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含有连接碳环的取代苯并 咪唑碱的抗病毒核苷类似物
    本发明涉及含有替代糖基的碳环的某些嘌呤核苷类似物，其可药用衍生物，以及它们在医疗，特别是在治疗某些病毒感染方面的用途。

    乙型肝炎病毒(HBV)是感染人类的含有病毒的小DNA。它是与已知嗜肝DNA病毒密切相关的一类病毒中的一员，这类病毒都可以选择性地感染哺乳动物或禽类，如土拨鼠和鸭子。

    世界范围内，HBV是主要的病毒病原体。它在亚洲国家极为普遍并流行于亚撒哈拉非洲。该病毒与原发性肝细胞癌有病原性的联系，而且被认为世界上80％的肝癌由它引发。在美国，每年有一万以上的人因HBV病就医，平均250人死于疾病爆发。

    保守估计，美国目前有50万-1百万感染携带者。携带者中发展成慢性活动性肝炎患者的将超过25％，而且常常会发展成肝硬变。据估计在美国每年有5000人死于与HBV有关的肝硬变，另外可能有1000人死于与HBV有关的肝癌。尽管正在全球性推广HBV疫苗，但仍然需要有效的抗HBV化合物。大量持续感染的携带者，估计全世界有2.2亿人，他们从接种疫苗中得不到任何好处，他们还将有由HBV诱发成肝病的高危险性。这个携带者群作为易受感染者源延长了疾病的存在，特别是在地方病区域或高危群体如IV药物滥用者和同性恋者中。因此，十分需要有效的抗病毒剂，既能控制慢性感染又减缓肝细胞癌的发展。

    HBV感染的临床表现包括头疼，发烧，不适，恶心，呕吐，厌食和腹痛。在人体持续数周或数月的恢复过程中病毒的复制常常受到免疫反应控制，但感染可能更加严重，以致发展成上述持久慢性肝病。

    在“人类的病毒感染(Viral Infections of Humans)”(第二版，Evans，A.S.编，(1982)Plenum Publishing Corporation，New York)第12章中有关于病毒肝炎感染病因的详细描述。

    对于DNA病毒，疱疹类是许多常见人类病毒疾病的来源。此类包括巨细胞病毒(CMV)，非洲淋巴细胞瘤病毒(EBV)，水痘带状疱疹病毒(VZV)，单纯疱疹病毒(HSV)和人体疱疹病毒6(HHV6)。

    与其它疱疹病毒一样，被CMV感染将导致病毒与宿主终身相连，在初次感染之后可能数年排放病毒。临床表现从死亡和严重疾病症(小头，肝肿大，黄疸，精神发育迟缓)，经过发育障碍，胸部敏感和耳部感染到缺少任何明显病征。AIDS患者中的CMV感染是40-80％成人患者发病的主要原因，它以潜在地形式存在，而且可以在免疫损伤(immunocompromised)患者体内复活。

    EBV引起传染性单核增生，而且被认为是鼻咽癌，免疫细胞(immunoblastic)淋巴瘤，Burkitt淋巴瘤和毛发粘膜白斑病的诱发剂。

    VZV引起水痘和带状疱疹。水痘是未免疫宿主所患的主要疾病。对于幼儿，水痘是一种温和的疾病，其特征是泡状疹和发烧。带状疱疹是一种经常发生在以前感染过水痘的成年人身上的病症。带状疱疹的临床表现包括神经痛和泡状皮肤疹，后者呈单侧和皮肤瘤样(dermatomal)分布。炎症的扩散可能导致麻痹或抽搐，如果脑膜受到侵害，还会发生昏迷。对于免疫缺陷症患者，VZV传播可能会引起严重甚至致命疾病。

    HSV1和HSV2是某些人类最常见的感染源。这些病毒中的大多数能够在宿主神经细胞中长期存在。一旦被感染，患者将处在感染的临床表现重新复发的危险中，即可能承受身体和生理的双重痛苦。HSV感染通常的特征为皮肤，嘴和/或生殖器大面积损伤。尽管初次感染有发展成比以前曾经感染过病毒的患者的感染更严重趋势，但其临床表现并不明显。HSV引起的眼部感染可以导致角膜炎或白内障。对于新生儿和免疫损伤患者，或感染渗入中枢神经系统，感染将是致命的。HHV6是儿童患幼儿急疹(exanthum subitum)的诱因，其特征为发烧和发烧减退后出现红疹。HHV6还会引起免疫损伤患者出现发烧和/或出疹及肺炎或肝炎综合征。

    现在已经发现，某些下面将要叙述的取代苯并咪唑化合物可用于治疗或预防某些病毒感染。根据本发明第一方面，本发明提供新的式(I)和(I-1)化合物，其中R¹是H，CH₃或CH₂OH；R²是H或OH；R³是H或OH；或R²和R³一起形成一个键；R⁴是氨基，环丙氨基，环丁氨基，异丙氨基，叔丁氨基或-NR⁸R⁹，其中R⁸和R⁹与它们所连接的氮原子一起形成一个4，5或6员杂环；R⁵是H，而R⁶和R⁷是氯，但化合物(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(环丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇除外，并且条件是，至少R¹，R²和R³之一是或者包含OH；优选的式(I)和(I-1)化合物是其中R⁴是环丙氨基，异丙氨基或叔丁氨基，特别是异丙氨基或叔丁氨基的化合物。

    优选的式(I)和(I-1)化合物是式(IA)或(IA-1)化合物及其可药用衍生物，其中R²是H或OH；R⁴是氨基，环丙氨基，异丙氨基，叔丁氨基，尤其是异丙氨基或叔丁氨基，或-NR⁸R⁹，其中R⁸和R⁹与它们所连接的氮原子一起形成一个4，5或6员杂环；R⁵是H；R⁶和R⁷是氯，但化合物(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(环丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇除外。

    特别优选的是其中R⁴是环丙氨基，异丙氨基或叔丁氨基；R⁵是H；R⁶和R⁷均是氯的式(IA)和(IA-1)化合物及其可药用衍生物。

    应该理解，本发明包括式(I)和(I-1)描绘的特定对映体，包括嘌呤的互变异构体，单独或与它们的镜像对映体结合的形式。式(I)描绘的对映体是优选的，而且最好达到在一定程度上基本上没有相应对映体，即与之混合的相应对映体在整个混合物中所占的重量比一般小于10％(w/w)，优选小于5％(w/w)，更优选小于2％(w/w)，最优选小于1％(w/w)。式(I-1)描绘的对映体是最优选的，而且最好是达到基本上没有相应的对映体，即与之混合的相应对映体在整个混合物中所占的重量比一般小于10％(w/w)，优选小于5％(w/w)，更优选小于2％(w/w)，最优选小于1％(w/w)。

    本发明化合物特别优选的实例有：(1R，2S，3S，5S)-5-[5，6-二氯-2-(环丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇；(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(异丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇；(1R，2S，3S，5S)-5-[5，6-二氯-2-(异丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇；(1R，2S，3S，5S)-5-[2-(叔丁氨基)-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇；及(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-[2-(叔丁氨基)-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇；(1S，2R，3R，5R)-5-[5，6-二氯-2-(异丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇；(1S，2R，3R，5R)-5-[2-(叔丁氨基)-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇；(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(1-氮杂环丁基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇；(1R，2S，3S，5S)-5-[5，6-二氯-2-(1-氮杂环丁基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇；及(1S，2R，3R，5R)-5-[5，6-二氯-2-(1-氮杂环丁基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇，以及它们的可药用盐。

    上述式(I)和(I-1)化合物及其可药用衍生物在本文中被称为本发明化合物。

    本发明进一步提供了用于医疗，特别是用于治疗或预防病毒感染如疱疹病毒感染的本发明化合物。虽然早期结果预示本发明化合物也可能能抵御其它疱疹病毒感染如EBV，VZV，HSV I和II及HHV6，但到目前为止，本发明化合物已经显示出抵御乙型肝炎病毒(HBV)和巨细胞病毒(CMV)感染的能力。本发明化合物特别可用于治疗或预防CMV感染。本发明还公开了本发明化合物在制备治疗病毒感染的药物方面的用途。

    可以根据本发明治疗的其它病毒疾病在前面的介绍中已经讨论过。

    本发明的又一方面内容提供了：a)一种治疗或预防嗜肝DNA病毒如乙型肝炎感染或疱疹病毒感染如CMV的方法，该法包括给患者施用治疗有效量的本发明化合物。b)本发明化合物在制备治疗或预防任何上述感染或疾病的药物方面的用途。

    “可药用衍生物”指所有本发明化合物的可药用或生理上可接受的盐，酯或这些酯的盐，或在给受者使用后能够提供(直接或间接)本发明化合物的任何化合物，或其抗病毒活性代谢物或其残基。

    术语“杂环”指含有一个或多个独立选自杂原子氮，氧和硫的饱和或不饱和或部分饱和的环。这种基团的实例包括氮杂环丁基，吡咯烷基和哌啶基。

    优选的本发明化合物的酯包括羧酸酯，其中该酯基的非羰基部分选自直链和支链烷基，如正丙基，叔丁基，烷氧基烷基(例如甲氧基甲基)，芳烷基(例如苄基)，芳氧基烷基(例如苯氧基甲基)，芳基(例如任意被卤素，C_1-4烷基或C_1-4烷氧基或氨基取代的苯基)；磺酸酯如烷基-或芳烷基磺酰基(例如甲磺酰基)；氨基酸酯(例如L-缬氨酰或L-异亮氨酰)；及一，二或三磷酸酯。磷酸酯可以被，例如，C_1-20醇或其反应衍生物或2，3-二(C_6-24)酰基甘油进一步酯化。

    关于上述酯，除非另有说明，否则任何所用烷基部分含有1-18个碳原子有利，尤其是含有3-6个碳原子，如戊酸酯。在这些酯中所有芳基部分含有苯基有利。

    所有上述化合物的任何基准也包括其可药用盐的基准。

    生理上可接受的盐包括有机羧酸盐如乙酸盐，乳酸盐，酒石酸盐，苹果酸盐，羟乙磺酸盐，乳糖酸盐，对氨基苯甲酸盐和琥珀酸盐；有机磺酸盐如甲磺酸盐，乙磺酸盐，苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐和无机酸盐如盐酸盐，硫酸盐，磷酸盐和氨基磺酸盐。

    上述本发明化合物及其可药用衍生物可与治疗上述感染或疾病的其它治疗剂结合使用。所说治疗剂的实例包括能有效治疗病毒感染或相关疾病的药物如无环核苷(例如，无环鸟苷)，免疫调节剂如胸腺素，核甘酸还原酶抑制剂如2-乙酰吡啶5-[(2-氯苯胺基)硫代羰基]硫代碳腙，干扰素如α-干扰素，1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-5-(1-丙炔基)尿嘧啶，3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷，三唑核苷和膦甲酸。这种结合治疗的各部分化合物可同时给药，以分开或混合制剂形式，或在不同时间给药，例如连续给药以达到混合的效果。

    为了治疗，本发明化合物(这里也称作活性成份)可通过任何适宜途径给药，包括口服，经直肠，鼻，表面(包括皮肤(transdermal)，颊和舌下)，阴道和非肠道(包括皮下，肌肉内，静脉内和真皮内)途径。优选的途径应随患者的病情和年龄，感染的性质和所选活性成份选择而变化。

    对于上述每种疾病所用的适当剂量一般每天为每公斤受者(例如人)体重0.01-250mg，优选范围为每天每公斤体重0.1-100mg，最优选每天每公斤体重1.0-20mg。(除非另有说明，否则，所有活性成份的重量以式(I)母体化合物计算；对于式(I)化合物的盐或酯，其重量将会按比例增加。)所需剂量最好在一天中以适当间隔分两，三，四，五，六或更多次的分剂量给药。这些分剂量可以单剂量形式给药，例如，每个剂型单位含有10-1000mg，优选20-500mg，最优选100-400mg活性成份。

