甘草酸及其盐的肠溶制剂和制备方法 【技术领域】
本发明涉及甘草酸及其盐的肠溶制剂和制备方法。
背景技术
天然植物药甘草(Glycyrrhiza Uralensis)的根中主要含β构型的甘草酸和极少数的α构型的甘草酸，通过一定的反应，β构型的甘草酸可转化为α构型的甘草酸，见专利CN1381462A。目前，国内外已有一些甘草酸及其盐的制剂上市。国外以甘草酸为主药的口服片剂由日本Minophagen药厂研制的“甘思荣片”(Glycyron)，用于治疗肝炎及过敏性疾病，临床常用于慢性肝炎的巩固性治疗，即静脉给药至肝功能正常或接近正常后，改为口服治疗；以及以甘草酸单铵为主要成分的制剂复方甘草甜素片、复方甘草甜素注射液，用于慢性肝病及湿疹、皮炎、荨麻疹等的治疗。国内以甘草酸单钾为原料的甘草甜素片，由湖南长沙中药一厂生产，治疗慢性肝炎的疗效不及静脉给药的复方甘草甜素注射液(商品名强力宁)，不良反应也较多。江苏正大天晴药业股份有限公司生产和销售的甘草酸二铵注射液及胶囊(商品名甘利欣)，应用于临床已有8年，取得了较好的临床效果。
甘草酸二铵通过甘草酸两步氨化后精制而得。药理试验证明，甘草酸二铵对四氯化炭、D-氨基半乳糖及硫代乙酰胺引起的血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高，具有明显的降低作用，还能显著减轻D-氨基半乳糖对肝脏的形态损伤和改善免疫因子对肝脏形态的慢性损伤，甘草酸二铵具有较强地抗炎、保护肝细胞及改善肝功能的作用。甘草酸二铵胶囊具有服用方便、不需长期住院治疗等优点。但与注射剂相比，由于甘草酸或其盐属于高极性、亲水性大分子物质，在胃肠道内吸收较差。但甘草酸二铵与甘草酸相比，由于不形成分子聚合体(胶束)，因而口服后，甘草酸的血药浓度得到提高，一定程度改善了甘草酸消化道吸收差的特点。
磷脂为含磷酸根的脂类物质的总称，主要有卵磷脂(PC)、脑磷脂(PE)、肌醇磷脂(PI)和磷脂酸(PA)等，它们是动植物细胞中细胞膜、核膜和类质膜的基本成分，在生物体代谢中有着重要的生理功能。磷脂广泛存在于动物的脑髓、内脏、血液、乳汁、蛋黄及植物的种子中，具有来源广泛、无毒等优点。卵磷脂具有乳化、分散、助渗、润湿等特性，并对皮肤和粘膜有很强的亲和力，在药剂中用作分散剂、润湿剂、乳化剂、稳定剂、透皮促进剂、前体药物载体等。
【发明内容】
本发明的目的是提供一种甘草酸及其盐的肠溶制剂。
本发明的另一目的是提供一种甘草酸及其盐的肠溶制剂的制备方法，该方法通过在辅料中添加一定量的卵磷脂，并装入肠溶胶囊中，来促进甘草酸在肠道的吸收，提高甘草酸及其盐的生物利用度，从而增加口服甘草酸制剂的疗效，减少不良反应。
本发明的目的可以通过以下措施来达到：
一种甘草酸及其盐的肠溶制剂，其特征在于：甘草酸或其盐与卵磷脂的重量比为1∶1-20，优选1∶1-5。
根据以上所述的甘草酸及其盐的肠溶制剂，其特征在于：甘草酸包括α构型和β构型的甘草酸。甘草酸盐包括甘草酸的无机盐如铵盐、镁盐、钠盐、钾盐、锌盐等。卵磷脂包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂或氢化卵磷脂。
本发明的甘草酸及其盐的肠溶制剂，其制备方法为将甘草酸及其盐按重量比为1∶1-20比例与卵磷脂混合，加其他辅料，装入肠溶胶囊中。由于卵磷脂具有乳化、分散、助渗、润湿等特性，可促进甘草酸及其盐从肠道吸收，明显提高了甘草酸及其盐口服的生物利用度。
