一种治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂及其制备方法.pdf

本发明属中药领域，涉及一种治疗老年骨质疏松性腰痛的中药制剂及其制备方法。所述制剂由药材黄芪、淫羊藿、墨旱莲、丹参、怀牛膝、青风藤的水提取物与辅料混合，制粒、压片制成。所述药材通过水浸泡，水煎煮后，合并煎煮液浓缩至密度约为1.05，加乙醇至浓度为60％，放置过夜，醇沉；滤液回收乙醇并浓缩、减压干燥、粉碎成浸膏粉；加辅料混匀，制粒，压片，包薄膜衣，即得。本发明运用益气补肾、化瘀通络的治疗法则，能改善腰椎局部微循环、抑制炎症介质、延缓骨质疏松、修复腰神经损伤，防治疗老年骨质疏松性腰痛，体现了“标本兼顾”、“未病先防”的学术思想。

1、  一种治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂，由药物有效成分与药物载体组成，其特征是所述有效成分是由下列重量配比范围的原料药组分组成，生药剂量：
黄芪450～250g、淫羊藿350～150g、墨旱莲350～150g、丹参300～100g、怀牛膝300～100g、青风藤300～100g。

2、  按权利要求2所述的治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂，其特征是所述的原料药的重量配比范围是，生药剂量：黄芪400～300g、淫羊藿300～200g、墨旱莲300～200g、丹参250～150g、怀牛膝250～150g、青风藤250～150g。

3、  按权利要求3所述的治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂，其特征是所述的原料药的重量配比范围是，生药剂量：
黄芪350～250g、淫羊藿250～150g、墨旱莲250～150g、丹参200～100g、怀牛膝200～100g、青风藤200～100g。

4、  权利要求1或2或3的治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂的制备方法，其特征在于通过下列步骤：
①按组分重量称取药材，浸泡1h，煎煮1～3次，每次0.5～1.5h，一煎加水10～14倍，二、三煎加水6～10倍，合并煎煮液，滤过，在60～70℃温度下，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.30的浸膏，备用；
②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为50％～80％，静置过夜，醇沉，滤过，滤液在60～80℃温度下回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.35～1.40的浓浸膏；
③上述②浓浸膏在60～80℃时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，得药物活性组分浸膏粉；
④取上述③制得的活性组分浸膏粉，加入填充剂、崩解剂，混匀，采用干法制粒，并压制成1000片，片重0.45g，包薄膜衣，制成片剂、颗粒剂、胶囊剂、合剂或散剂。

5、  根据权利要求4所述的治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂的制备方法，其特征在于所述填充剂为微晶纤维素101，加入量为120～130g；崩解剂为交联羧甲基纤维素纳，加入量为20～30g。

6、  根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述步骤1的原料药经水浸泡1小时后，提取3次，每次1.5小时，浓缩至相对密度为1.35～1.40后，加入乙醇使含醇量达60％，回收乙醇后的提取物。

