稻瘟病抗性基因 Pik 及其应用 【技术领域】
本发明属于基因工程技术领域， 具体涉及一种水稻稻瘟病抗性基因 Pik 的克隆及 其应用。背景技术
植物在生长的过程中， 常常受到多种病原物的侵害， 而植物则采取多种防御策略 以保护自身， 避免受其侵袭。植物中一个最重要的防御机理就是能够识别专性致病微生物 的存在并启动自身的防御应答系统。植物对病原菌的识别由抗病基因所介导。因此， 对抗 病基因产物结构进行分析与研究， 是了解植物抗病机制的基础， 对于其病害的预防和控制 也具有重要的指导意义。
迄今为止， 已经从植物中分离了 80 多个抗病基因。对这些抗病基因的结构和 产物的研究发现， 虽然寄主植物不同， 所对应的病原物也有真菌、 细菌、 病毒和线虫等差 异， 但抗病基因的结构和产物却有许多共同的结构特征， 如 C- 端存在富亮氨酸重复序列 (leucine-rich repeat， LRR)， N- 端存在核苷酸结合位点 (nucleotide binding site， NBS)， 亮氨酸拉链 (leucine zipper， LZ)， 卷曲螺旋结构域 (coiled-coil， CC)， 跨膜结构域 (transmembrane domain， TM)， 蛋白激酶 (proteinkinase， PK)， 以及果蝇 Toll 蛋白及哺乳 动物白介素 -1 受体 (Toll and interleukin-1 receptor， TIR) 等。根据它们所编码蛋白 的结构特征， 可将抗病基因分为 7 类 (Hammond-Kosack&Jones， 1997 ； Dangl & Jones 2001 ； Iyer & McCouch 2004)。
第一类， 毒素还原酶类抗病基因。如玉米抗病基因 Hm1， 它是第 1 个被克隆的植物 抗病基因， 它控制对真菌 Cochliobolus carbonum 小种 1 的抗性。 Hm1 编码的解毒酶能钝化 病原真菌所产生的 HC 毒素， 而 HC 毒素是真菌 C.carbonum 小种 1 产生的致病因子， 它决定该 病菌只能感染玉米的某些基因型 (Johal 等， 1992)。 第二类， NBS-LRR 类抗病基因。 它们编码 的蛋白近 N 端为 NBS， 而近 C 端则由 LRR 组成。 如 RPS2(Bent et al.， 1994)、 RPM1(Grant et al.， 1995)、 I2(Simonet al.， 1998) ； RPP5(Parker et al.， 1997)、 N(Dodd et al.， 2001)、 L6(Lawrence et al.， 1995)、 Mla1(Zhou et al.， 2001)、 Mla6(Halterman et al.， 2001) ； 水稻的抗病基因如 Xa1(Yoshimuraet al.， 1998)、 Pib(Wang et al.， 1999)、 Pita(Bryan et al.， 2000) 等。第三类， PK 类抗病基因。如番茄 Pto 基因， 其产物是一种位于细胞内的丝氨 酸 - 苏氨酸蛋白激酶， 没有 LRR 结构域 (Martinet al.， 1993)。第四类， LRR-TM 类抗病基 因。番茄抗叶霉病不同生理小种的基因 Cf-2(Dixon etal.， 1996)、 Cf-4(Thomas et al.， 1997)、 Cf-5(Dixon et al.， 1998)、 Cf-9(Jones et al.， 1994)， 以及甜菜抗胞囊线虫的基 pro-1 1997) 等。第五类， LRR-TM-PK 类抗病基因， 以水稻抗白叶枯病基因 因 Hs1 (Cai et al.， Xa21(Song et al.， 1995) 为代表。第六类， 以拟南芥的 RPW8 为代表， 其编码的蛋白仅含有 完整的 CC 和 NBS 结构域 (Xiao et al.， 2001)。第七类， 以水稻的 xa5 基因为代表， 其编码 的蛋白为一个转录因子 (TFIIAγ)(Iyer&McCouch， 2004)。
编码 NBS-LRR 类抗病蛋白的抗病基因是植物抗病基因中最大的一类抗病基因， 根据 NBS-LRR 类抗病蛋白 N 末端的结构特点， 又可将该类基因分为两大类 TIR-NBS-LRR 和 CC-NBS-LRR(Meyers et al.， 2002 ； Pan et al.， 2000 ； Cannon et al.， 2002 ； Richly et al.， 2002)。TIR-NBS-LRR 类抗病基因主要发现在双子叶植物， 至今还没有在单子叶植物 基因组中发现 (Baiet al.， 2002 ； Meyers et al.， 2002)。目前在单子叶植物中鉴定到的 抗病基因主要编码 CC-NBS-LRR 类抗病蛋白， 双子叶植物中也存在大量的 CC-NBS-LRR 类抗 病基因， 相对而言， 单子叶植物中的 CC-NBS-LRR 类抗病基因比双子叶植物中的更丰富多样 (Cannon et al.， 2002)。
研 究 表 明， NBS、 CC、 TIR 结 构 域 可 能 参 与 信 号 传 导 (Hammond-Kosack&Jones 1997)， 尽管这类 R 蛋白不具有内在的激酶活性， 但 NBS 可以激活激酶或 G 蛋白， NBS 具有结 合 ATP 或 GTP 以及水解酶活性 (Traut et al.， 1994)。TIR 结构可能参与植物抗病防卫反 应下游的信号传导 (Jones et al.， 1994)。 最近的证据表明， 亚麻的 L 族多样性选择也发生 在 TIR 区域， 这个区域与相应的 LRR 区域共进化形成特异性 (Luck et al.， 2000)。LRR 结 构域的功能主要涉及到蛋白质 - 蛋白质和与配体的相互作用 (Jones&Jones， 1996 ； Kajava et al.， 1998)， 据推测是抗病基因产物直接和病原菌无毒基因编码的产物或间接产物相互 作用的部位 (Bent， 1996 ； Baker et al.， 1997)。Jia et al.(2000) 通过酵母双杂交证明 AVR-Pita 编码的蛋白加工为一个 176 氨基酸的活性蛋白 AVR-Pita176 小种特异性的激发子， 传递到植物细胞质特异地与 Pita 受体的 LRD 区域结合， 从而激活细胞内 Pita 介导的防卫 反应。当 Pita 中的 Ala 变为 Ser 后 Av-rPita176 不能与 LRD 结合， 因而表现感病。这一结 果直接证明了 LRR 结构域可能就是病原菌识别的区域 ； Pita 与 AvrPita 的互作第一次从分 子水平验证了水稻与稻瘟病菌的 “基因对基因” 关系。
水稻是世界上最重要的粮食作物之一， 约有一半以上的人口以稻米为主食。由病 原真菌 Magnapothe oryzae( 无性态 ： Pyricularia oryzae) 引起的稻瘟病是对水稻生产危 害最严重的病害之一， 每年都造成严重的粮食损失。从环境保护与农业的可持续发展的观 点来看， 抗病品种的育成与利用是防治稻瘟病最安全有效的方法。 但是， 由于稻瘟病菌群体 的多样性及易变性， 加之人们缺乏对抗性基因的有效利用， 以及对抗性机理缺乏充分的了 解， 以致抗病品种的感病化问题不但没有得到解决， 反而因有效抗源基因的缺乏和抗病品 种的短命化而成为育种学家最为棘手的问题。 因此， 发掘、 鉴定和克隆抗病基因并合理地应 用于抗病育种计划中， 已成为农业科研中优先解决的重要问题。
随着分子生物学的快速发展， 迄今， 至少有 80 多个水稻稻瘟病主效抗性基因已经 被报道， 其中 60 个已经被分子定位。目前， 除了水稻的第 3 染色体上还没有被鉴定到稻瘟 病主效抗性基因之外， 其余的 11 条染色体上均被鉴定到有主效抗性基因位点， 并且有的 染色体上含有多个稻瘟病抗性位点， 而且有些基因位点的抗性基因是成簇存在的。目前， 在稻瘟病抗性基因的克隆研究方面， 正式报道的已有 13 个抗性基因， Pib(Wang et al.， 1999)， Pita(Bryan et al.， 2000)， Pi9(Qu et al.， 2006)， Pid2(Chen et al.， 2006)， Piz-t 和 Pi2(Zhou et al.， 2006b)， Pi36(Liu et al.， 2007a)， Pi37(Lin et al.， 2007)， Pik-m(Ashikawa et al.， 2008)， Pit(Hayashi et al.， 2009)， Pi5(Leeet al.， 2009)， Pid3(Shang et al.， 2009) 和 pi21(Fukuoka et al.， 2009)。
克隆抗病基因是对水稻抗性机理深入研究的前提， 揭示水稻抗稻瘟病的分子机理 可以更好地控制和降低稻瘟病菌对水稻的危害。 同时， 对克隆的抗病基因进行修饰和改造，可以人为地控制和增加植物的抗病性， 拓宽植物的抗谱。这些方面是采用常规植物育种和 改良技术所不能达到的。 发明内容
本发明的目的是提供一种水稻稻瘟病抗性基因和包含调控这个基因的启动子的 DNA 片段。本发明的另一个目的是提供上述稻瘟病抗性基因所编码的蛋白质。本发明的另 一个目的是提供上述含有上述抗性基因的载体。 本发明的另一个目的是提供上述载体的宿 主细胞。本发明的另一个目的是提供上述基因在制备转基因植物中的应用。本发明的进一 步目的是提供上述抗性基因产生的分子标记及其在选育对稻瘟病具有抗病性的水稻中的 应用。
本发明从水稻品种 Kusabue 中分离得到 Pik 基因， 包括 2 个编码 NBS-LRR 类蛋 白的基因 Pik-1 和 Pik-2， 其核苷酸序列如 SEQ ID NO.1 或 SEQ ID NO.2 所示， 它们分 别编码 SEQ ID NO.3 以及 SEQ ID NO.4 所示的氨基酸序列， 结构如图 6 和图 7 所示。它 们的蛋白都包含 2 个主要的结构域 ： NBS 和 LRR 区域， 其中 Pik-1NBS 结构域含有保守的 kinase 1a ： GLPGGGKTTVAR， kinase 2 ： NKKYLIVIDDIW， kinase 3a ： DLGGRIIMTTRLNSI， GLPL ： EDNSCYDIVNMCYGMPLALIW ； Pik-2NBS 结 构 域 含 有 保 守 的 kinase 1a ： VLSIVGFGGVGKTTIA， kinase 2 ： LEQLLAEKSYILLIDDIW ，kinase 3a ： EQVPEEIWKICGGLPLAIVT ，GLPL ： EQVPEEIWKICGGLPLAIV， RNBS-D ： CLLYLSIFPKGWK， MHDV ： KTFQVHDMVLEYI。 而 Pik-1 蛋 白 的 C- 末端为 16 个不完整的 LRR 重复， 其亮氨酸含量为 14.0％ ( 附图 6)。Pik-2 蛋白的 C- 末 端为 13 个不完整的 LRR 重复， 其亮氨酸含量为 17.0％ ( 附图 7)。
应当理解， 在不影响蛋白活性的前提下 ( 不在蛋白的活性中心 )， 本领域技术人员 可对 SEQ ID NO.3 或 SEQ ID NO.4 所示的氨基酸序列进行各种取代、 添加和 / 或缺失一个 或几个氨基酸获得具有同等功能的氨基酸序列。 此外， 考虑到密码子的简并性， 例如可在其 编码区， 在不改变氨基酸序列的条件下， 或在其非编码区在不影响蛋白表达的条件下， 对编 码上述蛋白的基因序列进行修改。本发明还包括基于所述基因的正义序列或反义序列， 包 括含有所述核苷酸序列或其片段的克隆载体或表达载体、 含有所述载体的宿主细胞、 含有 所述核苷酸序列或其片段的转化的植物细胞和转基因植物。
本发明同样包括将 Pik 抗性基因的主要结构部分有效地连接上合适的调节序列 所形成的嵌合基因， 以及在基因组中包含这种基因的植物和这种植物的种子。这种基因可 以是天然的或是嵌合的。 例如， 将包含该基因的片段和一个组成型表达的启动子连接， 该启 动子可以在任何条件下和细胞发育的任何时期表达。 这种组成型表达的启动子包括花椰菜 花叶病毒的 35S 启动子等。另一方面， 也可以将该基因和一个组织特异性表达的启动子或 发育时期特异性表达的启动子或精确环境诱导的启动子连接， 这些启动子称之为诱导型启 动子。这样， 环境的改变， 发育时期的不同都可以改变该基因的表达。同样地， 也可以将该 基因的表达限定在某一个组织内， 使由该基因诱导的抗病反应得到人为的控制。其中环境 条件包含病原菌的攻击、 厌氧条件和光等， 组织和发育时期包括叶、 果实、 种子和花等。
本发明还进一步克隆得到所述基因的启动子， 包含调控该基因的启动子的 DNA 片 段分别如 SEQ ID NO.5 和 SEQ ID NO.6 所示。
根据本发明提供的 Pik 基因序列信息 (SEQ ID No.1 和 SEQ ID No.2)， 本领域技术人员可以通过以下方法容易地获得与 Pik 等同的基因 ： (1) 通过数据库检索获得 ； (2) 以 Pik 基因片段为探针筛选水稻或其它植物的基因组文库或 cDNA 文库获得 ； (3) 根据 Pik 基因序列信息设计寡核苷酸引物， 用 PCR 扩增的方法从水稻或其它植物的基因组、 mRNA 和 cDNA 中获取 ； (4) 在 Pik 基因序列的基础上用基因工程方法改造获得 ； (5) 用化学合成的方 法获得该基因。
本发明提供的稻瘟病抗性基因 Pik 具有重要的应用价值， 其赋予植物对稻瘟病菌 (Magnaporthe oryzae) 所引起的病害产生特异性的抗病反应 ( 图 2)。 其适用于对所有对该 病原菌敏感的植物， 这些植物包括单子叶植物和双子叶植物。应用之一是将所述的 Pik 基 因序列连接到任何一种植物转化载体， 用任何一种转化方法将 Pik 抗病基因导入水稻或其 他植物细胞， 可获得表达所述基因的转基因抗病品种， 从而应用于生产。 本发明所述的基因 构建到植物转化载体中， 可以对所述基因或其调控序列适当修饰， 也可以在其转录起始密 码子前用其它启动子取代所述基因原有的启动子， 从而拓宽和增强植物对病原菌的抗性。
本发明提供的抗性基因的另一个应用是根据所述基因序列信息产生特异性的分 子标记， 包括但不限于 SNP( 单核苷酸多态 )、 SSR( 简单序列重复多态 )、 RFLP( 限制性内切 酶长度多态 )、 CAPS( 切割扩增片段多态 )。 用此标记可鉴定水稻或其它植物的抗性基因型， 用于分子标记辅助选择育种， 从而提高育种的选择效率。 本发明具有明显的优点和效果。将克隆的抗病基因转入感病的植物， 有助于产生 新的抗病植物。特别是可以用转化技术在植物中累加多个抗病基因， 而不会产生传统育种 技术中伴随出现的基因组中不良基因的连锁问题， 并且可以缩短育种时间。抗病基因的克 隆是克服传统育种中不能在植物种间转移抗病基因的问题的前提。
本发明能够进一步提供或应用利用上述 DNA 片段获得的抗病的转基因植株和相 应的种子， 以及用本发明的基因或基于该基因的重组体转化的植株或由这类植株获得的种 子。可以用有性杂交的方式将本发明的基因转入其他的植株中。
附图说明 图 1. 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 的图位克隆技术路线图。
图 2.4 个 Pik 簇等位基因对 10 个中国稻瘟病菌群体抗谱的比较。
图中纵坐标为抗性频率， 横坐标为 10 个稻瘟病菌群体 (GD， 广东 ； FJ， 福建 ； HN， 湖 南； YN， 云南 ； GZ， 贵州 ； SC， 四川 ； JS， 江苏 ； LN， 辽宁 ； JL， 吉林 ； HLJ， 黑龙江 )。4 个 Pik 簇等 位基因 (Shin 2， Pik-s ； K60， Pik-p ； Kusabue， Pik ； Tsuyuake， Pik-m)。由此可以看出， Pik 对广东、 福建、 湖南、 贵州、 四川、 江苏的稻瘟病菌群体表现高度的抗性。
图 3A.Pik 基因位点的连锁标记图。
图中横线上面的数字为标记之间的物理距离 [ 用碱基 (bp) 表示 ] ； 括号内的数字 为该标记检测出的重组体 / 配子体。
图 3B.Pik 基因位点在日本晴类型基因组上存在的具有 NBS-LRR 保守结构的 6 个 抗性候选基因。
图 3C.Pik 基因位点在 Kusabue/K60/Tsuyuake 类型基因组上存在的具有 NBS-LRR 保守结构的 2 个抗性候选基因。
由此可以看出， 在 Pik 基因位点存在两种类型的基因组， 彼此之间存在很大的缺
失 / 插入 ； Pik 基因只有 2 个候选基因 (Pik1-KU 和 Pik2-KU)。
图 4( 左桶 ). 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 之组成基因 Pik-1(K3) 之遗传互补 T0 植 株的抗性鉴定实物图。
由于受体品种 Q1063 存在与 Pik-1(K3) 匹配 ( 序列完全相同 ) 的 Pik-2(K4)， 图中 的转化植株中出现抗病个体 ( 实线箭头 )， 说明单一的 Pik-1 导入与之匹配的背景中也能产 生抗性。
图 4( 中桶 ). 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 之组成基因 Pik-2(K4) 之遗传互补 T0 植 株的抗性鉴定实物图。
由于受体品种 Q1063 不存在与 Pik-2(K4) 匹配的 Pik-1(K3)， 图中所有转化植株都 表现感病 ( 虚线箭头 )， 说明单一的 Pik-2 不具备抗性功能。
图 4( 右桶 ). 水稻稻瘟病抗性基因 Pik( 由 Pik-1 和 Pik-2 组成 ) 之遗传互补 T0 植株的抗性鉴定实物图。
图中实线箭头所指的是抗病植株， 虚线箭头所指的是感病植株， 说明抗性基因 Pik 由 Pik-1 和 Pik-2 组成才能表现功能。
图 5. 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 遗传互补的部分 T0 转化体的选择标记 HPT 基因的 PCR 检测图。 图中由左至右， 泳道 1 ： 分子量标记 DL2000 ； 泳道 2 ： 空载体 (Vector)， 阳性对照 ； 泳道 3 ： H2O， 阴性对照 ； 泳道 4 ： 受体品种龙粳 24， 阴性对照 ； 泳道 5-14 ： T0 转化体。结果表 明， 所有抗病的转化体都检测到了选择性标记的 PCR 扩增产物， 而大部分的感病转化体没 有检测到选择性标记的 PCR 扩增产物， 说明抗病的转化体是由于转化构建体已经整合到了 高感的受体品种中获得了表达而恢复了抗性。其中出现的阳性中感个体 ( 泳道 12) 可能是 由于外源基因的整合等问题， 在受体品种中并没有得到充分的表达。 R： 高抗 ； MR ： 中抗 ； MS ： 中感 ； S： 感病。
图 6A. 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 之组成基因 Pik-1 的基因结构图。
图中浅色方框表示 5’ 和 3’ -UTR ； 深色方框表示外显子 ； 线条表示内含子 ； 该基因 编码区的启动子 (ATG) 和终止子 (TAG) 以及各个区域的大小 (bp) 亦标示于其中。
图 6B. 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 之组成基因 Pik-1 编码的氨基酸多肽序列结构 图。
图中 CC 结构域中的斜体字表示形成 CC motif 的氨基酸， NBS 区域的黑体字表示 NBS 中保守的氨基酸序列。下部分独立列出的氨基酸残基为 C- 末端 LRR 区域， 黑体字表示 形成 LRR 区域的 xLDL 保守基序。LRR 区域后面还带有一段 CNL(C 端非 LRR 区域 ) 氨基酸序 列。 星号标示的氨基酸序列为 Pik 特异的氨基酸替换 [substitution， 与 Pik 簇的其他其他 等位基因 (Pik-h， Pik-p， Pik-m) 相比 ]。
