薏苡仁抗癌中药及其制备方法.pdf

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1、10申请公布号CN101940738A43申请公布日20110112CN101940738ACN101940738A21申请号201010237432622申请日20100727A61K36/8994200601A61P35/0020060171申请人辽宁中医药大学地址110032辽宁省沈阳市皇姑区崇山东路79号辽宁中医药大学科研处72发明人孟宪生包永睿巩晓杰康廷国74专利代理机构沈阳利泰专利商标代理有限公司21209代理人刘忠达54发明名称薏苡仁抗癌中药及其制备方法57摘要一种薏苡仁抗癌中药，从薏苡仁中提取的具有抗癌作用的化学物质组分，所述具有抗癌作用的化学物质组分主要有三亚油酸甘油酯、二亚。

2、油酸油酸甘油酯、棕榈酸二亚油酸甘油酯、亚油酸二油酸甘油酯、棕榈酸亚油酸油酸甘油酯、二棕榈酸亚油酸甘油酯、三油酸甘油酯、棕榈酸二油酸甘油酯、二棕榈酸油酸甘油酯、二油酸硬脂酸甘油酯。从薏苡仁中提取的有效化学物质组做成以下制剂或剂型口服液、片剂、胶囊、含片、丸剂、注射剂或喷雾给药制剂，本发明的优点在于提取工艺简单、能制成多种剂型，具有较好的抗癌作用。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页附图1页CN101940742A1/1页21一种薏苡仁抗癌中药，其特征为从薏苡仁中提取的具有抗癌作用的化学物质组分，所述具有抗癌作用的化学物质组分主要有、三亚油酸甘油酯。

3、，分子式C57H98O6，分子量8787，在液谱图中保留时间为9721分，、二亚油酸油酸甘油酯，分子式C57H100O6，分子量8808，在液谱图中保留时间为11679分，、棕榈酸二亚油酸甘油酯，分子式C55H98O6，分子量8547，在液谱图中保留时间为12228分，、亚油酸二油酸甘油酯，分子式C57H102O6，分子量8828，在液谱图中保留时间为14188分，、棕榈酸亚油酸油酸甘油酯，分子式C55H100O6，分子量8568，在液谱图中保留时间为14858分，、二棕榈酸亚油酸甘油酯，分子式C53H98O6，分子量8307，在液谱图中保留时间为15584分，、三油酸甘油酯，分子式C57H1。

4、04O6，分子量8848，在液谱图中保留时间为17370分，、棕榈酸二油酸甘油酯，分子式C55H102O6，分子量8588，在液谱图中保留时间为18327分，、二棕榈酸油酸甘油酯，分子式C53H100O6，分子量8328，在液谱图中保留时间为19317分，、二油酸硬脂酸甘油酯，分子式C57H106O6，分子量8868，在液谱图中保留时间为22140分。2根据权利要求1所述的一种薏苡仁抗癌中药，其特征在于所述的具有抗癌作用的化学组分，在液相谱图色谱条件下色谱柱为迪马C18柱46MM250MM，5M，流动相为乙腈二氯甲烷6040；流速为1ML/MIN；柱温为25；ELSD参数为漂移管温度35。抗癌。

5、作用的化学物质组分分析的色谱条件改变，色谱峰化合物流出的顺序、流出时间会发生相应改变。3根据权利要求1所述的一种薏苡仁抗癌中药，其特征是从薏苡仁中提取的有效化学物质组做成以下制剂或剂型口服液、片剂、胶囊、含片、丸剂、注射剂或喷雾给药制剂。权利要求书CN101940738ACN101940742A1/5页3薏苡仁抗癌中药及其制备方法发明领域0001本发明涉及了一种具有抗肿瘤抗癌作用的中药，特别是从薏苡仁提取的化合物中制备具有抗肿瘤抗癌作用的有效化学物质组的方法。背景技术0002薏苡仁为禾本科植物薏苡COIXLACRYMAJOBILVARMAYUENROMANSTAPF的干燥成熟种仁，呈宽卵形或长。