一种治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂及其制备方法
技术领域
本发明属中药领域，具体涉及一种治疗老年骨质疏松性腰痛的复方制剂及制备方法。
背景技术
腰腿痛是人们最为常见的疼痛症候群，给生产、工作、学习和生活带来诸多不便。随着社会生活水平的提高，人均寿命延长，老年骨质疏松性腰痛发病人数不断增长。老年骨质疏松性腰痛是50岁以上老年人群最常见的腰部疾患，在老年人群中的发病率约为25.2％。其发病主要是椎体骨质疏松后，导致椎体骨小梁骨折、腰椎间盘退行性改变、腰椎管狭窄、椎体压缩性骨折等，使相邻的神经根、脊髓等遭受化学性刺激或物理性压迫，从而产生腰痛、一侧或双侧下肢疼痛、麻木等症状。
老年骨质疏松性腰痛以持续性腰部钝痛多见，大多先出现腰痛，之后又出现腿痛。其中，伴有腰椎间盘退行性改变、腰椎管狭窄改变者，由于椎管内压力增加、马尾神经缺血、神经根受压，引起马尾神经或神经根症状，出现下肢无力，严重者足下垂，行走拖步；伴有椎体骨小梁骨折、椎体压缩性骨折者，往往缠绵难愈，导致长期慢性腰痛；一些严重的老年骨质疏松性腰痛病人，可出现会阴部麻木、刺痛，大小便失禁等马尾神经受损的表现；胸、腰椎压缩性骨折导致脊椎后弯、胸廓畸形，可使肺活量和最大换气量显著减少，肺气肿发生率可高达40％，出现胸闷、气短、呼吸困难等症状。
据美国国家骨质疏松基金会估计，美国全年有0.7亿人患有腰痛，每年新增70万骨质疏松症引起的椎体骨折性腰痛，其中26万由于疼痛接受非手术治疗，15万人次住院治疗。患者为治疗所付出的费用以及不能工作所造成的损失价值约70亿美元。欧洲有关的老年妇女的大样本研究表明：椎体压缩性骨折的发病率随年龄的增加而增长，50-54岁为11.5％；55-59岁为14.6％；60-64为16.8％；65-69岁为23.5％；70-74岁为27.2％；75-79岁为34.8％。在我国则有″五口人家，一人腰痛″之说。随着人口老龄化，用于治疗老年骨质疏松性腰痛的费用不断上升。因此，开发质量稳定、疗效确切、安全价廉、服用方便的中药新药具有很好的经济和社会效益。
发明内容
本发明目的在于提供一种疗效确切、安全性高的治疗老年骨质疏松性腰痛的中药复方制剂。
中医认为，老年骨质疏松性腰痛的病因主要是“气虚肾亏、血瘀络阻”。本发明以“益气补肾，化瘀通络”为治疗老年骨质疏松性腰痛之法则，遵循“标本兼顾”、“未病先防”的学术思想，采用下述原料药组分制成复方制剂，通过改善腰椎局部微循环、抑制炎症介质、延缓骨质疏松、修复腰神经损伤等预防并治疗老年骨质疏松性腰痛。
本发明复方制剂由有效成分与药物载体制成，其特征在于所述有效成分是由下列重量配比范围的原料药组分组成：黄芪450～250g、淫羊藿350～150g、墨旱莲350～150g、丹参300～100g、怀牛膝300～100g、青风藤300～100g(生药剂量)。
所述的原料药的优选重量配比范围是：黄芪400～300g、淫羊藿300～200g、墨旱莲300～200g、丹参250～150g、怀牛膝250～150g、青风藤250～150g(生药剂量)。
所述的原料药的更优选重量配比是：黄芪350～250g、淫羊藿250～150g、墨旱莲250～150g、丹参200～100g、怀牛膝200～100g、青风藤200～100g(生药剂量)。
本发明复方制剂可按常规方法制成各种口服制剂，包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、合剂、散剂等。
本发明的进一步目的是提供上述复方制剂的制备方法。
本发明复方制剂通过下述方法和步骤制备：
①按组方重量称取各药材，浸泡1h，煎煮1～3次，每次0.5～1.5h，一煎加水10～14倍，二、三煎加水6～10倍，合并煎煮液，滤过，在60～70℃温度下，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.30的浸膏。其中，优选煎煮2次，每次煎煮1h，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，优选滤液浓缩至相对密度为1.05～1.07的浸膏液；
②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为50％～80％，优选加乙醇至浓度为60％；静置过夜，醇沉，滤过，滤液在60～70℃温度下回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.35～1.40的浓浸膏；
③上述②浓浸膏在70～80℃时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，得本发明药物组分的浸膏粉；
④按照：浸膏粉∶填充剂∶崩解剂＝12∶5∶1重量配比(浸膏粉300g，微晶纤维素101是125g，交联羧甲基纤维素纳25g)，取上述③制得的组分，加入上诉比例的填充剂、崩解剂，混匀，采用干法制粒，压制成1000片，片重0.45g。包薄膜衣，制成成品片剂，即得。
本发明所述的药物活性组分的制备方法，采用了水提取法并优选了煎煮次数、时间和加水量后提取了黄芪、淫羊藿中皂甙类的化合物、丹参中的酚酸类化合物和丹参素及其它组分中的主要有效成分，然后优选了醇沉的密度和乙醇浓度进行醇沉纯化，最大限度的提取有效成分并去除杂质，在减压低温条件下浓缩、干燥，同时对干燥方法及条件、制剂成型工艺的辅料、制粒方法及条件等进行了考查、筛选，优选出适合于工业化生产的制备工艺。
本发明复方制剂能避免中药汤剂服用前临时煎煮，久置易酶败变质及给患者带来很多不方便，根据临床用药特点、保存处方中主要药味的理化性质并结合现代制剂技术，制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂等固体制剂，方便有效的满足了患者的需求。
本发明进行了动物实验，结果显示：
小鼠热板实验，本发明复方制剂2倍剂量组、等倍剂量组、0.5倍剂量组、0.25倍剂量组痛阈值在60min和120min均高于对照组，有显著性差异；
小鼠耳肿胀实验，本发明复方制剂2倍剂量组、等倍剂量组、0.5倍剂量组肿胀抑制率均低于对照组，有显著性差异；
细胞学实验，MTT法检测结果表明，本发明复方制剂能明显促进成骨细胞的增殖，与对照组比较，有非常显著性差异(P＜0.01)；
实时荧光定量PCR反应结果显示，与对照组比较，本发明复方制剂可以促进成骨细胞BMP-2mRNA的表达(P＜0.01)，促进成骨细胞Type I Collagen mRNA的表达，促进成骨细胞BGP mRNA表达(P＜0.01)。
结果证实，本发明复方制剂不仅可以解除老年骨质疏松性腰痛临床症状体征，而且可以通过改善腰椎局部微循环、抑制炎症介质、延缓骨质疏松、修复腰神经损伤等方面预防老年骨质疏松性腰痛，巩固治疗效果，减少复发，体现了“标本兼顾”、“未病先防”的学术思想。
具体实施方式
实施例1
原料组方：黄芪450g、淫羊藿350g、墨旱莲350g、丹参300g、怀牛膝300g、青风藤300g。
①按组分重量称取药材，浸泡1h，煎煮2次，每次煎煮1h，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.07的浸膏液，备用；
②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为60％。静置过夜，醇沉。滤过，滤液在60～70℃温度下回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.35～1.40的浓浸膏；