    理想地，服用活性成份后应使活性化合物在血浆中的峰值浓度达到约0.025-100μM，优选约0.1-70μM，最优选约0.25-50μM。这可以例如，通过静脉内注射0.1-5％活性成份的溶液，任选地在盐水中，或口服含约0.1-250mg/kg活性成份的药丸来实现。通过以约0.01-5.0mg/kg/小时的速度连续输注或将约0.4-15mg/kg的活性成份间歇式输液可以维持理想的血液浓度。

    虽然活性成份可以单独给药，但最好是将其制于药物制剂中。本发明制剂至少含有一种上述活性成份，以及一种或多种其可接受的载体和可任选的  其它治疗剂。每种载体必须是在与制剂中其它成份配伍的意义上是“可接受的”并且对患者没有损害。制剂包括适于口服，经直肠，鼻，表面(包括皮肤(transdermal)，颊和舌下)，阴道和非肠道(包括皮下，肌肉内，静脉内和真皮内)给药的制剂。该制剂可以方便地制成单位剂型并可用药学领域已知的任何方法制备。这些方法包括将适当的活性成份与一种或多种附加成份构成的载体混合的步骤。一般来讲，制剂这样制备：均匀和紧密地将适当活性成份与液体载体或精细的固体载体或两者混合，然后，如果需要，加工为成型产品。

    适于皮肤给药的组合物可制成独立的贴剂(patch)以适于与受者表皮紧密接触持续长时间。这种贴剂宜含有活性化合物，1)在任选的缓冲水溶液中，2)溶解于和/或分散于粘合剂中或3)分散于聚合物中。活性化合物的适宜浓度约为1-25％，优选约3-15％。作为一种具体情况，可按Pharmarceutical Research(药物研究)，3(6)，318(1986)概述的电子传输法或离子电渗疗法将活性化合物从贴剂中放出。

    适于口服给药的本发明制剂可以每个含有预定量活性成份的独立的单元形式存在，如胶囊剂，扁形胶囊剂或片剂；或以粉剂或粒剂；水或非水液体中的溶液或悬浮液；或从水包油型的乳浊液或油包水型的乳浊液的形式存在。活性成份也可制成药丸，干糖浆或糊剂形式。

    片剂可以任意带有一种或多种辅剂通过挤压或模压制成。可以通过在适当机器上将自由流动状如粉状或颗粒状的活性成份任意与粘合剂(例如，聚乙烯吡咯烷酮，明胶，羟丙基甲基纤维素)，润滑剂，惰性稀释剂，防腐剂，崩解剂(例如，淀粉羟乙酸钠，交联聚乙烯吡咯烷酮，交联羧甲基纤维素钠)，表面活性剂或分散剂混合制成挤压型片剂。模压片剂可在适当机器上将潮湿的粉状化合物与某种惰性液体稀释剂形成的混合物模压而成。片剂可以是包衣的或裸片，或者，可制成使活性成份缓慢或受控释放的片剂，例如，可以各种比例加入羟丙基甲基纤维素，以达到所需的释放性能。片剂也可以任意采用肠衣，以达到在肠内释放而不是在胃中释放的目的。

    适于在口内表面给药的制剂包括在香味基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中含有活性成份的锭剂；在惰性基质如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶中含有活性成份的软锭剂；以及在适当液体载体中含有活性成份的漱口液。

    用于直肠给药的制剂可以是带有适当基体如可可油或水杨酸酯的栓剂。

    适于阴道给药的制剂可制成阴道栓剂，塞，乳膏，凝胶，糊剂，泡沫或喷剂形式，其中除含有活性成份外还有本领域技术人员已知的适宜的载体。

    适于胃肠外给药的制剂包括水性或非水性等渗无菌注射液，其中可以含有抗氧化剂，缓冲剂，制菌剂和将制剂等渗于患者血液的溶质；水性和非水性无菌悬浮液，其中包括悬浮剂和增稠剂。这种制剂可以被制成单位剂型或封装在多倍剂量的容器如安瓿和小瓶中并可以储存在冻干条件下，使用前只要加入无菌液体载体如注射用水便可使用。临时配制的注射液和悬浮液可由上述各种无菌粉剂，粒剂和片剂制成。

    优选的单位剂型是含有上述日剂量或单元，日分剂量或它们的适当份额的活性成份的制剂。

    应该理解，除了上面特别指出的成份外，本发明制剂还可以包含与制剂方面有关的领域中其它常用的物质，例如，适于口服给药的制剂可以进一步含有如甜味剂，增稠剂和调味剂。

    本发明还包括下列用流程图表示的本发明化合物制备方法。(其中L是离去基团，如卤素，特别是氯)

    因此，根据本发明另一特征，我们提供了制备式(I)和(I-1)化合物本身或与它们镜像对映体的混合物，及其可药用衍生物的方法，包括(A)使式(II)化合物或其镜像对映体与a)其中R⁴是H，C_1-4烷基或C_1-4全氟烷基的式R⁴CO₂H化合物最好在升温条件下反应，或与其中R⁴是H，C_1-4烷基或C_1-4全氟烷基及R是C_1-4烷基的式R⁴C(OR)₃化合物最好在室温和酸性介质中反应，生成其中R⁴是H的式(I)或(I-1)化合物，或与b)溴化氰反应，生成其中R⁴是NH₂的式(I)或(I-1)化合物；或(B)a)例如用N-(Cl，Br或I)琥珀酰亚胺处理，将其中R⁴是氢的式(I)或(I-1)化合物转变成另一种其中R⁴是离去基团的式(I)或(I-1)化合物，形成其中R⁴是Cl或Br的化合物，及b)通过用C_1-4烷基胺或二-C_1-4烷基胺或R⁸R⁹NH处理，其中R⁸和R⁹定义如上，将其中R⁴是Cl或Br的式(I)或(I-1)化合物转变成另一种其中R⁴是氨基或取代氨基-NR⁸R⁹(R⁸和R⁹定义如上)的式(I)或(I-1)化合物，或(C)

    将式(III)化合物(其中R⁴，R⁵，R⁶和R⁷定义如上)或其官能等价物与式(IV)化合物反应，其中R¹，R²和R³定义如上，L是离去基团如有机磺酰氧基(例如，对甲苯磺酰氧基或甲磺酰氧基)，卤素或三氟甲磺酸酯(OSO₂CF₃基团)，例如在碱如碳酸钠或氢化钠存在下，在溶剂如二甲基甲酰胺中，最好在升温如80-100℃条件下反应，生成其中R⁴是氢，卤素或NR⁸R⁹的式(I)或(I-1)化合物；可任意将式(I)或(I-1)化合物转化成其可药用衍生物。

    或者，在上述方法(C)中，式(IV)化合物可用其中L和R³被环状硫酸酯置换的化合物替代。

    所有上面所示的结构式旨在代表所描绘的对映体以及其镜像异构体，以及它们的混合物。因此，本发明既包括外消旋体也包括基本上没有其镜像异构体的纯对映体。

    式(I)或(I-1)化合物可以通过与适当酯化剂如酰卤或酸酐反应被转化成可药用酯。式(I)或(I-1)化合物，包括其酯，可用常规方法，如用适当的酸处理，转化成可药用盐。式(I)或(I-1)化合物的酯或其酯的盐也可以通过比如水解转化成母体化合物。

    下列实施例仅为了举例说明而非以任何方式限制本发明的范围。用于实施例中的术语“活性成份”指式(I)或(I-1)化合物或其可药用衍生物。实施例A：片剂

    先用聚乙烯吡咯烷酮溶液将各成份湿润成颗粒，然后加入硬脂酸镁并挤压，制备下面的制剂A和B。制剂A

                       mg/片     mg/片(a)活性成份             250       250(b)乳糖B.P.             210       26(c)聚乙烯吡咯烷酮B.P.   15        9(d)淀粉乙醇酸钠         20        12(e)硬脂酸镁             5         3

                        500       300制剂B

                        mg/片         mg/片(a)活性成份              250          250(b)乳糖                  150          -(c)Avicel PH 101         60           26(d)聚乙烯吡咯烷酮B.P.    15           9(e)淀粉乙醇酸钠          20           12(f)硬脂酸镁              5            3

                         500          300制剂C

                     mg/片活性成份             100乳糖                 200淀粉                 50聚乙烯吡咯烷酮       5硬脂酸镁             4

                     359

    下面的制剂是将混合成份直接挤压制成的。制剂E中所用的乳糖是直接挤压型的(Dairy Crest-”Zeparox”)。制剂D

                          mg/片活性成份                   250预先胶凝的淀粉NF15         150

                           400制剂E

                          mg/片活性成份                   250乳糖                       150微晶纤维素                 100

                           500制剂F(控制释放型制剂)

    该制剂是先用聚乙烯吡咯烷酮溶液将以下成份湿润成颗粒，然后加入硬脂酸镁并挤压制成。

                             mg/片(a)活性成份                  500(b)羟丙基甲基纤维素          112

    (Methocel K4M Premium)(c)乳糖B.P.                  53(d)聚乙烯吡咯烷酮B.P.C.      28(e)硬脂酸镁                  7

                             700实施例B：胶囊剂制剂A

    该胶囊剂是通过将上述实施例A中的制剂D的各种成份混合并装入两半硬明胶胶囊中制成。制剂B(见下文)以类似方法制备。制剂B

                            mg/粒(a)活性成份                 250(b)乳糖B.P.                 143(c)淀粉乙醇酸钠             25(d)硬脂酸镁                 2

                            420制剂C

                           mg/粒(a)活性成份                 250(b)聚乙二醇4000BP           350

                            600

    该胶囊剂是通过熔化聚乙二醇4000BP，将活性成份分散在熔体中并将该熔化物装入两半硬明胶胶囊中制成。制剂D

                           mg/粒活性成份                    250卵磷脂                      100花生油                      100

                            450

    该胶囊剂是通过将活性成份分散于卵磷脂和花生油中并将此分散体装入柔软有弹性的明胶胶囊中制成。制剂E(控制释放型胶囊剂)

    下列控制释放型胶囊剂是先用挤出机挤出成份a，b和c，然后将挤出物制成球并干燥。将干燥的丸粒用控制释放膜(d)包衣，然后装入两半硬明胶胶囊制成。

                           mg/粒(a)活性成份                 250(b)微晶纤维素               125(c)乳糖B.P.                 125(d)乙基纤维素               13

                            513实施例C：注射剂制剂A活性成份                    0.200g0.1M盐酸溶液                调至pH 4.0-7.00.1M氢氧化钠溶液            调至pH 4.0-7.0无菌水                      补充至10ml

    将活性成份溶解于大部分水(35-40℃)中并用适量盐酸或氢氧化钠将pH调至4.0-7.0之间。该批料用水补足体积，用无菌微孔过滤器过滤后装入10ml无菌安瓿状玻璃小瓶中(类型I)，然后用无菌罩密封并封装。制剂B活性成份                           0.125g无菌，无热源，pH7的磷酸盐缓冲液    补充至25ml实施例D：肌肉内注射剂活性成份                   0.20g苄醇                       0.10g糖糠醛(Glycofurol)         1.45g注射用水                   补充至3.00ml

    将活性成份溶解于糖糠醛。加入苄醇并使之溶解，加水至3ml。然后将混合物用无菌微孔过滤器过滤，最后封装在无菌3ml安瓿状玻璃小瓶中(类型I)。实施例E：糖浆活性成份                       0.2500g山梨糖醇溶液                   1.5000g甘油                           2.0000g苯甲酸钠                       0.0050g调味剂，Peach 17.42.3169       0.0125ml纯水                           补充至5.0000ml

    将活性成份溶解于甘油和大部分纯水的混合物中，然后加入苯甲酸钠水溶液，接着加山梨糖醇溶液，最后加调味剂。用纯水补充至所需体积并混合均匀。实施例F：栓剂

                                        mg/栓活性成份(631m)^*                         250硬脂肪，BP(Witepsol H15-Dynamit Noble)   1770

