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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201310615276.6(22)申请日 2013.11.28CGMCCNo：7343 2013.03.21C12N 1/20(2006.01)A01N 63/00(2006.01)A01P 3/00(2006.01)C12R 1/01(2006.01)(71)申请人辽宁省农业科学院地址 110161 辽宁省沈阳市沈河区东陵路84号(72)发明人刘长远 梁春浩 王辉 关天舒马晓飞 于舒怡 刘丽 赵达黄玉茜 李柏宏(74)专利代理机构沈阳亚泰专利商标代理有限公司 21107代理人韩辉(54) 发明名称一种防治辣椒疫病的多粘类芽孢杆菌XD6。
2、菌株及其生防菌剂(57) 摘要一种防治辣椒疫病的多粘类芽孢杆菌XD6菌株及其生防菌剂，其特点是：该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号：CGMCCNo：7343；将可溶性淀粉为0.1100克/升，酵母膏为0.130克/升，NaCl为120克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为100500克/升，发酵温度1534，接种量0.110克/升，pH值310；多粘类芽孢杆菌XD6菌株种子量按每平方厘米0.315个菌落数（cfu/cm2）；转速100300转/分钟，振荡发酵培养5696小时即成生防菌剂。本发明可避免了辣椒植株产生抗药性，并可提高辣椒果实的品质。(83)生物。
3、保藏信息(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书5页(10)申请公布号 CN 104450548 A(43)申请公布日 2015.03.25CN 104450548 A1/1页21.一种防治辣椒疫病的多粘类芽孢杆菌XD6菌株，从土壤中分离筛选得到，其特征在于该多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）XD6菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心保藏，保藏时间为2013年3月21日，保藏编号为CGMCC No：7343 。2.一种能防治由疫霉病菌引起辣椒土传病害的生防菌剂，采用权利要求1所述多粘类芽孢杆。
4、菌XD6菌株制备，其特征在于将可溶性淀粉为0.1100克/升，酵母膏为0.130克/升，NaCl为120克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为100500克/升，发酵温度1534，接种量0.110克/升，pH值310；多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) XD6菌株种子量按每平方厘米0.315个菌落数（cfu/cm2）；转速100300转/分钟，振荡发酵培养5696小时即成。3.根据权利要求2所述的一种能防治由疫霉病菌引起辣椒土传病害的生防菌剂，其特征在于优选的XD6生防菌剂为：可溶性淀粉为25克/升，酵母膏为10克/升，NaCl为5克/升，其余为水，配成母液；。
5、装液量为240克/升，将多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) XD6菌株种子培养液接种量1.5克/升接入母液中，发酵温度30，pH8；多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) XD6菌株种子量按每平方厘米7个菌落数（cfu/cm2）；转速130转/分钟，振荡发酵培养72小时即成。4.根据权利要求2所述的一种能防治由疫霉病菌引起辣椒土传病害的生防菌剂，其特征在于优选的XD6生防菌剂为：可溶性淀粉为25克/升，酵母膏为10克/升，NaCl为克/升，其余为水，配成母液，装液量为240克/升，将多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa。