6、椭圆形，长48MM，宽36MM。表面乳白色，光滑，偶有残存的黄褐色种皮；一端钝圆，另端较宽而微凹，有1淡棕色点状种脐；背面圆凸，腹面有1条较宽而深的纵沟。质坚实，断面白色，粉性。我国大部分地区均产，主产于福建、河北、辽宁等地。0003薏苡仁始载于神农本草经，其性甘味淡凉，具有利水渗湿、健脾止泻、除痹、排脓、解毒散结的功效。其中含薏苡仁酯COIXENOLIDE，粗蛋白1314，脂类28。脂类中三酰甘油6164，二酰甘油67，一酰甘油4，甾醇酯9，游离脂肪酸1718。在三酰甘油中亚油酸LINOLEICACID含量可达2528，在游离脂肪酸中亚油酸含量为2728，游离脂肪酸还有棕榈酸PALMITIC。

7、ACID，硬脂酸STEARICACID，顺8十八碳烯酸CIS8OCTADECENOICACID即油酸等。一酰甘油中有具抗肿瘤作用的单油酸甘油酯MONOOLEIN，甾醇酯中有具促排卵作用的顺、反阿魏酰豆甾醇CIS、TRANSFERULOYLSTIGMASTEROL和顺、反阿魏酰菜油甾醇CIS、TRANSFERULOYLCAMPESTEROL等。还含抗补体作用的葡聚糖和酸性多糖CA1、CA2及降血糖作用的薏苡多糖COIXANA、B、C。种子挥发油含69种成分，其中主要的有己醛HEXANAL，己酸HEXANOICACID，2乙基3羟基丁酸己酯2ETHYL3HYDROXYHEXYLBUTRATE，壬内。

8、酯NONALACTONE，壬酸NONANOICACID，辛酸OCTANOICAID，棕榈酸乙酯ETHYLPALMITATE，亚油酸甲酯METHYLLINOLEATE，香草醛VANILLIN及亚油酸乙酯ETHYLLINOLEATE等。0004在传统中医中药学研究中，均采用薏苡仁治疗水肿，小便不利，脚气，脾虚泄泻，湿痹拘挛，肺痈，肠痈等症。现代研究认为，薏苡仁具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖血钙、降压、降脂减肥、抗疟原虫、抗病毒的功效。0005近年来公开文献报道了一些薏苡仁化学成分及药理作用的研究内容，例如温晓蓉在辽宁中医药大学学报发表了“薏苡仁化学成分及抗肿瘤活性研究进展”的文章，本文对薏苡仁的化学。

9、成分和药理研究进展进行了综述，包括该中药的主要成分如脂肪酸及酯、甾醇类、三萜类、生物碱类、多糖类化合物，以及有关抗病毒、免疫调节、抑制肿瘤血管生成、抗炎镇痛镇静作用的研究。0006刘津，唐安洲，康敏等在广西医学发表了“薏苡仁提取物对鼻咽癌细胞作用的研究”的文章，研究薏苡仁提取物对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、TWO3和C6661细胞体外培养情况下的抑制作用。在倒置显微镜下观察其作用于鼻咽癌细胞后细胞形态学的改变。运用MTT法检测药物提取物及含药血清抑制细胞增殖的情况。结果证明薏苡仁可抑制CNE1、说明书CN101940738ACN101940742A2/5页4CNE2、TWO3和C6661细。

10、胞的增殖，其作用具有时间和浓度依赖性。结论薏苡仁提取物在体外实验中具有抗鼻咽癌细胞增殖的作用。发明内容0007本发明的目的，是确定传统中药薏苡仁的药理作用抗肿瘤抗癌作用，从薏苡仁中提取出抗肿瘤有效化学物质组分和提取方法，并用这些有效化学物质组分作为制备抗肿瘤抗癌作用药物的原料，从而更好的利用我国中草药资源，丰富中草药治疗疾病的领域。0008本发明人通过对薏苡仁药材的提取物进行研究，在体内外的抗癌试验研究表明其提取物有良好的抗肿瘤作用。0009采用的技术方案是0010一种薏苡仁抗癌中药，其特征是为从薏苡仁中提取的具有抗肿瘤抗癌作用的化学物质组分。所述具有抗肿瘤作用的化学物质组分主要有00111、。