本发明甘草酸盐优选为甘草酸二铵。在处方中加入了卵磷脂，促进主药甘草酸二铵的吸收，且制成肠溶胶囊后能避免药物与胃酸的直接接触而部分水解或形成胶团及胶束而影响其吸收，减少不良反应。
下面通过甘草酸二铵肠溶胶囊与甘草酸二铵胶囊大鼠口服的生物利用度和小肠吸收试验的比较，来进一步说明本发明甘草酸盐肠溶胶囊的实用性。
一、大鼠口服甘草酸二铵肠溶胶囊和甘草酸二铵胶囊的生物利用度研究。
1、材料和方法：
药物：甘草酸二铵胶囊、甘草酸二铵肠溶胶囊各含活性成分甘草酸二铵50mg，由江苏正大天晴药业股份有限公司提供。
配制方法：两胶囊内容物用0.9％氯化钠溶液制成每ml含甘草酸二铵22mg的溶液，pH5.0～7.0。
动物：SD清洁级大鼠，购自浙江省医学实验动物中心。雄性大鼠178g±6g，每组大鼠6只，试验前动物禁食12h，试验期间所有动物均自由饮水。
试验主要步骤：
(1)药品与试剂：内标吲哚美辛，Sigma产品；乙酸为分析纯；无水甲醇、乙腈为HPLC级；甘草酸二铵标准品(含量99.32％)
(2)方法：取SD♂大鼠12只，随机分2组，每组6只。一组大鼠用甘草酸二铵胶囊内容物ig，给药量1.5ml/100g；另一组用甘草酸二铵肠溶胶囊内容物ig，给药量1.5ml/100g。给药后10min、30min、1hr、1.5hr、2hr、3hr、4hr、6hr、8hr、10hr、24hr尾静脉采血，分离血浆，-20℃贮存，待测。
(3)样品处理血浆样品100μl，精密加入300μl无水甲醇，涡旋均匀，20,000g×5min离心，精密移取上清液300μl，50℃水浴中氮气吹干，残渣用50μl内标甲醇液(含吲哚美辛20mg/L)溶解，进样20μl作HPLC分析。
(4)测定方法 采用高效液相色谱法测定。
A、色谱条件
色谱仪：岛津LC-9A液相色谱仪
色谱柱：ODS，4.6×150mm，5μm
流动相：甲醇∶水∶乙酸＝76∶20∶4
流速：1.0ml/min
检测波长：245nm
甘草酸二铵和内标的保留时间分别约为2.9min和4.0min，两者的分离度＞1.5，血浆中的内源性物质不干扰测定。
B、标准曲线制备
取大鼠空白血浆100μl，分别加入甘草酸二铵标准品溶液使其浓度分别为0.375、1.875、3.75、5.625、7.5mg/L，按“样品处理”项下操作，以甘草酸二铵与内标峰面积之比为应变量(Y)，甘草酸二铵浓度为变量(X)，作线性回归，回归方程为：
Y＝0.0432X-0.0153(r＝0.9996)
本法测定的线性范围为0.375～7.5mg/L。
2、试验结果
两组大鼠分别口服甘草酸二铵胶囊与其肠溶胶囊内容物后，平均血药浓度见表1。数据经3P87软件选择模型，结果符合两室模型。主要药物动力学参数计算结果见表2。
表1大鼠口服甘草酸二铵胶囊与其肠溶胶囊内容物的平均血药浓度(n＝6， x±s，mg/L) 时间(h) 胶囊 肠溶胶囊 0.1667 1.845±0.263 10.571±1.683 0.5 3.328±0.415 13.166±2.089 1 5.335±0.444 14.528±1.837 1.5 6.726±0.313 13.345±1.594 2 7.862±0.408 12.037±1.366 3 7.152±0.331 9.685±1.032 4 5.935±0.268 7.893±0.901 6 4.132±0.190 5.295±0.558 8 2.802±1.171 3.550±0.396 10 2.141±0.105 2.550±0.258 24 0.192±0.026 0.234±0.026
