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1、10申请公布号CN104145823A43申请公布日20141119CN104145823A21申请号201410439528922申请日20140901A01H4/0020060171申请人西藏坎巴嘎布卫生用品有限公司地址西藏自治区拉萨市经济技术开发区博达路1号72发明人泽仁旺姆尼珍杜运建74专利代理机构江苏圣典律师事务所32237代理人程化铭54发明名称坎巴嘎布的快速繁殖方法57摘要本发明公开一种坎巴嘎布的快速繁殖方法，包括以下步骤（A）取坎巴嘎布植株带有腋芽的茎段作为外植体，对外植体进行灭菌处理；（B）将外植体接种至萌发培养基培养1012D，外植体形成带叶小苗；（C）将移至生芽培养基中，。
2、诱导形成丛生芽，以20D为一个增殖周期，至少一个增殖周期结束后，取225CM的芽接种于生根培养基中，待小苗形成完整植株后进行移栽；（D）取根系生长良好的植株移栽至大田，进行常规栽培；本发明方法操作简便，出芽快，培养时间短，植株成活率高，植株生长旺盛，易于工业化生产。51INTCL权利要求书1页说明书4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页10申请公布号CN104145823ACN104145823A1/1页21一种坎巴嘎布的快速繁殖方法，其特征在于，具体步骤如下A取坎巴嘎布植株含有23个腋芽的茎段作为外植体，对外植体进行灭菌处理；B向培养瓶中加入萌发培养基，。
3、将外植体接种在萌发培养基中，1株/瓶，于温度2024、光照1214H/D的条件下，培养1012D，外植体形成带叶小苗；C将步骤B获得的小苗移至生芽培养基中，诱导形成丛生芽，以20D为一个增殖周期，至少一个增殖周期结束后，取225CM的丛生芽接种于生根培养基中诱导生根；D）取根系生长良好的植株移栽至大田，进行常规栽培；所述萌发培养基是指加入10MG/L6BA的MS培养基；所述生芽培养基是指加入0612MG/L6BA、0102MG/LIAA的MS培养基；所述生根培养基是指加入005MGLIBA、005MGLNAA的MS培养基。2根据权利要求1所述坎巴嘎布的快速繁殖方法，其特征在于，步骤A所述灭菌处。
4、理是指先用肥皂水进行清洗外植体，再用流水冲洗，然后将外植体再放入75的酒精中消毒30秒，再用无菌水冲洗3次，用01升汞消毒512MIN，最后用无菌水冲洗35次。权利要求书CN104145823A1/4页3坎巴嘎布的快速繁殖方法技术领域0001本发明涉及植物组织培养技术，具体涉及一种坎巴嘎布的快速繁殖方法。背景技术0002坎巴嘎布，学名“毛莲蒿”（ARTEMISIAVESTITAWALLEXDC）为菊科、蒿属，半灌木或灌木状；根茎粗大，木质，植物有挥发性香气，主要产丁青、洛扎、拉萨、南木林、日喀则等海拔26004300米的山坡、山麓、草地、灌丛、砾质滩地中，坎巴嘎布具有极高的药用价值，宇妥本草中。
5、记载坎巴嘎布具有消肿、治肉瘤、肠病的功效；药名荟萃中记载坎巴嘎布具有止血、消四肢肿胀功效；蓝琉璃中记载坎巴嘎布有利肾病和补品的作用；坎巴嘎布在藏医药里也是作为止血、消肿、清热的药物，用于治疗各种疾病引起的出血、四肢肿胀、外伤等疾病，随着藏医药研究的进一步发展，目前野生坎巴嘎布的产量难以满足日益增加的医药需求量，但由于坎巴嘎布生长海拔高、对生产环境要求严格，一般环境难以生长，人工引进培养繁殖尚未见报道。0003发明目的针对上述问题，本发明提供一种利用坎巴嘎布茎段所为外植体额快速繁殖方法，该方法操作简便，出芽快，培养时间短，植株生长旺盛，易于工业化生产，本发明是这样实现的一种坎巴嘎布的快速繁殖方法。
