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1、10申请公布号CN104177371A43申请公布日20141203CN104177371A21申请号201410445538322申请日20140904C07D493/10200601A61K31/365200601A61P35/0020060171申请人南京标科生物科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边东108号1幢701室72发明人张金芳杨存54发明名称一种南大戟内酯A的制备方法及抗肿瘤应用57摘要本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及一种南大戟内酯A的制备方法及抗肿瘤应用。制备方法包括以下步骤将南大戟的根粉碎，用醇类溶剂进行超声提取，得到醇提物，用乙。
2、酸乙酯对醇提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷甲醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩后经高速逆流色谱法分离纯化，冷冻干燥即得产品。采用本发明制备方法，工艺操作简便、得率高，污染小，适合高纯度南大戟内酯A的生产。南大戟内酯A具有抗肿瘤作用，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，利于提高生物利用度。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104177371ACN104177371A1/1页21一种南大戟内酯A的制备方法，其特征在于包括以下步骤（1）将南大戟的根粉碎，用乙。
3、醇溶液进行超声提取，提取液浓缩干燥，得到南大戟的根乙醇粗提物；（2）用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液；（3）浓缩液与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷甲醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集南大戟内酯A洗脱液；（4）洗脱液浓缩后经高速逆流色谱法分离纯化，冷冻干燥即得产品。2根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中乙醇溶液为体积分数6085的乙醇水溶液，乙醇溶液与南大戟的根的质量比为8121。3根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中超声频率为2540KHZ。4根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（3）中二氯甲。
4、烷甲醇体积比为1111。5根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（4）中高速逆流色谱法溶剂系统为环己烷乙酸乙酯甲醇水，体积比为（35）（25）（68）（24），上相为固定相，下相为流动相。6根据权利要求15所述方法制备的南大戟内酯A，在其口服配方中添加肠吸收促进剂。7根据权利要求6所述的南大戟内酯A，其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。权利要求书CN104177371A1/3页3一种南大戟内酯A的制备方法及抗肿瘤应用技术领域0001本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种南大戟内酯A的制备方法及抗肿瘤应用。背景。
5、技术0002南大戟内酯A为二萜类化合物，MP220（分解），呈白色针晶状，分子式C20H26O3，分子量31443，结构式为南大戟内酯A在天然植物中广泛存在，主要从大戟科EUPHORBIACEAE南大戟EUPHORBIAJOLKINIBOISS的根中分离得到。药理研究表明，南大戟内酯A有明显的抑制S180、艾氏腹水癌、肝癌腹水等细胞生长的活性。0003通过文献检索，国内尚未见南大戟内酯A在抗肿瘤药物中的应用。发明内容0004为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种南大戟内酯A的制备方法及抗肿瘤应用。0005为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种南大戟内酯A的制备方法，其特征。
6、在于包括以下步骤（1）取南大戟的根，经粉碎处理，加512倍6090乙醇溶液在2045的温度下进行连续逆流超声提取30100MIN，过滤，得到提取液；（2）提取液通过截留分子量为10003000的超滤膜超滤和截留分子量为100500的纳滤膜浓缩，操作压力为0528MPA，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的南大戟内酯A，其两相溶剂系统为环己烷乙酸乙酯甲醇水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集南大戟内酯A组分；（4）将南大戟内酯A组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85甲醇回。
7、流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得南大戟内酯A。说明书CN104177371A2/3页40006步骤（1）中超声频率为3560KHZ。0007步骤（3）中环己烷乙酸乙酯甲醇水溶剂系统的体积比为57244713。0008所述制备的南大戟内酯A，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。0009采用本法制备南大戟内酯A，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染；添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。0010下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施方式0011实施例1南大。
8、戟内酯A的制备将南大戟的根粉碎，取1KG，用12KG75乙醇溶液进行超声提取，超声频率为30KHZ，提取3次，每次05H，提取液浓缩干燥，得到南大戟的根乙醇粗提物，用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷甲醇按体积比101、61、11梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集南大戟内酯A洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷乙酸乙酯甲醇水5384为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，主机转速为800RPM，流动相流速为3ML/MIN，根据检测器谱图收集南大戟内酯A流分，浓缩，冷冻干燥即得南大戟内酯A14G，HPLC检测。
9、含量为98。0012实施例2南大戟内酯A的制备将南大戟的根粉碎，取1KG，用10KG70乙醇溶液进行超声提取，超声频率为2540KHZ，提取2次，每次15H，提取液浓缩干燥，得到南大戟的根乙醇粗提物，用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷甲醇按体积比111、51、11梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集南大戟内酯A洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷乙酸乙酯甲醇水5584为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，主机转速为750RPM，流动相流速为35ML/MIN，根据检测器谱图收集南大戟内酯A流分，浓缩，冷冻干。
10、燥即得南大戟内酯A19G，HPLC检测含量为97。0013实施例3南大戟内酯A的制备将南大戟的根粉碎，取1KG，用8KG60乙醇溶液进行超声提取，超声频率为40KHZ，提取2次，每次15H，提取液浓缩干燥，得到南大戟的根乙醇粗提物，用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷甲醇按体积比101、51、11梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集南大戟内酯A洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷乙酸乙酯甲醇水3262为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，主机转速为750RPM，流动相流速为4ML/MIN，根据检测器谱图收集。
11、南大戟内酯A流分，浓缩，冷冻干燥即得南大戟内酯A13G，HPLC检测含量为说明书CN104177371A3/3页595。0014实施例4南大戟内酯A的制备将南大戟的根粉碎，取1KG，用12KG85乙醇溶液进行超声提取，超声频率为25KHZ，提取2次，每次1H，提取液浓缩干燥，得到南大戟的根乙醇粗提物，用乙酸乙酯对粗提物进行萃取，过滤，滤液减压浓缩，得到浓缩液，与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，二氯甲烷甲醇按体积比111、61、11梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集南大戟内酯A洗脱液，洗脱液浓缩注入高速逆流色谱仪，以环己烷乙酸乙酯甲醇水5574为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，。
12、主机转速为900RPM，流动相流速为25ML/MIN，根据检测器谱图收集南大戟内酯A流分，浓缩，冷冻干燥即得南大戟内酯A20G，HPLC检测含量为98。0015实施例5南大戟内酯A的抗肿瘤应用1、材料动物昆明种小鼠，雌雄各半性，体重202G，由南京中医药大学提供。0016细胞株SARCOMA180腹水型瘤株（S180），由中国科学院上海药物研究所提供。00172、方法取50只小鼠，每只小鼠左腋下接种S180瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为生理盐水对照组（NS组）、阳性对照组、南大戟内酯A低剂量组（1MG/KG）、中剂量组（2MG/KG）、高剂量组（4MG/KG）。接种24H后南大戟内。
13、酯A给药组灌胃给药，连续7，阳性对照组试验期间腹腔注射2次，隔日给药。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药24H后断颈处死，称重，并计算抑瘤率。00183、结果本发明植物提取物对小鼠S180皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为70867767，结果见表1。0019抑瘤率（）（1治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重）表1本发明植物提取物对S180皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（N10，S）组别给药剂量（MG/KG）试验前体重（G）试验后体重（G）瘤重（G）抑瘤率（）空白对照组20205522656312215028阳性对照组30202013024883180890495861南大戟内酯A低剂量组1202070927094281351153721南大戟内酯A中剂量组2202090227542950950525581南大戟内酯A高剂量组4202016727283220480297767注与阳性对照组相比，P001。说明书CN104177371A。