木鳖子油在制备具有抗炎作用药物中的应用 【技术领域】
本发明涉及木鳖子油在制备药物中的应用，尤其是在制备具有抗炎作用药物中的应用，属中药油料新品种开发与应用领域。
背景技术
油料产品作为常用食用油脂，主要有大豆、花生、芝麻、向日葵、蓖麻等作物榨取油。为了发展油料作物生产，开辟新的油料来源，近年来开发出茶油、核桃油、橄榄油、玉米油等。油脂的用途很广，除供人们食用外，工业、医药、国防都广泛使用。日常生活中作为烹调用油主要是从一些油脂含量很高的油料作物的果实或种子中提炼出来的。常见的油料作物主要有油棕、花生、大豆、芝麻、油菜、向日葵等。
木鳖子Seed of M omordica Cochinchinensis.为葫芦科植物木鳖子的成熟种子，主产广西、四川、湖北等地。性温，味苦，微甘，有毒。中药相关文献记载具有散结消肿，攻毒疗疮之功效。种子含油量约为40％-45％左右，索氏提取法对木鳖子油进行了提取，并鉴定出14种脂肪酸，其中不饱和脂肪酸含量为41.91％，其中亚油酸(19.85％)、(z)-13-十八(碳)烯酸(21.62％)、11-二十(碳)烯酸(2.10％)为主。木鳖子是一种常见的中药材，其种植环境要求低，适应能力强，适合大面积种植，具有产量高，含油量高等特点，可作为较好的油料作物应用，但其文献资料认为其有毒，这大大限制了木鳖子油地开发与应用。
【发明内容】
针对上述现有技术，本发明的发明人对木鳖子油的安全性进行了实验观察，结果表明木鳖子油不是木鳖子的毒性成分，应用安全。本发明的发明人还对其抗炎作用进行了动物实验观察，结果表明木鳖子油具有明确的抗炎作用，可以用来制备具有抗炎作用的药物。
本发明的木鳖子油是通过以下方法得到的：将木鳖子去壳和内皮后，用榨油机直接压榨出油，得到绿色油状物，即为木鳖子油，密封保存。
本发明克服了人们认为木鳖子油具有毒性的偏见，并发现了木鳖子油的一种新用途：抗炎作用，可以应用木鳖子油来制备具有抗炎作用的药物。
【附图说明】
图1为依文思蓝标准曲线。
【具体实施方式】
下面结合动物实验对本发明作进一步的说明：
对木鳖子油进行了急性毒性、抗炎作用等相关药效学研究，简述如下：
实验1 急性毒性试验观察：
①预实验观察：18-22g KM种小鼠6只，雌雄各半，于禁食12h后给予0.4ml/10g体重灌胃，观察小鼠状况，连续观察12h，6只小鼠均未见明显的中毒症状，提示木鳖子毒性成分不在油内，在此基础上进行了最大给药量观察。
②最大给药量观察：18-22g KM种小鼠6只，♀♂各半，分为空白对照组和木鳖子油组，每组20只，给药前禁食不禁水12h，木鳖子油以最大容积0.4mL/10g灌胃，一日内给药三次，间隔4h，灌胃后正常饮食，连续观察14d，记录14天内小鼠体重变化，于第14天解剖各组小鼠，观察主要脏器变化，称重计算脏器指数。
脏器指数＝脏器重(mg)÷体重(g)
结果一日内木鳖子油最大给药量至120ml/kg，未出现明显的毒性反应。体重和主要脏器指数如表1、2所示，木鳖子油对小鼠体重和主要脏器指数均无明显影响，组间比较无明显差异。结果提示木鳖子油不是木鳖子的毒性成分，应用安全。
表1 木鳖子油急性毒性观察对小鼠体重的影响(x±S，n＝20)
表2 木鳖子油急性毒性观察对小鼠脏器指数的影响(x±S，n＝20)
实验2 抗炎作用观察(小鼠耳肿胀法)：
分组与给药：按体重、性别均衡随机分为空白对照组，木鳖子油组，每组10只。木鳖子油组20ml/kg灌胃给予木鳖子油，空白对照组给予生理盐水20ml/kg灌胃，连续给药一周。
