二咖啡酰氧基-奎宁酸在制药中的应用 本发明涉及二咖啡酰氧基--奎宁酸(可单独用3，4-位或3，5-位二咖啡酰氧基--奎宁酸化合物，也可用3，4-、3-5-二咖啡酰氧基--奎宁酸二个化合物组成的混合物)的用途，尤其涉及在制药领域中的用途。
肾炎、肾衰竭、脉管炎、静脉栓塞、老年性痴呆、心脑血管疾病均为危害人类生命和健康的疑难病症，而治疗或预防此类疾病需要有下述药理作用的药物，也就是具有改善血液流变学，降低血管阻力，增加心脑血流供应，提高机体巨噬细胞免疫功能及对抗脑垂体后叶素所致缺血、缺氧和对抗由二磷酸腺甙(ADP)引起的血小板凝聚功能，具有对抗心肌再给氧性损伤作用以及调控脂质过氧化反应等作用；具有较强的抑制内凝血，促进纤溶活性及显著增加外周和冠脉流量等功能。本发明基于此，应用已知化合物发掘具有新医药用途的药物，造福于人类。
本发明具有新医药用途的化合物名称为二咖啡酰氧基--奎宁酸，结构式为：3，4-Dicafferoylquinic acid 3，5-Dicafferoylquinic acid
(3，4-二咖啡酰氧基奎宁酸) (3，5-二咖啡酰氧基奎宁酸)
分子式为C25H24O12，黄色粉末状，分子量为516，易溶于水和乙醇。
该化合物或混合物可由茜草科咖啡属植物咖啡豆或菊科飞蓬属植物灯盏花植物中提取制得。
本发明的目的在于提供二咖啡酰氧基--奎宁酸的新用途，即在制药中的应用。
实际上，本发明涉及二咖啡酰氧基--奎宁酸作为制备治疗或预防肾炎疾病的药中的应用。
涉及二咖啡酰氧基-奎宁酸作为制备治疗或预防脉管炎疾病的药中的应用。
涉及二咖啡酰氧基--奎宁酸作为制备治疗或预防静脉栓塞疾病的药中的应用。
还涉及二咖啡酰氧基--奎宁酸作为制备治疗或预防肾衰竭药中的应用。
还涉及二咖啡酰氧基--奎宁酸作为制备治疗或预防老年性痴呆药中的应用。
还涉及二咖啡酰氧基--奎宁酸作为制备治疗或预防肺心病的药中的应用。
同时，本发明还涉及二咖啡酰氧基--奎宁酸作为制备治疗或预防心、脑血管疾病药中地应用，具体地涉及二咖啡酰氧基--奎宁酸作为制备治疗或预防高血脂疾病的药中的应用；作为制备抑制血小板凝聚药中的应用；作为制备治疗或预防冠心病药中的应用；作为制备抑制脑血栓形成药中的应用。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用3，5-、3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸两个化合物的混合物的药理试验及结果来说明其在制药领域中新用途。同样地，单独用3，5-或3，4-或4，5-二咖啡酰氧基--奎宁酸化合物均可达同样的药理效果，区别仅在使用的量上的不同。
采用茜草科咖啡属植物咖啡豆2.5kg，用95％的乙醇提取，提取物溶于水后分别以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分。乙酸乙酯部分经硅胶柱层析和MCI柱层析分别得3，5-、3，4-二咖啡酰氧基查宁酸(两者可用高压液相色谱进一步分开，在混合物中，两者的比例以高压液相色谱分析，按峰面积计算约为2比1)4000mg和奎宁酸2000mg。然后把3，5-，3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸250mg，溶于1000ml水中制成0.25％浓度的水溶液加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒制成口服液产品备用。
采用菊科飞蓬属植物短葶飞蓬灯盏花(Erigeron breviscapus(Vant)Hand-Mazz)全植物20kg，用95％的乙醇提取，提取物溶于水后分别以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分。乙酸乙酯部分经硅胶柱层析和MCI柱层析分别得3，5-，3，4-二咖啡酰氧基奎宁酸8000mg和奎宁酸4000mg。然后把前者2500mg，溶于1000ml水中制成水溶液，加热溶解，混合均匀后，分装成5mg/2ml/支浓度的注射液装入药瓶中密封，消毒制成产品备用。
1、小白鼠的急性毒性试验：
A.口服给药：健康雄性小鼠10只，体重17-24g，用20％3，4-、3，5-二咖啡酰氧基-奎宁酸水溶液灌胃0.4ml/10g(相当于生物80g/kg)，观察三天无一只死亡。
