用作1-磷酸鞘氨醇(S1P)激动剂的二唑取代的吲唑衍生物 本发明涉及具有药理学活性的新的噁二唑衍生物，它们的制备方法，含有它们的药物组合物以及它们在治疗各种疾病中的用途。
l-磷酸鞘氨醇(S1P)是一种由鞘氨醇激酶磷酸化鞘氨醇而形成的生物活性类脂介体，并且发现其在血液中浓度较高。许多类型细胞都生产并分泌S1P，包括如血小板和肥大细胞等那些造血起源的细胞(Okamoto等，1998 JBiol Chem 273(42)：27104；Sanchez和Hla 2004，J Cell Biochem 92：913)。其生物作用较广，包括对细胞增殖、分化、运动性、血管化的调节以及对炎症细胞和血小板的活化(Pyne和Pyne 2000，Biochem J.349：385)。目前记载有五种亚型的S1P响应受体，S1P1(Edg-1)、S1P2(Edg-5)、S1P3(Edg-3)、S1P4(Edg-6)和S1P5(Edg-8)，它们形成了受体的G-蛋白质偶联的内皮分化基因家族的一部分(Chun，等，2002 Pharmacological Reviews 54：265，Sanchez and Hla2004 J Cellular Biochemistry，92：913)。该5种受体显示不同的mRNA表达，其中S1P1-3被广泛表达，S1P4被表达在淋巴组织和造血组织上，S1P5主要表达在脑中并较低程度地表达在脾脏中。它们通过G蛋白质的不同亚类发出信号，以促成各种生物响应(Kluk和Hla，2002 Biochem et Biophysica Acta1582：72，Sanchez和Hla 2004，J Cellular Biochem 92：913)。
提出的S1P1受体的作用包括运输淋巴细胞、诱导/抑制细胞因子，和对内皮细胞的作用(Rosen和Goetzl，2005 Nat Rev Immunol.5：560)。S1P1受体的激动剂已经被用于许多自身免疫和移植的动物模型中，包括MS的试验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型，以减少诱导疾病的严重性(Brinkman等2003 JBC 277：21453；Fujino等2003 J Pharmacol Exp Ther 305：70；Webb等2004 J Neuroimmunol 153：108；Rausch等2004 J Magn Reson Imaging20：16)。报导认为这种活性通过S1P1激动剂对淋巴细胞经淋巴系统的循环的作用而介导。用S1P1激动剂进行治疗产生了第二淋巴样器官如淋巴结内部淋巴细胞的隔离(sequestration)，包括动物模型中的可逆外周淋巴细胞生成(Chiba等1998，J Immunology 160：5037，Forrest等2004 J Pharmacol ExpTher 309：758；Sanna等2004 JBC 279：13839)。关于激动剂，已公开的数据表明化合物治疗诱导了S1P1受体从细胞表面因内化的损失(Graler和Goetzl2004FASEB J18：551；Matloubian等2004 Nature 427：355；Jo等2005ChemBiol 12：703)，以及这种S1P1受体在免疫细胞上的减少有助于减少T细胞从淋巴结运动回到血流。
S1P1基因缺失导致了胚胎致死现象。检查S1P1受体在淋巴细胞迁移和运输中的作用的实验已经包括标记的S1P1缺失的T细胞向辐射后的野生型小鼠的过继转移。这些细胞显示从第二淋巴样器官的流出减少(Matloubian等2004 Nature 427：355)。
S1P1还被认为具有内皮细胞连接调节的作用(Allende等人2003102：3665，Blood Singelton等人2005FASEB J 19：1646)。关于该内皮作用，已经报导了S1P1激动剂对孤立的淋巴结有作用，而孤立淋巴结可能对免疫病变有调节作用。S1P1激动剂造成了淋巴窦的内皮间质“门”的关闭，而所述淋巴窦的内皮间质“门”排空(drain)淋巴结并防止淋巴细胞流出(Wei wtal 2005，Nat.Immunology 6：1228)。
免疫抑制化合物FTY720(JP11080026-A)已经显示减少动物和人体内的循环淋巴细胞，在免疫病变的动物模型中具有疾病调节活性，并且减少了在缓解复发(relapsing remitting)的多发性硬化症中的缓解速率(Brinkman等2002JBC 277：21453，Mandala等2002 Science 296：346，Fujino等2003JPharmacology and Experimental Therapeutics 305：45658，Brinkman等2004American J Transplantation 4：1019，Webb等2004J Neuroimmunology 153：108，Morris等2005 EurJ Immunol 35：3570，Chiba 2005 Pharmacology andTherapeutics 108：308，Kahan等2003，Transplantation 76：1079，Kappos等2006New Eng J Medicine 335：1124)。该化合物是一种前药，其在体内由鞘氨醇激酶磷酸化得到对S1P1、S1P3、S1P4和S1P5受体具有激动剂活性的分子。临床研究表明用FTY720治疗在治疗的头24小时内导致心动过缓(Kappos等2006 New Eng J Medicine 335：1124)。根据许多基于细胞的实验和动物实验，认为该心动过缓是因为对S1P3的激动作用。这些实验包括使用不同于野生型小鼠的S1P3敲除动物，其在给药FTY720和使用S1P1选择性化合物后并没有显示出心动过缓。(Hale等2004Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters14：3501，Sanna等2004JBC 279：13839，Koyrakh等2005American JTransplantation 5：529)。
下列专利申请描述了噁二唑衍生物作为S1P1激动剂：WO03/105771、WO05/058848、WO06/047195、WO06/100633、WO06/115188和WO06/131336。
下列专利申请描述了吲哚-噁二唑衍生物作为抗微小核糖核酸病毒药物(antipicornaviral agents)：WO96/009822。下列专利申请描述了吲哚-甲酸衍生物分别作为白细胞三烯受体拮抗剂、杀虫剂和农药杀菌剂：WO06/090817、EP 0439785和DE 3939238。
国际专利申请WO06/001463公开了多种作为S1P1受体激动剂的化合物。
国际专利申请PCT/EP2007/064185公开了作为S1P1受体激动剂的吲哚-噁二唑化合物。
现已发现一类新结构的化合物，其提供了S1P1受体的激动剂。
因此，本发明提供式(I)化合物或其盐：
其中
R5和R6中的一个为氢或R2，另一个为(a)
R3和R4之一为(b)
A为苯基或5或6-元杂芳环；
R1为氢或至多3个取代基，所述取代基独立地选自：卤素、C(1-4)烷基、C(1-4)烷氧基、C(5-7)环烷基、C(5-7)环烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基、氰基、苯基、5或6元杂芳环、哌啶基和吡咯烷基；
R2为氢或至多3个取代基，所述取代基独立地选自：卤素、C(1-4)烷基、C(1-4)烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基和氰基；
R7为氢或卤素；
Z为C(1-4)烷基，其可任选插入(interrupt)一个N或O，其可任选在碳上被至多4个取代基取代，所述取代基独立地选自：卤素、甲基和羟基，条件是没有碳原子被两个羟基取代。
因此，本发明提供式(IA)化合物或其盐：
其中A、R：、R2、R5、R6、R7和Z如式(I)定义。
因此，本发明提供式(IB)化合物或其盐：
其中A、R1、R2、R5、R6、R7和Z如式(I)定义。
因此，本发明提供式(II)化合物或其药学上可接受的衍生物：
其中
R5和R6中的一个为氢或R2，另一个为(a)
R3和R4之一为氢，且另一个为(b)
A为苯基或5或6-元杂芳环；
R1为氢或至多3个取代基，所述取代基独立地选自：卤素、C(1-4)烷基、C(1-4)烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基、氰基，和任选被取代的苯基或任选被取代的5或6元杂芳环；
R2为氢或至多3个取代基，所述取代基独立地选自：卤素、C(1-4)烷基、C(1-4)烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基和氰基；
R7为氢或卤素；
Z为C(1-4)烷基，其任选插入N或O，且任选被卤素或甲基取代。
当R1为苯基或5或6元杂芳环时，其可被至多3个取代基取代，所述取代基选自：卤素、C(1-4)烷基、C(1-4)烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲基和氰基.
应理解，对于式(II)化合物，当R4为(b)时，R3不存在，且芳香环中的化学键如上述式(IB)中所述排列。
术语“烷基”作为一个基团或基团(如烷氧基或羟基烷基)的一部分，是指所有异构形式的直链或支链烷基。术语“C(1-4)烷基”是指如上定义的烷基，其含有至少1个且至多4个碳原子。这样的烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、1-甲基丙基或2-甲基丙基。这样的烷氧基地实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基或1-甲基丙氧基。
适合的C(5-7)环烷基包括环戊基、环己基和环庚基。
适合的C(5-7)环烷氧基包括环戊氧基、环己氧基和环庚氧基。
本文中所用的术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)，且术语“卤代”是指卤素：氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)和碘(-I)。
术语“杂芳基”表示包含一个或多个杂原子的不饱和环。当该术语杂芳基表示5-元基团时，其包含选自O、N或S的杂原子，且可任选再含有1-3个氮原子。当杂芳基表示6-元基团时，其包含1-3个氮原子。这样的5或6元杂芳环的实例包括吡咯基、三唑基、噻二唑基、四唑基、咪唑基、吡唑基、异噻唑基、噻唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、呋咱基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基和三嗪基。
本发明的一个实施方案为式(I)化合物，其中
A为噻吩、吡啶基或苯基；且
R1为两个取代基，所述取代基独立地选自：氯、溴、异丙氧基、丙氧基、甲氧基、1-甲基丙氧基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、环己基、哌啶、吡咯烷基、乙基、2-甲基丙基、苯基和环戊氧基；且
R2为氢；且
R7为氢；且
Z为亚乙基或亚丙基，各自任选被偕-二甲基取代。
本发明的一个实施方案为式(I)化合物，其中
R6为(a)，且R5为氢；且
A为噻吩、吡啶基或苯基；且
R1为两个取代基，所述取代基独立地选自：氯、溴、异丙氧基、丙氧基、甲氧基、1-甲基丙氧基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、环己基、哌啶、吡咯烷基、乙基、2-甲基丙基、苯基和环戊氧基；且
R2为氢；且
R7为氢；且
Z为亚乙基或亚丙基，各自任选被偕-二甲基取代。
本发明的一个实施方案为式(IA)化合物，其中
R6为(a)，且R5为氢；且
A为苯基；且
R1为两个取代基，所述取代基独立地选自：氯、异丙氧基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、哌啶、乙基和苯基；且
R2为氢；且
R7为氢；且
Z为亚乙基或亚丙基。
本发明的一个实施方案为式(IA)化合物，其中
R6为(a)，且R5为氢；且
A为苯基；且
R1为氯和异丙氧基；且
R2为氢；且
R7为氢；且
Z为亚乙基或亚丙基。
本发明的一个实施方案为式(IB)化合物，其中
R6为(a)，且R5为氢；且
A为苯基；且
R1为两个取代基，所述取代基独立地选自：氯、异丙氧基和氰基；且
R2为氢；且
R7为氢；且
Z为亚乙基或亚丙基。
本发明的一个实施方案为式(I)化合物，其中
R5为(a)，且R6为氢；且
A为噻吩、吡啶基或苯基；且
R1为两个取代基，所述取代基独立地选自：氯、溴、异丙氧基、丙氧基、甲氧基、1-甲基丙氧基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、环己基、哌啶、吡咯烷基、乙基、2-甲基丙基、苯基和环戊氧基；且
R2为氢；且
R7为氢；且
Z为亚乙基或亚丙基，各自任选被偕-二甲基取代。
本发明的一个实施方案为式(IA)化合物，其中
R5为(a)，且R6为氢；且
A为苯基；且
R1为氯和异丙氧基；且
R2为氢；且
R7为氢；且
Z为亚乙基。
本发明的一个实施方案为式(IB)化合物，其中
R5为(a)，且R6为氢；和/或
A为苯基；且
R1为两个取代基，所述取代基独立地选自：氯、异丙氧基、苯基和三氟甲基；且
R2为氢；且
R7为氢；且
Z为亚丙基。
本发明的一个实施方案为式(II)化合物，其中
R3为(b)；和/或
R5为(a)，且R6为氢；和/或
A为任选被取代的噻吩或苯基；和/或
R1为氢、卤素、C1-4烷氧基或三氟甲基；和/或
R2为氢；和/或
Z为亚乙基。
本发明的另一个实施方案为式(II)化合物，其中
R3为(b)；和/或
R5为(a)，且R6为氢；和/或
A为被苯基取代的噻吩；和/或
R1为氢、卤素、C1-4烷氧基或三氟甲基；和/或
R2为氢；和/或
Z为亚乙基。
本发明包括所有旋光异构体，例如式(I)化合物的立体异构体包括对映异构体、非对映异构体及其混合物，如外消旋体。不同的立体异构体可通过常规方法将一个与另一个分离或拆分，或任何给定的异构体可通过常规立体选择或不对称合成获得。
本发明的适合的化合物为：
3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸
3-(5-{5-[3-氯-4-(乙氧基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸
3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸
4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸
3-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸
4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸
3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸
3-(5-{5-[3-氯-4-(丙氧基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
3-[5-(5-{3-氯-4-[(三氟甲基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸
3-(5-{5-[4-环己基-3-(三氟甲基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
3-(5-{5-[4-(甲氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸
3-(5-{5-[3-氯-4-(甲氧基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
3-(5-{5-[3-乙基-4-(1-哌啶基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
3-{5-[5-(4-环己基-3-乙基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基]-1H-吲唑-1-基}丙酸
3-(5-{5-[3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
3-[5-(5-{3-溴-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸
3-(5-{5-[3-氯-4-(2-甲基丙基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
4-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丁酸
3-{5-[5-(2-氰基-4-联苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基]-1H-吲唑-1-基}丙酸
3-(5-{5-[3-氯-4-(1-吡咯烷基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
4-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸盐酸盐
4-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丁酸盐酸盐
4-(5-{5-[2-(三氟甲基)-4-联苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丁酸
4-(5-{5-[2-(三氟甲基)-4-联苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-2H-吲唑-2-基)丁酸
3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸
3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丙酸
3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丙酸
4-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸
4-(4-{5-[3-乙基-4-(1-哌啶基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丁酸
4-(4-{5-[2-(三氟甲基)-4-联苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丁酸
4-[4-(5-{3-氯-4-[(三氟甲基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸
3-(4-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
4-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸
4-(4-{5-[4-苯基-5-(三氟甲基)-2-噻吩基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丁酸
4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丁酸
3-{5-[5-(3-氰基-4-{[(1S)-1-甲基丙基]氧基}苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基]-1H-吲唑-1-基}丙酸钠盐
3-{5-[5-(3-氰基-4-{[(1R)-1-甲基丙基]氧基}苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基]-1H-吲唑-1-基}丙酸钠盐
3-(5-{5-[3-氰基-4-(环戊氧基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸
4-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸
4-(5-{5-[4-苯基-5-(三氟甲基)-2-噻吩基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丁酸
4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丁酸
3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸
3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]-2，2-二甲基丙酸
3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸
3-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸
