使用酯化卵磷脂的纳米脂质体、其制备方法和含有其的用于预防或治疗皮肤疾病的组合物.pdf

本发明涉及一种纳米脂质体，该纳米脂质体包含：含有酯化卵磷脂的脂质体膜和一种或多种包含在该脂质体膜的内部空间中的生理学活性成分；及其制备方法；和其用于预防或治疗皮肤疾病的组合物。根据本发明的纳米脂质体具有长期稳定性和均匀性，因此该纳米脂质体可用于制备具有极佳皮肤保湿和渗透特性的组合物或用于治疗皮肤疾病等的药物。特别地，用于预防或治疗皮肤疾病的本发明组合物含有包含于纳米脂质体中的表皮生长因子，由此该组合物显示出极佳促进皮肤渗透作用和良好的药物稳定性。此外，在制备脂质体中所使用酯化卵磷脂可提供软化皮肤和促进皮肤渗透作用，由此增强了表皮生长因子和天然提取物进入皮肤的渗透性，以及在治疗皮肤疾病中有利的其它保湿作用。另外，由于本发明组合物含有通过在脂质体膜中包含酯化卵磷酯所制备的纳米脂质体，因此解决了在高温(70℃或更高)加热和分散活性成分、低稳定性和均匀性等常见问题。

1.  纳米脂质体，其包含：含有酯化卵磷脂的脂质体膜和一种或多种包含在该脂质体膜的内部空间的生理学活性成分。

2.  根据权利要求1的纳米脂质体，其中所述生理学活性成分是选自辅酶Q10和表皮生长因子中的一种或多种。

3.  根据权利要求1的纳米脂质体，其中所述酯化卵磷脂是卵磷脂与有机酸的反应产物。

4.  根据权利要求3的纳米脂质体，其中所述有机酸选自无水乙酸、无水苹果酸、无水乳酸、无水乙醇酸、无水柠檬酸和无水草酸。

5.  根据权利要求1的纳米脂质体，还包括选自下述的一种或多种：氢化饱和烃卵磷脂、阴离子表面活性剂、甘油三酯型有机化合物、软化剂、螯合剂和甜菜碱型两亲型表面活性剂。

6.  制备纳米脂质体的方法，包括：
通过卵磷脂与有机酸反应制备酯化卵磷脂的第1步骤；
使该酯化卵磷脂和一种或多种生理学活性成分在溶剂中溶解的第2步骤；以及
使所得的溶液分散以获得纳米尺寸的脂质体的第3步骤。

7.  根据权利要求6的方法，其中所述生理学活性成分是选自辅酶Q10和表皮生长因子中的一种或多种。

8.  根据权利要求7的方法，其中所述第2步骤包括下述步骤：
通过在有机溶剂中溶解酯化卵磷脂和辅酶Q10制备油相溶液；
通过在水性溶剂中溶解表皮生长因子制备水相溶液；以及
将油相溶液和水相溶液混合。

9.  根据权利要求6的方法，其中所述第2步骤是在20℃-60℃的温度下进行的。

10.  用于预防或治疗皮肤疾病的组合物，该组合物含有纳米脂质体和一种或多种具有抗炎活性的天然提取物，所述纳米脂质体包含：含有酯化卵磷脂的脂质体膜和包含在该脂质体膜的内部空间中的表皮生长因子。

11.  根据权利要求10的组合物，其中所述纳米脂质体还包含一种或多种选自下述的抗氧化剂：辅酶Q10、视黄醇、视黄醛、视黄醇棕榈酸酯、视黄酸、抗坏血酸、抗坏血酸磷酸酯或其盐、和抗坏血酸棕榈酸酯。

12.  根据权利要求10的组合物，其中所述天然提取物是一种或多种选自下述天然产物的提取物：山茶(Camellia japonica)、槲寄生(Viscum album L.var.coloratum)、榆白皮(Ulmi cortex)、百合(Lillium brownii F.E.)、半夏(Pimellia ternata Thunb Breit)、白芨(Bletilla striata Reichb.fil.)、芍药(Paeonia lactifloraPall)、乳香(Boswellia carterii Birdw)、知母(Anemarrhenarhizome)、楤木皮(Aralia cortex Aralia cortex)、生地黄(Rehmaniaeradix)、山药(Dioscoreae Radix)、山茱萸(Corni Fructus)、茯苓(Hoelen)、牡丹皮(Moutan Cortex Radicis)、五味子(SchizandraeFructus)、天冬(Asparagi Tuber)、麦冬(Liriopsis Tuber)、贝母(Fritillariae Bulbus)、杏仁(Armeniacae Semen)、半夏(PinelliaeTuber)、桔梗(Platicodi Radix)、黄芩(Scutellariae Radix)和黄连(Coptidis Rhizoma)。