图 7A. 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 之另一组成基因 Pik-2 的基因结构图。
图中浅色方框表示 5’ 和 3’ -UTR ； 深色方框表示外显子 ； 线条表示内含子 ； 该基因 编码区的启动子 (ATG) 和终止子 (TAG) 以及各个区域的大小 (bp) 亦标示于其中。
图 7B. 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 之另一组成基因 Pik-2 编码的氨基酸多肽序列结 构图。
图中 CC 结构域中的斜体字表示形成 CC 结构的氨基酸， NBS 区域带下划线的黑体
字表示 NBS 中保守的氨基酸序列。下部分独立列出的氨基酸残基为 C- 末端 LRR 区域， 黑体 字表示形成 LRR 区域的 xLDL 保守基序。
图 8. 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 表达特性的定量 RT-PCR 检测图。
左图为组成基因 Pik-1 在不同的接种时间点 (0hr， 12hr， 24hr， 72hr) 的相对表 达水平， 由此可以看出， 该基因呈逐步上调的表达类型。中图为另一个组成基因 Pik-2 在 不同的接种时间点的相对表达水平， 由此可以看出， 该基因也呈逐步上调的表达类型， 但是 前者上调的幅度比后者的大。右图为病原菌诱导表达基因 PBZ1(pathogenesis-related probenazole-inducible gene) 作为对照的相对表达水平， 由此可以看出， 该基因在接种对 照 (H2O) 和接种病原菌之间表现明显不同的诱导型表达。2 个组成基因都表现为组成型表 达， 因为接种之前和之后都能检测到 2 个基因的表达。
图 9. 利用水稻稻瘟病抗性基因 Pik 特异性分子标记的基因型鉴定图。
由此可以看出， 利用该分子标记可以把抗性品种 Kusakue(Ku) 的基因型 (Pik/ Pik) ； 感病品种 IR36(IR) 的基因型 (pik/pik) ； 含有与 Pik 等位的抗性品种 Tsuyuake(TS) 的基因型 (Pikm/Pikm) ； 抗性品种 K60 的基因型 (Pikp/Pikp) ； 抗性品种 K3 的基因型 (Pikh/ Pikh) ； 以及抗性品种 Kusabue 与感病品种 IR36 的杂交 F2 之感病个体 S1-S4 的基因型 (pik/ pik) ； R1-R2 的杂合基因型 (Pik/pik) 鉴别出来。图中， M： 分子量标记 DL2000。 具体实施方式 以下实施例进一步说明本发明的内容， 但不应理解为对本发明的限制。在不背离 本发明精神和实质的情况下， 对本发明方法、 步骤或条件所作的修改或替换， 均属于本发明 的范围。
若未特别指明， 实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
在本发明的实施例部分， 我们阐述了 Pik 基因的分离过程 ( 附图 1) 和该基因的特 点， 分离的 Pik 基因能够与载体连接， 转入植物体中， 使该植物体带有抗性。
实施例 1 ： 抗性基因 Pik 的抗性特征
首先， 为了比较和明确在 Pik 位点上 4 个等位基因 (Pik， Pik-p， Pik-s， Pik-m) 的 抗谱， 利用从广东 (GD， 60 个菌株 )， 福建 (FJ， 40 个 )， 湖南 (HN， 40 个 )， 贵州 (GZ， 60 个 )， 云 南 (YN， 43 个 )， 四川 (SC， 66 个 )， 江苏 (JS， 72 个 )， 辽宁 (LN， 108 个 )， 吉林 (JL， 60 个 ) 和黑 龙江 (HLJ， 63 个 )， 收集的总计 612 个菌株对上述 4 个等位基因所持品种 ( 分别是 Kusabue， K60， Shin 2 和 Tsuyuake) 进行了抗谱比较分析。结果表明， Pik 对广东、 福建、 湖南、 贵州、 四川、 江苏的稻瘟病菌群体表现高度的抗性。由此说明该基因可在上述地区使用。生物材 料水稻品种 Kusabue， Shin 2， K60， Tsuyuake 已在文献 (Wang et al.Characterization of riceblast resistance genes in the Pik cluster and fine mapping of the Pik-p locus.Phytopathology， 2009， 99 ： 900-905) 中公开。
实施例 2 ： 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 的定位及电子物理作图
本发明对由粳稻抗病品种 Kusabue 与 IR36 等籼稻感病品种的杂交组合由来的 F2 群体， 接种 CHL346 等对双亲品种表现分明的非亲和性 / 亲和性反应的菌株 ( 稻瘟病菌单一 孢子分离的菌株 )。 结果表明， 这些 F2 群体中抗病植株与感病植株的分离比都符合 3 ∶ 1。 由 此推断， Kusabue 所表现的对这些接种菌株的抗性都是由一对显性基因控制的。 对这些 F2 群
体对应的抗性基因进行连锁分析， 结果表明它们受同一显性基因控制， 因此， 构建了由 499 个体组成的一个作图群体 ( 相当于 998 个配子体 )。 生物材料水稻品种 IR36 已在文献 (Lin et al.A high-resolution map ofthe rice blast resistance gene Pi15constructed by sequence-ready markers.Plant Breeding， 2007， 126 ： 287-290) 中公开。生物材料水稻品 种 CHL346 已在文献 (Ma et al.Identification and fine mappingof AvrPi15， a novel avirulence gene of Magnaporthe grisea.Theor Appl Genet， 2006， 113 ： 875-883) 中公 开。
前期的遗传分析表明 Pik 基因与 Pik-m 基因是等位的， 而申请人所在的研究室已 经对 Pik-m 基因进行了精细定位 (Li et al.2007， Molecular Breeding， 20 ： 179-188)。因 此， 申请人利用 Li et al(2007) 开发的分子标记进行了连锁分析。结果表明， 在标记 K34 和 RM5766 分别检测出了 7 个和 11 个重组体 ( 附图 3)。为了缩小 Pik 位点的染色体区域 并找到与之共分离的标记 ( 没有重组体发生的标记 )， 进一步在 K34--RM5766 区域内， 从 Li et al(2007) 开发的标记中获得了 2 个多态性标记 (K33， K28)， 并对上述 18 个不同的重组 体进行了连锁分析。结果表明， 在标记 K33 和 K28 分别检测出了 0 个和 7 个重组体。因此， Pik 位点最终被界定于 K34--K28 之间的区域内， 其中标记 K33 与之完全共分离。
为了构建 Pik 位点的电子物理图， 把与之连锁的标记通过生物信息学方法着陆于 水稻品种日本晴 (Nipponbare) 的参考序列上， 并由此构建了该基因位点的重叠群。由参考 序列可以推测 Pik 位点被界定于侧翼标记 K34 和 K28 之间约 127kb 的范围内。
实施例 3 ： 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 候选基因的注释及序列分析
为了确定 Pik 的候选基因， 申请人利用日本晴的参考序列， 通过 3 种基因预测软 件 RiceGAAS(http://ricegaas.dna.affrc.go.jp)、 Gramene(http://143.48.220.116/ resources/) 和 Softberry 的 FGENESH(http://www.softberry.com) 对 目 的 基 因 区 域 进 行了基因预测及注释分析， 初步确定了 Pik 的候选抗性基因为 6 个核苷酸结合位点和富 亮 氨 酸 重 复 (nucleotide binding site-leucine-rich repeat， NBS-LRR) 的 候 选 基 因 (Pik1-NP， Pik2-NP， Pik3-NP， Pik4-NP， Pik5-NP， 和 Pik6-NP)。
对 6 个候选基因进行基于基因特异性标记的存在 / 缺失 (presence/absence， P/ A) 分析， 结果表明， 在日本晴参考序列存在的 4 个候选基因 (Pik1-NP， Pik2-NP， Pik3-NP， Pik4-NP) 在 Kusabue 中是不存在的。因此， Pik 的候选抗性基因实际上只有 2 个 Pik-1 和 Pik-2( 图 3)。下一步通过以下的基因功能互补实验确认其功能。
实施例 4 ： 水稻稻瘟病抗性基因 Pik 的遗传互补实验及转化子的抗性鉴定
首先， 利用高保真酶 phusion 结合长片段 PCR(long-range PCR， LR-PCR) 技术， 以 Kusabue 的总 DNA 为模板， 根据或参考 Liu et al.(2007， Genetics， 176 ： 2541-2549) 和 Lin et al.(2007， Genetics， 177 ： 1871-1880) 描述的实验方法和程序， 分别扩增、 克隆了 Pik-1( 正向引物 ： TTTTGGCGCGCCGCCAGTGTCCACCAACCACAGTAATAAA ； 反向引物 ： TTTTGGCGCGC CGAACAGCCTGAGGAAGCAGAACATCGTC) 和 Pik-2( 正向引物 ： TTTTGGCGCGCCGCAAGATCAGTACCAT CACGAGTAATAGCA ； 反向引物 ： TTTTGGCGCGCCAGGGACAGAATGACAGTGTAAGTGAGTTTG)， 并进行了 遗传互补实验。结果表明， 候选基因 Pik-1 在感病受体品种 Q1063(Lin et al.， The blast resistance gene Pi37encodesan NBS-LRR protein and is a member of a resistance gene cluster on rice chromosome 1.Genetics， 2007， 177 ： 1871-1880) 中实现了功能互补 ( 附图 4 左桶 ) ； 而候选基因 Pik-2 在感病受体品种 Q1063 中则没有实现功能互补 ( 表 1； 附图 4 中桶 )。对感病受体品种 Q1063 进行序列比较分析发现， 该品种中存在与候选基 因 Pik-1 匹配的 Pik-2， 而不存在与候选基因 Pik-2 匹配的 Pik-1。
表 1.Pik 2 个组成基因的遗传互补实验分析结果
自各个构建体的 T0 转化植株接种对 Pik 无毒性的菌株 CHL381 或 CHL346。R， 抗 病； MR， 中抗 ； MS， 中感 ； S， 感病。 b
功能互补成功率 (％ ) 为 R+MR/R+MR+MS+S*100。
进一步将上述 2 个候选基因拼接为一个整体的基因在上述感病受体品种 Q1063 以 及完全没有这 2 个候选基因的感病受体品种龙粳 24 中进行遗传互补实验。结果表明， 该拼 接基因在上述 2 个感病受体品种中都实现了功能互补 ( 表 1 ； 附图 4 右桶 )。利用转化载体 中的潮霉素基因 (HPT) 标记对转化体进行了 PCR 检测。结果表明， 目的基因片段已经导入 所有抗病转化体中， 而没有导入大部分的感病转化体中 ( 部分结果见附图 5)。
上述遗传互补的实验结果表明， 抗性基因 Pik 由 2 个基因 Pik-1 和 Pik-2 组成才 能表现其功能。
实施例 5 ： Pik 基因的结构
采用移步法对 Pik 的 DNA 序列进行了测定。利用 RACE 技术， 获得了 Pik 的全长 cDNA 序列并对其进行了测序。Pik 基因 DNA 长度为 16.9kb( 包含 Pik-1 和 Pik-2)， 其中， Pik-1 的全长 cDNA 序列为 3695bp， 含有一个 3432bp 的开放读码框， 5’ 和 3’ 非翻译区分别 为 73bp 和 190bp。通过比较基因组 DNA 和 cDNA 序列， 发现该基因的开放读码框含有 2 个 内含子和 3 个外显子 ( 附图 6A)。另一个组成基因 Pik-2 的全长 cDNA 为 3511bp， 含有一个 3066bp 的开放读码框， 5’ 和 3’ 非翻译区分别为 162bp 和 283bp。通过比较基因组 DNA 和 cDNA 序列， 发现该基因的开放读码框含有 1 个内含子和 2 个外显子 ( 附图 7A)。
实施例 6 ： Pik 抗性蛋白的结构
Pik 基因包含的 2 个组成基因编码的蛋白序列如序列表中 Pik-1SEQ ID No.3 和 Pik-2SEQID No.4 所示。Pik-1 基因编码 1 个由 1143 个氨基酸残基组成的蛋白多肽， 分子 量为 126.80KD， 等电点为 6.16。利用 COIL 工具分析表明该蛋白多肽有 CC(coiled-coil) 结构域。Pik-1 蛋白属于 NBS-LRR 蛋白， NBS 结构域中保守的 kinase 1a(GLPGGGKTTVAR) 位 于 该 多 肽 的 第 291 个 氨 基 酸 残 基 ； kinase 2(NKKYLIVIDDIW) 位 于 该 多 肽 的 第 376 个氨基酸残基 ； kinase 3a(DLGGRIIMTTRLNSI) 位 于 该 多 肽 的 第 403 个 氨 基 酸 残 基， GLPL(EDNSCYDIVNMCYGMPLALI) 位于该蛋白多肽 462 个氨基酸残基。而该蛋白的 C- 端的 611-961 个氨基酸残基为 16 个不完整 LRR 重复， 其亮氨酸含量为 14.0％， 其 C 末端还有个非 LRR 结构 (CNL) 的氨基酸序列 ( 附图 6B)。 图中星号标示的氨基酸序列为 Pik 基因特异的氨
10a102051368 A CN 102051374说明书9/10 页基酸替换 (substitution)， 由此可以鉴别 Pik 基因与其他等位基因 (Pik-s， Pik-h， Pik-m， Pik-p) 的不同。
Pik-2 基因编码 1 个由 1021 个氨基酸残基组成的蛋白多肽， 分子量为 114.57KD， 等电点为 8.39。利用 COIL 工具分析表明该蛋白多肽没有 CC 结构域， 但是利用更为强 大的预测工具 Paircoil2 分析发现有 CC 结构域。Pik-2 蛋白属于 NBS-LRR 蛋白， NBS 结 构 域 中 保 守 的 kinase 1a(GFGGVGKTTIA) 位 于 该 多 肽 的 第 211 个 氨 基 酸 残 基 ； kinase 2(KSYILLIDDIW) 位于该多肽的第 330 个氨基酸残基 ； kinase 3a(GGRIIVTTRFQAV) 位于该多 肽的第 358 个氨基酸残基， GLPL(EQVPEEIWKICGGLPLAIV) 位于该多肽的第 415 个氨基酸残 基， RNBS-D(CLLYLSIFPKGWK) 位于该多肽的第 488 个氨基酸残基， MHDV(KTFQVHDMVLEYI) 位 于该多肽的第 553 个氨基酸残基。而该蛋白的 C- 末端的 610-960 个氨基酸残基为 13 个不 完整 LRR 重复， 其亮氨酸含量为 17.0％ ( 附图 7B)。
实施例 7 ： Pik 基因的表达特性分析
利 用 定 量 RT-PCR 技 术 对 Pik 基 因 的 表 达 模 式 进 行 了 分 析。 在 抗 病 品 种 Kusabue 接 种 后 不 同 的 时 间 点 (0hr， 12hr， 24hr， 72hr) 上 采 集 叶 片 并 提 取 其 总 RNA， 利 TM 用 反 转 录 试 剂 盒 SuperScript Reverse TranscriptaseII(Invitrogen 公 司 ) 进 行 反 转 录 cDNA 第 一 条 链 的 合 成。RT-PCR 的 引 物 为， RRT5F ： GAAGCTCTGATCAACGGTATTCC， RRT5R ： TCTTTGATCATCTTCGGGATACG ； RRT17F ： TGAACTTCCACGATTGGATCCAC ，RRT17R ： ACATGGTTCTTGAATACATCATGTC。
实时定量 RT-PCR 使用 CFX96Real-time PCR 检测系统和 SYBR Premix Ex Taq 试 剂盒 ( 宝生物公司 )， 操作按照试剂盒说明进行。附图 8( 左 ) 为组成基因 Pik-1 在不同的 接种时间点的相对表达水平， 由此可以看出， 该基因呈逐步上调的表达类型。 附图 8( 中 ) 为 另一个组成基因 Pik-2 在不同的接种时间点的相对表达水平， 由此可以看出， 该基因也呈 逐步上调的表达类型， 但是前者逐步上调的幅度比后者的大。附图 8( 右 ) 为病原菌诱导表 达基因 PBZ1(pathogenesis-related probenazole-inducible gene) 作为对照的相对表达 水平， 由此可以看出， 该基因在接种对照 (H2O) 和病原菌接种之间表现明显不同的诱导型表 达。2 个组成基因都表现为组成型表达， 因为接种之前和之后都能检测到 2 个基因的表达。
实施例 8 ： 转化 Pik 基因产生的抗性植株的应用
将 Pik 基 因 克 隆 到 植 物 转 化 载 体 pCAMBIA1300(Lin et al.， The blast resistance gene Pi37encodes an NBS-LRR protein and is a member of a resistance gene cluster on rice chromosome 1.Genetics， 2007， 177 ： 1871-1880)， 导入农杆菌菌株 EHA105 中， 用于转化感病的水稻品种龙粳 24， 获得了 24 株转化植株， 其中 19 株表现抗性反 应 ( 表 1)。 这说明可以用 Pik 基因转化水稻感病品种， 结合现有技术经过自交、 纯化选择等 一系列育种程序之后， 即可产生抗病品种而应用于生产。
实施例 9 ： Pik 基因序列在分子标记辅助选择育种中的应用
利 用 本 发 明 提 供 的 Pik 基 因 序 列 信 息 可 开 发 基 因 特 异 性 的 dCAPS 分 子 标 记 (Pik-SNP-1F ： TTCGAGGCCCTACCAAGACA ； Pik-SNP-1R ： CATGGAAGGCTATCCTTGGTA， 扩增产物用 限制性内切酶 KpnI 进行酶切 )， 既可用于鉴别 Pik 基因与其他等位基因 (Pik-h， Pik-m， Pik-p， Pik-s) 的不同， 也可在杂交后代用于鉴定 Pik 位点上的各种基因型， 即 Pikh/Pikh、 Pikh/pikh 和 pikh/pikh 的植株， 这些信息可在分子标记辅助选择育种过程中加以应用， 以提高育种的目的性和效率 ( 附图 9)。
序列说明
