用于CCR5体内成像的放射性PET试剂.pdf

本发明涉及医学成像领域，尤其涉及与趋化因子受体5(CCR5)上调相关的疾病状态的成像。提供了对这些疾病状态成像有用的显像剂、前体和方法。

1.  包含合成化合物的显像剂，该化合物对趋化因子受体5(CCR5)具有亲和力且分子量为3000道尔顿或更小，且被至少一种成像部分标记，其中将所述化合物体内施用到哺乳动物体之后，可以非侵入的方式从外部检测到该成像部分，并且所述成像部分选自：
(i)γ-发射放射性卤素；或
(ii)正电子-发射放射性非金属。

2.  权利要求1的显像剂，其中，γ-发射放射性卤素是¹²³I。

3.  权利要求1的显像剂，其中，正电子-发射放射性非金属是¹⁸F或¹¹C。

4.  权利要求1-3中任一的显像剂，其中，合成化合物具有式I：

其中：
R¹和R²独立地是C_1-6烷基、或C_1-6卤代烷基；
R^3a和R^3b独立地表示键，或选自C_1-5亚烷基、-O-[C_1-4亚烷基]-或-[C_1-2亚烷基]-O-[C_1-2亚烷基]-的连接基团；
R⁴选自H、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；和，
Q^a和Q^b独自地是A³基团或-(A²)_n-R⁵；
其中，A²选自-O-、-OCH₂-、-CH₂O-、CH₂、C＝O、S＝O、SO₂、-NH(CO)-或-CO(NH)-，R⁵是具有0-3个取代基的苯基，所述取代基是A³基团，n是0至3的整数；
其中，-A³是H、C_1-6烷基、OH或卤素。

5.  权利要求1-3中任一的显像剂，其中，合成化合物具有式II：

其中：
R⁶是酰基、氟酰基或甲磺酰基；
R⁸-R⁹独立地选自H、C_1-3烷基、OH或卤素；
E是N或CH；
当E是N时，X¹是-CH₂-，当E是CH时，X¹是-CH₂-或-O-；
Ar¹是具有0-2个N杂原子、且被0至3个R⁷基团取代的6-元芳环；
各个R⁷独立地选自C_1-3烷基、OH、卤素、NO₂、NH₂、CO₂H、C_1-6烷氧基、C_1-6氨基、C_1-6酰氨基、-O(CH₂CH₂O)_xX²或-NH(CH₂CH₂O)_xX²，其中x是0-4的整数，X²是H或CH₃。

6.  权利要求1-3中任一的化合物，其中，合成化合物具有式III：

其中：
R¹⁰是H或C_1-3烷基；
R^10a是CH₂或具有0-2个取代基的亚苯基，所述取代基选自C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、或卤素；
R¹¹是氢或具有0-3个取代基的苯基，所述取代基独立地选自OH、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基烷基、C_1-6氟代烷基或腈；
R^11a选自CH、C_1-3亚烷基、和-O-C_1-3亚烷基；
R¹²是具有0-3个取代基的苯基，所述取代基选自C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、卤素、C^1-3烷基磺酰基，或者R¹²是-NHC＝O-R^xR^y，其中：
R^x选自氧和(CH₂)_p，其中p是0至3的整数；和，
R^y是具有0-3个选自O、N和S的杂原子的六元环；
R^12a是H或OH；
R¹³是H，C_1-3烷基或C_1-3卤代烷基；和，
Q^c和Q^d独立地是选自H、卤素、C_1-3烷基、和C_1-3烷基磺酰基的取代基。

7.  权利要求1-3中任一的化合物，其中，合成化合物具有式IV：

其中：
R¹⁴是H、C_1-6烷基、C_1-6氟代烷基、C_1-6烷氧基、或者任选被A⁴基团取代的苯基或苄基；
其中A⁴是C_1-6烷基、C_1-6烷氧基或卤素，
R^14a选自卤素或C_1-3卤代烷基；和，
R^14b和R^14c独自地选自CH₂或N，
优选在式IV中：
R¹⁴是C_1-3氟代烷基或卤代苯基；
R^14a是C_1-3卤代烷基；和，
R^14b和R^14c都是N，
可选择地优选在式IV中：
R¹⁴是C_1-3烷基；
R^14a是卤素；和，
R^14b和R^14c都是CH₂。

8.  权利要求1-3中任一的化合物，其中，合成化合物具有式V：

其中：
R¹⁵和R¹⁶独立地是H、OH、C_1-3烷基或卤素；和，
R¹⁷是H、C_1-6烷基、或C_1-6卤代烷基。

9.  权利要求1-3中任一的化合物，其中，合成化合物具有式VI：

其中：
R¹⁸是H或卤素；
R¹⁹是C_1-6烷基、或C_1-6卤代烷基；
R²⁰是H、OH或卤素；和，
R²¹是C_1-6烷基、C_1-6环烷基、或C_1-6卤代烷基。

10.  权利要求1至9中任一的显像剂的制备方法，其包括：
(i)非放射性前体；和，
(ii)适当来源的权利要求1-3中任一的成像部分，的反应，
其中，所述前体是权利要求1或权利要求4-9中任一的合成化合物的衍生物，所述衍生物包含取代基Y¹，该取代基能与所述适当来源的成像部分反应得到权利要求1-9中任一的显像剂。

11.  权利要求10的方法，其中，反应性取代基Y¹选自：
(i)有机金属衍生物，如三烷基锡烷或三烷基硅烷；
(ii)包含用于亲核取代反应的烷基卤化物、甲苯磺酸烷基酯或甲磺酸烷基酯的衍生物；
(iii)包含对亲核或亲电取代反应活化的芳环的衍生物；
(iv)包含能进行容易的烷基化反应的官能团的衍生物；
(v)能使含硫羟基化合物烷基化以得到含硫醚的产物的衍生物；
(vi)能与醛或酮进行缩合反应的衍生物；
(vii)能被活性酯基团酰化的衍生物。

12.  权利要求10或11的方法，其中，所述前体是无菌、无热源的形式。

13.  权利要求10至12中任一的方法，其中，所述前体与固相结合。

14.  权利要求10至13中任一的方法，其中，所述成像部分的所述来源选自：
(i)卤化物离子；
(ii)F⁺或I⁺；
(iii)选自烷基或氟代烷基卤化物、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯或甲磺酸酯的烷化剂。

15.  适于向哺乳动物施用形式的药物组合物，其包含权利要求1至9中任一的显像剂和生物相容性载体。

16.  权利要求15的药物组合物，其具有适合单个患者的放射性剂量，并在合适的注射器或容器中提供。

17.  用于制备权利要求15或16的药物组合物的试剂盒，其包含如权利要求10-13中任一定义的前体。

18.  在患有CCR5状况的受试者中进行体内诊断或成像的方法，包括施用权利要求15或16的药物组合物。

19.  权利要求15或16的药物组合物用于在患有CCR5状况的受试者中体内成像的用途，其中，将所述药物组合物预先施用给所述受试者。

20.  权利要求1-9中任一的显像剂在制备用于CCR5状况诊断方法的药物中的用途。

21.  监测用抗击CCR5状况的药物治疗人或动物体的效果的方法，所述方法包括将权利要求15或16的药物组合物施用给所述身体，并检测所述药物组合物的显像剂的吸收。