3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸
4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丁酸
3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸
3-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸
4-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丁酸
4-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丁酸
或其盐。
式(I)化合物的药学上可接受的衍生物包括式(I)化合物的任何药学上可接受的盐、酯或该酯的盐，当向接受者给药后能够(直接或间接)提供式(I)化合物或其活性代谢产物或残余物。
式(I)化合物的一些酯在本文中描述为合成一些所述实施例的中间体。这样的酯也可以显示作为S1P1激动剂的活性，且由此构成本发明的一部分。
式(I)化合物可形成盐。应理解在药物中应用式(I)化合物的盐应该是药学上可接受的。适合的药学上可接受的盐对于本领域技术人员将是明显的，且包括描述于J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19中的那些，例如与无机酸(如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸或磷酸)形成的酸加成盐；与有机酸(如琥珀酸、马来酸、乙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、苯甲酸、对甲苯磺酸、甲磺酸或萘磺酸)形成的酸加成盐。一些式(I)化合物可与一当量或更多当量的酸形成酸加成盐。本发明在其范围内包括所有可能的化学计量和非化学计量形式。盐也可以从药学可接受的碱制备，所述碱包括无机碱和有机碱。源自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、三价锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。源自药学可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺盐；取代的胺盐，包括天然存在的取代胺盐；和环胺盐。特定的药学上可接受的有机碱包括精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙基胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-吗啉、N-乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、三(羟基甲基)氨基甲烷(TRIS，氨基丁三醇)等。盐也可由碱性离子交换树脂，例如聚胺树脂形成。当本发明的化合物为碱性时，盐可以从药学上可接受的酸制备，所述酸包括无机酸和有机酸。这样的酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、乙二磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。
式(I)化合物可以晶体或非晶体形式制备，且如果为晶体可任选为水合物或溶剂合物。本发明在其范围内包括化学剂量的水合物或溶剂合物，以及含有不同量的水和/或溶剂的化合物。
在另一个方面，本发明提供了制备式(I)化合物的方法。本领域技术人员将理解方案1-8通过使用适合的中间体也适用于式(I)化合物的制备，其中R6为(a)(而不是所述的R5为(a))。式(IV)的化合物在文献中已知，且其中R6为(a)或R5为(a)的异构体是商购的。
可以用于制备式(IA)化合物的一个路线见方案1。
方案1
式(III)化合物可通过用水合肼处理转化为式(IV)化合物，或者式(IV)化合物可商购或可按文献中所述制备。
式(IV)化合物可通过在高温(如50℃)下，在溶剂(如甲醇或乙醇)中用羟胺盐酸盐和适合的碱(如碳酸氢钠)处理转化为式(V)化合物。
式(V)化合物可以在EDAC和HOBt存在下，在适合的溶剂(如DMF)中用式(VI)的羧酸处理转化为式(VII)化合物。该反应通常在高温(如50-80℃)下进行。通常，将酸(VI)、EDAC和HOBt在室温搅拌一段时间，然后加入式(V)化合物。式(VI)的酸是商购的或可通过下述许多方法制备。
式(VII)化合物可通过在碱(如碳酸铯)存在下，在溶剂(如DMF或DMPU)中用烷基化剂(VIII)处理转化为式(IX)化合物。所述反应可在高温下，如80℃或在微波反应器中如140℃的温度下进行。烷基化剂(VIII)通常是商购的，或可使用标准方法制备。
式(IX)化合物可通过在醇溶剂(如乙醇或甲醇)中用碱(如氢氧化钠水溶液)处理转化为式(IA)化合物。可加入共溶剂，如THF以帮助溶解。该水解反应可在室温或高温(如50-80℃)下进行。或者，该转化可使用固体氢氧化钠在乙醇中在微波反应器中，在温度如100℃下进行。或者，所述反应可在微波反应器中，使用二甲基胺在乙醇中并加入水，在温度如160℃下进行。
(VII)和(VIII)生成(IX)的反应也可产生异构的式(X)化合物(方案2)。如上所述式(VII)化合物在溶剂(如DMF)中用式(VIII)烷基化剂和碱(如碳酸铯)处理产生式(IX)和(X)化合物的混合物，它们通常通过色谱法分离。
方案2
式(X)化合物可通过方案3中所述的水解步骤转化为式(IB)化合物。
方案3
或者，式(IA)和(IB)化合物可通过方案4、5和6中所述的路线制备。式(XI)和(XII)化合物可从式(IV)化合物通过在碱(如碳酸铯)存在下在溶剂(如DMF)中与式(VIII)烷基化剂反应来制备。通常，所述反应在高温(如80℃)下进行。在一些情况下，化合物(XI)和(XII)通过色谱法分离，而在其它情况下二者的混合物用于随后产生(IX)和(X)的混合物的反应中，(IX)和(X)的混合物通常可通过色谱法分离。
方案4
式(XI)化合物可如方案5所述转化为式(IX)化合物。
方案5
式(XI)化合物可通过在溶剂(如乙醇)中，在高温(如50℃)下用羟胺盐酸盐和碱(如碳酸氢钠)处理转化为式(XIII)化合物。
式(XIII)化合物可通过在EDAC和HOBt存在下，在适合的溶剂(如DMF)中用式(VI)羧酸处理转化为式(IX)化合物。所述反应通常在高温(如50-120℃)下进行。有时，将酸(VI)、EDAC和HOBt在室温搅拌一段时间，然后加入式(XII)化合物，或者所有试剂可一起混合并加热。式(IX)化合物可如上所述转化为式(IA)化合物。
式(XII)化合物可如方案6中所述转化为式(X)化合物。
方案6
式(XII)化合物可通过在溶剂(如乙醇)中，在高温(如50℃)下用羟胺盐酸盐和碱(如碳酸氢钠)处理转化为式(XIV)化合物。
式(XIV)化合物可在EDAC和HOBt的存在下，在适合的溶剂(如DMF)中用式(VI)羧酸处理转化为式(X)化合物。所述反应通常在高温(如80-120℃)下进行。酸(VI)、EDAC和HOBt可在室温下搅拌一段时间，然后加入式(IX)化合物，或者所有试剂可一起混合和加热。式(X)化合物可如上所述转化为式(IB)化合物。
式(XI)化合物，其中Z为-CH2-CH2-(如式(XVIII)化合物所示)，也可通过方案7中所述的路线制备。
方案7
式(XV)化合物可通过在溶剂(如氯仿)中，在5℃-15℃的温度下用乙酸酐处理，然后在室温至80℃的温度下用碱(如乙酸钾)和亚硝酸异戊酯处理转化为式(XVI)化合物。
式(XVI)化合物可通过在碱(如DBU)存在下且在溶剂(如乙腈)中，在回流温度下用2-丙烯酸乙酯处理转化为式(XVI)化合物，而避免形成异构体(XIX)：
式(XVII)化合物可通过在催化剂(如Pd2(dba)3)和配体(如DPPF)存在下，在溶剂(如1，4-二噁烷)中，在回流温度下用二氰基锌处理转化为式(XVIII)化合物。
或者，式(XVI)化合物可通过在催化剂(如Pd(PPh3)4)存在下，在溶剂(如NMP)中，在温度(如80℃)下用二氰基锌[Zn(CN)2]处理转化为式(IV)化合物。然后式(IV)化合物可以使用与将式(XV)化合物转化为式(XVII)化合物使用的相似方法转化为式(XVIII)化合物。
式(XIII)化合物可根据方案8所述的路线转化为式(IX)化合物：
方案8
式(VI)化合物可通过在DMF存在下，在溶剂(如二氯甲烷)中，在室温下用草酰氯处理转化为式(XIX)化合物。
式(XIII)化合物可通过在碱(如三乙胺)存在下，在溶剂(如二氯甲烷)中，于0℃，用式(XX)化合物处理转化为式(XXI)化合物。
式(XXI)化合物可通过在溶剂(如乙腈)存在下在100℃加热转化为式(IX)化合物。
″或者，式(XIII)化合物可通过在溶剂(如乙腈)中，在室温至110℃的温度下用式(XX)化合物和三乙胺处理转化为式(IX)化合物″。
因此，式(I)化合物和它们药学上可接受的盐用于治疗通过S1P1受体介导的病症或疾病。尤其是，式(I)化合物和它们药学上可接受的盐用于治疗多发性硬化、自身免疫性疾病、慢性炎性病症、哮喘、炎性神经病、关节炎、移植、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、红斑狼疮、牛皮癣、缺血-再灌注损伤、实体肿瘤和肿瘤转移、与血管发生有关的疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒病、炎性肠病、胰岛素和非胰岛素依赖性糖尿病(下文中称为“本发明的疾病”)。
应当理解本文中所用的″治疗″包括预防以及确定症状的减轻。
因此，本发明还提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用作特别是治疗由S1P1受体所介导的病症或疾病的治疗物质。特别是，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用作治疗多发性硬化症、自身免疫性疾病、慢性炎性疾病、哮喘、炎性神经病、关节炎、移植、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、红斑狼疮、牛皮癣、缺血-再灌注损伤、实体肿瘤和肿瘤转移、与血管发生有关的疾病、血管疾病、疼痛病症、急性病毒病、炎性肠病、胰岛素和非胰岛素依赖性糖尿病的治疗物质。本发明还提供了治疗哺乳动物包括人中由S1P1受体所介导的病症或疾病的方法，所述方法包括给药于患者治疗上安全且有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
另一方面，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由S1P1受体所介导的病症或疾病的药物中的用途。
为了在治疗中使用式(I)化合物，通常根据标准的药学实践将它们配制成药物组合物。本发明还提供了药物组合物，其包括式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
在另一方面，本发明提供了制备药物组合物的方法，所述方法包括将式(I)化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或赋形剂混合。
本发明的药物组合物可以合适地通过在环境温度下以及大气压力下混合制备，通常适合于口服、肠胃外或直肠给药，并且可以以片剂、胶囊、口服液体制剂、粉剂、粒剂、锭剂、可重构粉剂(reconstitutable powders)、可注射或可输注的溶液或悬浮液或栓剂的形式存在。通常优选口服给药的组合物。
本发明化合物对于S1P1受体的效能和功效可以通过如本文所述的在人克隆的受体上进行的GTPγS试验测定，或通过酵母结合试验测定，使用本文所述的功能试验也已经证明描述的式(I)化合物对于S1P1受体有激动活性。
对于口服给药的片剂和胶囊可为单位剂型，并且可含有常规赋形剂，如粘合剂(如预胶化的玉米淀粉，聚乙烯吡咯烷酮或羟基丙基甲基纤维素)；填充剂(如乳糖，微晶纤维素或磷酸氢钙)；压片润滑剂(如硬脂酸镁，滑石或二氧化硅)；崩解剂(如马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠)；和可接受的润湿剂(如月桂基硫酸钠)。片剂可通过通常的药物实践中熟知的方法进行包衣。
口服液体制剂可以是例如含水或含油悬浮液、溶液、乳液、糖浆或酏剂的形式，或者可以以干产品的形式存在，这种干产品在使用前用水或其它合适的载体(vehicle)重构(reconstitution)。所述液体制剂可以含有常规添加剂例如助悬剂(如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)，乳化剂(如卵磷脂或阿拉伯树胶)，非水载体(其可以包括食用油如杏仁油，油酯，乙醇或分馏植物油(fractionated vegetable oils))，防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)，以及如果需要的话，该制剂还可以包括常规调味剂(flavouring)或着色剂、缓冲性盐和甜味剂。口服给药制剂可适当地配制成活性化合物的控释释放剂型。
对于肠胃外给药，使用本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及无菌载体配制成液体单位剂量形式。注射用制剂可以使用本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及无菌载体，任选地加入防腐剂制备，以单位剂型例如装在安瓿或以多剂量存在。组合物可以采取在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制试剂，如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。另一方面，活性成分可以是粉末形式，在使用前用合适的载体，如无菌无热原水来构建(costitution)。根据所用的载体及浓度，可将所述化合物悬浮或溶解在所述载体中。在配制溶液的过程中，可将所述化合物溶解用于注射和过滤灭菌，随后填充到合适的小瓶(vial)或安瓿中，然后密封。有利地，将助剂例如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂溶于载体中。为了提高稳定性，可将组合物填充到小瓶中后，将其冷冻并在真空下除去水。除了将所述化合物悬浮在载体中而不是溶于载体中，并且不能通过过滤灭菌外，以基本上相同的方法配制肠胃外悬浮液。在将化合物悬浮于无菌载体中之前，可通过暴露于环氧乙烷中来对所述化合物进行灭菌。有利地，将表面活性剂或润湿剂加入到所述组合物中，以便促进化合物的均匀分布。
洗剂可用水性或油性基质配制，洗剂一般还包含一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。滴剂可以用水性或非水性基质配制，还包含一种或多种分散剂、稳定剂、增溶剂或助悬剂。它们还可含有防腐剂。
本发明的化合物还可以制成直肠组合物的形式，如栓剂或者保留灌肠剂，例如含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油酯。
本发明的化合物还可被配制成长效制剂(depot preparation)。这些长效制剂可以通过植入(implantation)方式(例如皮下或者肌内)或者通过肌肉注射方式给药。因此，例如本发明的化合物可以与合适的聚合物或者疏水性材料(例如以在可接受油中的乳液)或离子交换树脂，或以微溶性衍生物例如微溶性盐一起制成制剂。
对于鼻内给药，本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以被配制成通过合适的计量或单一剂量装置给药的溶液，或者与适合的载体配制成粉末混合物，利用适合的递药装置给药。因而，式(I)化合物可以被配制成口服、口含、肠胃外、局部(包括眼和鼻)、缓释(depot)或直肠给药剂型或者被配制成适合于借助吸入或吹入(通过口或鼻)给药的剂型。
式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以被配制成用于局部给药的软膏剂、霜剂、凝胶剂、洗剂、阴道栓剂、气雾剂或滴剂(例如眼、耳或鼻滴剂)。软膏剂和霜剂例如可以用水性或油性基质加以配制，其中加入适合的增稠剂和/或胶凝剂。眼部给药用软膏剂可以使用经过灭菌的组分、按无菌方式加以制备。
根据给药方法，所述组合物可含有0.1％～99重量％，优选地含有10～60重量％的活性物质。用于治疗前述疾病的化合物的剂量可按常规的方式随疾病的严重程度、患者的体重以及其他类似的因素而变化。但是，作为一般性的指导，合适的单位剂量可为0.05～1000mg，1.0～500mg或1.0～200mg；并且所述的单位剂量可以每天多次给药，例如每天二或三次给药。
式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以组合制剂(combinationpreparations)的形式使用。例如，本发明化合物可与环孢霉素A或其他治疗活性的化合物组合使用。
本发明也包括同位素标记的化合物，其与在式(I)和下面中所述的那些化合物相同，但实际上一个或多个原子被具有不同于自然界中通常存在的原子量或质量数的原子量或质量数的原子所替换。可掺入到本发明的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、碘和氯的同位素，如3H、11C、14C、18F、123I和125I。
含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的式(I)化合物及所述化合物的药学上可接受的盐在本发明的范围内。本发明同位素标记的化合物(例如掺入放射性同位素如3H、14C的化合物)可用于药物和/或底物组织分布试验。氚代，即3H，以及碳-14，即，14C，同位素是特别优选的，由于它们易于制备以及检测。11C和18F同位素尤其可用于PET(正电子发射断层扫描术)，且125I同位素特别用于SPECT(单光子发射计算机化断层显象)，它们都用于脑成像。此外，用较重的同位素(如氘，即2H)进行取代能够提供某些治疗优点，得到更好的代谢稳定性，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求，且因此在一些情况下较重的同位素是优选的。同位素标记的本发明的式(I)化合物及下述化合物一般可通过实施在下述方案和/或在实施例中公开的方法，利用易得的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来进行制备。
在本说明书中所引用的所有出版物，包括但不局限于专利和专利申请，在此将它们引入作为参考，就像每个单独的出版物具体地和单独地在此被充分阐述地引用作为参考。
下面说明和实施例举例说明了本发明化合物的制备。
给出分析方法的硬件和软件的下述说明仅是为了说明的目的。
对于分析LCMS系统的条件、硬件和软件
硬件
Agilent 1100梯度泵
Agilent 1100自动进样器
Agilent 1100DAD检测器
Agilent 1100除气器
Agilent 1100恒温箱
Agilent 1100控制器
Waters Acquity B inary溶剂控制器
Waters Acquity样品控制器
Waters Acquity PDA
Waters ZQ质谱仪
Sedere Sedex 55，Sedere Sedex 85，Sedere Sedex 75或Polymer LabsPL-ELS-2100
软件
Waters MassLynx版本4.0SP2或4.1
对于5分钟方法
柱子
所用柱子为Waters Atlantis，其大小为4.6mm×50mm。固定相粒径为3μm。
溶剂
A：含水溶剂＝水+0.05％甲酸
B：有机溶剂＝乙腈+0.05％甲酸
方法
所用的通用方法具有5分钟的运行时间。
时间/分钟 ％B
0 3
0.1 3
4 97
4.8 97
4.9 3
5.0 3
流速
上述方法的流速为3ml/分钟。
对于2分钟方法
软件
Waters MassLynx版本4.1
柱子
所用柱子为Waters Acquity BEH UPLC C18，其大小为2.1mm×50mm。固定相粒径为1.7μm。
溶剂
A：含水溶剂＝水+0.05％甲酸
B：有机溶剂＝乙腈+0.05％甲酸
弱洗脱(Weak Wash)＝1∶1甲醇∶水
强洗脱(Strong Wash)＝水
方法
所用通用方法具有2分钟的运行时间。
时间/分钟 ％B 0 3 0.1 3 1.5 97 1.9 97 2.0 3
上述方法的流速为1ml/分钟
通用方法的注射体积为0.5μl
柱温为40℃
UV检测范围为220-330nm
Open Access Mass Directed Auto Prep System(Open Access质谱控制的自动制备液相色谱系统)(MDAP)
硬件
Open Access Mass Directed Prep仪器包括下述设备：
1Waters 600梯度泵
1Waters 2767注射/收集器
1Waters试剂控制器
1MicroMass ZQ质谱仪
1Gilson Aspec-废液收集器
1Gilson 115后级分UV检测器
1计算机系统.