SEQ ID NO.1&2 是 Pik-1 和 Pik-2 的核苷酸序列 ； SEQ ID NO.3&4 是 SEQ ID NO.1&2 的编码产物 ； SEQ ID NO.5&6 是带有启动子的 Pik-1 和 Pik-2 核苷酸序列。SEQ ID NO.7&8 和 SEQ ID NO.9&10 是分别用来扩增 Pik-1 和 Pik-2 的引物对 ； SEQ ID NO.11&12 和 SEQ IDNO.13&14 分别是引物对 RRT5F、 RRT5R 和 RRT17F、 RRT17R ； SEQ ID NO.15&16 是引物对 Pik-SNP-1F 和 Pik-SNP-1R ； SEQ ID NO.17 ～ 26 分别是 Pik-1 的 kinase 1a、 kinase 2、 kinase 3a、 GLPL 序列以及 Pik-2 的 kinase 1a、 kinase 2、 kinase 3a、 GLPL、 RNBS-D、 MHD 序列。12102051368 A CN 102051374序列 序列表表1/27 页<110> 华南农业大学 <120> 稻瘟病抗性基因 Pik 及其应用 <130>******** <160>26 <170>PatentIn version 3.5 <210>1 <211>8058 <212>DNA <213> 稻属水稻 (Orysa sativa L.) <220> <221>5’ UTR <222>(1)..(73) <220> <221>CDS <222>(74)..(640)， (760)..(1328)， (4098)..(6393) <220> <221>3’ UTR <222>(6394)..(6584) <400>1 agtcaggagg tgagagagta gcactcaacg caaaagggca tcggccgagc ggcgcgagta gggatggagg cggctgccat ggccgtaacc gcagccacgg gcccgtgcta gtgaagctgg ccgctttgct ggacgacggg gagtgcaatc gagccggagc gacgcagagt tcatcagatc cgagctggag gccgtgcact cccaaatatc ttggggagga tgggggatga cgatgcggcg tgcaaggatg ggaggtccgg gagctgtcct acgacctgga tgatgccgtc gacgacttct tttcgagcag cgaagaagcg caagcccttt cggtgagctc aaggcaagag tgtctccaat cgcttctctg actggaagct accggcggcg agccttccgc acaccgtcga gctggcttgc cgccaccaga tgcagggctg gtggggatgc ggaagagctc atcgagttgc tggaacaagg gagcagtgat gcttcacgat aaaacctcat gtccccctca ggataatggg aggggaaatg gtaccggtgg ctcacaaata gcttcgcttc cttggatggc gctgccaata aatttgttta tgattcttca acttggaagt acttcatttt ttgttgcagc aaaaaatcgt cccatggtgg acgataagag ccgtacaaaa gcaatgtcat tggttgcaag gtgcactcgg ttgcaatcgc cggtgaccta agagacgagg ttgtggtggt attgactcca tcaatctggt ctctgcgctc cggaagaagg tgggccatgc caggtcagcc aagtaaagga agatgtgaag gagataacgg cgatgcttgc tccatatgtg aatttcacga ggtcaaaaca atttgcatcc ttggattgcc13cgccgatcga gggccttggc ttctggaggg ctctcctcac gcttgattgc tggagctcaa ttgaggagcg cgtcgtcggt acaaacgtaa ggcgcaagcg atctcgattc ctttttctct gttcaagatt tacggttgga cggtgatggc ggagttgctg gccggtgaaa agggggaggc60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080102051368 A CN 102051374序ttgcccgagt tctctccaag aagcacaact gagctcttca caatatctta aggctatatg agatatgcca aatggggcag ttatcactga tttgtaaatc ctctatatag acacgaaaaa cttgcttcag actgccattg gaactagtct gccccgctag gctgctcagc tataaaagat agaacgagag gttatgtctt gatcattaaa aacatttaaa gggcttttat tttttcaaaa tgagacaact tcgaagtcgt tatatacaca ccagtctata agtaaaggca atgaacaaca actagttagg ggactatggt aggtggccat agctgaaaat gcaataaatc gctattacaa caacagtttg tatttccaca taacctgatg actatatcat ttccagcccc aggagtaact acaacatctc tatctcttat tccatataat aacttttttt gcccctcctt agctcttgct cacagggagt aaagccaaag caaacgacca aaaacaggga caactaccac gctgctttgt cgataacgag tatgtgttaa tgtacttcaa agagagagag caagaacagt aatatgtcat ggaaaatcag tttagtgcac acttttgggg ttcgtatcaa gaacatataa cactataaga catgaaccag ccttccagta aagcatagaa gattcgggaa ggagactggg ggctgactgc cgttgcgata ccgtggtaat tggttttgca taccatgctg cattcatttt caacgggtta列表cgcagttcca taacagagac gcacaccata tatcagcttt cttaatccgg ttttttctgt actttattct caatggtttt atggtactga tttttttaag tgcatacact acgataagat tagcccgctc ctgtttcgcc cactggtttc ccatgctgtt aacaatctct atgaaataga atgagttagc ttgccactat cttcataaca ttatgtaaag tgtgtgttct aacccatgcc gcattaaatt ttatataatt aaacaaacat gctggtctga ggacagtaaa aaaaaaaaaa gctggcttgg ctcaatctct atttcttgca gtgacataat aatgattttc aacaacttga tcgcaacaca attcagtgcg agtaacttat atgccgggtt tcttgcagac tggtgggagt cctcctcaac cttcccaaat cctcgatgag acctagtaaa atgatgtgga tcttgcaaag ataatgaata ccaaatctca taagtttcaa ttcccctgcc gtgagcgaag atgctgccca gtcgctggag ccattctctt gttcctgcct actgtgaaga aaaaatatga accagtatca aaaaactaga ttgacgtata ccatgcatcc taatcccaat taattaggcc tcgctccttt ctataaatgt aacacccatg caactagaac gacaagctat tggagattgg acggaaattt tgaatccatt cgatggttgc tatgtcatag gacctattca acaagcatgt tagcacattt2/27 页aaaacaacga ttcgcatcaa attttcgctc gggaccggga aaaaagtaag taaagtgaac gtatatatca tagatacaga aacaactccc gcttgcagta gaaatctggc aagctgagaa gcttttcctc atgccctctc ggaggggatg aacaacctat agcacttgtc gtagactgct tacaacaaca cttcctgact tagccctcaa caaatatgaa ctagaactct tacttgatat aaagtagtag atttgttctc aattgagcca taggttttga ttttttagag ctttaaggtt aagttctgga gcctgccatt cctatgtcct tcattgcaaa gggagccgta ataaaaaggt gtatttattg ttaaatagcc tctatagctagcattgggaa agtcccaatc gatacactta atcgacaaca ctagcttgtc gttgggtttt aattagcgtt tgtgacaggc attactcgtg ggtcatcttt gttacacaag aaaagaaaag aatgcagagc aaaagctccc tgtcgccaag tctgttgccg gtaagctact ctttttatta agccaatatc ataaaagcat gttcttttac tatttgccat actgtataca gcatatctgt tggacatgtg ttggacaaaa aacttctaca ccaacggtgt cctctctcga caaccacaag gccattgctt cataaaggat aaggagatat tgtacctatt aggctattgc ttgctattgc caataagatt tgtggcaata gacttgttgc141140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420102051368 A CN 102051374序taaatttata aagcaatctc cacaccgtac atacaggttc agacacacag gtgcttaata tagggagatc taggatcagg ctcctaggaa atatatatca tgcatatatg ataggtatct agtccattcc tagctgagaa ataataatga ggatcggaac ctttagcact ctgaagtgaa ccttacaacc ggactttgtt tggtcaggag ttggcgagct actatgagat ttttaacatg ttcgccggct atgtgtcaca ccttctatat attctcatct agggaacgcg tgtatgtggg tgcggattct tgcagcatct ttggcaagct caaaggagat gagagctgcc gtggcgatgg gggctacgcg ctccccttgt aagaccactt ttgattcaac caaaaattca agtgcactta tgtaaataat tgctttcctc aattctggcc gcaaacaaat tcatgaaaac ctgcaagttt gctgactgtt ctaatgtaat cattgtaatc caagaatgat gtgccacact tgctttgtcg tggagaggat tatttggctg aaaatgtagg attggcggag gttgtactgt gtggattgcg tattaacaga ccaccccgtg cttgggtctg gtctcttcag cacttgcagc gtttaagcgc gcagggcata gatccgaaag gagcactcgg ggacgtgaga gcacactctg gcagaatctc tggggagctg atggcaagct cgtgcggttg tgcaaaatgc tgggatattc ccgcgttctt列表tcattcaata aaacgaatta atataatgct atcaatttga ttgccgatct cagcctgcat ccatttcttc gaccggaaat aaaagcaaaa ggactcacat tattgaggct ggcattggga gaataatcat atgtttttgt ggatagcaac atgatattgt tggttggaga acatagagga ttggttataa attggtctaa tgtcggaaga cgcagcacgg tcctgagatg ctagtactag cagtggactg ttggtgacgt tggaccttga taagcctcag agatgaggaa ttccgcaaga tcactgagct acactccaat gcgtgaggag agactctgga cccaatcgtt tctgcgaagc tgtccatcgc gcagtcatat acatcaggct cagtaaatac aatcatatac atatacattt tttcttgacc atgtaacttg ggcgaaaaaa tctactgacc actcaagatt tacaaccaga ctgtgaaatt tattactctt agaatgggaa gactactcgt ctacgaagtt aaagtctggg gaacatgtgt gatagaagaa tggtattttg ccatcttcct cagaatcgaa gaaagaagca agacaacaac caagtccaag tgcatcctcc cttgtcaagc ggcgcgaccc agataataag agtgaggtac gctgaagcat gattggagag cccactgcag cagtgagctc cactggggtt cgtgagaaac gcgcgtgctt tctgatcaac gatcatcgat gcgtatcccg ctgccacaag3/27 页aattttttac tggaaaatgc acaattattt ccaaccctca ggtccctctg taaactcctt aagaacttgt ataaaagctc cagaacacga tgacaaacta gttagttcta ctcgactttt gtcatcagaa cttaattcaa ggggatctag gcaggcaaca tatggtatgc ttaggtggtg gacatcccat ctttatctga aggggtcgtc gaaggttact agttataatt gagtacaatt ccaaggttga atgagtatgg aagggaatcc gatatacagg cttggtctca ttggagattt ctgaagcatc atacgggagc ccgccgcagg agggagctcc acgagggtga gccggtgaca ggtattccag cgtttcggac aagatgatcatatttcaaca ccaataagag agtgtaggaa gaaaagaaac agcaacatcg agggttactt gttagctgcc aatgccgtca aaatttcaac catctcaagt actaatatgc gatgacattt ctgggtggta gatgacaatg ttgtcttggg aattcatgct tcgtcagcat gatttgagac agtttatgcc agtgcatacc gaaggatttg ggatggatta atgctggcct ggatctgata ggggggtatc cttgtcgtcc ttgcgagtgt tgtgaacagt ctccctcagg atcagtgaac aacacggaca gacgtgagga aagattatgt aatcatctac ggccagatct cccgaaggcg agggaggttc aaagttcccg tcttgcctag153480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760102051368 A CN 102051374序atgaccaaaa ccctaccaag gtgtcgacag ttctcgagtt tgaagagcct gcatcagcgc tcaccctcct aaaacattgc tccctgctgt cctgcggccg ttcaaacaga ctccttcatg atactcaaaa gatttcaatc aaaagatata atcttatgga ggcggttcta accgcccccc taagctaggg tgccgcctcc ccgcctccgc gcgtgccgcc cccccactcc cggctgcctg cacaggcggc gtcagtagac gtactcagta attaaatgat agacattatg tgtaatcttc ttcaaattta caattatatt ggagcatcaa cttaatcata caggcttata catcatgttc gttaatgaat ttctagatgt gtcggtac gttcctcgcc acaacccata ccggttgcca caagttctac ccaaaaggtg caccattgac catcaatgct gggcagcagt tcgagatgac agcgactaaa aactactagc taatactcta ctgatttctt ctatgaaaag taatagaaaa gaattcctgt gtgggtggtc ccccctcctc ttagggagag gcctctgcgt cttggcgccg tccgccttag tgtcggttgc ggcaagccgg gccgggtccc atttcttgtt gtagtgctag ggtttaatca cataatttca tacttatcta aatgttggtt tttattattt gtaggactac ctgaggtaag gctttaatgt gattctcaaa aaaatgccag atcttgaata列表acctgcagac gcacaggctt tccatgaaga caagcaacga gctcgccatg aagaagccga agatatcaac ctgagcctgc aagggattct aaacccaaga cgctgtctaa caatttttct gattgtagaa aacaaattac atttttatag atagaggaaa ctggaccacc tggtcgaaac gaactagcca gtgccgtctc tcctcggctc tcgcctcctc gggcggcggc cgcccctgga agctttcttg aatgttgccc ctgccttgag gcgggttatt tgaacggaga tttgaatgat tgtgatgttg tggcttgaat atgaaaccaa tttgcaaaag gctaagtttc aatctaagta taaaagaata actggaccag gctcgtgctg ccagatgctg cgccatgccc tgccatcggc gtacaagagc ggagcatccc tgagtcacac acaggcacag tcttgatggc tcgagtagca ttttatttgt tgcctccgca aaaacatggg ggaatcctat gaaagttaac gtgagactca ctaaaatttg cagaaaaaag cagcagcacg cccggctctc ccgcttctac ccttccacga caacgcctac aagggaaaac ttgctcagca tatgcagtag tgtagcatgt ttctctcaag gtagaaaaga tatgttctaa tgagatatat ttgtaacaat tgtgccgata tagaatttct cttgtacctt ggaatgtaaa tgtaattcaa tctttcaagt4/27 页cttgaggatg aggttcgagg gagagcttcc aacctcaagc atcaccaacc gacgcccctg aaccggccga gggagcagtg catgataatc aggtgtccta gatattgaaa attaaatact actctacatg aagtttggag cttttccttt aaaagcctca cctaatcagg gcccacgaga gccactgagc catcgctggc gactctgcct gtcagcgcca ctcctccaat aagccaacta attgccattc aagttcaaag tgagtagtca gtgacaaatt ttagcaaaga agtagggttt ctttcgtaac tgctacattt atgacaattt tttagcggtt tcatgaaaat agaggagggg taatttggtt attaatatta tgggtcagtggagatgccca accatcaacg aggatagcct gccggcccag gtctttcggt gtcgtgaaga gggtataagg gggatcgata tacaagggaa attgaagagg tagctagtac agtccccgct acctcccttt gactttgaga tcctatagag gtttatttgc caggtgatcc ctcccggggt gtgtagccat cagcgccagc atgcatcgcc cgccgcctcc tatcgtcggc cggccgcccc ctttctctct ggttttttgc tgaaaatttt catctattga tgtctatatg ttataagata ttaagcaagt ttgacacatt ccgacgattc aaggcaacat tcacaaacta tactccttgt aattttattc gcccattagc5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6540 6600 6660 6720 6780 6840 6900 6960 7020 7080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 805816102051368 A CN 102051374序列表5/27 页<210>2 <211>6386 <212>DNA <213> 稻属水稻 (Orysa sativa L.) <220> <221>5’ UTR <222>(19)..