                                         2020^*活性成份被制成粉末使用，其中至少90％颗粒的直径是631m或更小。

    将Witepsol H15的1/5熔化于最高45℃的蒸汽套盘中。活性成份经2001m筛子筛选后在搅拌下加到熔融的基质，用装有削头(cuttinghead)的silverson混合，直至达到均匀分散。保持混合物在45℃，将剩下的Witepsol H15加到悬浮液中并搅拌以保证均匀混合。全部悬浮液经2501m不锈钢筛过筛并在持续搅拌下自然冷却至40℃。在38-40℃将2.02g所得混合物装入适当的2ml塑料模具中。将栓剂自然冷却至室温。实施例G：阴道栓剂

                                  mg/阴道栓活性成份(631m)                      250脱水葡萄糖                          380马铃薯淀粉                          363硬脂酸镁                            7

                                    1000

    将上述化合物直接混合并将所得混合物直接挤压成阴道栓剂。抗病毒试验1.抗HCMV

    在多孔盘中对MRC5细胞(人体胎肺)单层细胞内的人体巨细胞病毒(HCMV)进行测定。通过测定斑块减少情况来确定化合物的活性，其中单层细胞用HCMV悬浮液感染。然后将一定浓度范围的试验化合物(已知摩尔数)掺到羧甲基纤维素覆盖层内。每种浓度的斑点数用对照组的百分比表示并绘出剂量-响应曲线。由该曲线估算50％抑制浓度(IC₅₀)。抗HCMV活性化合物          IC50(μM)实施例4           1.92.抗HBVa.概述：

    式(I)和(I-1)化合物的抗HBV活性是用评价功效的高效测定法(high-capacity assay)测定的。将在96孔盘中培养的产生HBV细胞(HepG2 2.2.15，P5A细胞系)的上清液移到微量滴定板的孔中，这些孔已经涂覆有针对HBV表面抗原(HBsAg)的特异性单克隆抗体。上清液中的病毒微粒结合到抗体上并在其它碎片被洗掉时仍保持固定。然后将这些病毒微粒变性，使之释放HBV DNA链，接着通过聚合酶链反应将该链放大并用比色杂交捕获检测法测定。通过标准曲线拟合含已知HBV DNA含量的细胞上清液稀释度进行定量。通过比较未处理对照组细胞上清液与含式(I)或(I-1)化合物的上清液的HBV DNA含量，测定抗HBV效果。.b.获得HBV的免疫亲和力

    将HBV产生细胞接种在装有RPMI/10％胎牛血清/2mM谷氨酰胺(RPMI/10/2：)的96孔培养盘中(2500细胞/孔)。培养基在第1，3，5和7天用式(I)或(I-1)化合物在RPMI/10/2中的稀释液补充，达到终体积为150μL。将50μL鼠单克隆抗HBsAG抗体(10μg/mL，于PBS中)加到圆底微量滴定板的每个孔中。在4℃培养过夜后吸出溶液，代之以100μL 0.1％BSA的PBS溶液。样品在37℃培养2小时，然后用PBS/0/01％Tween-20(PBS/T)在Nuns洗刷机上洗涤3次。将10μL 0.035％Tween-20的PBS通过Pro/Pette加到所有孔中。将含细胞外病毒粒子DNA的细胞上清液(25μL)通过Pro/Pette转移到各孔中；最终Tween浓度是0.01％。将在RPMI/10/2中的25μLHBV标准培养基稀释液加到两行孔中，作为定量用的内标曲线。将各盘密封后在4℃培养过夜。样品用PBS/T洗涤5次，用PBS洗涤2次，吸出最后的洗液。然后，通过Pro/Pette在每个孔中加入25μL 0.09NNaOH/0.01％NP40。将样品孔封住并在37℃培养60分钟，然后用25μL0.09N HCl/100mM Tris(pH8.3)中和样品。c.聚合酶链反应(PCR)

    对5μL样品进行聚合酶链反应(Saiki，R.K.等人，Science(科学)，239(4839)487-91(1988))，使用Perkin Elmer PCR试验盒。PCR以终体积为25μL在“MicroAmp管”中进行。从HBV基因组的保存区选择引物，通过对几个序列的排序测定。将一个引物在5-引物底端进行生物素化以易于PCR产物的杂交捕获检测。引物全部从SynthecellCorp.，Rockville，MD 20850购得。d.PCR产物的杂交捕获检测

    基本采用Holodiniy，M.等人，Bio Techniques(生物技术)，12(1)37-39(1992)所述方法，用horse radish过氧化物酶标记的寡核苷酸探针检测PCR产物(Synthecell Corp.，Rockville，MD 20850)，该探针直接在包有链霉抗生物素蛋白的微量滴定盘的孔中杂交成变性PCR产物的生物素化链。改性包括使用251 PCR反应体积和氢氧化钠变性反应代替热。杂交过程中生物素部分同时与束缚于盘的(plate-dound)的链霉抗生物素蛋白结合，以“捕获”杂交物。在结合(杂交)horse radish过氧化物酶的比色法测定前洗掉未结合标记探针。通过与标准比较计算原始样品中的HBV DNA的量。然后将这些值与未处理的细胞培养物的值比较，从而确定抗HBV活性程度。

    IC₅₀(半抑制浓度)是使HBV DNA减少50％的化合物用量。实施例4，13和69化合物的IC₅₀近似值列于下表。

    抗HCMV活性化合物            IC₅₀(μM)实施例4           0.74，2.5实施例32          1.3， 0.79实施例33          0.44，0.50实施例40          2.0， 1.4实施例41          0.4， 0.40鸟嘌异甘醚(ganciclovir)(对照)1.1(10个值的平均数值)实施例1(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯

    将N-[2，3-二羟基-4-(羟甲基)-1-环戊基]氨基甲酸(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，4R^*)-叔丁酯(6.27g，25.1mmol)和1N盐酸(50mL)搅拌过夜。真空浓缩所得的澄清溶液并蒸发甲醇和乙醇使其干燥，得到(±)-(1S^*，2R^*，3S^*，5R^*)-3-氨基-5-(羟甲基)-1，2-环戊二醇的盐酸盐，为固态泡沫状物(4.73g)。将此固态泡沫状物与三乙胺(7.5g，75mmol)，1，2，4-三氯-5-硝基苯(5.84g，25.0mmol，为97％，Aldrich)和2-甲氧基乙醇(75mL)剧烈回流24小时。将所得黑色混合物蒸发至干，剩余物在硅胶上进行色谱分离，产物用甲醇∶氯仿(1∶10)洗脱，得到深橙色玻璃状物质(6.9g)。将其从乙醇-水中结晶，得到橙色粉末(3.00g)，然后室温下将其在乙酐(3.0mL)-吡啶(20mL)中搅拌过夜。蒸发掉挥发物，接着从乙酸乙酯-己烷中结晶，得到标题化合物，为橙色针晶(2.82g，24％)，m.p.153-156℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.25和7.51(均为单峰，各1H，C₆H₂)，8.07(d，J＝7.8Hz，1，NH)，5.23和5.09(均为多峰，2，2 CHO)，4.3(m，1，CHN)，4.2-4.0(m，2，CH₂O)，2.5-2.35(m，2，2CH)，2.04，2.03，2.02(均为s，9，3 CH₃CO)，1.5-1.4(m，1，CH)。元素分析：C₁₅H₂₀N₂O₅Cl₂计算值：C，46.67；H，4.35；N，6.05；Cl，15.31；实测值：C，46.66；H，4.37；N，6.02；Cl，15.38。实施例2(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯

    在异丙醇(250ml)中将(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(2.75g，5.93mmol)和阮内镍(水浆液，Aldrich，300mg(湿))在40psi氢气压力下在Parr摇动器中摇动2.25小时。用硅藻土滤出催化剂，滤液用98％甲酸(5mL)酸化并浓缩成橙色油。再用98％甲酸(45mL)稀释该油并将所得橙色溶液回流40分钟。除去挥发物后将剩余的深色油溶解于氯仿(100mL)。用碳酸氢钠饱和水溶液(3×10mL)洗涤氯仿溶液，干燥(硫酸钠)，蒸发后得到泡沫状物，在硅胶上进行色谱分离。标题化合物用甲醇∶氯仿(3∶97)洗脱，从乙酸乙酯得到白色泡沫状物(2.26g，86％)；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.57，8.17，7.97(均为单峰，各1H，3苯并咪唑CH)，5.6(m，1，CHO)，5.3-5.1(m，2，CHO和CHN)，4.35-4.15(m，2，CH₂O)，2.6-2.4(m，与溶剂重叠，2，CH)，2.10，2.06，1.92(均为s)重叠于2.0(m，总共10，3CH₃CO和CH)。元素分析：C₁₉H₂₀N₂O₆Cl₂计算值：C，51.49；H，4.55；N，6.32；Cl，16.00；实测值：C，51.39；H，4.58；N，6.22；Cl，16.07。实施例3(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯

    将(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸(1.32g，2.98mmol)在干燥的N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中加热至60℃。用5小时分批(每次约1mmol)加入N-溴琥珀酰亚胺(1.59g，8.93mmol)，再继续加热4小时。真空除去挥发物后，剩余物在硅胶上进行色谱分离，标题化合物用1∶1己烷-乙酸乙酯洗脱，得到褐色粉末(1.1g，69％)。¹H-NMR与重结晶样品一致，从乙醇-水中重结晶得到白色粉末样品，m.p.156-159℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.34，7.97(均为单峰，每个1，2苯并咪唑CH)，5.6(m，1，OCH)，5.3(m，1，OCH)，5.2-5.0(m，1，NCH)，4.4-4.2(m，2，OCH₂)，2.7-2.5(m，1，CH)，2.4-2.0(m)重叠于2.1和2.07(均为单峰，总共8，CH₂和2CH₃CO)，1.92(s，3，CH₃CO)；质谱(CI)：527(6.6)，525(45)，523(100)，521(65，M+1)，257(48，M-B)。元素分析：C₁₉H₁₉N₂O₆BrCl₂计算值：C，43.71；H，3.67；N，5.37；全部卤素为Br，45.91；实测值：C，43.64；H，3.63；N，5.30；全部卤素为Br，45.77。实施例4(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    将(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(600mg，1.15mmol)加到搅拌的碳酸钠(122mg)的水(2mL)-乙醇(10mL)-甲醇(10mL)混合物中。在室温2.5小时后用冰醋酸将pH调节至7。真空除去挥发物，剩余物用水(5mL)研制，过滤得到白色固体。该固体从1∶1乙醇-甲醇中重结晶，得到标题化合物为白色粉末(282mg，62％)，m.p.208-211℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.23(s，1，苯并咪唑H7)，7.95(s，苯并咪唑H4)，5.13(t，J＝4.1Hz，1，CH₂OH)，5.03(d，J＝6.2Hz，1，OH)，5.0-4.85(m，1，H5)，4.71(d，J＝3.5Hz，1，OH)，4.55-4.45(m，1，H1)，3.85-3.80(m，1，H2)，3.7-3.6和3.55-3.45(均为多峰，各1，OCH₂)，2.2-1.95(m，3，H3和2H4)；质谱(CI)：395(M+1)。元素分析：C₁₃H₁₃N₂O₃Cl₂Br计算值：C，39.43；H，3.31；N，7.07；全部卤素为Br，60.52；实测值：C，39.50；H，3.33；N，7.02；全部卤素为Br，60.61。实施例5苯甲酸(1α，3β，4β)-(3，4-二羟基-1-环戊基)甲酯

    向搅拌的4-羟甲基环戊烯(37.0g，276mmol)(J.-P.，Depres和A.E.Green，J.Org.Chem.(有机化学杂志)，1984，49，928-931，此处作为参考)在吡啶(450mL)中的冰冷(0℃)溶液中用30分钟加入苯甲酰氯(32.1mL，276mmol)。将所得混合物在室温搅拌1.25小时。加水(50mL)并真空除去挥发物。将剩余的油溶解于氯仿并用水萃取该溶液，硫酸钠干燥。蒸发溶剂，得到苯甲酸(3-环戊烯-1-基)甲酯为黄色油(53.94g，91％)，已达到使用的纯度；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.98，7.67，7.56(m，5，C₆H₅)，5.72(s，2，CH＝CH)，4.19(m，2，OCH₂)，2.71(m，1，CH)，2.56-2.77(m，与溶剂重叠，2 CH)，2.21-2.14(m，2，2 CH)。

