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1、10申请公布号CN102372794A43申请公布日20120314CN102372794ACN102372794A21申请号201010260794722申请日20100824C08B37/08200601A61P3/06200601A61P9/10200601A61P19/02200601A61P27/02200601A61P29/0020060171申请人上海辉文生物技术有限公司地址201210上海市浦东新区沔北路185号F2申请人骆峰72发明人骆峰周自华钱辉华74专利代理机构上海智信专利代理有限公司31002代理人薛琦朱水平54发明名称硫酸软骨素的制备方法57摘要本发明公开一种硫酸软骨。
2、素的制备方法，包括如下步骤1在质量百分比0020的氢氧化钠水溶液中，5060条件下，将动物软骨组织进行碱解反应；2用盐酸水溶液将步骤1所得溶液体系PH调节为5080，然后加入溶液体积百分比0220的蛋白酶，于5060酶解；3之后再用盐酸水溶液将步骤2所得溶液体系PH调节为5080，灭酶；4在1030条件下，将步骤3所得滤液中加入乙醇至乙醇体积百分比5095进行沉淀，收集沉淀即可。该方法能够提供不同分子量的硫酸软骨素，操作步骤简单方便，工艺合理，具有一定的经济和社会效益。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页CN102372797A1/1页21一种。
3、硫酸软骨素的制备方法，其特征在于其包括如下步骤1在质量百分比0020的氢氧化钠水溶液中，5060条件下，将动物软骨组织进行碱解反应；2用盐酸水溶液将步骤1所得溶液体系PH调节为5080，然后加入溶液体积百分比0220的蛋白酶，于5060酶解；3之后再用盐酸水溶液将步骤2所得溶液体系PH调节为5080，灭酶；4在1030条件下，将步骤3所得滤液中加入乙醇至乙醇体积百分比5095进行沉淀，收集沉淀即可。2如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的动物软骨组织与氢氧化钠水溶液的固液比为12G/ML110G/ML；和/或所述的氢氧化钠水溶液的浓度为质量百分比0015；和/或所述的碱解的时间为05H5。
4、H，较佳的为05H25H。3如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于所述的盐酸水溶液为由浓盐酸经3倍5倍体积水稀释的水溶液。4如权利要求13任一项所述的制备方法，其特征在于所述的步骤2中PH调节为PH调节后继续搅拌，并复测PH值维持5080。5如权利要求14任一项所述的制备方法，其特征在于所述的蛋白酶为碱性蛋白酶、复合风味蛋白酶、中性蛋白酶和胰酶中的一种或多种；和/或所述的酶解反应时间为2H6H。6如权利要求15任一项所述的制备方法，其特征在于所述的灭酶为将反应体系升温至70以上即可。7如权利要求16任一项所述的制备方法，其特征在于所述步骤3所得溶液还用活性炭脱色脱味再进行下一步操作；和/或。
5、所述步骤3所得溶液还过微孔滤芯过滤再进行下一步操作。8如权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述的活性炭的用量为溶液体积百分比0525；和/或所述的活性炭脱色脱味的条件为以灭酶温度保温30MIN以上；和/或所述的微孔滤芯的孔径大小为02M05M。9如权利要求18任一项所述的制备方法，其特征在于所述的步骤4收集沉淀的方式为离心沉淀。10如权利要求19任一项所述的制备方法，其特征在于所述的步骤4的沉淀还经干燥，碾磨，得硫酸软骨素成品；其中，所述的干燥为真空干燥、热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。权利要求书CN102372794ACN102372797A1/4页3硫酸软骨素的制备方法技术领域0001本发。
6、明涉及硫酸软骨素的制备方法。背景技术0002硫酸软骨素是从动物的软骨组织中提取制备的酸性粘多糖类物质，广泛应用于药品、保健食品、食品、化妆品和宠物饲料等。0003硫酸软骨素具有多种生理功能，在维持组织和免疫技能上起着重要作用可用于防治关节炎，改善老年性关节功能退化；具有调脂、抗炎以及弱的抗凝血和抗血栓的生物活性；还可以用于治疗偏头痛等神经性疼痛；另外，硫酸软骨素对角膜胶原纤维具有保护作用，能促进基质中纤维的增长，增强通透性，改善血液循环，加速新陈代谢，促进渗透液的吸收及炎症的消除，其聚阴离子具有的强保水性，能改善眼角膜组织的水分代谢，对角膜有较强的亲和力，其在角膜表面形成一层透气保水膜，有效促。
