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1、10申请公布号CN104138403A43申请公布日20141112CN104138403A21申请号201410418719722申请日20140825A61K36/48200601A61P35/00200601F26B5/06200601A61K127/0020060171申请人济南康众医药科技开发有限公司地址250014山东省济南市历下区科院路19号山东省科学院西楼4号72发明人张为胜李诗标周宝艳李强54发明名称一种三叶青的干燥方法57摘要本发明涉及一种三叶青的干燥方法，取鲜三叶青，冷冻后干燥。制备的三叶青主要活性成分含量高，抗癌效果好。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民。
2、共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104138403ACN104138403A1/1页21一种三叶青的干燥方法，其特征在于取鲜三叶青，冷冻后干燥。2根据权利要求1的一种三叶青的干燥方法，其特征在于冷冻是冷冻至冻结。3根据权利要求1的一种三叶青的干燥方法，其特征在于冷冻是冷冻至5以下。4根据权利要求1的一种三叶青的干燥方法，其特征在于冷冻后干燥是冷冻后晒干或烘干或晾干。权利要求书CN104138403A1/3页3一种三叶青的干燥方法发明领域0001本发明涉及药品制法，特别涉及一种三叶青的干燥方法，属医药技术领域。背景技术0002三叶青TETRASTIG。
3、MATISHEMSLEYANI为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤TETRASTIGMAHEMSLEYANUMDIELSETGILG其块根名为蛇附子，异名有石猴子、石抱子、拦山虎、雷胆子、破石珠、土经丸、搜夹风、三叶对、小扁藤、阴灵子、三叶扁藤、金丝吊葫芦、丝线吊金钟、金线吊葫芦、金线吊马铃薯。三叶青以块根或全草入药，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能。其内服可治疗小儿高热惊厥、痢疾、支气管炎、肺炎、咽喉炎、肝炎及病毒性脑膜炎，外敷可治疗毒蛇咬伤、扁桃体炎、蜂窝织炎、跌打损伤。0003中药干燥在我国有很长的历史，经干燥的中草药可保持一定的药用成分以及不易腐败变质，干燥作为保证中草药品质的重要措施。
4、，是中草药加工中一个必不可少的工艺过程，干燥与中药生产的关系密切，干燥的方法将直接影响产品的质量。0004发明专利CN200910156906，公开了一种中药三叶青真空冷冻干燥保留药效活性成分的工艺，包括三叶青原料选取、清洗切片、预干燥、装盘预冻、升华干燥、解析干燥后出料。制备的三叶青，可以最大限度地保存原药的药效成分和还原生药的性能，主要抗肿瘤成分总黄酮是传统加工方法的36倍，总皂甙是传统加工方法的25倍。缺点是能耗高，饮片疏松易碎，运输贮存不便。发明内容0005本发明的目的是提供一种三叶青的干燥方法，该方法干燥三叶青，主要有效成分含量高，抗癌效果好。0006本发明的目的是这样实现的一种三叶。
5、青的干燥方法，其特征在于取鲜三叶青，冷冻后干燥。0007本发明的一种三叶青的干燥方法，其特征在于冷冻是冷冻至冻结。0008本发明的一种三叶青的干燥方法，其特征在于冷冻是冷冻至5以下。0009本发明的一种三叶青的干燥方法，其特征在于冷冻后干燥是冷冻后晒干或烘干或晾干。0010至此完成了本发明，本发明制备的三叶青主要活性成分含量高，抗癌效果好。0011下面通过试验例进一步说明本发明的有益之处，试验例旨在进一步说明本发明的有益之处，而非对本发明的限制。0012将同一批鲜三叶青，按以下方法进行加工。00131）晾干鲜三叶青，切厚片，放于阴凉通风处，摊开晾干；2）烘干鲜三叶青，切厚片，60以下烘干；3）。
6、冷冻后烘干鲜三叶青，切厚片，冷冻至5至全部冻结，取出，60以下烘干。0014一、不同方法干燥三叶青总黄酮的含量侧定比较说明书CN104138403A2/3页41、仪器与试药仪器紫外一可见分光光度仪；电子天平；芦丁对照品。00152、检测波长的确定芦丁对照品硝酸铝显色后在500510NM波长处有最大吸收，结合文献，试验选择500NM为检测波长。00163、对照品溶液的制备精密称取在120减压干燥至恒重的芦丁对照品10MG，置50ML量瓶中，加70乙醇35ML，置水浴上微热使溶解，放冷，加70乙醇至刻度，摇匀，即得每ML中含无水芦丁02MG。00174、供试品制备和含量测定取以上制备的三叶青药材各。