6、) XD6菌株种子培养液接种量1.5克/升接入母液中，发酵温度30，pH8；多粘类芽孢杆菌XD6菌株种子量按每平方厘米7个菌落数（cfu/cm2）；转速130转/分钟，振荡发酵培养72小时即成。5.根据权利要求2所述的一种能防治由疫霉病菌引起辣椒土传病害的生防菌剂，其特征在于优选的XD6生防菌剂为：可溶性淀粉为100克/升，酵母膏为30克/升，NaCl为20克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为500克/升，发酵温度34，接种量10克/升，pH值10；多粘类芽孢杆菌XD6菌株种子量按每平方厘米15个菌落数（cfu/cm2）；转速300转/分钟，振荡发酵培养96小时即成。权 利 要 求 书。
7、CN 104450548 A1/5页3一种防治辣椒疫病的多粘类芽孢杆菌 XD6 菌株及其生防菌剂 技术领域0001 本发明涉及自主筛选的一种有益微生物及其制成的生防菌剂，特别是涉及一种能防治由疫霉病菌(Phytophthora capsici)引起辣椒土传病害的防治辣椒疫病的多粘类芽孢杆菌XD6菌株及其生防菌剂，属于生物制剂技术领域。背景技术0002 辣椒疫病（Phytophthora capsici）是辣椒生产上的一种毁灭性病害，不管在露地栽培还是设施栽培辣椒疫病均普遍发生。在该病1918年在美国新墨西哥洲被首次发现，我国发现是在20世纪50年代的江苏省境内，目前在我国辣椒主产区发生较为严重。
8、。该病可导致辣椒根部变黑萎蔫坏死，后期大面积死秧，可造成严重的产量损失，轻者减产 20左右，重者绝收，其危害程度有逐年加重及扩大的趋势。目前有关该病的防治主要采用化学药剂防治，然而过度用药不可避免地导致农药残留、病原菌抗药性以及环境污染等问题，而且该病害多始发于辣椒根部，当地上部分显症后，再采用化学方法难以达到理想的防效，因此严重威胁我国设施辣椒辣椒生产的可持续发展。0003 生物防治是指利用有益微生物杀死或降低病原生物的数量以控制植物病害发生、发展的一种防控措施。土壤为微生物的生存提供了良好的环境，大量具有相互拮抗作用的微生物生存在土壤中。植物与微生物之间存在着密切的相互作用关系，拮抗微生物。
9、被筛选出来接种后，能在植株根表面很好的定殖能力。因此，从植物根表面或根圈土壤中筛选生防菌株已经成为生防菌株筛选的研究重点(Van Peer等，1991)。利用生防菌防治植物土传病害的作用方式各不相同，其所涉及的影响因素也很多。目前比较清楚的主要有生态位点竞争、抗生作用、重寄生以及诱导系统抗性（ISR）等几个方面。以上几种作用并不相互排斥，往往是起到协同作用。有关植物病害生物防治的科学记载最早开始于1926年Sanford报道土壤中某些微生物对土传病原菌具有抑制拮抗作用，生物防治优于化学防治，不污染环境，不产生抗性，对人畜安全，能参与调控生态环境，保持生态平衡，起到长效的作用。为了适应绿色农业的。
10、发展需要，人们越来越重视对生物防治的研究，已经成为防治土传病害的研究热点。Jubina（1998）等从印度不同黑辣椒产区分离筛选根际生防细菌，其中8 个可减少辣椒疫霉病菌孢子的产生；Knnaiht（2003）等从苗期黑椒根际土壤中分离出64株生防菌株，平板试验表明11株对辣椒疫病有抑制作用，温室盆栽试验表明PN-026具有很好的防治作用。我国最早使用微生态制剂乳酶生来治疗肠道疾患。80年代初大连医科大学康白教授首先研制成功促菌生（蜡杆芽胞杆菌）以来，此后各种活菌微生态制剂相继研制成功，燕嗣皇等（1999）研究了哈茨木霉（Trichoderma harzianum）菌糠制剂对辣椒疫病的防制效果，。
11、盆栽试验防效和田间试验防效为80.0%以上；鲍增海等（2004）报道了粘帚霉（Gliochadliumspp.）SHW-3-1在平板内对峙培养对辣椒疫病具有很强的拮抗作用，可使辣椒疫霉病菌菌丝发生弯曲、变细等变化，抑菌圈直径达26mm。近年来生防菌剂防治植物病害研究已成为热点，在辣椒生产中辣椒疫病防治急需生防菌剂，应用前景广阔。说 明 书CN 104450548 A2/5页4发明内容0004 对上述问题，自主从土壤中分离筛选得到微生物XD6菌株，该菌株经鉴定为多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa），并提供一种采用多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyx。