13.  根据权利要求10的组合物，其中所述天然提取物是山茶(Camellia japonica)或槲寄生(Viscum album L.var.coloratum)的提取物。

14.  根据权利要求10的组合物，其中所述脂质体膜除了包括酯化卵磷脂以外，还包括氢化卵磷脂、神经酰胺或其混合物。

15.  根据权利要求10-14中任一项的组合物，其中所述酯化卵磷脂是卵磷脂与有机酸的反应产物。

16.  根据权利要求15的组合物，其中所述有机酸是乙酸、苹果酸、乳酸、乙醇酸、柠檬酸、草酸或其酸酐。

17.  根据权利要求10-14中任一项的组合物，其中所述纳米脂质体还包括选自下述的一种或多种：阴离子表面活性剂、甘油三酯型有机化合物、软化剂、螯合剂和两亲型表面活性剂。

使用酯化卵磷脂的纳米脂质体、其制备方法和含有其的用于预防或治疗皮肤疾病的组合物
技术领域
本发明涉及一种纳米脂质体，该纳米脂质体包含：含有酯化卵磷脂的脂质体膜和一种或多种包含在该脂质体膜的内部空间中的生理学活性成分；及其制备方法；和含有该纳米脂质体的用于预防或治疗皮肤疾病的组合物。
背景技术
脂质体是其中存在亲水空间并具有封闭双层脂质膜的微内质网。因此，脂质体的特征在于在亲水的内部空间包含水溶性物质，并且在外部双层脂质膜捕获油溶性物质。形成这类脂质膜的物质被称为类脂。作为类脂，通常使用磷酸甘油酯类或鞘脂类。由于极佳的保湿特性和对人体无毒，卵磷脂或神经酰胺在化妆品或食品领域使用最普遍。
但是，这些卵磷脂和神经酰胺是疏水的，并且难于在醇溶液和水溶液中分散。因此，为了作为类脂使用，它们需要加热到70℃或更高温度的高温度而分散，然后向其中加入功能性物质。因此，将在高温度下氧化或热不稳定的功能性化合物(例如辅酶Q10和EGF)脂质化时存在着一个大问题。此外，由此所形成的脂质体具有非常低的稳定性和粒度不均匀的缺点。特别是将彼此具有极其不同极性的两个功能性化合物(例如疏水性辅酶Q10和亲水性EGF)共同脂质化是困难的。
最近，通过卵磷脂与磷酸或其它极性化合物反应所获得从而具有良好的水溶液可分散性的阴离子表面活性剂类型的磷脂基(phospholipidyl)类脂被广泛应用。但是，如果类脂过于亲水，那么润湿性可能被增强，而进入皮肤的渗透作用由于与皮肤表面的成分间极性的差异而明显消失。此外，如果类脂是阴离子盐的类型，那么它使化妆品的粘度降低，从而需要进一步添加增稠剂。
最初，辅酶Q10被称作促进人体细胞能量产生的辅酶，其具有针对活性氧的有效抗氧化能力。因此，它的吸入或在皮肤上施用能预防细胞的氧化，从而维持皮肤的弹性并有效预防衰老。特别地，这类辅酶Q10在人体以充足的量产生直到20岁，但是由于各种原因(例如饮食不均衡、应激等)该量在20岁前后从峰值下降。在40岁前后，所述下降加速，因此需要对其加以补充。
表皮生长因子(EGF)是存在于母奶的初乳，并且在细胞再生和促进伤口愈合方面具有极佳效力的一种蛋白，因此EGF作为用于治疗糖尿病性足溃疡的生物药物使用。同样地，EGF被认为是具有使伤口自然愈合而没有疤痕作用的一种成分，并且其具有皮肤再生作用。因此，EGF被广泛作为功能性化妆品的原材料，以及作为用于使由糖尿病性足溃疡、烧伤、刀伤等引起的伤口愈合的药物使用。