    室温下将苯甲酸(3-环戊烯-1-基)甲酯(37.6g，0.161mol)的丙酮(200mL)液用2小时滴加到搅拌的N-甲基吗啉-N-氧化物(33.1g，60％，于水中，0.169mol)，四氧化锇(2.5％叔丁醇溶液，Aldrich，3.0mL)和丙酮(200mL)。继续搅拌16小时。加入氯仿(500mL)和水(150mL)。分离有机相，用冷1N盐酸(2×150mL)洗涤，然后用碳酸氢钠饱和水溶液(100mL)洗涤并干燥(MgSO₄)。除去挥发物，剩余的固体从甲苯(200mL)中结晶，得到标题化合物，为白色晶体(26.9g，73％)，m.p.92-94℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.96，7.65，7.56(m，5，C₆H₅)，4.38(d，J＝4.1Hz，2，2OH)，4.14(d，J＝6.6Hz，2，CH₂O)，3.90(m，2，2 OCH)，2.58(m，与溶剂重叠，CH)，1.75(m，2，2 CH)，1.55(m，2，2CH)。元素分析：C₁₃H₁₆O₄计算值：C，66.09；H，6.83；实测值：C，66.19；H，6.86。

    将母液浓缩，得到10.33g白色固体，它含有混有苯甲酸(±)-(1_，3_，4_)-(3，4-二羟基-1-环戊基)甲酯的标题化合物，¹H-NMR分析，比例约为2∶3。实施例6苯甲酸(3a-α，5α，6a-α)-(四氢-4H-环戊-1，3，2-二氧杂硫醇-5-基)甲酯S-氧化物

    将亚硫酰氯(6.04g，50.8mmol)加到苯甲酸(1β，3a，4a)-(3，4-二羟基-1-环戊基)甲酯(10.0g，42.3mmol)的四氯化碳(150mL)溶液中。将溶液回流1.5小时。蒸发除去溶剂，留下的标题化合物为浓稠的油状物，已达到使用的纯度(见下面实施例)。从甲苯中结晶，得到蜡状固体样品，m.p.48-57℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.96，7.66，7.52(m，5，C₆H₅)，5.46和5.32(均为多峰，1，2 OCH，由于约1∶1异构S-氧化物的混合物)，4.28(m，2，OCH₂)，2.90和2.43(均为多峰，1，两个异构S-氧化物的CH)，2.10和1.74(均为多峰，4，4 CH)。元素分析：C₁₃H₁₄O₅S计算值：C，55.31；H，5.00；S，11.36；实测值：C，55.41；H，5.04；S，11.30。实施例7苯甲酸(3a-α，5α，6a-α)-(四氢-4H-环戊-1，3，2-二氧杂硫醇-5-基)甲酯S，S-二氧化物

    将苯甲酸(3a-α，5α，6a-α)-(四氢-4H-环戊-1，3，2-二氧杂硫醇-5-基)甲酯S-氧化物(实施例6，42.3mmol)在四氯化碳(40mL)-乙腈(40mL)-水(60mL)中搅拌，同时加入偏高碘酸钠(8.98g，42.3mmol)和三氯化钌(44mg，0.21meq)。30分钟后再加入偏高碘酸钠(179mg)，用TLC(硅胶，甲醇∶氯仿(1∶19)，用碘显色)判断反应是否完成。整个经过1.0小时后加入二氯甲烷(300mL)。分离有机相，另用二氯甲烷(300mL)萃取水相。合并的有机相用碳酸氢钠饱和水溶液(100mL)洗涤，然后用氯化钠饱和水溶液(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到标题化合物，为白色粉末(12.37g，98％)，m.p.114-119℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.02，7.70，7.55(均为m，5，C₆H₅)，5.62(m，2，OCH)，4.34(d，J＝5.8Hz，2，OCH₂)，2.79-2.64(m，1，CH)，2.32-2.21和1.97-1.79(m，4，2 CH₂)。元素分析：C₁₃H₁₄SO₆计算值：C，52.35；H，4.73；S，10.75；实测值：C，52.32；H，4.73；S，10.69。实施例8(±)-(1R^*，2R^*，4S^*)-2-(5.6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-4-(羟甲基)环戊醇

    将氢化钠(416mg，10.4meq，为60％油分散液)加到5，6-二氯苯并咪唑(L.B.Townsend和G.R.Revankar，Chem.Rev.(化学综述)，1970，70，389，在此作为参考)(1.50g，8.00mmol)的无水N，N-二甲基甲酰胺(35mL)溶液中。将混合物在25℃搅拌45分钟。用5小时分批加入苯甲酸(3a-α，5α，6a-α)-(四氢-4H-环戊-1，3，2-二氧杂硫醇-5-基)甲酯S，S-二氧化物(3.05g，10.2mmol)(制备于实施例7，8和9)，在室温继续搅拌过夜。真空除去挥发物，剩余的油状物溶解于同4M硫酸(2.3mL)一起回流的1，4-二恶烷(130mL)-水(10mL)中。回流10分钟后，溶液用5N氢氧化钠碱化，再在50℃加热1小时，然后再用酸中和。真空蒸发挥发物，剩余的固体用氯仿萃取以除去未反应的5，6-二氯苯并咪唑，然后从乙醇-水结晶，得到标题化合物，为白色粉末(2.09g，87％)。该样品从乙醇-水重结晶，得到标题化合物，为白色颗粒，m.p.244-245℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.47，8.05，7.93(均为s，3，芳基CH)，5.19(d，J＝5.3Hz，1，CHOH)，4.71(t，J＝5.3Hz，1，CH₂OH)，4.6-4.5(m，1，NCH)，4.37-4.25(m，1，OCH)，3.41(m，2，OCH₂)，2.4-2.2和1.95-1.62(m，5，5 CH)。元素分析：C₁₃H₁₄N₂O₂Cl₂·0.02C₂H₅OH计算值：C，51.85；H，4.71；N，9.27；Cl，23.47；实测值：C，51.87；H，4.74；N，9.28；Cl，23.60。实施例9乙酸(±)-(1R^*，2R^*，4S^*)-4-(乙酰氧基甲基)-2-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)环戊酯

    将(±)-(1R^*，2R^*，4S^*)-2-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-4-(羟甲基)环戊醇(7.80g，25.8mmol)溶解于吡啶(50mL)-乙酐(50mL)并将溶液搅拌过夜。真空除去挥发物，剩余的油在二氯甲烷(150mL)和碳酸氢钠饱和水溶液(100mL)之间分配。干燥(硫酸钠)有机相并蒸发，得到玻璃状物(9.91g，99％)；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.58，8.08，7.96(s，3，芳基CH)，5.39-5.32(m，1，OCH)，5.09-5.04(m，1，NCH)，4.11(d，J＝6.6Hz，2，OCH₂)，2.59-2.50(m与溶剂重叠，CH)，2.41-2.35(m，1，CH)，2.17-1.86(m重叠于2.06和1.94，均为单峰，总共9，3CH和2CH₃CO)。元素分析：C₁₇H₁₈N₂O₂Cl₂·0.1CH₂Cl₂计算值：C，52.96；H，4.70；N，7.26；Cl，18.55；实测值：C，52.86；H，4.74；N，7.25；Cl，18.50。实施例10乙酸(±)-(1R^*，2R^*，4S^*)-4-(乙酰氧基甲基)-2-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)环戊酯

    将N-溴琥珀酰亚胺(4.54g，25.5mmol)加到乙酸(±)-(1R^*，2R^*，4S^*)-4-(乙酰氧基甲基)-2-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)环戊酯(8.95g，23.2mmol)的无水N，N-二甲基甲酰胺(46mL)溶液中。将该溶液保持在约70℃(油浴)5小时。真空除去挥发物，剩余的橙色浆液在硅胶上进行色谱分离。用氯仿洗脱标题化合物，得到浅黄色固体(5.14g，48％)，m.p.122-125℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.16(s，1，苯并咪唑H7)，7.95(s，1，苯并咪唑H4)，5.60-5.55(m，2，OCH)，5.12-5.03(m，1，NCH)，4.15(d，J＝6.3Hz，2，OCH₂)，2.66-2.60(m，1，CHCH₂)，2.29-2.14(m，3，CH)，2.06(s，3，CH₃CO)，1.93(s重叠于m，4，CH₃CO+CH)；质谱(CI)：469(5.8)，467(37.5)，465(95)，463(54，M+1)，199(100，M-B)。元素分析：C₁₇H₁₇N₂BrCl₂O₄计算值：C，43.99；H，3.69；N，6.04；全部卤素为Br，51.65；实测值：C，44.06；H，3.70；N，5.97；全部卤素为Br，51.74。实施例11(-)-(1S，4R)-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇及其对映体(+)-(1R，4S)-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇的分析

    Bruchner，H.，Wittner，R.和Godel，H.的方法“通过使用邻苯二醛和N-乙酰化半胱氨酸衍生化自动进行氨基酸对映体的分离”，J.Chrom.(色谱杂志)，476(1989)73-82描述了标题化合物样品的特征。用邻苯二醛和N-乙酰基-L-半胱氨酸作为衍生剂。用Optima IIODS 100×4.5mm，3μm柱(III Supplies Co.，Meriden，CT)，以0.9mL/min洗脱速度梯度洗脱，开始用100％乙酸钠缓冲液(40mM，pH6.5)用15分钟直线上升至18％乙腈梯度洗脱，然后在18％乙腈保持15分钟洗脱。在338nm处检测。将样品溶解于0.1摩尔硼酸盐缓冲液(pH10.4)。样品的鉴定和纯度通过与权威标准(见EP 434450(1991年6月26日))比较而确定。(1S，RS)异构体的保留时间约为21分钟。(1R，4S)异构体的保留时间约为22分钟。实施例12(±)-顺-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇

    给一个2L的干燥三颈烧瓶装上机械搅拌器和隔膜，连接氮气源的进气口接头上装有温度计。烧瓶用氮气吹洗，并浸入冰-丙酮浴，然后通过套管加入氢化铝锂的四氢呋喃溶液(1.0摩尔，800mL，0.8mol，Aldrich)。用无水四氢呋喃(2×15mL)冲洗氢化铝锂溶液。在溶液被冷却到0℃时通过套管加入(±)-顺-4-氨基-2-环戊烯-1-羧酸4-甲苯磺酸盐的四氢呋喃浆液并以保持温度在10℃以下的速率充分搅拌，使氢的逸出速度适中(约1小时)。用无水四氢呋喃(2×15mL)冲洗烧瓶，隔膜用回流冷凝器代替。用大约2小时将所得清澈浅琥珀色溶液慢慢升温至微微回流状态，此时，溶液已变得浑浊。回流过夜(16小时)后撤去加热浴，加入氟化钠(136.3g，3.25mol，试剂级粉末)，冷凝器复位以进行随后的蒸馏。蒸馏混合物得到的稀浆液(蒸馏收集700mL馏出液)，在冰浴中冷却。加入无水乙醚(500mL)，用盛有水(43mL，2.4mol)的加料漏斗代替冷凝器。非常缓慢(2小时)地加水，同时，小心控制氢的逸出速率并保持温度在10±5℃。与此同时，加水(54mL)到上述回收的蒸馏液中，添加足够的四氢呋喃使整个体积达到900mL(6％H₂O)。吸滤反应混合物，滤饼用四氢呋喃(100mL)置换洗涤(displace-wash)。用6％水-四氢呋喃溶液(300mL)部分浆洗滤饼，然后将滤饼转入反应烧瓶。在6％水-四氢呋喃溶液(400mL)中研制滤饼(25分钟)，过滤并用6％水-四氢呋喃(200mL)置换洗涤。真空浓缩合并的滤液，得到浅黄色油(44.07g，HPLC结果为67.8％，见实施例3)。此含纯标题化合物，水和痕量甲苯磺酸盐的油状物在室温条件下颜色迅速变深，它即刻反应生成N-BOC衍生物，为稳定的晶状固体(见下面实施例)。重新将滤饼放入烧瓶并在甲醇(800mL)中研制48小时。在橡胶挡板下过滤所得浆液，用甲醇(200mL)洗涤滤饼。真空浓缩滤液，得到黄色固体(56.80g，HPLC分析产率为20.9％；总产率为88.7％)。实施例13(±)-顺-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇

    用实施例12方法，但以约两倍的规模(97.40g，0.8924mol的(±)-2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮)实施，得到标题化合物为含有标题化合物(0.7926mol，理论值的88.8％，考虑到除去的等分试样，由实施例11的方法测定)的萃取物。实施例14(±)-顺-N-[4-(羟甲基)-2-环戊烯-1-基]氨基甲酸叔丁酯

    将从上个实施例得到的合并的四氢呋喃萃取物真空浓缩成1031g，放入冰水浴冷却并加入碳酸氢钠(97.46g，1.16mol)的水(500mL)混合物，接着加入二碳酸二叔丁酯(204.5g，0.9501mol)。将混合物在5℃搅拌2天。将从上个实施例得到的甲醇萃取物蒸发成油性固体(136.64g)，并将其加到上述混合物中。待其升至室温后真空蒸发有机溶剂，所得浆液依次用己烷，二氯甲烷(三次)和己烷(每次200mL)萃取。蒸发有机萃取物得到油状物，将其用己烷(约300mL)结晶，得到标题化合物(154.15g，0.7229mo1)。对母液进行色谱分离又得到产物(10.5g，0.0491mol，从起始内酰胺的理论产率的86.6％，考虑到除去的部分)。实施例15(±)-顺-[4-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-2-环戊烯-1-基]甲醇

    在0℃将(±)-顺-N-[4-(羟甲基)-2-环戊烯-1-基]氨基甲酸叔丁酯(50.0g，0.230mol)在25％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(1.5L)中搅拌1.0小时。蒸发除去挥发物，留下实施例27所述的胺的三氟乙酸盐，为深色油状物。向该油中加入叔丁醇(350mL)，碳酸钾(65g)和1，2，4-三氯-5-硝基苯(Aldrich，54.7g，0.230mol为97％)。将所得混合物剧烈搅拌回流3天。真空除去挥发物，剩余物用甲醇研制。将该溶于甲醇的物质在硅胶上进行色谱分离，粗产物用2％甲醇-氯仿洗脱，得到橙色固体(38.0g)。用乙酸乙酯-己烷结晶，得到标题化合物，为橙色晶体(34.0g，49％)，m.p.96-98℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)和质谱(CI)分析结果与结构相符并与实施例18和26所述手性对映体样品的一致。元素分析：C₁₂H₁₂N₂Cl₂O₃计算值：C，47.55；H，3.99；N，9.24；Cl，23.39；实测值：C，47.75；H，4.10；N，9.20；Cl，23.52。

    继续柱洗脱，又得到含有标题化合物和少量低R_f杂质的流分。将这些流分与上述结晶过程产生的母液合并，然后从乙酸乙酯-己烷中重结晶，又得到橙色固体(16.7g)，它具有与上述产物一致的¹H-NMR谱，因而使总产率达到73％。实施例16(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯和(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯

    向(±)-顺-[4-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-2-环戊烯-1-基]甲醇(20.0g，66.0mmol)和N-甲基吗啉N-氧化物(Aldrich，60％水溶液，12.0mL，69mmo1)的丙酮(280mL)溶液中加入四氧化锇(2.5％叔丁醇溶液，Aldrich，1.24mL)。室温搅拌18小时后真空除去挥发物，剩余物在吡啶(200mL)-乙酐(40mL)中再搅拌18小时。将溶液浓缩成粘稠的红色油状物并将其在碳酸钠饱和水溶液和氯仿之间分配。干燥(硫酸钠)氯仿相，然后真空浓缩成油。将标题化合物的异构体混合物通过硅胶柱色谱分离，用2％甲醇-氯仿洗脱并用乙酸乙酯-己烷结晶(晶种是实施例1方法制备的(1R^*，2S^*)-异构体)，得到(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯，为橙色晶体(17.4g，57％)，m.p.154-156℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)分析结果与实施例1所述样品的一致。

    母液继续用乙酸乙酯-己烷结晶，得到(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯，为橙色晶体(8.82g，29％)，m.p.105-107℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)。元素分析：C₁₈H₂₀N₂Cl₂O₈计算值：C，46.67；H，4.35；N，6.05；Cl，15.31；实测值：C，46.50；H，4.33；N，5.96；Cl，15.23。实施例17(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯

    室温下将(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(5.00g，10.8mmol)在氨/甲醇(约2N，100mL)中搅拌18小时。真空除去挥发物，留下橙色固体(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-3-(乙酰氧基甲基)-1，2-环戊二醇，经在硅胶TLC板上分析其R_f与实施例19所述手性样品的一致。该固体用阮内镍/氢(45psi)在异丙醇(200mL)中还原。用硅藻土滤出催化剂，真空蒸发滤液-洗涤液至干。如实施例2所述，将剩余物在甲酸(69％，50mL)中回流1小时。将蒸发甲酸余留的油溶解于甲醇。用5N氢氧化钠水溶液将pH调至13并将溶液在室温搅拌1小时以水解甲酸酯。再用1N盐酸调节pH至7，真空蒸发除去挥发物。在剩余物中加入吡啶(100mL)和乙酐(4mL)，混合物在室温搅拌过夜。真空蒸发挥发物，接着在硅胶上色谱分离，用1％甲醇-氯仿洗脱，得到(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯，从乙醇-水中结晶，为白色晶体(2.6g，53％)，¹H-NMR(DMSO-d₆)分析结果与结构相符。将(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(2.5g，5.7mmol)溶解于无水二恶烷(15mL)。回流溶液，同时一次加入刚重结晶的N-溴琥珀酰亚胺(2.10g，11.5mmol)。回流5分钟后真空蒸发红棕色溶液，得到红色油。将该油的氯仿溶液用水洗涤，然后干燥(硫酸钠)。将氯仿溶液浓缩成油状物，在硅胶上色谱分离，含产物流分以2-4％甲醇-氯仿洗脱出。用乙酸乙酯-己烷结晶，得到乳白色固体(1.5g，50％)；¹H-NMR(DMSO-d₆)分析符合标题化合物结构。该样品重新在硅胶上色谱分离，用氯仿洗脱，得到(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯，用乙酸乙酯-己烷结晶后为白色晶体，m.p.166-167℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.14和7.96(均为单峰，1每个，2芳香CH)，5.6-5.35(m，3，2 OCH和NCH)，4.4-4.1(m，2，OCH₂)，2.8-2.4(m，与溶剂重叠，2CH)，2.4-2.1(m，与在2.25处的单峰重叠，总共4，CH和CH₃)，2.04(s，3，CH₃)，1.37(s，1，CH₃)；质谱(CI)：525(53)，523(100)，521(54，M+1)。元素分析：C₁₉H₁₉N₂BrCl₂O₆计算值：C，43.70；H，3.67；N，5.37；全部卤素为Cl，20.37；实测值：C，43.65；H，3.68；N，5.35；全部卤素为Cl，20.32。实施例18(1S，4R)-[4-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-2-环戊烯-1-基]甲醇

    用实施例1方法将(-)-(1R，4S)-N-[4-(羟甲基)-2-环戊烯-1-基]氨基甲酸叔丁酯(15.00g，70.3mmol)转化成(1S，4R)-[4-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-2-环戊烯-1-基]甲醇，经硅胶柱用1；1己烷-氯仿洗脱并用乙酸乙酯-己烷中重新固化后分离出黄色粉末(9.97g，47％)，m.p.94.5-96.5℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.24(s，1，苯并咪唑CH)，8.09(d，J＝8.1Hz，1，NH)，7.51(s，1，苯并咪唑CH)，5.95和5.85(均为多峰，2，CH＝CH)，4.9-4.7(m，与在4.78的t重叠，J＝5.1Hz，总共2，CHN和OH)，3.4(m，2，CH₂O)，2.80(m，1，CH)，2.6-2.4(m，与溶剂重叠，CH)，1.5-1.4(m，1，CH)；质谱(CI)：303(M+1)；[α]²⁰₅₈₉+199°，[α]²⁰₅₇₈+222°，[α]²⁰₅₄₆+333°(c＝0.267，甲醇)。元素分析：C₁₂H₁₂N₂Cl₂O₃·0.18C₆H₁₄计算值：C，49.30；H，4.59；N，8.79；Cl，22.25；实测值：C，49.64；H，4.64；N，8.68；Cl，22.10。实施例19(1S，2R，3R，5R)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇和(1R，2S，3R，5R)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    向(1S，4R)-[4-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-2-环戊烯-1-基]甲醇(8.60g，27.6mmol)和N-甲基吗啉N-氧化物(Aldrich，60％水溶液，5.02mL，29.0mmol)的丙酮(90mL)溶液中加入四氧化锇(Aldrich，2.5％叔丁醇溶液，0.51mL)。室温搅拌18小时后再加入0.25mL N-甲基吗啉N-氧化物60％水溶液并将溶液再搅拌5小时。真空蒸发挥发物，剩余物用95％乙醇重结晶两次，得到(1S，2R，3R，5R)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇为黄色粉末(1.78g，19％)，m.p.197-199℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.23(s，1，苯并咪唑CH)，8.1(d，J＝7.0Hz，1，NH)，7.50(s，1，苯并咪唑CH)，5.02(d，J＝4.9Hz，1，OH)，4.74(t，J＝5.1Hz，1，CH₂OH)，4.58(d，J＝5.1Hz，1，OH)，4.0-3.8(m，1，NCH)，3.8-3.7(m，2，2OCH)，3.5-3.4(m，2，CH₂O)，2.45-2.25(m，1，CH)，2.1-1.9(m，1，CH)，1.4-1.2(m，1，CH)；质谱(CI)：337(M+1)；[α]²⁰₅₈₉-106°，[α]²⁰₅₇₈-118°，[α]²⁰₅₄₆-182°(c＝0.273，甲醇)。元素分析：C₁₂H₁₄N₂Cl₂O₅计算值：C，42.75；H，4.19；N，8.31；Cl，21.03；实测值：C，42.87；H，4.21；N，8.24；Cl，21.09。

    将母液在硅胶上色谱分离，用7-8％甲醇-氯仿洗脱，得到(1R，2S)异构体，用90％乙醇固化两次，得到(1R，2S，3R，5R)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇，为黄色粉末(1.57g，17％)，m.p.179-181℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.70(d，J＝7.1Hz，1，NH)，8.22和7.32(均为单峰，各1，2苯并咪唑CH)，5.28(d，J＝5.6Hz，1，OH)，4.77(d，J＝3.9Hz，1，OH)，4.45(t，J＝4.9Hz，1.CH₂OH)，4.1-3.9(m，3，2OCH和NCH)，3.6-3.5和3.45-3.35(均为多峰，与H₂O部分重叠，2，CH₂O)，2.45-2.25(m，1，CH)，2.2-3.9(m，1，CH)，1.35-1.25(m，1，CH)；质谱(CI)：337(M+1)；[α]²⁰₅₈₉-15.6°，[α]²⁰₅₇₈-13.2°，[α]²⁰₅₄₆-4.00°(c＝0.250，甲醇)。元素分析：C₁₂H₁₄N₂Cl₂O₃计算值：C，42.75；H，4.19；N，8.31；Cl，21.03；实测值：C，42.87；H，4.15；N，8.30；Cl，21.14。

    用8-10％甲醇-氯仿洗脱，得到白色固体(2.9g)，¹H-NMR显示其为两种异构体约1∶1的混合物。

    继续用10-20％甲醇-氯仿洗脱该柱，又得到含(1S，2R，3R，5R)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇的流分，将其从90％乙醇中固化，得到白色粉末(2.23g)，这使这种异构体的总产率达到43％。实施例20(1S，2R，3R，5R)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯

    同实施例16将(1S，4R)-[4-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-2-环戊烯-1-基]甲醇(3.75g，11.1mmol)在吡啶-乙酐中乙酰化。粗产物用2％甲醇-氯仿从硅胶柱上洗脱并用乙酸乙酯固化，得到(1S，2R，3R，5R)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯，为黄色粉末(5.13g，100％)。其NMR结果与实施例1的一致。将该样品用乙酸乙酯-己烷结晶，得到标题化合物，为黄色粉末。m.p.128-130℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)和质谱(CI)结果与实施例1的一致；[α]²⁰₅₈₉-95.8°，[α]²⁰₅₇₈-107°，[α]²⁰₅₄₆-165°(c＝0.259，甲醇)。元素分析：C₁₈H₂₀N₂Cl₂O₈计算值：C，46.67；H，4.35；N，6.05；Cl，15.31；实测值：C，46.74；H，4.36；N，5.96；Cl，15.38。实施例21(1S，2R，3R，5R)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯

    如实施例2所述外消旋样品一样，将(1S，2R，3R，5R)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(4.42g，9.97mmol)转化成标题化合物。粗产物在硅胶上色谱分离，用5％甲醇-氯仿洗脱，蒸发溶剂，得到(1S，2R，3R，5R)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯，从乙醇中得到乳白色固态泡沫状物(4.0g，90％)。¹H-NMR(DMSO-d₆)和质谱(CI)结果与实施例2所述外消旋体的一致；[α]²⁰₅₈₉+25.5°，[α]²⁰₅₇₈+26.7°，[α]²⁰₅₄₆+30.6°(c＝0.255，甲醇)。元素分析：C₁₉H₂₀N₂Cl₂O₆计算值：C，51.49；H，4.55；N，6.32；Cl，16.00；实测值：C，51.33；H，4.58；N，6.27；Cl，15.90。实施例22(1S，2R，3R，5R)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    室温下将(1S，2R，3R，5R)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(0.96g，2.17mmol)和碳酸钠(0.23Og，2.17mmol)在水(3mL)-乙醇(15mL)-甲醇(15mL)中搅拌24小时。用乙酸将pH调节至7，真空除去挥发物。剩余的固体在水(25mL)中浆化并过滤。用2∶1乙醇-甲醇重新固化，得到(1S，2R，3R，5R)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇，为白色粉末(408mg，60％)，m.p.222-225℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.49，8.09和7.96(均为单峰，各1，3苯并咪唑CH)，5.04(d，J＝7.0Hz，1，OH)，4.87(t，J＝5.1Hz，1，CH₂OH)，4.8-4.6(m，与在4.76的d重叠，J＝4.3Hz，2，NCH和OH)，4.25-4.10(m，1，OCH)，3.9-3.8(m，1，OCH)，3.6-3.45(m，2，CH₂O)，2.45-2.25(m，1，CH)，2.2-2.0(m，1，CH)，1.85-1.65(m，1，CH)；质谱(CI)：317(M+1)；[α]²⁰₅₈₉-12.2°，[α]²⁰₅₇₈-12.9°，[α]²⁰₅₄₆-14.1°(c＝0.255，甲醇)。元素分析：C₁₃H₁₄N₂Cl₂O₃计算值：C，49.23；H，4.45；N，8.83；Cl，22.36；实测值：C，49.25；H，4.47；N，8.83；Cl，22.46。实施例23(1S，2R，3R，5R)-5-(2-溴-5.6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    将(1S，2R，3R，5R)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(2.00g，4.51mmol)溶解于无水N，N-二甲基甲酰胺(9mL)中并加热至90℃。用5小时分4批加入N-溴琥珀酰亚胺(1.62g，9.02mmol)。真空蒸发挥发物，剩余物在硅胶上色谱分离，产物用30-50％乙酸乙酯-己烷洗脱，得到黄色玻璃状物质(1.00g，43％)；¹H-NMR(DMSO-d₆)结果与结构相符。室温下用碳酸钠(203mg，1.9mmol)在水(3mL)-乙醇(15mL)-甲醇(15mL)中将样品脱保护。用乙酸将pH调至7。将溶液真空蒸发至干，剩余物用水研制，得到白色粉末，将之在硅胶柱上色谱分离，用10-12％甲醇-氯仿洗脱，得到(1S，2R，3R，5R)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇，用1∶1乙醇-甲醇固化后为白色粉末(410mg，54％)，m.p.212-215℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)和质谱结果与实施例4所述外消旋体的一致；[α]²⁰₅₈₉-31.2°，[α]²⁰₅₇₈-32.3°，[α]²⁰₅₄₆-37.3°(c＝0.260，甲醇)。元素分析：C₁₃H₁₃N₂BrCl₂O₃计算值：C，39.43；H，3.31；N，7.07；全部卤素为Cl，26.86；实测值：C，39.62；H，3.37；N，7.02；全部卤素为Cl，26.75。实施例24(1S，2R，3R，5R)-5-[5，6-二氯-2-(环丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    氮气下将(1S，2R，3R，5R)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(500mg，0.958mmol)在水∶乙醇/2∶1(7.5mL)中与环丙胺(0.66mL，9.6mmol)一起回流18小时。TLC(硅胶，10％甲醇-氯仿)表明其完全转化成具有R_f较起始原料低的单斑点。加入1N氢氧化钠(0.96mL)，蒸发挥发物。剩余物在硅胶柱上进行快速色谱分离，标题化合物用10％甲醇-氯仿洗脱，为无色玻璃状物质，从水∶乙醇/2∶1(5mL)中固化，得到乳白色粉末(207mg，59％)，m.p.116-118℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ和质谱结果与实施例4所述对映体的一致；[α]²⁰₅₈₉-12.2°，[α]²⁰₅₇₈-12.5°，[α]²⁰₅₄₆-13.5°(c＝0.312，甲醇)。元素分析：C₁₆H₁₉N₃Cl₂O₃计算值：C，51.63；H，5.15；N，11.29；Cl，19.05；实测值：C，51.37；H，5.10；N，11.16；Cl，19.25。实施例25(1R，4S)-4-氨基-2-环戊烯-1-甲醇

    将(-)-(1S，4R)-4-氨基-2-环戊烯-1-羧酸(Chiroscience Ltd.，Cambridge，England；40.00g，0.315mol)的无水四氢呋喃(300mL)混合物在冰浴中搅拌，其间用1.5小时加入1M氢化铝锂的四氢呋喃液(Aldrich，485mL)，此添加过程中不允许温度高于0℃。将混合物升至室温，然后回流1小时并保持在回流温度2.5小时。让混合物冷却至室温，加入氟化钠(89.6g)并继续搅拌0.5小时。冷却(冰浴)混合物并缓慢加水(23mL)，再继续搅拌0.5小时。滤出沉淀并用40％甲醇-四氢呋喃萃取(2×300mL)。真空浓缩滤液-洗涤液，得到无色油状物，它在空气中和光亮处迅速变深，被立即使用(实施例16)。该样品在室温和0.2mmHg条件下被干燥成浅黄色油状物；¹H-NMR(DMSO-d₆)结果与实施例22所述对映体的一致；d：5.67(m，2，CH＝CH)，3.8-3.7(m，1，CHN)，3.32(d，J＝6.0Hz，被中心在3.18的D2O可交换宽峰重叠，CH₂O，OH，NH₂和溶剂中的H₂O)，2.68-2.56(m，1，H-1)，2.28-2.18(m，1，1/2CH₂)，1.08-0.98(m，1，1/2CH₂)；质谱(CI)：114(M+1)；[α]²⁰₅₈₉+55.0°，[α]²⁰₅₇₈+58.3°，[α]²⁰₅₄₆+67.4°，[α]²⁰₄₃₆+119°(c＝0.242，甲醇)。元素分析：C₆H₁₁NO·0.31H₂O计算值：C，60.69；H，9.86；N，11.80；实测值：C，61.12；H，9.79；N，11.38。实施例26(1R，4S)-[4-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-2-环戊烯-1-基]甲醇

    将实施例25得到的滤液-洗涤液浓缩并在剩余的油状物中加入叔丁醇(400mL)。该溶液用于根据实施例10的方法与1，2，4-三氯-5-硝基苯(Aldrich，71.3g，0.315mol为97％)缩合。真空蒸发挥发物后将反应混合物在硅胶柱上色谱分离，用1∶1己烷-乙酸乙酯和乙酸乙酯洗脱。粗产物重新在硅胶上进行色谱分离，用4-6％甲醇-氯仿洗脱。合并含产物的流分，蒸发溶剂后得到58g带红色的固体。将该固体从乙酸乙酯-己烷中重新固化，得到(1R，4S)-[4-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-2-环戊烯-1-基]甲醇，为黄色粉末(34.5g，36％，由(-)-(1S，4R)-4-氨基-2-环戊烯-1-羧酸)，m.p.95-97℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)和质谱(CI)结果与实施例18所述对映体的一致；[α]²⁰₅₈₉-195°，[α]²⁰₅₇₈-217°，[α]²⁰₅₄₆-326°(c＝0.350，甲醇)。元素分析：C₁₂H₁₂N₂Cl₂O₃计算值：C，47.55；H，3.99；N，9.24；Cl，23.39；实测值：C，47.56；H，4.01；N，9.25；Cl，23.30。

    继续对上述硅胶柱洗脱，又得到黄色粉末(18.0g，19％)，¹H-NMR显示其为含有约15％杂质(1R，4S)-[4-(2，5-二氯-4-硝基苯胺基)-2-环戊烯-1-基]甲醇的标题化合物。实施例27(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯和(1S，2R，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯

    如实施例16所述将(1R，4S)-[4-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-2-环戊烯-1-基]甲醇(17.00g，56.1mmol)羟基化并将三醇的混合物乙酰化。将乙酰化之后分离的粗红色油状物在硅胶上色谱分离，标题化合物的混合物用2％甲醇-氯仿洗脱。用乙酸乙酯-己烷分级结晶，分两次得到(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯，为黄色针晶(12.78g，49％)，m.p.127-128℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)和质谱(CI)结果与实施例1所述外消旋样品的和实施例55所述对映体的一致；[α]²⁰₅₈₉+106°，[α]²⁰₅₇₈+119°，[α]²⁰₅₄₆+184°(c＝0.275，甲醇)。元素分析：C₁₈H₂₀N₂Cl₂O₈计算值：C，46.67；H，4.35；N，6.05；Cl，15.31；实测值：C，46.74；H，4.40；N，6.09；Cl，15.22。

    继续将母液用乙酸乙酯-己烷分级结晶，得到(1S，2R，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯，为橙色晶体(2.45g，10％)，m.p.122-124℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)。

    蒸发合并的母液，得到另外9.50g(40％)标题化合物约1∶1的混合物(通过¹H-NMR测定)。实施例28(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯

    如实施例2所述将(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯转化成标题化合物。用甲酸处理后将粗产物在硅胶上色谱分离，用10％乙酸乙酯-己烷洗脱。蒸发含产物流分，得到(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯，由乙酸乙酯得到白色固态泡沫状物(1.85g，95％)；¹H-NMR(DMSO-d₆)和质谱(CI)结果与实施例2所述外消旋体和实施例56所述对映体的一致；[α]²⁰₅₈₉-25.5°，[α]²⁰₅₇₈-27.0°，[α]²⁰₅₄₆-31.2°(c＝0.333，甲醇)。元素分析：C₁₉H₂₀N₂Cl₂O₆·0.1EtOAc计算值：C，51.54；H，4.64；N，6.20；Cl，15.68；实测值：C，51.29；H，4.69；N，6.19；Cl，15.91。实施例29(1S，2R，3S，5S)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇和(1R，2S，3S，5S)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    室温下用碳酸钠(97mg)在1∶1∶1水-乙醇-甲醇(100mL)给约1∶1的(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯和(1S，2R，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(4，5-二氯-2-硝基苯胺基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(4.30g，9.28mmol)混合物脱乙酰化24小时。用乙酸将pH调至7，然后真空除去挥发物。剩余的固体用甲醇萃取。将甲醇滤液真空蒸发至干。剩余的固体溶解于乙醇(55mL)-水(20mL)中，用硫酸调节pH至5-6，再与铁粉(325目，99.9％，Aldrich，5.18g，93毫克当量)和硫酸铁(II)七水合物(Aldrich，98+％，1.30g，4.58毫克当量)一起回流4小时。滤出固体，将乙醇滤液-洗液浓缩成油状物。在油状物中加入原甲酸三乙酯(55mL)和甲磺酸(0.05mL)，并将所得溶液在室温搅拌18小时。真空浓缩后剩下的油重新溶解于1N盐酸(50mL)-二恶烷(5mL)。2.5小时后用1N氢氧化钠调节pH至7并真空蒸发挥发物。剩余的固体在硅胶上色谱分离，用10-12％甲醇-氯仿洗脱，得到含(1S，2R，3S，5S)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇流分，将之用乙酸乙酯-己烷结晶，分离得到白色晶体(540mg，18％)，m.p.201-202℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.42，8.07和7.92(全部单峰，各1，苯并咪唑CH)，5.1-4.8(m，与在5.02，J＝5.7Hz的双峰和在4.93，J＝3.9Hz的双峰重叠，总共3，NCH和2OH)，4.54(t，J＝4.8Hz，1，OH)，4.2-4.0(m，2，2OCH)，3.75-3.45(m，2，OCH₂)，2.4-1.9(m，3，CH₂和CH)；质谱(CI)：317(M+1)；[α]²⁰₅₈₉-61.4°，[α]²⁰₅₇₈-63.1°，[α]²⁰₅₄₆-72.9°(c＝0.350，甲醇)。元素分析：C₁₃H₁₄N₂Cl₂O₃计算值：C，49.23；H，4.45；N，8.83；Cl，22.36；实测值：C，49.20；H，4.45；N，8.78；Cl，22.37。