7、进角膜创伤愈合，改善眼部干燥症状。0004其中，硫酸软骨素的生物活性随分子量不同而各异，其药理活性与分子量有着密切的关系，用途也各不相同。高分子量的硫酸软骨素分子量50000由于吸水性强，易溶于水变成粘稠液体，具有较高的粘性和较好保水性，可作为食品添加剂添加至饮料及各种保健品中，用于食品的乳化、保湿和祛除异味；在化妆品中添加硫酸软骨素，可调节皮肤细胞代谢，促进营养的吸收，保持皮肤的水分和改善发质。而低分子化的硫酸软骨素分子量50000则具有粘度低、水溶性好、生物利用度高的优点。国家药品标准WS10001HD08922002、WS10001HD08932002中收载的硫酸软骨素和国家药品标准WS。
8、10001HD08942002、WS10001HD08952002中收载的硫酸软骨素A钠，均为低分子量的硫酸软骨素，其重均分子量范围为3500050000，主要是用于降血脂的注射剂；美国专利US3,405,120中披露了，当硫酸软骨素的平均分子量在20006000道尔顿时，其药理活性最强，对防治动脉粥样硬化、风湿性炎症和伤口愈合等方面具有更好的疗效。因此，硫酸软骨素在药品、保健食品、食品、化妆品和宠物饲料等领域的应用发挥了重要的作用，为提高大众健康服务。发明内容0005本发明所要解决的技术问题是克服了现有技术空白，提供了一种能够提供不同分子量的硫酸软骨素的制备方法，该方法操作步骤简单方便，工艺。
9、合理，具有一定的经济和社会效益。0006本发明的硫酸软骨素的制备方法包括如下步骤00071在质量百分比0020的氢氧化钠水溶液中，5060条件下，将动物软骨组织进行碱解反应；00082用盐酸水溶液将步骤1所得溶液体系PH调节为5080，然后加入溶液体积百分比0220的蛋白酶，于5060酶解；说明书CN102372794ACN102372797A2/4页400093之后再用盐酸水溶液将步骤2所得溶液体系PH调节为5080，灭酶；00104在1030条件下，将步骤3所得滤液中加入乙醇至乙醇体积百分比5095进行沉淀，收集沉淀即可。0011下面，进一步的对本发明的硫酸软骨素的制备方法进行详细介绍00。
10、121在质量百分比0020的氢氧化钠水溶液中，5060条件下，将动物软骨组织进行碱解反应。0013其中，所述的动物软骨组织为本领域常规所述动物软骨组织，一般可包括猪、牛、羊等动物的软骨、皮肤组织，软骨鱼如鲨鱼、瑶鱼等的软骨、皮肤组织，以及其他的动物或水产品软骨、皮肤组织等。所述的动物软骨组织颗粒大小没有限定只要不影响碱解反应即可，工业上一般不对动物软骨组织进行另行粉碎处理。0014其中，所述的动物软骨组织与氢氧化钠水溶液的用量可为本领域常规用量，所述的动物软骨组织与氢氧化钠水溶液的固液比较佳的为12G/ML110G/ML。0015其中，步骤1中，经过本发明人大量实验研究，终于实现在本发明硫酸软。
11、骨素的制备方法其他参数配合下，所述的氢氧化钠水溶液的浓度在质量百分比0020的范围内，可通过控制碱液浓度实现制备不同分子量的硫酸软骨素；其中，在氢氧化钠浓度适用范围内，氢氧化钠浓度大，则获得小分子量硫酸软骨素；氢氧化钠浓度小，则获得大分子量硫酸软骨素。所述的氢氧化钠水溶液的浓度较佳的为质量百分比0015。0016其中，所述的碱解的时间为本领域常规适用时间，较佳的为05H5H，更佳的为05H25H。00172用盐酸水溶液将步骤1所得溶液体系PH调节为5080，然后加入溶液体积百分比0220的蛋白酶，于5060酶解。0018其中，所述的盐酸水溶液为本领域常规浓度盐酸水溶液，较佳的为由浓盐酸经3倍5。
12、倍体积水稀释的水溶液。所述的浓盐酸为本领域常规所述浓盐酸，其物质的量浓度一般为12MOL/L。0019其中，所述的PH调节为本领域常规操作，较佳的为PH调节后继续搅拌，并复测PH值维持5080。0020其中，所述的蛋白酶为本领域常规使用蛋白酶，较佳的为碱性蛋白酶、复合风味蛋白酶、中性蛋白酶和胰酶中的一种或多种。0021其中，所述的酶解反应时间为本领域常规时间，较佳的为2H6H。00223之后再用盐酸水溶液将步骤2所得溶液体系PH调节为5080，灭酶。0023其中，所述的盐酸水溶液为本领域常规浓度盐酸水溶液，较佳的为由浓盐酸经3倍5倍体积水稀释的水溶液。所述的浓盐酸为本领域常规所述浓盐酸，其物质。
