一种阿里红有效组分及其制备方法和用途 【技术领域】
本发明涉及一种从多孔菌科菌类阿里红中分离得到的有效组分，并提供其制备方法、制剂和医药用途。
背景技术
近些年在植物中发现的喜树碱、长春碱、紫杉醇等，具有较好的抗肿瘤作用，使得植物来源的抗肿瘤药物组件引起重视，但已发现的植物药还有一些不足，即药物在杀伤癌细胞同时，对人体一些正常的器官组织亦有一定损害，患者会出现恶心、脱发、骨髓抑制、血小板减少和贫血等不良反应。阿里红药材中除含有三萜酸类(主要为四环三萜类，如羊毛脂烷型)外，还含有芳香类、倍半萜(烯)类、甾醇类、多糖、单宁以及甘露醇、以及钙、镁、磷、钴等微量元素。
【发明内容】
本发明要解决的技术问题是研发一种主要由阿里红总三萜酸组成的提取物，能较好的治疗肿瘤疾病，并且毒性较小。该提取物中总三萜酸含量高，而且总三萜酸中主要成份较清楚，产品的重现性好，质量容易控制，从而可以达到疗效稳定的目的。
本发明包括具有抗肿瘤作用的阿里红总三萜酸的制备方法，以及阿里红总三萜酸为活性成分的中药制剂。
为解决上述技术问题，本发明研究并制定如下技术方案：
一种阿里红总三萜酸提取物，其特征在于按重量百分比计，其中含有阿里红总三萜酸为50％～99％。
所述阿里红总三萜酸提取物，其特征在于按重量百分比计，提取物中含齿孔酸1.5-18％、去氢齿孔酮酸1.0-12％、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸1.2-8％、硫色多孔菌酸0.5-10.6％，和C组成份，C组成份中至少有fomelactone B、Versisponic acid D、去氢齿孔酸、阿里红酸A、阿里红酸G中一个或二个或二个以上成分。
前述阿里红总三萜酸提取物，优选提取物中阿里红总三萜酸的重量百分比为60-99％；或者，提取物中含齿孔酸2-18％、去氢齿孔酮酸2.5-12％、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸1.8-8％、硫色多孔菌酸1.0-10.6％、和C组成份，C组成份中至少有fomelactone B、Versisponic acid D、去氢齿孔酸、阿里红酸A和阿里红酸G中的一个或二个或二个以上成分。
优选阿里红总三萜酸提取物中，阿里红总三萜酸的重量百分比为70-99％；或者，提取物中含齿孔酸4.0-18％、去氢齿孔酮酸3.5-12％、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸2.1-8％、硫色多孔菌酸2.4-10.6％、和C组成份，C组成份中至少有fomelactone B、Versisponic acid D、去氢齿孔酸、阿里红酸A和阿里红酸G中的一个或二个或二个以上成分。
更优选阿里红总三萜酸提取物中，阿里红总三萜酸的重量百分比为80-90％；或者，提取物含齿孔酸7-16％、去氢齿孔酮酸4.5-8％、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸2.6-5％)、硫色多孔菌酸2.7-7％和C组成份，C组成份中至少有fomelactone B、Versisponic acid D、去氢齿孔酸、阿里红酸A和阿里红酸G中的一个或二个或二个以上成分。
本领域普通技术人员能够理解以下情况：上述阿里红总三萜酸提取物中，阿里红总三萜酸的重量百分比为99％就等于是纯的阿里红总三萜酸；由于阿里红总三萜酸是从中药阿里红中提取分离的有效部位，其中可能含有少量阿里红药材中一些其它成份，其它成分指非三萜类成份或由于含量低或发明时因测试手段等原因而没有鉴定的三萜酸成份，或者是一些源于药材本身或提取分离过程中产生的杂质，但这些“阿里红中提取的其它成份”或杂质不影响本发明药物组合物治疗肿瘤的效果；此处“少量”意味着按重量计不大于49％，较好的是不大于40％，更理想是不大于20％，最优选是不大于15％。
本发明包括一种阿里红总三萜酸提取物的制备方法，其包括如下步骤：
