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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410759454.7(22)申请日 2014.12.11C12P 19/14(2006.01)C12P 19/02(2006.01)C12R 1/01(2006.01)(71)申请人 中国科学院过程工程研究所地址 100190 北京市海淀区中关村北二条 1号(72)发明人 韩业君 彭小伟 米朔甫(54) 发明名称高温木质纤维素酶协同酶解制备可发酵糖的方法(57) 摘要木质纤维素原料酶解成本高是实现其生物转化的主要障碍，极端嗜热菌有独特的木质纤维素酶系，对天然木质纤维素原料有强降解作用。本发明以木聚糖、秸秆等为底物诱导极端嗜热菌产生。
2、木质纤维素酶系，提取胞内和胞外酶具有完备的半纤维素酶和纤维素酶系，能直接降解秸秆等原料，用胞内酶和胞外酶按一定比例混合后与商业化的纤维素酶协同酶解，半纤维素和纤维素的酶解率达到 80以上。本发明所提供的酶解方法可直接酶解天然木质纤维素原料，免去生物质预处理步骤，降低综合生产成本以，避免了预处理过程产生的抑制物对对后续生物转化的不利影响，清洁环保，没有糖损失，具有广阔的应用前景。(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书6页(10)申请公布号 CN 104450829 A(43)申请公布日 2015.03.25CN 104450829 A。
3、1/1 页21.一种高温木质纤维素酶协同酶解制备可发酵糖的方法，包括以下步骤 ：1) 以 0.1-2的木质纤维素原料为碳源，60-90下利用极端嗜热菌发酵 20-72h ；2) 发酵结束后离心，分离细胞和上清液，细胞 pH5.0-7.6 的缓冲液悬浮，经超声破壁后，离心去除细胞壁，上清液即为胞内木质纤维素酶，发酵上清液用饱和度为 70-80硫酸铵溶液沉淀蛋白，离心去除上清液后，用 pH5.0-7.6 的缓冲液溶解蛋白，吸入透析袋内在pH5.0-7.6 的缓冲液透析过夜，透析完成后用聚乙二醇在透析袋外吸附浓缩蛋白，蛋白浓度达到 0.5-2mg/ml，收集蛋白溶液即为胞外酶 ；3) 用步骤 2) 。
4、获得的胞内和胞外木质纤维素酶与商业化的纤维素酶协同酶解木质纤维素原料制备可发酵糖，具体酶解方法包括 ：用胞内酶、胞外酶单独或胞内酶与胞外酶按照1:100-100:1 的比例混合在 60-85下酶解天然木质纤维素原料 24-72h 后，再加入商业纤维素酶制剂在 50-55下酶解 48-72h，得到可发酵糖 ；用胞内酶、胞外酶单独或胞内酶与胞外酶按照 1:100-100:1 的比例混合再与商业纤维素酶制剂混合在 50-55下酶解经过预处理的木质纤维素原料 48-96h 后，得到可发酵糖。2.按权利要求1所述的方法，所述的极端嗜热菌为热解纤维素菌属Caldicellulosiruptor 菌种。3.。
5、按权利要求 1 所述的方法，所述的商业化纤维素酶制剂包括所有在市场上能购买到纤维素酶制剂。4.按权利要求 1 所述的方法，所述的预处理过的木质纤维素原料是指用酸、碱、汽爆、离子液体或水热处理过的木质纤维素原料。5.按权利要求 1 所述的方法，所述的可发酵糖包括葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖。权 利 要 求 书CN 104450829 A1/6 页3高温木质纤维素酶协同酶解制备可发酵糖的方法技术领域0001 本发明属于生物质高效转化领域，特别涉及一种高温木质纤维素酶协同酶解制备可发酵糖的方法。背景技术 ：0002 利用木质纤维素原料替代化石资源生产生物能源和化学品，是实现人类社会可持续发。
