本发明涉及眼用组合物，特别是滴眼剂配方，它含有一种环孢多肽作活性组分，适用于治疗眼睛及其周围区域的疾病。 环孢多肽包括具有药用的大的和可识别的肽类化合物，例如免疫抑制剂，消炎和/或抗寄生物活性，和/或消除肿瘤以抗肿瘤活性或抑制细胞的药物治疗活性。该环孢多肽包括，如天然存在的真菌代谢物，如环孢多肽A、B、C、D和G，以及各种合成和半合成的环孢多肽，例如-氢-和异-环孢多肽（见US4108985，US4210581和US4220641），[（D）-Ser]8-环孢多肽（见US4384996），[邻-乙酰基，（D）-Ser]8-环孢多肽（见US4764503），[β-氟-（D）Ala]8-环孢多肽（见UK专利申请2206119A，[Val]2-[（D）]2-[（D）甲硫基-Sar]3-和[二氢-MeBmt]′-[Val]2-[（D）甲硫基-Sar]3-环孢多肽[见US4703033]，[邻-（2-羟乙基）-（D）Ser]8-环孢多肽和[3′-脱羟基-3′-酮-MeBmt]′-[Val]2-环孢多肽等等。
这些环孢多肽中，至今研究最广泛的是环孢多肽A，它可从市场上买到，其注册商标为SANDIMMUN或SANDIMMUNE。已证明环孢多肽A具有选择性地抑制各种T-淋巴细胞的作用，包括预防化脓，以及在细胞间免疫反应中致敏T-淋巴细胞的表达，现在已成功地广泛用于抑制器官移植的排异反应。环孢多肽A还系统地用于治疗眼内炎症或自身免疫疾病，例如，眼色素层炎。然而，由于全身治疗量会产生副作用，环孢多肽A只限用于治疗眼科疾病。
环孢多肽A对眼的有效局部给药，由于它对待治疗病部位的限制活性，可大大减少或消除全身副作用，文献中提及已产生这种效果（参见如，US4649047）。然而，直到现在，环孢多肽A在治疗眼科疾病方面的应用和效果仍有障碍，其原因是没有适用于眼的合适滴眼剂。对滴眼剂的要求是：不会使病人不舒服，能用简便的给药方式，并无须非常频繁给药，又能提供足够的药剂输送到体内，尤其是眼的内部区域。另一个困难是环孢多肽A在水中的溶解度很小。这常常会导致环孢多肽A在水基滴眼剂中沉淀，以使眼睛受到强烈刺激。
为克服这些困难已作了如下尝试，使环孢多肽A溶于植物油中[眼科学，96，1144-1150（1989）]，和用环糊精笼形环孢多肽A（日本未审专利出版物SHO-64-85921/1989）。
可是，在油性溶液中的环孢多肽A在眼中分布差[Folia Ophthalmologica Japonica，40，（5），902-908（1989）]，临床治疗需要高浓度（2%）的环孢多肽A[眼科学，96，1144-1150（1989）]。而且，这些油性滴眼剂会使眼睛感觉不舒服。
而用环糊精笼形化溶解的环孢多肽滴眼剂在眼中的分布无疑地得到了改善（Folia Ophthalmologica Japonica，40，（5），902-908（1989）），可是，已溶解的环孢多肽还会再沉淀。正如对兔的试验表明，这至少对眼前部有强烈刺激，而且会使睑结膜充血和水肿，并产生结膜分泌物，以这种方式应用环孢多肽A会带来问题。
因此，迫切需要研制一种局部的对眼不会有刺激的眼配方，在眼中环孢多肽A分布较好，而且没有环孢多肽的沉淀问题。
在试图解决这些问题时，对目前用于配制水中溶解度小的药物的各种表面活性剂，特别是最常用的表面活性剂多乙氧基醚和聚氧乙烯氢化蓖麻油进行了研究。可是，发现当用多乙氧基醚制备滴眼剂时，其溶解效果差，而且环孢多肽的溶解不充分。还发现，将聚氧乙烯氢化蓖麻油用于滴眼剂时，会强烈刺激眼睛。
因此，事实证明这些常用的表面活性剂不能成功地用于制备含高浓度环孢多肽并减少对眼的刺激的滴眼剂。
意想不到的是将环孢多肽配制在选自聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基苯基醚和聚氧乙烯烷基醚或其混合物的表面活性剂中可克服这些困难。
因此，一方面，本发明提供一种眼用组合物，它含有环孢多肽，尤其是环孢多肽A，和选自聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基苯基醚，和聚氧乙烯烷基醚或其混合物的表面活性剂。