一种阿里红总三萜酸提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取阿里红，用水和/或有机溶剂提取，得提取液；
(2)将步骤(1)提取液直接上大孔树脂柱吸附，或者，将步骤(1)提取液浓缩后上大孔树脂柱吸附；
(3)对吸附阿里红提取物的大孔树脂柱进行梯度洗脱；
(4)收集富含阿里红总三萜酸的洗脱液，浓缩，得阿里红总三萜酸提取物；
或者，将步骤(1)提取液，回收溶剂，浓缩得浸膏，用10％-50％乙醇分散浸膏；过滤或离心收集沉淀物，干燥，得阿里红总三萜酸提取物。
较好的制备方法中，步骤(1)提取时，有机溶剂是指碳数为C1-C5的直链或支链低级醇、卤代烷基、石油醚、丙酮、乙酸乙酯；用回流、浸渍、渗漉、水煎或超声的方法提取；本领域普通技术人员熟知，根据不同的提取方法，选择相应的提取溶剂。
步骤(2)所用大孔树脂为聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚甲基丙烯酸酯型中的任意一种或几种为骨架材料的树脂；
步骤(3)所述梯度洗脱的溶剂选自水、C1-C5的直链或支链低级醇、石油醚、丙酮、乙酸乙酯或者它们的混合物；
或者，用C1-C5的直链或支链低级醇、二氯甲烷或氯仿超声提取阿里红，将提取液浓缩后得浸膏，用浸膏重3-5倍量的30％-45％乙醇分散浸膏；过滤或离心收集沉淀物，干燥，即得阿里红总三萜酸提取物。
较优选的制备方法中，提取时，所用有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、二氯甲烷、氯仿中的任意一种或它们的混合物；所述大孔树脂选自D101、DM301、AB-8、ZTC-1、DM130、D1400、HPD100、SP825或HP20型树脂；大孔树脂柱的梯度洗脱是先用＜40％的乙醇除去杂质，再用40-95％乙醇洗脱阿里红总三萜酸，或者用石油醚与丙酮的混合溶液梯度洗脱大孔树脂柱，收集富集总三萜酸的洗脱液，浓缩，得到阿里红总三萜酸提取物；或者用石油醚与丙酮的混合溶液梯度洗脱大孔树脂柱，收集富集总三萜酸的洗脱液，浓缩，得到阿里红总三萜酸提取物。
优选的制备方法中，提取所用溶剂是30-90％乙醇；大孔树脂柱的梯度洗脱是先用5％-35％乙醇除去杂质，再用55％-90％乙醇洗脱阿里红总三萜酸，收集富含总三萜酸的洗脱液，浓缩，干燥，得到阿里红总三萜酸提取物，或者用石油醚与丙酮15∶0-1(V/V)的混合溶液梯度洗脱大孔树脂柱，收集富集总三萜酸的洗脱液，浓缩，得到阿里红总三萜酸提取物。
更优选的制备方法中，提取所用溶剂是55-85％乙醇；梯度洗脱是先用10-30％乙醇除去杂质，再用60％-85％乙醇洗脱阿里红总三萜酸，收集富集总三萜酸的洗脱液，浓缩后，选用减压、真空、冷冻或喷雾方法中的任意一种进行干燥，得到阿里红总三萜酸提取物，按重量百分比计其中含有阿里红总三萜酸为50％～99％；将阿里红总三萜酸提取物与药学上可接受载体混合，制成口服制剂或注射剂。
所述阿里红总三萜酸制备方法，所用的提取、分散或梯度洗脱时，所用的有机溶剂是指碳数为C1-C5的直链或支链低级醇(所述低级醇优选甲醇、乙醇、丙醇和/或正丁醇)、卤代烷基(所述地卤代烷基优选一氯甲烷、二氯甲烷和/或氯仿)；水和低级醇是V/V混合(例如，在一定毫升数的水中，加入一定毫升数的低级醇)。步骤(1)提取中，优选水和低级醇混合比例为0-95％(例如，95％是按100毫升溶液中低级醇占95毫升计)；用回流、浸渍、渗漉或水煎法提取。前述步骤(3)中所述梯度洗脱，是指在洗脱液中从少到多地在水中逐步加大含醇量；较好的方法是先用40％以下浓度的低级醇除去杂质(例如用10-38％低级醇除杂质)，再用40-95％低级醇洗脱总三萜类，收集富含阿里红总三萜酸的洗脱液，浓缩，得到阿里红总三萜酸提取物。柱层析过程中，可按常规用薄层层析监测洗脱过程。
本发明还包括一种治疗肿瘤的药物组合物，将前述任一种阿里红总三萜酸提取物与药学上可接受载体混合，制成口服制剂或注射剂。所述药学上可接受载体包括常规制剂辅料，也包括对本发明药效没有明显影响的抗氧化剂、氨基酸、维生素、碳水化合物或植物提取物。所述口服制剂为胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂或滴丸，所述注射剂包括冻干粉针剂或注射液。
