可有利地被加入以帮助本发明化合物的均匀分布。
另一个用于本发明化合物给药的方法是指局部治疗。局部制剂可包含例如膏剂，霜剂，洗剂，凝胶剂，溶液剂，糊剂，和/或可包含脂质体，胶束和/或微球体。
另一个用于本发明化合物给药的方法是指透皮递送。典型的透皮制剂包括传统的水性和非水性的媒介物诸如霜剂、油剂、洗剂或糊剂，或者可为膜剂或加药贴剂的形式。
作为一般惯例，所述组合物通常附有用于有关治疗的书写或打印的说明书。
提供了以下所述的本发明的实施例，其仅用于说明性目的，而非限制性目的。实施例部分
1.方法
1.1由化疗诱导的周围神经病(CIPN)
通过对成年的雄性Sprague-Dawley大鼠(150-200g，供应商Harlan)重复给药长春新碱、紫杉醇或奥沙利铂来诱导周围神经病。分别使用以下的方案：
长春新碱：在150μg/kg的剂量下通过静脉内途径注射药物。每2天进行处理，历经5次，直到达到750μg/kg的累积剂量。在最后一次注射后4天，进行爪压力试验(Marchand F.等人，2003，BrainRes.980：1 17-120)。
紫杉醇：通过在第1、3、5和8天，一天一次腹膜内给药0.5mg/kg诱导紫杉醇神经病变。累积的紫杉醇剂量是2mg/kg。在最后一次注射紫杉醇后14-18天进行药理学试验(Polomano R.C.等人，2001，Pain 94：293-304)。
奥沙利铂：通过腹腔内途径注射2.4mg/kg，连续5天，然后中断2天(一个循环)。总共进行3个循环，达到36mg/kg的累积剂量(Cavaletti G.2001，Eur.J.Cancer 37：2457-2463)。在最后一次注射奥沙利铂后48小时进行试验。
1.2由抗病毒药诱导的神经病变
成年雄性Sprague-Dawley大鼠(150-200g，供应商Harlan)采用单次给药25mg/kg的核苷反转录酶抑制剂ddC(2′，3′-双脱氧胞苷)或d4T(2′，3′-二脱氢-3′-脱氧胸苷)通过静脉内途径进行处理。给予这些抗HIV药物诱导了对机械刺激的显著的异常性疼痛应答(JosephE.K.2004，Pain 107：147-158)。在注射后第5-10天之间达到爪压力阈的最大降低。在第10天进行试验。
1.3头痛
在大鼠的实验模型中阐明了脑膜和大脑血管是疼痛敏感的结构并且受到三叉神经的高度支配。三叉神经纤维的激活引起脑膜组织的神经源性炎性，其已被提议作为偏头痛性疼痛和其它头痛的基本机理。(Bolay H.2002，Nature Medicine 8：136-142)。根据这些基础，通常利用在进行三叉神经的电刺激后的血管神经炎症的动物模型来发现潜在的有效的药物。成年雄性Sprague-Dawley大鼠(150-200g体重，Harlan)用戊巴比妥(60mg/kg i.p.)麻醉，并置于脑功能区定位框架中。然后插入同侧电极并刺激三叉神经核以诱导脑膜神经炎症，其可通过渗出的伊文思蓝染料或放射性标记的牛血清白蛋白被检测到。
1.4在大鼠中的关节炎性疼痛
通过在被麻醉的大鼠(雄性成年Sprague-Dawley大鼠，150-200g，供应商Harlan)中通过关节内注射0.1ml的Freund’s完全佐剂(CFA)诱导关节炎症。在CFA给药后14天使用爪压力试验评价机械痛觉过敏(Shan S 2006，Pain 129：64-75)。
1.5在大鼠中的骨关节炎相关疼痛
通过在被麻醉的大鼠(雄性成年Sprague-Dawley大鼠，150-200克，供应商Harlan)的左膝关节内单次给药2mg(在25μl的体积中)的2-碘醋酸钠来诱导骨关节炎(Fernihough J.2004，Pain112：83-93)。该处理诱导了关节的渐进性退化和痛觉过敏的形成，模拟了在人中所观察到的组织学和行为水平。在处理后7天进行药理学试验。
1.6a机械痛觉过敏的评价：爪压力试验
使用爪压力试验测定了大鼠(雄性成年Sprague-Dawley大鼠，150-200g，供应商Harlan)中的机械痛觉过敏。采用痛觉测量器(UgoBasile，Italy)测定伤害感受阈，所述痛觉测量器根据Leighton G.E.1988，Br.J.Pharmacol.93：553-560所述方法以恒定速率(32g/s)施加力。在处理之前和在处理后的不同时间评价引起缩爪的刺激。结果代表机械阈值(用克表示)。为了避免对动物爪造成任何可能的损害，将施加的最大力固定在240克。