7、01G，精密称定，置L00ML容量瓶中，加70乙醇70ML，振摇后加乙醇至刻度，放置LH，用干燥滤器迅速滤过,精密量取续滤液6ML，置25ML容量瓶中,加5亚硝酸钠溶液1ML，混匀，放置6MIN；加10硝酸铝溶液LML，摇匀，放置6MIN；加氢氧化钠试液10ML，再加水至刻度，摇匀，放置15MIN。00185、测定照分光光度法在500NM波长处测定吸收度，计算，即得。结果见表1。0019表1不同方法干燥三叶青总黄酮的含量药材晾干烘干冷冻后烘干总黄酮含量（）033032047由表1看出，三叶青冷冻后烘干，总黄酮含量均较高。0020二、冷冻后不同方法干燥三叶青总黄酮的含量侧定比较将同一批鲜三叶青，。
8、切厚片，冷冻至10至全部冻结，取出，分别晾干、晒干，60以下烘干。测定冷冻后不同方法干燥三叶青总黄酮的含量，结果见表2。0021表2冷冻后不同方法干燥三叶青总黄酮的含量药材晾干烘干冷冻后烘干总黄酮含量（）047046047三、不同方法干燥三叶青抗癌活性比较1、制备三叶青提取物分别取晾干、烘干、冷冻后烘干粉碎，各加水煎煮两次，第一次加水8倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并药液，药液滤过，取滤液，浓缩至相对密度为110（60）时，加入乙醇使含醇量达到75，沉淀，静置36小时，吸取上清液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎，得不同方法干燥的三叶青提取物。00222、肿瘤细胞株人肺源腺癌细胞。
9、SPCA1、人肝癌细胞系HEPG2和人慢性髓系白血病细胞K562，用RPMI1649培养液,37,5CO2，相对湿度100培养，贴壁细胞025胰蛋白酶消化传代。00233、方法MTT比色法测定提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用。取对数生长期细胞，用新鲜的RPMI1640培养液配制成细胞悬液，悬浮细胞1105个/ML贴壁细胞08105个/ML。悬浮细胞分别加入不同浓度实验药物后接种于96孔培养板中；贴壁细胞先接种于96孔培养板中，每孔90L24H后分别加入不同浓度实验药物。终体积为每孔100L且每组设3个平行孔，分组受试药组培养液细胞悬液不同浓度受试药、阴性对照组培养液细胞悬液、药物颜色对照组培养液。
10、不同浓度受试药、空白对照组培养液说明书CN104138403A3/3页5生理盐水。受试药浓度依次为10G/ML、30G/ML、50G/ML。置37,5CO2培养箱中培养72H后，向每孔加入MTT溶液10L震荡混匀后，继续培养4H，加入SDS90L终止培养,37过夜，然后室温下在微量振荡器上震荡10MIN，酶标仪测定570NM波长处的吸光度OD值,实验重复3次。0024按以下公式计算生长抑制率生长抑制率N组OD均值B组OD均值T组OD均值TC组OD均值/N组OD均值B组OD均值100。00254、抑制率结果见表3、表4、表5。0026表3对SPCA1的抑制率结果抑制率（）10（G/ML）30（G。
11、/ML）50（G/ML）晾干436458636668烘干427558716652冷冻后烘干513564388164表4对HEPG2的抑制率结果抑制率（）10（G/ML）30（G/ML）50（G/ML）晾干465950746120烘干470650636214冷冻后烘干573864967681表5对K562的抑制率结果抑制率（）10（G/ML）30（G/ML）50（G/ML）晾干503567217352烘干516367227354冷冻后烘干673778418659结果表明，冷冻后烘干三叶青对SPCA1、HEPG2、K562细胞的增殖均较晾干、烘干三叶青有较强的抑制作用。具体实施方式0027实施例1鲜三叶青，切厚片，冷冻至5至全部冻结，取出，60以下烘干。0028实施例2鲜三叶青，切厚片，冷冻至10至全部冻结，取出，60以下烘干。0029实施例3鲜三叶青，切厚片，冷冻至20至全部冻结，取出，晾干。0030实施例4鲜三叶青，切厚片，冷冻至30至全部冻结，取出，晒干。0031实施例5鲜三叶青，切厚片，冷冻至15至全部冻结，取出，晒干。0032实施例6鲜三叶青，切厚片，冷冻至28至全部冻结，取出，晾干。说明书CN104138403A。