一种治疗肝脏疾病的药物组合物 所属技术领域
本发明涉及一种治疗肝脏疾病的药物组合物，该药物组合物的有效组分为从苦参或其它植物性中草药中提取的苦参类生物碱和从中药三七中提取的三七总皂苷。
背景技术
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，简称HBV)引起的一种世界性传染性疾病。据统计，全球携带乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的人数超过2.8亿。中国是乙型肝炎的高流行区，有40％～60％的人群受过HBV感染，10％的人群(约1.2亿人口)为慢性HBsAg携带者。据调查，中国现患慢性乙型肝炎的病人超过3000万，其中25％～40％以上发展为肝硬化或肝癌，每年国内死于乙肝后肝硬化者有40万人，受HBV慢性感染的人群罹患原发性肝细胞癌的相对危险性至少增加100倍。而对于我国的HBsAg携带者来说，死于肝病(主要是肝硬化和大部分由肝硬化发展而来的肝癌)的危险率男性为50％，女性为14％，其中肝纤维化地形成与发展是影响预后和病情转归的关键病理变化之一，也是临床慢性肝病治疗中最为复杂的疑难问题。目前治疗慢性乙型肝炎的疗法主要有：抗病毒药物疗法、免疫调控药物疗法、改善肝微循环疗法、保护疗法、中医辨证论治等。国内外近年来治疗肝炎的药物虽然有许多，但大多没有十分公认的疗效，并且疗效并不十分理想，另外治疗后病情易反复，价格还十分昂贵。迄今为止，市场上缺少抗HBV疗效确切，又副作用较小的药物。
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种以中草药有效组分为原料配伍制成的治疗肝脏疾病的药物组合物，其有效组分明确，质量可控，使用本发明的药物组合物治疗肝脏疾病起效迅速、疗效确切，使用方便。
本发明在有效成分和药理作用研究、临床观察的基础上将从苦参或其它植物性中草药中提取的苦参类生物碱和从中药三七中提取的三七总皂苷组合，发现该组合物具有优良的抗肝炎病毒、抗肝纤维化等治疗肝脏疾病的功效，从而完成了本发明。
本发明提供的一种治疗肝脏疾病的药物组合物，它是由下述重量配比的药物为原料：
三七总皂苷3～40、苦参类生物碱5～50。
即：三七总皂苷∶苦参类生物碱＝3～40∶5～50。
上述本发明中所述的苦参类生物碱可以是苦参总生物碱、山豆根总生物碱、苦豆子总生物碱、苦参碱、苦参素中的任意一种，并且所述的苦参总生物碱、山豆根总生物碱、苦豆子总生物碱都含有苦参碱、氧化苦参碱中的一种或两种。本发明要求上述三种总生物碱的含量在制备口服制剂时高于25％，最好高于50％；在制备注射剂时最好高于80％。苦参碱、苦参素(主含氧化苦参碱)则要求它们的含量高于90％，最好高于98％。
在本发明的药物组合物中，苦参总生物碱是从豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根中提取得到的总生物碱，主要为喹喏里西啶(quinolizidne)类生物碱成分，极少数为双哌啶类生物碱。总生物碱为苦参的重要活性成分，其中苦参碱和氧化苦参碱又是总碱中的主要活性成分。苦参总生物碱的提取制备工艺可参考文献(于喜水，等：苦参总碱的提取方法比较研究，中成药，1990，12(3)；3)进行提制。
苦豆子总生物碱是从豆科槐属植物苦豆子(sophora alopecuroides L)中提取得到的总生物碱，含有20种以上的生物碱。其中主要的生物碱是：苦参碱(matrine)，氧化苦参碱(oxymatrine)、槐果碱(sophocarpine)，氧化槐果碱(oxysophocarpine)，槐胺碱(sophoramine)，槐定碱(sophoridine)，莱曼碱(lehmannine)，苦豆碱(aloperine)；氧化槐定碱等。苦豆子总生物碱的提取制备工艺可参考文献(秦学功，等：苦豆子种子中生物碱的冷浸提取实验研究。中草药，2001，32(7)：604.及秦学功，等：用大孔吸附树脂吸附分离苦豆子生物碱。中国中药杂志，2002，27(6)：428.)进行提制。
