抗肿瘤的人参皂苷Rg3注射剂及其制备方法 【技术领域】
本发明涉及一种抗肿瘤的稀有人参皂苷注射剂及其制备方法，进一步涉及人参皂苷Rg3注射液、冻干粉、输液制剂。
背景技术
人参具有的抗肿瘤作用早已有报道，随着对人参的深入研究，对人参成分逐渐的明确，发现一些人参皂苷具有非常好的抗肿瘤作用。在体外实验，人参皂苷Rg3能抑制癌细胞浸润和肺癌细胞转移〔韩萍国外医疗·植物药分册，1994，9(2)：89〕；人参皂甙Rg3可明显抑制Lewis肺癌的生长，其抑瘤作用部分是因为抑制了肿瘤诱导的新生血管形成(第二军医大学学报，2001，22(1)：40)。人参皂苷Rg3对胃癌细胞条件培养液诱导的VEC增殖具有抑制作用(肿瘤防治杂志，2001，8(3)：234-236)。人们发现人参皂甙Rg3具有抑制结肠癌腹膜转移(Clin ExpMetastasis，1997，15：603)，可明显降低黑色素细胞瘤的肺转移(BiolpharmBull，1995，18：1197)。
人参皂苷制剂在临床上既可用作直接杀伤癌细胞，也可配合化疗、放疗，以提高杀伤癌细胞的作用，并减轻其对机体的损害作用。人参皂苷还用于肿瘤术后机体的恢复，用于晚期癌症患者减轻症状，改善病人的一般状态和延长生命的作用。
目前，临床应用抗肿瘤的稀有人参皂苷都多为口服给药制剂，如Rg3等，由于稀有人参皂苷在人参中的含量比较低，而且有的稀有人参皂苷是通过对现有人参皂苷进人工方法制备得到的，而口服给药生物利用度非常低，造成极大的资源浪费；现有的专利文献中披露了一些稀有人参皂苷的注射剂，如，CN1182433，人参皂苷地人肠道细菌代谢物及其抗癌制剂，但是没有一篇文献具体披露其静脉注射用制剂的技术方案。
稀有人参皂苷的注射剂尤其是静脉注射制剂，药液直接注入人体组织或血管，具有吸收快、起效迅速、作用可靠，生物利用度高的特点，而人参皂苷随着糖配基个数的降低，人参皂苷的水溶性越来越差；由于稀有人参皂苷非常难溶，且在溶液中不稳定，因此将稀有人参皂苷做成注射剂，尤其是静脉注射剂，其难溶性成了难以跨越的技术屏障。
【发明内容】
本发明针对上述技术缺陷提供一种抗肿瘤的稀有人参皂苷静脉注射剂。
本发明稀有人参皂苷注射剂含有人参皂苷Rg3、注射溶剂和附加剂，其中本发明中稀有人参皂苷可以为20(R)-人参皂苷-Rg3、20(S)-人参皂苷-Rg3或20(R，S)-人参皂苷-Rg3，该人参皂苷单体或皂苷元可以为从人参植物中提取的，也可以是通过人工方法合成的，如化学合成法、细菌代谢法等；其人参皂苷Rg3在注射剂含量为0.1-50％(w/v)，其优选含量为0.2-20％(w/v)，其中本发明优选的人参皂苷Rg3可采用现有技术文献披露的提取方法或人工合成及细菌代谢方法获得。
本发明中注射溶剂为注射用水、乙醇、丙二醇、甘油、异丙醇、异丁醇和聚乙二醇中的一种、两种或两种以上的组合；附加剂为pH调节剂、稳定剂、等渗调节剂和支撑剂中的一种、两种或两种以上的组合。其中注射溶剂优选为占注射剂0.5％～99.9％(体积比)的注射用水、乙醇、丙二醇、甘油、异丙醇、异丁醇、聚乙二醇的两种或两种以上组合，本发明中注射溶剂进一步优选为注射用水、乙醇、甘油和聚乙二醇中的一种、两种或两种以上组合。
本发明中附加剂为pH调节剂、稳定剂、等渗调节剂、支撑剂中的一种、两种或两种以上的组合。