12、a）XD6菌株制备用于预防和治疗由辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)引起辣椒土传病害的XD6生防菌剂。0005 本发明给出的这种对辣椒疫病菌具有较好的防治作用的生防菌株，其特点是从土壤中分离筛选得到微生物XD6菌株。0006 微生物(株)：多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）XD6。0007 保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心。0008 保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。0009 保藏时间：2013年3月21日。0010 保藏编号：CGMCC No：7343。0011 XD6菌株为多粘类芽孢杆菌（Paenibaci。
13、llus polymyxa），经盆栽及田间试验结果表明，该菌株对辣椒疫病菌具有较好的防治作用，且作用稳定、持效期长。在盆栽防治辣椒疫病试验中，本发明的生防菌剂防治效果达到了77.86%，在田间试验中，防治效果为75.61%，高于化学药剂80%代森锰锌可湿性粉剂的防治效果。本发明为辣椒疫病的生物防治提供新的材料与途径，具有广阔的开发与应用前景。0012 本发明采用如下技术方案：这种防治辣椒疫病的多粘类芽孢杆菌XD6生防菌剂，其特点是：将可溶性淀粉为0.1100克/升，酵母膏为0.130克/升，NaCl为120克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为100500克/升，发酵温度1534，接种量。
14、0.110克/升，pH值310；多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) XD6菌株种子量按每平方厘米0.315个菌落数（cfu/cm2）；转速100300转/分钟，振荡发酵培养5696小时即成。0013 为更好地实现本发明的目的，优选的防治辣椒疫病的多粘类芽孢杆菌XD6生防菌剂为：可溶性淀粉为25克/升，酵母膏为10克/升，NaCl为5克/升，其余为水，配成母液；装液量为240克/升，将多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) XD6菌株种子培养液接种量1.5克/升接入母液中，发酵温度30，pH8；多粘类芽孢杆菌XD6菌株种子量按每平方厘米7个菌落。
15、数（cfu/cm2）；转速130转/分钟，振荡发酵培养72小时即成。0014 与现有技术相比，本发明的XD6生防菌剂的有益效果。0015 本发明的XD6生防菌剂对辣椒疫病具有较好的防治效果，室内平板对峙试验表明抑菌带宽度可达14mm；在人工大量接种疫病菌条件下，盆栽试验结果表明，施用XD6生防菌剂后对辣椒疫病的防效为68.2583.37，比甲霜灵300mg/L防效稍低，但显著高于80代森锰锌可湿性粉剂300mg/L。田间试验防治效果看出XD6生防菌剂对辣椒疫病防治效果为70.4280.29，明显高于80代森锰锌可湿性粉剂300mg/L。XD6菌株是从健康辣椒植株根际土壤中筛选分离获得，因此对植。
16、物及人、畜安全，并且在土壤中具有较好的生长与繁殖能力，该菌剂可通过改变土壤微生态区系及土壤酶活性，从而改善土壤微生态环境，调节微生态平衡，且避免了辣椒植株产生抗药性，安全可靠，并可提高辣椒果实的品质，应用前景广阔。说 明 书CN 104450548 A3/5页5具体实施方式0016 实施例1。0017 1. 种子培养液的制备。0018 多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) XD6菌株，由NA培养基活化培养，NA培养基成分: 牛肉膏3g、蛋白胨5g、葡萄糖2.5g，氯化钠5g，琼脂18g、蒸馏水1000ml，pH 7.0，在28培养箱中活化24 h后，用接种针接种于10。