B.注射给药：雄性小白鼠17-24g，用5％3，5-、3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸提取液注射给药，按简化机率单位法计算，测得LD50(ip)＝13.14+5.42g/kg，LD50(iv)＝10.02+1.55g/kg。
2、用常规药理试验观察了3，5-，3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸口服液和混合物液对小鼠常压耐缺氧、离体豚鼠心脏灌流、体外家兔血小板聚集及家兔脑血流等的影响。试验结果证明口服液毒性较小，一次口服相当于生药80g/kg时，三天内末见小鼠死亡，口服60g/kg 1--2hr内，具有保护小鼠常压耐缺氧作用。在家兔耳静脉注射1g/kg时，具有增加家兔脑血流量及外周血流量的作用，持续时间为17min。在家兔体外血浆药物浓度为23mg/ml时，该药能抑制家兔血小板聚集。当5％3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸混合物提取液进行豚鼠离体心脏灌流时浓度为0.25mg/ml，0.5mg/ml，均能增加冠脉流量。
上述结果说明3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸有扩张脑血管、冠脉血管和外周血管的作用，使血流量增加，改善局部供血，使外周阻力下降，减轻心脏负担，减轻心肌耗氧量，同时也能增加机体耐缺氧能力，抑制血小板聚集等作用，这些作用都有利预防和治疗脑血栓形成、脑血管意外及引起的后遗症和冠心病等。
3、通过结扎左冠状动脉前降支造成25条犬实验性心肌梗塞模型并采用血流动力学监测，NBT染色法，电镜下超微结构观察、血清CPK测定、冠状血管树铸型等方法观察3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸注射对正常麻醉犬血流动力学和心肌塞犬心梗范围的影响，结果表明，3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸注射液有一定抗心肌缺血作用。
4、3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸注射液逆转急性初期肾功能衰竭的临床研究：对病因、病情基本相似的46例急性初期肾功能衰竭病人随机分为该注射液治疗组22例，对照组24例进行治疗，观察到治疗组的病人尿量、血肌酐、血机酐清除率、尿钠及肾衰指数在用药前后均有显著差异，两组病人在缩短少尿期、透析率及治愈率等方面治疗组明显优于对照组，说明本发明注射液对逆转急性初期肾功能衰竭有显著功效。
治疗方法采用：在常规治疗基础上(包括治疗原发病、纠酸、透析治疗等)，应用本发明的3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸注射液(2ml含3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸6mg)，每次20ml加入5％或10％葡萄糖250ml稀释静脉滴注，一日一次或二次(糖尿病患者改用生理盐水)。疗程由诊断肾衰开始至肾衰痊愈(7-32天)；对照组在上述常规治疗基础上不使用3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸注射液而只用5％-10％的葡萄糖250ml静脉点滴，疗程同前。
治疗组除一例因原发病脑梗塞合并肺感染加重死亡外，其它21例急肾衰均得到逆转，急肾衰前后各项化验结果前后变化见表一，两组治疗结果比较见表二。
表一急肾衰前后各项化验检查对比尿量(N＝14)血肌酐血肌酐清除率 尿钠 肾衰指数用药前272+76 524+174 6.4+5.7 57.9+14.8 2.47+0.34用药后1542+358 97+21 42.6+12.3 21.3+4.5 0.24+0.04P值P＜0.01 P＜0.01 P＜0.01 P＜0.01 P＜0.01
表二治疗组与对照组治疗结果比较 少尿期 透析率 肾衰逆转率 死亡率治疗组2.1+0.3 4/22(18.2％)22/22(100％)1/22(4.5％)对照组8.3+6.7 18/24(75％)17/24(70.8％)7/24(29.8％)P值P＜0.01 P＜0.05P＜0.05P＜0.05