13、的量浓度一般为12MOL/L。0024其中，所述的灭酶为本领域常规操作，较佳的将反应体系升温至70以上即可。0025其中，所述步骤3所得溶液较佳的还用活性炭脱色脱味再进行下一步操作。所述的活性炭的用量较佳的为溶液体积百分比0525。所述的活性炭脱色脱味的条件较佳的为以灭酶温度保温30MIN以上。所述的活性炭脱色脱味之后一般按照本领域常规过滤即可。0026其中，所述步骤3所得溶液较佳的还过微孔滤芯过滤再进行下一步操作。所述说明书CN102372794ACN102372797A3/4页5的微孔滤芯的孔径大小较佳的为02M05M。00274在1030条件下，将步骤3所得滤液中加入乙醇至乙醇体积百分比。
14、5095进行沉淀，收集沉淀即可。0028其中，所述的步骤4收集沉淀的方式可按本领域常规操作，较佳的为离心沉淀。0029本发明中，所述的步骤4的沉淀较佳的还按本领域常规操作，经干燥，碾磨，得硫酸软骨素成品。其中，所述的干燥为本领域常规方式，较佳的为真空干燥、热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥。0030本发明所用试剂和原料均市售可得。0031在符合本领域常识的基础上，本发明中上述的各技术特征优选条件可以任意组合得到较佳实例。0032本发明的积极进步效果在于本发明的硫酸软骨素的制备方法能够提供不同分子量的硫酸软骨素，操作步骤简单方便，工艺合理，具有一定的经济和社会效益，制得的硫酸软骨素按不同分子量分别在药。
15、品、保健食品、食品、化妆品和宠物饲料等领域的应用发挥了重要的作用，为提高大众健康服务。具体实施方式0033下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。0034实施例10035硫酸软骨素的制备方法0036将5000ML水溶液加热升温至50，向其中加入已剪碎的鲨鱼软骨500G，在50条件下，搅拌保温05H，之后向其中加入稀盐酸由浓盐酸经5倍体积水稀释的水溶液调节PH50，再向料液中加入体系溶液体积百分比20的复合风味蛋白酶，50保温、酶解6H，酶解结束，用稀盐酸由浓盐酸经5倍体积水稀释的水溶液调节料液PH50，将上述料液加热升温至75，保温灭酶，再向其中加入。
16、溶液体积百分比05活性炭进行脱色、脱味，保温30MIN，过滤，将滤液用02M的微孔滤芯进行过滤，收集滤液，向滤液中加入乙醇进行沉淀至乙醇终点浓度为体积百分比50，沉淀温度为10，离心收集沉淀，将所得沉淀进行热风循环干燥，干燥温度为85，干燥至恒重，碾磨，得粉末状硫酸软骨素。0037经检测，本实施例所得的硫酸软骨素的分子量为120000道尔顿，粘度为045PAS15WT溶液浓度；25。0038实施例20039硫酸软骨素的制备方法0040将2500ML的质量百分比05的氢氧化钠水溶液加热升温至55，向其中加入已剪碎的猪软骨500G，在55条件下，搅拌保温碱解25H，之后向其中加入稀盐酸由浓盐酸经4。
17、倍体积水稀释的水溶液调节PH70，继续搅拌20MIN，复测PH值应维持在PH70，再向料液中加入体系溶液体积百分比10的中性蛋白酶，55保温、酶解35H，酶解结束，用稀盐酸由浓盐酸经4倍体积水稀释的水溶液调节料液PH65，将上述料液加热升温至70，保温灭酶，再向其中加入溶液体积百分比15活性炭进行脱色脱味，保温30MIN，过滤，将滤液用045M的微孔滤芯进行过滤，收集滤液，向滤液中加入乙醇进行沉说明书CN102372794ACN102372797A4/4页6淀至乙醇终点浓度为体积百分比75，沉淀温度为20，离心收集沉淀，将所得沉淀进行真空干燥，真空度为008MPA，干燥温度为70，干燥至恒重，。
18、碾磨，得粉末状硫酸软骨素。0041经检测，本实施例所得的硫酸软骨素的分子量为20000道尔顿，粘度为011PAS15WT溶液浓度；25。0042实施例30043硫酸软骨素的制备方法0044将1000ML的质量百分比15的氢氧化钠水溶液加热升温至60，向其中加入已剪碎的鲑鱼软骨500G，在60条件下，搅拌保温碱解05H，之后向其中加入稀盐酸由浓盐酸经3倍体积水稀释的水溶液调节PH80，继续搅拌15MIN，复测PH值应维持在PH80，再向料液中加入体系溶液体积百分比02的胰酶，60保温、酶解2H，酶解结束，用稀盐酸由浓盐酸经3倍体积水稀释的水溶液调节料液PH80，将上述料液加热升温至70，保温灭酶，再向其中加入溶液体积百分比25活性炭进行脱色脱味，保温30MIN，过滤，将滤液用022M的微孔滤芯进行过滤，收集滤液，向滤液中加入乙醇进行沉淀至乙醇终点浓度为95，沉淀温度为30，离心收集沉淀，将所得沉淀进行喷雾干燥，进风温度为200；出风温度为85，干燥至恒重，碾磨，得粉末状硫酸软骨素。0045经检测，本实施例所得的硫酸软骨素的分子量为3000道尔顿，粘度为003PAS15WT溶液浓度；25。说明书CN102372794A。