22.  用于CCR5状况的诊断方法的权利要求15或16的药物组合物。

用于CCR5体内成像的放射性PET试剂
发明的技术领域
本发明涉及医学成像领域，尤其涉及与特殊种类趋化因子受体(CCR)上调相关的疾病状态的体内成像。提供了对这些疾病状态成像有用的化合物和方法。
相关技术的说明
趋化因子系统调节免疫细胞向组织的运输，因此在炎症中起着重要作用。该系统也参与很多其它生物学过程，例如生长调节、血细胞生成和血管发生。此外还认为趋化因子在中枢神经系统中起着重要作用。趋化因子(趋化性细胞因子)是分泌型小分子，其特征在于4个保守的半胱氨酸残基形成两个必需的二硫键(Cys1-Cys3；Cys2-Cys4)。根据两个半胱氨酸残基的相对位置可以将它们简要分为CC和CXC型，CC和CXC代表了两个主要的类别。趋化因子充当化学介质，由侵入的免疫细胞或位于炎症部位的驻留细胞(resident cells)释放。
趋化因子通过与趋化因子受体(CCR)相互作用而产生生物效应。CCR是整合膜蛋白，由通过细胞内和细胞外环连接的七个跨膜α-螺旋区域、细胞外N-端和胞质C-端构成。它们都具有由三股反向平行的β-片层形成的共同折叠结构，这些β-片层的一个表面被C-端α-螺旋覆盖，而且β-片层前面有紊乱的N-端。对于它们的功能性质必不可少的二聚/寡聚过程涉及N-端。
在炎症起作用的某些疾病状态中，业已发现趋化因子受体(CCR)的表达是紊乱的。例如，神经炎性疾病如多发性硬化症(MS)[Rottman等，2000 Eur.J.Immunol.30，第2372页]、阿尔茨海默氏病(AD)和帕金森病(PD)[Xia & Hyman 1999J.Neurovirology 5，第32页]，以及其它病理学炎性状况如动脉粥样硬化[Greaves & Channon 2002 TrendsImmunol.23(11)，第535页]、慢性阻塞性肺病(COPD)、类风湿性关节炎、骨关节炎、变应性疾病、HIV/AIDS、哮喘和癌症。
在一些疾病状态中特别重要的一种趋化因子受体是CCR5。它已经成为大量治疗研发的主题，因为它是人类免疫缺陷病毒(HIV)用来获得进入巨噬细胞入口的趋化因子受体，并且CCR5表达在慢性HIV感染中被上调。CCR5受到关注也归因于它参与各种神经炎性状况，如MS、阿尔茨海默氏病和PD的病理生理学。
Gao和Metz[Chem.Rev.，103，3733-52(2003)]，以及Ribeiro和Horuk[Pharmacol.Ther.，107，44-58(2005)]已经对趋化因子受体的配体作了综述。
用于核医学成像的靶向细胞因子和趋化因子受体被描述为挑战[Signore等，Eur.J.Nucl.Med.Mol.Imaging，30(1)，149-165(2003)]。Signore等人报导，已知的靶向趋化因子受体的主要途径是放射标记的白介素-8(IL-8)。
WO 02/36581教导了与CCR1受体结合且能够通过血脑屏障(BBB)的放射性药物。这些放射性药物被教导在诊断阿尔茨海默氏病中有用。
WO 2006/102395教导了成像部分(在其中被称作“显像剂”)对动脉粥样硬化斑块的靶向。与CCR5受体结合的配体RANES被教导是适合于当与其相连时递送成像部分到动脉粥样硬化病变部位的许多靶向部分中的一种。所教导的成像部分包括适合于一系列体内成像模式如单光子发射断层摄影术(SPECT)、磁性共振成像(MRI)和正电子发射断层摄影术(PET)的那些成像部分。
对特别涉及CCR5的状况成像的能力，尤其是神经炎症，可能代表着用于不同急性和慢性病理学状况早期诊断并为治疗途径和策略提供支持的重要工具。因此对使CCR5成像的显像剂存在需求，特别是能够通过BBB的那些显像剂。
发明概述
本发明涉及体内成像，特别涉及适用于趋化因子受体5(CCR5)体内成像的新显像剂。本发明还提供了制备本发明显像剂的方法和包含该显像剂的药物组合物。为了容易地制备药物化合物，提供了试剂盒。除此之外，本发明提供了使用本发明显像剂和药物组合物的方法。
发明的详细说明
第一方面，本发明提供了包含合成化合物的显像剂，该化合物对趋化因子受体5(CCR5)具有亲和力并且分子量为3000道尔顿或更小，且被至少一种成像部分标记，其中将所述化合物体内施用到哺乳动物体之后，可以非侵入的方式从外部检测到该成像部分，并且所述成像部分选自：
(i)γ-发射放射性卤素；或
(ii)正电子-发射放射性非金属。
“对CCR5具有亲和力”的化合物在本发明中被定义为以0.1nM至10nM的IC₅₀值抑制MIP-1β CCR5-表达CHO细胞的结合的化合物，其中MIP-1β是巨噬细胞炎性蛋白1β(CCR5的配体)[Samson等，J.Biol.Chem.，272，24934-41(1997)]。也可参见实施例4。相对于其它趋化因子受体(如CCR1或CCR3)来说，本发明的CCR5化合物还优选对CCR5具有选择性。这些选择性抑制剂适当地显示出对CCR5的效价是对CCR1的至少50倍，优选至少100倍，最优选至少500倍，所述效价被定义为Ki。
该合成的化合物优选是非肽。术语“非肽”是指不包含任何肽键，即两个氨基酸残基间的酰胺键的化合物。对趋化因子受体5(CCR5)具有亲和力的该合成化合物优选具有1000道尔顿或更小的分子量，最优选600道尔顿或更小。该合成化合物优选包含2至6个，最优选2至5个氮(N)原子。所述N原子作为酰胺、胺或者5-或6-元含氮杂芳环官能团的一部分存在。杂芳环可以具有1或2个N杂原子。当存在胺的时候，其适合于为开链或者作为5-或6-元饱和脂肪环的一部分。这些优选的环胺是哌啶、哌嗪或吗啉。当存在酰胺的时候，其适合于为开链，即不包括内酰胺。这些优选的酰胺是苯甲酰胺，或者是苯胺、苄胺或氨基哌啶残基的酰基衍生物。该合成化合物也优选包含1至3个苯环，最优选1或2个苯环。CCR5药效团优选包含2个氢键受体和3个疏水性相互作用部位，特别是它在距苯环5-处具有碱性胺。
术语“用......标记”是指官能团包含成像部分，或者成像部分作为其它种类连接。当官能团包含成像部分时，这意味着‘成像部分’形成了化学结构的部分，并且是以显著高于所述同位素的自然丰度水平的水平存在的放射性同位素。适当地，同位素所述升高的或富集的水平是至少5倍，优选至少10倍，最优选20倍；并且理想地，至少为50倍所述同位素的自然丰度水平，或者以所述同位素富集水平为90至100％的水平存在。这些官能团的实例包括具有提高水平¹¹C的CH₃基团，和具有提高水平¹⁸F的氟代烷基，这样的话，成像部分是化学结构内同位素标记的¹¹C或¹⁸F原子。放射性同位素³H和¹⁴C不适合作为成像部分。
当成像部分是γ-发射放射性卤素时，适当的放射性卤素选自¹²³I、¹³¹I或⁷⁷Br。优选的γ-发射放射性卤素是¹²³I。当成像部分是正电子-发射放射性非金属时，显像剂适用于正电子发射断层摄影术(PET)。适当的此类正电子放射源包括：¹¹C、¹³N、¹⁷F、¹⁸F、⁷⁵Br、⁷⁶Br或¹²⁴I。优选的正电子-发射放射性非金属是¹¹C、¹³N、¹²⁴I和¹⁸F，尤其是¹¹C和¹⁸F，最尤其¹⁸F。
成像部分优选是正电子-发射放射性非金属。PET成像部分的使用具有某些技术优势，包括：
(i)PET/CT照相机的发展允许功能(PET)和解剖(CT)影像的容易的影像融合(co-registration)，以改善诊断信息；
(ii)定量PET影像的便利允许精确判定疾病分期和治疗监护；
(iii)增强的灵敏度使得更小的靶组织可显像。
在一个实施方案中，显像剂包含式I的合成化合物：