1.6b机械异常性疼痛的评价：von Frey试验
将大鼠(雄性成年Sprague-Dawley大鼠，150-200g，供应商Harlan)置于室中，该室具有被塑料圆顶覆盖的金属网地板，其能够使动物自由行动，但不能跳越。使用电子von Frey仪器向左后爪的中部跖皮肤内传送机械刺激。截止值固定在50克，而力增加速率(坡道持续时间)在20秒内固定。
1.7在大鼠中的Irwin试验
为了检验化合物的给药是否可诱导中央介导的副作用，根据“Irwin试验”方案(其是一种用于评价在动物中由药物治疗所诱导的行为和生理学变化的系统的和定量的方案)，通过皮下途径和口服途径，用地来西坦处理成年雄性Sprague-Dawley大鼠(150-200，供应商 Harlan)并进行监控(Irwin 1968，Psychopharmacologia13：222-257)。
在给药后对大鼠进行不断的监控，历时30分钟。在给药后在每天上午9点重复监控历时4天。
1.8在大鼠中的运动协调
转棒仪试验允许评价化合物对运动协调的影响。将成年雄性Sprague-Dawley大鼠(200-220g，供应商Harlan，Milan)置于直径为6厘米和长度为35厘米的、以恒定速度(16rpm)旋转的、高度为25cm的塑料棒上。将棒分成4个相同部分，使得最多4只动物可同时进行试验。要求动物在30秒内行走以对抗转筒的运动。根据Vaught等人，1985，Neuropharmacology 24：211-216的方法，记录在30秒内从转棒仪掉落的时间作为掉落次数。在各实验中，在给药供试化合物之前(预试验)和之后测量运动协调。将预试验中得分小于3和掉落次数大于6的大鼠丢弃。
1.9在大鼠中的转棒仪/共济失调
通过Veneroni等人，2003，Pain，102：17-25所述方法进行该试验。通过大鼠不能保持在旋转棒(10rpm)上所历时的试验时段来评价神经病学缺陷。计算中毒剂量作为引起25％(TD₂₅)或50％(TD₅₀)的掉落大鼠的剂量(仅对于加巴喷丁而言，中毒剂量是TD₁₆＝掉落的大鼠中的16％)。
1.10在小鼠中的洞板实验
洞板试验允许研究当啮齿类动物面临新环境时所述啮齿类动物的行为(Boissier JR 1964，Therapie 19：571-583)。该试验能够评价动物的最初的探索活动及其由给药所引起的可能的变化。
洞板试验使用40平方厘米的平板，其具有16个齐平安装的圆柱形孔(直径为3厘米)，以等距的网格状方式进行4×4分布。将小鼠(雄性Swiss Webster小鼠，重25-30g，供应商Morini)一个接一个地置于板的中心，并允许其自由行动，各自历时5分钟。两根光电横梁，从中点到对边的中点穿过平板，并由此将该平板分成四个相同的四分体，自动记录在平板表面上的动物的行动。在16个孔的每个孔中的微型光电管记录了小鼠对孔的探索活动(头倾伏动作)。
2.结果(抗痛觉过敏活性)
2.1在大鼠中由奥沙利铂诱导的神经病变
在由重复给药奥沙利铂后诱导的神经病变模型中，采用爪压力试验评价地来西坦的影响。结果如图1所示。地来西坦在100和300毫克/千克的剂量下一天一次口服给予，在奥沙利铂处理前三天开始和在用奥沙利铂自身进行处理期间被给予。在300毫克/千克的剂量下，地来西坦显著降低机械痛觉过敏。在给药后30分钟到4小时之间，该效果是统计学显著的。
2.2由抗病毒药诱导的神经病变
试验结果(von Frey试验)如图2所示。在100毫克/千克的剂量下，在给药后15-30分钟，地来西坦完全反转由ddC诱导的异常性疼痛，机械阈在被处理的动物中和在对照动物中处于相同水平。在处理后45分钟，这一效果仍然是统计学显著的。
地来西坦是外消旋化合物；合成了两个相应的对映体并在由ddC诱导的神经病变模型中分别进行试验。两个化合物在150和300毫克/千克的剂量下被口服给药并且使用爪压力试验评价了它们的抗痛觉过敏活性。结果如图3所示。(R)-地来西坦在给药后15-45分钟，在300毫克/千克的剂量下，诱导了疼痛机械阈的显著降低。(S)对映体在给药后15分钟，在300毫克/千克的剂量下，诱导显著效果。这些数据说明了地来西坦的单一对映体也具有效力。
2.3在大鼠中的骨关节性疼痛