    继续用15-20％甲醇-氯仿从柱上洗脱，得到含标题化合物的混合物的流分，接着得到仅含(1R，2S，3S，5S)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇的流分从10％甲醇-氯仿中结晶，分离出白色晶体(605mg，21％)，m.p.221-222℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)和质谱(CI)为317(M+1)；[α]²⁰₅₈₉+14.5°，[α]²⁰₅₇₈+15.2°，[α]²⁰₅₄₆+16.9°(c＝0.290，甲醇)。元素分析：C₁₃H₁₄N₂Cl₂O₃计算值：C，49.23；H，4.45；N，8.83；Cl，22.36；实测值：C，49.29；H，4.46；N，8.87；Cl，22.26。实施例30(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯

    如实施例3所述将(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(1.40g，2.94mmol)溴化。真空除去挥发物，剩余物在硅胶上色谱分离。粗产物由20-30％己烷-乙酸乙酯洗脱出，为无色油状物。用水洗涤该油的氯仿溶液以除去杂质琥珀酰亚胺。干燥(硫酸钠)氯仿溶液并真空蒸发至干，从乙醇中得到标题化合物，为白色固态泡沫状物(760mg，50％)；¹H-NMR(DMSO-d₆)和质谱(CI)结果与实施例3所述外消旋体的一致；[α]²⁰₅₈₉+43.8°，[α]²⁰₅₇₈+45.2°，[α]²⁰₅₄₆+52.2°(c＝0.345，甲醇)。元素分析：C₁₉H₁₉N₂BrCl₂O₆·0.05EtOH计算值：C，43.74；H，3.71；N，5.34；全部卤素为Cl，20.28；实测值：C，43.74；H，3.69；N，5.35；全部卤素为Cl，20.41。实施例31(1R，2S，3S，5S)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    如实施例4所述将(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(660g，1.26mmol)脱乙酰化，用1∶1乙醇-甲醇固化后得到标题化合物，为白色粉末(415mg，83％)；m.p.213-216℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)和质谱(CI)结果与实施例4所述外消旋体的一致；[α]²⁰₅₈₉+35.9°，[α]²⁰₅₇₈+36.8°，[α]²⁰₅₄₆+42.1°(c＝0.340，甲醇)。元素分析：C₁₃H₁₃N₂BrCl₂O₃计算值：C，39.43；H，3.31；N，7.07；全部卤素为Cl，26.86；实测值：C，39.48；H，3.29；N，7.00；全部卤素为Cl，26.90。实施例32(1R，2S，3S，5S)-5-[5，6-二氯-2-(环丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    氮气下将(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(500mg，0.958mmol)在水∶乙醇/2∶1(7.5mL)中与环丙胺(新打开的安瓿，Aldrich，0.66mL，9.6mmo1)一起回流18小时。TLC(硅胶，10％甲醇-氯仿)显示它完全转化成R_f比起始原料低的单斑点。加入1N氢氧化钠(0.96mL)并蒸发挥发物。剩余物在硅胶柱进行快速色谱分离，用10％甲醇-氯仿洗脱，得到标题化合物，为无色玻璃状物质；从水∶乙醇/2∶1(5mL)中固化，得到白色粉末(170mg，48％)，m.p.219-220℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.64和7.46(均为单峰，2，芳香CH)，7.11(m，1，NH)，5.11(t，J＝4.3Hz，1，OH)，4.77(d，J＝7.0Hz，1，OH)，4.67(d，J＝3.7Hz，1，OH)，4.65-4.30(m，2，OCH和NCH)，3.85-3.75(m，1，OCH)，3.7-3.4(m，2，OCH₂)，2.85-2.70(m，1，环丙基的NCH)，2.15-1.80(m，3，环庚烷的CH₂和CH)，0.80-0.50(m，4，环丙基的2CH₂)；质谱(CI)：372(M+1)；[α]²⁰₅₈₉+13.4°，[α]²⁰₅₇₈+15.5°，[α]²⁰₅₄₆+16.9°(c＝0.277，甲醇)。[见实施例26-28和30]元素分析：C₁₆H₁₉N₃Cl₂O₃计算值：C，51.63；H，5.15；N，11.29；Cl，19.05；实测值：C，51.36；H，5.06；N，11.25；Cl，19.16。实施例33(1R，2S，3S，5S)-5-[5，6-二氯-2-(异丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    氮气下将(1R，2S，3S，5S)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(1.00g，1.92mmol)在乙醇(10mL)中与异丙胺(1.6mL，Fluka)一起回流24小时。加入第二批异丙胺(0.80mL)，继续回流4小时。蒸发挥发物，剩余物溶解于乙醇，再加入1N氢氧化钠(1.90mL)并蒸发挥发物。剩余物在硅胶柱上色谱分离，用10％甲醇-乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物，为无色玻璃状物质。浓缩乙醇溶液，得到标题化合物，为乳白色固态泡沫状物(360mg，46％)。通过用95％水-5％甲醇研制使样品固化，得到标题化合物，为白色粉末(96％)，m.p.137-138℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.60和7.39(均为单峰，2，芳香CH)，6.64(d，J＝7.4Hz，1，NH)，5.14(t，J＝4.3Hz，1，OH)，4.81(d，J＝7.3Hz，1，OH)，4.70(d，J＝3.5Hz，1，OH)，4.70-4.50(m，1，NCH)，4.50-4.30(m，1，OCH)，4.10-4.00(m，1，环丙氨基的NCH)，3.9-3.75(m，1，OCH)，3.70-3.50(m，2，OCH₂)，2.20-1.80(m，3，环庚烷的CH₂和CH)，1.24(d，J＝6.6Hz，2CH₃)；质谱(CI)：374(M+1)；[α]²⁰₅₈₉-3.72°，[α]²⁰₅₇₈-2.60°，[α]²⁰₅₄₆-2.23°，[α]²⁰₄₃₆-9.67°，[α]²⁰₃₆₅-51.7°(c＝0.269，甲醇)。[见实施例16-18和20]元素分析：C₁₆H₂₁N₃Cl₂O₃·1.3H₂O计算值：C，48.32；H，5.98；N，10.57；Cl，17.83；实测值：C，48.08；H，5.91；N，10.41；Cl，18.13。实施例34(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-(5，6-二氯-2-氨基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    将(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(750mg，1.44mmol)溶解于乙醇(10mL)。加入肼水合物(55％，0.41mL，7.2mmol)并将溶液回流2小时。蒸发挥发物，剩余的白色固体用乙醇-水重新固化，与阮内镍(氢气下预平衡)在甲氧基乙醇(20mL)中一起搅拌30分钟。滤出催化剂，滤液用氢氧化钠水溶液稍微碱化以彻底除去乙酸根基团。中和溶液并蒸发挥发物，剩余的固体从乙醇-水中重结晶，得到标题化合物，为淡粉色固体(97mg，20％)，m.p.283-284℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.61和7.30(均为单峰，2，芳香CH)，6.65(宽单峰，2，NH₂)，5.07(t，J＝4.3Hz，1，OH)，4.80(d，J＝7.0Hz，1，OH)，4.66(d，J＝3.7Hz，1，OH)，4.65-4.50(m，1，NCH)，4.45-4.30(m，1，OCH)，3.90-4.80(m，1，OCH)，3.70-3.40(两个m，2，OCH₂)，2.20-1.80(m，3，环庚烷的CH₂和CH)；质谱(CI)：332(M+1)。[见实施例1-3]元素分析：C₁₃H₁₅N₃Cl₂O₃计算值：C，47.01；H，4.55；N，12.65；Cl，21.35；实测值：C，46.72；H，4.60；N，12.46；Cl，21.08。实施例35(±)-(1R^*，2R^*，4S^*)-2-(2-环丙氨基-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-4-(羟甲基)环戊醇

    用实施例32的方法将乙酸(±)-(1R^*，2R^*，4S^*)-4-(乙酰氧基甲基)-2-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)环戊酯(500mg，1.50mmol)与环丙胺(0.73mL)反应。粗产物在硅胶上色谱分离，用5％甲醇-乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物，为无色玻璃状物质，再从乙酸乙酯-己烷中重新固化，得到白色粉末(180mg，48％)，m.p.251-253℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.54和7.45(均为单峰，2，芳香CH)，5.04(d，J＝5.1Hz，1，OH)，4.97(t，J＝4.7Hz，1，OH)，4.60-4.50和4.50-4.30(均为m，各1，NCH和OCH)，3.50(m，2，OCH₂)，2.80(m，1，CH)，2.35-2.10(m，1，CH)，2.05-1.80(m，3，环庚烷的CH₂和CH)，1.80-1.60(m，1，CH)，0.80-0.50(1m，4，环丙基的2CH₂)；质谱(CI)：356(M+1)。[见实施例5-7]元素分析：C₁₆H₁₉N₃Cl₂O₂计算值：C，53.97；H，5.34；N，11.80；Cl，19.91；实测值：C，53.72；H，5.42；N，11.52；Cl，19.64。实施例36(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(环丁氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    将(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(500mg，0.958mmol)溶解于无水乙醇(7mL)并加入环丁胺(0.41mL，4.8mmol)。将溶液在氮气下回流18小时。蒸发挥发物，剩余物在0℃的用氨半饱和的甲醇(20mL)中搅拌18小时。真空除去挥发物，剩余物从乙醇-水中结晶，得到标题化合物，为白色固体，m.p.250℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.61和7.38(均为单峰，各1，芳香CH)，7.07(d，J＝7.4Hz，1，NH)，5.15(t，J＝3.9Hz，1，OH)，4.81(d，J＝7.3Hz，1，OH)，4.71-4.45(m，与在4.71，J＝3.5Hz的d重叠，总共2，OH和NCH)，4.40-4.30(m，2，OCH和NCH)，3.82-3.80(m，1，OCH)，3.72-3.42(均为m，1每个，OCH₂)，2.32-1.67(三个m，9，4 CH₂和CH)；质谱(CI)：386(M+1)。[见实施例5-7]元素分析：C₁₇H₂₁N₃Cl₂O₃·0.15H₂O·0.05C₂H₅OH计算值：C，52.49；H，5.56；N，10.74；Cl，18.12；实测值：C，52.34；H，5.47；N，10.52；Cl，17.99。实施例37(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(1-氮杂环丁基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    将(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(500mg，0.958mmol)溶解于乙醇(7mL)。加入氮杂环丁烷(Aldrich，250mg，4.4mmol)并将溶液在氮气下回流48小时。向该冷却的溶液中加入含氨甲醇(0℃饱和的，20mL)并将该溶液再搅拌18小时。蒸发挥发物，剩余物重新溶解于乙醇(10mL)并加入1N氢氧化钠(0.96mL)。蒸发挥发物，剩余的固体用水(3mL)研制并过滤。将固体从乙腈-甲醇中重新固化，得到标题化合物，为白色粉末(146mg，41％)，m.p.221-222℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.78和7.53(均为单峰，1每个，2芳香CH)，5.05(t，J＝4.3Hz，1，OH)，4.91(d，J＝5.3Hz，1，OH)，4.59(d，J＝3.7Hz，1，OH)，4.45-4.40(m，2，OCH和NCH)，4.25-4.15(m，4，2CH₂N)，3.82-3.79(m，1，OCH)，3.66-3.43(均为m，各1，OCH₂)，2.40-2.32(m，2，CH₂)，2.03-1.95(m，3，CH₂和NCH)；质谱(CI)：372(M+1)。[见实施例8-10]元素分析：C₁₆H₁₉N₃Cl₂O₃计算值：C，51.63；H，5.14；N，11.29；Cl，19.05；实测值：C，51.45；H，5.10；N，11.27；Cl，18.96。实施例38(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-5-[5，6-二氯-2-(环丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    将(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(实施例39，1.00g，1.87mmol)，环丙胺(Aldrich，1.7mL，24mmol)和无水乙醇(10mL)在氮气下回流48小时。冷却反应液并加入1N氢氧化钠(1.2mL)。真空蒸发挥发物，剩余的油状固体在硅胶上色谱分离，用5％甲醇-乙酸乙酯洗脱，得到含白色粉末的部分(200mg)。从1∶1水-乙醇中重结晶，得到(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5R^*)-5-[5，6-二氯-2-(环丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇，为白色晶体(180mg，40％)，m.p.＞250℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.70(m，1，NH)，7.62和7.39(均为单峰，1每个，2苯并咪唑CH)，5.77(宽单峰，1，OH)，5.13(d，J＝5.3Hz，1，OH)，4.95-4.80(m，1，CHN)，4.48(t，J＝4.7Hz，1，CH₂OH)，4.2-4.0(m，2，2OCH)，3.7-4.0(m，2，OCH₂)，2.9-2.65(m，1，OCH)，2.2-1.8(m，3，CH₂和CH)；质谱(CI)：372(M+1)。[见实施例10-14]元素分析：C₁₆H₁₉N₃Cl₂O₃计算值：C，51.63；H，5.14；N，11.29；Cl，19.05；实测值：C，51.53；H，5.18；N，11.22；Cl，18.97。实施例39(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(环丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-甲基-1，2-环戊二醇A.(±)-(1S^*，2R^*，3R^*，5R^*)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    将(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(实施例2，3.00g，6.77mmol)溶解于甲醇(100mL)。加入于0℃用氨饱和的甲醇(100mL)并将溶液在室温搅拌过夜。真空蒸发挥发物，剩余的固体用水制成浆液，过滤，得到标题化合物，为褐色粉末(2.02g，94％)。B.(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5S^*)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-碘-1，2-环戊二醇