本发明还包括前述任一种阿里红总三萜酸提取物在制备治疗肿瘤药物中的应用。所述肿瘤包括肝脏肿瘤、胃癌、结肠癌。
从阿里红中共分离得到11个化合物分别为齿孔酸、去氢齿孔酮酸、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸、硫色多孔菌酸、Versisponic acid D、fomelactone B、去氢齿孔酸、阿里红酸A、阿里红酸G、24-methyl-lanost-8，24-dien-23S，26-lactone和3-O-乙酰基齿孔酸。该提取物中主要的三萜类化合物结构式如下：
齿孔酸 去氢齿孔酮酸
3-酮基-去氢硫色多孔菌酸 硫色多孔菌酸
fomelactone B 阿里红酸G
24-methyl-lanost-8，24-dien-23S，26-lactone Versisponic acid D
本发明以阿里红中总三萜酸为有效活性成分，用于制备治疗肿瘤的中药制剂，该中药制剂可以是阿里红中总三萜酸和药学上可接受的载体混合，药学上可接受的载体包括口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。给药途径可以是口服、注射、局部给药等。
根据本发明的技术方案，该中药制剂可以是口服制剂或注射用制剂，其中口服制剂包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂、滴丸等。注射剂型为注射液或冻干粉针剂。所用辅料包括：淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、土温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硬脂酸盐和明胶等常规辅料，制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。
本发明采用大孔吸附树脂技术富集阿里红中总三萜酸，不仅总三萜酸含量高，而且总三萜酸的基本成份及其相对含量较清楚，利于质量控制，可使产品重现性好，从而达到疗效显著且稳定的优良效果。
由于采用了中药现代化技术中的树脂技术，去除了大量杂质，活性成分的含量较高，且成本低，工艺简单，更适合工业化大生产，可用于制备各种现代制剂。根据动物实验数据推测，人有效用量范围为50mg-150mg/天。实验表明阿里红总三萜酸提取物随着给药剂量增加，抑瘤率也明显增加。
【具体实施方式】
以下通过实施例详细说明本发明技术方案的实施，但不应以此限定本发明的实施范围。
一、药学试验
本发明所述的菌类材料来源于真菌类多孔菌科层孔菌属(Fomes)阿里红(Fomes officinalis(Vill.et Fr.)Ames)，别名为苦白蹄。(杨卫星，新疆常见药用植物使用图谱，新疆科学技术出版社，2006年出版)。材料可以以多种形式投入使用，如新采收、未加工的材料。本实验使用干燥后的材料。
实施例1：阿里红总三萜酸提取物制备
1kg粉碎的阿里红药材，装入回流提取罐，以60％浓度的乙醇液回流提取3次，每次2h，合并提取液，减压浓缩后加适量水分散，直接吸附于DM301大孔树脂上，依次用10-95％乙醇进行梯度洗脱，用薄层层析跟踪检测洗脱液，(薄层层析条件：展开剂为石油醚∶丙酮(2∶1)或石油醚∶乙酸乙酯(4∶1)的混合溶剂，将展开后的硅胶板，用香草醛-浓硫酸显色，可与标准品或对照品对照)。前10-40％的乙醇逐步除杂，收集后面45-95％乙醇洗脱液，浓缩干燥得，阿里红总三萜酸提取物260g。
总三萜酸的含量测定方法：取样品，加适量的香草醛-冰醋酸-高氯酸显色后，在535nm下测定吸光度，按外标一点法，计算阿里红总三萜酸的含量。
其中各单体的含量测定方法主要是参照文献(吴霞，维吾尔药阿里红、阿育魏实的化学成分及生物活性研究，中国协和医科大学，博士论文，2005，收载于中国知网的《中国学术文献网络出版总库》)，本发明所述的阿里红总三萜酸和各单体的含量均采用上述方法测定。