该眼用组合物最好按滴眼剂配方配制。最好它们是含水基剂。
用这些眼用组合物，可得到很好的治疗效果，即使环孢多肽以低浓度存在：例如约0.005-1.0%（w/v），优选约0.005-0.1%（w/v），更理想约为0.01-0.075%（w/v）。本说明书中所用的1%（w/v）等于1g/100ml。
优选的聚氧乙烯脂肪酸酯基于饱和脂肪酸，最好不含任何取代基。链长为14-22个碳原子，最好16-18个碳原子。优选的脂肪酸是硬脂酸酯。最好该酯是单酯。聚氧乙烯部分的聚合数最好约为20-60。一个优选例子是硬脂酸-40-聚烃氧基酯。例如商品名称为Myrz52的公知的硬脂酸-40-聚烃氧基酯（由Atlas chemie，Essen，德国购得）。
优选的聚氧乙烯芳烷基酯是基于由1个或多个烷基取代的酚;烷基例如有4-10个碳原子，最好8或9个碳原子。苯基最好只有一个烷基作取代基。聚氧乙烯部分的聚合数优选约为1-50，更优选为40左右。优选实例具有Cosmetic，Toiletry&Fragrance Association，Inc（CTFA）Cosmetic ingredients directory中所列性能。例如octoxynols如商品名称为“Triton”的那些，它们可以Rohm和Haas，philadelphia，美国得到。
优选的聚氧乙烯烷基醚是基于如具有4-20个碳原子的脂肪醇。聚氧乙烯部分的聚合数最好为10-60。已知的聚氧乙烯烷基醚的例子如Cetomacrogol 1000，其酸值小于0.5，羟基值为40-52.5，折射率为1.448-1.452。
优选的表面活性剂是聚氧乙烯脂肪酸脂，更优选的是硬脂酸40聚烃氧基酯。
表面活性剂与环孢多肽的重量比优选约为10∶1-50∶1。
在眼用组合物中表面活性剂的浓度约为0.1%-3.0%（w/v），约为0.15-2.5%（w/v）更好，最好为0.75%-2.5%（w/v）。
该眼用组合物还可含增稠剂（增加粘性）或粘弹性的），因为这些试剂可用于改善环孢多肽在眼中的分布。优选的增稠剂是纤维素和纤维素衍生物增稠剂如烷基纤维素和羟烷基纤维素，还有非纤维素增稠剂如羧乙烯聚合物，聚乙烯聚合物和聚乙烯吡咯烷酮。合适的例子是甲基纤维素，特别是羟丙基甲基纤维素8（例如在日本和美国药曲中限定的2208或2906号）和羟乙基纤维素。合适的聚乙烯聚合物是聚乙酸乙烯酯和聚乙烯醇，合适的聚乙烯吡咯烷酮是聚-N-乙烯吡咯烷酮和乙烯吡咯烷酮共聚物，如乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物。
对所用增稠剂的浓度要求不高。一般约为0.05-5.0%（w/v），更理想的是约0.1-3.0%（w/v）。
为弄清环孢多肽在眼中的分布，将含环孢多肽A和增稠剂的滴眼剂对兔进行试验。将用环糊精溶解的环孢多肽A的滴眼剂用作对照物。试验表明含增稠剂的滴眼剂在角膜中环孢多肽A的浓度比对照物高1.7倍。
由于该眼用组合物中的环孢多肽在眼睛中的分布极好，即使该组合物中环孢多肽的浓度很低。也有可能得到该滴眼剂中足够疗效的环孢多肽A。
最好还含有抗氧化剂，但这不是必不可少的。对可用的抗氧化剂的选择要求不高，但最好使用丁基化的羟基茴香醚，或抗坏血酸，优选硫代硫酸钠或丁基化的羟基甲苯。如果不用抗氧化剂。还可将眼用组合物贮存在含氮和选择性地含游离氧吸收剂（如Fe）的容器中。
用丁基化的羟基甲苯作抗氧化剂的代表进行了稳定性研究，研究中发现没有抗氧化剂情况下在40℃贮存一个月后环孢多肽（特别是环孢多肽A）的含量降至85.3%。相反，在上述含抗氧化剂的组合物中环孢多肽没有明显损失。这说明具有非常高的稳定性。例如，实例5D的组合物（如下所述）在25℃和40℃，3个月后没有明显分解。但是，不是所有的组合物都要求抗氧化剂稳定。
当然所含抗氧化剂的浓度应低到对眼睛无刺激。一般，抗氧化剂的浓度应约为0.00005-0.1%（w/v），更理想的是约为0.001-0.01%（w/v）以免刺激眼睛。
优选的眼用组合物含有约0.01-0.075%（w/v）的环孢多肽A;约0.15-2.5%（w/v）的硬脂酸-40-聚烃氧基酯;约0.1-3.0%（w/v）选自羟丙基甲基纤维素或羟乙基纤维素的纤维素增稠剂;约0.0001-0.01%（w/v）的选自丁基化的羟基甲苯或硫代硫酸钠的抗氧化剂。