山豆根总生物碱为从豆科植物越南槐Sophora tonkinensis Gapnep.的干燥根及根茎中提取得到的总生物碱，其中以苦参碱、氧化苦参碱为主，为山豆根中主要活性成分。山豆根总生物碱的提取制备工艺可参考文献(李成网，等：山豆根提取工艺的正交试验，中草药，1996，27(A09)；71.)进行提制。
三七总皂苷可采用水或醇—大孔树脂或正丁醇等常规的皂苷提取纯化方法从中药三七中提取得到。详细提取纯化工艺可参考《中药化学成分提取分离手册》(杨云主编，中国中医药出版社，1998年第一版)。还可参考文献：闫光军，等：渗漉法提取三七总皂苷的工艺研究，山东医药工业，2003，22(5)；4。在本发明的药物组合物中，要求三七总皂苷的含量高于50％，最好在90％以上。
本发明药物组合物中的原料药物—苦参总生物碱、山豆根总生物碱、苦豆子总生物碱、苦参碱、苦参素、三七总皂苷均可从市场上购买得到，纯度可达25％～99.9％。
上述用于治疗肝脏疾病的药物组合物，可以制成多种剂型，也可以与任何一种药剂学上所述的辅料混合制成多种剂型，如注射液、大输液、粉针剂、片剂、胶囊剂、软胶囊、分散片、缓释及控释制剂、滴丸、颗粒剂、合剂、微粒剂、鼻腔用喷雾剂等。在制备不同的剂型时，使用不同的辅料。如在制备口服制剂时，常用辅料如稀释剂淀粉、糊精、糖粉、甘露醇、葡萄糖、乳糖等，崩解剂如干燥淀粉、羧甲基淀粉钠等，粘合剂如PVP、淀粉浆、纤维素类等，润滑剂如硬脂酸镁、微粉硅胶等，增溶剂如泊洛沙姆、聚乙二醇类、PVP、磷脂类等等均可使用。在制备注射剂时，常用的药用辅料如甘露醇、山梨醇、聚维酮K30、葡萄糖、乳糖、吐温80、精氨酸、环糊精及其衍生物、泊洛沙姆、磷脂、丙二醇、甘油等，可用其中的一种或几种组合。
本发明的药物组合物的施用量可根据用药途径、患者年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量以药物组合物计算可以是1～60mg/kg体重，优选2～50mg/kg体重。可以一次或多次施用。
本发明药物组合物用于治疗肝炎、肝纤维化、肝硬化、肝腹水、肝癌等肝脏疾病，不但具有抗肝炎病毒作用，而且有保肝降酶、抗肝纤维化、抗肝硬化、抗肝癌等作用，起效快、疗效确切，毒副作用小。经动物试验表明，本发明的药效明显强于苦参素。
下面通过实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明。
实施例1选用下列用量的药物组合物和附加剂，制备粉针剂
三七总皂苷 55克
苦参素或苦参碱 95克
甘露醇 100克
制法：取三七总皂苷和苦参素或苦参碱，置适宜容器中，加注射用水约900ml，加入甘露醇搅拌均匀，用稀盐酸溶液调pH至6.0～7.0，再加注射用水至1000ml，加入5g针用活性炭，搅拌25分钟，滤过除炭，经予滤后，用0.22um的微孔滤膜过滤，在无菌条件下，灌装于已灭菌的西林瓶中，部分塞上丁橡胶塞，装盘，冷冻干燥。冻干结束后压塞、压盖即得。
实施例2 选用下列用量的药物组合物和附加剂，制备粉针剂
三七总皂苷 72克
苦豆子总生物碱或苦参总生物碱 100克
甘露醇 158克
葡萄糖 50克
制备方法同实施例1。
实施例3选用下列用量的药物组合物和附加剂，制备粉针剂
三七总皂苷 100克
山豆根总生物碱 50克
甘露醇 200克
制备方法同实施例1。
实施例4用下列用量的药物组合物和附加剂，制备注射液
三七总皂苷 25g
苦参碱或苦参素 100g
吐温-80 1ml
注射用水 加至1000ml
制法：取三七总皂苷、苦参碱或苦参素，用900ml注射用水溶解，再用稀盐酸溶液调pH至5.5～7.0，加1ml吐温-80，混匀，补加注射用水至1000ml，静置，用0.22μm的微孔滤膜过滤，灌封，流通蒸汽灭菌，质检，即得。
