一种治疗阴道炎的药物组合物、凝胶剂及其制备方法.pdf

本发明涉及中医药领域，具体涉及一种治疗阴道炎的药物组合物，以重量百分比计包含：蓝荷精油0.1-20.0％、龙脑精0.1-20.0％、维生素E0.5-5.0％、精氨酸0.5-15.0％、硝酸甘油或戊四硝酯0.5-1.0％。本发明还提供所述药物组合物的凝胶剂及其制备方法。本发明所述药物组合物及其凝胶剂可改善阴道周围血液循环，预防阴道上皮细胞早衰，长期使用对人体无任何副作用及潜在危险。抗菌实验表明其能抑制多种病原菌的繁殖，经急性皮肤刺激试验未见毒性反应，微生物学指标达标，无致病菌存在，具有广泛的应用前景。

1.  一种治疗阴道炎的药物组合物，以重量百分比计包含如下组分：
蓝荷精油                0.1-20.0％
龙脑精                  0.1-20.0％
维生素E                 0.5-5.0％
精氨酸                  0.5-15.0％
硝酸甘油或戊四硝酯      0.5-1.0％
所述蓝荷精油为蓝桉叶和薄荷叶按1∶1混合，加3-5倍80℃热水进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液加Nacl盐析，静置，分取上部油层即得；所述龙脑精为樟树叶加3-5倍80℃热水后进行水蒸气蒸馏，收集蒸镏液经NaCl盐析，冷却后析出的结晶。

2.  根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述阴道炎为萎缩性阴道炎。

3.  一种治疗阴道炎的凝胶剂，其特征在于，由权利要求1所述药物组合物加入药学上可接受的辅料制成。

4.  根据权利要求3所述的凝胶剂，其特征在于，所述凝胶剂PH在4.0-5.0之间。

5.  根据权利要求3或4所述的凝胶剂，其特征在于，所述辅料包括山梨酸、聚丙烯酸树脂、甘油、液体石蜡。

6.  根据权利要求5所述的凝胶剂，其特征在于，所述辅料的重量百分比为山梨酸0.05-3.0％、聚丙烯酸树脂0.05-5.0％、甘油5.0-20.0％、液体石蜡5.0-30.0％。

7.  根据权利要求3、4或6所述的凝胶剂，其特征在于，所述阴道炎为萎缩性阴道炎。

8.  一种治疗阴道炎的凝胶剂的制备方法，包含如下步骤：
步骤1：将聚丙烯酸树脂在山梨酸水溶液中分散均匀，静置过夜，加入甘油及硝酸甘油或戊四硝酯混合均匀；
步骤2：取蓝荷精油、龙脑精和维生素E溶于液体石蜡中；
步骤3：将步骤1制备的溶液与步骤2制备的溶液混合均匀，加入精氨酸控制溶液PH值在4.0-5.0之间，即得本发明所述凝胶剂。

9.  权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述蓝荷精油为蓝桉叶和薄荷叶按1∶1混合，加3-5倍80℃热水进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液加Nacl盐析，静置，分取上部油层即得。

10.  权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述龙脑精为樟树叶加3-5倍80℃热水后进行水蒸气蒸馏，收集蒸镏液经NaCl盐析，冷却后析出的结晶。