软件
MicroMass MassLynx v4.0
柱子
所用柱子通常为Supelco LCABZ++柱子，其大小为内径20mm，长100mm。固定相粒径为5μm。
溶剂
A：含水溶剂＝水+0.1％甲酸
B：.有机溶剂＝MeCN∶水95∶5+0.05％甲酸
补充(Make up)溶剂＝MeOH∶水80∶20+50mMol乙酸铵
针冲洗溶剂＝MeOH∶水∶DMSO 80∶10∶10
方法
根据所关注化合物的分析保留时间可以使用5种方法中的一种。
所有方法的运行时间为15-分钟，包括10-分钟梯度洗脱，然后5-分钟柱子冲洗和再平衡步骤。
MDP 1.5-2.2＝0-30％B
MDP 2.0-2.8＝5-30％B
MDP 2.5-3.0＝15-55％B
MDP 2.8-4.0＝30-80％B
MDP 3.8-5.5＝50-90％B
流速
所有上述方法的流速为20ml/分钟。
另一种设备：
硬件：
· Waters 2525二梯度模块(Binary Gradient Module)
· Waters 515补充泵(makeup pump)
· Waters泵控制模块(Pump Control Module)
· Waters 2767注射收集(Inject Collect)
· Waters柱子流控控制器(Column Fluidics Manager)
· Waters 2996光电二极管阵列检测器(Photodiode Array Detector)
· Waters ZQ质谱仪
· Gilson 202级分收集器
· Gilson Aspec废液收集器
软件
Waters MassLynx版本4SP2
柱子
所用柱子为Waters Atlantis，其大小为19mm×100mm(小量)和30mm×100mm(大量)。固定相粒径为5mm。
溶剂
A：含水溶剂＝水+0.1％甲酸
B：有机溶剂＝乙腈+0.1％甲酸
补充溶剂＝甲醇∶水80∶20
针冲洗溶剂＝甲醇
方法
根据所关注化合物的分析保留时间有5种方法可以使用。它们具有13.5-分钟的运行时间，包括10-分钟梯度洗脱，然后3.5分钟柱子冲洗和再平衡步骤。
大量/小量1.0-1.5＝5-30％B
大量/小量1.5-2.2＝15-55％B
大量/小量2.2-2.9＝30-85％B
大量/小量2.9-3.6＝50-99％B
大量/小量3.6-5.0＝80-99％B(6分钟，然后7.5分钟冲洗和再平衡)
流速
所有上述步骤的流速为20mls/分钟(小量)或40mls/分钟(大量)。
浅梯度(Shallow gradients)
大量1.5-2.3分钟＝13-29％B
大量1.9-2.3分钟＝25-41％B
大量2.3-2.6分钟＝37-53％B
大量2.6-3.1分钟＝49-65％B
大量3.1-3.6分钟＝61-77％B
对于NMR所用的条件
硬件
Bruker 400MHz Ultrashield
Bruker B-ACS60自动进样器
Bruker Advance 400控制台
Bruker DPX250
Bruker AVANCE 500
Bruker DRX600
软件
User interface-NMR Kiosk
Controlling software-XWin NMR版本3.0
色谱法
除非另有说明，所有色谱法使用硅胶柱进行。
缩写：
g-克
mg-毫克
ml-毫升
μl-微升
CHCl3-氯仿
MeCN-乙腈
MeOH-甲醇
EtOH-乙醇
EtOAc-乙酸乙酯
DBA-二亚苄基丙酮
DCM-二氯甲烷
DMF-N，N-二甲基甲酰胺
DMPU-1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮
DMSO-二甲基亚砜
DPPF-1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁
EDC-N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐
EDAC-N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐
EDCl.HCl-N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐
HATU-2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐甲铵
IPA-异丙醇
NMP-N-甲基-2-吡咯烷酮
PyBOP-苯并三唑-1-基-氧基三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐
THF-四氢呋喃
dba-二亚苄基丙酮
RT-室温
℃-摄氏度
M-摩尔浓度
H-质子
s-单峰
d-二重峰
t-三重峰
q-四重峰
LCMS-液相色谱-质谱联用法
LC/MS-液相色谱-质谱联用法
NMR-核磁共振
MS-质谱
ES-电喷雾
MH+-质量离子(mass ion)+H+
MDAP-质谱控制的自动制备液相色谱法(Mass Directed AutomatedPreparative liquid chromatography)
SCX-强阳离子交换
一般化学
制备实施例的中间体不一定以所述特定批量制备。
D1的描述
1H-吲唑-5-甲腈(D1)
将2-氟-5-氰基苯甲醛(1.1g)溶于水合肼(19ml)中，并于室温搅拌18小时。然后蒸馏溶液，且残余物通过硅胶快速柱色谱法(用DCM洗脱)纯化。得到标题化合物(300mg)。
D1的描述(另一种方法)
1H-吲唑-5-甲腈(D1)
将5-氰基-3-氟苯甲醛(4g，26.8mmol)溶于水合肼中，并于室温搅拌18小时。将溶液倒在冰上，且所得固体通过过滤分离，然后在真空下于60℃干燥得到标题化合物(1.27g)，为粉色固体。从水层中分离其它物质。MS(ES)：C8H5N3计算值143；实测值144(MH+)。
1H-吲唑-5-甲腈也可以根据以前描述制备(Halley和Sava 1997，Synth.Commun.27(7)：1199-1207)。
D2的描述
N-羟基-1H-吲唑-5-甲脒(D2)
将5-氰基吲唑(D1)(500mg)，羟胺.HCl(485mg)和NaHCO3(1.47g)溶解/悬浮于MeOH(18ml)中，加热至50℃，并搅拌19小时，然后过夜。然后过滤反应混合物，用MeOH洗涤，并蒸发得到标题化合物(584mg)，为白色固体。MS(ES)：C8H8N4O计算值176；实测值177(MH+)。
D3的描述
3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(D3)
将4-羟基-3-氯苯甲酸甲酯(13.4g)溶于DMF(150ml)中，用K2CO3(19.9g)处理，然后用异丙基溴(13.5ml)处理，然后将所得混合物加热至70℃，并搅拌过夜。然后将反应混合物冷却至室温，蒸发至干，再溶解于EtOH中，过滤并再次蒸发得到中间体酯(22.24g)，为白色固体。该化合物为乙基酯和甲基酯的3∶1混合物，且在下一步反应中使用粗产物。
将粗中间体(22.24g)溶于MeOH(75ml)中，用2M的NaOH水溶液(75ml)处理，加热至60℃，并搅拌2小时。然后将反应混合物冷却至室温，蒸发MeOH，且将剩余的水溶液用5M的HCl水溶液(30ml)酸化。滤出沉淀并干燥得到标题化合物(15.1g)，为白色固体。δH(CDCl3，400MHz)：1.42(6H，d)，4.70(1H，七重峰)，6.97(1H，d)，7.97(1H，d)，8.12(1H，s).MS(ES)：C10H11ClO3计算值214；实测值213(M-H+)。
3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸可根据WO2006047195中所述制备。
D4的描述
5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑(D4)
将3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(D3)(712mg)，EDCI.HCl(699mg)和HOBT(493mg)溶于DMF(16.5ml)中，并于室温搅拌10分钟。加入N-羟基-1H-吲唑-5-甲脒(D2)(584mg)，且将混合物加热至80℃，保持12小时。然后将反应混合物冷却至室温，且静置过周末，蒸发至干并再溶解于H2O中。该溶液用EtOAc(x3)萃取，且合并的萃取液用盐水洗涤，蒸发并用DCM研磨2次，超声处理4分钟，然后过滤、干燥并重复1次得到标题化合物(407mg)，为粉色固体。δH(d6-DMSO，400MHz)：1.37(6H，d)，4.89(1H，七重峰)，7.46(1H，d)，7.73(1H，d)，8.04(1H，d)，8.13(1H，d)，8.20(1H，s)，8.28(1H，s)，8.58(1H，s).MS(ES)：C18H15ClN4O2计算值354；实测值355(M+H).
D5的描述
3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸乙酯(D5)
将5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑(D4)(200mg)溶于DMPU(2.8ml)中，并用Cs2CO3(367mg)处理，然后用3-溴丙酸乙酯(145μl)处理。将所得混合物在微波反应器中加热至140℃，保持1.5小时。然后将反应混合物冷却至室温，蒸发至干，并溶于H2O中。该溶液用EtOAc(x3)萃取，且合并的萃取液用盐水洗涤，并蒸发得到标题化合物(240mg)，为褐色油状物。MS(ES)：C23H2335ClN4O4计算值454；实测值455(MH+)。
D5的描述(另一种方法)
3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸乙酯(D5)
将3-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-lH-吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)(2.04g，7.38mmol)，3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(D3)(1.743g，8.12mmol)，EDC(2.123g，11.08mmol)和HOBT(1.357g，8.86mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(25ml)中的溶液搅拌过夜，然后在4小时内于120℃加热。将混合物溶于EtOAc中，然后用水和NaHCO3洗涤，并通过快速色谱法纯化，用10-90％然后10-30％EtOAc/异己烷洗脱。蒸发溶剂得到(1.95g)的白色固体。MS(ES)：C23H2335ClN4O4计算值454；实测值(MH+)455。
D6的描述
3-氯-4-(乙氧基)苯甲酸甲酯(D6)
将4-羟基-3-氯苯甲酸甲酯(10g，53.6mmol)和碳酸钾(14.8g，107.2mmol)悬浮于DMF(110ml)中，然后加入碘乙烷(8.56ml，107.2mmol)。将反应混合物加热至70℃过夜。过滤反应混合物，且残余物用乙醚洗涤。在真空中蒸发有机溶液，然后溶于EtOAc中，并用NaOH水溶液和水洗涤，干燥并在真空中蒸发至干得到标题化合物(11.24g)，为黄色油状物。MS(ES)：C10H1135ClO3计算值214；实测值(MH+)215。
D7的描述
3-氯-4-(乙氧基)苯甲酸(D7)
向搅拌的3-氯-4-(乙氧基)苯甲酸甲酯(D6)(11.24g，52.4mmol)在甲醇(40ml)中的悬浮液中加入2M的NaOH水溶液(40ml)，且将所得混合物于60℃加热2小时。反应混合物分配于EtOAc和稀盐酸中。分离有机层，干燥并在真空中蒸发得到粗产物。该物质用乙醚研磨得到标题化合物，为白色固体(8.21g)。MS(ES)：C9H935ClO3计算值200；实测值(MH+)201。
D8的描述
3-乙基-4-(1-哌啶基)苄腈(D8)
将4-氨基-3-乙基苄腈(3.0g，20.5mmol)，1，5-二溴戊烷(11.1mL，82.1mmol)，碳酸钾(5.67g，41.0mmol)和水(39.6mL)全部等分在10个微波管中，且将每个在160℃加热1小时。合并所有反应混合物，并用乙酸乙酯(40mL)萃取2次，且将合并的有机部分干燥(分相器)，并在真空中浓缩。加入二氯甲烷，过滤混合物，然后滤液通过硅胶色谱法纯化，用2-5％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为无色油状物(823mg，3.85mmol)。分析表明该化合物含少量二溴戊烷杂质。MS(ES)：C14H18N2计算值214；实测值215(MH+)。
D9的描述
3-乙基-4-(1-哌啶基)苯甲酸(D9)
将在乙醇(35mL)和水(8mL)中的3-乙基-4-(1-哌啶基)苄腈(D8)(817mg，3.82mmol)和氢氧化钾(2.14g，38.2mmol)加热至90℃(设备温度(blocktemperature))，保持9小时。加入另一些氢氧化钾(2.14g，38.2mmol)和水(8mL)，且反应再加热18小时。使反应冷却，并用HCl水溶液中和。白色固体通过过滤分离，且尝试通过SCX柱纯化，但失败了。合并固体和SCX的产物，加入甲醇，然后混合物用乙酸酸化。过滤混合物得到滤液，然后将滤液加至SCX柱中，用甲醇洗涤，并用2M氨的甲醇溶液洗脱。对于试验规模得到标题化合物，为白色固体(96mg，0.41mmol)，且对于残余物质得到无色油状物(563mg，2.41mmol)。MS(ES)：C14H19NO2计算值233；实测值234(MH+)。
D10的描述
3-乙基-4-碘苄腈(D10)
于0℃，向搅拌的4-氨基-3-乙基苄腈(2.50g，17.1mmol)在水(14mL)中的溶液中滴加浓盐酸(7.80mL，257mmol)，然后滴加亚硝酸钠(1.24g，18.0mmol)在水(3.43mL)中的溶液。将所得混合物搅拌15分钟，然后于0℃经15分钟加入到碘化钾(2.98g，18.0mmol)在水(6.0mL)中的溶液中。混合物于室温搅拌2小时。混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，且合并的有机部分用盐水(100mL)洗涤，干燥(分相器)并在真空中浓缩得到标题化合物，为褐色固体(4.21g，16.4mmol)。δH(甲醇-d4，400MHz)：8.02(1H，d)，7.61(1H，d)7.24(1H，dd)，2.80(2H，q)，1.21(3H，t)。
D11的描述
4-(1-环己烯-1-基)-3-乙基苄腈(D11)
将3-乙基-4-碘苄腈(D10)(1.23g，4.80mmol)，1-环己烯-1-基硼酸(907mg，7.20mmol)，甲醇钠(778mg，14.4mmol)和氯化双(三苯基膦)合钯(II)(337mg，0.48mmol)在无水甲醇(12mL)中的混合物于80℃在微波中加热10分钟。将反应混合物分配于乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)中，然后有机层进一步用水(40mL)洗涤，干燥(分相器)并在真空中浓缩。粗物质通过硅胶色谱法纯化，经30分钟用0-5％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为黄色油状物(824mg，3.91mmol)。δH(甲醇-d4，400MHz)7.56(1H，d)，7.46(1H，dd)，7.19(1H，d)，5.61-5.56(1H，m)，2.68(2H，quart)，2.23-2.16(4H，m)，1.85-1.68(4H，m)，1.20(3H，t)。
D12的描述
4-(1-环己烯-1-基)-3-乙基苯甲酸(D12)
将4-(1-环己烯-1-基)-3-乙基苄腈(D11)(824mg，3.91mmol)和氢氧化钾(2.19g，39.1mmol)在乙醇(36mL)和水(8mL)中于90℃(设备温度)加热20小时。反应混合物在真空中浓缩，且残余物分配于乙酸乙酯(120mL)和盐酸水溶液(2M，50mL)中，然后有机相用另外的盐酸(2M，50mL)洗涤，干燥(分相器)，并真空浓缩得到标题化合物，为黄色油状物(808mg，3.51mmol)。LCMS(ES)：C15H18O2计算值230；实测值229(M-H+)。
D13的描述
4-环己基-3-乙基苯甲酸(D13)
将4-(1-环己烯-1-基)-3-乙基苯甲酸(D12)(803mg，3.49mmol)溶于甲醇(70mL)，且在H-Cube上使用钯/碳柱氢化。将产物溶液在真空中浓缩得到标题化合物，为白色固体(792mg，3.41mmol)。δH(甲醇-d4，400MHz)：7.82-7.68(2H，m)，7.33(1H，d)，2.83(1H，m)，2.73(2H，q)，1.87(2H，m)，1.85-1.70(3H，m)，1.58-1.30(5H，m)，1.22(3H，t)。