其中：
R¹和R²独立地是C_1-6烷基、或C_1-6卤代烷基；
R^3a和R^3b独立地表示键，或选自C_1-5亚烷基、-O-[C_1-4亚烷基]-或-[C_1-2亚烷基]-O-[C_1-2亚烷基]-的连接基团；
R⁴选自H、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基；和，
Q^a和Q^b独自地是A³基团或-(A²)_n-R⁵；
其中A²选自-O-、-OCH₂-、-CH₂O-、CH₂、C＝O、S＝O、SO₂、-NH(CO)-或-CO(NH)-，R⁵是具有0-3个取代基的苯基，所述取代基是A³基团，和n是0至3的整数；
其中-A³是H、C_1-6烷基、OH或卤素。
优选的式I化合物如下：
R¹和R²独立地选自甲基、乙基、1-甲基乙基、氟甲基、2-氟乙基、3-氟丙基或1-氟甲基乙基；
R^3a和R^3b独立地是C_1-3亚烷基或C_1-3烷氧基；
R⁴是H或C_1-3烷基；
Q是3-苯氧基、4-苯氧基、4-(3-羟基苯氧基)、4-(4-甲基苯基)磺酰基、4-(4-氯苯基)磺酰基、4-(2，4-二氯苯基)磺酰基、4-(4-氯苯氧基)、4-甲基苯基氨基、4-苯基氨基、4-苯基硫、4-苯磺酰基、4-苯甲酰基、4-(4-碘苯氧基)、3-(4-碘苯氧基)、4-(4-氟苯氧基)、3-(4-氟苯氧基)或3-(4-氟乙基)苯氧基。
包含式I化合物的优选的显像剂具有式Ia：

其中：
IM¹和IM³独立地是H或成像部分；
IM²是C或成像部分¹¹C；
条件是IM^1-3中至少一个是成像部分。
优选的式Ia化合物如下：


可供选择的优选的式I化合物是式Ib化合物：

其中：
IM^1a和IM^2a独立地是H、卤素或成像部分；
IM^3a是C或成像部分¹¹C；
条件是IM^1-3中的至少一个是成像部分。
在进一步的实施方案中，显像剂包含式II的合成化合物：

其中：
R⁶是酰基、氟酰基或甲磺酰基；
R⁸-R⁹独立地选自H、C_1-3烷基、OH或卤素。
E是N或CH；
当E是N时，X¹是-CH₂-，当E是CH时，X¹是-CH₂-或-O-；
Ar¹是具有0-2个N杂原子且被0至3个R⁷基团取代的6-元芳环；
各个R⁷独立地选自C_1-3烷基、OH、卤素、NO₂、NH₂、CO₂H、C_1-6烷氧基、C_1-6氨基、C_1-6酰氨基、-O(CH₂CH₂O)_xX²或-NH(CH₂CH₂O)_xX²，其中x是0-4的整数，X²是H或CH₃。
在式II中，R⁶优选是乙酰基；R⁸-R⁹优选选自H、CH₃、OH、Cl、F和I；Ar¹优选包含苯或吡啶环，最优选苯环。优选地，Ar¹环未被取代或被R⁷基团取代。当存在时，R⁷优选选自：-OH、-NHCH₃、F、-O(CH₂CH₂O)_xX²或-NH(CH₂CH₂O)_xX²。X²优选是H。
包含式II化合物的优选的显像剂具有式IIa：

其中：
IM⁴独立地是H、CH₃或成像部分；
IM⁶、IM⁷和IM⁸独立地是H或成像部分；
IM⁵是C或成像部分¹¹C；
条件是IM^4-8中的至少一个是成像部分；和，
X¹如上述对于式II所定义。
优选的式IIa化合物是：


其中，X¹如上述对于式II所定义。
在进一步的实施方案中，显像剂包含式III的合成化合物：

其中：
R¹⁰是H或C_1-3烷基；
R^10a是CH₂或具有0-2个取代基的亚苯基，所述取代基选自C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、或卤素；
R¹¹是氢或具有0-3个取代基的苯基，所述取代基独立地选自OH、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基烷基、C_1-6氟代烷基或腈；
R^11a选自CH、C_1-3亚烷基、和-O-C_1-3亚烷基；
R¹²是具有0-3个取代基的苯基，所述取代基选自C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、卤素、C_1-3烷基磺酰基，或者R¹²是-NHC＝O-R^xR^y，其中：
R^x选自氧和(CH₂)_p，其中p是0至3的整数；和，
R^y是具有0-3个选自O、N和S的杂原子的六元环；
R^12a是H或OH；
R¹³是H、C_1-3烷基或C_1-3卤代烷基；和，
Q^c和Q^d独立地是选自H、卤素、C_1-3烷基、和C_1-3烷基磺酰基的取代基。
优选的式III化合物具有：
R¹⁰＝H；
R^10a＝CH₂；
R¹¹＝3-氟苯基、4-氟苯基、3-氯苯基、3，5-二氟苯基、3-氟、4-氯-苯基、3-羟基、4-碘苯基、4-碘苯基；
R^11a＝CH；
R¹²＝具有1或2个选自C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、卤素、C_1-3烷基磺酰基的取代基的苯基，或者R¹²是NHC＝O-R^xR^y，其中：
R^x是氧；和，
R^y是环己基、二氢吡喃或四氢吡喃；
R^12a＝H；
R¹³＝乙基、氟乙基、丙基或氟丙基；和，
Q^c是H，Q^d是4-C_1-3烷基或4-C_1-3烷基磺酰基。
优选可供选择地，对于式III化合物来说：
R¹⁰＝H或CH₃；
R^10a＝具有卤素取代基的亚苯基；
R¹¹＝H；
R^11a＝C_1-3烷氧基；
R¹²＝具有1或2个选自C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、卤素、C_1-3烷基磺酰基的取代基的苯基，或者R¹²是NHC＝O-R^xR^y，其中：
R^x是氧；和，
R^y是环己基、二氢吡喃或四氢吡喃；
R^12a＝OH；
R¹³＝乙基、氟乙基、丙基或氟丙基；和，
Q^c是H，Q^d是4-C_1-3烷基或4-C_1-3烷基磺酰基。
包含式III化合物的优选的显像剂具有式IIIa-IIIc：