一种治疗阴道炎的药物组合物、凝胶剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及中医药领域，具体涉及一种治疗阴道炎的药物组合物、凝胶剂及其制备方法。
背景技术
阴道炎是妇科常见疾病，尤其萎缩性阴道炎发病率高达40-60％，给女性的工作和生活带来很大影响。萎缩性阴道炎是因卵巢功能衰退，雌激素水平降低，阴道壁萎缩，粘膜变薄，上皮细胞内糖原含量减少，阴道内PH值上升，局部抵抗力降低，致病菌入侵繁殖引起的炎症。
临床上对萎缩类阴道炎的治疗主要是应用雌激素及抗生素针对阴道干燥症状进行对症治疗。诸如申请号为89105335.2的中国专利公开的配方为甘油、蜂蜜、液态石蜡；申请号为89102479.4的中国专利选择抗生素胼胝素、纤维素；申请号为99123092.2的中国专利选择化学合成抗感染药喹诺酮类，灭滴灵治疗萎缩性阴道炎。公告号为1077373的中国专利选择纤维素、抗菌药洗必秦、抗滴虫药灭滴灵，专利申请号03130426.5的中国专利选择化学合成纳米银制剂及冰片、薄荷脑等，专利申请号200310107042.7的中国专利选择化学合成纳米银及玻璃质酸钠、甘油来治疗萎缩性阴道炎。
近年来发现它们具有潜在的危险。长期使用抗生素容易产生难以救治的耐药菌以及阴道菌群失调，自卫能力降低时反而引起反复感染。长期使用雌激素容易刺激肝脏产生肝脏蛋白，导致高血脂、胆管疾病，导致人发胖，甚至是子宫内膜癌、乳腺癌发生率增高。纳米材料可能被人体吸收导致纳米综合症已有报道。
综上所述，激素的副作用、抗生素的耐药性及引起人体正常群菌失调的潜在危害性、纳米材料的安全性已引起人们的关注，急需找到一种安全有效的治疗萎缩性阴道炎的替代药物。
发明内容
本发明针对现有治疗萎缩性阴道炎的抗生素易于产生耐药菌以及造成阴道菌群失调、雌激素摄入过多易致病、纳米材料的安全性不足的缺陷，提供一种新的治疗阴道炎的药物组合物。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种治疗阴道炎的药物组合物，以重量百分比计包含如下组分：
蓝荷精油                0.1-20.0％
龙脑精                  0.1-20.0％
维生素E                 0.5-5.0％
精氨酸                  0.5-15.0％
硝酸甘油或戊四硝酯      0.5-1.0％
所述蓝荷精油为蓝桉叶和薄荷叶按1∶1混合，加3-5倍80℃热水进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液加Nacl盐析，静置，分取上部油层即得；所述龙脑精为樟树叶加3-5倍80℃热水后进行水蒸气蒸馏，收集蒸镏液经NaCl盐析，冷却后析出的结晶。
作为优选，所述药物组合物治疗萎缩性阴道炎效果更为显著。
萎缩性阴道炎主要因妇女卵巢雌激素分泌减少，精血不足使阴道上皮细胞功能减退，除阴道组织供血不足外，内源性自由基对上皮细胞的损伤也是重要因素之一。
维生素E具有促进细胞分裂，防止阴道变薄，恢复弹性、伸缩性。维生素E还具有强力抗自由基作用，同时它能促进上皮细胞分裂，细胞层增厚，恢复弹性，延缓上皮细胞衰老进程。
在本发明中，精氨酸具有三重作用：作为氨基酸的营养作用、血管舒张因子、调控PH值。精氨酸、硝酸甘油作为一氧化氮供体，在人体NOS酶作用下，释放出血管舒张因子NO扩展血管改善局部血液供应，营养阴道粘膜上皮细胞，激活细胞活性，预防早衰，恢复正常生理功能。精氨酸还可调控PH值。调控PH值为4.0-5.0，有利于有益细菌如乳酸杆菌繁殖，抑制其他病原菌生长，维持阴道菌群平衡发挥生物抗菌作用，而无需依赖抗生素来消灭病原体。
龙脑精由我国樟科植物[Cinnamomum Camphor(L.)presl]樟树的新鲜叶粉碎，加3-5倍80℃热水后进行水蒸气蒸馏，收集蒸镏液至无油滴蒸出，所得蒸馏液量约为叶量的1-2倍，加Nacl盐析，静量过夜，冷却后，收集析出的白色结晶，即得龙脑精。
蓝荷精油为从桃金娘科植物[Eucalyptus Globulus Labill.]蓝桉的新鲜叶及唇形科植物[Mentha Haplocalyx Briq]薄荷的新鲜叶按1∶1混合，粉碎，加3-5倍80℃热水后，即进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液至无油滴蒸出，所得蒸馏液量约为叶量的1～2倍，加Nacl盐析，静置过夜，分取上部油层，即得蓝荷精油。蓝荷精油具有广谱抗病原体作用，包括革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌、霉菌以及滴虫、螨虫等，抗菌实验表明其能抑制金黄色葡萄球菌、变形链球菌、化脓性葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、铜绿脓假单胞菌、白色链球菌。
龙脑精及蓝荷精油除了直接抗菌，还可通过促进阴道上皮粘膜细胞分泌，促进除去附着在炎症粘膜上粘液，以及局部血液循环改善等综合因素发挥抗炎效果。
龙脑精及蓝荷精油还具有清凉、除臭、止痒、止痛、兴奋末梢神经感受器作用。龙脑精及蓝荷精油的芳香可掩盖异味，还可通过抑制阴道细菌发酵产生异味，从根本上达到除臭作用。龙脑精及蓝荷精油可通过刺激兴奋神经末梢冷觉感受器而产生清凉感受，有利于缓解阴道灼热感。
以龙脑精及蓝荷精油作为抗菌成分替代抗生素抗感染，抗菌谱广，长期使用不易产生耐药性，且具有多种功能如芳香、止痒、清凉、止痛，提高神经末梢敏感性，有利于治疗阴道炎各种症状及改善性生活质量。
本发明根据腔道给药有效活性成分容易被机体吸收，但由于重力影响药液容易流出，同时阴道分泌液又会加速药液流出体外造成药效损失的缺陷，设计具有生物粘附性的凝胶剂配方，维持药效持久，提供一种治疗阴道炎特别是萎缩性阴道炎的凝胶剂，由以重量百分比计：
蓝荷精油              0.1-20.0％
龙脑精                0.1-20.0％
维生素E               0.5-5.0％
精氨酸                0.5-15.0％
硝酸甘油或戊四硝酯    0.5-1.0％
加入药学上可接受的辅料制成。
作为优选，所述凝胶剂PH在4.0-5.0之间。
维护阴道自身生理功能防卫能力是预防各种阴道炎发生的最重要因素。为适应阴道正常生理要求，本发明所述凝胶剂维持PH4.0-5.0。超出此PH值范围，则易引起群菌絮乱，导致病原体繁殖。本发明所述凝胶剂的PH值由精氨酸调控。调控阴道合适的PH值4.0-5.0，有利于有益细菌如乳酸杆菌繁殖，抑制其他病原菌如HPV乳头瘤病毒和滴虫的生长，发挥阴道组织自身防卫自洁自净能力，维持阴道菌群平衡发挥生物抗菌作用，而无需依赖抗生素来消灭病原体。
作为优选，所述辅料包括山梨酸、聚丙烯酸树脂、甘油、液体石蜡。
聚丙烯酸树脂为生物粘附剂，与人体腔道如鼻、口腔、阴道粘膜组织有良好的粘附性，可防止药物被腔道如阴道分泌液冲走，因其具有黏性又可延缓活性成分释放，而发挥持久药效。
本发明还具体提供一种治疗阴道炎特别是萎缩性阴道炎的凝胶剂，其配方以重量百分比计为：
