一种高效制备海参抗氧化活性肽的方法.pdf

本发明涉及生物技术，具体的说是一种高效制备海参抗氧化活性肽的方法。具体为以新鲜海参体壁或内脏为原料，将其破碎匀浆并用磷酸缓冲液稀释，而后用复合蛋白酶于55-65℃下酶解，酶解液离心上清液即为海参抗氧化活性肽。本发明所得海参多肽的羟自由基清除能力和总还原力明显高于目前广泛使用的抗氧化剂—维生素C(Vc)和2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)。本发明为实现海参资源的高值化利用以及开发具有保健功能的食品奠定了基础。

1.  一种高效制备海参抗氧化活性肽的方法，其特征在于：以新鲜海参体壁或内脏为原料，将其破碎匀浆并用磷酸缓冲液稀释，而后用复合蛋白酶于55-65℃下酶解，酶解液离心上清液即为海参抗氧化活性肽。

2.  按权利要求1所述高效制备海参抗氧化活性肽的方法，其特征在于：所述破碎匀浆用磷酸缓冲液稀释，使其料液比(w/v)在15％-20％。

3.  按权利要求1所述高效制备海参抗氧化活性肽的方法，其特征在于：所述复合蛋白酶加入量为3000-5000U/g，酶解2-4h。

4.  按权利要求1所述高效制备海参抗氧化活性肽的方法，其特征在于：所述酶解液于8000-12000rpm下离心10-15min,然后将离心上清液进行冷冻干燥，所得固体即为海参体壁或海参内脏抗氧化活性肽。

一种高效制备海参抗氧化活性肽的方法
技术领域
本发明涉及生物技术，具体的说是一种高效制备海参抗氧化活性肽的方法。
背景技术
海参是我国传统的名贵海洋珍品，营养价值极高，含有多种有益于人类身体健康的生物活性物质，是一种高蛋白的营养物质，素有“海中人参”之称，是“海八珍”之一。海参体内含有的生物活性物质，具有抗氧化、增强免疫力、延缓衰老、防治肿瘤等多种功效。近年来，随着我国海参养殖业的迅速发展，我国海参市场规模不断扩大，海参资源非常丰富。
生物活性肽是指一类由25个及以下天然氨基酸，以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称。它具有多种人体代谢和生理调节功能，例如易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒、增强免疫力、降血压、降血脂等作用。目前，生物活性肽主要有以下3种来源：天然提取法、合成法和蛋白质降解法。天然提取法易受到原料的限制很难大规模制备；合成法副反应较多、成本较高、筛选复制，并且可能残留一部分毒性物质，存在一定的食品安全隐患；蛋白质降解法是利用某些水解方法将大分子的蛋白质肽链打断，生成较短链小分子肽的方法，包括化学水解法、酶水解法和微生物发酵法。但是，化学水解法反应较为剧烈，需要强酸性或者强碱性，高温环境，对设备的要求高，并且水解的程度不容易控制，氨基酸结构也容易被破坏，再加上选择性较差，产物分子量分布不均，稳定性和重现性较差；微生物发酵法的产物较为复杂，生物活性肽中可能会掺入大量微生物及其代谢产物，难以除去；而酶水解法反应条件温和，而且具有酶解产物含盐量低，无氨基酸破坏和消旋，无毒副产物，原料的有效成分保存完全，对环境无污染等优点非常适用于生物活性肽的大规模生产制备。通常可应用于生物活性肽制备的蛋白酶有多种，主要包括：中性蛋白酶、风味蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和复合蛋白酶等。但是，同一蛋白酶对不同的酶解原材料的酶解效果、酶解产物及其生物活性是有很大差异；即使是同一种酶解原材料，采用不同的蛋白酶或酶解条件进行酶解，所得到酶解效果、酶解产物及其生物活性也有很大不同。所以，以海参为原材料，通过酶解方法制备生物活性肽过程中，并非任何一种蛋白酶都可高效制备高生物活性肽。这些蛋白酶中，一般只会有一种蛋白酶最适合高效制备高生物活性肽。本发明是通过优化多种蛋白酶及酶解条件，最终获得的一种高效制备抗氧化活性肽的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效制备海参抗氧化活性肽的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种高效制备海参抗氧化活性肽的方法，以新鲜海参体壁或内脏为原料，将其破碎匀浆并用磷酸缓冲液稀释，而后用复合蛋白酶(Protamex)于55-65℃下酶解，酶解液离心上清液即为海参抗氧化活性肽。
进一步的说，以新鲜海参体壁或内脏为原料，将其破碎匀浆并用磷酸缓冲液稀释，而后在pH6.0-7.0，用复合蛋白酶(Protamex)于55-65℃下进行酶解，酶解液离心上清液即为具有较强抗氧化活性的海参多肽。
所述破碎匀浆用磷酸缓冲液稀释，使其料液比(w/v)在15％-20％。
所述复合蛋白酶加入量为3000-5000U/g，酶解2-4h。
所述酶解液于8000-12000rpm下离心10-15min,然后将离心上清液进行冷冻干燥，所得固体即为海参体壁或海参内脏抗氧化活性肽。将制备得到的海参抗氧化活性肽进行羟自由基清除活性以及还原力等抗氧化活性测定；
本发明的优点：
1、本发明是一种简单、快速、高效制备海参抗氧化活性肽的方法，适合工业化生产。
2、本发明获得的海参活性肽具有较强的抗氧化活性特点，与传统抗氧化剂Vc与BHT相比，其羟自由基清除能力及还原能力更强，具有非常好的应用前景。
附图说明
图1几种常见蛋白酶酶解制备海参多肽比较图；
图2为本发明实施例提供的海参抗氧化活性肽与抗氧化剂Vc对羟自由基清除能力比较图；
图3为本发明实施例提供的海参抗氧化活性肽与抗氧化剂BHT的总还原能力比较图。
具体实施例
实施例1：
取1g海参内脏匀浆液，分别加2000U的中性蛋白酶、风味蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和复合蛋白酶，然后加入10mL各自蛋白酶合适pH的缓冲液，并于各自蛋白酶的合适条件下反应4小时(表1)。
表1实验条件