其中：
IM⁹和IM¹⁰独立地是H或成像部分；
条件是IM^9-10中的至少一个是成像部分。

其中：
IM¹¹和IM¹²独立地是H、CH₃或成像部分；
条件是IM^11-12中的至少一个是成像部分。

其中：
IM^12a-IM^12d独立地是H、CH₃或成像部分；
条件是IM^12a-IM^12d中的至少一个是成像部分。
优选的式IIIa显像剂选自：

优选的式IIIb显像剂选自：

在进一步的实施方案中，显像剂包含式IV的合成化合物：

其中：
R¹⁴是H、C_1-6烷基、C_1-6氟代烷基、C_1-6烷氧基、或者任选被A⁴基团取代的苯基或苄基；
其中A⁴是C_1-6烷基、C_1-6烷氧基或卤素；
R^14a选自卤素或C_1-3卤代烷基；和，
R^14b和R^14c独自地选自CH₂或N。
优选地，在式IV中：
R¹⁴是C_1-3氟代烷基或卤代苯基；
R^14a是C_1-3卤代烷基；和，
R^14b和R^14c都是N。
可选择地优选地，在式IV中：
R¹⁴是C_1-3烷基；
R^14a是卤素；和，
R^14b和R^14c都是CH₂。
优选的包含式IV化合物的显像剂具有式IVa或式IVb：

其中：
IM¹³独立地是CH₃或成像部分；
IM¹⁴独立地是C或成像部分¹¹C；
条件是IM^13-14中的至少一个是成像部分。

其中：
IM^14a独立地是CH₃或成像部分；
IM^14b独立地是C或成像部分¹¹C；
条件是IM^14a-14b中的至少一个是成像部分。
优选的式IVa显像剂选自：

优选的式IVb的显像剂选自：

在进一步的实施方案中，显像剂包含式V的合成化合物：

其中：
R¹⁵和R¹⁶独立地是H、OH、C_1-3烷基或卤素；和，
R¹⁷是H、C_1-6烷基、或C_1-6卤代烷基。
优选的式V化合物是那些，其中：
R¹⁵和R¹⁶独立地是H或卤素；和，
R¹⁷是C_1-3氟代烷基。
包含式V化合物的优选的显像剂具有式Va：

其中：
IM¹⁵至IM¹⁷独立地是H或成像部分；
条件是IM^15-17中的至少一个是成像部分。
优选的式Va显像剂选自：

在进一步的实施方案中，显像剂包含式VI的合成化合物：

其中：
R¹⁸是H或卤素；
R¹⁹是C_1-6烷基、或C_1-6卤代烷基；
R²⁰是H、OH或卤素；和，
R²¹是C_1-6烷基、C_1-6环烷基、或C_1-6卤代烷基。
优选的式VI显像剂的实例如下：

对趋化因子受体5(CCR5)具有亲和力的合成化合物可以如下获得：
式I-WO 00/06146，Shiraishi等[J.Med.Chem.43，第2049-63页(2000)]。
式II-哌啶-4-甲酰胺衍生物，Imamura等，[Bioorg.Med.Chem.13，第397-416页(2005)，和J.Med.Chem.49，第2784-93页(2006)]。
式III-二苯基丙基哌啶衍生物，Cumming等[Bioorg.Med.Chem.Lett.，16，第3533-3536页(2006)]，和Shou-Fu Lu等，Bioorg.Med.Chem.Lett，2007，17，1883-1887。
式IV-基于哌嗪的衍生物，Tagat等[J.Med.Chem.，47，2405-8(2004)]；和Tagat等[J.Med.Chem 44，3343-6(2001)]。
式V-Wood和Armour[Prog.Med.Chem.，43，239-271(2005)]。
式VI-Mitsuya等[J.Med.Chem.49，第4140-52页(2006)，和Bioorg.Med.Chem.Lett.17，第727-31页(2007)]。
第一方面的显像剂可通过与下面第二方面中所述的前体反应而适当地制备。
第二方面，本发明提供了制备第一方面的显像剂的方法，其中包括：
(i)非放射性前体；和，
(ii)适当来源的第一方面的成像部分，的反应，
其中所述前体是第一方面的合成化合物的衍生物，所述衍生物包含取代基Y¹，该取代基能与所述适当来源的成像部分反应得到所需的显像剂。
“前体”适当地包含合成化合物的非放射性衍生物，其被设计以便于与所需非金属放射性同位素的便利的化学形式的化学反应能以最少步骤进行(理想地1步)，并且不需要明显纯化(理想地不需进一步纯化)以得到所需放射性产物。这些前体是合成的并且可以良好的化学纯度便利地获得。对于合成的CCR5化合物的某些官能团来说，“前体”可任选包含保护基(P^GP)。合适的前体描述于Bolton，J.Lab.Comp.Radiopharm.，45，485-528(2002)中。
术语“保护基”(p^GP)指的是抑制或阻止不期望的化学反应的基团，但是它又被设计成具有充分的反应性从而可在不改变分子的剩余部分的足够温和的条件下从所述官能团上除去。脱保护之后获得所需产物。保护基是本领域技术人员熟知的，其适当地选自，对于胺基来说：Boc(其中Boc是叔-丁氧羰基)、Fmoc(其中Fmoc是芴基甲氧羰基)、三氟乙酰基、烯丙氧基羰基、Dde[即1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代环亚己基)乙基]或Npys(即3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(sulfenyl))；对于羧基来说：甲酯、叔丁酯或苄基酯。对于羟基来说，合适的保护基是：甲基、乙基或叔丁基；烷氧甲基或烷氧乙基；苄基；乙酰基；苯甲酰基；三苯甲基(Trt)或三烷基甲硅烷基如叔丁基二甲基甲硅烷基。对于硫羟基来说，合适的保护基是：三苯甲基和4-甲氧苄基。更多保护基的使用描述于‘Protective Groupsin Organic Synthesis’，Theorodora W.Greene和Peter G.M.Wuts，(第3版，John Wiley & Sons，1999)之中。
优选的前体是其中Y¹包含衍生物的那些前体，其中的衍生物进行直接的亲电或亲核卤化作用；与选自烷基或氟代烷基卤化物、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯(triflate)(即三氟代甲烷磺酸酯)、甲磺酸酯、马来酰亚胺或标记的N-卤代乙酰基部分的标记的烷化剂进行容易的烷基化反应；使硫羟基部分烷基化以形成硫醚键；或与标记的活性酯、醛或酮进行缩合反应。第一类别的实例是：
(a)有机金属衍生物如三烷基锡烷(如三甲基锡烷基或三丁基锡烷基)，或三烷基硅烷(如三甲基甲硅烷基)；
(b)用于卤素交换的非放射性烷基碘化物或烷基溴化物，和用于亲核卤化的甲苯磺酸烷基酯、甲磺酸酯或三氟甲磺酸酯；
(c)对亲电卤化活化的芳环(如酚)和对亲核卤化活化的芳环(如芳基碘鎓、芳基重氮、芳基三烷基铵盐或硝基芳基衍生物)。
进行容易的烷基化反应的优选的衍生物是醇、酚、胺或硫羟基基团，尤其是硫醇和无空间位阻的伯胺或仲胺。
使含硫羟基的放射性同位素反应物烷基化的优选的衍生物是马来酰亚胺衍生物或N-卤代乙酰基。后者的优选实例是N-氯代乙酰基和N-溴代乙酰基衍生物。
与标记的活性酯部分进行缩合反应的优选的衍生物是胺，特别是无空间位阻的伯胺或仲胺。
与标记的醛或酮进行缩合反应的优选的衍生物是氨基氧和酰肼基，特别是氨基氧衍生物。
“前体”可任选地共价结合到固体支持基质上。那样，所需的显像剂产物在溶液中形成，而原料和杂质仍结合在固相上。与¹⁸F-氟化物进行固相亲电氟化作用的前体描述在WO 03/002489中。与¹⁸F-氟化物进行固相亲核氟化作用的前体描述在WO 03/002157中。因此，固体支持物-结合的前体可作为试剂盒提供，该试剂盒可以插入到适当修改的自动合成仪中。除了固体支持物-结合的前体之外，试剂盒可包含能除去不需要的氟化物离子的柱子，和允许反应混合物蒸发并允许产物以需要的方式配制的适当的连接的容器。试剂和溶剂和合成所需的其它消耗品也可与光盘放在一起，该光盘携带着能使合成仪按照满足客户对放射性浓度、体积、递送时间等需求的方式操作的软件。方便地，试剂盒的所有部件都是用完即可丢弃的以使运行之间污染的可能性最小化，并且都将是无菌的和质量有保障的。
当成像部分包含放射性碘同位素时，Y¹适当地包含：非放射性前体卤素原子如芳基碘化物或溴化物(以允许放射性碘交换)；活化的前体芳环(如酚或苯胺基团)；咪唑环；吲哚环；有机金属前体化合物(如三烷基锡或三烷基甲硅烷基)；或者有机前体如三氮烯或对亲核取代来说良好的离去基团如碘鎓盐。Bolton[J.Lab.Comp.Radiopharm.，45，485-528(2002)]描述了引入放射性卤素(包括¹²³I和¹⁸F)的方法。放射性卤素，尤其是碘可以连接的合适的前体芳基的实例如下：