表面活性剂如硬脂酸-40-聚烃氧基酯或聚氧乙烯十六烷基醚或聚氧乙烯辛基苯基醚与环孢多肽（尤其是环孢多肽A）的结合会生成极好的对眼睛不会引起刺激的滴眼剂，它在眼睛中的分布较好，含有的环孢多肽A的浓度低，使其沉淀问题减至最小，还具有较高的稳定性，而且，所含的抗氧化剂和纤维素增稠剂还可改善环孢多肽在眼中的分布及稳定性。
若需要的话可含其它赋形剂，如等渗剂，缓冲剂，防腐剂，和/或PH调节剂。还可含适量无菌纯水以得到所需要的滴眼剂。
通常还含如浓度约为0.01-0.5%（w/v）的乙醇。
该眼用组合物的PH在通常用于眼制剂的范围内，但最好为4-8。
该眼用组合物可通过将环孢多肽与上述表面活性剂混合，以及按需要与增稠剂和抗氧化剂以及其它赋形剂混合而制备。
将眼用组合物装入合适的容器中以便于对眼给药，例如配有合适滴管的点滴器。
因此，另一方面本发明提供了在容器中的上述眼组合物，该容器适于该组合物的眼用途，例如，该眼用组合物适合用于眼睛或用在眼睛表面（如角膜或角膜上皮）。
本发明还提供了治疗眼睛或周围或与眼睛有关器官或组织的疾病（需用本发明组合物）的方法，特别是治疗免疫媒介或有炎症的患病器官或组织，该方法包括将上述眼用组合物对眼睛局部给药，例如对眼睛或在眼睛表面（如角膜或角膜上皮给药）。该方法适用的眼的特定区间、部位或组织如本说明书所述。该方法所适用的特定的眼疾病同样如本说明书所述。
另一方面，本发明提供了用于上述方法中的上述眼用组合物。
又一方面，本发明提供了用于上述方法中的制备眼用组合物时环孢多肽的应用。
下列实施例是对本发明眼用组合物的说明。在下列文献中给出了更详细的组分，即“Lexicon for pharmazie，Kosmetic and angrenzende Gebiete”by H.P.Fiedler，3rd Edition，1989 published by Editio cantor Auiendorf，Germany;Hand book of Pharmaceutical Excipients，1st Edition，1986，joint publication of American pharmaceutical Association，Washington，USA and the Pharmaceutical society of Great Britain，London，England;或从有关的制造者得到。在下列实施例中，粘度是在25℃，经牛顿粘度测得的，例如用HAAKE生产的CV20型粘度测定仪测得的。
实施例中所用的硬脂酸-40-聚烃氧基酯是KIKKOL（注册商标）MYS-40，日本Nikko化学有限公司的产品，它的凝固点为39-44℃，酸值低于1，皂化值为25-35。
实施例所用的聚氧乙烯辛基苯基醚是NONION HS240，日本Nippon oil和Fats有限公司的产品。平均聚合数是40，平均分子量是1968。
实施例中所用的羟丙基甲基纤维素（也称为HPMC）是METOLOSE 65SH-4000，日本Shin-Etsu化学有限公司的产品，相当于羟丙基甲基纤维素2906。
实施例1，滴眼剂配方（在100ml中）
环孢多肽A 0.05g
硬脂酸-40-聚烃氧基酯 2.0g
羟丙基甲基纤维素 0.3g
丁基化的羟基甲苯 0.001g
乙醇 0.1g
氯化钠 0.73g
磷酸二氢钠 0.2g
依地酸钠（Sodium edethate） 0.1g
氢氧化钠 适量
无菌纯水 适量
制备方法：
将环孢多肽A溶于含丁基化羟基甲苯的乙醇溶液中，向其中加入硬脂酸-40-聚烃氧基酯。加热该混合物后，加入羟丙基甲基纤维素（预先溶于少量经灭菌的纯水中），将剩余的无菌纯水加到该混合物中以得到澄清的溶液。最后，将氯化物，磷酸二氢钠和依地酸钠加到该混合物中，用氢氧化钠调节PH至6.0。
下列配方可以上述相同的方法制备。
实施例2：滴眼剂配方（在100ml中）
环孢多肽A 0.025g
硬脂酸-40-聚烃氧基酯 0.5g
羟丙基甲基纤维素 0.2g
丁基化的羟基甲苯 0.0005g
乙醇 0.1g