本发明中附加剂中的pH调节剂可以是如下物质中的一种或几种：磷酸及其盐、氢氧化钠、盐酸、有机胺、氢氧化钾、氢氧化钙、酒石酸及其盐、碳酸及其盐、硼酸盐类、枸橼酸及其盐、乳酸及其盐；稳定剂可以是如下物质中的一种或几种亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、EDTA及其盐、甘氨酸、半胱氨酸、枸橼酸及其盐、酒石酸及其盐、蛋氨酸；等渗调节剂可以是如下物质中的一种或几种山梨醇、果糖、氯化钠、氯化钙、氯化钾、氯化镁、硫酸铵、葡萄糖、硝酸钠、硝酸钾、硼砂、硼酸、甘油；支撑剂为甘氨酸、甘露醇、乳糖、右旋糖苷、右旋糖苷、蔗糖或氯化钠。
本发明稀有人参皂苷注射剂还可以含有增溶剂、其中增溶剂为聚乙二醇硬脂酸酯、吐温类、泊洛沙姆或聚氧乙烯蓖麻油，进一步优选为聚氧乙烯蓖麻油或泊洛沙姆(poloxamer)，其中增溶剂的含量为占注射剂体积的0.1～30％(w/v)。
本发明的有效活性成分溶解可以采用注射用水加增溶剂的方法；也可以采用复合注射溶剂方法或采用复合注射溶剂加增溶剂的方法进行溶解。
本发明中稀有人参皂苷注射剂为注射液。
本发明注射液含稀有人参皂苷、注射溶剂和PH调节剂，其中稀有人参皂苷为为20(R)-人参皂苷-Rg3、20(S)-人参皂苷-Rg3或20(R，S)-人参皂苷-Rg3；本发明注射溶剂为注射用水、乙醇、甘油、丙二醇和聚乙二醇中的一种、两种或两种以上组合；(这里与权利要求第9条不一致)进一步优选为PEG占复合溶剂体积的20-50％(体积)，乙醇占复合溶剂体积的20-50％(体积)，其余为注射用水的PEG-乙醇-水复合溶剂；PH调节剂为磷酸及其盐缓冲溶液磷酸盐、酒石酸盐、硼酸盐或稀氢氧化钠，优选为磷酸及其盐缓冲溶液。
本发明注射溶液的pH范围是4～9，优选PH范围是6-8。
本发明中稀有人参皂苷注射溶液还可以含有增溶剂，其中增溶剂为聚氧乙烯蓖麻油或泊洛沙姆(poloxamer)。
本发明中稀有人参皂苷注射液，还可以进一步还可以含有稳定剂，其中稳定剂为EDTA-2Na、酒石酸或亚硫酸氢钠；最佳为EDTA-2Na，其中稳定剂的含量为占注射剂总量的0.002～0.02％(w/v)。
本发明中稀有人参皂苷注射液制备方法可以采用的本领域常规注射液的制备方法制备。
本发明中，稀有人参皂苷注射剂可以为注射冻干粉针。当为注射冻干粉针时，其含有人参皂苷、注射溶剂和支撑剂，其中为20(R)-人参皂苷-Rg3、20(S)-人参皂苷-Rg3或20(R，S)-人参皂苷-Rg3；注射溶剂为水、乙醇、丙二醇、甘油、异丙醇、异丁醇和聚乙二醇任一种、两种或两种以上的组合；注射用水、乙醇、甘油、聚乙二醇的一种、两种或两种以上组合；支撑剂为甘氨酸、甘露醇、乳糖、右旋糖苷、右旋糖苷、蔗糖或氯化钠，进一步优选为甘露醇或甘氨酸。
本发明注射用冻干粉针剂还可以含有增溶剂和pH调节剂，其中增溶剂为聚氧乙烯蓖麻油或泊洛沙姆(poloxamer)，pH调节剂为磷酸及其盐。
本发明注射用冻干粉针制备方法可以采用常规的制备方法制备，但优选本发明冻干粉针剂的制备方法为：取稀有人参皂苷，加入注射溶剂溶解，根据需要可加入增溶剂，然后加入支撑剂、活性炭吸附、过滤、分装，采用常规冻干工艺冻干即得，其中当采用的注射溶剂中含有低沸点溶剂时，应在冻干前蒸去此低沸点溶剂。
