诱发日本真牡蛎产生三倍体的方法.pdf

本发明属于遗传变异工程，具体地说是一种诱发日本真牡蛎产生三倍体的方法。
    由于三倍体的不育性，把本来用于贝类生殖腺发育的糖原，用在肌肉生长上，近几年来，三倍体技术已广泛应用于水产养殖领域，其通常使用两种方法：一是物理因子诱导法，如静水压、冷刺激、热休克;二是化学因子诱导法，如细胞松驰素B、秋水仙素、咖啡因等。《海洋湖沼通报》92年第2期公开了一篇<细胞松驰素B诱导栉孔扇贝产生三倍体的研究>，该文介绍了一种用细胞松驰素B处理栉孔扇贝获得同源三倍体的方法，其处理过程是：一、选择性腺成熟栉孔扇贝作为亲体，开启贝壳取得生殖腺，剪碎其性腺，分别收集精、卵;二、精、卵混和使卵子受精，受精后10分钟用细胞松驰素B处理，通过刺激受精卵阻止第一极体或第二极体的释放，从而直接形成了三倍体;三、所产生的三倍体受精卵经孵化、附着、稚贝、养成阶段发育为成熟三倍体栉孔扇贝。采用这种诱导方式获得的三倍体为同源三倍体，即为生殖细胞自身的染色体，后代生长优势不很显著;另外，三倍体诱导率不稳定，一般在17%～50%之间;再者，要获得大量的三倍体幼苗，必须使用数量较多的化学药品，一方面大水体使用生产费用昂贵，另一方面废液对工作人员身体及环境都存在着一定影响。

    本发明的目的就在于提供一种诱发日本真牡蛎产生三倍体的方法，其生产成本低、对工作人员身体及环境影响小且三倍体为异源多倍体。

    为达到上述发明目的，本发明可通过如下措施来实现：选择性腺成熟的雌性及雄性日本真牡蛎，并分别收集其精、卵，把卵子放入经清毒处理温度在21℃±1℃海水中，在充气的条件下加入精液，在1分钟～3分钟内施入细胞松驰素B刺激受精卵20～28分钟，此时受精卵内的染色体虽然已复制，但细胞质却不能分裂，从而形成了同源四倍体，将四倍体受精卵在洁净的海水中反复洗涤后放入育苗池孵化，孵化后所得到的幼虫经附着、变态、稚贝、养成阶段发育成熟，以性腺成熟的四倍体为父本，二倍体日本真牡蛎为母本进行杂交，从而获得异源三倍体受精卵，由于三倍体的获得是依靠四倍体与二倍体杂交，也就是说只需数量较少的四倍体作为亲本即可得到数量很多的三倍体，从而减少了细胞松驰素B的用量，降低了生产成本，减轻了对环境及操作人员身体的影响。

    本发明清寒可通过如下措施来达到，细胞松驰素B施入后地浓度为0.8ppm～1.5ppm。

    本发明化学诱导药品用量小，可大幅度地降低生产成本，较少的废液对工作人员身体及环境不会造成严重的影响，四倍体的诱导率高，再者三倍体是四倍体与二倍体杂交后产生的，为异源三倍体，可表现出较强的生长优势。

    最佳实施例：日本真牡蛎是雌雄异体，外观不能分出性别，在水温20℃～22℃时性腺发育成熟，挑选壳长在12cm以上的个体，用刀启开贝壳，取出生殖腺放在海水中剪碎，再用120目筛绢网滤出杂物，把精、卵分别收集起来;将收集的卵子放入经清毒处理21℃的海水的小型水体中，在充气的条件下加入精液，2分钟后向水体中施入1ppm的细胞松驰素B，搅动均匀，25分钟后将受精卵移出，并放入洁净的海水中反复洗涤，此时的受精卵因细胞松驰B的刺激虽然染色体已复制，但细胞质不分裂，从而形成同源四倍体，四倍体率为62%，把所得到的四倍体受精卵放入育苗池中孵化，孵化所需条件是：水温20℃～23℃，溶氧含量在5ml/L以上，受精卵密度30～40粒/ml，连续充气，盐度28-32%，酸碱度7.8～8.2。按常规的育苗条件幼虫经附着、变态、稚贝、养成阶段发育成熟;然后选择性腺成熟的四倍体成贝为父本，二倍体日本真牡蛎为母本采用常规的方法进行杂交，最终获得异源三倍体。

    本发明所提供的诱发日本真牡蛎产生三倍体的方法，还可根据下列图表所示方法实现，其中施入细胞松驰素B的时间是指精子与卵子混和后的时间，处理时间是指加入细胞松驰素B后对受精卵的作用时间。