蓝荷精油            0.1-20.0％
龙脑精              0.1-20.0％
维生素E             0.5-5.0％
精氨酸              0.5-15.0％
硝酸甘油或戊四硝酯  0.5-1.0％
山梨酸              0.05-3.0％
聚丙烯酸树脂        0.05-5.0％
甘油                5.0-20.0％
液体石蜡            5.0-30.0％
余量为水。
本发明还提供治疗阴道炎的凝胶剂的制备方法，包含如下步骤：
步骤1：将聚丙烯酸树脂在山梨酸水溶液中分散均匀，静置过夜，加入甘油及硝酸甘油或戊四硝酯混合均匀；
步骤2：取蓝荷精油、龙脑精和维生素E溶于液体石蜡中；
步骤3：将步骤1制备的溶液与步骤2制备的溶液混合均匀；加入精氨酸，并控制溶液PH值在4.0-5.0之间，即得本发明所述凝胶剂。
所述蓝荷精油为蓝桉叶和薄荷叶按1∶1混合，加3-5倍80℃热水进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液加Nacl盐析，静置，分取上部油层即得；所述龙脑精为樟树叶加3-5倍80℃热水后进行水蒸气蒸馏，收集蒸镏液经NaCl盐析，冷却后析出的结晶。
本发明考虑到阴道所处解剖学位置特殊性，位于肛门、尿道口两个人体排泄口交叉位置，容易受到外来病原体侵入，以非抗生素的植物性抗菌成分来对抗侵入病原体。强调保持阴道内环境生理要求适合PH值，维护有益细菌生长环境，保持菌群平衡；通过扩张血管改善局部血液循环，补充上皮细胞营养促进增殖；清除自由基，延缓细胞衰老进程，实现对各种阴道炎特别是萎缩性阴道炎的治疗目的。
本发明所述药物组合物可改善阴道周围血液循环，预防阴道上皮细胞早衰，长期使用对人体无任何副作用及潜在危险。抗菌实验表明其能抑制金黄色葡萄球菌、变形链球菌、化脓性葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、铜绿脓假单胞菌、白色链球菌，最小抑菌浓度依次为15.6、31.2、31.2、7500、125μg/ml。此外，还可杀灭滴虫、螨虫。
本发明所述药物组合物按国家化妆品实施方法进行急性皮肤刺激试验，对受试动物连续观察24h、36h、72h未见皮肤红斑、水肿等刺激性毒性反应，属于无毒级产品。按国家化妆品实验方法进行试验，理化指标中有毒成分含量均低于国家标准规定限量，符合微生物学指标限量要求，无致病菌存在，具有广泛的应用前景。
具体实施方式
本发明公开了一种治疗阴道炎的药物组合物、凝胶剂及其制备方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述凝胶剂及其制备方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：制备本发明所述药物组合物
一种治疗阴道炎的药物组合物，组分以重量百分比计为：
蓝荷精油              0.1％
龙脑精                20.0％
维生素E               0.5％
精氨酸                0.5％
硝酸甘油或戊四硝酯    1.0％
余量为水。
所述蓝荷精油为蓝桉叶和薄荷叶按1∶1混合，加3-5倍80℃热水进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液加Nacl盐析，静置，分取上部油层即得；所述龙脑精为樟树叶加3-5倍80℃热水后进行水蒸气蒸馏，收集蒸镏液经NaCl盐析，冷却后析出的结晶。
实施例2：制备本发明所述药物组合物
一种治疗阴道炎的药物组合物，组分以重量百分比计为：
蓝荷精油            20.0％
龙脑精              0.1％
维生素E             5.0％
精氨酸              15.0％
硝酸甘油或戊四硝酯  0.5％
余量为水。
实施例3：制备本发明所述药物组合物的凝胶剂
其配方以重量百分比计为：
蓝荷精油            20.0％
龙脑精              0.1％
维生素E             5.0％
精氨酸                0.5％
硝酸甘油或戊四硝酯    1.0％
山梨酸                0.05％
聚丙烯酸树脂          5.0％
甘油                  5.00％
液体石蜡              30.0％
余量为水。
所述蓝荷精油为蓝桉叶和薄荷叶按1∶1混合，加3-5倍80℃热水进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液加Nacl盐析，静置，分取上部油层即得；所述龙脑精为樟树叶加3-5倍80℃热水后进行水蒸气蒸馏，收集蒸镏液经NaCl盐析，冷却后析出的结晶。
实施例4：制备本发明所述药物组合物的凝胶剂
其配方以重量百分比计为：
蓝荷精油              0.1％
龙脑精                20.0％
维生素E               0.5％
精氨酸                15.0％
硝酸甘油或戊四硝酯    0.5％
山梨酸                3.0％
聚丙烯酸树脂          0.05％
甘油                  20.0％
液体石蜡              5.0％
余量为水。
所述蓝荷精油为蓝桉叶和薄荷叶按1∶1混合，加3-5倍80℃热水进行水蒸气蒸馏，收集蒸馏液加NaCl盐析，静置，分取上部油层即得；所述龙脑精为樟树叶加3-5倍80℃热水后进行水蒸气蒸馏，收集蒸镏液经NaCl盐析，冷却后析出的结晶。
实施例5、本发明所述药物组合物及其凝胶剂对白色念珠菌的杀菌效果试验
一、实验用材料
1、白色念珠菌ATCC10231由军事医学科学院五所提供：取经24h培养的新鲜斜面培养物(第4代)，先用PBS洗下菌苔。再用PBS稀释至所需浓度。用滴染法取20ul菌悬液于灭菌玻片(1cm²)烘干，使回收菌数达1×10⁴cfu/片～9×10⁴cfu/片。
2、实施例1-4制备的本发明所述药物组合物及其凝胶剂。
3、无菌过滤冲洗液：含0.3％吐温80的PBS缓冲液。
4、沙堡氏琼脂培养基。
5、经过灭菌处理的微孔滤膜及过滤装置(美国进口)。
二、方法
检验依据：《消毒技术规范》2002版
取本发明所述实施例1-4制备的本发明所述药物组合物及其凝胶剂置于灭菌平皿内，取上述已制备好的载体使之分别浸透于上述药物样品内，分别作用到2min、5min、10min、20min时用无菌镊子取出上述载体，分别移入含5.0mlPBS的试管内混匀，振敲80次，作适当稀释后，分别取混合样稀释液1.0ml加入过滤器，用无菌过滤冲洗液冲洗3次，每次15.00ml，将滤膜平贴于沙堡氏培养基置37℃培养48h做活菌菌落计数。
三、结果
在20℃±1℃水浴条件下，试验重复3次，结果见表1，显示本发明所述药物组合物及其凝胶剂作用2-20min对白色念珠菌的平均杀菌率为100.00％。
表1本发明所述药物组合物及其凝胶剂对白色念珠菌的杀菌效果