(180) <220> <221>CDS <222>(181)..(1172)， (1336)..(3409) <220> <221>3’ UTR <222>(3410)..(3692) <400>2 atatgttcca aatattatta attcattcat ggtatggtct tatccatggg caggacacgg aaattctcag caggttcgcg gctcatactc tcttgtgctt gcaacagctg aaagttgcag atggagttgg tggtaggtgc ttccgaagcc accatgaaat aatcttctag cccaggagta tgctctcatc agcggtatcc aatgacgagc ttgccagcat gcaggccttc ctccgtgatc cacagtcatg gccaccggat gaaggactgg atgaagcaga gttgaggact gtatcgatga ctttgcccac cgcctccctc aaatggtcct tcctactcac aaaaatctat gaactatgga attgcttcca acattgccca actcaaggta cgggcacaac agatacggag tgaacaaccc agaacacctt gacagtagca gtcaattacg aaattgctga gtatcaggtc acaagccctc cctgtgggga tgaagacggt catggaggag cttgaggttt gaaaatgggc aagctgttct gtccatagtc ggttttggag gccacagcat tgtacagaaa agtcagtgaa aaatttcagt tctcagaact atgaccaagg caaagtcctc aatagtattc gagcagggca gcagcacaac aattagtgag aaaaagaacc atgttgaaga cagccctgtc actgctcaga ggtaattgta ggaaaccctg ataatacacc aatcaggctg caggaaacaa agaaaactgg aacagctcct ggccgaaaag aggtaccttt tgcttatctg taaattaact tactcatccc actctaaatc acacagcaca actccatctt ttgaatgggt tttatttttc ttatcatctc tgcagttata tcctcttgat tgatgacatt gagtatcaga tcgattttgc ctaaaaataa taaaggcggt atttcaagct gttggttcaa catgctcccc tcttgaaact17ttattttcat cttgatctga tgagaagtac ctctcttggg gtggtgacat tcagcaacgt tccgagacat aggattccat catggtggcc agatcgcaga gcagtgccag agatcattgg ggttaactaa gtgtgggaaa gccgggcatc tgagtcaagt tcacctcagg tatgtcagcc cggacgatga ttttgtaaat taatgtttat tcacttgtgc tggtctgccg agaataatag gatcgtttgctttcccccct actgtctgtg agagaacaag caagctgggc ccagtacatc gccagagggt cgcctatgat cagcgatgcc acgtcgtgtg tcgacgtagt gacccgtgct tataaaggag tcctcaagct gactaccatt agtagctgtg cagcaatcag cgctaagagc agaaaatgat tcaaaacccc aaaattgctt ttccttctat tcattttttt aaacatggga tgactacaag atacagttga60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500102051368 A CN 102051374序gatgacgagt agcaacaaag ttggccatag tggagtaaac gttacaagga ttgtacttga tggatagctg gcatacttta gggaaggtaa atcgaagaga aaagtccgtc ctgaacttgg cattcattca gagagacata acagaaattt ataagggaga agcatacttg aagaagccaa ttcttatccc gagattgttg aagcttgcca tcctccattg tctgaattta gagctgtctg aagctaacca ccttcattgt ataataaagg gctgaaggat agctttttgg ttcgaaggtc agtgatgggg aaaccaaaag ggagaactta tattattgct atggttccat ttaataaaag ctataaatga ttttctagca ccaaaattac cccaaaactt tagacgagca tcagcatggc tttgcaaatc tactggattg gtatatttcc aaggttttgc atcaactcac aaacgtttca attttattac gactgtcgat ctcaagtgag actatgggat tgacggagat ccaaaattcc catatgtcag gagggaataa ttaaaaaccc aagaaaaagg aggaatcatc tatacaagct agtaccttgg tcaactcact gcaagttgga tatctgtaac tttccctcac acatccttga tcaagagtct acaagaatgc tatttggcat cagaagcaat tatttgttga ccaatcatct caccttgcaa catagttgat ggagatctcc tgggattgct gttggctggt gctttgcact列表agtatttgtg gaaatatgga gcctgcaacc gagcaagaaa gatttgcctg aaaattagta caagggttaa ttagtacgtc atggttcttg ggacactggc ggatccaatc gtgtttggga ctggatcttg cttttactca cagaaacttg aagtcaatag aaggggctga ggaaaaacaa atgaaagcac gcaggccttc aagggtggtg ctgcagactc cccgcgcctc aagtggatca actgaaactt tcacttagtg ttggacagtg cgcttctttg ctcgaaatca gaaaatctcc cttgtaaatg actgcatgag ctctattatt ggatggcata attacagtgt attattatac tgccacaatt gtgctgccat ttgtaaaact aatcaaagat aaatatgtgg caaggaaagc ctcctcttac cggatctgaa ggaaacgttt cccaggaaag ccatggagca aatacatcat agatgactgc gtggaagttc acctgaacca aggactggaa agtatttgag agtacttgga tccagctaaa ggttgcctca aggagcccgc tccgtgtact atcagttgac ataccttcaa tggccatcaa caagatatct ccagcatcac tggagatcct cagcgaagca atggggaaat cacctttagt ttgaaatgcg gtgaggtgca atttgaaggt aagtaaaatt actctcttag gcatattgct ctgttcagtt ttatattcgg tccatgagtg tgctcctcta tacctaaatt6/27 页ttttctcacc aagaaaagat gggattgcct ctgctgcgat cctcgatggt gacttgctta gtcccggcga agttgcagag tggcagcaat gtccaaatca accaagcaat aacaaaaggc tgtgccattc gggtttgaaa catccgacga aactcttgac acggatcatt agaaaaaagt aaagaaagga gtcagggatt agggctaagg acaattacag tgatgagaat tgtcgccctt tactctcaac ccacatttta ggatcaggac cgtcattcca gccgaagctc gtttaaagac tctcaaagtt taatactgag gctgcaaatc aatatattgt acaacgtacc gtgttttcta ttattgaact cggtattttt ttattggtgcattcaataca agtccctgag tggtcttgtc attatttcca ttgttacaat gaagggttgg taatgagaag aagaaggaac agttcatgac tgtggttggt gcaaagcagt atcactgacg aatacaggtg atgtcaaatg ctccaagatt ggacctgcct aaacacacgg gtcgcctcaa taaaggcgca agaagtagct caatataaca cagctgtggt gggcgacatg gaagctaccc agttcttagg cttcgccttt gaataataaa taagctgctt aatgccagca cgaaatcctt aaccaagttc tggcatcgtc gaggcttccc aataaaatag ttcacttgtc gcaagaaacc atatttatgg gttaagattt atgttcacag181560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840102051368 A CN 102051374序gtactgtaat ttcaaggtat acttttaaca ctaattggat tctattcata ttttccatcc gacgagaggc gggcgagtga ccccactttg tgggcggagc ctcacctgat cccccaccgg ccctcaacat agatggagga gatccaagcc ccgacgccct cctcctccac tcggctccct aaggagctag tacggtcccg gcgggaagaa acgtgacagc aagaattgta cccaaattta gtcgcctaca tttctgaaaa tcaatctcta atgtccagaa gacttatatt aagtaaaaca tctgtttgtt tttttagata gagagaacat tcagactcct tcattcctgt agtgcatcag agtgcaccaa taggcagcca gcatccacga gttgtgattt atctggtaag gtatgcatgc ctatgccatt gctgtgctag atcttttctt gagtggcggc gggagagctc ctcctcttcc tcaagcgagg tgccatccct ctcctcctcc cgtctcgaag gtcgctcact catcgtcatc cgccgaggag ctcctccggc cttcgacatc actgatgcat cctcacgccc gatgggagaa aatagcacgg gtagcatttt ttttatgcca taaaaccttc aattgactgg tgaagctcca ctgtccagta acatgtatca attatataag aatgcctgac ctatctgatg gttgtgaatt caagcatcac gaactctccc agaggaagca tggccacctt gtgcctcctt gtcagatttt列表ttatattttt attcgttaag cccgttatct caagattcag caaaattgga ttcttcttta agaggcgagt ctgcgaagct ttgaagctag gacgatggag tcactccatc ccgtggcagc cactgtggaa agctgaacaa atgagctcga gccccgcccc ccgccaagga tcgagttcgt tatgtccgtc cggtcccgcc aaacgggaaa gtaaaatttc catatttgta tggcaactgg ttggttgaac ccgtccctgc atctccagat gctatgatct ttttctggag tgttaattaa aaagaaaaaa ctctcaaata catgcgagtg aaacaatcag caagccatcc gggagatacc tgctctagct cgcgcctcga tcagttgaat ttctttgcca tttttagttt tatccaatat aaaaatgcta accgtgctat tcccgtcttc ggcggcgagt ctcatcttcg cggccctctc cttcgcgtgg tccaagccca cgaggccacc gaagcacaac ggagcaggag gcggatgcgt ttccctatct tctcctcacg caccaccatg cttgccgcag gccacttgct aaaaaagaga aatggcaccg atggcatgga tgtcattaac aggtaattaa tactccctga gatatttcat tttctgaatt ctacaccaga ttacagcttt aatacacagg ctatgtacct acctgaaact cagcatcatt tgttcgtagg ttgacccttg ctatcgagaa gcatgaaacc gcagagaatt7/27 页tcgtgtatta gaagtttgat aatcagctaa aattaatggg ctacaatttg tgatatcacg ttcccgcacc cgccctgggt ttttcctcat tcaccagatc accccacagc aatcccacct gatgggccaa caaatcctcc gaggtgctcc gccctgcttg gtcactccct ctcatctact ctcgcacgct cacgacttgc tctcatcggt tggatgaaaa ctacgaatag tccaataaac gtataaatgg ttgcaaccat atgctttagt taaaaacatc ctggactcgg tgaaatcacc gatagaccac attacaaaac gaacaaacaa ctctacaggg gatcctccca ctcaattctc cttgcagaga tgcgttgacg tgaacttatatcgcgtccag cttcagccgg actagtttct acaaacatgt tgaaatttta ttttttcctt gggaccggcg tcccaagtgt actactgctg cgccaccacc cctaccctca tcagcccctg cagctccgcg ggcgggagga gcgctcattg ctctcctcct gctgatttgt aagtcgcaga cacctacgac cgtcgctcgc agaaggaaga ttccaatttc tctgaatcaa atacaaatat cgcgtccttc aagtctgaaa tccaaacaaa tccaagaatg aatccagtta gatggtgagt aagagttcac tgtgttaatt gtgatctcct tgcagcctgg taaatgaagc tctcgctgca ggatggaaca gttctgatct gatgttgaat193900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180102051368 A CN 102051374序列表tagttgagtt gatcaccttc gccttctgca gacatatctc agtccttgcc atatttcaaa8/27 页gtcatgttag tgtaacatag aagtggtgaa agttcaagtt tgcatgcatt gttgcagccg agtaggattt tagggctcta agcgtctctc cagattgaga gactggagta caggtttgca ctcacttaca ctgtcattct gtccct <210>3 <211>1143 <212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa L.) <400>3 Met Glu Ala Ala Ala Met Ala Val Thr Ala Ala 1 5 10 Pro Val Leu Val Lys Leu Ala Ala Leu Leu Asp 20 25 Leu Leu Glu Gly Ser Arg Ser Asp Ala Glu Phe 35 40 Glu Ala Val His Ser Leu Leu Thr Pro Asn Ile 50 55 Asp Asp Asp Ala Ala Cys Lys Asp Gly Leu Ile 65 70 75 Leu Ser Tyr Asp Leu Asp Asp Ala Val Asp Asp 85 90 Phe Glu Gln Arg Arg Ser Ala Ser Pro Phe Gly 100 105 Val Glu Glu Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Asp 115 120 Ala Ser Leu Pro Pro Ser Ser Val His Arg Arg 130 135 Pro Asp Ala Gly Leu Val Gly Met His Lys Arg 145 150 155 Lys Leu Leu Glu Gln Gly Ser Ser Asp Ala Ser 165 170 Lys Pro His Val Pro Leu Arg Ile Met Gly Gly 180 185 Val Phe Lys Ile Pro Met Val Asp Asp Lys Ser 195 200 Ser Leu Val Ala Ser Thr Val Gly Val His Ser 210 215 Asp Leu Arg Asp Glu Val Val Val Val Gly Asp 225 230 235206240 6300 6360 6386Thr Gly Ala Leu 15 Asp Gly Glu Cys 30 Ile Arg Ser Glu 45 Leu Gly Arg Met 60 Ala Glu Val Arg Phe Glu TrpAla Asn Leu GlyAla 140 Lys Glu Glu Leu Thr 160 Arg Trp Arg Lys Arg 175 Glu Met Gln Lys Ile 190 Arg Thr Lys Ala Met 205 Val Ala Ile Ala Gly 220 Gly Ile Asp Ser Ile 240Glu 80 Leu Glu Leu Asn 95 Leu Lys Ala Arg 110 Lys Leu Pro Ala 125 Gly Leu Pro Pro102051368 A CN 102051374序列表Gly His Ala Glu Leu 255 Glu Ile Thr Ala Met 270 Glu Val Lys Thr Ile 285 Thr Ile Ala Arg Val 300 Arg Val Phe Ala Ser 315 Thr Glu Thr Leu Ala 335 Asp Thr Leu Ser Thr 350 Gln Gln His Leu Ile 365 Tyr Leu Ile Val Ile 380 Ile Arg Lys Ser Ile 395 Thr Thr Arg Leu Asn 415 Asp Val Phe Val Tyr 430 Ser Leu Ser Trp Gly 445 Gly Thr Gly Glu Asp 460 Gly Met Pro Leu Ala 475 Ile Glu Glu Leu Gly 495 His Ile Glu Asp Gly 510 Glu Ser Leu Cys Leu 525 Leu Leu Leu Tyr Cys 540 Gly Arg Leu Val Arg Leu Leu Cys Leu Ile 320 Asp Ser Asp Asp Pro 400 Ser Glu Ile Asn Leu 480 Gly Ile Gly Ser Arg9/27 页Asn Leu Val Ser Ala 245 Gln Val Ser Gln Val 260 Ala Pro Val Lys Ser 275 Ile Leu Gly Leu Pro 290 Tyr His Ala Leu Gly 305 Ser Pro Ser Ser Ser 325 Ile Phe Ala Gln Ala 340 Tyr Gly Gly Ser Gly 355 Asn Ile Ser Ala Phe 370 Asp Ile Trp His Trp 385 Lys Asn Asp Leu Gly 405 Ile Ala Glu Lys Cys 420 Val Gly Asp Leu Asp 435 Ala Thr Lys Ser Gly 450 Ser Cys Tyr Asp Ile 465 Ile Trp Leu Ser Ser 485 Ala Glu Val Lys Lys 500 Leu Asp Ile Pro Ser 515 Tyr Asn His Leu Pro 530 Ala Tyr His Trp SerLeu Arg Lys Lys Val 250 Lys Glu Asp Val Lys 265 Ile Cys Glu Phe His 280 Gly Gly Gly Lys Thr 295 Thr Gln Phe Gln Cys 310 Pro Ser Pro Asn Leu 330 Gln Leu Gly Val Thr 345 Thr Gly Arg Ala Leu 360 Leu Leu Asn Lys Lys 375 Glu Glu Trp Glu Val 390 Gly Arg Ile Ile Met 410 His Thr Asp Asp Asn 425 Asn Asn Asp Ala Leu 440 Ala Gly Asn Arg Ile 455 Val Asn Met Cys Tyr 470 Ala Leu Val Gly Glu 490 Cys Arg Asp Leu Arg 505 Leu Gln Pro Leu Ala 520 Leu Tyr Leu Arg Thr 535 Asn Arg Ile Glu Arg21102051368 A CN 102051374序列表555 Lys Glu Ala Glu Gly 575 Thr Gln His Gly Asp 590 Val Met Leu Ala Phe 605 Thr Cys Leu Gly Leu 620 Arg Leu Ile Arg Arg 635 Leu Ser Ser Met Ser 655 Leu Gly Asp Val Ala 670 Arg Leu Arg Val Leu 685 His Leu Gln Gly Ile 700 Gly Leu Lys Gly Thr 715 Leu Lys His Leu Glu 735 Leu Pro Gln Glu Ile 750 Arg Asn Thr Asp Ile 765 His Leu His Thr Leu 780 Pro Gln Val Gly Lys 795 Thr Gly Val Arg Glu 815 Gln Thr Leu Asp Val 830 Ala Gly Gln Ile Ser 845 Asp Gly Val Arg Leu 860 560 Tyr Asn Leu Gly Leu 640 Met Arg Asp Cys Arg 720 Ile Gly Thr Asp Leu 800 Leu Arg Gln Pro10/27 页545 Trp Ile Ala Glu Gly 565 Phe Gly Glu Leu Ile 580 Asn Ser Tyr Asn Tyr 595 Arg Cys Lys Ser Lys 610 Ser Asp Thr Ser Thr 625 Ser Leu Gln Gly Gly 645 Asp Val Ser His Thr 660 Pro Lys Gly Ile Pro 675 Leu Glu Asp Asn Lys 690 Glu Gln Leu Ser Leu 705 Ile Arg Lys Leu Pro 725 Leu Tyr Val Gly Ser 740 Glu Leu Lys His Leu 755 Glu Leu Pro Leu Gln 770 Val Arg Asn Thr Pro 785 Gln Asn Leu Lys Ile 805 Pro Lys Glu Ile Gly 820 Asn Thr Arg Val Arg 835 Ser Leu Arg Val Leu 850550 Phe Val Ser Glu Glu 570 Asn Arg Gly Trp Ile 585 Tyr Glu Ile His Pro 600 Glu Tyr Asn Phe Leu 615 Ser Ala Ser Ser Pro 630 Tyr Pro Val Asp Cys 650 Cys Ser Leu Val Val 665 Phe Tyr Met Phe Lys 680 Asp Ile Gln Asp Ser 695 Arg Val Arg Tyr Leu 710 Gln Glu Met Arg Lys 730 Thr Arg Ile Ser Glu 745 Arg Ile Leu Asp Val 760 Ile Arg Glu Leu Gln 775 Ile Ser Glu Leu Pro 790 Met Cys Val Arg Ser 810 Glu Leu Asn His Leu 825 Glu Leu Pro Trp Gln 840 Ala Gly Asp Ser Gly 85522102051368 A CN 102051374序列表Ile Pro Gly Ala Thr 875 Ile Ile Asp Arg Phe 895 Gly Ser His Met Arg 910 Leu Ser Cys Leu Asp 925 Gln Lys Phe Leu Ala 940 Phe Glu Ala Leu Pro 955 Gln Met Leu Glu Ser 975 Phe His Glu Asp Ala 990 Tyr Ala Gly Pro Ala 1005 Ser Leu Gln Lys Val 1020 Asp Ala Pro Gly Ile 1035 Ala Glu Glu His Pro 1050 Gly Tyr Lys Glu Ile 1065 Ile Ala Gly Ser Ser 1080 His Asp Asn Leu Pro 1095 Ile Leu Leu Asp Gly 1110 Ile Glu Glu Glu Thr 1125 Thr Glu Thr Thr Ser 1140 Arg 880 Gly Ile Ile Glu Arg 960 Phe Met Ser11/27 页Glu Gly Val Cys Glu 865 Ala Lys Cys Arg Glu 885 Pro Pro Leu Val Gly 900 Pro Lys Met Ile Lys 915 Arg Leu Cys His Lys 930 Met Pro Asn Leu Gln 945 Gln Pro Ile Thr Ile 965 Arg Val Asp Ser Arg 980 Pro Asn Leu Lys Leu 995 Asn Asp Ala Ile Gly 1010 Val Phe Arg Cys Ser 1025 Ser Ala Thr Ile Asp 1040 Asn Arg Pro Ile Thr 1055 Ser Thr Glu Ser His 1070 Gly Ile Asp Thr Glu 1085 Ala Val Arg Asp Asp 1100 Arg Cys Pro Thr Cys 1115 Gln Asp Arg Val Ala 1130 <210>4 <211>1021 <212>PRTAla Leu Ile Asn Gly 870 Val Leu Ser Ile Ala 890 Ile Phe Lys Val Pro 905 Asp His Phe Arg Val 920 Leu Glu Asp Asp Asp 935 Thr Leu Val Leu Arg 950 Asn Gly Thr Gly Phe 970 Leu Pro Arg Ile Ala 985 Leu Glu Phe Lys Phe 1000 Ile Thr Asn Leu Lys 1015 Pro Trp Tyr Lys Ser 1030 Val Val Lys Lys Glu 1045 Leu Leu Ile Asn Ala 1060 Gly Ser Ser Glu Asn 1075 Pro Ala Gln Ala Gln 1090 Tyr Lys Gly Lys Gly 1105 Gly Arg Ala Thr Lys 1120 Asp Ile Glu Ile Gln 113523102051368 A CN 102051374序L.)列表12/27 页<213> 稻属水稻 (Orysa sativa <400>4 Met Glu Leu Val Val Gly Ala 1 5 Gly Lys Leu Gly Asn Leu Leu 20 Ile Arg Gly Asp Ile Gln Tyr 35 Ala Phe Leu Arg Asp Leu Ser 50 55 His Arg Met Lys Asp Trp Met 65 70 Val Glu Asp Cys Ile Asp Asp 85 Ile Ser Asp Ala Lys Trp Ser 100 Trp Thr Trp Trp Pro Arg Arg 115 Lys Val Arg Ala Gln Gln Ile 130 135 Asn Asn Pro Glu His Leu Asp 145 150 Val Asn Tyr Glu Ile Ala Glu 165 Gly Ile Lys Glu Pro Val Gly 180 Val Trp Leu Thr Asn Pro Gln 195 Ile Val Gly Phe Gly Gly Val 210 215 Tyr Arg Lys Val Ser Glu Lys 225 230 Ser Gln Asn Tyr Asp Gln Gly 245 Val Ser Asn Gln Glu Gln Gly 260 Asn Leu Thr Ser Gly Ala Lys 275 Leu Arg Gly Asn Cys Ile CysSer Glu Ala 10 Ala Gln Glu 25 Ile Asn Asp 40 Asn Val Pro Lys Gln Ile Phe Ala His 90 Phe Leu Leu 105 Val Ile Ala 120 Ala Asp Arg Ser Ser Ser Tyr Gln Val 170 Met Lys Thr 185 Ala Glu Asn 200 Gly Lys Thr Phe Gln Cys Lys Val Leu 250 Ser Ser Thr 265 Ser Met Leu 280 Gln Pro Glu24Thr Met Lys Ser Leu 15 Tyr Ala Leu Ile Ser 30 Glu Leu Ala Ser Met 45 Glu Gly His Ser His 60 Arg Asp Ile Ala Tyr 75 Arg Leu Pro Gln Asp 95 Thr Lys Ile Tyr Glu 110 Ser Asn Ile Ala Gln 125 Arg Ser Arg Tyr Gly 140 Ser Ala Arg Thr Arg 155 Thr Ser Pro Gln Ile 175 Val Met Glu Glu Leu 190 Gly Gln Ala Val Leu 205 Thr Ile Ala Thr Ala 220 Arg Ala Ser Val Ala 235 Asn Ser Ile Leu Ser 255 Thr Ile Ser Glu Lys 270 Lys Thr Ala Leu Ser 285 Asn Asp Gly Asn ProLeu Gly Gln Gly Asp 80 Ser Leu Leu Val Ala 160 Ile Glu Ser Leu Val 240 Gln Lys Leu Asp102051368 A CN 102051374序列表300 Asp Asp Asp Gln Asn 315 Ser Tyr Ile Leu Leu 335 Ser Ile Arg Ser Ile 350 Val Thr Thr Arg Phe 365 Thr Asp Arg Leu His 380 Asn Leu Phe Asn Thr 395 Asn Lys Val Asp Glu 415 Gly Leu Pro Leu Ala 430 Pro Arg Lys Ala Cys 445 Pro Glu Gln Glu Thr 460 Asp Cys Cys Tyr Asn 475 Tyr Leu Ser Ile Phe 495 Ser Arg Arg Trp Ile 510 Thr Gln Glu Arg Val 525 Asn Leu Val Arg Pro 540 Phe Gln Val His Asp 555 Glu Glu Asn Phe Ile 575 Pro Ser Asn Lys Val 590 Arg Gly Ser Ser Thr 605 Pro 320 Ile Leu Gln Thr Ser 400 Gln Ile Cys Pro Asp 480 Pro Ala Ala Met Met 560 Thr Arg Lys13/27 页290 Asn Thr Pro Ile Arg 305 Arg Lys Leu Glu Gln 325 Asp Asp Ile Trp Ser 340 Pro Lys Asn Asn Lys 355 Ala Val Gly Ser Thr 370 Val Asp Phe Leu Thr 385 Ile Cys Glu Ser Lys 405 Val Pro Glu Glu Ile 420 Val Ser Met Ala Gly 435 Asp Trp Ser Lys Leu 450 Leu Thr Leu Asp Gly 465 Leu Pro Ala Asp Leu 485 Lys Gly Trp Lys Ile 500 Glu Gly Phe Ala Asn 515 Glu Ala Tyr Phe Asn 530 Glu His Gly Ser Asn 545 Val Leu Glu Tyr Ile 565 Val Val Gly Gly His 580 Arg Leu Ser Met Gln 595295 Leu Gln Glu Thr Thr 310 Leu Leu Ala Glu Lys 330 Ala Glu Thr Trp Glu 345 Gly Gly Arg Ile Ile 360 Cys Ser Pro Leu Glu 375 Asp Asp Glu Ser Gln 390 Ile Arg Lys Asp Ser 410 Trp Lys Ile Cys Gly 425 Leu Val Ala Cys Asn 440 Cys Lys Ser Leu Phe 455 Val Thr Arg Ile Leu 470 Lys Thr Cys Leu Leu 490 Ser Arg Lys Arg Leu 505 Glu Lys Gln Gly Leu 520 Gln Leu Thr Arg Arg 535 Gly Lys Val Lys