实施例5用下列用量的药物组合物和附加剂，制备注射液
三七总皂苷 52g
苦豆子总生物碱或苦参总生物碱 50g
泊洛沙姆 2g
注射用水 加至1000ml
制法同实施例4。
实施例6选用下列用量的药物组合物和附加剂，制备大输液
三七总皂苷 42克
苦参素或苦参碱 60克
葡萄糖 500克
制法：取三七总皂苷和苦参素，置适宜容器中，加注射用水约8000ml，加入葡萄糖，搅拌均匀，用稀盐酸溶液调pH至6.0～7.0，再加注射用水至10000ml，加入25g针用活性炭，搅拌25分钟，滤过除炭，经予滤后，再分别用0.45um和0.22um的滤膜滤过，在无菌条件下，滤液灌封于100ml/瓶的输液瓶中，灭菌、质检，即制得本发明大输液剂。
实施例7用下列用量的药物组合物和附加剂，制备大输液
三七总皂苷 25g
山豆根总生物碱或苦参总生物碱 75g
葡萄糖 550g
注射用水 加至10000ml
制法同实施例6。
实施例8用下列用量的药物组合物和附加剂，制备胶囊剂
三七总皂苷 110g
苦参总生物碱或山豆根总生物碱 205g
糊精 35g
羧甲基纤维素钠 25g
硬脂酸镁 5g
取三七总皂苷、苦参总生物碱或苦豆子总生物碱、糊精、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，过80目筛，用干式制粒机制粒，整粒，灌装于胶囊中，即得。
实施例9选用下列用量的药物组合物和附加剂，制备片剂
三七总皂苷 50g
苦参碱或苦参素 205g
淀粉 315g
乳糖 25g
硬脂酸镁 5g
取三七总皂苷、苦参碱或苦参素、淀粉、乳糖、混合均匀，过80目筛，用10％淀粉浆制粒，烘干，整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片、包衣，即得。
实施例10用下列用量的药物组合物和附加剂，制备软胶囊剂
三七总皂苷 110g
苦参总生物碱或苦豆子总生物碱 205g
大豆磷脂 35g
大豆油 450g
取三七总皂苷、苦参总生物碱或苦豆子总生物碱、大豆磷脂，加入到大豆油中，用胶体磨搅匀，按常规方法压制成软胶囊，即得。
实施例11用下列用量的药物组合物和附加剂，制备滴丸
三七总皂苷 50g
苦参素或苦参碱 215g
大豆磷脂 40g
聚乙二醇6000 600g
制法：将聚乙二醇6000加热80～90℃至全部熔化后，加入大豆磷脂搅拌均匀，再加入苦参素或苦参碱细粉，搅拌均匀，待全部熔化后，将料液在80～85℃保温条件下控速滴入甲基硅油冷凝液中，冷凝成丸，即得。
实施例12用下列用量的药物组合物和附加剂，制备缓释片
三七总皂苷 80g
苦参素或苦参碱 120g
羟丙基甲基纤维素(MethocelE50) 110g
羟丙基甲基纤维素(MethocelK4m) 55g
羟丙基纤维素 35g
乳糖 50g
PVP k30 适量
微粉硅胶 适量
制法：取三七总皂苷、苦参素或苦参碱、羟丙基甲基纤维素(MethocelE50)、羟丙基甲基纤维素(MethocelK4m)、羟丙基纤维素、乳糖混合均匀，用10％PVPk30乙醇溶液湿法制粒，干燥，加入微粉硅胶混匀，压片，包衣，即得。
以上实施例仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。
本发明提供的是一种新型的治疗肝脏疾病的药物组合物及其药剂，为证明其治疗肝脏疾病的效果及安全性，发明者使用按上述实施例1中提供的方法制备得到的药物组合物，进行了毒理和主要药效学试验，研究结果如下：
一、急性毒性试验
为观察本发明药物组合物的急性毒性，对小鼠进行了iv与ip两种给药途径的试验，结果表明本品iv的半数致死量(LD50)为360mg/kg，小鼠ip给药的半数致死量度(LD50)为960mg/kg。