③上述②浓浸膏在60～80℃时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，即得本发明药物的活性组分；
④取上述③制备的活性组分250～350g，加入微晶纤维素101120～130g、交联羧甲基纤维素纳20～30g，混匀。采用干法制粒，并压制成1000片，包薄膜衣，制成片剂，即得。
按实施的组分重量及采用上述制备方法所制成的中药片剂，每片重0.45g，每片相当于生药1.75g。生产单位可根据各自的生产规模按此比例放大相应的倍数。
实施例2
原料组方：黄芪400g、淫羊藿300g、墨旱莲300g、丹参250g、怀牛膝250g、青风藤250g。
①按组分重量称取药材，浸泡1h，煎煮2次，每次煎煮1h，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.07的浸膏液，备用；
②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为60％。静置过夜，醇沉。滤过，滤液在60～70℃温度下回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.35～1.40的浓浸膏；
③上述②浓浸膏在60～80℃时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，即得本发明药物的活性组分；
④取上述③制备的活性组分250～350g，加入微晶纤维素101120～130g、交联羧甲基纤维素纳20～30g，混匀。采用干法制粒，并压制成1000片，包薄膜衣，制成成品片剂，即得。
实施例3
原料组方：黄芪350g、淫羊藿250g、墨旱莲250g、丹参200g、怀牛膝200g、青风藤200g。
①按组分重量称取药材，浸泡1h，煎煮2次，每次煎煮1h，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.07的浸膏液，备用；
②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为60％。静置过夜，醇沉。滤过，滤液在60～70℃温度下回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.35～1.40的浓浸膏；
③上述②浓浸膏在60～80℃时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，即得本发明药物的活性组分；
④取上述③制备的活性组分250～350g，加入微晶纤维素101120～130g、交联羧甲基纤维素纳20～30g，混匀。采用干法制粒，并压制成1000片，包薄膜衣，制成片剂，即得。
按实施的组分重量及采用上述制备方法所制成的中药片剂，每片重0.45g，每片相当于生药1.75g。生产单位可根据各自的生产规模，按此比例放大相应的倍数。
实施例4
黄芪300g、淫羊藿200g、墨旱莲200g、丹参150g、怀牛膝150g、青风藤150g。
①按组分重量称取药材，浸泡1h，煎煮2次，每次煎煮1h，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.07的浸膏液，备用；
②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为60％。静置过夜，醇沉。滤过，滤液在60～70℃温度下回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.35～1.40的浓浸膏；
③上述②浓浸膏在60～80℃时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，即得本发明药物的活性组分；
④取上述③制备的活性组分350～250g，加入微晶纤维素101 120～130g、交联羧甲基纤维素纳20～30g，混匀。采用干法制粒，并压制成1000片，包薄膜衣，制成成品片剂，即得。
实施例5
黄芪250g、淫羊藿150g、墨旱莲150g、丹参150g、怀牛膝100g、青风藤100g(生药剂量)。
①按组分重量称取药材，浸泡1h，煎煮2次，每次煎煮1h，一煎加水14倍，二煎加水量10倍，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.07的浸膏液，备用；
②上述①浸膏液中加入乙醇，至乙醇浓度为60％。静置过夜，醇沉。滤过，滤液在60～70℃温度下回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.35～1.40的浓浸膏；
③上述②浓浸膏在60～80℃时减压干燥，粉碎成细粉，过60目筛，即得本发明药物的活性组分；
④取上述③制备的活性组分350～250g，加入微晶纤维素101 120～130g、交联羧甲基纤维素纳20～30g，混匀。采用干法制粒，并压制成1000片，包薄膜衣，制成成品片剂，即得。
实施例6
将实施例1、2或3中所得活性组分，按常规方法粉碎，加入糊精，混合均匀后制粒，60～65℃干燥，整粒，即得。
实施例7
将实施例1、2或3中所得活性组分，按常规方法粉碎，加入微晶纤维素、碳酸钙，混合均匀，装入胶囊。
实施例8
将实施例1、2或3中所得活性组分，按常规方法粉碎，加入羧甲基淀粉钠、瓜耳树胶、藻酸钠等崩解剂，制粒或直接压片。
实施例9
将实施例1、2或3中所得活性组分，按常规方法粉碎，加入甜菊糖苷、吐温80等辅料，加水至足量，滤过，分装。
实施例10 本发明复方制剂治疗老年骨质疏松性腰痛有关药理研究
(一)本发明复方制剂(简称：健腰密骨片)消肿、止痛实验研究
1、药物：健腰密骨片四种浓度：2倍剂量组、等倍剂量组、0.5倍剂量组、0.25倍剂量组和生理盐水组比较，按公斤体重折算，剂量相当于临床60KG体重病人用药量；用药剂量按照人与动物体表换算关系确定《中药药效研究思路与方法》P18-19，《现代医学实验动物学P335》相当于临床等效剂量。用药剂量按照人与动物体表换算关系确定，等倍剂量组用药剂量相当于临床等效剂量。
2、实验动物：昆明种雄性小鼠，清洁级(复旦大学实验动物科学部，许可证号：Scxk沪2003-0003，实验动物质量合格证：0019761)；体重：20±2克；动物数：每组小鼠12只；随机分为：2倍剂量组(14.6g/Kg体重/日)、等倍剂量组(7.3g/Kg体重/日)、0.5倍剂量组(3.65g/Kg体重/日)、0.25倍剂量组(1.825g/Kg体重/日)、生理盐水组。给药剂量每10g体重给药0.1ml，给药3天，末次给药1小时后进行药效实验。
①小鼠热板法镇痛试验
筛选合格小鼠，将小鼠放在热板上至出现舔足所需时间(s)作为该鼠的痛阈值。凡舔足所用时间小于5s或大于60s或跳跃者，弃之不用。将合格小鼠随机分为7组，再测其痛阈值，作为该鼠给药前的痛阈值。
试验前小鼠禁食12h，各组均灌胃给药，给药后30、60、120min分别测小鼠痛阈值。如60s仍无反应，将小鼠取出，其痛阈以60s计算。
结果显示，小鼠热板实验痛阈值，2倍剂量组、等倍剂量组、0.5倍剂量组、0.25倍剂量组和对照组比较，60min和120min均有显著性差异。各用药剂量组无显著性差异，0.5倍剂量组优于其它治疗组。
表1是小鼠热板法镇痛试验结果。
表1