Thr 550 Met Ser Lys Ser Ile 570 Trp Gln Met Thr Ala 585 Ser Ser Gly Ser Asn 60025102051368 A CN 102051374序列表Thr Val Phe Gly Asn 620 Gly Ile Ile Gln Val 635 Arg His Met Thr Glu 655 Ile Arg Arg Thr Glu 670 Glu Tyr Leu Glu Thr 685 Pro Lys Ser Ile Val 700 Asn Lys Asn Thr Arg 715 Lys Pro Ile Lys Asn 735 Lys Lys Gly Phe Leu 750 Leu Arg Val Leu Ser 765 Ala Ala Gly Leu His 780 Lys Leu Asn Ile Thr 795 Ser Ile Glu Tyr Leu 815 Asp Glu Asn Ser Glu 830 Pro Arg Tyr Leu Val 845 Pro Lys Trp Ile Thr 860 Val Thr Val Leu Arg 875 Ser Leu Phe Ser Leu 895 Asp Gln Asp Ile Ile 910 Asp Gly Glu Ile Val Leu Leu 640 Ile Ile Leu Gln Lys 720 Pro Ser Gly Gln Lys 800 Gly Phe Ala Ser Thr 880 Thr Lys Ile14/27 页Gly Leu Asn Leu Ala 610 Asn His Val Pro Phe 625 Asp Leu Glu Asp Trp 645 Cys Gln Met Leu Leu 660 Ser Lys Ile Pro Ser 675 Asp Ile Arg Glu Thr 690 Leu Lys Arg Ile Ile 705 Gly Leu Arg Leu Pro 725 Ser Pro Gln Gly Lys 740 Gln Glu Lys Gly Lys 755 Ile Glu Ile Val Glu 770 Leu Thr Gly Leu Arg 785 Gly Gly Asp Thr Phe 805 Ser Cys Gly Leu Gln 820 Ile Asn Ser Leu Gly 835 Leu Glu Leu Ser Gly 850 Ile Thr Thr Leu Asn 865 Glu Thr Leu Glu Ile 885 Phe Ala Phe Ser Leu 900 Asp Ile Leu Glu AsnGln Val Arg Ser Leu 615 His Ser Phe Asn Tyr 630 Lys Gly Leu Lys Glu 650 Leu Lys Tyr Leu Ser 665 Lys Ile Gln Lys Leu 680 Tyr Val Arg Asp Leu 695 Ser Ile Leu Gly Gly 710 Gln Glu Lys Ser Lys 730 Thr Lys Glu Pro Ala 745 Gly Ala Met Lys Ala 760 Glu Ser Ser Glu Val 775 Lys Leu Ala Ile Tyr 790 Lys Gln Leu Gln Ser 810 Thr Leu Ala Ile Asn 825 Asp Met Pro Ala Pro 840 Lys Leu Glu Lys Leu 855 Lys Leu Thr Ile Ser 870 Leu His Ile Leu Pro 890 Ser Ala Ala Lys Gln 905 Asn Lys Leu Asp Ser26102051368 A CN 102051374序列表925 Leu Leu Arg Phe Phe Ala Pro 940 Lys Asn Ala Met Pro Ala Leu 955 960 Phe Glu Gly Leu Phe Gly Ile 970 975 His Leu Lys Val Ser Asp Gly 990 Asn Asp Leu Lys Val Asn Thr 1005 Ile Val Thr Ala 102015/27 页915 920 Pro Ala Glu Gly Phe Lys Ser Leu Lys 930 935 Leu Val Pro Lys Leu Ser Phe Leu Asp 945 950 Glu Ile Ile Glu Met Arg Phe Lys Asp 965 Glu Ile Leu Glu Asn Leu Arg Glu Val 980 985 Ala Glu Ala Ile Thr Lys Phe Leu Val 995 1000 Glu Lys Pro Lys Val Phe Val Asp Gly 1010 1015 <210>5 <211>9333 <212>DNA <213> 稻属水稻 (Orysa sativa L.)<220> <221>promoter <222>(1)..(1276) <220> <221>5’ UTR <222>(1277)..(1350) <220> <221>CDS <222>(1351)..(1918)， (3037)..(3605)， (6374)..(8671) <220> <221>3’ UTR <222>(8672)..(8861) <400>5 ggaggggggg acagcggcgc ggtgggaaga ttggggcctt gggggtgagg gaggccaata atactgcact gcattcgcag actcgttgac tgactcgtgg tctccctaat atttcctccg tcctttaata taatattaaa ttctttaaca actactccct ccattataaa atataagtca taaccacccc taacccaaac taattattat tatcttgtag tttagaacat cctaataaat acaatgcatg aatcagagaa catgagtgta gaggatgtta aaaaataata atttaataaa tagttaattg cctatatgca tgcatgcctt atattatgaa acatctaaga tgccttatat tatggaatag agggagtcct atttaaccat ttatcttatt tatgcaaata ataaaaataa aaagttgtgc ttaaaagatt ttagataata27cttttgggcg tcatgccgtt ttatacttgt accaagaaaa catccaatag aaagaggtca aaagtggttg ttaaaaaaat aaataagtaa60 120 180 240 300 360 420 480 540102051368 A CN 102051374序aataataatt ttgatctacg atatttactc caaatcaaga tccatttact gatcatttag aaagtaaaat ttctctaacc agcaggctat agcgggctat caggtgggac aaataaattg cggagagtca atcgaggcgc ttggcgcccg gaggggagcc ctcaccccaa attgcggagg ctcaatttcg gagcgtgtct tcggtacacc cgtaaggaag aagcgaaaac gattcctcac tctcttgatt agattcccat ttggagtgca atggcattga tgctgcaggt tgaaatccat gaggcaaaac gggttttcgc cagacatttt ggagtgggac tcaacaaaaa caaattaaag atgaggtata gtaaatagat gtggaaacaa ttcaaacttt tattttatag taacaacaaa tattgcatgt ccaatgcaca gaataaccta gttaaaatcc cattgcgaga aagccaactg agatttgtag caggtattaa aagctactag ggaggtgaga gagtagggat tgctagtgaa ggagcgacgc atatcttggg tccgggagct agcagcgaag ccaatcgctt gtcgagctgg agctcatcga ctcatgtccc aaatagcttc cttcaacttg ggtggacgat ctcggttgca ctccatcaat cagccaagta atgtgaattt aacgattgcc atcaatctct cgctcaagca cgggagagct gtaagcaata tgaacaggct tatcaagata acagaaatgg ctcccttatc列表aacgaaggat accaagaaaa gcatcatccc tacttgtgtg atagacttaa atatagatca agaacaaagg aaataccacc ttaaggagat cacagactcc cttgtatgaa tgttaacctt caacgcaaaa gccatggccg ttgctggacg agatccgagc gatgacgatg ctggatgatg cctttcggtg aagctaccgg ccagatgcag caagggagca atgggagggg atggcgctgc attttttgtt caaaagcaat acctaagaga cgctccggaa tgaaggagat aaacaatttg atcatgcatt gccccagtcc taactgatac atctcatcga cttatctagc ataatgttgg tttttaatta tcctttgtga ttgctattac cgtactccct actaataact caatatttcc catggaagca taaatgaaca atttagaatg aactaattat actttaagag aaataaggag aagacgcagt taagctatta gctctaatta gggcatcggc taaccgcagc acggggagtg tggaggccgt cggcgtgcaa ccgtcgacga agctcaaggc cggcgagcct ggctggtggg gtgatgcttc aaatggtacc caataaattt gcagcaaaaa gtcattggtt cgaggttgtg gaaggtgggc aacggcgatg catccttgga gggaacgcag caatctaaca acttagcaca caacatatca ttgtccttaa gttttttttt gcgttacttt caggccaatg tcgtgatggt16/27 页aagaaaatta ccattctaaa ctttcatatt tagccaatag tgcatcaatg caaatatata aagggagtac gtgaaagcag cagttacaat agagaagggt gtgtgtatga gattggctat cactcggagt cgagccgccg cacgggggcc caatcttctg gcactctctc ggatggcttg cttcttggag aagagttgag tccgccgtcg gatgcacaaa acgatggcgc ggtggatctc gtttactttt atcgtgttca gcaagtacgg gtggtcggtg catgcggagt cttgcgccgg ttgccagggg ttccaatgcc gagactcttg ccatatggtg gctttcctcc tccggcttcc tctgtcctcg attctaccta gttttatgattttttaataa gtacaccaag ctcaatgcat gggttataaa caaataacga aaaaaactat cttatactag ggaccgagaa caaacatatt ccaactgtag tagtatagta ttggctatac gagtagcact ggaggcggct gctggccgct agagttcatc gaggatgggg gtcctacgac aagcgcaagc ctctgactgg cttgccgcca gttgctggaa cctcaggata gcttccttgg gaagtacttc aagagccgta atcgccggtg ctggtctctg aaggaagatg cacgaggtca cgagtactat ccaagttcca caactaggag cttcaacaac tcttatatct atatgtccat tgccaaactt ggcaggcccc actgaagctc28600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880102051368 A CN 102051374序caaaggcttg gaatagaaat tctcaaagct ttcaagcttt ctgccatgcc cgaagggagg gcccaaacaa tggagagcac ctcttgtaga tgccttacaa gaagacttcc tatgatagcc tatcacaaat ctagactaga gtatatactt catccaaagt ccaatatttg aggccaattg ccttttaggt aatgtttttt ccatgcttta agaacaagtt gctatgcctg attggcctat aattttcatt ccattgggag gttgcataaa cataggtatt attcattaaa catgttctat catttaattt aatactggaa tatacacaat catttccaac tgaccggtcc acttgtaaac aaaaaaagaa tgaccataaa agattcagaa cagtatttgt ctggcctcta gagaaacacg tcctccttgc ctctcactgc ggatggaact cctatgcccc ttgtcgctgc ctgcttataa caacaagaac tgactgttat ctcaagatca atgaaaacat actctgggct gatatttttt agtagtgaga ttctctcgaa agccatatat tttgaccagt tagagagtaa aggttatgaa ctggaactag ccattggact gtcctaggtg gcaaaagctg ccgtagcaat aaggtgctat tattgcaaca tagcctattt agctataacc tttactaaat aatgcaagca tatttcacac cctcaataca ctctgagaca tccttgtgct cttgttaggg agctctagga cacgactcct列表ggagtggtca caaaggttac gaccaaaaag agggaaatgc accacaaaag tttgttgtcg acgagtctgt gttaagtaag ttcaactttt gagagagcca acagtataaa gtcatgttct atcagtattt tgcacactgt tgggggcata atcaatggac tataattgga taagaaactt accagccaac cagtacctct tagaacaacc gggaagccat ctgggcataa actgcaagga cgatatgtac gtaataggct ttgcattgct tgctgcaata atttttgtgg ggttagactt tcaactattt attcaccaat acttaagtgt ataatgaaaa tcctcagcaa tggccagggt caaatgttag aaaacaatgc agtttaaatt tctttttttt acaagtgcat aaaagacgat agagctagcc ctcccctgtt ccaagcactg tgccgccatg ctactaacaa tattaatgaa atatcatgag agcatttgcc tttaccttca gccatttatg atacatgtgt tctgtaaccc atgtggcatt caaaattata ctacaaaaca ggtgtgctgg ctcgaggaca acaagaaaaa tgcttgctgg aggatctcaa gatatatttc ctattgtgac attgcaatga attgcaacaa agatttcgca caataattca gttgcagtaa caacatcatt aagagaaacg aggaaatata gaaacatcaa catcgttgcc tacttcagcc ctgccccatt cgtcagaccg tcaacaaaag17/27 页actgatcttg ttaagataat acactccaaa aagattaagt cgctcttccc tcgccgtgag gtttcatgct ctgttgtcgc tctctccatt atagagttcc ttagcactgt actataaaaa taacaaccag taaagaaaaa gttctttgac atgccccatg aaatttaatc taatttaatt aacattcgct tctgactata gtaaaaacac aaaaacaact cttgggacaa tctcttggag ttgcaacgga ataattgaat ttttccgatg cttgatatgt acacagacct gtgcgacaag cttattagca caatacagta aattaaatca atgctatata tttgatttct gatctatgta tgcatggcga tcttctctac gaaatactcaaaatccacag tatagaaagc aaaaacaaac ttcagaaaac cattgcaact agtctgctgc gctagcgata tcagctatgt aagattgtac gagagagaga gtcttcaaga ttaaaaatat ttaaaggaaa tttattttag caaaaacttt caactttcgt gtcgtgaaca acacacacta ctatacatga aggcaccttc caacaaagca ttagggattc atggtggaga gccatggctg aaaatcgttg aaatcccgtg tacaatggtt gtttgtacca ccacacattc tgatgcaacg ttatattgat atctccaaaa cgtacagtgc ggttctgtaa cacagtgctt taataaattc agatcgcaaa tcaggtcatg aggaactgca292940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220102051368 A CN 102051374序ccagatgaca aaattgttag ctcttctcga gggaagtcat ctcgtcttaa aagttgggga ctggggcagg tgtgttatgg aagaattagg ttttggacat ttcctcttta tcgaaagggg aagcagaagg acaacagtta ccaaggagta cctccccaag caagcatgag gacccaaggg ataaggatat ggtaccttgg agcatttgga gagagctgaa tgcagatacg agctcccgcc