6、，其特征在于，具体步骤如下A取坎巴嘎布植株含有23个腋芽的茎段作为外植体，对外植体进行灭菌处理；B向培养瓶中加入萌发培养基，将外植体接种在萌发培养基中，1株/瓶，于温度2024、光照1214H/D的条件下，培养1012D，外植体形成带叶小苗；C将步骤B获得的小苗移至生芽培养基中，诱导形成丛生芽，以20D为一个增殖周期，至少一个增殖周期结束后，取225CM的丛生芽接种于生根培养基中诱导生根，培养3238D后，小苗形成完整植株；D）取根系生长良好的植株移栽至大田，进行常规栽培；所述萌发培养基是指加入10MG/L6BA的MS培养基；所述生芽培养基是指加入0612MG/L6BA、0102MG/LIAA。
7、的MS培养基；所述生根培养基是指加入005MGLIBA、005MGLNAA的MS培养基。0004优选的，本发明中，步骤A所述灭菌处理是指先用肥皂水进行清洗外植体，再用流水冲洗，然后将外植体再放入75的酒精中消毒30秒，再用无菌水冲洗3次，用01升汞消毒512MIN，最后用无菌水冲洗35次。0005本发明的有益效果在于（1）利用坎巴嘎布带腋芽茎段为外植体，取材容易，一年四季均可取材，而且数量大，同时成熟的茎段做外植体，保证了遗传稳定性，克服了组织培养中，愈伤组织在分化培养基上随着芽的分化而逐渐停止生长，失去增殖能力的弱点，防止愈伤组织继代培养过程中，随着培养代数的增加，分化出来的苗出现变异的现象。
8、。0006（2）本发明方法利用外植体建立，芽的增殖和生根需要50天左右形成完整植株，说明书CN104145823A2/4页4实现坎巴嘎布的大规模工厂化育苗，移栽基质利用田园土，方法简单，而且大大降低了移栽成本。0007（3）本发明培养方法简单，出芽快，增殖率高,生芽培养基中增殖系数达到51以上；成活率高，生根培养基中生根率可以达到80以上，移栽大田后，植株的成活率达到90以上。00084本发吗生产成本低，可工业化批量生产，应用价值高。具体实施方式0009以下结合实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。0010实施例1生芽培养基筛选分别按照表1所述配比，配制不同浓度的生芽培养基，分别编号14。。
9、0011选用坎巴嘎布优良单株，切取带23个腋芽的茎段作为外植体进行培养，对外植体进行灭菌处理后，分别接种于14号生根培养基中，接种后小苗生长情况如表1所示。0012表1不同激素配比的生芽培养基对坎巴嘎布分化芽的影响培养基6BAMGLIAAMGL接种数增殖系数生长表现1032051正常,苗健壮206012057正常,苗健壮309022060正常,苗健壮412032052叶片微卷曲,结果表明，随着6BA和IAA浓度逐步升高在一定范围对坎巴嘎布分化芽有明显增加作用，但6BA和IAA激素浓度合计达到15MGL时，叶片微卷曲,生长不正常。这表明6BA在0612MGLIAA0102MGL激素浓度范围时生长。
10、综合表现最佳，芽的平均增殖系数为5760。0013实施例2筛选生根培养基依照表2所示配比，配制不同浓度的生根培养基，编号15，将实施例1获得的健壮小苗分别移栽至15号生根培养基中，小苗生长状况如表2所示表2不同激素配比的生根培养基对坎巴嘎布生根的影响结果表明，在添加005MGLIBA、005MGLNAA浓度的MS生根培养基中，生根时间及整齐度为最优，生根率可达到98。0014实施例3实施例所涉及的培养基配方萌发培养基MS培养基中加入10MG/L的6BA；生芽培养基MS培养基中加入0612MG/L的6BA、0102MG/L的IAA；说明书CN104145823A3/4页5生根培养基MS培养基加入。