17、0mL NB培养基的250mL三角瓶中，NB培养成分: 牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠 5g，蒸馏水1000mL，pH 7.0，28 120rpm振荡培养24h，此时培养液为种子培养液。0019 2. XD6生防菌剂A配比的制备。0020 本发明的XD6生防菌剂A为将可溶性淀粉为0.1克/升，酵母膏为0.1克/升，NaCl为1克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为100克/升，发酵温度15，多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) XD6菌株种子培养液接种量0.1克/升，pH值3；多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) XD6菌株种子量按每。
18、平方厘米0.3个菌落数（cfu/cm2）；转速100转/分钟，振荡发酵培养56小时即成。0021 3. XD6生防菌剂B配比的制备。0022 本发明的XD6生防菌剂为可溶性淀粉为25克/升，酵母膏为10克/升，NaCl为克/升，其余为水，配成母液，装液量为240克/升，将多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) XD6菌株种子培养液接种量1.5克/升接入母液中，发酵温度30，pH8；多粘类芽孢杆菌XD6菌株种子量按每平方厘米7个菌落数（cfu/cm2）；转速130转/分钟，振荡发酵培养72小时即成。0023 4. XD6生防菌剂C配比的制备。0024 本发明的XD6生防菌。
19、剂C为将可溶性淀粉为100克/升，酵母膏为30克/升，NaCl为20克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为500克/升，发酵温度34，多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) XD6菌株种子培养液接种量10克/升，pH值10；多粘类芽孢杆菌XD6菌株种子量按每平方厘米15个菌落数（cfu/cm2）；转速300转/分钟，振荡发酵培养96小时即成。0025 将制备的生防菌剂进行盆栽和田间防效试验，每个配比（A、B和C）设6个处理：XD6生防菌剂100倍，XD6生防菌剂300倍，XD6生防菌剂600倍，25甲霜灵可湿性粉剂300mg/L，80代森锰锌可湿性粉剂300mg/。
20、L，CK（清水）。每个处理辣椒苗60株，3次重复。盆栽试验是将培养好的XD6生防菌剂和化学药剂提前施植株根部土壤中，24h小时将辣椒疫霉病菌接种辣椒植株根部。接种12天后调查辣椒发病情况，调查病株数，计算发病率和防治效果。田间试验选择在往年设施辣椒生产疫病发生较重的地块进行。0026 （1）盆栽防效试验结果分析。0027 XD6生防菌剂A配比盆栽防效试验结果表明（表1）：XD6生防菌剂对辣椒疫病具有较好的防治效果，其防效为68.8578.00，其中XD6生防菌剂100倍防效最高；25甲霜灵可湿性粉剂300mg/L防效为83.14，80代森锰锌可湿性粉剂300mg/L的防效为69.37。在=0.。
21、05水平上，XD6生防菌剂100倍、300倍间无显著差异，XD6生防菌剂300倍、600倍、80代森锰锌可湿性粉剂300mg/L间无显著差异。说 明 书CN 104450548 A4/5页60028 表1 XD6生防菌剂A配比防治辣椒疫病盆栽防效分析。 处理浓度发病率（%）防治效果（%）XD6生防菌剂100倍19.56 78.00bXD6生防菌剂300倍22.56 74.62bcXD6生防菌剂600倍27.69 68.85c25甲霜灵WP 300mg/L 15.00 83.14a80代森锰锌WP 300mg/L 27.22 69.37cCK清水88.89 0029 XD6生防菌剂B配比盆栽防效。
22、试验结果表明（表2）：XD6生防菌剂对辣椒疫病具有较好的防治效果，其防效为74.3881.26，其中XD6生防菌剂100倍防效最高；25甲霜灵可湿性粉剂300mg/L防效为83.14，80代森锰锌可湿性粉剂300mg/L的防效为69.37。在=0.05水平上，XD6生防菌剂100倍、300倍、600倍间有显著差异，均显著高于80代森锰锌可湿性粉剂300mg/L的防效，XD6生防菌剂100倍与25甲霜灵300mg/L无显著差异。0030 表2 XD6生防菌剂防治辣椒疫病盆栽防效分析。 处理浓度发病率（%）防治效果（%）XD6生防菌剂100倍16.67 81.26aXD6生防菌剂300倍18.89。
