O,O二烷基O取代Α氰基苄叉氨基磷酸酯及硫代磷酸酯.pdf

本发明公开了一种O，O-二烷基-O-(取代-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯及硫代磷酸酯，该化合物的结构如式(I)所述，其中，Z为O或S；R为CH2CH3或CH(CH3)2；当R为CH2CH3时，Z为S；R为CH(CH3)2时，Z为O；且R1、R2、R3不同时为H；R1为H、F或Br；R2为H、Br或CF3；且R为CH2CH3时，R2不为CF3；R3为H、CH3、OCH3、F、Cl或Br；且当R1为H时，R3不为F；当R为CH2CH3时，R3不为OCH3；R3为Cl时，R1和R2不同时为H。本发明的化合物对日本血吸虫的中间宿主—湖北钉螺(Oncomelania hupensis)表现出很好的杀灭作用。

1、  一种式(I)所述的化合物，

其中，
Z为O或S；
R为CH₂CH₃或CH(CH₃)₂；
R₁为H、F或Br；且R₁、R₂、R₃不同时为H；
R₂为H、Br或CF₃；且当R为CH₂CH₃时，R₂不为CF₃；
R₃为H、CH₃、OCH₃、F、Cl或Br；且当R₁为H时，R₃不为F；当R为CH₂CH₃时，R₃不为OCH₃；当R₃为Cl时，R₁和R₂不同时为H。

2、  根据权利要求1所述的化合物，其中
Z为S时，R为CH₂CH₃；Z为O时R为CH(CH₃)₂。

3、  根据权利要求1或2所述的化合物，选自
O，O-二异丙基-O-(2-溴-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯
O，O-二异丙基-O-(3-溴-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯
O，O-二异丙基-O-(4-溴-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯
O，O-二异丙基-O-(2，4-二氟-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯
O，O-二异丙基-O-(2-氟-4-氯-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯
O，O-二异丙基-O-(4-甲基-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯
O，O-二异丙基-O-(3-三氟甲基-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯
O，O-二异丙基-O-(4-甲氧基-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯
O，O-二乙基-O-(2-溴-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯
O，O-二乙基-O-(3-溴-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯
O，O-二乙基-O-(4-溴-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯
O，O-二乙基-O-(2，4-二氟-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯
O，O-二乙基-O-(2-氟-4-氯-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯
O，O-二乙基-O-(4-甲基-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯。

4、  权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于将取代苯乙腈在碱性条件下和亚硝酸烷基酯进行反应，制得“取代-α-氰基苯甲酮肟钠”；再与二烷氧基磷酰氯或二烷氧基硫代磷酰氯进行反应，制得式(I)所述的化合物，其反应式如下：


其中各基团的定义如权利要求1所述。

5、  根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于第一步反应中的溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇和丁醇中的一种或几种；反应温度为0～50℃。

6、  根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述的碱性条件为醇钠，选自乙醇钠或甲醇钠；所述的亚硝酸烷基酯为亚硝酸丁酯、亚硝酸乙酯或亚硝酸甲酯。

7、  根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于第二步反应中的溶剂选自丙酮、乙醇、水、二氯甲烷、氯仿、苯或甲苯中的一种或几种；反应温度为0～100℃。

