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本发明为一种使用甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)制备用于皮肤美白的组合物及该组合物的用途，其中该组合物包括:甲磺酸甲磺酸伊马替尼，还可以包括醇类、坚果油、复合多醣体、酯类，及药学上可接受之载剂、赋形剂、稀释剂、辅剂等；且该组合物系以透过抑制酪胺酸酶活性来减少细胞内黑色素含量的方式，来达到美白的功效。

1.  一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮肤美白的组合物，其特征 在于：该组合物包括甲磺酸伊马替尼。

2.  如权利要求1所述的一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮肤美 白的组合物，其特征在于：该组合物还包括：醇类、坚果油、 复合多醣体、或酯类，或药学上可接受的载剂、赋形剂、稀释 剂、或辅剂。

3.  如权利要求1或2所述的一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮 肤美白的组合物，其特征在于：该组合物系包含0.1～2％之甲磺 酸伊马替尼。

4.  如权利要求3所述的一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮肤美 白的组合物，其特征在于：所述醇类包括下列至少一者:C16-18 醇、丁二醇、戊二醇、辛二醇、丙三醇、16醇、18醇、22醇、 丙二醇。

5.  如权利要求3所述的一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮肤美 白的组合物，其特征在于：所述酯类系包括下列至少一者:橄榄 油鲸蜡醇酯、单硬脂酸甘油酯、木棉酯、IPM、IPP、三酸甘油 酯。

6.  如权利要求3所述的一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮肤美 白的组合物，其特征在于：所述复合多醣体为汉生胶。

7.  如权利要求3所述的一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮肤美 白的组合物，其特征在于：所述坚果油包括下列至少一者:阿甘 油、夏威夷核果油、酪梨油、小麦胚芽油、橄榄油。

8.  如权利要求1或2所述的一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮 肤美白的组合物的用途，其特征在于：所述组合物以美白乳、 化妆水、精华液、防晒乳、隔离霜或面膜的方式使用。

9.  如权利要求3所述的一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮肤美 白的组合物的用途，其特征在于：所述组合物以美白乳、化妆 水、精华液、防晒乳、隔离霜或面膜的方式使用。