氯化钠 0.73g
磷酸二氢钠 0.2g
依地酸钠 0.1g
氢氧化钠 适量
无菌纯水 适量
实施例3：滴眼剂配方（在100ml中）
环孢多肽A 0.075g
硬脂酸-40-聚烃氧基酯 2.5g
羟丙基甲基纤维素 0.2g
丁基化的羟基甲苯 0.002g
乙醇 0.1g
氯化钠 0.73g
磷酸二氢钠 0.2g
依地酸钠 0.1g
氢氧化钠 适量
无菌纯水 适量
实施例4：滴眼剂配方（在100ml中）
环孢多肽A 0.1g
硬脂酸-40-聚烃氧基酯 3.0g
羟乙基纤维素 0.3g
硫代硫酸钠 0.01g
乙醇 0.1g
氯化钠 0.73g
磷酸二氯钠 0.2g
依地酸钠 0.1g
氢氧化钠 适量
无菌纯水 适量
实施例5：
A B C*D
环孢多肽A 0.075% 0.075% 0.05% 0.05%
硬脂酸-40-聚烃氧基酯 1.125% 1.125% 0.75% 1%
HPMC - - 0.3% 0.3%
丁基化的羟基甲苯 - - - 0.0001%
丙二醇 - 0.25% - -
乙醇 0.1% - 0.1% 0.1%
浓缩的丙三醇 2.1% 1.92% - -
NaH2PO4·2H2O 0.2% 0.2% 0.2% 0.2%
依地酸钠 - - 0.1% 0.1%
NaCl - - 0.72% 0.72%
HCl/NaOH(至PH为7) 适量 适量 - -
纯水 适量 适量 适量 适量
＊粘度6.2厘泊
上述实施例中硬酯酸-40-聚烃氧基酯可用等量聚乙烯辛基苯基醚或聚氧乙烯烷基醚代替。
该眼用组合物可象其它含环孢多肽的局部眼用组合物那样用于同样的病症。如影响角膜、眼房水、晶状体、虹膜、睫、脉络膜或视网膜的疾病。尤其是该眼用组合物可用于治疗眼睛或眼睛四周或有关器官或组织的自身免疫或有炎症的病症，不希望增加免疫反应或炎症反应或作部分病因学。该眼用组合物优选用于治疗眼睛的前或后部分。例如用于治疗前或眼色素层炎，慢性角膜炎，干性角膜结膜炎，春天发生的角膜结膜炎，结膜炎，包括春季结膜炎，或用于角膜成形术中。
该眼用组合物的良好治疗特性可在临床试验中，例如按上述方法对患病的眼睛给药而得到证实。
眼用组合物的极好耐受性可用常规试验确定。例如，将该组合物对6组兔局部给药，用滴注法滴入一个眼内，每隔30分钟滴一次，每次滴一滴（约50微升），共滴10次，即5个小时。用另一只眼（未经治疗）作对照。然后用显微镜观察最后给药后1，5，和18小时对眼的刺激，根据角膜中浊斑和不透气的面积，虹膜，结膜睑的充血和水肿，结膜球充血，mictating膜的状态和结膜分泌物判断该组合物的效果。
实验表明了该眼用组合物具有良好的耐受性。例如，实例5A和B的组合物在上述所有测定中，除结膜睑充血的测定外结果为零。而在这次测定中，只是在最后给药后1小时有到结膜睑边缘充血，该结果与用重量盐水（0.9%氯化钠）得到的结果很接近或相同。
通过常规试验可测定由眼用组合物进入角膜（没有上皮）的环孢多肽A。一次试验中，将50微升试验溶液滴入5组兔的眼睛中，并测定角膜中环孢多肽A的量。通过耳静脉注射戊巴比妥钠，给药30分钟后戳死动物。摘出眼球，用1ml生理盐水清洗其表面，用微型剃刀除去角膜上皮。然后沿其四周切出角膜，用生理盐水洗3次，用一片滤纸将它吸干至完全无水。称重该角膜，并保存在-80℃下。
然后将角膜搅化在1ml甲醇中，同时用冰冷却，在室温下，以3000转/分速度均化离心10分钟。收集上清液，加入1ml甲醇，使混合物进行Boltex处理，然后再离心。合并上清液，在40-50℃下蒸发，将1ml甲醇加到残余物中。取出50μl该溶液，用标准放射免疫测定法测定其中环孢多肽A的量。
环孢多肽A能很好的输入角膜中，这可用上述试验中实例5C的组合物说明，测得平均值为479.2ng/g（S.D+/-245.8）。
为达到该试验目的或为用于实际治疗，将眼用组合物（如实例1的组合物）以特定的量适当给予眼睛表面。例如一天4次，1次约0.1-0.2ml，这取决于待治疗的病情或症状，其临床情况和所要效果。经过连续治疗，如1-2周和更长周期，与未治疗的对照物相比可观察到病情明显好转。发现该眼用组合物使进行这种治疗的对象有较好的耐受性，即没有明显的或难受的刺激。