D14的描述
3-溴-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸1-甲基乙酯(D14)
将3-溴-4-羟基苯甲酸(2.00g，9.22mmol)，2-碘丙烷(1.85mL，18.4mmol)和碳酸钾(2.55g，18.4mmol)在DMF(175mL)中的混合物加热回流5小时。将反应冷却并过滤。滤液在真空中浓缩，且残余物分配于乙酸乙酯(150mL)和水(150mL)中，用2M的NaOH碱化。将有机相干燥(分相器)，并真空浓缩得到标题化合物，为黄色油状物(2.36g，7.84mmol)。δH(甲醇-d4，400MHz)：8.05(1H，d)，7.90(1H，dd)，7.25(1H，d)，5.10(1H，七重峰)，4.81(1H，七重峰)，1.32(6H，d)，1.31(6H，d)。
D15的描述
3-溴-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(D15)
将3-溴-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸1-甲基乙酯(D14)(2.36g，7.84mmol)在乙醇(100mL)和氢氧化钠水溶液(2M，39mL)中的溶液加热回流5小时。反应混合物在真空中浓缩，并分配于乙酸乙酯(125mL)和水(125mL)中，水层用2M的HCl(40mL)酸化。水层再用乙酸乙酯(70mL)萃取，且将合并的有机萃取液干燥(分相器)，并真空浓缩得到标题化合物，为灰白色固体(1.83g，7.06mmol)。MS(ES)：C10H11BrO3计算值258，260；实测值257，259(M-H+)。
D16的描述
4-溴-3-氯苯甲酸乙酯(D16)
向4-溴-3-氯苯甲酸(5.00g，21.2mmol)在乙醇(50mL)中的悬浮液中加入硫酸(5mL)，且将所得混合物加热回流60小时。将反应分配于乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)中。水层再用乙酸乙酯萃取，且将合并的有机部分干燥(分相器)，并真空浓缩得到标题化合物，为褐色油状物/固体(5.09g，19.3mmol)。δH(d6-DMSO，400MHz)：8.06(1H，d)，7.96(1H，d)，7.80(1H，dd)，4.33(2H，q)，1.33(3H，t)。
D17的描述
3-氯-4-(2-甲基丙基)苯甲酸乙酯(D17)
在氩气下，将溴化异丁基锌在THF中的溶液(0.5M，30mL，15.0mmol)加入到4-溴-3-氯苯甲酸乙酯(D16)(2.00g，7.60mmol)中，然后加入二氯化1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯甲烷复合物(930mg，1.14mmol)。将反应加热回流4.5小时。混合物在真空中浓缩，且残余物分配于乙酸乙酯(125mL)和水(125mL)中。形成固体，滤出并弃去。有机层用水(100mL)洗涤，干燥(分相器)，并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化，经30分钟用0-5％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为无色油状物(1.76g，7.33mmol)。δH(d6-DMSO，400MHz)：7.91(1H，d)，7.80(1H，dd)，7.46(1H，d)，4.30(2H，q)，2.66(2H，d)，1.88-2.01(1H，m)，1.32(3H，t)，0.89(6H，d)。
D18的描述
3-氯-4-(2-甲基丙基)苯甲酸(D18)
将3-氯-4-(2-甲基丙基)苯甲酸乙酯(D17)(1.76g，7.33mmol)和氢氧化钠水溶液(2M，3.70mL，7.4mmol)在乙醇(30mL)中的溶液于40℃加热3小时。反应混合物在真空中浓缩，且残余物分配于乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)中，水层用2M的HCl(4mL)酸化。水层用乙酸乙酯(100mL)萃取，且将合并的有机萃取液干燥(分相器)，并真空浓缩得到标题化合物，为白色固体(1.35g，6.36mmol).MS(ES)：C11H1335ClO2计算值212；实测值211(M-H+)。
D19的描述
3-氰基-4-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}苯甲酸甲酯(D19)
于0℃在氩气流下，向3-氰基-4-羟基苯甲酸甲酯(3g，16.93mmol)和三乙胺(3.54ml，25.4mmol)在无水二氯甲烷(60ml)中的溶液中缓慢滴加三氟甲烷磺酸酐(3.15ml，18.63mmol)。将反应温热至室温，并搅拌1小时。反应混合物用10％碳酸钾水溶液(2×50mL)洗涤，然后用HCl水溶液(2M，2×50mL)洗涤，然后将有机相干燥(分相器)，并在真空中移除溶剂，得到标题化合物，为深褐色油状物，(5.165g，16.70mmol)。δH(CDCl3，400MHz)：8.44(1H，d)，8.38(1H，dd)，7.60(1H，d)，3.99(3H，s)。
D20的描述
2-氰基-4-联苯甲酸甲酯(D20)
下述反应以一半的量分两批进行：将3-氰基-4-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}苯甲酸甲酯(D19)(1.5g，4.85mmol)，苯基硼酸(1.183g，9.70mmol)，碳酸钾(2.011g，14.55mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.561g，0.485mmol)溶于DMF(24ml)中，且混合物于150℃在微波中加热30分钟。将两个反应混合物合并，并用乙酸乙酯(50mL)稀释，且混合物通过硅藻土过滤以移除钯残余物。滤液在真空中浓缩以减少DMF的量，然后将残余物分配于饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)中。有机相再用碳酸氢钠(50mL)洗涤，然后用水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤，且在真空中移除溶剂。褐色固体通过硅胶色谱法纯化，经35分钟用0-25％EtOAc的异己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为白色固体(935mg，3.94mmol)。δH(d6-DMSO，400MHz)：8.42(1H，d)，8.29(1H，dd)，7.81(1H，d)，7.65(2H，m)，7.60-7.50(3H，m)，3.92(3H，s)。
D21的描述
2-氰基-4-联苯甲酸(D21)
向2-氰基-4-联苯甲酸甲酯(D20)(935mg，3.94mmol)中加入乙醇(18ml)，但没有溶解，因此加入二氯甲烷(10ml)。然后加入2M氢氧化钠水溶液(2ml，4.00mmol)，搅拌反应2小时。向混合物中加入二氯甲烷(20mL)和2M的HCl水溶液(10mL)。分离各层，且水层用另外的二氯甲烷(20mL)萃取。将合并的有机相干燥(分相器)，且在真空中移除溶剂得到白色固体，将其溶于甲醇(30mL)中，并加入氢氧化钠水溶液(2M，3mL)。反应于室温搅拌1小时，然后加入水(20mL)。再搅拌反应1小时。加入二氯甲烷(60mL)，并振摇混合物，然后分离各层。水相用另外的二氯甲烷(50mL)萃取，然后将合并的有机相干燥(分相器)，且在真空中移除溶剂得到标题化合物，为白色固体(849mg，3.80mmol)。MS(ES)：C14H9NO2计算值223；实测值222(M-H+)。
D22的描述
4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸乙酯(D22)
将4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸(1g，4.45mmol)溶于乙醇(3ml)中，并加入浓硫酸(0.15ml)。混合物在微波中于100℃加热5分钟，然后于120℃加热15分钟。在真空中移除溶剂，且将残余物分配于饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和乙酸乙酯(50ml)中。水层用另外的EtOAc(50ml)萃取，并合并有机相，用分相器干燥，并真空浓缩得到标题化合物(1.026g)，为无色油状物。δH(甲醇-d4，400MHz)1.40(3H，t)，4.41(2H，q)，7.76(1H，d)，8.21(1H，dd)，8.33(1H，d)。
D22的描述(另一种方法)
4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸乙酯(D22)
将4-氯-3-三氟甲基苯甲酸(10g，44.5mmol)在乙醇(10ml)中的溶液等分到两个微波管中。向每个管中加入浓硫酸(0.75ml)(总计1.5ml)。反应在微波中于120℃加热总共30分钟。合并反应混合物并真空浓缩。将残余物分配于EtOAc(100ml)和碳酸氢钠水溶液(100ml)中，分离有机相，用碳酸氢钠水溶液(100ml)和水(2×100ml)洗涤，然后干燥(分相器)，并在真空中移除溶剂得到标题化合物(4.126g)，为无色油状物。δH(400MHz，甲醇-d4)，与前面的实施例一致。
D23的描述
2-(三氟甲基)-4-联苯甲酸(D23)
将反应一分为4，每个使用1/4的试剂：向4-溴-3-(三氟甲基)苄腈(4g，16.00mmol)，苯基硼酸(3.90g，32.0mmol)和碳酸钾(6.63g，48.0mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(64ml)中的混合物中加入四(三苯基膦)合钯(0)(1.849g，1.600mmol)。每个反应在微波中于150℃加热30分钟。合并的反应混合物通过塞力特硅藻土(celite)过滤，用乙酸乙酯洗涤，且在真空中移除溶剂。将残余物分配于乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)中，且有机相用碳酸氢钠溶液(100mL)洗涤。将有机相干燥(MgSO4)，过滤并在真空中移除溶剂。褐色油状物用二氯甲烷研磨，并过滤得到淡黄色固体，2-(三氟甲基)-4-联苯甲酰胺(2.47g)，其没有进一步纯化就使用。向2-(三氟甲基)-4-联苯甲酰胺(2g，7.54mmol)在乙醇(80ml)中的溶液中加入氢氧化钾(4.23g，75mmol)和水，且将混合物加热至90℃，保持18小时。将反应混合物在真空中浓缩，且残余物分配于二氯甲烷(100mL)和2M的HCl(100mL)中。分离有机相，并干燥(分相器)，并在真空中移除溶剂得到粗产物。使用Biotage Horizon，反相柱纯化，用5-100％MeCN的水溶液洗脱，得到灰白色固体的标题化合物(960mg)。MS(ES)：C14H9F3O2计算值266；实测值265(M-H+)。
D23的描述(另一种方法)
2-(三氟甲基)-4-联苯甲酸(D23)
批次A：将4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸乙酯(D22)(1.0g，3.96mmol)，苯基硼酸(724mg，5.94mmol)，乙酸钯(44mg)，(二环己基膦基)联苯(140.2mg)和氟化钾(689mg，11.9mmol)在THF(8ml)中的混合物在微波中于120℃加热总共40分钟。
批次B：4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸乙酯(D22)(500mg，1.98mmol)，苯基硼酸(290mg，2.38mmol)，乙酸钯(2.2mg)，(二环己基膦基)联苯(7mg)和氟化钾(344mg，5.8mmol)在THF(4ml)中的混合物在微波中于120℃加热20分钟。
合并批次A和B的反应混合物，过滤且滤液在真空中浓缩。残余物通过快速色谱法(SiO2，0-5％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到起始物质和偶联产物的混合物。将该混合物溶于乙醇(10ml)和2M的NaOH(水溶液)(5ml)中，然后加热回流3小时。在真空中移除溶剂，且将残余物分配于DCM和2M的HCi水溶液中。水层用另外的DCM萃取。合并有机相并真空浓缩。粗物质通过在Horizon上的反相色谱法纯化，用5-100％MeCN的水溶液洗脱，得到标题化合物，为白色固体(367mg)(DN108121-170A2，GSK1869780A).MS(ES)：C14H9F3O2计算值266；实测值265(M-H+)。
D24的描述
3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯甲酸甲酯(D24)
氩气下，向3-氰基-4-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}苯甲酸甲酯(D19)(1.5g，4.85mmol)中加入在四氢呋喃(50ml)中的溴化(2-甲基丙基)锌(48.5ml，24.25mmol)。然后向该溶液中加入二氯化1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯甲烷复合物(0.355g，0.485mmol)，且将反应加热回流6小时。混合物用水(2mL)淬灭，然后通过塞力特硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤。在真空中移除溶剂。将残余物分配于乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)中，并将有机相干燥(分相器)，且在真空中移除溶剂。残余物通过硅胶色谱法纯化，经40分钟用0-15％EtOAc的异己烷溶液洗脱。收集2批产物，其中一批为标题化合物，为无色油状物(233mg，1.072mmol)。δH(CDCl3，400MHz)：8.28(1H，d)，8.15(1H，dd)，7.38(1H，d)，3.94，3H，s)，2.78(2H，d)，2.02(1H，m)，0.96(6H，d)。
D25的描述
3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯甲酸(D25)
将3-氰基-4-(2-甲基丙基)苯甲酸甲酯(D24)(233mg，1.072mmol)溶于乙醇(4ml)中，并加入2M氢氧化钠水溶液(1ml，2mmol)。搅拌反应1小时。加入2M的HCl水溶液(10mL)，且混合物用二氯甲烷(20mL+10mL)萃取。分离有机相，并通过分相器干燥，合并，然后在真空中移除溶剂，得到标题化合物，为白色固体(203mg，0.999mmol)。MS(ES)：C12H13NO2计算值203；实测值202(M-H+)。
D26的描述
5-甲酰基-2-{[(1S)-1-甲基丙基]氧基}苄腈(D26)
将(2S)-2-丁醇(0.99g，0.013mol)溶于DMF(50ml)中，并将溶液冷却至0℃。向其中分批加入氢化钠(60％在矿物油中的分散体，1.54g，0.036mol)，加入完成后混合物于0℃搅拌10分钟。然后加入2-氟-5-甲酰基苄腈(2.0g，0.013mol)，且将反应混合物温热至室温(在冰浴中缓慢进行)，然后反应混合物于室温搅拌过夜。然后将反应混合物冷却至0℃，用盐水淬灭，并用EtOAc(～25ml)稀释。分配混合物，且有机部分用水(～30ml)萃取，合并的有机层通过相分离柱干燥，然后减压下蒸发至干得到粗产物。粗残余物在40+MBiotage柱上纯化，用20-50％的EtOAc的己烷混合物洗脱，得到标题化合物(220mg)，为白色固体。MS(ES)：C12H13NO2计算值203；实测值204(MH+)。
D27的描述
3-氰基-4-{[(1S)-1-甲基丙基]氧基}苯甲酸(D27)
向5-甲酰基-2-{[(1S)-1-甲基丙基]氧基}苄腈(D26)(220mg，1.08mmol)在乙酸(20ml)中的溶液中加入过硼酸钠四水合物(334mg，2.17mmol)，反应混合物于50℃加热过周末。反应混合物在真空中浓缩。加入水(～50ml)，加入EtOAc(～30ml)并分离各层，水层用EtOAc(～30ml)萃取2次，并将合并的有机相在减压下蒸发至干，得到标题化合物(245mg)，为灰白色固体。MS(ES)：C12H13NO2计算值219；实测值220(MH+)。
D28的描述
5-甲酰基-2-{[(1R)-1-甲基丙基]氧基}苄腈(D28).