一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮肤美白的组合物及该组合物的用途
技术领域
本发明使用涉及一种使用甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate) 制备用于皮肤美白的组合物及该组合物的用途。
背景技术
一般而言，肤色是由数种生理因素所决定，而其中之一为皮肤中 黑色素的存在量，若黑色素含量越高，则肤色将会较为黝黑。因此， 过去数十年来美白领域之研发方向大多着重在如何降低皮肤中黑色 素的含量，以藉此达成皮肤美白的功效。酪胺酸酶是黑色素生合成过 程中的一个重要酵素，因此若能抑制或减少酪胺酸酶之活性，即可降 低黑色素之合成量。细胞内具有多种酵素以及代谢途径可用以最小化 细胞所受之氧化伤害。紫外线辐射会造成蛋白质氧化、DNA之损害以 及诱使皮肤之活性氧分子的生成，因而造成老化相关之疾病甚或黑色 素(melanin)之生成。
黑色素生成自黑色素细胞(melanocyte)，且黑色素主要之功能系 为抵抗皮肤遭受紫外线辐射之伤害。然而，黑色素过量之生产以及其 于皮肤当中之含量累积会造成多种之皮肤病变，例如黑斑、老年斑、 雀斑以及其他过度色素沉淀之相关病征。酪氨酸酶是黑色素生成之过 程当中影响反应速率决定步骤的关键酵素。其中，此步骤是将左旋酪 氨酸(L-tyrosine)转换为左旋多巴(L-DOPA)，而左旋多巴可再进一步 地被氧化成邻醌(O-quinone)。因此，酪氨酸酶是用以筛选抑制黑色 素生成之抑制剂的首要标的。
近年来，许多黑色素生成之抑制剂被大量的应用于防止色素沉淀 之皮肤保养品中。令人惊讶地是，研究报导指出黑色素生成的过程当 中会产生过氧化氢以及其他之活性氧分子(reactive oxygen  species,ROS)，而这些活性氧分子会使得黑色素细胞承受强大的氧化 压力(oxidative stress)。活性氧分子(ROS)例如单态氧(singlet  oxygen)、氧分子(molecular oxygen)、过氧化氢(H₂O₂)等，其皆可起 始氧化反应并产生自由基分子。自由基是具有独立且不成对电子的原 子、分子或离子。举例言之，超氧化离子(superoxide anion)、氢氧 自由基(hydroxyl radical)以及过氧化自由基(peroxyl radical)即 为具有短周期特性及化学活性之三个常见的自由基。另一方面，活性 氧分子清除剂(ROS scavenger)以及活性氧分子生成反应之抑制剂皆 会抑制紫外线辐射诱导之黑色素生成反应，代表着活性氧分子对于黑 色素生成之调控作用扮演重要的角色。因此，许多市售美白产品皆包 含抗氧化剂例如维生素C及其衍生物，或者还原态的胱甘肽(reduced  glutathione,GSH)，以应用于抑制黑色素生成反应。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的问题，提供一种使用甲磺酸伊 马替尼(imatinib mesylate)制备用于皮肤美白的组合物及该组合物 的用途。
为达成上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种使用甲磺酸伊马替尼用于制备皮肤美白的组合物，该组合 物包括甲磺酸甲磺酸伊马替尼。
进一步，该组合物还包括：醇类、坚果油、复合多醣体、或酯类， 或药学上可接受的载剂、赋形剂、稀释剂、或辅剂。
进一步，该组合物系包含0.1～2％之甲磺酸伊马替尼。
进一步，所述醇类包括下列至少一者:C16-18醇、丁二醇、戊二 醇、辛二醇、丙三醇、16醇、18醇、22醇、丙二醇。
进一步，所述酯类系包括下列至少一者:橄榄油鲸蜡醇酯、单硬 脂酸甘油酯、木棉酯、IPM、IPP、三酸甘油酯。
进一步，所述复合多醣体为汉生胶。
进一步，所述坚果油包括下列至少一者:阿甘油、夏威夷核果油、 酪梨油、小麦胚芽油、橄榄油。
进一步，所述组合物以美白乳、化妆水、精华液、防晒乳、隔离 霜或面膜的方式使用。
进一步，所述组合物以美白乳、化妆水、精华液、防晒乳、隔离 霜或面膜的方式使用，方便使用。
采用上述技术方案，该组合物系以透过抑制酪胺酸酶活性来减少 细胞内黑色素含量的方式，来达到美白的功效。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明 的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构 成对本发明的不当限定。在附图中：
图1左旋维生素C处理后细胞外抑制酪胺酸酶活性；