本发明中稀有人参皂苷注射剂为输液，本发明输液含有人参皂苷、注射溶剂、等渗调节，其中为20(R)-人参皂苷-Rg3、20(S)-人参皂苷-Rg3或20(R，S)-人参皂苷-Rg3；注射溶剂为水、乙醇、丙二醇、甘油、异丙醇、异丁醇和聚乙二醇中的一种、两种或两种以上的组合；等渗调节剂为如下物质中的一种或几种山梨醇、果糖、氯化钠、氯化钙、氯化钾、氯化镁、硫酸铵、葡萄糖、硝酸钠、硝酸钾、硼砂、硼酸，优选的等渗调节剂为氯化钠或葡萄糖，其中等渗调节剂加入量可以根据具体情况适量加入。
本发明输液液还可以含有增溶剂、其中增溶剂为聚氧乙烯蓖麻油或泊洛沙姆。
本发明稀有人参皂苷注射剂，具有疗效好、生物利用度高、溶解性好，质量稳定。
【具体实施方式】
实施例1
称取0.50g 20(S)-人参皂苷-Rg3，加入50g PEG-400，使皂苷溶解；配制50g pH5.5的磷酸盐缓冲液，称取0.20g盐酸普鲁卡因、0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中；将缓冲液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均匀，加入0.01％针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤、0.22um的微孔滤膜过滤，过滤后的药液分装成2ml/支的针剂50支，分装好的注射剂可以直接压塞、压铝盖成针剂。
实施例2
称取0.50g 20(R)-人参皂苷-Rg3，加入50g PEG-400，使皂苷溶解。配制50g PH5.5的磷酸盐缓冲液，称取0.20g盐酸普鲁卡因、0.02g亚硫酸氢钠加入到上述磷酸盐缓冲液中；将缓冲液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均匀，加入0.01％针用活性炭100℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤、0.22um的微孔滤膜过滤；过滤后的药液分装成2ml/支的西林瓶中，经冻干机冻干制成冻干粉针。
实施例3
称取1.00g为20(R，S)-人参皂苷-Rg3，加入20ml乙醇使皂苷完全融解，再加入40ml甘油混合均匀，将0.20g盐酸丁卡因、0.02g的EDTA-2Na加入到40ml注射用水中，使辅料完全溶解，并将上述水溶液加入到药物溶液中，混合均匀，以0.01mol/L的氢氧化钠和稀盐酸调节pH值为5.5±1.0，加入0.1％的针用活性炭85℃保温15分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤，0.22um的微孔滤膜过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每支装量2ml。
实施例4
称取1.50g为人参皂苷-Rg3，加入20ml乙醇搅拌，使皂苷完全溶解，向上述醇溶液中加入15.00g泊洛沙姆，加热至50℃使泊洛沙姆融解，再加入0.10g苯甲醇，搅拌使溶解；以酒石酸及其盐配制pH5.5的0.9％的氯化钠溶液80ml，向氯化钠溶液中加入0.02g抗坏血酸，搅拌使完全溶解；将氯化钠溶液加入到皂苷溶液中，使混合均匀，加入0.05％针用活性炭80℃保温15分钟，用垂熔玻璃漏斗和0.22um的微孔滤膜依次过滤，滤液装100ml输液瓶制成人参皂苷-Rh2输液。
实施例5