将(2R)-2-丁醇(0.99g，0.013mol)溶于DMF(50ml)中，并将溶液冷却至0℃。向其中分批加入氢化钠，60％在矿物油中的分散体(1.54g，0.036mol)，加入完成后混合物于0℃搅拌10分钟。然后加入2-氟-5-甲酰基苄腈(2.0g，0.013mol)，并将反应混合物温热至室温(在冰浴中缓慢进行)，且反应混合物于室温搅拌过夜。然后将反应混合物冷却至0℃，用盐水淬灭，并用EtOAc(～25ml)稀释。分离混合物，且有机部分用水(～30ml)萃取，合并的有机相通过相分离柱干燥，并在减压下蒸发至干得到粗产物。粗残余物在40+MBiotage柱上纯化，用20-50％的EtOAc的己烷混合物洗脱。得到标题化合物(310mg)，为黄色油状物。δH(d6-DMSO，400MHz)：9.88(1H，s)，8.30(1H，s)，8.15(1H，d)，7.49(1H，d)，4.73-4.81(1H，m)，1.63-1.79(2H，m)，1.33(3H，d)，0.95(3H，t)。
D29的描述
3-氰基-4-{[(1R)-1-甲基丙基]氧基}苯甲酸(D29)
向5-甲酰基-2-{[(1R)-1-甲基丙基]氧基}苄腈(D37)(310mg，1.53mmol)在乙酸(30ml)中的溶液中加入过硼酸钠四水合物(471mg，3.05mmol)，反应混合物于50℃加热过周末。反应混合物在真空中浓缩，并加入水(～50ml)，加入EtOAc(～30ml)，且分离各层，水层再用EtOAc(～30ml)萃取2次，且合并的有机相在减压下蒸发至干得到标题化合物(315mg)，为灰白色固体。MS(ES)：C12H13NO2计算值219；实测值220(MH+)。
D30的描述
5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸1-甲基乙酯(D30)
将5-氯-6-羟基-3-吡啶甲酸(3.00g，17.28mmol)悬浮于甲苯(75ml)中，并用碳酸银(12.4g，24.8mmol)和2-碘丙烷(6.9ml，69.12mmol)处理，且于室温在黑暗中搅拌18小时。过滤混合物，并蒸发滤液得到含杂质的标题化合物(1.32g)。δH(d6-DMSO)1.31(6H，d)，1.35(6H，d)，5.13(1H，七重峰)，5.40(1H，七重峰)，8.22(1H，d)，8.65(1H，d)。
D30的描述(另一种方法)
5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸1-甲基乙酯(D30)
将5-氯-6-羟基-3-吡啶甲酸(1g，5.76mmol)悬浮于甲苯(200ml)中，并用碳酸银(3.97g，14.40mmol)和2-碘丙烷(3.46ml，34.6mmol)处理，且于室温在黑暗中搅拌3天。加入另一部分2-碘丙烷(3ml)，并搅拌24小时。加入EtOAc(200ml)，并用水(200ml)和饱和NaHCO3(50ml)洗涤，然后用水(200ml)洗涤。经MgSO4干燥，并蒸发溶剂得到1.0g的标题化合物，为透明无色油状物，没有进一步表征就使用。
D30的描述(另一种方法)
5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸1-甲基乙酯(D30)
将2-碘丙烷(12.42ml，124mmol)加入到5-氯-6-羟基-3-吡啶甲酸(商购自Fluka，5.4g，31.1mmol)和Ag2CO3(21.45g，78mmol)在CHCl3(200ml)中的悬浮液中，且反应于室温搅拌3天。滤出沉淀，并在真空中移除溶剂得到标题化合物(4g，47％)，为黄色油状物，其没有进一步纯化就用于下一步骤。MS(ES)C12H16ClNO3计算值257，实测值258[M+H]+
D31的描述
5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸(D31)
在异丙醇(70ml)和水(35.0ml)中的5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸1-甲基乙酯(D30)(1.6g，6.21mmol)用2N氢氧化钠(6.21ml，12.42mmol)处理，并搅拌3小时得到单一产物。蒸发IPA，用冰醋酸酸化并用EtOAc(100ml)萃取产物。经MgSO4干燥并蒸发溶剂得到1.30g的标题化合物，为白色固体。MS(ES)C9H1035ClNO3计算值215；实测值214(M-H+)。
D31的描述(另一种方法)
5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸(D31)
将氢氧化钠(29.1ml，58.2mmol)加入到5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸1-甲基乙酯(D30)(3g，11.64mmol)在甲醇(25ml)中的溶液中，并于室温搅拌过夜。蒸发溶剂，然后用2M的HCl中和，并用醚萃取。然后经硫酸镁干燥，并蒸发得到不纯白色固体。用DCM研磨得到标题化合物，为纯白色固体。MS(ES)C9H10ClNO3计算值215，实测值216[M+H]+
D32的描述
4-(1-环己烯-1-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(D32)
将4-溴-3-(三氟甲基)苄腈(商购)(1.2g，4.80mmol)，1-环己烯-1-基硼酸(0.907g，7.20mmol)，甲醇钠(0.778g，14.40mmol)和氯化双(三苯基膦)合钯(II)(0.337g，0.480mmol)加入到无水甲醇(12mL)中，且混合物在微波中于80℃加热10分钟。将反应混合物分配到乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)中，然后有机相再用水(40mL)洗涤。将有机相干燥(MgSO4)，过滤并在真空中移除溶剂。粗产物通过快速硅胶色谱法纯化，用0-75％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为白色固体(1.02g)。MS(ES)：C14H14F3NO计算值269；实测值270(MH+)。
D33的描述
4-环己基-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(D33)
将4-(1-环己烯-1-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(D32)(850mg，3.16mmol)溶于甲醇(63ml)中，并使用H-Cube，使用钯/碳于40℃氢化，流速为2mL/分钟。在真空中移除溶剂得到标题化合物，为白色固体(822mg)。MS(ES)：C14H16F3NO计算值271；实测值272(MH+)。
D34的描述
4-环己基-3-(三氟甲基)苯甲酸(D34)
向4-环己基-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(D33)(822mg，3.03mmol)在乙醇(40ml)中的溶液中加入氢氧化钾(1.700g，30.3mmol)和水(5ml)，且将反应加热至90℃设备温度，保持3小时，且于室温搅拌16小时。加入另一部分氢氧化钾(1.700g，30.3mmol)，且将反应加热回流27小时。再加入5mL水，且加热反应66小时(过周末)。反应混合物在真空中浓缩，且残余物分配于乙酸乙酯(25mL)和盐酸水溶液(2M，25mL)中。水层再用乙酸乙酯(25mL)萃取，且将合并的有机相干燥(MgSO4)，过滤并在真空中移除溶剂得到标题化合物，为白色固体(737mg)。MS(ES)：C14H15F3O2计算值272；实测值271(M-H+)。
D35的描述
4-[(1-甲基乙基)氧基]-3-(三氟甲基)苯甲酸1-甲基乙酯(D35)
将4-羟基-3-(三氟甲基)苯甲酸(商购)(450mg，2.18mmol)，2-碘丙烷(435μL，4.36mmol)和碳酸钾(603mg，4.36mmol)在N，N’-二甲基甲酰胺(40mL)中的混合物于70℃加热4小时，然后再加入2-碘丙烷(218μL，2.18mmol)，并继续加热18小时。滤除无机固体，并用乙酸乙酯洗涤。滤液在真空中浓缩，并分配于乙酸乙酯(150mL)和含一些氢氧化钠水溶液的水(150mL)中。将有机层干燥(分相器)，并真空浓缩得到粗标题化合物(704mg)，为黄色油状物。MS(ES)：C14H17F3O3计算值290；实测值291(MH+)。
D36的描述
4-[(1-甲基乙基)氧基]-3-(三氟甲基)苯甲酸(D36)
向4-[(1-甲基乙基)氧基]-3-(三氟甲基)苯甲酸1-甲基乙酯(D35)(704mg，2.43mmol)在乙醇(110mL)中的混合物中加入氢氧化钠水溶液(2M，12.2mL，24.3mmol)，且反应加热回流1小时。混合物在真空中浓缩，且将残余物分配于乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)中，并用盐酸水溶液(2M，13mL)酸化。水层再用乙酸乙酯(100mL)萃取，且将合并的有机层干燥并真空浓缩得到标题化合物，为黄色固体(563mg)。MS(ES)：C11H11F3O3计算值248；实测值247(M-H+)。
D37的描述
3-氯-4-(丙氧基)苯甲酸甲酯(D37)
将4-羟基-3-氯苯甲酸甲酯(10g，53.6mmol)溶于DMF(110ml)中，然后加入碳酸钾(14.8g，107.2mmol)，然后加入正-丙基碘(10.4ml，107.2mmol)。将反应加热至70℃过夜，过滤，然后将滤液分配于EtOAc和水中。分离有机层，干燥并蒸发得到标题化合物，为黄色油状物(12.37g)。MS(ES)C11H1335ClO3计算值228；实测值229(MH+)。
D38的描述
3-氯-4-(丙氧基)苯甲酸(D38)
将3-氯-4-(丙氧基)苯甲酸甲酯(D37)(RD108825-58-B1)(12.22g，0.053mol)在乙醇(40ml)和2M NaOH水溶液(40ml)中的溶液于60℃加热3小时。使反应冷却，然后于室温过周末。将反应混合物倒入稀HCl水溶液和EtOAc的混合物中。分离有机层，干燥并蒸发得到固体，将其用乙醚研磨得到标题化合物，为白色固体(7.7g)。MS(ES)C10H1135ClO3计算值214；实测值213(M-H+)。
D39的描述
3-氯-4-(1-吡咯烷基)苯甲酸乙酯(D39)
在氩气下将4-溴-3-氯苯甲酸乙酯(D16)(2.53g，9.62mmol)，吡咯烷(1.03mL，12.5mmol)，叔丁醇钠(1.29g，13.5mmol)，BINAP(196mg，0.29mmol)和三(二亚苄基丙酮)合二钯(0)(58mg，0.10mmol)在甲苯(120mL)中的混合物加热回流3小时。将反应冷却并过滤。固体用甲苯洗涤，然后浓缩滤液。残余物分配于乙酸乙酯(150mL)和含有碳酸氢钠水溶液(50mL)的水(100mL)中。将有机相干燥(分相器)，并浓缩得到橙色油状物。将该油状物通过反相色谱法纯化，用5-100％乙腈的水溶液洗脱，得到标题化合物，为橙色油状物(600mg)。其含有一些杂质。MS(ES)：C13H1635ClNO2计算值253；实测值254(MH+)。
另一些标题化合物(85mg)通过相似方法制备。
D40的描述
3-氯-4-(1-吡咯烷基)苯甲酸(D40)
将3-氯-4-(1-吡咯烷基)苯甲酸乙酯(D39)(685mg，2.71mmol)和氢氧化钠水溶液(2M，1.36mL，2.72mmol)在乙醇(15mL)中的混合物于40℃加热17小时。再加入氢氧化钠(1.36mL，2.72mmol)，且再加热反应8小时。浓缩混合物，且将残余物溶解于水(100mL)中。水相用乙酸乙酯(2×100mL)洗涤，然后酸化至pH6。形成白色固体并将其滤除，用水洗涤，并在真空烘箱中干燥得到标题化合物，为灰白色固体(362mg)。MS(ES)：C11H1235ClNO2计算值225；实测值226(MH+)。
D41的描述
2-(环戊氧基)-5-甲酰基苄腈(D41)
将环戊醇(1.15g，0.013mol)在DMF(50ml)中的溶液冷却至0℃。分批将氢化钠(1.54g，0.016mol)加入到该溶液中，且加入完成后混合物于0℃搅拌10分钟。然后加入3-氰基-4-氟苯甲醛(商购)(2.0g，0.013mol)，且将混合物温热至室温并搅拌过夜。反应混合物冷却至0℃，并加入盐水，混合物用乙酸乙酯(～25ml)稀释并分配，有机层用水(～30ml)洗涤，并通过相分离柱干燥。溶液在真空中浓缩，且残余物通过Biotage SP4，40M纯化，用20-60％乙酸乙酯/己烷作为洗脱液。含产物的级分在真空中浓缩得到标题化合物(1.02g，4.2mmol)，为黄色液体。MS(ES)：计算值C13H13NO2215；实测值216(MH+)。
D42的描述
3-氰基-4-(环戊氧基)苯甲酸(D42)
于50℃，向(D41)(0.13g，0.604mmol)在乙酸(20ml)中的溶液中分批加入过硼酸钠四水合物(0.186g，1.208mmol)。将反应混合物在50℃搅拌过夜。于50℃继续搅拌48小时，将过硼酸钠四水合物(0.093g，0.604mmol)加入到反应混合物中，并继续搅拌2天，然后将反应混合物于室温静置2天。
在真空中移除溶剂，且将混合物分配于乙酸乙酯(～20ml)和水(～20ml)中，水层用乙酸乙酯(2x～15ml)萃取，且合并的有机层在真空中浓缩得到标题化合物(106mg，0.435mmol)，为黄色固体。MS(ES)：计算值C13H13NO3231；实测值230(M-H+)。
D43的描述
5-[3-(1H-吲唑-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈(D43)
将3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(可以如WO2005/58848所述制备)(1.52g)，EDAC(2.14g)和HOBt(1.51g)溶于DMF(30ml)，然后搅拌5分钟。加入N-羟基-1H-吲唑-5-甲脒(D2)(1.3g)，且将反应加热至80℃，保持6小时，并冷却过夜。在真空中移除溶剂，且将粗产物分配于EtOAc和碳酸氢钠水溶液中。分离有机层，干燥并在真空中蒸发至干。所得固体用乙醚和乙酸乙酯研磨，用甲醇和乙醚洗涤，得到标题化合物(816mg)，为粉色固体。MS(ES)：C19H15N5O2计算值345；实测值(MH+)346
D43的描述(另一种方法)
5-[3-(1H-吲唑-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈(D43)
将3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酰氯(D106)(545mg，2.437mmol)和N-羟基-1H-吲唑-5-甲脒(D2)(685mg，2.437mmol)溶于乙腈(30ml)中，然后加入三乙胺(0.374ml，2.68mmol)。所得混合物于室温搅拌3小时，然后于80℃搅拌48小时，然后于室温冷却。滤出形成的沉淀并溶解于EtOAc中，然后用水洗涤，蒸发并用色谱纯化[0-15％EtOAc的环己烷溶液]得到标题化合物(170mg，17％)，为粉色固体。MS(ES)：C19H15N5O2计算值345；实测值(MH+)346
D44和D45的描述
4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丁酸乙酯(D44)和4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丁酸乙酯(D45)
将5-[3-(1H-吲唑-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈(D43)(200mg，0.58mmol)溶于DMF(5ml)中，并加入Cs2CO3(567mg，1.74mmol)和4-溴丁酸乙酯(0.166ml，1.16mmol)。将反应加热至80℃，保持12小时，然后冷却。将反应混合物分配于水和EtOAc中。分离有机层，干燥并在真空中蒸发得到粗产物，其通过快速色谱法(EtOAc/石油醚1∶6至1∶1)纯化，得到4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸乙酯(D44)(151mg)，为白色固体。δH(d6-DMSO)1.14(3H，t)，1.39(6H，d)，2.04-2.18(2H，m)，2.31(2H，t)，4.01(2H，q)，4.51(2H，t)，4.99(1H，七重峰)，7.57(1H，d)，7.87(1H，d)，8.08(1H，dd)，8.29(1H，d)，8.43(1H，dd)，8.52(1H，d)8.57-8.58(1H，m).MS(ES)：C25H25N5O4计算值459；实测值(MH+)460。和RD108825-187A24-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丁酸乙酯(D45)(66mg)，为白色固体。δH (d6-DMSO)1.16(3H，t)，1.37(6H，d)，2.14-2.26(2H，m)，2.32(2H，t)，4.03(2H，q)，4.51(2H，t)，4.99(1H，七重峰)，7.57(1H，d)，7.78-7.80(1H，m)，7.89(1H，dd)，8.42(1H，dd)，8.52(1H，d)，8.57-8.58(1H，m)，8.62(1H，s).MS(ES)C25H25N5O4计算值459；实测值(MH+)460。
D46的描述
[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]乙酸乙酯(D46)
以与(D44)相似的方法从5-[3-(1H-吲唑-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈(D43)和溴乙酸乙酯制备。粗物质通过用乙醚研磨纯化，得到标题化合物，为黄色固体。MS(ES)C23H21N5O4计算值431；实测值(MH+)432。
D47的描述
3-(5-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47)
向1H-吲唑-5-甲腈(D1)(2.8g，19.72mmol)在DMF(60ml)中的溶液中加入碳酸铯(12.86g，39.4mmol)，然后加入3-溴丙酸乙酯(3.8ml，29.6mmol)。反应混合物于80℃搅拌3小时，然后冷却。在真空中移除溶剂，且将粗物质分配于EtOAc(x2)和水中，合并有机相，干燥并蒸发。粗产物与甲苯共沸，然后通过快速色谱法(EtOAc/己烷1∶3)纯化，得到3.75g的粉色固体，其用己烷研磨后得到标题化合物(3.2g)，为粉色固体。MS(ES)：C13H13N3O2计算值243实测值(MH+)244。
D47的描述(另一种方法)
3-(5-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47)
向1H-吲唑-5-甲腈(D1)(3.88g，27.3mmol)在DMF(85ml)中的溶液中加入Cs2CO3(17.8g，54.6mmol)，然后加入3-溴丙酸乙酯(3.5ml，27mmol)和3-氯丙酸乙酯(3.3g，24.2mmol)。反应混合物于80℃搅拌4小时，然后冷却。在真空中移除溶剂，且粗物质分配于EtOAc和水中，分离有机层，用盐水洗涤，干燥并蒸发。粗物质与甲苯共沸，然后通过快速色谱法(EtOAc/己烷1∶9至1∶1)纯化，得到3.84g的黄色胶状物。MS数据如同上述实施例。
D47的描述(另一种方法)
3-(5-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47)
将1H-吲唑-5-甲腈(D1)(3.5g，24.45mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(60ml)中。加入碳酸铯(15.93g，48.9mmol)和3-溴丙酸乙酯(4.68ml，36.7mmol)。混合物于80℃加热4小时。用EtOAc稀释，并用水(3×40ml)洗涤，经MgSO4干燥，并蒸发。混合物通过快速色谱法纯化，用10-30％然后10-20％EtOAc/异己烷洗脱，得到(3.682g)第一种异构体(黄色油状物)和(1.509g)第二种异构体(粉色固体)。通过1H NMR分析第一种异构体表明其为含2-异构体(约20％)的1-异构体。δH(d6-DMSO，400MHz)1.05(3H，t)，2.95(2H，t)，3.97(2H，q)，4.69(2H，t)，7.74(1H，dd)，7.92(1H，dt)，8.28(1H，d)，8.38(1H，dd).MS(ES+)：C13H13N3O2计算值243；实测值(MH+)244。
D48的描述
4-(4-氰基-2H-吲唑-2-基)丁酸乙酯和4-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)丁酸乙酯的混合物(D48)
将4-溴丁酸乙酯(0.390g，1.998mmol)，1H-吲唑-4-甲腈(0.143g，0.999mmol)和碳酸铯(0.976g，3.00mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4ml)中的混合物于80℃搅拌并加热90分钟。冷却，用乙酸乙酯/水(每种30m1)稀释，且有机相用3×15ml水洗涤，干燥(硫酸镁)，蒸发并通过快速色谱法纯化，用1∶2乙酸乙酯/己烷洗脱，得到部分分离的2种异构体，将其表征后合并，得到标题异构体的混合物(249mg)。δH(CDCl3，400MHz)对于1-异构体：1.24(3H，t)，2.29(4H，m)，4.12，(2H，q)，4.53(2H，t)，7.45(1H，dd)，7.54(1H，dd)，7.71(1H，dd)，8.19(1H，d).δH(CDCl3，400MHz)对于2-异构体：1.25(3H，t)，2.35(4H，m)，4.14，(2H，q)，4.58(2H，t)，7.33(1H，dd)，7.54(1H，dd)，7.96(1H，dd)，8.15(1H，d)。
D48的描述(另一种方法)
4-(4-氰基-2H-吲唑-2-基)丁酸乙酯和4-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)丁酸乙酯的混合物(D48)
将4-溴丁酸乙酯(5.36ml，37.4mmol)，1H-吲唑-4-甲腈(2.68g，18.72mmol)和碳酸铯(18.30g，56.2mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(50ml)中的混合物于80℃加热90分钟。冷却，用EtOAc/水稀释，且有机相用3×30ml水洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发。通过快速色谱法纯化，用EtOAc/己烷1∶3洗脱，得到标题异构体的混合物(4.7g)，为黄色油状物。MS(ES+)：C14H15N3O2计算值257；实测值(MH+)258。
D49的描述
3-(4-氰基-2H-吲唑-2-基)丙酸乙酯和3-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯的混合物(D49)
将3-溴丙酸乙酯(1.808g，9.99mmol)，1H-吲唑-4-甲腈(0.715g，4.99mmol)和碳酸铯(4.88g，14.98mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(10ml)中的混合物于80℃搅拌并加热2小时。冷却，用乙酸乙酯(40ml)和水(40ml)稀释，且有机相用3×15ml水洗涤，干燥(硫酸镁)，蒸发并通过快速色谱法纯化，用3∶7乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1.19g无色油状物，其缓慢结晶得到白色固体。NMR和LC/MS表明其为～3∶1的异构体混合物。MS(ES)：C13H13N3O2计算值243实测值(MH+)244.