与对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01
②二甲苯所致小鼠耳肿胀实验
末次给药后30min，小鼠右耳涂二甲苯0.1ml/只致炎，左耳为对照；15min后脱颈臼处死，沿耳廓基线剪下双耳，用6mm角膜环钻在左右耳相同位置冲下耳片，在电子分析天平上称重(精确到0.1mg)，右耳重量减去左耳重量之差值(单位：mg)即为肿胀度，计算各组平均肿胀度并求出肿胀抑制率(％)，肿胀抑制率(100％)＝(右耳重-左耳重)/左耳重×100％。
结果表明：小鼠耳肿胀抑制率，2倍剂量组、等倍剂量组、0.5倍剂量组和对照组比较有显著性差异，其中2倍剂量组优于0.5倍剂量组和等倍剂量组。各用药剂量组间无显著性差异。
表2是实验小鼠耳肿胀抑制率。
表2

与对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01
(二)本发明复方制剂(简称：健腰密骨片)细胞学实验研究
清洁级SD大鼠，体重大鼠300±20g(上海市实验动物管理委员会颁发的医学实验动物合格证书，合格证号：“沪动合证字152号”；动物实验环境设施等级：清洁级；环境设施合格证号：“医动字第02-24号”)。分组如下：
(1)阴性对照组，正常大鼠血清；
(2)健腰密骨片1/4倍剂量组大鼠血清(2.1875g/Kg体重/日)；
(3)健腰密骨片1/2倍剂量组大鼠血清(4.375g/Kg体重/日)；
(4)健腰密骨片1倍剂量组大鼠血清(8.75g/Kg体重/日)；
(5)健腰密骨片2倍剂量组大鼠血清(17.5g/Kg体重/日)；
(6)阳性对照组，BMP-2纯化蛋白(50ng/ml)。
①MTT法观察对成骨细胞增殖的影响：取对数生长期成骨细胞，经常规胰蛋白酶消化后制成单细胞悬液。计数细胞，调整细胞密度为1×10⁴/ml左右。将细胞移入96孔培养板中，每孔200ml，然后放入37℃、5％CO₂培养箱中培养，第二日吸去孔内的培养液，按上述分组方法分别给药，每组8个复孔，每孔200ul含药血清细胞培养液，之后，再放入37℃、5％CO2培养箱中继续培养，于培养48小时后，取出培养板进行MTT法检测，每孔加入20ul MTT溶液(5mg/ml)，放入37℃、5％CO2培养箱中孵育4小时后，弃去上清液，每孔加入DMSO 180ul，震摇混匀，使结晶完全溶解，立即上酶标仪测定OD值，波长为490nm，以同时做的单纯培养液为空白对照孔。
MTT法检测结果表明：健腰密骨片能明显促进成骨细胞的增殖(P＜0.01)，其中以1/4倍剂量最明显。
表3是MTT法观察对成骨细胞增殖影响。
表3

