关玉竹多糖的提取方法.pdf

一种关玉竹多糖的提取方法，是用关玉竹生药粉末进行超声提取，水为提取剂，提取温度为20～80℃，超声频率为30～100kHz，提取后过滤，提取液减压浓缩，加入无水乙醇液分离沉淀物，沉淀物用丙酮洗涤，冷冻干燥、粉碎。本发明由于采取超声波提取，提取液用量少，减少溶入提取液中的多糖量，提高多糖收率，并且提取温度比现有方法降低10～20℃，低温提取有利于有效成分的保护。同时，提取时间缩短1小时以上。与煎煮法、浸渍法、渗漉法等传统方法比较，超声提取法具有省时、节能、提取效率高等优点。

1、  一种关玉竹多糖的提取方法，其特征是：超声提取：关玉竹生药粉碎筛分，取筛下粉末进行超声提取，水为提取溶剂，料液比1∶15～40，提取温度为20～80℃，超声频率为30～100kHz，提取时间0.5～3h，提取后过滤，滤渣进行重复提取；
精制处理：将提取液减压浓缩，放至室温，加入无水乙醇液，摇匀，静置，过滤，分离沉淀物，沉淀物用丙酮洗涤，弃去洗涤液，沉淀物冷冻干燥、粉碎，得白色粉末。

2、  根据权利要求1所述的一种关玉竹多糖的提取方法，其特征是：关玉竹生药粉碎筛分，筛分过60目筛。

3、  根据权利要求1所述的一种关玉竹多糖的提取方法，其特征是：超声提取次数为1次或2次或3次。

4、  根据权利要求1所述的一种关玉竹多糖的提取方法，其特征是：提取液减压浓缩，压力为0.008～0.05MPa，温度25℃，浓缩至浓缩液相对密度为1.25～1.36。