表2大鼠口服甘草酸二铵胶囊与其肠溶胶囊内容物后的药物动力学参数(n＝6， x±s) 参数 胶囊 肠溶胶囊 Cmax(mg/L) 7.904±0.398 14.196±1.867 Tmax(h) 1.655±0.064 0.962±0.073 K21 0.534±0.056 0.422±0.021 K10 0.185±0.006 0.211±0.003 K12 0.034±0.023 0.060±0.008 t1/2(Ka) 0.515±0.022 0.256±0.028 t1/2(α) 1.032±0.348 1.329±0.067 t1/2(β) 4.087±0.139 4.068±0.072 AUC0-T(mg/L·h) 63.307±3.269 93.826±10.616
两者AUC0-T和Cmax经双单侧t检验显示有极显著性差异(P＜0.001)。
研究结果表明，甘草酸二铵肠溶胶囊大鼠口服的生物利用度明显优于甘草酸二铵胶囊，AUC0-T约为后者的1.5倍。
二、比较甘草酸二铵肠溶胶囊内容物与甘草酸二铵胶囊内容物在小肠的吸收情况。1、材料和方法：
药物：甘草酸二铵胶囊、甘草酸二铵肠溶胶囊各含活性成分甘草酸二铵50mg，由江苏正大天晴药业股份有限公司提供。
配制方法：精密称取取除淀粉后的甘草酸二铵胶囊及其肠溶胶囊内容物用含有酚红的磷酸盐缓冲液(pH6.5)分别溶解制成每100ml含甘草酸二铵80mg的溶液。
动物：SD清洁级大鼠，购自浙江省医学实验动物中心。雄性大鼠181g±10g，每组大鼠6只，试验前动物禁食20h。
试验主要步骤：
(1)大鼠吸收试验：将禁食20小时的大鼠用戊巴比妥纳45mg/kg腹腔麻醉，背部固定，沿腹中线切开腹部，在十二指肠上端和回肠下端各伸入细玻璃管并用线扎紧，从十二指肠缓慢注入37℃生理盐水充分洗净肠管后，接通微量输液器和药液(37℃)制成循环回路，弃去10ml循环液后的药液为0时，然后在2.3ml/min流速下，按循环时间30、60、90、120min取样测定循环药液的药量变化，以酚红为体积指示剂按下式计算甘草酸二铵的含量并计算吸收率。
G＝Gt×A0/At
G：甘草酸二铵含量；Gt：甘草酸二铵在t时含量；A0：酚红在0时的吸收度；At：酚红在t时的吸收度(酚红的测定：取循环药液1ml，加入氢氧化钠液(1mol/L)3ml，摇匀后，于560nm处测定吸收度。)
(2)甘草酸二铵的含量测定
测定方法：采用紫外分光光度法测定
样品处理：甘草酸二铵对照品在80℃减压真空干燥至恒重，含量为99.32％，甘草酸胶囊内容物加稀盐酸后用正丁醇提取，减压浓缩至干，甘草酸二铵肠溶胶囊内容物用氯仿溶解除去不溶物后减压蒸干，两蒸干物在P2O5真空干燥器干燥24小时。
最大吸收波长选择：精确称取甘草酸二铵标准品溶液，用磷酸盐缓冲液制成每1ml中约含0.04mg的溶液，在190～300nm间扫描(日本岛津UV-2201)，结果在252±2nm处有最大吸收。
表4甘草酸二铵胶囊与甘草酸二铵肠溶胶囊内容物大鼠小肠累积吸收结果
时间
累积吸收值(％)
(min) n 胶囊 肠溶胶囊 P
30 6 3.22±0.4 8.53±0.5 ＜0.01
60 6 7.39±0.7 17.02±0.6 ＜0.01
90 6 11.65±0.5 19.51±0.9 ＜0.01