23、 78.76bXD6生防菌剂600倍27.78 74.38c25甲霜灵WP 300mg/L 15.00 83.14a80代森锰锌WP 300mg/L 27.22 69.37dCK清水88.89 0031 XD6生防菌剂C配比盆栽防效试验结果表明（表3）：XD6生防菌剂对辣椒疫病具有较好的防治效果，其防效为79.4083.37，其中XD6生防菌剂100倍防效最高；25甲霜灵可湿性粉剂300mg/L防效为83.14，80代森锰锌可湿性粉剂300mg/L的防效为69.37。在=0.05水平上，XD6生防菌剂100倍、300倍与25甲霜灵300mg/L无显著差异。0032 表3 XD6生防菌剂C配比防。
24、治辣椒疫病盆栽防效分析。 处理浓度发病率（%）防治效果（%）XD6生防菌剂100倍14.78 83.37aXD6生防菌剂300倍16.49 81.45abXD6生防菌剂600倍18.31 79.40b25甲霜灵WP 300mg/L 15.00 83.14a80代森锰锌WP 300mg/L 27.22 69.37cCK清水88.89 0033 （2）田间防效试验结果分析。0034 XD6生防菌剂A配比田间防效试验表明（表4）：XD6生防菌剂对辣椒疫病具有较好的防治效果，其防效为70.4274.32，其中XD6生防菌剂100倍防效最高；25甲霜灵可湿性粉剂300mg/L防效为81.67，80代森锰。
25、锌可湿性粉剂300mg/L的防效为66.67。在=0.05水平上，XD6生防菌剂100倍、300倍、600倍间无显著差异。0035 表4 XD6生防菌剂A配比田间试验平均防病效果。 处理浓度发病率（%）防治效果（%）XD6生防菌剂100倍8.56 74.32bXD6生防菌剂300倍8.76 73.72bXD6生防菌剂600倍9.86 70.42bc25甲霜灵WP 300mg/L 6.11 81.67a说 明 书CN 104450548 A5/5页780代森锰锌WP 300mg/L 11.11 66.67cCK清水33.33 0036 XD6生防菌剂B配比田间防效试验表明（表5）：XD6生防菌剂。
26、对辣椒疫病具有较好的防治效果，其防效为73.3378.33，其中XD6生防菌剂100倍防效最高；25甲霜灵可湿性粉剂300mg/L防效为81.67，80代森锰锌可湿性粉剂300mg/L的防效为66.67。在=0.05水平上，XD6生防菌剂100倍、300倍、600倍间无显著差异，均显著高于80代森锰锌可湿性粉剂300mg/L的防效，XD6生防菌剂100倍、300倍与25甲霜灵可湿性粉剂300mg/L无显著差异。0037 表5 XD6生防菌剂B配比田间试验平均防病效果。 处理浓度发病率（%）防治效果（%）XD6生防菌剂100倍7.22 78.33abXD6生防菌剂300倍7.78 76.67ab。
27、XD6生防菌剂600倍8.89 73.33b25甲霜灵WP 300mg/L 6.11 81.67a80代森锰锌WP 300mg/L 11.11 66.67cCK清水33.33 0038 XD6生防菌剂C配比田间防效试验表明（表6）：XD6生防菌剂对辣椒疫病具有较好的防治效果，其防效为74.3280.29，其中XD6生防菌剂100倍防效最高；25甲霜灵可湿性粉剂300mg/L防效为81.67，80代森锰锌可湿性粉剂300mg/L的防效为66.67。在=0.05水平上，除了XD6生防菌剂100倍与25甲霜灵可湿性粉剂300mg/L无显著差异外，其他处理间均无显著差异。0039 表6 XD6生防菌剂C配比田间试验平均防病效果 处理浓度发病率（%）防治效果（%）XD6生防菌剂100倍6.57 80.29aXD6生防菌剂300倍7.16 78.52bXD6生防菌剂600倍 8.56 74.32c25甲霜灵WP 300mg/L 6.11 81.67a80代森锰锌WP 300mg/L 11.11 66.67dCK清水33.33 说 明 书CN 104450548 A。