图2美白乳处理后细胞外抑制酪胺酸酶活性；
图3左旋维生素C处理后细胞内黑色素含量；
图4美白乳处理后细胞内黑色素含量；
图5左旋维生素C处理后细胞内抑制酪胺酸酶活性；
图6美白乳处理后细胞内抑制酪胺酸酶活性。
具体实施方式
为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清 楚、明白，以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。 应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限 定本发明。
如图1-图6所示本发明有目的为提供一种使用甲磺酸伊马替尼 (imatinib)制备用于皮肤美白的组合物及该组合物的用途，该组合物包 括：甲磺酸伊马替尼、醇类、坚果油、复合多醣体、酯类，及药学上 可接受之载剂、赋形剂、稀释剂、辅剂等；且该组合物系透过抑制酪 胺酸酶活性来减少细胞内黑色素含量，进而达成皮肤美白的功效。
其中该组合物的甲磺酸伊马替尼含量为0.1～2％，且该组合物中 的醇类系选自下列至少一者:C16-18醇、丁二醇、戊二醇、辛二醇、 丙三醇、16醇、18醇、22醇、丙二醇；该组合物中的酯类系选自下 列至少一者:橄榄油鲸蜡醇酯(OLIVEM 1000)、单硬脂酸甘油酯 (GMS，Glycol stearate)、木棉酯、十四酸异丙酯(isopropyl myristate, IPM)、棕榈酸异丙酯(isopropyl Palmitate,IPP)、三酸甘油酯；该组合 物中的复合多醣体为汉生胶；该组合物中的坚果油系选自下列至少一 者:阿甘油、夏威夷核果油、酪梨油、小麦胚芽油、橄榄油。
该组合物的使用方式则可以美白乳、化妆水、精华液、防晒乳、 隔离霜、面膜的方式应用于欲美白之皮肤部位。
本发明实施例抑制黑色素形成的美白乳组合物，其配制成分为所 列如下A剂、B剂混和物：
A剂：ImatinibMesylate 200mg
B剂：OLIVEM1000 5g、GMS 2g、16-18醇2g、阿拉刚果油4g、
木棉
酯6g、034 4g、水56.6g、1,3-丁二醇5g、LIPONIC EG-1 5g、汉生胶0.2g、 A-47 5g、BSASM 2g、戊二醇3g、辛二醇0.2g。
使用左旋维生素C组合物作为抑制黑色素形成之正对照组 (positive control)，其配制成分为所列如下A剂、B剂混和物：
A剂：左旋维生素C 0.42g
B剂：A-01 0.03ml,nanoHA 0.02ml,水8.6ml,甘油0.3ml,1,3-丁二 醇0.4ml,
吞噬菌0.3g,symbiocell 0.3ml,PE-9010 0.05ml,辛二醇0.02ml
本发明系以下面的实施例予以示范阐明，但本发明不受下述实施 例所限制。
实施例1细胞外抑制酪胺酸脢活性分析
酪胺酸酶在黑色素形成过程中之速率限制步骤担任催化作用，是 黑色素形成最关键的一种酵素，所以如果可以有效抑制酪胺酸酶活 性，将可减少黑色素的生成，达到美白作用的目的。以往进行美白功 效之试验时，最常使用蕈菇类之酪胺酸(Mushroom Tyrosinase)进行酵 素活性评估，以酪胺酸(Tyrosine)或左旋多巴(L-Dopa)作为酵素之受 质，当酵素催化受质形成产物生成量减少时，即可以此来初步判定， 测试样品可能具备美白活性(Yeonet al.,2008)。
参考Yeonet al.之方法，于96孔盘中加入40μl测试样品(正对照 组：左旋维生素C、美白乳)、40μl酪胺酸酶(2Units，1Unit为于酵 素最大活性之下每分钟转换1微莫耳(μM)之受质的酵素量)及120μl 的5mM L-Dopa溶液后，于37℃中反应30分钟，然后测波长490nm 之吸光值；并以1％DMSO(v/v)(二甲基亚砜)作为其对照组(Yeonet  al.,2008)。
酪胺酸酶抑制率(％)＝(1－测试样品之OD₄₉₀之吸光值/空白组之 OD₄₉₀吸光值)×100％。
结果显示，所使用样品浓度越高，酪胺酸酶活性越低，也就是说 样品浓度越高，产生抑制效果越好。样品左旋维生素C浓度为31250 μg/ml、62500μg/ml、125000μg/ml时，分别具有29.05％、45.71％、 70.60％抑制酪胺酸酶作用(第1图)；而当美白乳浓度为7812.5μg/ml、 15625μg/ml、31250μg/ml时抑制率分别为2.02％、7.38％、13.93％(第 2图)。
实施例2细胞内黑色素含量分析