称取1.50g为20(S)-人参皂苷-Rg3，加入20ml乙醇搅拌，使皂苷完全溶解，向上述醇溶液中加入15.00g泊洛沙姆，加热至50℃使泊洛沙姆融解，再加入0.10g苯甲醇，搅拌使溶解，以酒石酸及其盐配制pH5.5的水溶液80ml，向氯化钠溶液中加入0.02g抗坏血酸，搅拌使完全溶解，将氯化钠溶液加入到皂苷溶液中，使混合均匀，加入0.05％针用活性炭80℃保温15分钟，用垂熔玻璃漏斗和0.22um的微孔滤膜依次过滤，滤液分装至7ml西林瓶中，可制成注射液。
实施例6
称取1.00g为20(R)-人参皂苷-Rg3，用适量无水乙醇溶解，加入5.00g聚氧乙烯蓖麻油酸酯，使完全溶解，加葡萄糖注射液稀释至100ml，加入0.02g蛋氨酸溶解；加入0.05％针用活性炭80℃保温15分钟，用垂熔玻璃漏斗和0.22um的微孔滤膜依次过滤，滤液装100ml输液瓶制成人参皂苷-Rh2输液。
实施例7
称取1.00g为20(R，S)-人参皂苷-Rg3，用适量无水乙醇溶解，加入5.00g聚氧乙烯蓖麻油酸酯，使完全溶解；60度减压干燥除去乙醇，加葡萄糖注射液稀释至100ml，加入0.02g蛋氨酸溶解、4％甘露醇、之后加入0.05％针用活性炭80℃保温15分钟，用垂熔玻璃漏斗和0.22um的微孔滤膜依次过滤；分装，冻干制成冻干粉针。
实施例8
称取1.00g为20(R)-人参皂苷-Rg3，用适量无水乙醇溶解，加入8.00g聚乙二醇1000单月硅酸酯，使完全溶解，加入0.9％氯化钠注射液并稀释至100ml，加入0.02g苷氨酸溶解，加入0.05％针用活性炭80℃保温15分钟，用垂熔玻璃漏斗和0.22um的微孔滤膜依次过滤，滤液装100ml输液瓶制成人参皂苷-Re输液；滤液也可以分装至7ml西林瓶中，制成2ml/支的针剂。
实施例9
称取1.00g为20(S)-人参皂苷-Rg3，用适量无水乙醇溶解，加入8.00g聚乙二醇1000单月硅酸酯，使完全溶解，60度减压干燥除去乙醇，加入0.9％氯化钠注射液并稀释至100ml，加入0.02g苷氨酸溶解、加入4％甘露醇，加入0.05％针用活性炭80℃保温15分钟，用垂熔玻璃漏斗和0.22um的微孔滤膜依次过滤，滤液、分装、冻干制成含有人参皂苷Re 20mg/支的冻干粉针。
实施例10
称取0.80g为20(R，S)-人参皂苷-Rg3，加入30ml乙醇使皂苷完全融解，再加入30ml异丙醇混合均匀，将0.10g盐酸甲派卡因，0.02g的焦亚硫酸钠加入到40ml注射用水中，使完全溶解，并将上述水溶液加入到药物溶液中，混合均匀，以10％的三乙醇胺和碳酸氢钠调节pH值为5.5±1.0，加入0.1％的针用活性炭85度保温15分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤，0.22um的微孔滤膜过滤，滤液分装于7ml西林瓶中，每支装量2ml。
实施例11
称取1.00g 20(R)-人参皂苷-Rg3，加入20ml正丁醇和30ml的丙二醇使皂苷完全融解，将0.15g盐酸丁卡因、0.02g的枸橼酸加入到40ml注射用水中，使完全溶解，并将上述水溶液加入到药物溶液中，混合均匀；以硼砂和硼酸调节pH值为5.5±1.0；加入0.1％的针用活性炭85℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤，0.22um的微孔滤膜过滤；滤液分装于7ml西林瓶中，每支装量2ml。