韩国专利特许公开No.10-2005-0058635公开了具有抗炎和抗氧化活性的日本产山茶(Camellia japonica)提取物。韩国专利特许公开No.10-2006-0025423公开了具有抗炎和抗氧化活性的槲寄生(Viscum albumL.var.coloratum)的提取物。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种纳米脂质体，该纳米脂质体包含：含有酯化卵磷脂的脂质体膜和一种或多种包含在该脂质体膜的内部空间中的生理学活性成分。根据本发明，如果双层脂膜通过使用在水或醇中良好分散并且具有亲水性和疏水性的酯化卵磷脂形成，那么包含功能性物质(例如辅酶Q10或表皮生长因子)的纳米脂质体溶液可在低的温度下制备，并且所制备的纳米脂质体具有长期稳定性和均匀性，因此可用作具有极佳的皮肤保湿和渗透特性的组合物(例如化妆品)的原材料或作为用于治疗皮肤疾病的药物，等等。
本发明的另一个目的是通过使酯化卵磷脂和生理学活性成分的混合溶液以纳米尺寸分散从而提供用于制备稳定纳米脂质体的方法。
本发明人已经发现，如果表皮生长因子作为纳米脂质体制备，并与具有抗炎活性的天然提取物共同配制，那么其稳定性增加，并且EGF进入皮肤的渗透性也得到加强，从而可以获得具有对皮肤疾病极佳愈合作用的组合物。
因此，本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗皮肤疾病的组合物，该组合物含有包含表皮生长因子的纳米脂质体和一种或多种具有抗炎活性的天然提取物。
附图说明
图1是表示根据本发明的通过使用酯化卵磷脂所制备的具有EGF/辅酶Q10的双层膜的纳米脂质体溶液的UV/可见光吸光度(％)的图。
图2是表示根据本发明的通过使用酯化卵磷脂所制备的具有EGF/辅酶Q10的双层膜的纳米脂质体溶液的UV/可见光透光度(％)的图。
图3是表示根据本发明的通过使用酯化卵磷脂所制备的具有EGF/辅酶Q10的双层膜的纳米脂质体粒度分布的图。
图4是显示当组合物被施用于由于放射治疗而引起皮炎的口腔癌患者和喉癌患者时，含有纳米脂质体的本发明组合物的治疗作用。
发明详述
本发明的一方面提供了一种纳米脂质体，该纳米脂质体包含含有酯化卵磷脂的脂质体膜，和一种或多种含在该脂质体膜的内部空间中的生理学活性成分。
本发明的另一方面提供了用于制备纳米脂质体的方法，该方法包括使卵磷脂与有机酸反应制备酯化卵磷脂的第1步骤；使酯化卵磷脂和一种或多种生理学活性成分在溶剂中溶解的第2步骤；以及使所得的溶液分散以获得纳米尺寸的脂质体的第3步骤。
本发明的另一方面提供了用于治疗或预防皮肤疾病的组合物，该组合物含有纳米脂质体以及一种或多种具有抗炎活性的天然提取物，所述纳米脂质体包含含有酯化卵磷脂的脂质体膜，和含在该脂质体膜的内部空间中的表皮生长因子。
本发明如下述进行详细说明。
如在本文中所使用的术语“包含”指在脂质体中心的亲水空间中含有水溶性物质(例如，表皮生长因子、抗坏血酸等)，或通过脂质体的双层脂膜捕获油溶性物质(例如辅酶Q10、视黄醇、视黄醇棕榈酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯等)。
如在本文中所使用的术语“纳米脂质体”指具有约100-200nm直径的脂质体，该脂质体通常通过在约1000psi或更高的压力条件下以纳米尺寸分散而制备。
在本发明中，脂质体膜包含酯化卵磷脂。如果需要的话，所述脂质体膜可包含通常在脂质体制备中所使用的脂质体膜成分(即类脂)。所述类脂包括磷酸甘油酯类或鞘脂类，例如磷脂酰胆碱(即卵磷脂)、氢化卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、神经酰胺、脑苷脂(即半乳糖苷神经酰胺)、鞘磷脂、神经节苷脂等。作为酯化卵磷脂，类脂还产生保湿作用。在上述类脂中，优选使用氢化卵磷脂和/或神经酰胺。所述氢化卵磷脂指由饱和烃构成的卵磷脂，该饱和烃通过卵磷脂中的所有不饱和烃的还原获得。