D50和D51的描述
4-(5-氰基-1H-吲唑-1-基)丁酸乙酯(D50)和4-(5-氰基-2H-吲唑-2-基)丁酸乙酯(D51)
向1H-吲唑-5-甲腈(D1)(1.93g，13.59mmol)在DMF(45ml)中的溶液中加入碳酸铯(9.1g，27.9mmol)，然后加入4-溴丁酸乙酯(2.92ml，20.4mmol)。反应于80℃加热6小时。大部分DMF在真空中移除，且将所得物质分配于乙酸乙酯和水中，有机相用盐水洗涤，干燥并蒸发得到4g胶状物。粗物质通过快速色谱法(使用1∶4EtOAc的己烷溶液)纯化。分离上部斑点得到RD107973-39B1，其被鉴定为4-(5-氰基-1H-吲唑-1-基)丁酸乙酯(D50)。δH(d6-DMSO)1.13(3H，t)，2.04-2.13(2H，m)，2.29(2H，t)，3.99(2H，q)，4.51(2H，t)，7.74(1H，dd)，7.88(1H，d)，8.28(1H，d)，8.41-8.44(1H，m).MS(ES)：C14H15N3O2计算值257实测值(MH+)258。
分离下部斑点得到标题化合物。δH(d6-DMSO)1.15(3H，t)，2.15-2.22(2H，m)，2.31(2H，t)，4.01(2H，q)，4.49-4.55(2H，m)，7.48(1H，dd)，7.78(1H，dd)，8.43-8.44(1H，m)，8.67(1H，d).C14H15N3O2计算值257实测值(MH+)258。
D52的描述
3-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)
将3-(5-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47)(1g，4.11mmol)溶于乙醇(30ml)中，并加入碳酸氢钠(1.73g，20.55mmol)和羟胺盐酸盐(571mg，8.22mmol)。反应于50℃加热过夜，然后冷却。过滤反应混合物，且残余物用乙醇洗涤。将滤液在真空中蒸发至干，且所得粗标题化合物(1.06g)用于下一步反应。
D52的描述(另一种方法)
3-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)
3-(5-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47)(1g，4.11mmol)溶于乙醇(30ml)中，并加入碳酸氢钠(1.73g，20.88mmol)和羟胺盐酸盐(571mg，8.22mmol)。反应于室温放置过夜，然后加热至50℃，保持4小时，然后冷却过夜。过滤反应混合物，且残余物用乙醇洗涤。含乙醇的滤液在真空中蒸发至干，然后用乙醚研磨得到标题化合物(764mg)，为白色固体，纯度约90％。MS(ES)：C13H16N4O3计算值276；实测值(MH+)277。
D52的描述(另一种方法)
3-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)
将3-(5-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D47)(3.84g，15.8mmol)溶于乙醇(100ml)中，并加入碳酸氢钠(6.6g，79mmol)，然后加入羟胺盐酸盐(3.3g，47.4mmol)。将反应加热至50℃，保持总共11小时，然后冷却过夜。过滤反应且残余物用乙醇洗涤。滤液在真空中蒸发至干，且所得固体用乙醚研磨得到标题化合物(3.79g)，为白色固体。MS(ES)：C13H16N4O3计算值276；实测值(MH+)277。
D52的描述(另一种方法)
3-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)
将3-(5-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯D47(3.6g，14.80mmol)溶于乙醇(40ml)中，加入羟胺盐酸盐(2.057g，29.6mmol)和碳酸氢钠(6.22g，74.0mmol)。混合物于60℃加热过夜。冷却，过滤，并蒸发滤液，溶解于EtOAc中，用水(3×20ml)洗涤，经MgSO4干燥，并再次蒸发得到(1.75g)产物。从旋转蒸发器中再回收0.290g的白色晶体。MS(ES+)：C13H16N4O3计算值276；实测值(MH+)277。
D53的描述
4-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丁酸乙酯(D53)
标题化合物通过与D50RD107973-039B1所述相似的方法制备。MS(ES)：C14H18N4O3计算值290；实测值(MH+)291。
D54的描述
4-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2H-吲唑-2-基}丁酸乙酯(D54)
标题化合物通过与4-(5-氰基-2H-吲唑-2-基)丁酸乙酯(D51)所述相似的方法制备。MS(ES)：C14H18N4O3计算值290；实测值(MH+)291.
D55的描述
3-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2H-吲唑-2-基}丙酸乙酯和3-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯的混合物(D55)
将3-(4-氰基-2H-吲唑-2-基)丙酸乙酯和3-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D49)(1.2g，4.938mmol)(样品为～3∶1的1和2-异构体的混合物)，羟胺盐酸盐(0.686g，9.87mmol)和碳酸氢钠(2.072g，24.66mmol)在乙醇(15ml)中的混合物于50℃加热3小时。过滤固体，且将滤液蒸发至干得到(1.4g)无色油状物。LCMS和NMR确证为～3∶1的异构体的混合物。MS(ES)：C13H16N4O3计算值276；实测值(MH+)277。
D56的描述
4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2H-吲唑-2-基}丁酸乙酯和4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丁酸乙酯的混合物(D56)
将4-(4-氰基-2H-吲唑-2-基)丁酸乙酯和4-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)丁酸乙酯(D48)(0.249g，0.968mmol)(样品为～3∶2的1和2-异构体的混合物)，羟胺盐酸盐(0.135g，1.936mmol)和碳酸氢钠(0.407g，4.84mmol)在乙醇(5ml)中的混合物于80℃搅拌并加热90分钟，然后用乙酸乙酯(30ml)/水(50ml)稀释，有机相干燥(硫酸镁)并蒸发得到标题混合物(270mg)，为无色胶状物。LC/MS表明为具有少量杂质的3∶2的异构体的混合物。MS(ES)：C14H18N4O3计算值290；实测值(MH+)291。
D56的描述(另一种方法)
4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2H-吲唑-2-基}丁酸乙酯和4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丁酸乙酯的混合物(D56)
将4-(4-氰基-2H-吲唑-2-基)丁酸乙酯和4-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)丁酸乙酯(D48)(4.7g，9.13mmol)(样品为1和2-异构体的～2∶1混合物)，羟胺盐酸盐(2.54g，36.5mmol)和碳酸氢钠(7.67g 91mmol)在乙醇(50ml)中的悬浮液于50℃加热3小时，冷却并蒸发，然后分配于EtOAc/水中。将有机层干燥(硫酸镁)，蒸发并用乙醚研磨得到标题混合物(4g)，为白色固体。NMR和LCMS表明为2∶1的异构体混合物。MS(ES)：C14H18N4O3计算值290；实测值(MH+)291。
D57的描述
3-(5-{5-[3-氯-4-(乙氧基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D57).
将3-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)(265mg，0.96mmol)和3-氯-4-(乙氧基)苯甲酸(D7)(192mg，0.96mmol)在DMF(5ml)中于80℃一起搅拌，并加入EDAC(203mg)和HOBt(142mg)。当判断反应完成时(通过LCMS分析)，将其冷却，且将反应混合物分配于EtOAc和碳酸氢钠水溶液中。分离有机层，并用水洗涤，干燥并蒸发，然后用乙醇研磨得到粗产物。通过快速色谱法(EtOAc/己烷1∶3至1∶1)纯化，得到标题化合物(87mg)，为白色固体。MS(ES)：C22H2135ClN4O4计算值440实测值(MH+)441。
D58的描述
3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸乙酯(D58)
将3-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)(265mg，0.96mmol)，3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(可按照WO2005/58848所述制备)(197mg，0.96mmol)，EDAC(203mg)和HOBt(142mg)在DMF(5ml)中于80℃搅拌2小时。于室温搅拌过周末，然后再于80℃加热4小时。将反应混合物冷却，然后分配于EtOAc和碳酸氢钠中。分离有机层，用盐水洗涤，干燥并在真空中蒸发至干。粗物质通过快速色谱法纯化，得到标题化合物(214mg)，为白色固体。MS(ES)：C24H23N5O4计算值445；实测值(MH+)446。
D58的描述(另一种方法)
3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸乙酯(D58)
将3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(可按照WO2005/58848中所述制备)(371mg，1.81mmol)，EDAC(547mg，2.85mmol)和HOBt(437mg，2.85mmol)在DMF(5ml)中的混合物于室温放置10分钟。加入3-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)(500mg，1.81mmol)，然后于室温放置过夜。加入EDAC(200mg，1.04mmol)，并放置24小时。混合物于80℃加热2天，每晚在室温放置。混合物再于80℃加热4小时。加入EtOAc(50ml)，并用水(60ml)，饱和NaHCO3(60ml)和水(60ml)洗涤。将EtOAc层干燥(MgSO4)，并蒸发溶剂。用乙醇研磨得到标题化合物(523mg)，为米色固体。MS(ES)：C24H23N5O4计算值445；实测值(MH+)446。
D59的描述
3-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D59)
将4-[(1-甲基乙基)氧基]-3-(三氟甲基)苯甲酸(D36)(100mg，0.4mmol)溶于DMF(5ml)中，然后加入EDAC(115mg，0.6mmol)和HOBt(81mg，0.6mmol)。搅拌混合物30分钟，然后加入3-{5-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯(D52)(111mg，0.40mmol)，且反应于80℃加热过夜。再加入EDAC(50mg)，且反应再加热4小时。再加入EDAC(20mg)，且将反应加热过夜。将反应混合物加入到乙酸乙酯和碳酸氢钠的混合物中，分离有机层，且水层再用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水然后用盐水洗涤，干燥并蒸发得到粗产物。该物质通过快速色谱法(SiO2)纯化，得到标题化合物(82mg)。MS(ES)：C24H23F3N4O4计算值488；实测值(MH+)489。
D60的描述
4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸乙酯(D60)
将4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2H-吲唑-2-基}丁酸乙酯和4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丁酸乙酯的混合物(D56)(0.27g，0.930mmol)(3∶2的1和2-异构体的混合物)，3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(D3)(0.200g，0.930mmol)，EDC(0.196g，1.023mmol)和HOBT(0.157g，1.023mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中于80℃搅拌16小时，然后于120℃搅拌2小时。将反应冷却，用乙酸乙酯(40ml)和水(40ml)稀释，且有机相用3×15ml水洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发。粗物质通过快速色谱法纯化，用3∶7乙酸乙酯/己烷洗脱，得到两种产物，且用1∶1乙醚/己烷研磨得到66mg的上部斑点和36mgs的下部斑点。上部斑点为所需的1-取代的吲唑。δH(CDCl3，400MHz)：1.24(3H，t)，1.46(6H，d)，2.31(4H，m)，4.12(2H，q)，4.55(2H，t)，4.73(1H，m)，7.08(1H，d)，7.52(1H，dd)，7.62(1H，d)，8.07(1H，dd)，8.11(1H，dd)，8.29(1H，d)，8.70(1H，d)。
D60的描述(另一种方法)
4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸乙酯(D60)
N2665-84-A1
将4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2H-吲唑-2-基}丁酸乙酯和4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丁酸乙酯的混合物(D56)(4g，13.78mmol)，3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(D3)(2.96g，13.78mmol)，EDC(2.91g，15.16mmol)和HOBT(2.321g，15.16mmol)在DMF(40ml)中的溶液于室温搅拌3小时形成中间体，然后于120℃加热2小时以成环。将溶液冷却，用EtOAc稀释，用水3x洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发。通过快速色谱法纯化，用1∶3的EtOAc/异己烷洗脱。将合并的级分蒸发得到标题化合物(1.5g)，为白色固体。MS(ES)：C24H2535ClN4O4计算值468；实测值(MH+)469.δH(CDCl3，400MHz)：1.24(3H，t)，1.46(6H，d)，2.31(4H，m)，4.12(2H，q)，4.55(2H，t)，4.73(1H，m)，7.08(1H，d)，7.52(1H，dd)，7.62(1H，d)，8.06(1H，dd)，8.10(1H，dd)，8.29(1H，d)，8.70(1H，d)。
D61的描述
3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸乙酯(D61)
将3-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-2H-吲唑-2-基}丙酸乙酯和3-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯的混合物(D55)(700mg，1.27mmol)(3∶1的1和2-异构体的混合物)，3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(D3)(0.544g，2.53mmol)，EDC(0.534g，2.79mmol)和HOBT(0.427g，2.79mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(10ml)中于120℃加热2小时，冷却，用乙酸乙酯(60ml)稀释，并用水(3×20ml)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，蒸发并通过快速色谱法纯化，用1∶4的EtOAc/己烷洗脱，得到标题化合物(380mg)，为白色固体。δH(CDCl3，400MHz)：1.17(3H，t)，1.46(6H，d)，3.02(2H，t)，4.10(2H，q)，4.70-4.77(3H，m)，7.08(1H，d)，7.53(1H，dd)，7.69(1H，d)，8.05-8.12(2H，m)，8.29(1H，d)，8.71(1H，d).MS(ES)：C23H2335ClN4O4计算值454；实测值(MH+)455。
下述化合物通过与上述实施例相似的化学方法制备。在一些情况中，羧酸.EDAC和HOBt一起搅拌，然后加入偕胺肟。在一些情况中，反应混合物于室温搅拌，然后加热。除非另有说明，反应在80-120℃的温度下在DMF中进行。在一些情况中，再加入EDAC和/或HOBt。在D91的情况中，再加入羧酸。产物通过下述方法纯化：快速色谱法、研磨、MDAP、反相色谱法、使用乙醇使产物从反应混合物中沉淀，或这些方法的组合。
D96的描述
3-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D96)
将1H-吲唑-4-甲腈(0.716g，5mmol)，3-溴丙酸乙酯(1.276ml，10.00mmol)和碳酸铯(4.90g，15.00mmol)加入到N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(20ml)中，且将混合物加热至90℃，保持80分钟。将混合物冷却，然后用乙酸乙酯和水的混合物萃取。有机部分用3×30ml的水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。将粗产物混合物加入到Biotage柱上，并用1∶3的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到0.95g的标题化合物。δH(CDCl3，400MHz)1.17(3H，t)，3.01(2H，t)，4.08(2H，q)，4.71(2H，t)，7.46(1H，dd)，7.54(1H，dd)，7.81(1H，d)，8.21(1H，d)。
D97的描述
3-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}丙酸乙酯(D97)
将3-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D96)(0.95g，3.91mmol)，羟胺盐酸盐(1.086g，15.62mmol)，和碳酸氢钠(3.28g，39.1mmol)在乙醇(20ml)中于50℃加热3小时。过滤混合物并蒸发得到标题化合物(760mg)，为白色粉末。MS(ES)：C13H16N4O3计算值276；实测值(MH+)277。
D98的描述
3-溴-2，2-二甲基丙酸乙酯(D98)
将3-溴-2，2-二甲基丙酸(商购自Fluka)(1g，5.52mmol)溶于亚硫酰氯(5ml，68.5mmol)中，且所得混合物回流2小时，然后冷却至室温并真空浓缩。将残余物溶于乙醇(10ml)中，并于室温搅拌30分钟。在真空中移除大部分溶剂，将残余物溶于EtOAc中，并用1M的NaOH水溶液，盐水洗涤2次，干燥并浓缩得到标题化合物(0.939g，81％)，为浅黄色油状物，其没有进一步纯化就用于下一步骤。
D99的描述
4-溴-2，2-二甲基丁酸乙酯(D99)
于室温，将溴化氢鼓入到3，3-二甲基二氢-2(3H)-呋喃酮(1g，8.76mmol)中约5小时，且所得混合物于室温放置过夜。然后将氮气鼓入到混合物中。将粗酸溶于DCM(10ml)中，并用草酰氯(2.3ml，26.3mmol)和DMF(1滴)处理，且所得混合物于室温搅拌过周末，然后在真空中浓缩。残余物用乙醇(10ml)处理，且所得混合物于室温搅拌1小时，然后倒入水中。水相用乙醚萃取2次，且醚溶液用盐水洗涤，干燥并真空浓缩得到标题化合物(949mg，49％)，为非常浅的黄色油状物，其没有进一步纯化就用于下一步骤。
D100和D101的描述
3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D100)，N6128-6-A4和3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D101)
在DMF(2ml)中的5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑(D4)(122mg，0.344mmol)用3-溴-2，2-二甲基丙酸乙酯(D98)(79mg，0.378mmol)和Cs2CO3(134mg，0.413mmol)处理，且所得混合物于80℃搅拌过夜。再加入3-溴-2，2-二甲基丙酸乙酯(D98)(29mg，0.4mmol)和Cs2CO3(56mg，0.5mmol)，且所得混合物于80℃搅拌6小时，然后冷却至室温并真空浓缩。将残余物溶于EtOAc中，且有机相用水然后用盐水洗涤，干燥并真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法[梯度：乙酸乙酯/环己烷]纯化，得到3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D100)(92mg，55％)和3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D101)(49mg，30％)。MS(ES)C25H27ClN4O4计算值482，实测值483[M+H]+
D102的描述
3-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)-2，2-二甲基丙酸乙酯(D102)
将在无水DMF(3ml)中的1H-吲唑-4-甲腈(商购自Insight ChemicalSolutions Ltd.)(500mg，3.49mmol)，3-溴-2，2-二甲基丙酸乙酯(D98)(803mg，3.84mmol)和Cs2CO3(1.36g，4.19mmol)加热至80℃过夜，然后再加热7小时。然后反应混合物分配于EtOAc和H2O中。分离两层，且有机相再用H2O，盐水洗涤，干燥并浓缩得到黄色油状物。残余物通过快速硅胶色谱法[梯度：乙酸乙酯/环己烷]纯化，得到标题化合物(356mg，37％)，为结晶物质。MS(ES)C15H17N3O2计算值271，实测值272[M+H]+
D102的描述(另一种方法)
3-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)-2，2-二甲基丙酸乙酯(D102)