11、三亚油酸甘油酯，分子式C57H98O6，分子量8787在液谱图中保留时间MIN为972100122、二亚油酸油酸甘油酯，分子式C57H100O6，分子量8808在液谱图中保留时间MIN为1167900133、棕榈酸二亚油酸甘油酯，分子式C55H98O6，分子量8547在液谱图中保留时间MIN为1222800144、亚油酸二油酸甘油酯，分子式C57H102O6，分子量8828在液谱图中保留时间MIN为1418800155、棕榈酸亚油酸油酸甘油酯，分子式C55H100O6，分子量8568在液谱图中保留时间MIN为1485800166、二棕榈酸亚油酸甘油酯，分子式C53H98O6，分子量8307在液。

12、谱图中保留时间MIN为1558400177、三油酸甘油酯，分子式C57H104O6，分子量8848在液谱图中保留时间MIN为1737000188、棕榈酸二油酸甘油酯，分子式C55H102O6，分子量8588在液谱图中保留时间MIN为1832700199、二棕榈酸油酸甘油酯，分子式C53H100O6，分子量8328在液谱图中保留时间MIN为19317002010、二油酸硬脂酸甘油酯，分子式C57H106O6，分子量8868在液谱图中保留时间MIN为221400021见附图10022所述具有抗肿瘤作用的化学组分，在液相谱图色谱条件下色谱柱为迪马C18柱46MM250MM，5M，流动相为乙腈二氯甲烷。

13、6040；流速1ML/MIN；柱温25；ELSD参数漂移管温度35。0023从薏苡仁中提取的有效化学物质组做成以下制剂或剂型口服给药制剂口服液、片剂、胶囊、含片、丸剂；注射给药制剂注射剂；喷雾给药制剂。说明书CN101940738ACN101940742A3/5页50024从薏苡仁中提取的具有抗癌作用的有效化学物质组分经实验证明在体内外均有抑制癌细胞增长作用，可应用于癌症的治疗。0025具有抗癌作用的有效化学物质组分的提取方法，是将薏苡仁粗粉加适量乙酸乙酯回流提取34次，合并提取液，过滤，回收溶剂，减压干燥至无溶剂，即得薏苡仁有效物质组。0026本发明的优点在于提取工艺简单、能制成多种剂型，具。

14、有较好的抗癌作用。附图说明0027图1是从薏苡仁中提取具有抗肿瘤抗癌作用的有效化学组分的液相图谱。0028图2是10含药血清对人肝癌细胞HEPG2的抑制作用示图。0029图3是10含药血清对人肝癌细胞SMMC7721抑制作用示图。0030图2和图3中标号为阳性对照0031为高剂量0032为中剂量0033为低剂量具体实施方式0034薏苡仁有效物质组分的提取0035提取前的处理先将薏苡仁药材粉碎，过20目筛。0036提取方法加3倍量乙酸乙酯，70回流提取3次，合并提取液，过滤，回收溶剂，减压干燥至无溶剂，即得薏苡仁有效物质组分。0037薏苡仁有效物质组的药理研究0038对接种H22肝癌实体瘤的小鼠。

15、灌胃薏苡仁提取物，测定其抑制作用。0039体外试验，采用MTT法结合血清药理学方法，测定含薏苡仁提取物的小鼠血清对人肝癌细胞株HEPG2、SMMC7721的生长抑制情况，为薏苡仁提取物抗肿瘤抗癌作用的下一步研究奠定基础。0040结论0041在体内外实验中，薏苡仁有效物质组对肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用。0042抗肝癌药物的制备0043薏苡仁中具有抗癌作用的有效化学物质组可以制备成抗肝癌的药物，例如，可根据需要，制备成不同的剂型口服给药制剂，如口服液、片剂、胶囊、含片、丸剂；注射给药制剂，如注射剂；喷雾给药制剂等的抗癌试验中，其有良好的抗肝癌效果。00441材料与方法004511材料人肝癌细胞。