根据上述方法，将干燥后的样品，色谱条件为：色谱柱：Diamonsil C18(250x4.6mm，5μm)，流动相：乙腈(B)-0.4％磷酸水溶液(A)进行梯度洗脱，50％B-90％(0～70min)，90％B-95％B(70～75min)，然后保持5min，流速0.8ml/min，检测波长210nm，记录时间大于90min。测得提取物中总三萜酸的含量为85％，齿孔酸含量5.3％，其余三萜酸类化合物的含量为79.7％，其中，还含有去氢齿孔酮酸、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸、硫色多孔菌酸、fomelactone B、Versisponic acid D、去氢齿孔酸、阿里红酸A、阿里红酸G。
实施例2：阿里红总三萜酸提取物的制备
1kg粉碎的阿里红药材，以10L 60％浓度的乙醇浸泡2h，装入渗漉桶，提取3次，每次2h，收集渗滤液，浓缩后，拌样上D1400大孔树脂柱，吸附后，以10-20％乙醇(水/乙醇的V/V比，全文同，除非有特别说明)除杂后，60％-70％乙醇洗脱(即解析)，收集60％乙醇洗脱液(用TLC法跟踪检测洗脱液)，减压浓缩，真空干燥，即得阿里红总三萜酸提取物280g，阿里红总三萜酸含量为52.3％，齿孔酸含量为5.4％，其余三萜酸类化合物的含量为46.9％，其中，去氢齿孔酮酸为2.8％、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸为2.1％、硫色多孔菌酸为1.4％、fomelactone B为1.8％、Versisponic acid D为1.5％、去氢齿孔酸为3.2％。
实施例3：阿里红总三萜酸的制备
1kg粉碎的阿里红药材，以15L 70％浓度的乙醇回流提取3次，每次2h，收集提取液，浓缩后，拌样上HP20大孔树脂柱吸附后，以25％乙醇除杂，70％乙醇解析，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得阿里红总三萜酸提取物294g，总三萜酸的含量为60％，齿孔酸含量为7.5％，其余三萜酸类化合物的含量为52.5％，其中，去氢齿孔酮酸为3.4％、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸为2.8％、硫色多孔菌酸为2.5％、Versisponic acid D为0.78％、去氢齿孔酸为5.5％，阿里红酸A为0.24％、阿里红酸G为0.45％。
实施例4：阿里红总三萜酸的制备
1kg粉碎的阿里红药材，以18L 75％浓度的乙醇回流提取3次，每次3h，收集提取液，浓缩后，拌样上D101大孔树脂柱吸附后，以30％乙醇除杂，85％乙醇解析，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得阿里红总三萜酸提取物360g，用显色法测定阿里红总三萜酸的含量为90％，齿孔酸含量为15.8％，其余三萜酸类化合物的含量为74.2％，其中，去氢齿孔酮酸为7.6％、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸为4.5％、硫色多孔菌酸为6.4％、fomelactone B为0.7％、Versisponicacid D为1.5％、去氢齿孔酸为1.4％、阿里红酸A为0.67％、阿里红酸G为0.34％。
实施例5：阿里红总三萜酸的制备
1kg粉碎的阿里红药材，以13L 70％浓度的乙醇回流提取3次，每次2h，收集提取液，浓缩后，用水分散后，上AB-8大孔树脂柱，吸附后，以10％乙醇除杂，80％乙醇解析，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得阿里红总三萜酸提取物286g，阿里红总三萜酸的含量为73％，齿孔酸含量为9％，其余三萜酸类化合物的含量为64％，其中，去氢齿孔酮酸为2.9％、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸为3.3％、硫色多孔菌酸为4.1％、fomelactone B为0.7％、Versisponicacid D为0.9％去氢齿孔酸为2.1％、阿里红酸A为0.43％和阿里红酸G为0.23％。