它们都包含容许在芳环上进行温和的放射性碘取代反应的取代基。包含放射性碘的可供选择的取代基可以经由放射性卤素交换、通过直接碘化作用来合成，例如

对于碘的放射性同位素来说，放射性碘原子优选通过直接的共价键结合到芳环如苯环，或者乙烯基，因为已知与饱和脂肪族系统结合的碘原子有倾向于进行体内代谢从而造成放射性碘的损失。在某些环境下，与活性芳环如酚结合的碘原子也被观察到具有有限的体内稳定性。
当成像部分包含氟的放射性同位素时，放射性氟原子可形成氟代烷基或氟代烷氧基的一部分，因为烷基氟化物能抵抗体内代谢。对于氟的放射性同位素(如¹⁸F)来说，放射性卤化作用可通过将¹⁸F-氟化物与适当的具有良好离去基团的前体进行反应、经由直接标记而进行，所述离去基团例如烷基溴化物、甲磺酸烷基酯或甲苯磺酸烷基酯。可供选择地，放射性氟原子可经由直接共价键与诸如苯环的芳环相连接。对于这些芳基系统来说，前体适当地包含活化的硝基芳环、芳基重氮盐、或芳基三烷铵盐。然而，直接的放射性氟化作用对敏感的官能团有害，因为这些亲核反应是在强碱性条件下在极性无质子溶剂中与无水[¹⁸F]氟化物离子进行的。
当合成的化合物具有对碱敏感的官能团，或者具有不适合于直接放射性卤化的其它官能度时，间接放射性卤化法是优选的。因此，当成像部分包含放射性卤素如¹²³I和¹⁸F时，Y¹优选包含将选择性地与放射标记的合成子反应，从而通过结合生成所需的显像剂产物的官能团。术语“放射标记的合成子”是指小的、合成的有机分子，它：
(i)已经被放射性标记以使放射性标记物以稳定方式与合成子结合；
(ii)包含官能团，该官能团被设计成选择性地和特定性地与作为需要放射性标记的化合物的一部分的相应官能团反应。相对于直接放射性标记法，该方法为制备具有改善的体内放射性标记稳定性的显像剂提供了更好的机会。
在用于引入成像部分的条件下合成子方法也允许更大的灵活性。
¹⁸F也可以通过用胺前体与烷化剂合成子，如¹⁸F(CH₂)₃OMs(其中Ms是甲磺酸根)进行N-烷基化得到N-(CH₂)₃¹⁸F来引入，用羟基与¹⁸F(CH₂)₃OMs、¹⁸F(CH₂)₃OTs或¹⁸F(CH₂)₃Br进行O-烷基化来引入，或者用硫羟基与¹⁸F(CH₂)₃OMs或¹⁸F(CH₂)₃Br进行S-烷基化来引入。¹⁸F还可以通过用N-卤代乙酰基与¹⁸F(CH₂)₃OH反应物烷基化得到-NH(CO)CH₂O(CH₂)₃¹⁸F衍生物，或者与¹⁸F(CH₂)₃SH反应物烷基化得到-NH(CO)CH₂S(CH₂)₃¹⁸F衍生物来引入。¹⁸F也可以通过将含马来酰亚胺的前体与¹⁸F(CH₂)₃SH反应来引入。对于芳基系统来说，从芳基重氮盐、芳基硝基化合物或芳基季铵盐的¹⁸F-氟化物亲核取代反应是对于用于与显像剂前体结合的芳基-¹⁸F标记的合成子的合适途径。
如Kahn等[J.Lab.Comp.Radiopharm.45，1045-1053(2002)]和Borch等[J.Am.Chem.Soc.93，2897(1971)]所教导的那样，通过使用¹⁸F-C₆H₄-CHO还原胺化，¹⁸F也可以标记其中Y¹包含伯胺基团的前体。这个方法也可以用于芳基伯胺，如包含苯基-NH₂或苯基-CH₂NH₂基团的化合物。
对于对碱敏感的前体来说特别优选的方法是当Y¹包含式-NH(C＝O)CH₂-O-NH₂的氨基氧基团时，所述氨基氧基团在酸性条件下(如pH 2至4)与¹⁸F-C₆H₄-CHO缩合。对¹⁸F-标记的衍生物来说更详细合成路线描述于Bolton，J.Lab.Comp.Radiopharm.，45，485-528(2002)中。
前体优选是无菌、无热源的形式。保持无菌的方法在下面第三个方面中描述。
适合制备本发明显像剂的前体的实例是Y¹包含胺基的那些前体，该胺基与合成子N-琥珀酰亚胺基4-[¹²³I]碘代苯甲酸酯在pH 7.5-8.5下缩合得到酰胺键连接的产物。
包含式I至式V化合物的优选的前体分别具有式Ip至Vp：