二、主要药效学试验
1、抗肝炎病毒作用
本试验以2.2.15细胞株为模型，以HBsAg，HBeAg，HBV-DNA为观察指标，以苦参素注射液作为阳性对照药物，观察本发明药物组合物对乙肝病毒的影响。试验结果表明：本发明药物组合物及阳性对照药对2215细胞分泌的HBsAg、HBeAg均有抑制作用，能明显降低2215细胞浆核心颗粒HBV-DNA水平，抑制HBV-DNA复制。在一定浓度范围内，随着药物浓度的增加，对HBsAg、HBeAg、HBV-DNA的抑制作用增强，同一浓度下对HBeAg的抑制率高于对HBsAg的抑制率。阳性对照组对HBsAg、HBeAg的抑制率分别为41.82％、43.16％，本发明对HBsAg、HBeAg的抑制率分别达到46.73％、49.38％，明显高于阳性对照组。对培养上清液中HBV-DNA的最高抑制率为本发明为48.79％，明显优于阳性对照组的42.25％。
2、保肝降酶作用
采用CCl4造成小鼠急性肝损伤模型，同时给等剂量本发明和阳性药苦参素，测定血清丙氨酸转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清白蛋白(ALB)和血清总蛋白(TP)，计算血清白蛋白与球蛋白的比值(A/G值)。结果：与CCl4组相比，本发明和阳性药均能显著降低ALT、AST水平，但本发明组的ALT、AST水平显著低于阳性药组，各组A/G值无显著性差异。结果表明，本发明对CCl4造成的小鼠急性肝损伤降转氨酶作用强于苦参素。
3、保肝退黄作用
采用异硫氰酸-1-萘酯(ANIT)大鼠黄疸模型，以苦参素注射液作为阳性对照药物，连续ip五日，结果表明本发明能明显降低血清胆红素(TBil)的含量，多者达58.27％，明显优于阳性对照组的50.15％，病理学检查表明大鼠肝细胞和胆管上皮细胞的病变，本发明和阳性药组的细胞病变显著轻于模型组，并且本发明组的细胞病变明显轻于阳性药组。表明本发明的保肝退黄作用明显优于阳性对照药苦参素。
4、对大鼠肝纤维化的作用
复制大鼠CCl4中毒性肝纤维化模型，以苦参素作为阳性对照组，采用光镜、电镜观察组织学改变，测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白、球蛋白、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量，以反映肝细胞损伤及肝纤维化程度。结果(1)大鼠一般情况：空白对照组在处死前，无死亡，平均每只体重增加139g；模型组实验中死亡8只，至处死前，每只体重增加45g，显著低于空白对照组；苦参素组实验中死亡4只，每只体重增加66g，显著低于空白对照组，但高于模型组；本发明组在实验中无死亡，每只体重增加95g，显著高于模型组和苦参素组(死亡者均未列入统计)。(2)对实验性大鼠肝功能的影响：模型组、苦参素组、本发明组不同时相ALT含量均显著高于同期空白对照组，而以模型组最高，显著高于其它同期各组。9周时，本发明组ALT低于苦参素组。模型组不同时相白蛋白下降、球蛋白增加，与其它各组比较差异显著，而9周时本发明组球蛋白显著低于苦参素组。(3)对大鼠血清HA、LN和肝组织中Hyp含量的影响：各组大鼠不同时相血清HA、LN、肝Hyp均较空白对照组有不同程度升高，但3周时均无显著性差异，6周时苦参素组Hyp升高及本发明组3项指标升高无统计学意义，各组以9周时3项指标升高(除本发明组Hyp外)最为明显，而本发明和苦参素组在第6周、第9周时各项指标显著低于同期模型组，并且本发明组在第9周时各项指标显著低于同期苦参素组。(4)经病理学检查结果表明，本发明组肝细胞损害、肝脏脂肪变性、炎细胞浸润的程度均明显较苦参素组轻，成纤维细胞和胶原纤维增生亦明显较苦参素组少。说明本发明对肝细胞损伤有一定保护作用，能抑制肝组织中成纤维细胞及胶原纤维增生，其防治肝纤维化的作用明显优于苦参素。