gggttaggga gaaacacgag tgcttgccgg tcaacggtat tcgatcgttt tcccgaagat acaagcttga tgctgaggtt tgctggagag tgcccaacct tcggcatcac agagcgacgc atcccaaccg cacacgggag cacagcatga aactaatata ttctatgcat cttttatagg cagaaagtcc ttcaatagct tctagataat caacaggatc tatgccttta tggtgctgaa cccatcctta tctgaggact tcgtctggtc ttactttggc taattactat caatttttta gttgattcgc tatggatgtg aatccccttc acaggattct tctcaaggga gattttgtat gcatctgcgg ggagctgcag gcaggttggc gctcccaaag ggtgagagag tgacagtggc tccaggggct cggacctccc gatcaaagac ggatgatgac cgaggcccta cttccgtgtc caagcttctc caacctgaag ccctggcatc gccgatcacc cagtgaaaac taatctccct列表ctgttcatct gtaatactaa taatcgatga atgatctggg acactgatga tgtcgttgtc aggataattc ggctgtcgtc gtagggattt cggagagttt actgtagtgc ttgcggaagg acagaggatg ccgtgatgct gtctgggatc ttcagggggg gcagccttgt agcgcttgcg gcatatgtga gaaagctccc ctcggatcag tgagaaacac ctctggacgt atctcaagat agctgaatca aagctggcca ggttgcccga aatgcaggga tattcaaagt ttctttcttg tcgccgagat ccataaccat tgccaaggat tctacgccgg aggtggtctt ttgacgtcgt atgctgggta gcagtgggat atgactacaa caagtggact tatgctattg catttggcat tggtagaata caatgatgtt ttgggggata atgctatgat agcattggtt gagacacata atgccttggt ataccattgg atttgtgtcg gattacgcag ggccttcctg tgatactagt gtatccagtg cgtccttggt agtgttggac acagttaagc tcaggagatg tgaacttccg ggacatcact gaggaacact tatgtgcgtg tctacagact gatctcccaa aggcgtctgc ggttctgtcc tcccggcagt cctagacatc gcccaacctg caacggcaca agccttccat cccagcaagc tcggtgctcg gaagaaagaa taaggagata cgatactgag gggaaaaggg18/27 页caaaatacaa cacatctgtg aggcttatta tgggaagaat atcatgacta tttgtctacg gcaacaaagt attgtgaaca ggagagatag gaggatggta tataaccatc tctaacagaa gaagagaaag cacggagaca agatgcaagt actagtgcat gactgcttgt gacgtggcgc cttgaagata ctcagagtga aggaagctga caagagattg gagctcccac ccaatcagtg aggagcactg ctggacgtga tcgttgcgcg gaagctctga atcgcgatca catatgcgta aggctctgcc cagacgctcg ggcttccaga gaagacgcca aacgatgcca ccatggtaca gccgaggagc tcaactgagt cctgcacaggtatcagctga atatgctaat tatctcattg attcccaaga gagaagtgcc aatgatgctt ggaactggag gcacttattt gtgaaaaaat caaccattgg ttgttgttgt aggaggtgga gagcttatta gagatccacc acatgcttgg cggctgtctc tcacacactt tatatgttta catctgcagg acgcggatcc gtggggagca attctggacg catctgcaca aagctgcaga gagattgggg ctgccatggc gatggcgtgc acgcgtgcaa cttgttggga cacttccgcg caaaagttcc ccaagacaac gacagccggt gagttcaagt agcctccaaa agcgccacca ctcctcatca attgcgggca gctgttcgag305280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6540 6600 6660 6720 6780 6840 6900 6960 7020 7080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560102051368 A CN 102051374序列表ctaaaattga ctagctagct ctctaagtcc ttcttacctc aaaaggactt gaaaatccta cctgtgttta tggtccaggt tcctcctccc gagaggtgta tgcgtcagcg cgccgatgca cttagcgccg gttgctatcg gccggcggcc gtcccctttc ttgttggttt gctagtgaaa aatcacatct tttcatgtct atctattata tggttttaag tatttttgac actacccgac gtaagaaggc aatgttcaca tcaaatactc gccagaattt gaatagccca agaggaaacc agtaccgctg ccgctcaatt cctttgattg tgagaaacaa tagagatttt tttgcataga gatccctgga ggggttggtc gccatgaact ccagcgtgcc tcgcctcctc cctcctcgcc tcggcgggcg gcccccgccc tctctagctt tttgcaatgt attttctgcc attgagcggg atatgtgaac agatatttga caagttgtga acatttggct gattcatgaa aacattttgc aactagctaa cttgtaatct tattctaaaa ttagcactgg19/27 页attcttcttg atggcaggtg tcctacctgc caagatcgag tagcagatat tgaaattcaa tctaatttta tttgtattaa atactctcct tttcttgcct ccgcaactct acatgatact tagaaaaaac atgggaagtt tggaggattt attacggaat cctatctttt cctttaaaag tataggaaag ttaacaaaag cctcaatctt ggaaagtgag actcacctaa tcaggggcgg ccaccctaaa atttggccca cgagaaccgc gaaaccagaa aaaaggccac tgagctaagc agccacagca gcacgcatcg ctggctgccg gtctccccgg ctctcgactc tgcctccgcc ggctcccgct tctacgtcag cgccagcgtg tcctcccttc cacgactcct ccaatccccc gcggccaacg cctacaagcc aactacggct ctggaaaggg aaaacattgc cattccacag tcttgttgct cagcaaagtt caaaggtcag tgccctatgc agtagtgagt agtcagtact ttgagtgtag catgtgtgac aaattattaa ttattttctc tcaagttagc aaagaagaca ggagagtaga aaagaagtag ggttttgtaa atgattatgt tctaactttc gtaacttcaa tgttgtgaga tatattgcta catttcaatt tgaatttgta acaatatgac aatttggagc accaatgtgc cgatatttag cggttcttaa aaaagtagaa tttcttcatg aaaatcaggc gtttccttgt accttagagg aggggcatca aagtaggaat gtaaataatt tggttgttaa gaatatgtaa ttcaaattaa tattattcta accagtcttt caagttgggt cagtggtcgg <210>6 <211>8865 <212>DNA <213> 稻属水稻 (Orysa sativa L.) <220> <221>promoter <222>(1)..(2279) <220> <221>5’ UTRggccgagcga acagaaacta tcatgtaata caaaactgat caatcctatg atatataata atggagaatt ttctagtggg cccccccccc tagggttagg cctccgcctc tccgccttgg ccgcctccgc actcctgtcg gcctgggcaa gcggcgccgg tagacatttc cagtagtagt atgatggttt ttatgcataa tcttctactt atttaaatgt atatttttat atcaagtagg tcatactgag ttatagcttt tgttcgattc tgaataaaat gatgtatctt tac7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 8100 8160 8220 8280 8340 8400 8460 8520 8580 8640 8700 8760 8820 8880 8940 9000 9060 9120 9180 9240 9300 933331102051368 A CN 102051374序列表20/27 页<222>(2280)..(2240) <220> <221>CDS <222>(2241)..(3232)， (3233)..(5306) <220> <221>3’ UTR <222>(5307)..(5589) <400>6 gagtgtaatt agagcaaggt taacagtata gccaactagt caatctaata gcttattcat acaagtacta tactattaat cacacactgc gtcttggagt ctgtgctaca gttggctaca tctctctcct tatttatctc cttaaaatat gtttgcagtt aactgctctt aaagtggtgg tatttttctc ggtcctctcg ttcacataat tagttccttt gttctctagt ataagggatt cccttcattc taaattgatc tatatatagt ttttttaggt atttgtgttc atttattaag tctattcgtt atttgtgtgc atgcatgctt ccatgcacac aagtatttat aacccacatg ggctaggaaa tattggggat gatgcatgca ttgagtttgt gaaagagtta aatggaggga ttcttttact gcataatttt aggcacaacc aactatgacc tgattctatt aattattttc gtagtacaag ggagaaacgg gcctccgccc cctccgacgg ccagctctgg tctactttcg tggctgccaa actttgttgt gaaaatggaa agtaaggaag aaagttggga tcagcgttag caacacttaa ttagtttttc gtacgatcct tattttatta tttaaaataa acttttctta tcttttttat ggatgcatgc ttggtgtttg tataatgtta catgaccacg aaaagcctca cggccaccat tcggaggagg tcttgagatc gatcgtccgt gttaatagac ataccgtaca ttgtaggtac gagaaacaag gaatttgcac aacaccaaat ttggtcttgg tcgttttatt tctaaaatct gataaatggt gatgtttcat taaattatta attgtattta ggttaggggt aagaatttaa agtcagtcaa cccccaaggc atcccccaat gttcagttcc tcgccgtttc gctttgcaaa tcagcgccgt cagtagtcta catgttctga aatgtatttg ctctttatta tagtttcatt tgtacctata aaaaaaaagt tttaagcaca taaataggac aatataaggc ttttttaaca ttaggatgtt ggttatgact tattatatta cgagtctgcg cccaatcttc cttcctcccg atgggtgcgt tgatctcctt ggtgaacaat cgcaacttgc tagagaatcg tgattatctt ttcacttgat agtttgacta gaatccaaca32agcttcaatt acctggtccc aatctatagc ggcttatagc caatgggtta ttaacatttt tattcctaaa attggagtaa caatatcttg tgttagagta aaatacgtag ttgaaaatta actttttatt tccctctatt atgcatgcat tcctctacac ctaaactaca tatattttat aaggacggag aatgcagtgc ccaccgcgcc ttggtcgctg cccctgccca gccatggcaa ctttttcttc aaataaaaag actagtattt tgaagcttgg tgggggcagt aatttataga ttgaatatattatttatagc acctgtcata ccgctaccct ctgctattgt gagaactgct actttgtact tgatctatat atggacattg atttgctatt aatataatat atcaatttag ttatttaatt tttattattt ccataatata ataggcaatt tcatgttctc agataataat aatggaggga gaaatattag agtattattg gctgtccccc gctggcctgg tccctccact ccagttgatt ttgggctttc gttcagatcg cctgactgta agggggacaa aggtaaaatc aaaaaattag tttgataata60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860102051368 A CN 102051374序gtgttcaaaa gaaaaaaaag atctttatta ttatttttaa tttgaaatgt ctacgaaaat tgaaacattt atattattaa aggacacgga cttgtgcttg ggtaggtgct ccaggagtat tgccagcatg ccaccggatg tatcgatgac cctactcaca cattgcccaa gaacaaccca aattgctgag gaagacggtc agctgttctg gtacagaaaa tgaccaaggc cagcacaaca agccctgtca taatacacca acagctcctg aaattaactt ctccatcttt gcagttatat cgattttgcc ttggttcaac atgacgagtc gcaacaaagt tggccatagt ggagtaaact ttacaaggat tgtacttgag tgttactata tcaaaccgac taatactttg atactattcc gtctgtgata gcaagaagta gcatgaggca ttcattcatg aattctcagc caacagctga tccgaagcca gctctcatca caggccttcc aaggactgga tttgcccacc aaaatctatg ctcaaggtac gaacaccttg tatcaggtca atggaggagc tccatagtcg gtcagtgaaa aaagtcctca attagtgaga ctgctcagag atcaggctgc gccgaaaaga actcatccca tgaatgggtt cctcttgatt taaaaataat atgctcccct ccaaaactta agacgagcaa cagcatggct ttgcaaatca actggattgt tatatttccg列表aatttgatca aatataaatg cgaatgaata tatatagaga ggaacggggc tattgataga aaaagcgctt tattttcatt ttgatctgaa gagaagtaca tctcttgggc tggtgacatc cagcaacgtg ccgagacatc ggattccatc atggtggcca gatcgcagat cagtgccagg gatcattggt gttaactaat tgtgggaaag ccgggcatca gagtcaagtc cacctcaggc atgtcagcca ggacgatgat tttgtaaata aatgtttatt cacttgtgct ggtctgccga gaataatagt atcgtttgca gtatttgtga aaatatggaa cctgcaaccc agcaagaaac atttgcctgc aaattagtag aatttcaata gagggagtag aagtttacaa acttgtgaaa ctaaatatat gctgaagttt gtgaaaaaaa ttcccccctt ctgtctgtgg gagaacaaga aagctgggca cagtacatca ccagagggtc gcctatgatg agcgatgcca cgtcgtgtga cgacgtagta acccgtgctg ataaaggagc cctcaagctg actaccattg gtagctgtgt agcaatcagg gctaagagca gaaaatgatg caaaacccca aaattgcttt tccttctata catttttttt aacatgggag gactacaaga tacagttgat atcaaagata