5、  根据权利要求1所述的一种关玉竹多糖的提取方法，其特征是：无水乙醇液用量为浓缩液质量的2～4倍，静置12～36h。

6、  根据权利要求1所述的一种关玉竹多糖的提取方法，其特征是：丙酮洗涤，丙酮用量为沉淀物质量0.5～3倍，丙酮洗涤1～3次。

关玉竹多糖的提取方法
技术领域
本发明涉及一种植物多糖类物质提取方法，具体说涉及玉竹多糖的提取。
背景技术
近年来，随着免疫物质、生物膜以及多种生物活性物质的研究进展表明，糖类在生物体内的功能不限于提供能量和参与结构，同时还具有多种多样的生物学功能，在生命活动中参与了细胞的各种活动，尤其是多糖的研究已成为人们关注的一个热点，各国学者从各种生物材料中寻找与提取具有一定生理活性的多糖成分的研究十分活跃，从而使多糖类的研究有了空前迅速发展的趋势。随着对多糖活性的深入了解，以及人们对各种天然药品、天然食品的推崇，多糖以其无毒、无副作用，而且又是营养、辅助医疗等功能性保健品的有效成分，被当今世界所重视。构成生命最基本物质之一的多糖类，以其多种多样的形式，广泛存在于动物细胞膜、植物和微生物细胞壁中。
随着细胞生物学和分子生物学研究的不断深入，多糖类的生物活性越来越被人们重视，尤其是它对免疫系统的双向调节功能，更使它成为当前药物研究的热点之一。人们对多糖的初始研究可追溯到1936年Shear对多糖抗肿瘤活性的发现。至50年代，陆续发现一些真菌多糖和高等植物多糖具有明显的抑瘤活性。70年代以来，科学家们发现多糖及糖复合物参与和介导了细胞各种生命现象的调节，特别是免疫功能的调节，多糖尤其是中药多糖因具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用，而且几乎没有毒性并可通过化学手段控制其质量，愈来愈引起国内外药理学家、生物学家和化学家们的兴趣，成为当前的研究热点。80年代又发现多糖的糖链在分子生物学中具有决定作用，能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长和衰老。
最近三十多年的研究发现，多糖及糖复合物参与了细胞的各种生命现象的调节。多糖类化合物是一种免疫调节剂，它能激活免疫细胞，提高机体的免疫功能，而对正常细胞没有毒副作用。到目前为止，已有300多种多糖类化合物从天然产物中被分离提取出来，其中从植物，尤其是从中药中提取的水溶性多糖最为重要，已发现有100多种中药中的多糖类化合物具有免疫促进作用。
目前，我国的玉竹主要作为原材料销往国内和国外市场，主要出口韩国、日本、东南亚、美洲、欧盟等广大国家和地区。玉竹可作为药用植物资源进行研究与开发，作为黄精属代表性植物玉竹，在全国大部分地区均产，尤其以东北和湖南地区玉竹的产量最大，是中国玉竹供应的两大主要产区，故在商品上也有“湘玉竹”和“关玉竹”之称。湘玉竹因药味较大，主要作为药用资源开发，关玉竹因其无异味，含糖量高，主要可作为保健食品开发。现有报道的玉竹提取方法大多是煎煮法、回流提取法、渗漉法等，具有提取时间长，提取溶剂用量较多等特点，在大规模生产过程中存在一定的浪费现象，但目前并未见国内关玉竹的相关报道。
发明内容
针对现有关玉竹多糖提取方法存在的缺陷，本发明提出一种操作简便、提取率高的提取方法。
完成上述发明目的所采取的具体技术措施是：一种关玉竹多糖的提取方法，其特征在于：提取工艺分为超声提取和精制处理，具体方法如下：
超声提取：关玉竹生药粉碎筛分，取筛下粉末进行超声提取，水为提取溶剂，料液比1∶15～40，提取温度为20～80℃，超声频率为30～100kHz，提取时间0.5～3h，提取后过滤，滤渣进行重复提取；
精制处理：将提取液减压浓缩，放至室温，加入无水乙醇液，摇匀，静置，过滤，分离沉淀物，沉淀物用丙酮洗涤，弃去洗涤液，沉淀物冷冻干燥、粉碎，得白色粉末。
关玉竹生药粉碎筛分，筛分过60目筛。
超声提取次数为1～3次。
提取液减压浓缩，压力为0.008～0.05MPa，温度25℃，浓缩至浓缩液相对密度为1.25～1.36。
无水乙醇液用量为浓缩液质量的2～4倍，静置12～36h。
丙酮洗涤，丙酮用量为沉淀物质量0.5～3倍，丙酮洗涤1～3次。
玉竹多糖含量测定：
标准曲线的绘制：配置不同浓度的标准溶液，在490nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。以浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：A＝0.0113C+0.0022，r＝0.9991。线性范围：12.28～42.98mg/ml。
样品含量测定：在100ml浓缩液中精密吸取2ml样品溶液，加水至100ml，再从中取2ml加10ml乙醇，搅拌，5000转离心10min，取沉淀至100ml量瓶，取2ml加1ml 4％苯酚，加7ml 98％浓硫酸，40℃水浴30min，冰水5min，490nm测定，按回归方程计算样品溶液中多糖得率。多糖得率＝待测液中多糖的质量/关玉竹质量。
本发明的有益效果：本发明由于采取超声波提取，提取液用量少，减少溶入提取液中的多糖量，提高多糖收率，并且提取温度比现有方法降低10～20℃，时间缩短1小时以上。与煎煮法、浸渍法、渗漉法等传统方法比较，超声提取法具有省时、节能、提取效率高等优点。超声波破碎过程是一个物理过程，浸提过程中无化学反应，被浸提的生物活性物质在短时间内保持不变，缩短了破碎时间。利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等都可加速药物有效成分进入溶剂，从而提高了提取效率，缩短了提取时间，节约了溶剂，低温提取有利于有效成分的保护。
具体实施方式
实施例1：关玉竹生药粉末过60目筛，取筛下粉末100g，加入水1500g，在20℃下，KQ-100DV型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，超声频率30kHz，提取时间0.5h。提取次数3次，过滤，将三次提取液合并，在真空压力0.08MPa，温度25℃下，减压浓缩至相对密度1.36，放至室温，加入3倍无水乙醇液，摇匀，静置12h，过滤，分离沉淀物，用0.5倍丙酮洗涤3次，弃去洗涤液，沉淀物按常规方法在-50℃下冷冻干燥、粉碎，得19.96g白色粉末。经测定多糖收率为8.79％。
实施例2：关玉竹生药粉末过60目筛，取筛下粉末100g，加入水3000g，提取温度为50℃，超声频率80kHz，提取时间2h。提取次数2次，过滤，将提取液合并，减压浓缩至相对密度1.18，放至室温，加入4倍无水乙醇液，摇匀，静置24h，过滤，分离沉淀物，用1.5倍丙酮洗涤2次，弃去洗涤液，沉淀物按常规方法在-50℃下冷冻干燥、粉碎，得20.32g白色粉末。经测定多糖收率为8.97％。
实施例3：关玉竹生药粉末过60目筛，取筛下粉末100g，加入水4000g，提取温度为80℃，超声频率100kHz，提取时间2小时。提取次数1次，过滤，将提取液减压浓缩至相对密度1.29，放至室温，加入3倍无水乙醇液，摇匀，静置36小时，过滤，分离沉淀物，用3倍丙酮洗涤1次，弃去洗涤液，沉淀物按常规方法在-50℃下冷冻干燥、粉碎，得22.15g白色粉末。经测定多糖收率为9.36％。
对照例：将玉竹生药粉末过60目筛，回流提取，水为提取溶液，料液比1∶60，提取温度90～95℃，回流提取4h，提取3次，过滤，合并滤液，浓缩，按浓缩液∶无水乙醇＝1∶3比例，醇沉36h。过滤，分离沉淀物，用3倍丙酮洗涤3次，弃去洗涤液，沉淀物冷冻干燥、粉碎，得22.69g白色粉末。经测定多糖收率为9.56％。
从上述实施例可看出多糖收率随提取温度和超声频率提高而提高，实例3表明在提取温度为80℃，超声频率100kHz，提取一次其多糖收率接近对照例，但提取时间仅为对照例的六分之一。