5、3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸注射液预防血栓病(椎基底动脉供血不全的试验：方法采用选择随机患者，以主诉、查体、实验室所见，确诊为椎--基底动脉供血不全者共60例，进行给药观察。给药前停用一切干扰药物1周，并做全面检查后给于该注射液18ml加入5％葡萄糖液250-500ml静滴1次/d，第7-14天再做全面复查，以给药前后对比确定有无效果。判断效果标准以主、查体、实验检查3项中有2项以上好转者为有效，否则为无效。实验室检查主要有血液流变学、血小板聚集率。血液流变学指标包括全血粘度、红细胞压积全血还原粘度、血浆粘度、红细胞变形性、红细胞聚集系数。部分做颈椎X线摄片检查。
60例椎基底动脉供血不全者，经给药后复查，结果51例好转，有效率为85％(见表三，用药前后临床主诉所见及用药前后临床查体改变所见略去)：
表三51例有效者用药前后实验室所见(X+SD) 用药前 用药后 P值全血粘度map.s 5.09+0.52 4.63+0.38＜0.01血浆粘度map.s 1.59+0.19 1.55+0.17＞0.05还原粘度msp.s 7.95+0.68 7.76+0.54＞0.05血球压积 0.51+0.05 0.46+0.04＜0.01红细胞变形性 1.14+0.17 1.00+0.15＜0.01红细胞聚集指数 0.75+0.14 0.7+0.12＜0.05血小板聚集率％ 64.80+23.11 51.34+23.73＜0.01
上述结果表明，60例椎基底动脉供血不全患者，经用本发明的3，5-、3，4-二咖啡酰氧基一奎宁酸注射液7-14天前后对比，有效率为88.23％。眩晕、恶心、肢体麻木、头痛、颈部体征均有明显改善。高粘血症全部恢复正常。全血粘度、血球压积、红细胞变形性、红细胞聚集指数明显的改善，而且降至正常值内(p＜0.05-0.01)，血小板聚集率平均下降13.46％(p＜0.01)。证实此注射液具抗凝，促进纤溶、降低血小板聚集率及改善血液流变学的作用。同时改变了临床证状和体征起到了治疗椎--基底脉供血不全的作用，达到预防血栓病的目的。
从以上结果，可以得出本发明的优点在于：
1、本发明对已知化合物3，5-或3，4-或4，5-二咖啡酰氧基-奎宁酸发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。
2、本发明的3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景。
3、本发明的物质原料来源丰富、价廉、未见毒付作用，制备工艺简单，并可作成口服剂型、注射剂型、片剂等，使用方便，注射液能作肌肉注射和穴位注射，可作静脉注射。
4、本发明的物质配制成的药物具有显著增加脑血流量，降低脑血管阻力，能提高血脑屏障的通透性，提高机体巨噬细胞免疫功能及对抗脑垂体后叶素所致缺血、缺氧和对抗由二磷酸腺甙(ADP)引起的血小板凝聚功能。还具有较强的抑制内凝血，促进纤溶活性及显著增加外周和冠脉流量等功能。
5、本发明的物质配制成的药物具有改善血液流变学，降低血管阻力，增加心脑血流供应，提高机体巨噬细胞免疫功能，而且还具有对抗心肌再给氧性损伤作用以及调控脂质过氧化反应等作用。这些药理作用恰恰针对了早期急性肾功能衰竭最根本的病理变化即肾脏的缺血及再灌注损害。
6、本发明的3，5-、3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸有扩张脑血管、冠脉血管和外周血管的作用，使血流量增加，改善局部血供，使外周阻力下降，减轻心脏负担，减轻心肌耗氧量，同时也能增加机体耐缺氧能力，抑制血小板聚集等作用，这些作用都有利预防和治疗脑血栓形成、脑血管意外及引起的后遗症和冠心病等。
7、经临床试验，表明本发明的二咖啡酰氧基-奎宁酸制成的口服液、注射液、片剂见效迅速，疗效显著，且无毒副反应。同时经过设立丹参注射液、复方丹参注射液、清开灵注射液等为对照组进行随机试验，结果经统计学处理，两者呈显著性或极显著性差异，治疗组明显优于对照组。证明本发明的疗效显著，药理作用强。
下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。