6、展的需要。然而 , 其生物转化受到纤维素水解困难的限制，这是因为秸秆的主要成分( 纤维素、半纤维素和木质素 ) 紧紧地相拥在一起，形成木质素和碳水化合物复合体，是抗微生物降解的屏障。因此，木质纤维素转化为可发酵糖，是利用可再生资源代替化石燃料满足日益增长的能源需求的一个重大挑战。酶法水解是最常见的纤维素和半纤维素降解成可发酵糖如葡萄糖和木糖的方法。目前，酶解过程的高成本是限制生物燃料和生物化学品工业化生产的主要障碍。寻找高效纤维素酶和半纤维素酶制剂同时开发高效的酶解方式是克服这一障碍的主要手段，已成为全球研究的热点之一。0003 许多极端嗜热菌能够利用各种碳水化合物相关的木质纤维素原料转化为生。
7、物能源。这些极端嗜热细菌产生的新颖而独特的酶可能会给生物燃料和化学品的产生带来新的机会。其中 , 热解纤维素菌属 (Caldicellulosiruptor) 是迄今发现的最耐热的一类生物质利用细菌，可以在较高温度(70-90)下生长，迄今，热解纤维素菌属已 经 有 8 个 种 (C.saccharolyticus,C.bescii,C.obsidiansis C.hydrothermalis,C.kristjanssonii,C.kronotskyensis,C.lactoaceticus,and C.owensensis) 在欧洲、北美洲、亚洲和澳洲等地先后被发现。Caldicellulo。
8、siruptor 属极端嗜热菌由于它可以产生多样化的糖苷水解酶水解木质纤维素，被认为具有广泛的应用前景。生物信息学方法分析发现(Blumer et al.,Journal of bacteriology.2012),Caldicellulosiruptor基因组编码106糖苷水解酶分布在43个糖苷水解酶家族。而且从其基因组中发现了许多纤维素酶和半纤维素酶基因簇。一些新颖高效且热稳定高的木质纤维素酶已得到异源表达。特别是一些酶不仅有多个结构域，而且拥有多种催化功能，它们的结构和酶解方式不同于其余两个普通的纤维素酶系统 ：一个是产生游离的单个的纤维素酶和半纤维素酶，如真菌和大多数细菌产生的纤维素酶。
9、 (Martinez,Nature Biotechnology 2008)，另一个是有多个水解酶自组装到一个常见的蛋白质支架形成大分子聚合体，称为纤维小体 cellulosome(Bayer,Annual Review of Microbiology.2004) 例如，C.bescii 产生的一个复合纤维素酶 CelA，包含一个第 9 家族糖苷水解酶和一个第 48 家族糖苷水解酶催化结构域，已发现该酶酶解纤维素的方式非常独特，除了能以普通的酶解方式从表面切割酶解纤维素外，还能以挖掘深入到纤维内部进行酶解 (Brunecky,Science.2013)。目前商业化的纤维素酶和半纤维素酶主要由真菌。
10、产生。由于 Caldicellulosiruptor 属高温菌能产生与真菌不同的纤维素酶系统，在酶解木质纤维素时，它们与真菌纤维素酶具有互补性，应用 Caldicellulosiruptor属的菌种高温纤维素酶与商业化的真菌纤维素酶协同酶解将产生更好的酶解效率，因此具有潜在的商业应用价值。然而，其应用价值远没有被开发出来，目前主要是将其中的一说 明 书CN 104450829 A2/6 页4些木质纤维素酶基因进行异源表达，并研究了其酶学特性，没有对不同底物诱导产生复合纤维素酶系作为整体与商业化纤维素酶协同作用进行研究。本发明提供一种高效的以Caldicellulosiruptor 属产生的高温。
11、木质纤维素复合酶与商业化维素酶协同酶解制备可发酵糖的方法，具有工业化应用前景。发明内容0004 ( 一 ) 本发明的目的0005 目前商业化的纤维素酶成本高，难以支撑生物质产品的大规模生产，寻找新的纤维素酶和酶解方式是解决这一问题的必然途径。通过文献调研结合我们研究团队的研究成果，发现 Caldicellulosiruptor 属微生物对天然木质纤维素原料有强降解作用，它们产生的木质纤维素酶具有独特的性能，与目前商业化的纤维素酶很好的互补作用，协同酶解能大幅度提高酶解效率。秸秆等木质纤维素原料酶解制备可发酵糖需要多种酶的协同作用才能完成，其中纤维素的酶解需要纤维素内切酶、外切酶和 - 葡萄糖苷。