    氮气下将(±)-(1S^*，2R^*，3R^*，5R^*)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇(步骤A，2.00g，6.31mmol)溶解于无水DMF(15mL)，冷却(冰浴)，同时用20分钟滴加甲基三苯氧基碘化鏻(Aldrich，3.27g，6.94mmol)的无水DMF(15mL)溶液。继续在冰浴中搅拌30分钟，然后在室温搅拌18小时。真空蒸发挥发物，剩余物在硅胶上色谱分离，产物用2％甲醇-氯仿洗脱，蒸发溶剂后得到浅黄色粉末(750mg，28％)；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.51，8.08和7.97(全部单峰，各1，3苯并咪唑CH)，5.20(d，J＝6.7Hz，1，OH)，5.04(d，J＝4.9Hz，1，OH)，4.8-4.6(m，1，NCH)，4.3-4.2(m，1，OCH)，3.8-3.7(m，1，OCH)，3.6-3.4(m，2，CH₂I)，2.55-2.40(m，CH重叠于溶剂)，2.35-2.30(m，1，CH)，1.75-1.50(m，1，CH)。C.(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5S^*)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-甲基-1，2-环戊二基二乙酸酯

    在充有氢气(50psi)的Parr摇动器中将(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5S^*)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-碘-1，2-环戊二醇(步骤B，0.73g，1.71mmol)的乙醇(200mL)液与5％Pd/C(140mg)和三乙胺(0.24mL)-起摇动7.5小时。滤出(硅藻土)催化剂，将乙醇滤液蒸发成白色固体。在该固体中加入吡啶(15mL)和乙酐(1.3mL)，所得溶液在室温下搅拌18小时。蒸发挥发物，剩余的油状物溶解于氯仿(50mL)。用碳酸氢钠水溶液萃取氯仿溶液并干燥(硫酸钠)。蒸发氯仿，剩下标题化合物，为黄色玻璃状物质(560mg，85％)；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.61，8.15和7.97(全部单峰，各1，3苯并咪唑CH)，5.60-5.45(m，1，OCH)，5.20-4.95(m，2，OCH和NCH)，2.50-2.15(m，3，CH₂和CH)，2.09和1.95(均为单峰，各3，2OAc)，1.20(d，J＝6.5Hz，3，CHCH₃)。D.(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5S^*)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-甲基-1，2-环戊二基二乙酸酯

    将(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5S^*)-5-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-甲基-1，2-环戊二基二乙酸酯(步骤C，550mg，1.43mmol)溶解于无水四氢呋喃(15mL)。加入N-溴琥珀酰亚胺(520mg，2.92mmol)并将所得溶液剧烈回流10分钟。再加入一批N-溴琥珀酰亚胺(100mg)并继续回流5分钟。这时，TLC(硅胶板，用5％甲醇-氯仿展开)显示起始原料已经转化成R_f稍高的吸收UV的斑点。通过冷却(冰浴)猝灭反应，用氯仿(50mL)稀释。该溶液用水洗涤并干燥(硫酸钠)。蒸发后所剩黄色固体在硅胶上进行色谱分离，用5％甲醇-氯仿洗脱并在乙酸乙酯中研制，得到标题化合物，为白色粉末(460mg，68％)，m.p.235-236℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：8.38和7.97(均为单峰，各1，2苯并咪唑CH)，5.75-5.65(m，1，OCH)，5.2-5.0(m，2，OCH和NCH)，2.11(s)与2.2-2.05(m，总共6，OAc与CH₂和CH)重叠，1.95(s，3，OAc)，1.22(d，J＝6.3Hz，3，CHCH₃)；质谱(CI)：463(M+1)。E.(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(环丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-甲基-1，2-环戊二醇

    将(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5S^*)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-甲基-1，2-环戊二基二乙酸酯(步骤D，350mg，0.75mmol)和环丙胺(Aldrich，0.53mL)在甲氧基乙醇(5mL)中回流5小时。在冷却的反应混合物中加入1N氢氧化钠(0.75mL)，真空蒸发挥发物。剩余物在硅胶上色谱分离，产物用5％甲醇-氯仿洗脱，从甲醇-乙酸乙酯中重结晶，得到(±)-(1R^*，2S^*，3R^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(环丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-甲基-1，2-环戊二醇，为白色晶体(170mg，64％)，m.p.231-233℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.48和7.39(均为单峰，各1，2苯并咪唑CH)，7.10(m，1，NH)，4.83(d，J＝5.9Hz，1，OH)，4.74(d，J＝5.1Hz，1，OH)，4.5-4.3(m，2，NCH和OCH)，3.7-3.6(m，1，OCH)，2.85-2.7(m，1，CHNH)，2.1-1.8(m，2，CH₂和CH)，1.7-1.5(m，1，CH)，1.16(d，J＝5.4Hz，3，CHCH₃)，0.8-0.5(m，4，环丙基的2CH₂)；质谱(CI)：356(M+1)。[见实施例1和2]元素分析：C₁₆H₁₉N₃Cl₂O₂计算值：C，53.95；H，5.38；N，11.80；Cl，19.90；实测值：C，53.75；H，5.45；N，11.71；Cl，19.98。实施例40(1R，2S，3S，5S)-5-[2-(叔丁氨基)-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    将(1R，2S，3S，5S)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇(500mg，1.26mmol)的叔丁胺(Aldrich，98％，20mL)溶液在保持在148℃(油浴)的Parr高压气体储罐中搅拌48小时。冷却高压气体储罐，所得浅黄色溶液用含1N氢氧化钠的乙醇(1.2mL)稀释。真空蒸发挥发物，剩余物在硅胶上色谱分离，用10％甲醇-氯仿洗脱，得到标题化合物，为无色油状物。将该油溶解于无水乙醇，再浓缩成油状物。用水(3mL)研制，得到(1R，2S，3S，5S)-5-[2-(叔丁氨基)-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇，为白色粉末(303mg，61％)，m.p.：在116-150℃收缩成玻璃状物质；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：7.63和7.43(均为单峰，2，芳香CH)，6.15(s，1，NH)，5.08(t，J＝4.3Hz，1，OH)，4.85(d，J＝7.4Hz，1，OH)，4.71(d，J＝3.8Hz，1，OH)，4.7-4.5(m，1，NCH)，4.45-4.3(m，1，OCH)，3.80(m，1，OCH)，3.7-3.4(m，2，OCH₂)，2.2-1.85(m，3，环庚烷的CH₂和CH)，1.47(s，9，3CH₃)；质谱(CI)：388(M+1)；[α]²⁰₅₈₉-4.0°，[α]²⁰₅₇₈-4.3°，[α]²⁰₅₄₆-6.0°，[α]²⁰₄₃₆-22.6°，[α]²⁰₃₆₅-82.1°(c＝0.420，甲醇)。[见实施例25-28，30和31]元素分析：C₁₇H₂₃N₃Cl₂0₃·0.40H₂O计算值：C，51.63；H，6.07；N，10.62；Cl，17.93；实测值：C，51.50；H，5.99；N，10.54；Cl，17.96。实施例41(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-[2-(叔丁氨基)-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    将(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基)-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇(750mg，1.44mmol)的叔丁胺(Aldrich，98％，25mL)溶液在保持在90℃(油浴)的Parr高压气体储罐中搅拌6天。真空蒸发挥发物，剩余的固体在乙醇(30mL)中与二甲胺水液(Aldrich，40％，2mL)一起回流1小时。蒸发挥发物，剩余的固体在硅胶上色谱分离，用10％甲醇-乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物，为无色玻璃状物质。用水固化，得到(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-[2-(叔丁氨基)-5，6-二氯-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇，为白色粉末(150mg，26％)；m.p.130-132℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)结果与实施例30所述对映体的一致。[见实施例1-4]元素分析：C₁₇H₂₃N₃Cl₂O₃·0.65H₂O·0.07C₂H₅OH计算值：C，51.18；H，5.94；N，10.47；Cl，17.63；实测值：C，51.34；H，6.06；N，10.37；Cl，17.58。实施例42(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(异丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇

    氮气下将(±)-(1R^*，2S^*，3S^*，5S^*)-3-(乙酰氧基甲基)-5-(2-溴-5，6-二氯-1H-.苯并咪唑-1-基)-1，2-环戊二基二乙酸酯(750mg，1.44mmol)在乙醇中与异丙胺(1.22mL，Aldrich)一起回流18小时。加入第二批异丙胺(1.22mL)并继续回流24小时。蒸发挥发物，剩余物重新溶解于乙醇。加入1N氢氧化钠(1.44mL)并再蒸发挥发物。剩余物在硅胶柱上色谱分离，用10％甲醇-氯仿洗脱，得到标题化合物，为无色玻璃状物质。将该玻璃状物质从乙酸乙酯-己烷中结晶，得到(±)-(1R^*，2S^*，3 S^*，5S^*)-5-[5，6-二氯-2-(异丙氨基)-1H-苯并咪唑-1-基]-3-(羟甲基)-1，2-环戊二醇，为白色晶体(305mg，57％)；m.p.213-214℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)结果与实施例23所述对映体的一致。[见实施例1-4]元素分析：C₁₆H₂₁N₃Cl₂O₃计算值：C，51.35；H，5.66；N，11.23；Cl，18.95；实测值：C，51.27；H，5.69；N，11.17；Cl，18.88。