其中E¹-E⁴和Y^a-Y^b中的至少一个包含Y¹，剩余的E¹-E⁴和Y^a-Y^b基团分别是式I的R¹-R⁴和Q^a-Q^b基团。

其中E⁶-E⁹中的至少一个包含Y¹，剩余的E⁶-E⁹基团分别是式II的R⁶-R⁹基团。

其中E¹⁰、E¹¹、E¹²或E¹³中的至少一个包含Y¹，剩余的E¹⁰、E¹¹、E¹²或E¹³基团分别是式III的R¹⁰-R¹³基团；
E^11a-E^12a如对于式III的E^11a-E^12a所定义；和，
Y^c和Y^d如对于式III的Q^c和Q^d所定义。

其中E¹⁴是包含Y¹的式IV中R¹⁴基团；和，
E^14a-E^14c如对于式IV的R^14a-R^14c所定义。

其中E¹⁵-E¹⁷中的至少一个包含Y¹，剩余的E¹⁵-E¹⁷基团分别是式V的R¹⁵-R¹⁷。

其中E¹⁸-E²⁰中的至少一个包含Y¹，剩余的E¹⁸-E²⁰基团分别是式VI的R¹⁸-R²⁰；和，
E²¹是如对于式VI定义的R²¹。
第三方面，本发明以适合于哺乳动物施用的形式提供了药物组合物，该组合物包含第一方面的显像剂和生物相容性载体。
“生物相容性载体”是流体，特别是液体，在该载体中显像剂可以混悬或溶解，以使组合物是生理学上可容许的，即，可以施用到哺乳动物的身体而不具有毒性或过度的不适。生物相容性载体适宜地是可注射的载体液体如无菌、无热源的注射用水；水溶液如盐水(其可有利地被平衡使得用于注射的最终产物是等渗的)；一种或更多种张力调节物质(例如具有生物相容性抗衡离子的血浆阳离子的盐)的水溶液，糖类(例如葡萄糖或蔗糖)，糖醇类(例如山梨醇或甘露醇)，甘醇类(例如甘油)，或其它非离子多元醇物质(例如聚乙二醇类，丙二醇类等)。优选的生物相容性载体是无热源的注射用水或等渗盐水。
这样的放射性药物组合物(即放射性药物的组合物)适合于在具有密封装置的容器中提供，该密封装置适合于皮下注射针单次或多次穿刺(如卷边的隔膜密封闭合装置(crimped-on septum seal closure))同时维持无菌完整性。这样的容器可包含单个或多个患者剂量。优选的多剂量容器包括单个散装瓶子(bulk vial)(如10至30cm³体积)，其中包含多个患者剂量，因而可以在制剂的活性有效期内以不同的时间间隔抽取单次患者剂量到临床等级的注射器中以适合临床情况。预填充注射器被设计成包含单次人用剂量，或“单位剂量”，因而优选为适合临床使用的用完即可丢弃的注射器或其它注射器。预填充注射器可任选具有注射器防护物以保护操作者免于放射性剂量。适宜的此类放射性药物注射器防护物在本领域是已知的，优选包含铅或钨。
如下面第四方面所述，放射性药物组合物可由试剂盒制备。可选择地，放射性药物可在无菌操作环境下制备以得到所需的无菌产物。放射性药物也可在非无菌条件下制备，接着最后使用如γ辐射、压热器处理、干热或化学处理(如用环氧乙烷处理)进行最后灭菌。
在第四方面，本发明提供了用于制备第三方面的药物组合物的试剂盒，该试剂盒包含第二方面的前体。这些试剂盒包含第二方面的“前体”，优选无菌无热源形式的，使得以最少的操作与无菌来源的放射性同位素的成像部分反应得到所需的放射性药物。当放射性同位素具有相对短的半衰期时，且为了便于操作和因此降低对放射性药剂师的辐射剂量，这样的考虑是特别重要的。因此，用于重建这样的试剂盒的反应介质优选是如上定义的“生物相容性载体”，最优选是水性的。
合适的试剂盒容器包括能维持无菌完整性和/或放射安全性，任选加入惰性的顶部空间气体(例如氮或氩)，同时容许注射器添加或吸取溶液的密闭容器。优选这样的容器是隔膜密封的玻璃瓶，其中不透气的闭合装置用顶封(通常是铝)卷边(crimped on)。这样的容器具有额外的优点，那就是如果需要例如更换顶部空间气体或者为溶液除气，它的闭合装置可以经受住真空。
非放射性试剂盒可任选进一步包含其它成分，例如辐射防护剂、抗菌性防腐剂、pH-调节剂或填充剂。术语“辐射防护剂”是指通过俘获高反应性自由基，如水辐射分解产生的含氧自由基，抑制降解反应如氧化还原过程的化合物。本发明的辐射防护剂适当地选自：抗坏血酸、对氨基苯甲酸(即4-氨基苯甲酸)、龙胆酸(即2，5-二羟基苯甲酸)和它们与生物相容性阳离子形成的盐。术语“生物相容性阳离子”是指带有正电荷的抗衡离子，这些离子与离子化的负电荷基团形成盐，其中所述的带有正电荷的抗衡离子也是无毒的，因此适合于向哺乳动物的身体施用，特别是人体。合适的生物相容性阳离子的实例包括：碱金属钠或钾；碱土金属钙和镁；和铵离子。优选的生物相容性阳离子是钠和钾，最优选钠。
术语“抗菌性防腐剂”是指抑制潜在有害的微生物如细菌、酵母或霉菌生长的试剂。抗菌性防腐剂也可显示某些剂量依赖性的杀菌性质。本发明抗菌性防腐剂的主要作用是抑制重构后的放射性药物组合物，即放射性诊断产品自身中的任何此类的微生物的生长。然而，抗菌性防腐剂还可任选用于抑制重构之前本发明非放射性试剂盒的一个或更多个部件中潜在的有害微生物的生长。适宜的抗菌性防腐剂包括：对羟苯甲酸酯，即对羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸乙酯、对羟苯甲酸丙酯、对羟苯甲酸丁酯或它们的混合物；苯甲醇；酚；甲酚；溴化十六烷基三甲铵和硫柳汞。优选的抗菌性防腐剂是对羟苯甲酸酯。
术语”pH-调节剂”是指用于确保当向人类或哺乳动物施用时重构的试剂盒的pH值在可接受的限度内(大约pH 4.0至10.5)的化合物或化合物的混合物。适宜的此类pH-调节剂包括药学可接受的缓冲剂，如tricine、磷酸盐或TRIS[即三(羟甲基)氨基甲烷]，和药学可接受的碱例如碳酸钠、碳酸氢钠或其混合物。当共轭体以酸性盐形式使用时，pH调节剂可任选在分离的小瓶或容器中提供，以使试剂盒的使用者可以作为多步过程的一部分调节pH值。
术语“填充剂”是指药学可接受的填充试剂，其可在生产和冻干过程中使原料容易处理。适宜的填充剂包括无机盐例如氯化钠，和水溶性糖类或糖醇类如蔗糖、麦芽糖、甘露醇或海藻糖。
当用于试剂盒时优选的“前体”如以上第二方面所述。用于试剂盒的前体可在无菌操作环境下使用得到所需的无菌、无热源的物质。前体也可在非无菌条件下使用，接着用例如γ辐射、压热器处理、干热或化学处理(如用环氧乙烷处理)进行最后灭菌。优选地，前体以无菌、无热源的形式使用。最优选无菌、无热源的前体在如上所述的密封容器中使用。
第五方面，本发明提供了在患有CCR5状况的受试者中体内诊断或成像的方法，包括施用第三方面的药物组合物。术语“CCR5状况”是指哺乳动物特别是人的身体CCR5表达被上调或下调的疾病状态。优选地，CCR5表达被上调因为这样在体内诊断性成像时将得到较好的信号-背景比。在慢性HIV感染中CCR5表达被上调。CCR5状况也包括各种病理学炎性状况和神经炎性状况。病理学炎性状况包括：动脉粥样硬化、慢性阻塞性肺病(COPD)、类风湿性关节炎、骨关节炎、变应性疾病、HIV/AIDS、哮喘和癌症。神经炎性状况包括：多发性硬化症(MS)、阿尔茨海默氏病和帕金森病。第五方面的优选方法是神经炎症的体内诊断或成像。大多数神经变性疾病具有炎症因素。
第六方面，本发明提供了第三方面的组合物用于患有CCR5状况的受试者体内成像的用途，其中所述受试者被事先施用所述的药物组合物。“CCR5状况”和其优选的实施方式如上述第五方面所定义。“事先施用”是指已经实施了涉及临床医师的步骤，其中显像剂组合物被给予患者，例如静脉注射。
第七方面，本发明提供了第一方面的任一显像剂在制备用于CCR5状况的诊断方法的药物中的用途。“CCR5状况”和其优选的实施方式如上述第五方面所定义。
第八方面，本发明提供了监测用抗击CCR5状况的药物治疗人或动物体的效果的方法，所述方法包括将第三方面的药物组合物施用到所述个体，并检测所述药物组合物显像剂的吸收。“CCR5状况”和其优选的实施方式如上述第五方面所定义。
第九方面，本发明提供了用于CCR5状况诊断方法中的本发明的药物组合物。“CCR5状况”和其优选的实施方式如上述第五方面所定义。
通过下列实施例举例说明本发明。
实施例1提供了落入本发明式I的非放射性¹⁹F对应化合物(“化合物1”)的合成。由于¹⁸F版本的区别仅在于氟同位素，因此它在化学上几乎是完全相同的。
实施例2提供了落入本发明式II的非放射性¹⁹F对应化合物(“化合物8”)的合成。由于¹⁸F版本的区别仅在于氟同位素，因此它在化学上几乎是完全相同的。
实施例3和4提供了¹⁸F-标记的化合物1和8的预言性合成实施例。实施例5提供了¹⁸F-标记的式V化合物的预言性合成实施例。
实施例6提供了实施例2的化合物8的生物学筛选数据。数据显示化合物8以高亲和力结合CCR5，并且由于不与CCR1和CCR2B结合因此对CCR5具有选择性。
实施例7提供了在膜渗透性测定中(PAMPA测定法)对化合物1和8的筛选。Pe(渗透性)预示着化合物8具有高CNS(血脑屏障)渗透性，化合物1具有中等渗透性。
缩略语
使用下述缩略语：
DCM＝二氯甲烷
DIAD＝偶氮二甲酸二异丙酯.
DIEA＝二异丙基乙胺
DMF＝N，N′-二甲基甲酰胺
EDCI＝1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
HOBT＝1-羟基苯并三唑
LCMS＝液相色谱质谱分析
THF＝四氢呋喃
实施例：
实施例1：合成化合物1