8、  权利要求1或2所述的化合物在制备杀螺药物方面的应用。

9、  权利要求1或2所述的化合物在制备杀钉螺药物方面的应用。

O，O-二烷基-O-(取代-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯及硫代磷酸酯
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种O，O-二烷基-O-(取代-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯及硫代磷酸酯化合物。
背景技术
血吸虫病是严重危害人民群众身体健康的寄生虫病。全球约有七十多个国家和地区流行血吸虫病，估计全世界受威胁的人口达6亿，有2亿人口感染血吸虫病，流行区域面积达5600多万平方公里。我国南方省区也是血吸虫病流行区，约有4千万人受威胁，150万人感染血吸虫病。
钉螺是血吸虫的唯一中间宿主和传播血吸虫病的媒介。使用药物消灭钉螺是控制和阻断血吸虫病传播途径，防止血吸虫感染的最有效措施之一。
数十年来，国内外筛选了数以万计的化合物，可是至今尚未找到一个非常理想的杀螺药物。国内现场曾经使用过的或正在使用的杀螺药，如氯硝柳胺、五氯酚钠、溴乙酰胺、烟酰苯胺、杀虫丁等，不同程度的存在着对非靶生物(人畜、鱼蚌等)毒性大，施药费用高，以及施药后引起钉螺回避、上爬等问题。具体来说：
氯硝柳胺杀螺效果好(浸杀48h，0.5mg/L，钉螺死亡率可达100％；LC₅₀ 0.124mg/L；杀螺效果是五氯酚钠的10余倍)。对人畜、作物毒性小(大鼠经口LD₅₀>5000mg/kg)，是世界卫生组织唯一推荐使用的杀螺剂，也是国内外使用最多的灭螺药物；缺点是难溶于水，现场施用不方便，对鱼毒性大(白鲢、草鱼TLM(24h)0.046～0.101mg/L)，施药后钉螺上爬，影响杀螺效果，价格贵。
五氯酚钠杀螺效果好(LC₅₀ 2.1mg/L)，溶于水，价廉，曾经是现场灭螺的主打药物；但对水生生物和哺乳动物毒性很大(小鼠经口LD₅₀ 82mg/kg，大鼠经口210mg/kg；鲤鱼TLM(48h)0.12mg/L)，有致突变、致畸和致癌作用。严重污染环境，破坏生态。在国内外已经被禁用。
溴乙酰胺杀螺效果好(浸杀48h，2.0mg/L，钉螺死亡率93.3％；1.0mg/L，46.7％；浸杀24h，LC₅₀ 0.64mg/L)；对哺乳动物有一定毒性(小鼠经口LD₅₀ 124mg/kg)，刺激皮肤，对植物有害；在杀螺浓度时对鱼安全(白鲢24h，LC₅₀ 9.4mg/L；草鱼24h，LC₅₀10.4mg/L)；施药后钉螺上爬严重；价格贵。该药由中国寄生虫病防治研究所研究开发，历经十余年，到目前为止尚未投入现场使用。
烟酰苯胺杀螺效果好(浸杀48h，1.0mg/L钉螺死亡率可达100％)，对人畜等非靶生物毒性较小(小鼠经口LD₅₀ 1850mg/kg)，对鱼毒性低；缺点是难溶于水，施药后钉螺上爬，价格较贵。
杀虫丁杀螺效果好(浸杀48h，2mg/L钉螺死亡率94％；1.0mg/L，96％)，对人畜有害(小鼠经口LD₅₀ 147mg/kg)，杀螺浓度时杀鱼(鲤鱼48h，LC₅₀ 1.17mg/L)，价格贵。
敌百虫杀螺作用较弱(浸杀48h，5mg/L钉螺死亡率34％，LC₅₀>10mg/L)，对人畜低毒(小鼠经口LD₅₀ 400～600mg/kg)，价格便宜。不常用。
四聚乙醛杀螺作用较弱(浸杀72h，LC₅₀ 36mg/L)，杀螺剂用量大；对人畜低毒(小鼠经口LD₅₀ 690mg/kg)，对鱼毒性低(鲤鱼48h，LC₅₀>40mg/L)但杀螺浓度时死鱼。
面对现有灭螺药物存在的问题，面对我国钉螺滋生面积仍然较大，有些地方血吸虫病流行还相当严重的严峻形势，消灭钉螺还是一项艰难而繁重的任务。寻找安全、有效和价廉的灭螺药物，仍然是当前血吸虫病防制工作中十分紧迫的任务。
发明内容
本发明的目的是针对上述杀螺药存在的问题，寻找、合成一系列具有对钉螺杀灭活性高、对人畜等低毒、价格便宜的O，O-二烷基-O-(取代-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯及硫代磷酸酯化合物。
本发明的另一目的是提供一种上述O，O-二烷基-O-(取代-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯及硫代磷酸酯化合物的制备方法。
本发明还有一个目的是提供上述O，O-二烷基-O-(取代-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯及硫代磷酸酯化合物在控制有害螺类滋生(如杀灭钉螺)方面的应用。
本发明的目的可以通过以下措施达到：
一种式(I)所述的O，O-二烷基-O-(取代-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯及硫代磷酸酯化合物，