12、酶协同完成，而半纤维素酶解需要木聚糖酶、木糖苷酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、阿魏酸酯酶等协同作用才能完成，半纤维素酶和纤维素酶协同作用才能有效地将天然木质纤维素原料降解为可发酵糖，单个酶无法发挥作用。因此，本发明以不同底物诱导产生的木质纤维素复合酶 ( 包括纤维素酶和半纤维素酶 ) 为整体，与商业纤维素酶协同作用，降解天然木质纤维素原料或预处理过的木质纤维素原料，提高酶解效率，降低纤维素酶解成本。0006 ( 二 ) 技术方案0007 高温木质纤维素酶协同酶解制备可发酵糖的方法，包括以下步骤 ：0008 1)以0.1-2的木质纤维素原料如秸秆，玉米芯木聚糖、甘蔗渣木聚糖微晶纤维素、汽爆秸秆等为碳源，6。
13、0-90下利用培养 20-30h 的 Caldicellulosiruptor 属极 端 嗜 热 菌 (C.saccharolyticus,C.bescii,C.obsidiansis C.hydrothermalis,C.kristjanssonii,C.kronotskyensis,C.lactoaceticus,C.owensensis 其 中 的 一 个 或 多个 ) 为种子液，厌氧发酵 20-72h ；0009 2) 发酵结束后在常温下 6,000g 条件下离心 15min，分离细胞和上清液，细胞经超声破壁后，离心去除细胞壁，上清液即为胞内木质纤维素酶，发酵上清液用饱和度为70-80。
14、硫酸铵溶液沉淀蛋白，离心去除上清液后，用 pH5.0-7.6 的缓冲液溶解蛋白，蛋白溶液吸入透析袋内在 pH5.0-7.6 的缓冲液透析过夜，透析完成后用聚乙二醇在透析袋外吸附浓缩蛋白，蛋白浓度达到 0.5-2mg/ml，收集蛋白溶液即为胞外木质纤维素酶 ；0010 3) 用步骤 2) 获得的胞内和胞外木质纤维素酶与商业化的纤维素酶协同酶解木质纤维素原料制备可发酵糖，具体酶解方法包括以下 2 种 ：用胞内酶、胞外酶单独或胞内酶与胞外酶按照 1:100-100:1(w/w) 的比例混合在 60-85下酶解天然或经过预处理的木质纤维素原料 24-72h 后，再加入商业纤维素酶制剂在 50-55下酶。
15、解 48-72h，得到可发酵糖；用胞内酶、胞外酶单独或胞内酶与胞外酶按照 1:100-100:1 的比例混合再与商业纤维素酶制剂混合在 50-55下酶解天然或经过预处理的木质纤维素原料 48-96h后，得到可发酵糖包括葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖等。上述酶解过程中Caldicellulosiruptor 属菌种产生的木质纤维素酶用量为 1-15mg/g 干底物，商业纤维素酶用量为 5-30FPU/g 干底物。说 明 书CN 104450829 A3/6 页50011 ( 三 ) 本发明的优势和创新性0012 木质纤维素的降解需要多种酶的协同酶解，其酶解效率取决于各个酶的单兵作战能力和。
16、各个酶之间合适的比例。目前商业化纤维素酶对纤维素的降解能力较强，半纤维素的降解能力弱，木质纤维素原料必须经过预处理去除半纤维素才能达到较好的酶解效果，对天然原料或预处理不彻底的原料，酶解效果差。Caldicellulosiruptor属菌种产生的木质纤维素酶包含完整的半纤维素酶和纤维素酶体系，对天然木质纤维素原料有强降解作用，但它们生产酶的能力不如真菌，单独用它们生产的酶制备酶制剂，很难达到商业化的要求，利用它们产生的复合木质纤维素酶与真菌纤维素酶协同酶解，可直接将天然木质纤维素原料高效地降解为可发酵糖，免去酸、碱、汽爆、离子液体等预处理步骤，没有糖的损失，也没有抑制物产生，为后续的发酵创造良。