aatatgtggg aaggaaagcc tcctcttacc ggatctgaag gaaacgtttg21/27 页tgtttacttt agtttgacta attataaatt agttgaaaag aaaaacaccg tccttttttc taaagtaaaa tatgttccaa atccatgggc ctcatactct tggagttggt atcttctagc atgacgagct acagtcatgg ttgaggactg aatggtcctt ttgcttccaatttttctata ttataatatg agtgtacaaa gataaacctg atctataaga ttgcctaata gcactggaca gtatggtctt aggttcgcgc aagttgcagt ccatgaaatc gcggtatccg tccgtgatct tgaagcagat gcctccctca aactatggac gggcacaaca acagtagcag caagccctca ttgaggtttg gttttggagg aatttcagtg atagtattct aaaagaacct gtaattgtat aggaaacaac ggtacctttt ctctaaatct ttatttttct gatgacattt aaaggcggta cttgaaactg ttcaatacaa gtccctgagg ggtcttgtcg ttatttccag tgttacaatg aagggttgga1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200gatacggagt tcaattacga ctgtggggat aaaatgggca ccacagcatt ctcagaacta agcagggcag tgttgaagac gaaaccctga gaaaactgga gcttatctgt cacagcacaa tatcatctct agtatcagat tttcaagctg tttctcaccg agaaaagata ggattgcctt tgctgcgatt ctcgatggtg acttgcttat tcccggcgat ggatagctga aggttttgct aatgagaagc aagggttaac ccaggaaaga33102051368 A CN 102051374序catactttaa ggaaggtaaa tcgaagagaa aagtccgtcg tgaacttggc attcattcaa agagacatat cagaaatttc taagggagac gcatacttgg agaagccaat tcttatccca agattgttga agcttgccat cctccattga ctgaatttat agctgtctgg agctaaccat cttcattgtt taataaagga ctgaaggatt gctttttgga tcgaaggtct gtgatggggc aaccaaaagt gagaacttac attattgctc tggttccatc taataaaagg tataaatgat tttctagcag caaaattacg tactgtaatg tcaaggtata cttttaacag taattggatc ctattcatag tttccatcca acgagaggcg tcaactcaca aacgtttcaa ttttattact actgtcgatg tcaagtgaga ctatgggata gacggagata caaaattccc atatgtcagg agggaataaa taaaaacccg agaaaaaggt ggaatcatca atacaagctc gtaccttggc caactcactg caagttggag atctgtaaca ttccctcacc catccttgag caagagtctt caagaatgca atttggcatc agaagcaata atttgttgat caatcatctg accttgcaaa atagttgatt gagatctccg gggattgcta ttggctggtg ctttgcacta ttgtgatttt tctggtaagc tatgcatgca tatgccatta ctgtgctagt tcttttcttt agtggcggcg列表tagtacgtcc tggttcttga gacactggca gatccaatcg tgtttgggaa tggatcttga ttttactcaa agaaacttga agtcaatagt aggggctgag gaaaaacaaa tgaaagcact caggccttca agggtggtga tgcagactct ccgcgcctcc agtggatcac ctgaaacttt cacttagtgc tggacagtga gcttctttgc tcgaaatcat aaaatctccg ttgtaaatga ctgcatgaga tctattatta gatggcatag ttacagtgtc ttattatact gccacaattt tgctgccatt tgtaaaactt tatatttttt ttcgttaagt ccgttatctt aagattcaga aaaattggaa tcttctttat gaggcgagtg catggagcat atacatcatg gatgactgca tggaagttca cctgaaccat ggactggaag gtatttgagc gtacttggaa ccagctaaaa gttgcctcaa ggagcccgca ccgtgtactg tcagttgaca taccttcaaa ggccatcaat aagatatctt cagcatcact ggagatcctc agcgaagcag tggggaaatc acctttagtg tgaaatgcgg tgaggtgcat tttgaaggtt agtaaaattg ctctcttaga catattgcta tgttcagttg tatattcggt ccatgagtgc gctcctctat acctaaattt tctttgccag ttttagttta atccaatata aaaatgctac ccgtgctatt cccgtcttct gcggcgagtc22/27 页gttgcagagg ggcagcaatg tccaaatcaa ccaagcaata acaaaaggcc gtgccattcc ggtttgaaag atccgacgaa actcttgaca cggatcatta gaaaaaagta aagaaaggat tcagggattg gggctaagga caattacagt gatgagaatt gtcgcccttg actctcaaca cacattttac gatcaggaca gtcattccag ccgaagctca tttaaagact ctcaaagtta aatactgaga ctgcaaatcg atatattgtt caacgtacca tgttttctat tattgaactc ggtatttttt tattggtgcc cgtgtattag aagtttgatt atcagctaaa attaatgggc tacaatttgt gatatcacgt tcccgcaccgagaaggaact gttcatgaca gtggttggtg caaagcagtg tcactgacgg atacaggtgc tgtcaaatgc tccaagattc gacctgccta aacacacgga tcgcctcaag aaaggcgcaa gaagtagctg aatataacaa agctgtggtc ggcgacatgc aagctaccca gttcttagga ttcgcctttt aataataaat aagctgcttc atgccagcac gaaatccttg accaagttcc ggcatcgtca aggcttcccc ataaaatagg tcacttgtca caagaaacca tatttatggt ttaagatttg tgttcacagt cgcgtccagt ttcagccgga ctagtttctc caaacatgtc gaaattttac tttttccttt ggaccggcga344260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6540102051368 A CN 102051374序ggcgagtgag cccactttgc gggcggagct tcacctgatt ccccaccggc cctcaacatc gatggaggag atccaagccc cgacgccctc ctcctccacc cggctccctc aggagctaga acggtcccgc cgggaagaag cgtgacagca agaattgtag ccaaatttat tcgcctacat ttctgaaaaa caatctctat tgtccagaac acttatatta agtaaaacaa ctgtttgtta ttttagatac agagaacatg cagactcctc cattcctgtg gtgcatcaga gtgcaccaat aggcagccag catccacgag gtaacataga ttgcagccga agattgagag tgtcattctg ggagagctct tcctcttcca caagcgaggc gccatccctc tcctcctcct gtctcgaagc tcgctcactg atcgtcatcg gccgaggagc tcctccggcg ttcgacatca ctgatgcatc ctcacgcccc atgggagaaa atagcacggt tagcattttt tttatgccaa aaaaccttcc attgactgga gaagctccat tgtccagtat catgtatcaa ttatataagg atgcctgaca tatctgatgt ttgtgaattg aagcatcact aactctccct gaggaagcat ggccaccttg tgcctccttg tcagattttg agtggtgaaa gtaggatttt actggagtac tccct列表tgcgaagctc tgaagctagc acgatggagc cactccatct cgtggcagcc actgtggaag gctgaacaag tgagctcgag ccccgcccct cgccaaggat cgagttcgtc atgtccgtcc ggtcccgccg aacgggaaaa taaaatttca atatttgtaa ggcaactggt tggttgaaca cgtccctgct tctccagatg ctatgatctt tttctggagc gttaattaat aagaaaaaaa tctcaaatac atgcgagtga aacaatcagc aagccatcct ggagatacct gctctagctc gcgcctcgag cagttgaatg agttgagttg ccttctgcag gtccttgcca tcatcttcgt ggccctctct ttcgcgtgga ccaagcccaa gaggccaccg aagcacaacc gagcaggagg cggatgcgtg tccctatctg ctcctcacgc accaccatgc ttgccgcagc ccacttgctt aaaaagagat atggcaccgc tggcatggat gtcattaacg ggtaattaat actccctgaa atatttcatt ttctgaattc tacaccagat tacagctttg atacacagga tatgtacctg cctgaaactc agcatcattg gttcgtaggc tgacccttgc tatcgagaat catgaaacct cagagaattg atcaccttct acatatctca tatttcaaac23/27 页gccctgggtg tttcctcatc caccagatct ccccacagcc atcccacctc atgggccaac aaatcctcca aggtgctccg ccctgcttgc tcactccctc tcatctactt tcgcacgcta acgacttgct ctcatcggtg ggatgaaaaa tacgaataga ccaataaacc tataaatggg tgcaaccatt tgctttagtt aaaaacatca tggactcggg gaaatcacca atagaccact ttacaaaact aacaaacaag tctacagggt atcctcccat tcaattctca ttgcagagaa gcgttgacgt gaacttatag tcatgttagt gcatgcattg gcgtctctcc tcacttacac <210>7 <211>40 <212>DNAcccaagtgtc ctactgctgt gccaccaccg ctaccctcat cagcccctgc agctccgcgc gcgggaggaa cgctcattga tctcctcctg ctgatttgtc agtcgcagat acctacgact gtcgctcgcc gaaggaagaa tccaatttcg ctgaatcaac tacaaatatt gcgtccttct agtctgaaac ccaaacaaaa ccaagaatgg atccagttat atggtgagtt agagttcaca gtgttaattc tgatctcctc gcagcctgga aaatgaagcc ctcgctgcag gatggaacat ttctgatctc atgttgaatt gttcaagttt agggctctag aggtttgcaa6600 6660 6720 6780 6840 6900 6960 7020 7080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 8100 8160 8220 8280 8340 8400 8460 8520 8580 8640 866535102051368 A CN 102051374序列表24/27 页<213> 人工序列 <400>7 ttttggcgcg ccgccagtgt <210>8 <211>40 <212>DNA <213> 人工序列 <400>8 ttttggcgcg ccgaacagcc <210>9 <211>42 <212>DNA <213> 人工序列 <400>9 ttttggcgcg ccgcaagatc <210>10 <211>42 <212>DNA <213> 人工序列 <400>10 ttttggcgcg ccagggacag <210>11 <211>23 <212>DNA <213> 人工序列 <400>11 gaagctctga tcaacggtat <210>12 <211>23 <212>DNA <213> 人工序列 <400>12 tctttgatca tcttcgggat <210>13 <211>23 <212>DNA <213> 人工序列 <400>13 tgaacttcca cgattggatcccaccaacca cagtaataaa40tgaggaagca gaacatcgtc40agtaccatca cgagtaatag ca42aatgacagtg taagtgagtt tg42tcc23acg23cac3623102051368 A CN 102051374序列表25/27 页<210>14 <211>25 <212>DNA <213> 人工序列 <400>14 acatggttct tgaatacatc atgtc <210>15 <211>20 <212>DNA <213> 人工序列 <400>15 ttcgaggccc taccaagaca <210>16 <211>21 <212>DNA <213> 人工序列 <400>16 catggaaggc tatccttggt a <210>17 <211>12 <212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa <400>17 Gly Leu Pro Gly Gly Gly Lys 1 5 <210>18 <211>12 <212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa <400>18 Asn Lys Lys Tyr Leu Ile Val 1 5 <210>19 <211>15 <212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa <400>19 Asp Leu Gly Gly Arg Ile Ile 1 5252021L.) Thr Thr Val Ala Arg 10L.) Ile Asp Asp Ile Trp 10L.) Met Thr Thr Arg Leu Asn Ser Ile 10 1537102051368 A CN 102051374序列表26/27 页<210>20 <211>20 <212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa L.) <400>20 Glu Asp Asn Ser Cys Tyr Asp IIe Val Asn Met Cys Tyr Gly Met Pro Leu Ala Leu Ile 1 20 <210>21 <211>11 <212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa L.) <400>21 Gly Phe Gly Gly Val Gly Lys Thr Thr Ile Ala 1 5 10 <210>22 <211>11 <212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa L.) <400>22 Lys Ser Tyr Ile Leu Leu Ile Asp Asp Ile Trp 1 5 10 <210>23 <211>13 <212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa L.) <400>23 Gly Gly Arg Ile Ile Val Thr Thr Arg Phe Gln Ala Val 1 5 10 <210>24 <211>19 <212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa L.) <400>24 Glu Gln Val Pro Glu Glu Ile Trp Lys Ile Cys Gly Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val 1 5 10 15 <210>25 <211>133851015102051368 A CN 102051374序L.)列表27/27 页<212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa <400>25 Cys Leu Leu Tyr Leu Ser Ile 1 5 <210>26 <211>13 <212>PRT <213> 稻属水稻 (Orysa sativa <400>26 Lys Thr Phe Gln Val His Asp 1 5Phe Pro Lys Gly Trp Lys 10L.) Met Val Leu Glu Tyr Ile 10