实施例一：采用茜草科咖啡属植物咖啡豆2.5kg，用95％的乙醇提取，提取物溶于水后分别以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分。乙酸乙酯部分经硅胶柱层析和MCI柱层析分别得3，5-、3，4-二咖啡酰氧基奎宁酸4000mg和奎宁酸2000mg。然后把3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸250mg，溶于1000ml水中制成0.25％浓度的水溶液加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒制成产品。
实施例二：采用菊科飞蓬属植物灯盏花(Erigeron breviscapus(Vant)Hand-Mazz)全植物10kg，用95％的乙醇提取，提取物溶于水后分别以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分。乙酸乙酯部分经硅胶柱层析和MCI柱层析分别得3，5-、3，4-二咖啡酰氧基奎宁酸4000mg和奎宁酸2000mg。然后把3，5-、3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸125mg，溶于1000ml水中制成0.125％浓度的水溶液加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒制成产品。
实施例三：采用茜草科咖啡属植物咖啡豆5.0kg，用95％的乙醇提取，提取物溶于水后分别以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分。乙酸乙酯部分经硅胶柱层析和MCI柱层析分别得3，5-、3，4-二咖啡酰氧基奎宁酸8000mg和奎宁酸4000mg。然后把3，5-、3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸用2500mg，溶于1000ml水中制成水溶液，加热溶解，混合均匀后，分装成5mg/2ml/支浓度的注射液装入药瓶中密封，消毒制成产品。
实施例四：用实施例二的方法得到3，5-、3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸4000mg。然后用高压液相色谱分离得到3，5-二咖啡酰氧基-奎宁酸2500mg和3，4-二咖啡酰氧基1500mg，然后用3，5-或3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸化合物1500mg，溶于1000ml水中制成水溶液，加热溶解，混合均匀后，分装成3mg/2ml/支浓度的注射液装入药瓶中密封，消毒制成产品。
实施例五：用实施例一的方法得到3，5-、3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸。然后用1500mg，溶于1000ml水中制成水溶液，加热溶解，混合均匀后，分装成3mg/2ml/支浓度的注射液装入药瓶中密封，消毒制成产品。
实施例六：用实施例二的方法得到3，5-、3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸。然后用1500mg，溶于1000ml水中制成水溶液，加热溶解，混合均匀后，分装成3mg/2ml/支浓度的注射液装入药瓶中密封，消毒制成产品。
实施例七：用实施例四的方法得到3，5--二咖啡酰氧基-奎宁酸化合物。然后用5000mg，溶于1000ml水中制成水溶液，加热溶解，混合均匀后，分装成10mg/2ml/支浓度的注射液装入药瓶中密封，消毒制成产品。
实施例八：按本领域技术人员公知的方法制备3，5-或3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸片剂，其中所述的片剂中按实际需要能制成含有6-10％3，5-或3，4-二咖啡酰氧基-奎宁酸，也可加大或减少3，5-或3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸的含量。用上述实施例中制取化合物的方法得到化合物，取100克3，5-或3，4-二咖啡酰氧基--奎宁酸，560克微晶纤维素，无水乳糖380克，硬脂酸镁200克，氧化硅30克，按公知的制片技术和装备，制成片剂，即取上述配方中除硬脂酸镁外所有成分混合25-30分钟，再筛入硬脂酸镁，继续混匀，尔后用13/32英寸(约1.03cm)标准凹冲压片。