17、好的条件。针对不同预处理方法和预处理程度不同，可调整 Caldicellulosiruptor 属木质纤维素酶与商业纤维素酶的比例进行酶解，达到最佳的效果。0013 我们的研究发现 Caldicellulosiruptor 属菌种产生的木质纤维素酶，其胞内和胞外酶的分布差异很大，木聚糖酶、纤维素内切酶、外切酶主要分布在胞外，而木糖苷酶、- 葡萄糖苷酶、阿拉伯呋喃糖苷酶主要分布在胞内，本项目针对不同的原料将胞内酶和胞外酶以一定的比例混合后与商业纤维素酶协同酶解，达到经济高效的酶解效果。这也是本发明的创新点。具体实施方式0014 实施例 1C.bescii 以玉米芯为碳源产生的木质纤维素酶与商业纤。
18、维素酶协同酶解玉米秸秆0015 1) 将在 80下培养 24h 的 C.bescii 种子液按 3的接种量接种到以 0.1的粉碎玉米芯为碳源培养基，培养基其他成分为(毎升)：0.9g NH4Cl,0.9g NaCl,0.75g KH2PO4,1.5g K2HPO4,0.4g MgCl26H2O,2.5mg FeCl36H2O,1ml 微量元素 ,1mg 刃天青 ,2g胰蛋白 ,1g 酵母膏 ,0.75g 半胱氨酸盐酸H2O，80下厌氧发酵 26h ；0016 2) 发酵结束后在常温下 6,000g 条件下离心 15min，分离细胞和上清液，细胞经超声破壁后，离心去除细胞壁，上清液即为胞内木质纤。
19、维素酶，发酵上清液用饱和度为70-80硫酸铵溶液沉淀蛋白，离心去除上清液后，用pH7.2的Tris-盐酸缓冲液溶解蛋白，蛋白溶液吸入透析袋内在 pH7.2 的 Tris- 盐酸缓冲液透析过夜，透析完成后用聚乙二醇在透析袋外吸附浓缩蛋白，蛋白浓度达到 2mg/ml，收集蛋白溶液即为胞外木质纤维素酶 ；0017 3) 用步骤 2) 获得的胞外木质纤维素酶与商业化的纤维素酶协同酶解木质纤维素原料制备可发酵糖，具体酶解方法如下 ：用胞外酶 ( 用量为 10mg/g 干底物 ) 在 pH6.0 的醋酸缓冲液中 75下酶解天然玉米秸秆 ( 酶解液固体量为 1，w/v)48h 后，再加入夏盛实业集团有限公司。
20、生产的商业纤维素酶制剂 ( 用量为 10FPU/g 干底物 ) 在 50-55下酶解 ( 酶解液固体量为 3，w/v)72h，得到可发酵糖，其中纤维素的酶解率为 81，木聚糖的酶解率为 83，阿拉伯聚糖酶解率为 90。0018 实施例 2C.owensensis 以汽爆秸秆为碳源产生的木质纤维素酶与商业纤维素酶协同酶解小麦秸秆0019 1) 将在 75下培养 24h 的 C.owensensis 种子液按 3的接种量接种到以 0.1说 明 书CN 104450829 A4/6 页6的汽爆秸秆为碳源培养基，培养基其他成分为(毎升)：0.9g NH4Cl,0.9g NaCl,0.75g KH2PO。
21、4,1.5g K2HPO4,0.4g MgCl26H2O,2.5mg FeCl36H2O,1ml 微量元素 ,1mg 刃天青 ,2g胰蛋白 ,1g 酵母膏 ,0.75g 半胱氨酸盐酸H2O，80下厌氧发酵 24h ；0020 2) 发酵结束后在常温下 6,000g 条件下离心 15min，分离细胞和上清液，细胞经超声破壁后，离心去除细胞壁，上清液即为胞内木质纤维素酶，发酵上清液用饱和度为70-80硫酸铵溶液沉淀蛋白，离心去除上清液后，用pH7.2的Tris-盐酸缓冲液溶解蛋白，蛋白溶液吸入透析袋内在 pH7.2 的 Tris- 盐酸缓冲液透析过夜，透析完成后用聚乙二醇在透析袋外吸附浓缩蛋白，蛋。