其中，
Z为O或S；
R为CH₂CH₃或CH(CH₃)₂；且Z为S时，R为CH₂CH₃；Z为O时R为CH(CH₃)₂。
R₁为H、F或Br；且R₁、R₂、R₃不同时为H；
R₂为H、Br或CF₃；且当R为CH₂CH₃时，R₂不为CF₃；
R₃为H、CH₃、OCH₃、F、Cl或Br；且当R₁为H时，R₃不为F；当R为CH₂CH₃时，R₃不为OCH₃；当R₃为Cl时，R₁和R₂不同时为H。
本发明的化合物，进一步优选以下化合物：

最优选的化合物是：O，O-二乙基-O-(2-溴-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯、O，O-二乙基-O-(2，4-二氟-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯以及O，O-二异丙基-O-(2，4-二氟-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯。
本发明的化合物可以通过以下方法制备：先将取代苯乙腈在碱性条件下(如醇钠)和亚硝酸烷基酯进行第一步反应，制得“取代-α-氰基苯甲酮肟钠”；再与二烷氧基硫代磷酰氯或二烷氧基磷酰氯进行第二步反应，制得式(I)所述的化合物，其反应方程式如下：

其中各基团的定义如上所述。
在上述反应式1中，可以选择乙醇、甲醇、异丙醇、丁醇等物质中的一种或几种作为溶剂，溶剂的使用量为取代苯乙腈重量的0.5至10倍；醇钠包括乙醇钠、甲醇钠等，其使用量是取代苯乙腈摩尔数的1至3.5倍；亚硝酸烷基酯为亚硝酸丁酯、亚硝酸甲酯、亚硝酸乙酯等，其使用量是取代苯乙腈摩尔数的1至3.5倍；反应温度为0～50℃之间；反应时间1～9小时。
优选的溶剂可以是乙醇、甲醇等物质中的一种或混合溶剂，溶剂的使用量为取代苯乙腈重量的1.5至3倍；醇钠优选为乙醇钠；亚硝酸烷基酯优选为亚硝酸丁酯；反应温度在10～30℃范围内；反应时间随反应条件不同而不同，一般为3～5小时。
在上述反应式2中，可以选择丙酮、乙醇、水、二氯甲烷、氯仿、苯或甲苯等物质中的一种或几种作为溶剂，溶剂的使用量为取代苯乙腈肟钠重量的1～10倍；(RO)₂P(Z)Cl优选为二异丙氧基磷酰氯和二乙氧基硫代磷酰氯，使用量为取代苯乙腈肟钠摩尔数的0.5～3倍；反应温度为0～100℃之间；反应时间为0.5～8小时。
优选的溶剂可以是丙酮、乙醇、氯仿，使用重量为取代苯乙腈肟钠的2～5倍；(RO)₂P(Z)Cl使用量为取代苯乙腈肟钠摩尔数的1～1.5倍；反应温度在20～40℃之间；反应时间随反应条件的不同而不同，一般为2～5小时。
本发明化合物在杀灭螺体(尤其是钉螺)方面具有良好的活性，可以应用于制备杀螺(尤其是钉螺)药物。本发明的化合物对日本血吸虫的中间宿主——湖北钉螺(Oncomelania hupensis)表现出很好的杀灭作用，通过进一步的深入研究，可以为血吸虫病防治提供一个有效防治手段。室内浸泡杀螺药效学评价试验结果表明(见表1)，本发明的化合物具有优良的杀螺活性。从测定结果可以看出，化合物1、4、9和12显示出很高的杀螺活性，在浓度1mg/L时(24小时内)钉螺的死亡率大于80％，其钉螺半数致死浓度LC₅₀分别为0.50mg/L，0.35mg/L，0.33mg/L和0.38mg/L，杀螺活性超过五氯酚钠(0.93mg/L)和溴乙酰胺(0.64mg/L)。其它化合物(如2、3、7、和13)也显示出较好的杀螺活性，其半数致死浓度在0.8～2.0mg/L之间。
表1.室内浸泡杀螺药效学评价试验结果(24h)

具体实施方式
熔点用电加热X-4显微熔点仪测定，折光率用2-WAJ阿贝折光仪测定。元素分析用Elementar Vario EL III元素分析仪测定。红外光谱用在NICOLET 380FT-IR红外光谱仪测定，KBr压片。¹HNMR核磁共振图谱用Bruker AV-300和AV-500测定，TMS内标。质谱用GCT micromass测定。
实施例1：O，O-二乙基-O-(2-溴-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯(9)的合成。