注：＊P＜0.01，与正常对照组比较有显著性差异。
②实时荧光定量PCR反应检测对成骨细胞中BMP-2、Type I Collagen和BGP mRNA表达的影响
引物由Genebank数据库中检索出基因全长序列，然后根据引物长度、Tm温度、GC％等因素设计最适合引物并合成。序列如下：
BMP-2：5’-GATC TGTA CCGC AGGC ACTC-3’，5’-TTCC CACT CATC TCTG GAAGTT-3’；Type I Collagen：5’-CATT TGCA CTGG GTCA CACG TA-3’，5’-GAAT CTGG CCAT GTTT GTGC TC-3’；Osteocalcin：5’-CCCT CTCT CTGC TCACTCTG CT-3’，5’-CTTA TTGC CCTC CTGC TTGG-3’；β-actin：5’-CTGT CCCTGTAT GCCT CTG-3’，5’-ATGT CACG CACG ATTT CC-3’。
将样本cDNA分别进行荧光定量PCR反应。待反应结束后，用Rotor Gene6.0软件根据标准曲线自动进行绝对定量分析，并计算结果，以每一样本所含目的基因的拷贝数和其β-actin内参基因的拷贝数的比值进行相对比较。
实时荧光定量PCR反应结果显示，健腰密骨片可以促进成骨细胞BMP-2 mRNA的表达(P＜0.01)，其中以1/4倍剂量最明显，1/2倍剂量次之；健腰密骨片可以促进成骨细胞Type I Collagen mRNA的表达，其中以2倍剂量最明显(P＜0.01)，1/4倍剂量次之(P＜0.05)；健腰密骨片可以促进成骨细胞BGP mRNA的表达(P＜0.01)，其中以1/4倍剂量最明显，1/2倍剂量次之。
表4是治疗后BMP-2、Type I Collagen和BGP mRNA表达的影响。
表4

注：^*P＜0.05，与正常对照组比较有显著性差异；＊P＜0.01，与正常对照组比较有极其显著性差异。
(三)急性毒性实验
昆明小鼠灌胃按最大浓度(7.52g生药/ml)、最大容积(40ml/kg)给药体积给予健腰密骨片溶液，1日内2次给药，连续观察14天，结果显示，未出现明显毒性反应，无一小鼠死亡。健腰密骨片临床人用量为70g(生药)/60kg/日，经计算，小鼠口服的最大给药量为32.72g干膏粉/kg，即600.37g生药/kg，相当于临床人用量(每kg体重)的513倍。