注：阳性对照菌量及其范围：2.85×10⁴(2.25×10⁴-3.40×10⁴)cfu/片
实施例6、本发明所述药物组合物及其凝胶剂对金黄色葡萄球菌的杀菌效果试验
一、实验材料
1、金黄色葡萄球菌ATCC6538由军事医学科学院五所提供：取经24h培养的新鲜斜面培养物(第4代)，先用TPS洗下菌苔，稀释至所需浓度，使回收菌数在1×10⁴cfu/片～9×10⁴cfu/片。
2、实施例1-4制备的本发明所述药物组合物及其凝胶剂。
3、无菌过滤冲洗液：含0.3％吐温80的PBS缓冲液。
4、胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)。
5、经过灭菌处理的微孔滤膜及过滤装置(美国进口)。
二、方法
检验依据：《消毒技术规范》2002版
取实施例1-4制备的本发明所述药物组合物及其凝胶剂。置于灭菌平皿内。取上述已制备好的载体使之分别浸透于上述药物样品内，分别作用到2min、5min、10min、20min时用无菌镊子取出上述载体，分别移入含5.0mlPBS的试管内混匀，振敲80次，作适当稀释后，取混合样稀释液1.0ml加入过滤器，用无菌过滤冲洗液冲洗3次，每次15.00ml，将滤膜平贴于胰蛋白胨大豆琼脂培养基置37℃培养48h做活菌菌落计数。
三、结果
在20℃±1℃水浴条件下，试验重复3次，结果见表2，显示本发明所述药物组合物及其凝胶剂作用2-20min对金黄色葡萄球菌的平均杀菌率为100.00％。
表2本发明所述药物组合物及其凝胶剂对金黄色葡萄球菌的杀菌效果