包含在脂质体膜中的酯化卵磷脂在水或醇中分散良好，并具有亲水性和疏水性。因此，酯化卵磷脂具有足够的极性在水性溶剂中分散，但是不足以完全在水性溶剂中溶解。因此，当脂质体膜通过使用酯化卵磷脂形成时，即使在低温(20℃-60℃)下也可以制备稳定的脂质体溶液。
酯化卵磷脂可通过使卵磷脂或氢化卵磷脂与有机酸反应制备。该酯化过程是一种缩合反应，其中卵磷脂的醇基团与有机酸反应，所得到的水分子从其中除去。如此制得的酯化卵磷脂与水在水性溶液中反应，并且再解离成卵磷脂(醇基团)和有机酸形式中。因此，在这个反应中，该酯化卵磷脂、卵磷脂(或氢化卵磷脂)和有机酸根据酸性以在酯化和解离之间维持适当的平衡状态共存，该反应如下：
RCOOR’(酯化卵磷脂)(有机酸)+R’OH(卵磷脂或氢化卵磷脂)
在制备酯化卵磷脂中所使用的有机酸包括在化妆品和食品中通常所使用的有机酸，例如乙酸、苹果酸、乳酸、乙醇酸、柠檬酸或草酸，优选为无水有机酸，更优选为无水苹果酸或无水乙酸。如果使用无水乙酸，那么酯化卵磷脂显示出相对于使用无水苹果酸更高的亲水性。因此，有机酸可依赖于所要添加的亲水性或疏水性功能性物质的相对量或功能性物质的极性程度而适宜地选择。这些有机酸如果施用到皮肤还显示出去除角质化物质的作用或软化皮肤的作用。
酯化卵磷脂以足够的量使用以形成脂质体，虽没有具体限制，但基于1重量份的生理学活性成分的重量，优选为1-5重量份。
包含在本发明脂质体膜的内部空间中的生理学活性成分可以是，但不限于水溶性药物、油溶性药物、热不稳定的功能性物质等。优选地，生理学活性成分是选自辅酶Q10和表皮生长因子中的一种或多种。
本发明的纳米脂质体还包括选自下述的一种或多种：甘油三酯型有机化合物，优选为辛酸/癸酸甘油三酯；阴离子表面活性剂，优选为二乙胺鲸蜡基磷酸酯、抗坏血酸磷酸酯钠、磷脂酰胆碱或三乙胺椰子酰基谷氨酸钠(triethylamine coconyl glutamine sodium)；氢化饱和烃卵磷脂；软化剂，优选为丁基羟基甲苯、甜菜碱型两亲型表面活性剂优选为例如月桂胺丙基甜菜碱、月桂基甜菜碱、月桂胺甜菜碱或椰油酰胺丙基甜菜碱；和螯合剂，优选为乙二胺四乙酸的钠盐。
本发明还涉及用于制备纳米脂质体的方法，该方法包括：使卵磷脂与有机酸反应制备酯化卵磷脂的第1步骤；使酯化卵磷脂和一种或多种生理学活性成分在溶剂中溶解的第2步骤；以及使所得的溶液分散以获得纳米尺寸的脂质体的第3步骤。
在第1步骤中，所述酯化卵磷脂通过卵磷脂与有机酸的缩合反应制备。所述有机酸优选选自乙酸、苹果酸、乳酸、乙醇酸、柠檬酸和草酸以及其酸酐。
在第2步骤中，所述生理学活性成分优选但不限于水溶性药物、油溶性药物或热不稳定功能性物质。更优选地，所述生理学活性成分是选自辅酶Q10和表皮生长因子中的一种或多种。此外，如果需要，作为生理学活性成分还可以使用抗氧化剂，例如辅酶Q10、视黄醇、视黄醛、视黄醇棕榈酸酯、视黄酸、抗坏血酸、抗坏血酸磷酸酯或其盐、或抗坏血酸棕榈酸酯等。
当疏水性成分(例如辅酶Q10)和亲水性成分(例如EGF)同时使用时，第2步骤优选包括下述步骤：通过在有机溶剂中溶解酯化卵磷脂和疏水性活性成分(例如辅酶Q10)制备油相溶液；通过在水性溶剂中溶解亲水活性成分(例如EGF)制备水相溶液；以及将油相溶液和水相溶液混合。
在上述制备油相溶液的步骤中，酯化卵磷脂和疏水性活性成分(例如辅酶Q10)溶解在有机溶剂(例如乙醇)中。优选地，还可以在有机溶剂中加入氢化饱和烃卵磷脂；甘油三酯型亲水性有机化合物，例如辛酸/癸酸甘油三酯；阴离子表面活性剂，例如二乙胺鲸蜡磷酸酯、抗坏血酸磷酸酯钠、磷脂酰胆碱或三乙胺椰子酰基谷氨酸钠；或软化剂，例如丁基羟基甲苯。