在氮气下，将1H-吲唑-4-甲腈(商购自Insight Chemical Solutions Ltd.，298mg，1.957mmol)在无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(1ml)中用NaH(94mg，2.348mmol)处理。然后将3-溴-2，2-二甲基丙酸乙酯(D98)(450mg，2.153mmol)在DMF(2ml)中的溶液加入到该深褐色的混合物中。将反应混合物加热至80℃过夜，然后在真空中浓缩。将残余物溶于EtOAc中，且有机相用水然后用盐水洗涤，干燥并浓缩得到褐色胶状物。残余物通过快速硅胶色谱法[梯度：乙酸乙酯/环己烷]纯化，得到标题化合物(217mg，86％)，为黄色油状物。MS(ES)C15H15N3O2计算值271，实测值272[M+H]+
D103的描述
3-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2，2-二甲基丙酸乙酯(D103)
将3-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)-2，2-二甲基丙酸乙酯(D102)(348mg，1.28mmol)，羟胺盐酸盐(1.087g，10.26mmol)，NaHCO3(1.078g，12.83mmol)在MeOH(20ml)中于65℃加热24小时，然后于室温过周末。混合物过滤，浓缩，用水处理并剧烈搅拌10分钟，过滤并干燥得到无色固体，在真空中于45℃干燥过夜得到标题化合物(373mg，90％)。MS(ES)C15H20N4O3计算值304，实测值305[M+H]+
D104的描述
3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D104)
将3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(D3)(245mg，1.143mmol)，3-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2，2-二甲基丙酸乙酯(D103)(348mg，1.143mmol)在DMF(5ml)中的混合物于室温用N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺(0.240ml，1.372mmol)处理，然后用HATU(522mg，1.372mmol)处理。所得混合物于室温搅拌1小时，然后于80℃搅拌过夜，然后再搅拌4小时，然后冷却至室温并真空浓缩。将残余物溶于EtOAc中，且有机相用H2O然后用盐水洗涤2次，干燥并真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法[梯度：乙酸乙酯/环己烷]纯化，得到标题化合物(233mg，39％)，为膏状固体。MS(ES)C25H27ClN4O4计算值482，实测值483[M+H]+
D105的描述
3-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D105)
将5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸(D31)(70.9mg，0.329mmol)，三乙胺(0.092ml，0.657mmol)，HOBT(60.4mg，0.394mmol)和EDC(76mg，0.394mmol)然后3-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2，2-二甲基丙酸乙酯(D103)(100mg，0.329mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(5ml)中。所得混合物于50℃搅拌过夜，然后冷却至室温，并用EtOAc稀释。有机相用H2O洗涤，干燥并真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法[15-40％EtOAc/环己烷]纯化，得到标题化合物(30mg，17％)，为浅黄色固体。MS(ES)C24H26ClN5O4计算值483，实测值484[M+H]+
D106的描述
3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酰氯(D106)
将草酰氯(0.224ml，2.56mmol)加入到搅拌的3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酸(其可如WO2005/58848中所述制备，500mg，2.437mmol)在DCM(10ml)中的溶液中，然后加入DMF(20μl)，且所得混合物于室温搅拌2小时。将溶剂蒸发得到标题化合物(545mg，100％)，为橄榄绿色固体，其没有进一步纯化就用于下一步骤。
D107的描述
3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D107)
向5-[3-(1H-吲唑-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈(D43)(85mg，0.246mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(5ml)中的溶液中加入3-溴-2，2-二甲基丙酸乙酯(D98)(103mg，0.492mmol)和Cs2CO3(120mg，0.369mmol)。所得混合物于80℃搅拌48小时，然后冷却至室温，并用EtOAc稀释。有机相用水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法[30-50％EtOAc/环己烯]纯化，得到标题化合物(20mg，16％)，为黄色固体。MS(ES)C26H27N5O4计算值473，实测值474[M+H]+
D108的描述
4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基1苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丁酸乙酯(D108)
标题化合物使用与合成3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D107)相似的方法，从5-[3-(1H-吲唑-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈(D43)，使用4-溴-2，2-二甲基丁酸乙酯(D99)作为烷基化剂代替3-溴-2，2-二甲基丙酸乙酯(D98)而获得，产率为31％(50mg)。MS(ES)C25H25N5O4计算值459，实测值460[M+H]+
D109的描述
3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D109)
将3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酰氯(D106)(0.398mmol)在乙腈(3.00ml)中于室温用3-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2，2-二甲基丙酸乙酯(D103)(101mg，0.332mmol)处理，然后用三乙胺(0.069ml，0.498mmol)处理。所得黄色溶液于室温搅拌1小时，回流过夜，再24小时并再次过夜然后冷却至室温并真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法[梯度：乙酸乙酯/环己烷]纯化，得到标题化合物(107mg，68％)，为无色固体。MS(ES)C26H27N5O4计算值473，实测值474[M+H]+
D110的描述
5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑(D110)，N6043-42
将5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸(D31)(350mg，1.623mmol)，三乙胺(328mg，452μl，3.25mmol)，羟基苯并三唑水合物(298mg，1.95mmol)，EDC (373mg，1.95mmol)和N-羟基-1H-吲唑-5-甲脒(D2)(430mg，2.43mmol)在DMF(5ml)中的混合物于50℃搅拌4天。将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc(25ml)稀释。有机层用饱和NaHCO3水溶液，水，然后盐水洗涤。将有机相干燥并真空浓缩得到标题化合物(334mg，58％)，为浅红色固体，其没有进一步纯化就用于下一步骤。MS(ES)C17H14CIN5O2计算值355，实测值356[M+H]+
D111的描述
3-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D111)
将5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑(D110)(335mg，0.94mmol)，3-溴-2，2-二甲基丙酸乙酯(D98)(197mg，0.94mmol)和K2CO3(130mg，0.94mmol)在DMF(5ml)中的混合物于80℃搅拌48小时。然后将反应混合物冷却至室温，并分配于EtOAc和水(30ml1∶1)中。分离有机相，经MgSO4干燥并真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法[20％乙酸乙酯/环己烷]纯化，得到标题化合物(100mg，22％)，为无色固体。MS(ES)C24H26ClN5O4计算值483，实测值484[M+H]+
D112的描述
4-(4-溴-1H-吲唑-1-基)-2，2-二甲基丁酸乙酯(D112)
于室温，向4-溴-1H-吲唑(商购自Insight Chemical Solutions Ltd.，826mg，4.19mmol)在DMF(10ml)中的溶液中加入Cs2CO3(1.37g，4.19mmol)和4-溴-2，2-二甲基丁酸乙酯(D99)(1.40g，6.29mmol)，且所得混合物于80℃搅拌24小时，然后冷却至室温，并用AcOEt稀释。有机相用水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法[15-25％EtOAc/环己烷]纯化，得到标题化合物(600mg，40％)，为橙色油状物。MS(ES)C15H1981BrN2O2计算值340，实测值341[M+H]+
D113的描述
4-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)-2，2-二甲基丁酸乙酯(D113)，N6375-40
于室温，向4-(4-溴-1H-吲唑-1-基)-2，2-二甲基丁酸乙酯(D112)(600mg，1.77mmol)和Zn(CN)2(207mg，1.77mmol)在DMF(5ml)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(204mg，0.18mmol)，且所得混合物于100℃搅拌过周末，再加热5小时，然后冷却至室温，并用AcOEt稀释。有机相通过塞力特硅藻土过滤，并用水然后用盐水洗涤，干燥并真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法[10-20％EtOAc/环己烷]纯化，得到标题化合物(200mg，36％)，为无色油状物。MS(ES)C16H19N3O2计算值285，实测值286[M+H]+。
D114的描述
4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2，2-二甲基丁酸乙酯(D114)
4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2，2-二甲基丁酸乙酯(D114)以与合成3-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2，2-二甲基丙酸乙酯(D103)相似的方法从4-(4-氰基-1H-吲唑-1-基)-2，2-二甲基丁酸乙酯(D113)获得，得到200mg，产率85％。MS(ES)C16H22N4O3计算值318，实测值319[M+H]+。
D115的描述
4-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丁酸乙酯(D115)
4-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丁酸乙酯(D115)以与合成5-[3-(1H-吲唑-5-基)-1，2，4-噁二唑-5-基]-2-[(1-甲基乙基)氧基]苄腈(D43)的另一种方法相似的方法从3-氰基4-[(1-甲基乙基)氧基]苯甲酰氯(D106)和4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2，2-二甲基丁酸乙酯(D114)获得。120mg，产率74％。MS(ES)C27H29N5O4计算值487，实测值488[M+H]+。
D116的描述
4-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丁酸乙酯(D116)
于室温，将5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶甲酸(D31)(67.7mg，0.314mmol)，然后三乙胺(88μl，0.628mmol)，然后HOBT(57.7mg，0.377mmol)，EDC(72.3mg，0.377)和4-{4-[(羟基氨基)(亚氨基)甲基]-1H-吲唑-1-基}-2，2-二甲基丁酸乙酯(D114)(100mg，0.314mmol)溶于DMF(4ml)中，然后于50℃搅拌5天。将混合物冷却至室温，并用EtOAc稀释。有机相用水洗涤，干燥并真空浓缩。残余物通过快速硅胶色谱法[15-40％EtOAc/环己烷]纯化，得到标题化合物(110mg，67％)，为浅黄色固体。MS(ES)C25H28ClN5O4计算值497，实测值498[M+H]+。
实施例1
3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸(E1)
将3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸乙酯(D5)(240mg)溶于MeOH(5ml)中，用2M的NaOH水溶液(5ml)处理，并于室温搅拌过夜，然后真空移除MeOH。然后反应混合物用1M的NaOH水溶液稀释，用EtOAc(x2)洗涤，并酸化至pH＝3。该溶液用EtOAc(x3)萃取，且合并的萃取液用盐水洗涤，然后蒸发得到粗产物。其使用MDAP设备纯化，得到标题化合物(13mg)，为白色固体。δH(CDCl3，400MHz)：1.44(6H，d)，3.03(2H，t)，4.68-4.75(3H，m)，7.05(1H，d)，7.60(1H，d)，8.06(1H，d)，8.11(1H，s)，8.15(1H，d)，8.24(1H，s)，8.56(1H，s).MS(ES)：C21H1935ClN4O4计算值426；实测值427(MH+).
实施例1(另一种方法)
3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸(E1)
将3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸乙酯(D5)(1.95g，4.29mmol)溶于乙醇中。加入2M的NaOH(2.143ml，4.29mmol)，且溶液于室温放置3小时。蒸发乙醇，且将混合物溶于EtOAc和水中，并用乙酸酸化。将有机层干燥(MgSO4)并蒸发得到(1.34g)的白色固体。δH(d6-DMSO，400MHz)：1.37(6H，d)，2.89(2H，t)，4.65(2H，t)，4.89(1H，m)，7.45(1H，d)，7.89(1H，d)，8.06(1H，d)，8.12(1H，d)，8.20(1H，s)，8.27(1H，s)，8.55(1H，s).MS(ES)：C21H1935ClN4O4计算值426；实测值427(MH+)。
实施例2
3-(5-{5-[3-氯-4-(乙氧基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸钠(E2)
将3-(5-{5-[3-氯-4-(乙氧基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D57)(77mg，0.17mmol)悬浮于2M的NaOH水溶液(2ml)和乙醇(2ml)中。混合物于50℃加热直到溶解，然后冷却。真空中移除乙醇，并过滤出所得固体，用乙醇，水和乙醚洗涤，然后在高真空下干燥得到标题化合物(63.6mg)，为粉色固体。δH(甲醇-d4，400MHz)1.49(3H，t)，2.77(2H，t)，4.25(2H，q)，4.71(2H，t)，7.27(1H，d)，7.82(1H，d)，8.09-8.25(4H，m)，8.55(1H，s).MS(ES)：C20H1735ClN4O4计算值；412实测值(MH+)413。
实施例3
3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸钠(E3)
将3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸乙酯(D58)(99mg，0.22mmol)溶于乙醇(2ml)中，并加入2M的NaOH水溶液(0.55ml)。反应于80℃加热30分钟，且所述试剂溶解。将反应混合物冷却至室温，然后放置过夜。过滤出所得沉淀，用水洗涤，然后用乙醚洗涤，通过真空加热干燥得到标题化合物(29.1mg)。δH(甲醇-d4，400MHz)1.46(6H，d)，2.78，(2H，t)，4.71(2H，t)，4.88-5.00(估算1H[部分重叠弱峰]，m).7.43(1H，d)，7.83(1H，d)，8.10-8.17(2H，m)，8.37-8.49(2H，m)，8.56(1H，s)，MS(ES)：C22H19N5O4计算值417；实测值(MH+)418。
实施例4
3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸(E4)
通过于50℃加热，将3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸乙酯(D58)(523mg，1.17mmol)溶于乙醇(20ml)和THF(10ml)的混合物中。冷却至室温并加入2N的NaOH(1ml，2mmol)，然后于室温放置30分钟。蒸除溶剂，加入水(50ml)，并用EtOAc(50ml)洗涤。酸化水层并用EtOAc(50ml)萃取产物。将EtOAc层干燥(MgSO4)，并蒸发溶剂。用乙醚研磨得到标题化合物(139mg)，为米色固体。δH(d6-DMSO，400MHz)：1.39(6H，d)，2.90(2H，t)，4.66(2H，t)，4.94-5.03(1H，m)，7.57(1H，d)，7.90(1H，d)，8.07(1H，dd)，8.28(1H，d)，8.42(1H，dd)，8.54(2H，dd)，12.35(1H，broad s).MS(ES)：C22H19N5O4计算值417；实测值(MH+)418。
实施例5
4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸(E5)
将4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丁酸乙酯(D44)(73mg，0.16mmol)，33％二甲基胺在乙醇(4ml)中，在微波中于160℃加热1小时。加入2滴水，然后在微波中于160℃加热3小时。使反应冷却过夜，然后在真空中蒸发至干。进行(attempt)MDAP纯化，得到粗物质。
向4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丁酸乙酯(D44)(65mg，0.14mmol)在乙醇(10ml)中的溶液中加入2M的NaOH水溶液(1ml)。于80℃加热1小时，然后于室温放置过夜。蒸发溶剂，且粗物质通过MDAP纯化。所得物质用乙醚和水研磨得到粗物质。
合并各批次的粗物质并通过MDAP纯化，将含产物的级分冻干得到标题化合物(11.1mg)。δH(d6-DMSO，400MHz)1.39(6H，d)，2.01-2.11(2H，m)，2.23(2H，t)，4.50(2H，t)，4.98(1H，七重峰)，7.56(1H，d)，7.86(1H，d)，8.07(1H，dd)，8.28(1H，d)，8.42(1H，dd)，8.52(1H，d)，8.57(1H，dd).MS(ES)：C23H21N5O4计算值431；实测值(MH+)432。
实施例6
3-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸(E6)
将3-(5-{5-[4-[(1-甲基乙基)氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-1，2，4-噁二唑-3-基}-1H-吲唑-1-基)丙酸乙酯(D59)(82mg，0.17mmol)溶于乙醇(4ml)中，然后加入2M的NaOH水溶液(0.5ml)。反应于室温搅拌过夜，然后在真空中蒸发乙醇。加入乙酸乙酯，但是化合物在水层和有机层中均存在，将混合物蒸发。通过MDAP(以2批)纯化，然后冻干得到标题化合物(28.7mg)。δH(400MHz，d6-DMSO)1.36(6H，d)，2.88(2H，t)，4.65(2H，t)，4.98(1H，七重峰.)，7.59(1H，d)，7.89(1H，d)，8.07(1H，dd)，8.27(1H，d)，8.32(1H，d)，8.41(1H，dd)，8.57(1H，dd).MS(ES)：C22H19F3N4O4计算值460；实测值(MH+)461。
实施例7
4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸(E7)
将2M氢氧化钠(1ml，2mmol)加入到4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸乙酯(D60)(N2666-13-A1)(0.062g，0.132mmol)在乙醇(5ml)中的溶液中，且将反应加热至80℃以溶解，然后冷却2小时。蒸发，溶解于乙酸乙酯/水(各25ml)中，并用乙酸酸化。将有机层干燥(硫酸镁)，蒸发，与15ml甲苯共沸，并用乙醚研磨。过滤得到标题化合物(42mg)，为白色固体。δH(d6-DMSO，400MHz)：1.37(6H，d)，2.09(2H，m)，2.24(2H，t)，4.54(2H，t)，4.90(1H，m)，7.47(1H，d)，7.62(1H，dd)，7.97(1H，d)，8.01(1H，d)，8.17(1H，dd)，8.26(1H，d)，8.56(1H，s).MS(ES)：C22H2135ClN4O4计算值440；实测值(MH+)441。
实施例7(另一种方法)
4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸(E7)
将4-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸乙酯(D60)(1.5g，3.20mmol)在热乙醇(15ml)中的溶液用氢氧化钠(7.5ml，15.00mmol)处理，并放置1小时。蒸发溶剂，且将残余物分配于乙酸乙酯/水中。加入乙酸以调节pH至5，分离各层。将有机层通过硫酸镁干燥，并蒸发。粗物质用乙醚研磨得到标题化合物(1.1g)，为白色固体。δH(d6-DMSO，400MHz)：1.37(6H，d)，2.08(2H，m)，2.23(2H，t)，4.54(2H，t)，4.90(1H，m)，7.47(1H，d)，7.62(1H，dd)，7.97(1H，d)，8.01(1H，d)，8.17(1H，dd)，8.26(1H，d)，8.56(1H，s).MS(ES)：C22H2135ClN4O4计算值440；实测值(MH+)441.