注：阳性对照菌量及其范围：2.18×10⁴(1.75×10⁴-2.45×10⁴)cfu/片
实施例7、本发明所述药物组合物及其凝胶剂对大肠杆菌的杀菌效果试验
一、实验材料
1、大肠杆菌8099由军事医学科学院提供：取经24h培养的新鲜斜面培养物(第6代)，先用TPS洗下菌苔，再用PBS稀释至所需浓度。使回收菌落数达1×10⁴cfu/片～9×10⁴cfu/片。
2、实施例1-4制备的本发明所述药物组合物及其凝胶剂。
3、无菌过滤冲洗液：含0.3％吐温80的PBS缓冲液.
4、经过灭菌处理的微孔滤膜及过滤装置(美国进口)。
二、方法
1、检验依据：《消毒技术规范》2002版2.1.11.3。
2、取实施例1-4制备的本发明所述药物组合物及其凝胶剂置于灭菌平皿内，取上述已制备好的载体使之分别浸透于上述药物样品内，分别作用到2min、5min、10min、20min时用无菌镊子取出上述载体，分别移入含5.0mlPBS的试管内混匀，振敲80次，作适当稀释后，取混合样稀释液1.0ml加入过滤器，用无菌过滤冲洗液冲洗3次，每次15.00ml，将滤膜平贴于胰蛋白陈大豆琼脂培养基置37℃培养48h做活菌菌落计数。
三、结果
在20℃±1℃水浴条件下。试验重复3次，见表3，显示本发明所述药物组合物及其凝胶剂作用2-20min对大肠肝菌的平均杀菌率为100.00％。
表3本发明所述药物组合物及其凝胶剂对大肠杆菌的杀菌效果