于250mL反应瓶中加入无水乙醇50mL，金属钠2.3g(0.10mol)，搅拌反应，待钠块消失后冰浴冷却至5℃，加入邻溴苯乙腈19.6g(0.10mol)，搅拌下(10℃)滴加亚硝酸丁酯10.3g(0.10mol)，滴毕，维持搅拌3小时。加入50mL乙醚，搅拌，抽滤，用乙醚洗涤滤饼3～4次，干燥得黄色粉末2-溴-α-氰基苯甲酮肟钠15.3g，收率62％。
以其他取代苯乙腈代替邻溴苯乙腈进行上述操作，可得相应的“取代-α-氰基苯甲酮肟钠”。
将2-溴-α-氰基苯甲酮肟钠7.4g(0.03mol)悬浮于丙酮20mL中，冰浴冷却到5℃，搅拌下滴加二乙氧基硫代磷酰氯5.7g(0.03mol)，滴毕，室温搅拌反应2-3h(TLC监测反应终点)。减压浓缩至干，残留物加水20mL，以乙醚提取2×20mL，用1.5％NaOH溶液洗涤醚液4×20mL，水洗至中性，无水硫酸钠干燥。蒸去乙醚，得粗产物。若为液体粗产物，需经硅胶柱层析精制，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱；若为固体粗产物，需经石油醚(活性炭脱色)重结晶精制。得白色晶体7.5g，产率66.7％。mp77-78℃；Anal.CalcdforC₁₂H₁₄BrN₂O₃PS(377.19)：C，38.21；H，3.74；N，7.45；Found：C，38.22；H，3.52；N，7.42；IR(KBr)：v_max 3055，2985，2939，2233，1590，1507，1472，1022，927，647cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.40(t，6H，CH₃，J＝7.1Hz)，4.33(m，4H，CH₂)，7.40～7.46(m，2H，Ar-H)，7.55(dd，1H，Ar-H，J＝1.9/7.6Hz)，7.71(dd，1H，Ar-H，J＝1.9/7.6Hz)；MS：m/z(I％)207.0(10.12)，183.0(95.49)，181.0(100.00)。
实施例2-14：按实施例1中所述步骤采用不同的基团制备下列化合物。
按实施例1的方法合成O，O-二异丙基-O-(2-溴-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯(1)。

得白色晶体8.6g，产率73.7％。mp44-45℃；Anal.Calcd for C₁₄H₁₈BrN₂O₄P(389.18)：C，43.21；H，4.66；N，7.20；Found：C，43.26；H，4.52；N，7.24；IR(KBr)：v_max 3077，2983，2936，2230，1586，1470，1279，1012，928cm^-1；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 1.40(m，12H，CH₃)，4.88(m，2H，CH)，7.42(m，2H，Ar-H)，7.53(m，1H，Ar-H)，7.70(m，1H，Ar-H)。
按实施例1的方法合成O，O-二异丙基-O-(3-溴-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯(2)。

得浅黄色油状物9.0g，产率77.3％。n_D²⁰ 1.5204；Anal.Calcd for C₁₄H₁₈BrN₂O₄P(389.18)：C，43.21；H，4.66；N，7.20；Found：C，43.57；H，4.96；N，7.68；IR(KBr)：v_max 3069，2984，2938，2236，1582，1552，1469，1291，1014，952cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.40(m，12H，CH₃)，4.88(m，2H，CH)，7.30(m，1H，Ar-H)，7.70(d，1H，Ar-H，J＝8.1Hz)，7.82(d，1H，Ar-H，J＝8.0Hz)，8.10(s，1H，Ar-H)。
按实施例1的方法合成O，O-二异丙基-O-(4-溴-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯(3)。

得白色晶体9.7g，产率83.5％。mp65-66℃；Anal.Calcd for C₁₄H₁₈BrN₂O₄P(389.18)：C，43.21；H，4.66；N，7.20；Found：C，42.92；H，4.56；N，6.97；IR(KBr)：v_max 3081，2986，2939，2875，2234，1587，1490，1467，1279，1010，945cm^-1；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 1.42(m，12H，CH₃)，4.86(m，2H，CH)，7.64(m，2H，Ar-H)，7.76(m，2H，Ar-H)。
按实施例1的方法合成O，O-二异丙基-O-(2，4-二氟-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯(4)。