路线1
步骤(i)：合成化合物A(路线1)
将5-氨基-2-甲氧基苯酚(2.78g，0.020mol)、4-苯氧基苯甲酸(4.28g，0.020mol)、DIEA(3.1g，4.2mL，0.024mol)和HOBT(3.2g，0.024mol)的DMF(20mL)溶液冷却到0℃，在氮气条件下以一份加入EDCI(4.6g，0.024mol)。室温下搅拌该混合物过夜。将混合物倾入冰水(100mL)中，用乙酸乙酯(50mLx3)萃取。用水、盐水洗涤合并的乙酸乙酯层，干燥(MgSO₄)，浓缩至干燥。用DCM/己烷研磨剩余固体，得到白色固体(4.1g，62％)。¹H NMR和LCMS分析显示＞98％纯度。
步骤(ii)：合成2-(乙基-2’-氟乙基氨基)乙醇
如路线2所示制备所需的中间体2-(乙基-2’-氟乙基氨基)乙醇

路线2
将2-乙氨基乙醇(6.7g，0.075mol)、2-氟乙基溴化物(12g，0.094mol)、无水碳酸钾(10.3g，0.075mol)和无水苯(50mL)的混合物加热回流搅拌48h。冷却到室温后，过滤除去固体，用苯洗涤。真空除去苯。¹HNMR分析显示产物的纯度为～90％，将其直接用于下面的步骤而不进行任何进一步的纯化(9.0g，89％)。
步骤(iii)：合成化合物1
将DIAD(1.36g，1.3mL，6.71mmol)逐滴加入到来自步骤(i)的化合物A(1.50g，4.47mmol)、来自步骤(ii)的2-(乙基-2’-氟乙基氨基)乙醇(0.91g，6.71mmol)和PPh₃(1.76g，6.71mmol)的无水DCM/THF(12mL，5∶1)溶液中。立即观察到放热反应。然后将混合物在室温下搅拌过夜。浓缩反应混合物至干燥，通过柱色谱[硅胶，DCM→DCM/MeOH(98∶2)]纯化剩余固体。第二个部分是所需产物，以如上所述相同的条件再次将该部分进行色谱法。用DCM/己烷重结晶得到无色固体(0.81g，40％)。分析数据显示＞98％纯度。LCMS(API-ES⁺)m/z 453.3(M+H⁺)
支持数据：化合物1的¹H NMR、¹³C NMR、HPLC、LCMS。
实施例2：合成化合物8.
根据路线3和4制备化合物8：