120 6 14.21±0.7 27.18±0.9 ＜0.01
研究结果表明：肠溶胶囊处方可以提高甘草酸二铵在大鼠小肠的吸收，在30min、60min、90min、120min时分别约为普通胶囊的2.6、2.3、1.7、1.9倍，均有显著性差异。
【具体实施方式】
有关原辅料来源和质量标准： 原辅料名称 生产厂家 质量标准 甘草酸二铵江苏正大天晴药业股份有限公司WS-019(X-015)-94大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、 氢化卵磷脂上海油脂一厂沪卫药准字(1995)第2178号-088005 淀粉山东聊城安华制药有限公司2000年版中国药典 十二烷基硫酸钠上海焱晨化工实业有限公司2000年版中国药典 乙醇南京化学试剂一厂GB679-94
下列实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。
实施例一：
组分 量(克/粒)
甘草酸二铵 0.05
大豆卵磷脂 0.05
淀粉 0.15
十二烷基硫酸钠 0.0025
乙醇 适量
实施例二：
组分 量(克/粒)
甘草酸二铵 0.05
大豆卵磷脂 0.25
磷酸氢钙 0.10
硬脂酸镁 0.0025
乙醇 适量
实施例三：
组分 量(克/粒)
甘草酸二铵 0.05
大豆卵磷脂 0.5
β-环状糊精 0.15
滑石粉 0.05
硬脂酸镁 0.001
乙醇 适量
实施例四：
组分 量(克/粒)
甘草酸二铵 0.05
大豆卵磷脂 0.75
乳糖 0.05
十二烷基硫酸钠 0.0035
乙醇 适量
实施例五：
组分 量(克/粒)
甘草酸二铵 0.05
大豆卵磷脂 1.00
淀粉 0.15
微粉硅胶 0.0035
硬脂酸镁 0.0035
乙醇 适量
实施例六：
组分 量(克/粒)
甘草酸二铵 0.025
蛋黄卵磷脂 0.125
羧甲基淀粉 0.1
聚乙二醇6000 0.005
乙醇 适量
实施例七：
组分 量(克/粒)
甘草酸二铵 0.10
氢化卵磷脂 0.10
羧甲基淀粉 0.1
聚乙二醇6000 0.005
乙醇 适量
实施例八：
组分 量(克/粒)
甘草酸铵 0.05
大豆卵磷脂 0.05
淀粉 0.15
十二烷基硫酸钠 0.0025
乙醇 适量
实施例九：
组分 量(克/粒)
甘草酸 0.05
大豆卵磷脂 0.05
淀粉 0.15
十二烷基硫酸钠 0.0025
乙醇 适量
实施例十：
组分 量(克/粒)
甘草酸钾 0.05
蛋黄卵磷脂 0.05
淀粉 0.15
十二烷基硫酸钠 0.0025
乙醇 适量
实施例十一：
组分 量(克/粒)
甘草酸镁 0.05
蛋黄卵磷脂 0.05
淀粉 0.15
十二烷基硫酸钠 0.0025
乙醇 适量
实施例十二：
组分 量(克/粒)
甘草酸钠 0.05
氢化卵磷脂 0.05
淀粉 0.15
十二烷基硫酸钠 0.0025
乙醇 适量
实施例十三：
组分 量(克/粒)
甘草酸锌 0.05
氢化卵磷脂 0.05
淀粉 0.15
十二烷基硫酸钠 0.0025
乙醇 适量
以上实施例产品的制备工艺为：
1.将原料甘草酸或其盐过60目筛，备用。
2.将卵磷脂加至适量乙醇中，加热使其回流溶解后，加入淀粉或其他辅料，搅拌混匀后，回收乙醇，干燥，粉碎，过60目筛，备用。
3.将上述原、辅料混合，加入润滑剂，置混匀机内混合30分钟后，测定中间体含量，灌装于肠溶胶囊壳中，铝塑压模，包装，即得。