22、白浓度达到 2mg/ml，收集蛋白溶液即为胞外木质纤维素酶 ；0021 3) 用步骤 2) 获得的胞外木质纤维素酶与商业化的纤维素酶协同酶解木质纤维素原料制备可发酵糖，具体酶解方法如下 ：用胞外酶 ( 用量为 15mg/g 干底物 ) 在 pH6.0 的醋酸缓冲液中 75下酶解天然玉米秸秆 ( 酶解液固体量为 1，w/v)48h 后，再加入夏盛实业集团有限公司生产的商业纤维素酶制剂(用量为10FPU/g干底物)在55下酶解(酶解液固体含量为 1，w/v)72h，得到可发酵糖，其中纤维素的酶解率为 84，木聚糖的酶解率为88，阿拉伯聚糖酶解率为 94。0022 实施例 3C.saccharoly。
23、ticus 以玉米芯木聚糖为碳源产生的木质纤维素酶与商业纤维素酶协同酶解汽爆玉米秸秆0023 1) 将在 80下培养 24h 的 C.saccharolyticus 种子液按 2的接种量接种到以0.2的玉米芯木聚糖为碳源培养基，培养基其他成分为(毎升)：0.9g NH4Cl,0.9g NaCl,0.75g KH2PO4,1.5g K2HPO4,0.4g MgCl26H2O,2.5mg FeCl36H2O,1ml 微量元素 ,1mg刃天青 ,2g 胰蛋白 ,1g 酵母膏 ,0.75g 半胱氨酸盐酸H2O，80下厌氧发酵 24h ；0024 2) 发酵结束后在常温下 6,000g 条件下离心 15。
24、min，分离细胞和上清液，细胞经超声破壁后，离心去除细胞壁，上清液即为胞内木质纤维素酶，发酵上清液用饱和度为70-80硫酸铵溶液沉淀蛋白，离心去除上清液后，用pH7.2的Tris-盐酸缓冲液溶解蛋白，蛋白溶液吸入透析袋内在 pH7.2 的 Tris- 盐酸缓冲液透析过夜，透析完成后用聚乙二醇在透析袋外吸附浓缩蛋白，蛋白浓度达到 2mg/ml，收集蛋白溶液即为胞外木质纤维素酶 ；0025 3) 用步骤 2) 获得的胞内和胞外木质纤维素酶与商业化的纤维素酶协同酶解木质纤维素原料制备可发酵糖，具体酶解方法如下 ：用胞胞内酶与胞外酶按 10:1 的比例混合，取该混合酶 (1mg/g 干底物 ) 与诺维。
25、信商业纤维素酶制剂 CTec2(10FPU/g 干底物 ) 混合在pH6.0 的柠檬酸缓冲液 55下酶解汽爆玉米秸秆原料 ( 酶解液固体量为 3，w/v)72h 后，得到可发酵糖，其中纤维素的酶解率为 92，木聚糖的酶解率为 95。0026 实施例 4C.obsidiansis 以玉米芯木聚糖为碳源产生的木质纤维素酶与商业纤维素酶协同酶解汽爆玉米秸秆0027 1) 将在 85下培养 24h 的 C.obsidiansis 种子液按 5的接种量接种到以 0.1的玉米芯木聚糖为碳源培养基，培养基其他成分为 ( 毎升 ) ：0.9g NH4Cl,0.9g NaCl,0.75g KH2PO4,1.5g。
26、 K2HPO4,0.4g MgCl26H2O,2.5mg FeCl36H2O,1ml 微量元素 ,1mg 刃天青 ,2g胰蛋白 ,1g 酵母膏 ,0.75g 半胱氨酸盐酸H2O，80下厌氧发酵 24h ；0028 2) 发酵结束后在常温下 6,000g 条件下离心 15min，分离细胞和上清液，细胞经超声破壁后，离心去除细胞壁，上清液即为胞内木质纤维素酶，发酵上清液用饱和度为70-80硫酸铵溶液沉淀蛋白，离心去除上清液后，用pH7.2的Tris-盐酸缓冲液溶解蛋白，说 明 书CN 104450829 A5/6 页7蛋白溶液吸入透析袋内在 pH7.2 的 Tris- 盐酸缓冲液透析过夜，透析完成。
27、后用聚乙二醇在透析袋外吸附浓缩蛋白，蛋白浓度达到 2mg/ml，收集蛋白溶液即为胞外木质纤维素酶 ；0029 3) 用步骤 2) 获得的胞内和胞外木质纤维素酶与商业化的纤维素酶协同酶解木质纤维素原料制备可发酵糖，具体酶解方法如下 ：用胞胞内酶与胞外酶按 1:1 的比例混合，取该混合酶 (5mg/g 干底物 ) 与诺维信商业纤维素酶制剂 CTec2(15FPU/g 干底物 ) 混合在pH5.0 的醋酸缓冲液 50下酶解酸处理过的水稻秸秆原料 ( 酶解液固体量为 2，w/v)60h后，得到可发酵糖，其中纤维素的酶解率为 90，木聚糖的酶解率为 92。0030 实施例 5C.kristjansson。