在上述制备水相溶液的步骤中，通过在纯净水中溶解亲水性活性成分(例如EGF)制备水相溶液。优选地，还可以在水相溶液中加入阴离子表面活性剂，例如二乙胺鲸蜡磷酸酯、抗坏血酸磷酸酯钠、磷脂酰胆碱或三乙胺椰子酰基谷氨酸钠；或螯合剂，例如乙二胺四乙酸的钠盐。
酯化卵磷脂和生理学有效成分在溶剂中的溶解过程优选在20℃-60℃的温度下进行。如果温度低于20℃，溶解可以进行，但是溶解时间较长，并且在溶解后存在稳定性的问题。在此，如果温度高于60℃，那么辅酶Q10和/或EGF等作为生理学活性成分可能不稳定。
在如上述所制备的油相溶液和水相溶液混合后，该混合物通过使用高速搅拌器成为均匀的。同时，脂质体在均匀的脂质体溶液中显示出微米数量级的粒度。
在第3个步骤中，在1000psi或更高的压力下通过使第2步骤的均匀混合的溶液通过微射流均质机(microfluidizer)(M/F)一次或多次获得纳米脂质体溶液，并且使其分散到纳米尺寸的脂质体。如果所述压力低于1000psi，可能很难形成纳米尺寸的脂质体。优选地，均匀混合的溶液通过微射流均质机(M/F)两次或多次。
包含在如上述所制备的纳米脂质体溶液中的脂质体在水性溶液中形成了水相/油相的双脂质体，因此还可以使存在于水相最内部的功能性物质(例如EGF和任选水溶性抗氧化剂)稳定，并且能进一步同时使亲水性活性成分(例如EGF)和疏水性活性成分(例如辅酶Q10)稳定。
使用酯化卵磷脂的包含辅酶Q10和EGF的本发明纳米脂质体可在制备用于皮肤的组合物(例如化妆品)、用于治疗皮肤疾病的药物等中通过常规方法使用。
在制备组合物中所使用的原材料的优选的量在实施例中详细描述。此外，上述的添加剂可被其它适合的添加剂替代，并且所述添加剂的量可根据功能性物质的量进行适当地调整以优化制备条件。
根据一个实施方案，本发明提供了用于预防或治疗皮肤疾病的组合物，该组合物含有：纳米脂质体以及一种或多种具有抗炎活性的天然提取物，所述的纳米脂质体包含：含有酯化卵磷脂的脂质体膜和包含在该脂质体膜的内部空间的表皮生长因子。
本发明组合物使用以包含在纳米脂质体中的形式存在的表皮生长因子，通过该形式使药物的药学稳定性和进入皮肤的渗透性增强。此外，在制备脂质体中所使用的酯化卵磷脂可提供有利于治疗皮肤疾病的其它保湿作用。通常地，皮肤疾病由烧伤、刀伤等创伤或癌症患者的放射治疗引起。因此，对创伤区域提供的保湿作用的酯化卵磷脂对于治疗皮肤疾病显示出更好作用。此外，酯化卵磷脂提供了软化皮肤和促进皮肤渗透的作用，由此增强了表皮生长因子和天然提取物进入皮肤的渗透性。
此外，由于本发明组合物含有通过在脂质体膜中包含酯化卵磷脂所制备的纳米脂质体，因此可解决在高温度(70℃或更高下)加热和分散活性成分、低稳定性、均一性等常规问题。
在本发明组合物中，以足够的量使用表皮生长因子以治疗皮肤疾病，并且用于治疗的有效量可随患者的病症、年龄、性别、易感性等发生变化。基于纳米脂质体的总重量，在本发明组合物中所述表皮生长因子的量可为1-50wt％。
在本发明组合物中，包含EGF的纳米脂质体还包含抗氧化剂。所述抗氧化剂可非限制性地包括辅酶Q10、视黄醇、视黄醛、视黄醇棕榈酸酯、视黄酸、抗坏血酸、抗坏血酸磷酸酯或其盐、或抗坏血酸棕榈酸酯。所述辅酶Q10起到了促进人体细胞能量产生的辅酶的作用，并且该辅酶Q10具有针对活性氧的有效抗氧化能力，因此它的吸入或在皮肤上施用对于有效预防细胞氧化，从而有效保持皮肤弹性和抗衰老是众所周知的。基于纳米脂质体的总重量，在本发明组合物中所述抗氧化剂的量可为0.1-10wt％。