11、、005MGL的IBA、005MGL的NAA。0015取材坎巴嘎布（ARTEMISIAVESTITAWALLEXDC）带腋芽茎段为外植体。00161、外植体的选择与灭菌选用坎巴嘎布优良单株，切取带23个腋芽的茎段作为外植体进行培养，对外植体进行灭菌处理首先用肥皂水进行清洗，再用流水反复冲洗，在放入75的酒精中消毒30秒，用无菌水冲洗3次，再用01升汞消毒512分钟，用无菌水冲洗35次备用；2、腋芽的萌发向培养瓶中加入萌发培养基，将灭菌后的外植体接种在萌发培养基中，1株/瓶，于温度2024、光照1214H/D的条件下，培养5天左右腋芽开始萌发，培养1012天形成带叶的小苗；3、丛生芽诱导及增殖将。
12、小苗切下接种丛生培养基中，直至形成丛生芽，20天为一个增殖周期，以保持高速度递增，增殖系数为51；4、诱导生根取225CM的丛生芽，接种于生根培养基中，培养18天可生根，生根率达85，38天左右形成完整植株；5、试管苗的移栽选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移栽到天然泥土中进行常规栽培，注意保水保湿，适当通风，移栽1个月后，移栽成活率达到80以上。0017实施例4取材坎巴嘎布（ARTEMISIAVESTITAWALLEXDC）带腋芽的茎段为外植体。00181、外植体的选择与灭菌选用坎巴嘎布优良单株，切取带23个腋芽的茎段作为外植体进行培养，对外植体进行灭菌处理首先用肥皂。
13、水进行清洗，再用流水反复冲洗，在放入75的酒精中消毒30秒，用无菌水冲洗3次，再用01升汞消毒512分钟，用无菌水冲洗35次备用；2、腋芽的萌发向培养瓶中加入萌发培养基，将灭菌后的外植体接种在萌发培养基中，1株/瓶，于温度2024、光照1214H/D的条件下，培养5天左右腋芽开始萌发，1012天左右形成带叶的小苗；3、丛生芽诱导及增殖将小苗切下接种在生芽培养基中，直至形成丛生芽，20天为一个增殖周期，以保持高速度递增，增殖系数为57；4、诱导生根切下长为225CM的丛生芽，接种在生根培养基上，培养18天可生根，生根率达83，38天形成完整植株；5、试管苗的移栽选取根系生长良好的试管苗，放入清水。
14、中把根部的琼脂清洗干净，移栽到天然泥土中进行常规栽培，注意保水保湿，适当通风，移栽1个月后，移栽成活率达到80以上。0019本实施例所涉及的培养基配方与实施例3相同。0020实施例5取材坎巴嘎布（ARTEMISIAVESTITAWALLEXDC）带腋芽茎段为外植体1、外植体的选择与灭菌选用坎巴嘎布优良单株，切取带23个腋芽的茎段作为外植体进行培养，对外植体进行灭菌处理首先用肥皂水进行清洗，再用流水反复冲洗，在放入75的酒精中消毒30秒，用无菌水冲洗3次，再用01升汞消毒512分钟，用无菌水冲洗35次备用；说明书CN104145823A4/4页62、腋芽的萌发向培养瓶中加入萌发培养基，将灭菌后的。
15、外植体接种在萌发培养基中，1株/瓶，于温度2024、光照1214H/D的条件下，培养5天左右腋芽开始萌发，10天左右形成带叶的小苗；3、丛生芽诱导及增殖将小苗切下接种在生芽培养基中，直至形成丛生芽，20天为一个增殖周期，以保持高速度递增，增殖系数为60；4、诱导生根切下长225CM的丛生芽，接种在生根培养基上，培养12天可生根，生根率达98，38天形成完整植株；5、试管苗的移栽选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移栽到天然泥土中进行常规栽培，注意保水保湿，适当通风，移栽1个月后，移栽成活率达到80以上。0021本实施例所涉及的培养基配方与实施例3相同。0022以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。说明书CN104145823A。