注：阳性对照菌量及其范围：3.50×10⁴(3.30×10⁴-3.75×10⁴)cfu/片。
实施例8、本发明所述药物组合物及其凝胶剂的阴道粘膜刺激试验
1实验材料和动物
受试物：实施例1-4制备的本发明所述药物组合物及其凝胶剂。
实验动物：开福区东创实验动物科技服务部提供的健康白色雌性家免6只，体重2.1～2.4kg。动物购进后观察3天。饲料由同一单位提供。实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2006-0001。
实验环境条件：温度23℃～24℃，湿度66％～68％，实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2005-0001。
2、方法
将实验动物随机分为染毒组和对照组，每组3只。将长度为8cm左右的钝头软管与2ml注射器连接，注满受试液备用。每只动物准备一套。将动物仰面固定，暴露会阴和阴道口。将导管用受试液湿润后轻柔地插入阴道(4～5cm)，并用注射器缓慢注入2ml受试液，抽出导管，完成染毒。对照组动物用灭菌生理盐水作同样处理。染毒后24h，采用气栓法处死动物，剖腹取出完整的阴道，纵向切开，肉眼观察是否有充血、水肿等表现。然后将阴道放入10％福尔马林溶液中固定24h以上，选取阴道两端和中央3个部位的组织制片，HE染色后，进行组织病理学检查，按《消毒技术规范》(2002年版)2.3.5中阴道粘膜刺激反应评分标准对刺激反应进行评分。
3、结果
肉眼观察未见明显异常。病理检查结果见表4。
表4本发明所述药物组合物及其凝胶剂对家兔阴道粘膜刺激反应评分表

4、结论
本发明所述药物组合物及其凝胶剂对白色家兔阴道粘膜刺激的刺激指数为0.78分，根据《消毒技术规范》(2002年版)，属无刺激性。