路线3

路线4
步骤(i)：合成化合物5：
将哌啶-4-甲酸乙酯(10g，0.064mol，1.1eq)和三乙胺(15ml，2eq)溶于DCM(30ml)中，在冰水浴上磁力搅拌冷却。将2-氟乙酰氯(5g，0.052mol，1.0eq)的DCM(20ml)溶液逐滴加入(15min)到反应中，搅拌1h。加入水(100ml)，真空除去溶剂。将残留物萃取到乙酸乙酯(300ml)中，用水、2N HC1、饱和NaHCO₃、盐水洗涤，通过Mg₂SO₄干燥。过滤有机溶液，然后浓缩。通过硅胶柱色谱后，得到6.2g产物化合物5(产率55％)。
步骤(ii)：合成化合物6
将化合物5(6.2g，0.029mol，1eq)溶解到甲醇(100ml)中，加入2NNaOH(30ml，2eq)，搅拌过夜。然后真空除去甲醇。用2N HCl将剩余物酸化到pH 3，用乙酸乙酯(3X500ml)萃取，过MgSO₄干燥，过滤，浓缩得到化合物6(4.3g，产率78％)。
步骤(iii)：合成化合物7
将化合物6(4.3g，0.023mol)溶于DCM(50ml)中，加入DMF(一滴)，在冰水浴上冷却，接着加入乙二酰二氯(2.3g，1.5ml，2.5eq)，搅拌2h。在50℃的水浴上除去溶剂，加入无水甲苯(50ml)以除去可能存在的残留溶剂得到化合物7(4.2g，产率88％)。
步骤(iv)：合成路线4的化合物1
将3-氯-4-甲基苯胺(15g，0.106mol，1eq)、2-(乙氧羰基)-乙酸(14g，0.106mol，1eq)、二异丙基乙胺(16.5g，22.3ml，1.2eq)、HOBT(17g，1.2eq)和DCM(150ml)混合到一起。然后加入[1-乙基-(3-二甲基-氨基-丙基)碳二亚胺盐酸盐无水物](EDCI，24.5g，1.2eq)，在N₂条件下搅拌所得混合物过夜。后处理(workup)，用水、饱和NaHCO₃、1N HC1和盐水洗涤反应混合物，过MgSO₄干燥。过滤，浓缩得到化合物1(18.5g，产率70％)。
步骤(v)：合成路线4的化合物2
将来自上述步骤(iv)的化合物1(18.5g，～0.072mol)溶于甲醇(100ml)中，在冰水浴上冷却。加入2N NaOH(72ml，2eq)，搅拌混合物过夜。然后真空除去溶剂甲醇。用2N HCl将剩余物酸化到pH 2，用乙酸乙酯(500ml)萃取，通过MgSO₄干燥，过滤，浓缩得到化合物2(13g，80％)。
步骤(vi)：合成路线4的化合物3
将来自步骤(v)的化合物2(4.9g，～0.021mol)、4-氟苄基哌啶盐酸盐(4.9g，0.021mol)、二异丙基乙胺(12g，2.2eq)、HOBT(3.5g，1.2eq)和DMF(150ml)混合到一起。然后加入[1-乙基-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐无水物](EDCI，5g，1.2eq)。在N₂下搅拌所得混合物过夜。后处理，用水(800ml)稀释反应混合物，用乙酸乙酯(500ml)萃取，用水、饱和NaHCO₃、1N HCl和盐水洗涤，通过MgSO4干燥。过滤，浓缩得到化合物3(6.8g，产率80％)。
步骤(vi)：合成路线4的化合物4
将来自步骤(v)的化合物3(6.8g，0.017mol)溶于THF(100ml)中，将BH3(1M的THF溶液，170ml，10eq)加入，回流4天直至反应完成(用LCMS检查)。然后除去溶剂THF，加入甲醇(100ml)6N HCl(100ml)，回流5天直至反应完成(用LCMS检查)。然后除去甲醇，将剩余物酸化到pH 11。用DCM(500ml)萃取，通过MgSO4干燥，过滤，浓缩(粗产品6.2g)。通过硅胶柱得到化合物4(3.7g，58％)。
步骤(vii)：合成路线4的化合物8
将来自步骤(vi)的化合物4(2.5g，0.0067mol)和三乙胺(7g，10ml，0.068mol，10eq)溶于DCM(50ml)中，在冰水浴上冷却，加入化合物7(4.2g，～3eq)的DCM(50ml)溶液。搅拌所得的混合物过夜。反应是混乱的，但是LCMS显示了所需产物的分子量。后处理，加入水，真空除去溶剂DCM。用乙酸乙酯(500ml)萃取剩余物，用水、饱和NaHCO₃洗涤，通过MgSO₄干燥，过滤，浓缩，通过硅胶柱色谱后得到最终化合物8(179mg，5％)。LCMS(API-ES⁺)m/z 546.3(M+H⁺)。
实施例3：合成¹⁸F-标记的化合物1(预言性的实施例)
如路线5所示制备¹⁸F-标记的化合物1：

路线5
实施例4：合成¹⁸F-标记的化合物8(预言性的实施例)
如路线6所示由实施例2的化合物4合成化合物8的F-18类似物：

路线6
实施例5：合成式V¹⁸F-标记的化合物(预言性的实施例).
如路线7所示制备¹⁸F-标记的式V化合物：

路线7
实施例6：筛选化合物8
以如下所述的CCR结合测定法筛选实施例2的化合物8：
根据从文献[Ben-Baruch等，J.Biol.Chem.，270(38)，22123-8(1995)；Pease等，J.Biol.Chem.，273(32)，19972-6(1998)]修改的方法，CCR1结合测定法在下述条件下进行。
如此，在0.02nM[¹²⁵I]-MIP-1α的存在下，将化合物8与人重组CHO-K1细胞一起在含1mM CaCl₂、0.5％BSA、5mM MgCl₂和1％DMSO的50mM HEPES，pH7.4中，在25℃下培养3小时。MIP-1α是巨噬细胞炎性蛋白1α(CCR1和CCR5的配体)。
根据从文献[Gong等，J.Biol.Chem.，272，11682-5(1997)；Moore等，J.Leukoc.Biol.，62，911-5(1997)]修改的方法，CCR2B结合测定法在下述条件下进行。
如此，在0.1nM[¹²⁵I]-MCP-1存在下，将化合物8与人重组CHO-K1细胞一起在含1mM CaCl₂、0.5％BSA、5mM MgCl₂、0.1％NaN₃和1％DMSO的25mM HEPES，pH7.4中，在25℃下培养1小时。MCP-1是单核细胞趋化蛋白(CCR2的配体)。
根据从文献[Samson等，J.Biol.Chem，272，24934-41(1997)]修改的方法，CCR5结合测定法在下述条件下进行。
如此，在0.1nM[¹²⁵I]-MIP-1β存在下，将化合物8与人重组CHO-K1细胞一起在含1mM CaCl₂、0.5％BSA、5mM MgCl₂和1％DMSO的50mMHEPES，pH7.4中，在25℃下培养2小时。其中MIP-1β是巨噬细胞炎性蛋白1β。
发现化合物8对CCR5有选择性(Ki 0.79nM)，因为其对CCR1的结合亲和力低的多(在化合物8为10μM时具有32％的结合抑制作用)，并且化合物8在10μM浓度时不抑制MCP-1对CCR2B的结合。
实施例7：化合物8的渗透性
在平行的人工膜渗透性测定法(PAMPA)中测量CCR化合物的渗透性，得到了以被动扩散通过血脑屏障的渗透性的预言[Di等，Eur.J.Med.Chem.，38(3)，223-232(2003)]。
对该PAMPA测定法来说，通常可接受的分类范围如下：
●高预言性的被动BBB渗透性：Pe＞4.0x10^-06cm/sec。
●低预言性的被动BBB渗透性：Pe＜2.0x10^-06cm/sec。
对BBB渗透性的不确定的预言：2.0x10^-06cm/sec＜Pe＜4.0x10^-06cm/sec。
结果是化合物1的Pe＝3.2E-06cm/sec，化合物8的Pe＝6.8E-06cm/sec。