给药最后一天8pm禁食，第8天称取两组小鼠体重(如表3所示)，按照体重给药1h后将混合致炎液涂在小鼠左侧耳前后两面，约涂0.1ml(每面50μL)，右耳作对照。致炎4h后将小鼠脱颈处死，称重后8.5mm打孔器分别在两耳同一部位打下一圆形耳片，电子天平称重，每鼠左侧耳片重量减去右侧耳片重量即为肿胀度。按照公式1、2分别计算肿胀率和肿胀抑制率，结果如表4所示。
公式1
公式2
表3 木鳖子油抗炎作用观察对小鼠体重的影响(x±S，n＝10)
表4 木鳖子油抗炎作用观察对小鼠耳肿胀率的影响(x±S，n＝10)
注：与空白对照组比较“**”P＜0.01。
结论：连续给予小鼠木鳖子油7天，对小鼠体重无明显影响，最后一次给药后观察对小鼠耳肿胀的影响，可见给予木鳖子油后可明显降低肿胀率，肿胀抑制率达21.05％，提示木鳖子油具有明显的抗炎作用。
实验3 抗炎作用观察(小鼠腹膜通透性法)：
方法：
①依文思蓝生理盐水溶液的配制：精确称取依文思蓝0.5克，溶解于生理盐水中定容成100ml。
②依文思蓝标准曲线的制备：分别取1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、6μg/ml、8μg/ml、10μg/ml照分光光度法在590nm波长处测定吸收度，计算回归方程。
③取体重20±2g昆明种小鼠，按体重、性别均衡随机分为空白组和木鳖子油组，每组10只，雌雄各半。木鳖子油组给予20ml/kg木鳖子油灌胃，空白对照灌服等量生理盐水。连续给药一周，最后一次给药后1h，各鼠尾静脉注射0.5％依文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g体重，随即腹腔注射0.6％HAc生理盐水溶液，20分钟后脱颈处死，用注射器将5毫升生理盐水注入腹腔，轻柔数下，剪开腹部皮肤肌肉，用灌胃器吸出洗涤液，3000rpm离心15分钟；取上清液于590nm比色测定，于标准曲线上查出每只小鼠腹腔渗入之染料量，进行组间t检验。
结果：分光光度计于590nm处测定各浓度依文思蓝标准液，绘制其标准曲线，如表5所示，以依文思蓝液浓度为纵坐标，吸光度为横坐标，建立标准曲线，如图1所示，计算回归方程，测得R2值为0.9958，回归方程为y＝12.155x-0.7145。
表5 依文思蓝标准曲线绘制(μg/ml，590nm)
按照回归方程计算各组小鼠腹腔染料的渗出量(μg/ml)，结果如表6所示，木鳖子油组明显降低依文思蓝的渗出量，与空白对照组比较具有显著性差异(P＜0.01)。
表6 木鳖子油对小鼠腹腔依文思蓝渗出量的影响(x±S，n＝10)
注：与空白对照组比较“**”P＜0.01。
结论：木鳖子油能够明显抑制腹腔的炎性渗出，具有明显的抗炎作用。
实验4 木鳖子油对小鼠腹腔化学刺激的抑制作用：
取体重20±2g昆明种小鼠，按体重、性别均衡随机分为空白组和木鳖子油组，每组10只，雌雄各半。木鳖子油组给予20ml/kg木鳖子油灌胃，空白对照组灌服等量生理盐水，连续一周。最后一次给药后1h，各小鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液0.1ml/10g。记录注射后20min内出现扭体反应的潜伏期和扭体次数，超过20min不出现扭体的按照20min潜伏期计算，比较组间差异。
结果如表7所示，木鳖子油明显延长小鼠扭体潜伏期，与空白对照组比较均具有非常显著地统计学差异(P＜0.01)。但对小鼠的扭体次数无明显影响，组间比较无显著性差异(P＞0.05)。
表7 木鳖子油对小鼠腹腔化学刺激的抑制作用(x±S，n＝10)
注：与空白对照组比较“**”P＜0.01。
结论：木鳖子油具有明显的抗炎作用，减少炎性介质的产生，减轻炎性介质对神经的刺激，从而延长疼痛潜伏期。