28、ii 和 C.kronotskyensis 混合菌以小麦秸秆为碳源产生的木质纤维素酶与商业纤维素酶协同酶解小麦秸秆0031 1) 将在 70下培养 24h 的 C.kristjanssonii 和 C.kronotskyensis 种子液分别按2的接种量接种到以0.1的小麦秸秆为碳源培养基，培养基其他成分为(毎升) ：0.9g NH4Cl,0.9g NaCl,0.75g KH2PO4,1.5g K2HPO4,0.4g MgCl26H2O,2.5mg FeCl36H2O,1ml 微量元素 ,1mg 刃天青 ,2g 胰蛋白 ,1g 酵母膏 ,0.75g 半胱氨酸盐酸H2O，80下厌氧发酵24h ；。
29、0032 2) 发酵结束后在常温下 6,000g 条件下离心 15min，分离细胞和上清液，细胞经超声破壁后，离心去除细胞壁，上清液即为胞内木质纤维素酶，发酵上清液用饱和度为70-80硫酸铵溶液沉淀蛋白，离心去除上清液后，用pH7.2的Tris-盐酸缓冲液溶解蛋白，蛋白溶液吸入透析袋内在 pH7.2 的 Tris- 盐酸缓冲液透析过夜，透析完成后用聚乙二醇在透析袋外吸附浓缩蛋白，蛋白浓度达到 2mg/ml，收集蛋白溶液即为胞外木质纤维素酶 ；0033 3) 用步骤 2) 获得的胞外木质纤维素酶与商业化的纤维素酶协同酶解木质纤维素原料制备可发酵糖，具体酶解方法如下 ：用胞外酶 ( 用量为 15m。
30、g/g 干底物 ) 在 pH5.0 的醋酸缓冲液中 75下酶解天然小麦秸秆 ( 酶解液固体量为 3，w/v)48h 后，再加入夏盛实业集团有限公司生产的商业纤维素酶制剂 ( 用量为 25FPU/g 干底物 ) 在 55下酶解 72h，得到可发酵糖，其中纤维素的酶解率为 86，木聚糖的酶解率为 92，阿拉伯聚糖酶解率为95。0034 实施例 6C.obsidiansis 混合菌以玉米芯为碳源产生的木质纤维素酶与商业纤维素酶协同酶解玉米芯0035 1) 将在 80下培养 44h 的 C.obsidiansis 种子液按 3的接种量接种到以 0.1的粉碎玉米芯为碳源培养基，培养基其他成分为 ( 毎升。
31、 ) ：0.9g NH4Cl,0.9g NaCl,0.75g KH2PO4,1.5g K2HPO4,0.4g MgCl26H2O,2.5mg FeCl36H2O,1ml 微量元素 ,1mg 刃天青 ,2g胰蛋白 ,1g 酵母膏 ,0.75g 半胱氨酸盐酸H2O，80下厌氧发酵 26h ；0036 2) 发酵结束后在常温下 6,000g 条件下离心 15min，分离细胞和上清液，细胞经超声破壁后，离心去除细胞壁，上清液即为胞内木质纤维素酶，发酵上清液用 70-80硫酸铵溶液沉淀蛋白，离心去除上清液后，用 pH7.2 的 Tris- 盐酸缓冲液溶解蛋白，蛋白溶液吸入透析袋内在 pH7.2 的 Tr。
32、is- 盐酸缓冲液透析过夜，透析完成后用聚乙二醇在透析袋外吸附浓缩蛋白，蛋白浓度达到 2mg/ml，收集蛋白溶液即为胞外木质纤维素酶 ；0037 3) 用步骤 2) 获得的胞外木质纤维素酶与商业化的纤维素酶协同酶解木质纤维素原料制备可发酵糖，具体酶解方法如下 ：用胞外酶 ( 用量为 10mg/g 干底物 ) 在 pH6.0 的醋酸缓冲液中 75下酶解天然玉米芯 ( 酶解液固体量为 2，w/v)48h 后，再加入夏盛实业集说 明 书CN 104450829 A6/6 页8团有限公司生产的商业纤维素酶制剂(用量为15FPU/g干底物)在50下酶解72h，得到可发酵糖，其中纤维素的酶解率为 83，木聚糖的酶解率为 89，阿拉伯聚糖酶解率为 90。说 明 书CN 104450829 A。