16、株HEPG2、SMMC7721，小鼠肝癌H22细胞株均购自上海复蒙生物有限公司，本实验室传代保存。清洁级昆明种小鼠，体重1820G，雌性，购于大连医科大学实验动物中心，合格证号为SCXX辽20080002。薏苡仁购自市面超市。004612试剂及仪器DMEM培养基、胰蛋白酶、四甲基偶氮唑盐MTT均由美国GIBCO公司出品；二甲基亚砜DMSO北京索莱宝科技有限公司；小牛血清NBCS杭州四季青生物工程材料有限公司；青霉素哈药集团制药总厂批号A081100207；链霉素大连美罗说明书CN101940738ACN101940742A4/5页6大药厂批号65081216；环磷酰胺江苏恒瑞医药股分有限公司批。

17、号090407210047ACCULABALC11C4型电子天平德国赛多利斯集团；NUAIRETMUSAUTOFLOW型CO2培养箱德国NUAIRE公司；BCN1360B型生物洁净工作台北京东联哈尔仪器制造有限公司；AE31型倒置相差显微镜MOTIC公司；SUNRISE酶标仪瑞士TECAN公司；MILLIQ超纯水处理装置美国MILLIPORE公司；不锈钢正压滤器500ML海宁市亚泰制药机械有限公司；96孔无菌培养板美国COSTAR公司；手提式压力蒸汽消毒器丹东市日用五金厂；血球计数板上海求精生化仪器厂004813实验方法0049131药物的制备薏苡仁药材粗粉，乙酸乙酯回流提取，回收溶剂。005。

18、0132动物分组及给药剂量将小鼠随机分6组，每组10只。分别为空白对照组；阴性对照组，灌胃生理盐水，每日02ML；环磷酰胺对照组CTX，剂量20MGKG1D1；薏苡仁提取物大、中、小剂量组分别为3，1，03GKG1D1。0051133给药方法及样品制备各组按常规方法接种H22瘤株，瘤细胞冰浴2107/ML，每鼠于右前腋下接种02ML，接种次日开始给药，每日1次，用药10天。各组小鼠均于末次给药后1H进行以下试验称重后，摘眼球取血，滴入离心管内，全血于37温孵30MIN后，3500RMIN1离心10MIN，吸取上部血清，同组血清合并，045UM、022UM微孔滤膜依次过滤除菌，置80冰箱保存备用。

19、。颈椎脱臼处死，完整剥离瘤块，精密电子天平称重并记录，计算肿瘤抑制率。0052肿瘤抑制率对照组平均瘤重给药组平均瘤重/对照组平均瘤重1000053134MTT噻唑兰试验人肝癌细胞HEPG2、SMMC7721接种在含10灭活的新生小牛血清的DMEM培养液中，置37，5CO2的孵箱中培养，每23D用025胰酶消化传代。传23代后，取处于对数生长期、生长状态良好的细胞1瓶，经PBS清洗，用025的胰酶消化，待细胞趋于变圆用培养液冲洗吹打细胞，制成细胞悬液。用血球计数板计数，加培养液稀释至浓度为5104个/ML，接种于96孔培养板，每孔100UL。培养24H后，加入含不同实验组不同浓度血清的培养液，每。

20、组设5个复孔。培养箱中连续培养24H、48H、72H、96H，分别加入20UL的MTT5MG/ML溶液，继续培养4H后吸去上清液，每孔加入二甲基亚枫150UL，振荡，至溴代噻唑蓝完全溶解，在492NM波长处用酶标仪测其吸光度OD，测定时需减去空白对照的吸光度OD。0054细胞生长抑制率IC对照组OD给药组OD/对照组OD1000055135统计学处理各项参数均以表示，数据用SPSS150软件分析。00562结果005721薏苡仁提取物对小鼠H22肝癌实体瘤的抑制作用各剂量抑制率均高于30，具有较明显的抑制作用，抑瘤率与给药剂量呈线性关系，与阴性对照组比较平均瘤重具有显著性差异P005，与环磷酰胺对照组比较无显著性差异P005见表1。005822含药血清对人肿瘤细胞株的体外抑制作用各作用时间CTX血清，薏苡仁大、中、小剂量组含药血清的OD值与空白血清的OD值相比，差异显著P005见表2。0059表1薏苡仁提取物对小鼠H22肝癌实体瘤的抑制作用0060说明书CN101940738ACN101940742A5/5页70061注与对照组比较P0050062表210含药血清对人肿瘤细胞株的体外抑制作用0063说明书CN101940738ACN101940742A1/1页8图1图2图3说明书附图CN101940738A。