本发明利用不同浓度的样品，来侦测样品对B₁₆F₁₀细胞中黑色素 含量的生成是否产生影响；因黑色素经1N NaOH于60℃溶解后，在 波长405nm具有吸光值，所以可以藉此得知不同浓度的样品对黑色 素含量的生成是否具有抑制的作用。
取每孔洞5×10⁴个细胞数(800μl)的B₁₆F₁₀细胞及100nM α-MSH(alpha-melanin stimulating hormone，黑色素激素)于24孔盘中， 于37℃，5％CO₂中培养24小时后，加入800μl不同浓度的测试样 品，再于37℃，5％CO₂中培养24小时后，利用PBS(磷酸盐缓冲液) 清洗2次后，再使用Trypsin(胰蛋白酶)-EDTA分离细胞，经过每分钟 1000转之转速离心5分钟后，加入100μl 1N NaOH，并于60℃水浴 锅中作用1小时后，再将其放置室温中冷却，测波长405nm吸光值。 并以1％DMSO(v/v)作为对照组。
黑色素生成抑制率(％)＝(1－测试样品之OD₄₀₅之吸光值/空白组 之OD₄₀₅吸光值)×100％。
结果显示，所使用样品浓度越高，B₁₆F₁₀细胞内黑色素含量越低， 也就是说样品浓度越高，减少黑色素合成的效果越好。当左旋维生素 C浓度为1.2mg/ml、2mg/ml、4mg/ml，黑色素含量分别为80.54％、 79.57％、66.96％(第3图)；当美白乳浓度在1.2μg/ml、2μg/ml、4μg/ml， 黑色素含量分别为87.50％、83.33％、82.64％(第4图)。
实施例3细胞内抑制酪胺酸脢活性分析
收取B₁₆F₁₀细胞内之酪胺酸酶时，是利用冷冻解冻(Freeze-Thaw  Cycle)原理，将细胞放在-80℃中冷冻一段时间(30分钟)，使细胞内的 水分形成冰晶；再于室温中解冻一段时间(30分钟)，使冰晶在恢复 成水分，藉由冰晶形成与解冻的力量使细胞破裂，而释出细胞内的酪 胺酸酶。其数值越低，表示样品抑制酪胺酸脢酶活性能力越强。
参考Kim之方法，取每孔洞5×10⁴个细胞数(800μl)的B16F10 细胞及100nMα-MSH于24孔盘中，于37℃，5％CO₂中培养24小 时后，加入800μl不同浓度的测试样品，再于37℃，5％CO₂中培养 24小时后，利用PBS清洗2次后，再使用Trypsin-EDTA将细胞脱离， 经过每分钟1000转之转速离心5分钟后，加入100μl细胞裂解液(包 含50mM PBS、1％Triton X-100及0.1mM PMSF(甲苯基硫磺酰氟) 异丙醇溶液)，再将其冷冻于80℃中30分钟，解冻于室温中30分钟 (重复2次)，再将细胞萃取物以每分钟12000转之转速于4℃离心30 分钟；取其上清液80μl，再加入20μl L-Dopa(2mg/ml)于96孔盘 中，在37℃中反应10分钟后，测波长492nm吸光值，并持续1小 时(10分钟/次)。并以1％DMSO(v/v)作为对照组(Kim et al.,2007. Antimelanogenic and antioxidant properties of Gallic acid.Biological& pharmaceutical bulletin,30(6),1052-1055)。
细胞内酪胺酸酶活性抑制率(％)＝(1－测试样品之OD₄₉₂之吸光 值/空白组之OD₄₉₂吸光值)×100。
结果显示，所使用样品浓度越高，B₁₆F₁₀细胞内酪胺酸酶的活性 越低，也就是说样品浓度越高，产生抑制效果越好。当左旋维生素C 浓度为1.2mg/ml、2mg/ml、4mg/ml，黑色素含量分别为94.92％、 92.72％、86.09％(第5图)；当美白乳浓度在1.2μg/ml、2μg/ml、4μg/ml， 黑色素含量分别为80.54％、79.57％、66.96％(第6图)。
综合以上实施例说明，本发明提供一药物甲磺酸伊马替尼 (imatinib)为配方制成之组合物，该组合物可被细胞所吸收，并且抑制 细胞内酪胺酸酶的活性、降低细胞内黑色素生成。
基于上述功效，本发明实属保养美容之潜力美白组合物，充分符 合新颖性及进步性之法定发明专利要件，依法提出申请，恳请贵局核 准本件发明专利申请案，以励发明。
上述说明示出并描述了本发明的优选实施例，如前所述，应当理 解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的 排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明 构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本 领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在 本发明所附权利要求的保护范围内。