具有抗炎活性的天然提取物包括来自天然产的提取物，已知该天然产物非限制性地含有抗炎成分。用于本发明组合物的具有抗炎活性的天然提取物包括一种或多种天然产物(例如山茶(Camellia japonica)、槲寄生(Viscum album L.var.coloratum)、榆白皮(Ulmi cortex)、百合(Lilliumbrownii F.E.)、半夏(Pimellia ternata Thunb Breit)、白芨(Bletillastriata Reichb.fil.)、芍药(Paeonia lactiflora Pall)、乳香(Boswellia carterii Birdw)、知母(Anemarrhena rhizome)、楤木皮(Aralia cortex)、生地黄(Rehmaniae radix)、山药(Dioscoreae Radix)、山茱萸(Corni Fructus)、茯苓(Hoelen)、牡丹皮(Moutan Cortex Radicis)、五味子(Schizandrae Fructus)、天冬(Asparagi Tuber)、麦冬(LiriopsisTuber)、贝母(Fritillariae Bulbus)、杏仁(Armeniacae Semen)、半夏(Pinelliae Tuber)、桔梗(Platicodi Radix)、黄芩(Scutellariae Radix)、黄连(Coptidis Rhizoma)等)的提取物。所述天然提取物可单独使用或与两种或多种提取物组合使用。优选地，所述天然提取物是来自山茶和/或槲寄生，并且更优选为如在韩国特许公开No.10-2005-0058635所公开的山茶提取物或如在韩国特许公开No.10-2006-0025423所公开的槲寄生提取物。
可以以不同量使用天然提取物，这取决于所使用的天然产物、提取方法等。通常，基于组合物的总重量，本发明的天然提取物的含量可以为0.01-10wt％。
用于预防或治疗皮肤疾病的本发明组合物可通过配制纳米脂质体和具有抗炎活性的天然提取物制备，该纳米脂质体如上所述制备以包含：含有酯化卵磷脂的脂质体膜，和包含在该脂质体膜内部空间的表皮生长因子。所述配制可通过在如上述所获得的纳米脂质体溶液中分散和/或溶解具有抗炎活性的天然提取物进行。所述分散和/或溶解优选地在室温下进行。
任选地，本发明组合物还含有稳定剂，例如氨基酸、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、硫氢化钠、甲醛次硫酸氢钠、硫脲、丙酮亚硫酸氢钠等；湿润剂例如神经酰胺、丙二醇、藻酸铵、环聚二甲基硅氧烷、二甲基硅酮、聚葡萄糖、透明质酸钠、乳酸钠、山梨糖醇、三乙酸甘油酯、三乙醇胺、木糖醇等；乳化剂，例如聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯等；或药学上可接受的添加剂，例如苯甲酸钠、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金(异)丙酯、尼泊金(异)丁酯、山梨酸、山梨酸钾、山梨酸钠、脱氢醋酸、脱氢醋酸钠、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯酚、甲酚、氯甲酚、苯甲醇等。本发明组合物还可配制为用于外部使用的药物，例如软膏剂、霜剂、洗剂等。
此外，本发明组合物还可配制为不同形式的化妆品，例如皮肤洗剂、营养洗剂、营养霜剂、按摩霜剂、营养精华、包装组、化妆基质、粉底、体油、发油、香波、漂洗剂等。