实施例8
3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸(E8)
将3-[4-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丙酸乙酯(D61)(380mg，0.835mmol)溶于热乙醇(4ml)中，加入2M氢氧化钠(2ml，4.00mmol)，并搅拌溶液30分钟。形成沉淀。蒸发乙醇，且将残余物分配于EtOAc/水中。水层用AcOH中和，并分离各层。有机层经硫酸镁干燥，并蒸发。粗物质用乙醚研磨得到(240mg)白色固体。δH(d6-DMSO)1.36(6H，d)，2.90(2H，t)，4.68(2H，t)，4.89(1H，m)，7.46(1H，d)，7.59(1H，t)，7.99(2H，d)，8.16(1H，dd)，8.25(1H，d)，8.55(1H，s)，11.90(1H，br.s).MS(ES)：C21H1935ClN4O4计算值426；实测值(MH+)427。
下述实施例通过相似的水解反应制备。除非另有说明，反应在室温至80℃之间进行。反应溶剂为乙醇和2M的NaOH(水溶液)的混合物。有时加入其它溶剂，如DCM，以帮助溶解。在一些情况中，在后处理步骤中使用其它溶剂，如DCM代替EtOAc。在一些情况中，将反应混合物酸化(使用乙酸或盐酸)以得到羧酸，而在另一些情况中将产物以钠盐分离。在一些情况中蒸发一些反应溶剂导致产物沉淀，且该物质通过过滤分离。或者，有时分离羧酸然后通过用氢氧化钠处理转化为钠盐。在E23，E24的情况中，在后处理中使用盐酸酸化反应得到盐酸盐。该化合物通过MDAP或研磨纯化。有时使用冻干得到固体物质。
实施例42
4-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸(E42)
将4-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]丁酸乙酯(D63)(127mg，0.27mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入氢氧化钠(11mg)。反应混合物在微波反应器中于100℃加热1小时，然后冷却。所得固体通过过滤分离，然后用丙酮洗涤。通过MDAP纯化，然后冻干所得物质得到标题化合物(38.1mg)。MS(ES)：C22H2135ClN4O4计算值440；实测值(MH+)441。
下列实施例使用与上述相似的方法制备。
实施例44
4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丁酸(E44)
将4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-2H-吲唑-2-基]丁酸乙酯(D45)(60mg，0.13mmol)加入到二甲基胺在乙醇(4ml)中的溶液中，然后加入几滴水。混合物在微波反应器中加热至160℃，保持4小时，然后冷却。在真空中移除溶剂，且粗物质通过MDAP纯化，得到标题化合物(28.3mg)，为白色固体。MS(ES)：C23H21N5O4计算值431；实测值(MH+)432.
实施例45
3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸(E45)
于室温，向3-[5-(5-{3-氯-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D100)(85mg，176mmol)在THF(2ml)中的溶液中加入NaOH(2N的H2O溶液，440μl，880mmol)，且所得混合物于50℃搅拌过夜。加入NaOH(2N的H2O溶液，440μl，880mmol)和THF(2ml)，且所得混合物于80℃搅拌2夜，然后冷却至室温。真空中移除大部分THF，且将所得水相酸化至pH3。滤出形成的沉淀，并用H2O洗涤，然后于60℃真空下干燥得到标题化合物(73mg，91％)，为白色固体。MS(ES)：C23H23ClN4O4计算值454；实测值(MH+)455。
下述实施例使用与实施例45(E45)所述相似的方法，使用EtOH而不是THF作为有机溶剂而制备：
实施例48
3-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸(E48)
将3-[4-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D105)(50mg，0.103mmol)溶于乙醇(10ml)中。加入氢氧化钠(2N的H2O溶液，0.258ml，0.517mmol)，且所得混合物于60℃搅拌过夜，然后冷却至室温。蒸发溶剂，然后残余物用水稀释。水相用2N的HCl水溶液中和，然后用EtOAc萃取。有机相用H2O洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩得到标题化合物(22mg，42％)，为灰白色固体。MS(ES)：C22H22ClN5O4计算值455；实测值(MH+)456。
实施例49
3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸(E49)
将3-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D107)(50mg，0.106mmol)溶于乙醇(10ml)中。加入氢氧化钠(2N的H2O溶液，0.264ml，0.528mmol)，且所得混合物于室温搅拌2小时。在真空中移除大部分溶剂，且残余物用水稀释。水相用2N的HCl水溶液中和，然后用EtOAc萃取。有机相用H2O洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩得到标题化合物(15mg，30％)，为浅黄色固体。MS(ES)：C23H24N5O4计算值445；实测值(MH+)446。
实施例50
4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丁酸(E50)
使用与制备实施例49(E49)相似的方法，从4-[5-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丁酸乙酯(D108)获得标题化合物(E50)(16mg，32％)。MS(ES)：C25H25N5O4计算值459；实测值(MH+)460.
实施例51
3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸(E51)
将3-[4-(5-{3-氰基-4-[(1-甲基乙基)氧基]苯基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D109)(100mg，0.21mmol)在乙醇(2ml)中的溶液用2M氢氧化钠水溶液(1ml，大量过量)处理，然后于80℃加热2小时。将反应混合物冷却，且在真空中移除大部分乙醇。残余物用水(3ml)稀释，且用浓HCl水溶液酸化，并用EtOAc(3×10ml)萃取。将合并的萃取液干燥并真空浓缩。残余物通过MDAP纯化，得到所需产物(5mg，5％)，为无色固体。MS(ES)C24H23N5O4计算值445；实测值(MH+)446。
实施例52
3-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸(E52)
3-[5-(5-{5-氯-6-[(1-甲基乙基)氧基]-3-吡啶基}-1，2，4-噁二唑-3-基)-1H-吲唑-1-基]-2，2-二甲基丙酸乙酯(D111)(100mg，0.21mmol)在乙醇(2ml)中的溶液用2M氢氧化钠水溶液(1ml)处理，然后于80℃在搅拌下加热4小时。将反应混合物冷却至室温，并用水(5ml)稀释。水溶液用冰醋酸酸化，并用EtOAc(2×10ml)萃取。合并的有机相经MgSO4干燥，并真空浓缩。残余物通过MDAP纯化，得到所需产物(3mg，3％)，为无色固体。MS(ES)：C22H22ClN5O4计算值455；实测值(MH+)456.
下述实施例使用与实施例48(E48)所述相似的方法制备。
S1P1 GTPγS结合试验
稳定表达S1P1受体的大鼠嗜碱性白血病细胞(RBL)生长至80％融合，然后收集到10ml磷酸缓冲盐水(PBS)中，并于1200rpm离心5分钟。移除上清液后，将沉淀再悬并匀浆在20体积的试验缓冲液(20mM HEPES pH7.4，100mM NaCl，10mM MgCl2.6H2O，10μM GDP Saponin 10μg/ml)中。于20,000rpm下再离心膜悬浮液20分钟，再均化并再离心(spun)。在第二次离心后，将沉淀物重悬于合适体积(每瓶细胞1ml)中，并测定蛋白质浓度。
对S1P浓缩储备物进行超声处理，然后以起始浓度10-5M制备一系列稀释液。在96深孔板中用不同浓度的S1P和0.3nM的35S-GTPγS(NEN；比活度1250Ci/mmol)温育稀释后的膜(10μg/孔)。在30℃进行结合45分钟，并通过用Packard Universal收集器将膜收集至GF/B过滤板上而终止结合。干燥该板45分钟后，将50μl的Microscint 0分别加至各孔中并在Topcount NXT(Perkin Elmer)上测量结合情况。使用Graphpad Prism 4分析数据并表示为超过基准的刺激百分数(percentage stimulation above basal)。EC50值定义为产生最大刺激的50％所需的激动剂的浓度。
在该GTPγS结合试验中，本发明的实施例1的pEC50＞6。
S1P1 GTPγS结合试验(另一种方法)
所有膜制备的步骤都在4℃下进行。稳定表达人S1P1受体的大鼠肝癌细胞或稳定表达人S1P3受体的大鼠嗜碱性白血病细胞(RBL)生长至80％融合，然后收集至10ml的磷酸缓冲盐水(PBS)中，并在1200rpm下离心5分钟。除去上清液后，将沉淀物重悬浮，并在玻璃韦林氏搅切器内在200ml的缓冲液(50mM HEPES，1mM亮肽酶素，25μg/ml杆菌肽，1mM EDTA，1mM PMS F，2μM胃蛋白酶抑制剂A)中通过两个15秒的破裂(burst)将细胞均质化。在第一次破裂后将搅切器浸入冰中5分钟，并在最终的破裂后浸入冰中10～40分钟，以使泡沫消散。然后将所得物质在500g下旋转20分钟，将上清液在48000g下旋转36分钟。将沉淀物重悬于与上述一样但是不含PMSF和胃蛋白酶抑制剂A的缓冲液中。然后迫使所得物质穿过0.6mm的针头，得到所需体积(通常为初始细胞沉淀物体积的4倍)，等分试样并冷冻储存于-80℃。
将人S1P1大鼠肝癌膜(1.5μg/孔)粘附于测定缓冲液(HEPES 20mM，MgCl210mM，NaCl 100mM，使用KOH 5M调节pH为7.4，还加入GDP 10μM FAC(最终测定浓度)和皂苷90μg/ml FAC)中的麦胚凝集素(WGA)涂覆的闪烁迫近测定(SPA)珠上(0.125mg/孔)。
于冰上预偶联30分钟后，珠与膜悬浮液分散至白色Greiner聚丙烯LV384孔板中(5μl/孔)，其中含有0.1μl的化合物。然后将测定缓冲溶液中制成的5μg/孔的[35S]-GTPγS(0.5nM最终放射性配体浓度)加至激动剂板上。然后在1000rpm下离心最终的测定混合物(cocktail)(10.1μl)5分钟，立即在Viewlux读出器上读取。
将所有的测试化合物以10mM的浓度溶于DMSO中，并使用1于4(1in4)稀释步骤在100％DMSO中制备，得到11点的剂量反应曲线。将稀释液转移至测定板上，确保DMSO浓度对于所有测定在整个板上是恒定的。
所有数据都标准化为各板上16个高和16个低对照孔的平均值。然后应用四参数曲线拟合。
在该试验中，本发明实施例1-52的pEC50＞5。
S1P3 GTPγS结合试验
将来自大鼠嗜碱性白血病细胞(RBL-2H3)的S 1P3膜(1.5μg/孔)粘附于测定缓冲液(HEPES 20mM，MgCl2 3mM，NaCl 100mM，使用KOH 5M调节pH为7.4，还加入GDP 10μM FAC和皂苷90μg/ml FAC)中的WGA涂覆的SPA珠上(0.125mg/孔)。
于冰上预偶联30分钟后，珠与膜悬浮液分散至白色Greiner聚丙烯LV384孔板(5μl/孔)中，其中含有0.1μl的化合物。然后将测定缓冲溶液中制成的5μg/孔的[35S]-GTPγS(0.5nM最终放射性配体浓度)加至激动剂板上。然后在1000rpm下离心最终的测定混合物(cocktail)(10.1μl)5分钟，立即在Viewlux读出器上读取。
将所有的测试化合物以10mM的浓度溶于DMSO中，并使用1于4稀释步骤用100％DMSO制备，得到11点的剂量反应曲线。将稀释液转移至测定板上，确保DMSO浓度对于所有测定在整个板上是恒定的。
所有数据都标准化为各板上16个高和16个低对照孔的平均值。然后应用四参数曲线拟合。
在该试验中，实施例1-46和52的pEC50＜6.5，许多被检测的实施例的pEC50＜5。
酵母结合试验
通过将表达盒(cassette)整合入酵母菌株MMY23的ura3染色体基因座而产生表达人S1P1受体的酵母(酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))细胞。该盒包含编码人S1P1受体的DNA序列，在S1P1的5’端的侧翼为酵母GPD启动子，而在S1P1的3’端的侧翼为酵母转录终止子序列。MMY23表达酵母/哺乳动物嵌合体G-蛋白质α亚单位，其中Gpal的C-末端的5个氨基酸被人Gαi1/2的C-末端的5个氨基酸替代(如Brown等(2000)，Yeast 16：11-22中所述)。在30℃，细胞于没有尿嘧啶、色氨酸、腺嘌呤和亮氨酸的液体完全合成的(SC)(liquid Synthetic Complete(SC))酵母培养基中生长(Guthrie和Fink(1991)，Methods in Enzymology，Vol.194)至对数生长期后期(约6OD600/ml)。
将激动剂制备成10mM的DMSO溶液。使用DMSO中4倍稀释液(BiomekFX，Beckman)测定EC50值(产生最大响应的50％所需浓度)。将激动剂的DMSO溶液(1％的最终测定体积)转移至黑色微滴定板(Greiner，384孔)中。将细胞以密度0.2OD600/ml悬浮于没有组氨酸、尿嘧啶、色氨酸、腺嘌呤和亮氨酸并补充0.1mM 3-氨基三唑、0.1M磷酸钠(pH7.0)和10μM荧光素二-β-D-吡喃葡萄糖苷(FDGlu)的SC培养基中。将该混合物(50μl/孔)添加于测定板(Multidrop 384，Labsystems)中的激动剂中。在30℃培养24小时后，使用荧光微滴定板读出器(Tecan Spectrofluor或LJL Analyst，激发波长：485nm；发射波长：535nm)测定因外切葡聚糖酶使FDGlu降解为荧光素而生成的荧光，所述外切葡聚糖酶是在激动剂刺激的细胞生长期间产生的内源酵母酶。将荧光对化合物浓度作图，并使用四参数拟合来反复拟合曲线，以得到浓度作用值。根据下列方程计算功效(Emax)：
Emax＝Max[化合物X]-Min[化合物X]/Max[S1P]-Min[S1P]×100％
其中，Max[化合物X]和Min[化合物X]分别为由化合物X的浓度作用曲线得到的拟合最大值和最小值，Max[S1P]和Min[S1P]为分别由1-磷酸鞘氨醇(可由Sigma得到)浓度作用曲线得到的拟合最大值和最小值。根据下列方程计算等效的摩尔比(EMR)值：
EMR＝EC50[化合物X]/EC50[S1P]
其中EC50[化合物X]是化合物X的EC50，EC50[S1P]是S1P的EC50。
在该试验中，测试的本发明示例性化合物的pEC50＞5。