得浅黄色油状物9.3g，产率89.6％。n_D²⁰ 1.4832；Anal.Calcd for C₁₄H₁₇F₂N₂O₄P(346.27)：C，48.56；H，4.95；N，8.09；Found：C，48.44；H，5.00；N，8.52；IR(KBr)：v_max 3059，2986，2939，2237，1614，1506，1292，1015，940cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.43(m，12H，CH₃)，4.84(m，2H，CH)，7.00(m，2H，Ar-H)，7.80(m，1H，Ar-H)。
按实施例1的方法合成O，O-二异丙基-O-(2-氟-4-氯-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯(5)。

得浅黄色油状物11.2g，产率98.9％。n_D²⁰1.5072；Anal.Calcd for C₁₄H₁₇ClFN₂O₄P(378.28)：C，46.36；H，4.72；N，7.72；Found：C，46.20；H，4.92；N，7.92；IR(KBr)：v_max 3092，2985，2939，2236，1608，1585，1490，1290，1015，945cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.43(m，12H，CH₃)，4.89(m，2H，CH)，7.28(m，2H，Ar-H)，7.73(m，1H，Ar-H)。
按实施例1的方法合成O，O-二异丙基-O-(4-甲基-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯(6)。

得白色晶体7.8g，产率80.2％。mp47-48℃；Anal.Calcd for C₁₅H₂₁N₂O₄P(324.31)：C，55.55；H，6.53；N，8.64；Found：C，55.81；H，6.66；N，8.50；IR(KBr)：v_max 2985，2938，2237，1611，1462，1291，1013，940cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.40(m，12H，CH₃)，2.42(s，3H，p-CH₃)，4.88(m，2H，CH)，7.27(d，2H，Ar-H，J＝8.4Hz)，7.77(d，2H，Ar-H，J＝8.4Hz)；MS：m/z(I％)324.1(M⁺，0.01)，143.1(2.12)，117.0(100.00)。
按实施例1的方法合成O，O-二异丙基-O-(3-三氟甲基-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯(7)。

得浅黄色油状物10.5g，产率92.8％。n_D²⁰ 1.4687；Anal.Calcd for C₁₅H₁₈F₃N₂O₄P(378.28)：C，47.63；H，4.80；N，7.41；Found：C，47.19；H，5.23；N，7.81；IR(KBr)：v_max 2986，2939，2237，1616，1462，1275，1016，and 954cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.42(m，12H，CH₃)，4.88(m，2H，CH)，7.68(m，1H，Ar-H)，7.84(d，1H，Ar-H，J＝7.8Hz)，8.10(d，1H，Ar-H，J＝7.9Hz)，8.14(s，1H，Ar-H)。
按实施例1的方法合成O，O-二异丙基-O-(4-甲氧基-α-氰基苄叉氨基)磷酸酯(8)。

得浅黄色油状物7.8g，产率76.5％。n_D²⁰1.5118；Anal.Calcd for C₁₅H₂₁N₂O₅P(340.31)：C，52.94；H，6.22；N，8.23；Found：C，52.69；H，6.29；N，8.15；IR(KBr)：v_max 2984，2938，2844，2237，1607，1550，1514，1462，1264，1015，935cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.40(m，12H，CH₃)，3.87(s，3H，OCH₃)，4.86(m，2H，CH)，6.98(d，2H，Ar-H，J＝8.9Hz)，7.83(d，2H，Ar-H，J＝8.9Hz)；MS：m/z(I％)340.1(M⁺，0.19)，133.1(100.00)。
按实施例1的方法合成O，O-二乙基-O-(3-溴-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯(10)。

得浅黄色油状物9.0g，产率80.0％。n_D²⁰ 1.5589；Anal.Calcd for C₁₂H₁₄BrN₂O₃PS(377.19)：C，38.21；H，3.74；N，7.43；Found：C，38.06；H，3.88；N，7.49；IR(KBr)：v_max 3067，2987，2935，2236，1581，1551，1474，1019，943，654cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.39(m，6H，CH₃)，4.33(m，4H，CH₂)，7.40(m，1H，Ar-H)，7.69(d，1H，Ar-H，J＝9.1Hz)，7.81(d，1H，Ar-H，J＝8.0Hz)，8.05(s，1H，Ar-H)。
按实施例1的方法合成O，O-二乙基-O-(4-溴-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯(11)。