本发明将通过下述实施例进行具体说明。但是，应当理解的是下述实施例是用于说明本发明，而不能以任何方式对本发明的保护范围进行限制。
实施例
酯化卵磷脂的合成
<实施例1>
将31g氢化饱和烃卵磷脂加入到被加热至70℃的200g的四氢呋喃溶剂中并溶解。在完全溶解所述卵磷脂后，向该混合物中加入3g无水苹果酸并溶解。在完全溶解无水苹果酸后，向其中加入0.5g作为催化剂的三乙胺，并且该反应在回流状态下保持3小时以上。在完成所述反应之后，在45℃的真空下干燥所得的混合物以获得白色粉末形式的酯化卵磷脂。
<实施例2>
除了使用2.5g无水乙酸代替无水苹果酸外，通过如实施例1的同样方法合成酯化卵磷脂。
制备纳米脂质体溶液
<实施例3>
1)制备油相溶液
将15g酯化卵磷脂、15g氢化饱和烃卵磷脂、200g辛酸/癸酸甘油三酯(MCT)、10g二乙胺鲸蜡基磷酸酯和0.5g丁基羟基甲苯(BHT)加入到110g乙醇中，并且将该混合物加热到约40℃搅拌并溶解。然后，将所述溶解的混合物冷却到室温以获得油相溶液。
2)制备水相溶液
在室温搅拌下，将0.5g Na-EDTA、1g抗坏血酸磷酸酯钠(NAP)和2g EGF溶解在650g水中以获得水相溶液。
3)油相溶液和水相溶液的混合
将如上述所获得的水相溶液加入到所制备的油相溶液中，并且使用均质混合机将该混合物充分搅拌5分钟以上以获得均匀混合物。
4)制备纳米脂质体
纳米脂质体溶液通过使所获得的均匀混合物在高于1000psi的压力下通过微射流均质机一次或多次以使脂质体以纳米尺寸分散而制备。该通过过程的温度条件通过使用冷却水冷却到室温下。
<实施例3’>
除了使用2.4g EGF外，纳米脂质体溶液通过如实施例3同样的方法制备。
<实施例4>
除了使用30g酯化卵磷脂外，纳米脂质体溶液通过如实施例3同样的方法制备。
<实施例5>
除了使用10g月桂基甜菜碱(甜菜碱型两亲性表面活性剂)替代二乙胺鲸蜡基磷酸酯(阴离子表面活性剂)外，纳米脂质体溶液通过如实施例3同样的方法制备。
<实施例6>
除了使用50g月酯化卵磷脂以及不使用氢化饱和烃卵磷脂和二乙胺鲸蜡基磷酸酯外，纳米脂质体溶液通过如实施例3同样的方法制备。
<实施例7>
1)制备油相溶液
将15g酯化卵磷脂、15g氢化饱和烃卵磷脂、200g辛酸/癸酸甘油三酯(MCT)、10g二乙胺鲸蜡基磷酸酯、0.5g丁基羟基甲苯(BHT)和10g辅酶Q10加入到110g乙醇中，并且将该混合物加热到约40℃搅拌并溶解。然后，将所述溶解的混合物冷却至室温以获得油相溶液。
2)制备纳米脂质体
根据如实施例3同样的方法，制备水相溶液，将如此制得的水相溶液与如上述所制得的油相溶液混合，并且该混合物以纳米尺寸分散从而制备纳米脂质体溶液。
<实施例8>
除了使用30g酯化卵磷脂以及不使用氢化饱和烃卵磷脂外，纳米脂质体溶液通过如实施例7同样的方法制备。
<实施例9>
除了使用10g月桂基甜菜碱(甜菜碱型两亲性表面活性剂)替代二乙胺鲸蜡基磷酸酯外，纳米脂质体溶液通过如实施例7同样的方法制备。
<实施例10>
除了使用50g月酯化卵磷脂以及不使用氢化饱和烃卵磷脂和二乙胺鲸蜡基磷酸酯外，纳米脂质体溶液通过如实施例7同样的方法制备。
<实施例11>
1)15g酯化卵磷脂、15g氢化饱和烃卵磷脂、200g辛酸/癸酸甘油三酯(MCT)、0.5g丁基羟基甲苯(BHT)和10g辅酶Q10加入到110g乙醇中，并且将该混合物加热到约50℃搅拌并溶解。然后，将所述溶解的混合物冷却至室温。
2)将2.4g EGF溶解在10g蒸馏水中。将如此得到的溶液加入到如上述步骤1)中所制备的溶液中。