实施例6：阿里红总三萜酸的制备
1kg粉碎的阿里红药材，以13L 65％浓度的乙醇回流提取3次，每次2h，收集提取液，浓缩后，用水分散后，上ZTC-1大孔树脂柱，吸附后，以15％乙醇除杂，70％乙醇解析，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得阿里红总三萜酸提取物276g，阿里红总三萜酸的含量为60％，齿孔酸含量为8％，其余三萜酸类化合物的含量为52％，其中，去氢齿孔酮酸为1.1％、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸为3.2％、硫色多孔菌酸为3.5％、fomelactone B为0.7％、Versisponicacid D为1.2％、去氢齿孔酸为3.8％和阿里红酸A为0.17％。
实施例7：本发明阿里红总三萜酸分离鉴定
取阿里红药材1kg，以90％浓度的乙醇回流提取3次，每次2h，提取液合并，减压浓缩至无醇味，拌样上ZTC-1大孔树脂柱吸附后，以30％乙醇洗脱除杂、90％乙醇洗脱解吸，收集90％乙醇洗脱液，减压蒸干，即得阿里红总三萜酸提取物400g，阿里红总三萜酸提取物中总三萜酸的含量为88％，齿孔酸含量为6.8％。
取以上提取物，通过硅胶柱层析粗分，利用石油醚∶丙酮(100∶1-1∶100，V/V)梯度洗脱得到多个流份，再分别对不同流份采用氯仿或甲醇进行重结晶，分别得到齿孔酸和去氢齿孔酮酸，再对各流份利用反相柱层析甲醇水系统梯度洗脱，配合硅胶柱层析得到其它的9个化合物。通过核磁共振技术以及质谱解析化合物结构，经与文献对照(阿里红化学成分的研究(1)，中草药，2005，6)确定其余9个化合物分别为3-酮基-去氢硫色多孔菌酸、硫色多孔菌酸、Versisponic acid D、fomelactone B、去氢齿孔酸、阿里红酸A、阿里红酸G、24-methyl-lanost-8，24-dien-23S，26-lactone和3-O-乙酰基齿孔酸。
实施例8：阿里红总三萜酸提取物制备
取阿里红药材1kg，用药材20倍量的80％的乙醇溶液回流提取4h，共三次，将提取液减压浓缩后，用4倍浸膏量的30％乙醇进行分散后，高速离心，将沉淀物在40℃下减压干燥后，即得阿里红总三萜酸提取物520g。该提取物中阿里红总三萜酸的含量为60％，齿孔酸含量为8％。
实施例9：阿里红总三萜酸提取物制备
取阿里红药材1kg，以15倍量的甲醇溶液回流提取3h，共三次，将提取液减压浓缩后，用4.5倍浸膏量的40％乙醇进行分散后，过滤，将滤渣在低温，干燥后，即得阿里红总三萜酸提取物600g。该提取物中阿里红总三萜酸的含量为55％，齿孔酸含量为6％。
实施例10：阿里红总三萜酸提取物制备
取阿里红药材5kg，以10倍量的二氯甲烷(或氯仿)超声提取2h，共三次，将提取液减压浓缩，回收溶剂后，用5倍浸膏量的50％乙醇进行分散后，过滤后，将滤渣低温，干燥后，即得阿里红总三萜酸提取物610g。该提取物中阿里红总三萜酸的含量为51％，齿孔酸含量为2.7％。
实施例11：阿里红总三萜酸提取物制备
取阿里红药材2kg，以10倍量的二氯甲烷超声提取2.5h，共三次，将提取液减压浓缩，回收溶剂后，用5倍浸膏量的45％乙醇进行分散后，过滤后，将滤渣低温，干燥后，上ZTC-1树脂柱，用石油醚∶丙酮按15∶1进行洗脱。得到样品504g，该提取物中阿里红总三萜酸的含量为87％，齿孔酸含量为29.3％。
实施例12：阿里红总三萜酸胶囊剂
取实施例2方法制备的阿里红总三萜酸提取物100g，60℃干燥，研磨粉碎，过80目筛，加过80目筛的淀粉98g及硬脂酸镁2g，混合均匀，用80％乙醇适量制成软材，过30目筛制颗粒，烘干，使水分小于5％，过40目筛整粒，分装于3号胶囊中。每粒胶囊含阿里红总三萜酸0.1g，用铝塑复合包装，即得。口服，1次1粒，每日2次。