得白色晶体8.2g，产率72.9％。mp36-37℃；Anal.Calcd for C₁₂H₁₄BrN₂O₃PS(377.19)：C，38.21；H，3.74；N，7.53；Found：C，38.22；H，3.55；N，7.74；IR(KBr)：v_max 3092，2986，2935，2237，1586，1023，936，619cm^-1；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ 1.40(t，3H，CH₃，J＝7.1Hz)，4.33(m，4H，CH₂)，7.62(d，2H，Ar-H，J＝6.9Hz)，7.76(t，2H，Ar-H，J＝6.9Hz)。
按实施例1的方法合成O，O-二乙基-O-(2，4-二氟-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯(12)。

得浅黄色油状物8.2g，产率81.8％。n_D²⁰ 1.5210；Anal.Calcd for C₁₂H₁₃F₂N₂O₃PS(334.28)：C，43.12；H，3.92；N，8.38；Found：C，42.95；H，3.96；N，8.38；IR(KBr)：v_max 3083，2988，2937，2237，1614，1506，1021，934，650cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.40(t，6H，CH₃，J＝7.0)，4.33(m，4H，CH₂)，6.99(m，2H，Ar-H)，7.80(m，1H，Ar-H)。
按实施例1的方法合成O，O-二乙基-O-(2-氟-4-氯-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯(13)。

得浅黄色油状物8.6g，产率81.9％。n_D²⁰ 1.5444；Anal.Calcd for C₁₂H₁₃ClFN₂O₃PS(350.73)：C，41.09；H，3.74；N，7.99；Found：C，41.44；H，3.86；N，8.23；IR(KBr)：v_max 3091，2986，2938，2237，1608，1488，1023，939，646cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.40(t，6H，CH₃，J＝7.1Hz)，4.33(m，4H，CH₂)，7.28(m，2H，Ar-H)，7.73(m，1H，Ar-H)；MS：m/z(I％)350.0(M⁺，0.01)，181.0(27.13)，155.0(100.00)。
按实施例1的方法合成O，O-二乙基-O-(4-甲基-α-氰基苄叉氨基)硫代磷酸酯(14)。

得浅黄色油状物7.9g，产率84.0％。n_D²⁰ 1.5410；Anal.Calcd for C₁₃H₁₇N₂O₃PS(312.32)：C，49.99；H，5.49；N，8.97；Found：C，49.89；H，5.36；N，8.90；IR(KBr)：v_max 2987，2933，2236，1611，1549，1022，932，649cm^-1；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ 1.40(m，6H，CH₃)，2.42(s，3H，p-CH₃)，4.35(m，4H，CH₂)，7.28(d，2H，Ar-H，J＝8.2Hz)，7.77(d，2H，Ar-H，J＝8.2Hz)。
实施例15：药物室内浸泡杀螺活性评价试验
钉螺采集于镇江丹徒有螺江滩，以群体逸蚴法剔除感染性钉螺，经室内饲养24h后选取活力强，螺龄相仿的7～8旋成螺随机分组进行杀螺活性评价试验。
称取上述磷酸酯或硫代磷酸酯100mg，加DMSO 1mL使其溶解，加吐温-800.5mL，搅拌均匀，用脱氯自来水配制成药物浓度为8.00mg/L，4.00mg/L，2.00mg/L，1.00mg/L，0.50mg/L，0.25mg/L，0.125mg/L浓度的溶液待用。
将100mL的不同浓度的上述药液，分别倒入100mL烧杯中，再放入10只钉螺成螺，上盖塑料纱网防止钉螺爬出液面。设立清水对照和空白剂对照试验。在25℃的恒温室浸泡钉螺24h后，倒去药液，清水冲洗钉螺，恢复饲养48h，敲击法观察钉螺死亡情况，计算LC₅₀＝lg^-1∑(p_i+1-p_i)(x_i+1+x_i)/2。杀螺试验结果见表1。本项研究获江苏省科技厅社会发展项目资助(BS2007060)。