3)在上述步骤2)中所制备的混合溶液使用均质混合机充分搅拌10分钟以上。
4)在上述步骤3)中所制备的溶液在高于1000psi的压力下通过微射流均质机。
5)将在上述步骤4)中所制备的溶液加入到使用均质混合机搅拌的650g的水中，该水含有0.5g Na-EDTA和1g抗坏血酸磷酸酯钠。
6)加入后，该混合物充分搅拌10分钟以上。
7)在上述步骤6)中所制备的溶液通过微射流均质机一次或多次以获得双层纳米脂质体溶液。
<实施例12>
除了使用35g酯化卵磷脂以及不使用氢化饱和烃卵磷脂外，纳米脂质体溶液通过如实施例11同样的方法制备。
<实施例13>
除了使用50g酯化卵磷脂以及不使用氢化饱和烃卵磷脂外，纳米脂质体溶液通过如实施例11同样的方法制备。
<实施例14>
1)将1g二乙胺鲸蜡基磷酸酯、200g辛酸/癸酸甘油三酯(MCT)、10g酯化卵磷脂、0.5g丁基羟基甲苯和10g辅酶Q10加入到110g乙醇中，并且将该混合物剧烈搅拌并在室温下溶解以获得油相溶液。
2)将2.3g EGF溶解在10g蒸馏水中。将如此得到的溶液加入到如上述步骤1)中所制备的溶液中。
3)在上述步骤2)中所制备的混合溶液使用均质混合机充分搅拌10分钟以上。
4)在上述步骤3)中所制备的溶液在高于1000psi的压力下通过微射流均质机。
5)将在上述步骤4)中所制备的溶液加入到使用均质混合机搅拌的650g的水中，该水含有0.5g Na-EDTA和1g抗坏血酸磷酸酯钠。
6)加入后，该混合物充分搅拌10分钟以上。
7)在上述步骤6)中所制备的溶液通过微射流均质机一次或多次以获得双层纳米脂质体溶液。
<实施例15>
除了使用1g抗坏血酸磷酸酯钠替代二乙胺鲸蜡基磷酸酯外，纳米脂质体溶液通过如实施例14同样的方法制备。
<实施例16>
除了使用1g三乙胺椰子酰基谷氨酸钠(MIAMI CT130，阴离子表面活性剂)替代二乙胺鲸蜡基磷酸酯外，纳米脂质体溶液通过如实施例14同样的方法制备。
<实施例17>
除了使用1g月桂胺丙基甜菜碱(甜菜碱型两亲性表面活性剂)替代二乙胺鲸蜡基磷酸酯外，纳米脂质体溶液通过如实施例14同样的方法制备。
<比较实施例>
除了使用30g氢化饱和烃卵磷脂而不使用酯化卵磷脂外，纳米脂质体溶液通过如实施例7同样的方法制备。
制备用于外部使用的制剂
<实施例18>
将在实施例3中所制备的5ml纳米脂质体溶液加入到95g营养洗剂的基质中，该基质含有根据韩国特许公开No.10-2005-0058635的实施例2制备的山茶提取物。然后，将所述混合物在室温搅拌20分钟以获得用于预防或治疗皮肤疾病的组合物。
<实施例19>
将在实施例3中所制备的5ml纳米脂质体溶液加入到95g营养洗剂的基质中，该基质含有根据韩国特许公开No.10-2006-0025423的制剂实施例1制备的槲寄生提取物。然后，将所述混合物在室温搅拌20分钟以获得用于预防或治疗皮肤疾病的组合物。
测定实施例1
<稳定性测定>
对于上述实施例8(仅使用酯化卵磷脂)、实施例7(使用酯化卵磷脂和氢化饱和烃卵磷脂)和比较实施例(仅使用氢化饱和烃卵磷脂)中所制备的纳米脂质体溶液，比较由于长期在室温储存所引起的平均粒度和胶凝化。在下列表1中显示了结果。此外，进行了观察以确定是否出现奥斯特瓦尔德熟化(即一种由于溶液中粒子间粒度的差异通过在较大粒子上沉积物质而使粒子生长的机制)[Ostwald，Z Phys.Chem.(34)，1900，495-5031]。
如果脂质体溶液长期储存，一般会由于聚沉引起胶凝化出现。因此，形成胶凝化的时间可通过下述时间确定，即尽管对胶凝化溶液进行再搅拌但其没有再分散或再溶解的时间。
表1.稳定性测定的结果