实施例13：阿里红总三萜酸片剂
取实施例4方法制备的阿里红总三萜酸提取物30g，加入淀粉30g，微晶纤维素10g，以10％淀粉浆适量用12目筛制粒，在50℃以下干燥，干粒加入硬脂酸镁，整粒，混匀，压片，即得。口服，1次1片，每日3次。
二、药效学试验
为了便于理解阿里红总三萜酸的治疗效果，本发明用实施例4制备得到的阿里红总三萜酸进行了以下药效学实验(如无特别说明，本发明中阿里红总三萜酸即指阿里红总三萜酸提取物)。
实施例1：阿里红总三萜酸对小鼠H22肝癌实体瘤的影响
用生理盐水将肝癌细胞H22配制成2.5×107个细胞/ml，接种于小鼠腋下，每鼠0.2ml，造成荷瘤小鼠模型。将荷瘤小鼠随机分为荷瘤对照组，抗肿瘤阳性药5-氟尿嘧啶组(30mg/kg)，阿里红总三萜酸小(50mg/kg)、中(100mg/kg)、大(200mg/kg)剂量组。5-氟尿嘧啶组按0.01ml/g腹腔注射给药，隔日一次；各给药组均按0.02ml/g灌胃给药，荷瘤对照组给予等体积生理盐水，每天一次，连续给药10天。于末次给药后，剥取肿瘤，称瘤重，计算肿瘤抑制率。实验结果见表1：
表1阿里红总三萜酸对小鼠H22肝癌实体瘤瘤重的影响
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01和***P＜0.001。
与荷瘤对照组比较，阿里红总三萜酸各剂量组小鼠肿瘤明显缩小，具有统计学意义。
从表1可以看出：5-氟尿嘧啶给药后可明显降低瘤重，随着大鼠灌胃给阿里红总三萜酸剂量的增加，抑瘤率也明显增加，具有一定的量效关系。
同时，本发明分别采用实施例2、3、4和6中制备得到的阿里红总三萜酸进行了“阿里红总三萜酸对小鼠H22肝癌实体瘤的影响实验”，结果表明，该总三萜酸同样具有抑制肿瘤的作用。
在阿里红总三萜酸对小鼠H22肝癌实体实验中，在给药的10天内，各剂量组的大鼠未见体重降低、行为异常的现象，推测该阿里红总三萜酸提取物毒性较低。
实施例2：阿里红总三萜酸提取物体外对肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞HCT-8、胃癌细胞BGC-823的影响
用含10％FBS的DMEM细胞培养液将阿里红总三萜酸提取物稀释成5个不同浓度，从200μg/ml设起，依次2倍比稀释，即200、100、50、25及12.5μg/ml，共配制三份上述药物，分别加入接种有HepG2肝癌细胞、HCT-8结肠癌细胞、BGC-823胃癌细胞的三块96孔板中，每孔200μl，每组设5个复孔，平行设置细胞对照组。置于37℃，5％CO2培养箱中培养，每日观察细胞状态。药物作用72小时后，取出96孔板，吸去各孔内培养液，并加入0.5mg/ml的MTT溶液200μl，平行设置空白对照组，置于37℃，5％CO2培养箱中继续培养4小时后取出，吸出各孔内的MTT溶液，分别加入DMSO溶液200μl，室温放置10分钟，充分震荡60秒后，于96孔板酶标检测仪上测定570nm处的OD值，计算各个浓度组药物对三种细胞的生长抑制率和IC50。实验结果见表2：
由表2可知，不同浓度的阿里红总三萜酸提取物作用于HepG2、HCT-8、BGC-823三种细胞后，细胞均受到明显的抑制，且随着药物浓度的增大，抑制作用亦增强。并且，阿里红总三萜酸提取物对HepG2、HCT-8、BGC-823三种细胞的IC50分别为：(29.85±3.93)μg/ml，(19.17±4.50)μg/ml，(50.97±8.24)μg/ml。
表2阿里红总三萜酸提取物体外对肝癌细胞HepG2、结肠癌细胞HCT-8、胃癌细胞BGC-823的影响
注：与对照组相比，给药组细胞均受到明显抑制，具有统计学意义，*P＜0.05，***P＜0.001。
结果表明本发明所述的阿里红总三萜酸提取物，对胃癌、结肠癌也有治疗作用。由此，我们可推断本发明所述的阿里红总三萜酸提取物也可以用于人和其他哺乳动物的肿瘤治疗，尤其是胃癌、结肠癌和肝癌。