在通过关节内注射一碘代醋酸钠(MIA)所诱导的骨关节疼痛模型中，评价了地来西坦的抗痛觉过敏潜力(爪压力试验)。试验结果如图4所示。地来西坦及其(R)对映体二者，在150毫克/千克的剂量下，在给药后15-30分钟，都在反转由MIA诱导的痛觉过敏中显示了统计学显著效果。在300毫克/千克的剂量下，地来西坦完全反转由MIA诱导的痛觉过敏，机械阈在被处理的动物中和在对照动物中，在给药后15-45分钟，处于相同水平；该效果在给药后60分钟仍然是统计学显著的。(R)对映体的效果在处理后45分钟仍然是统计学显著的。3.结果(耐受性)为了检验地来西坦是否可能诱导不希望的副作用，在大鼠的转棒仪模型(运动协调和共济失调)中和在小鼠的洞板模型(自发活动和探索活动)中试验所述化合物。
3.1在大鼠中的转棒仪试验
在急性毒性实验中，在3000毫克/千克剂量下被口服给予的地来西坦(是在先前的药理学活性试验中所用剂量的20倍)不改变在转棒仪试验中的大鼠运动协调，如图5所示。
不同地是，如图6所示，参考化合物1-(3-氰基苯基)-四氢吡咯并[1，2-a]咪唑-2，5-二酮(WO2004/085438的式(I)的代表性化合物，参见实施例13)显著改变动物的运动协调，增加了从300毫克/千克开始的掉落次数；这些数据显示了所述参考化合物具有更低的耐受性水平。
3.2在大鼠中的转棒仪/共济失调试验
口服给予的地来西坦的TD₂₅是6000毫克/千克，从而证明了该化合物具有非常高的安全性和耐受性。
在参考标准中，口服给予的曲马多表现出最高的毒性，其TD₅₀为253毫克/千克，而口服给予的普瑞巴林和左乙拉西坦显示出的TD₅₀分别为536和2000毫克/千克。口服给予的加巴喷丁显示出的TD₁₆为1000毫克/千克。
3.3在大鼠中的Irwin试验
通过皮下途径以1000毫克/千克剂量被给予的地来西坦和通过口服途径以3000毫克/千克剂量被给予的地来西坦在所有的被观察的行为参数中未显示任何的影响。
3.4在小鼠中的洞板试验
在洞板试验中，以3000毫克/千克被口服给予的地来西坦不显著降低自发活动(每只动物在平板上的移动次数)或好奇心(头倾伏次数)，如图7所示。
相反地，以1000毫克/千克被给予的加巴喷丁在被评价的两个参数中都引起统计学显著降低。
3.5在大鼠中的初步毒性：通过口服途径和静脉内途径给予单一剂量对Sprague-Dawley大鼠口服或静脉内给予3000毫克/千克的单一剂量的地来西坦被实质上很好地耐受。在实验期间未观察到毒性迹象。行为观测、血和尿分析未显示在被测量的临床参数中有任何剂量相关变化。
3.6在大鼠中的重复毒性：口服，4和13周
对Sprague-Dawley大鼠重复口服给药地来西坦，历时4周，并且高达2500毫克/千克/日的最大剂量没有在死亡率、症状学或正常行为改变方面产生任何改变。
对Sprague-Dawley大鼠重复口服给药地来西坦，历时13周，并且2500毫克/千克/日的最大剂量被很好地耐受。无死亡率或相应的临床征象，以及在所有的剂量水平下都未观察到体重、水和食物的消耗以及体温有改变。血液学、临床化学、血凝参数和尿分析在所有的供试剂量下都未显示被评价的不同的参数具有药物相关变化。注意到没有与地来西坦给药有关的宏观或微观的病变或异常。
3.7在食蟹猴中的重复毒性：口服，4和13周。
对食蟹猴重复口服给药地来西坦历时4周，并且2000毫克/千克/日的最大剂量被动物很好地耐受。在用2000毫克/千克最大剂量处理的一些动物中观察到食物消耗和体重略有降低。
对食蟹猴重复口服给药地来西坦历时13周，并且2000毫克/千克/日的最大剂量被动物很好地耐受。无死亡率或相应的临床征象，以及在所有的剂量水平下都未观察到体重、水和食物的消耗以及体温有改变。血液学、临床化学、血凝参数和尿分析在所有的供试剂量下都未显示被评价的不同的参数具有药物相关变化。注意到没有与地来西坦给药有关的宏观或微观的病变或异常。
总而言之，这些数据显示了，在本发明的典型的剂量范围内，地来西坦具有强的抗痛觉过敏活性。高的作用效力通过以下事实得以证实：该化合物比加巴喷丁显示出显著更高的效力，加巴喷丁在慢性疼痛治疗中到目前为止被认为是金标准。相对于不同来源的慢性疼痛(即，由化疗诱导的疼痛、由抗病毒药诱导的疼痛、骨关节疼痛、头痛等等)所发现的活性表明了本文所推荐治疗的广泛的应用范围。另外，在所述动物模型中所示的数据突出了地来西坦对与抗病毒药治疗有关的慢性疼痛和骨关节疼痛以及相关病变具有特殊的效力。另外，在本发明的典型的剂量下，地来西坦被证明比现有技术的加巴喷丁或吡咯并咪唑衍生物更加被耐受。