化橘红中活性成分挥发油在制药中的应用 【技术领域】
本发明涉及化橘红中活性成分挥发油的用途，尤其涉及在制药中的用途。
背景技术
化橘红为芸香科植物化州柚Citrus grandis‘Tomentosa’或柚Citrus grandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外层果皮。前者习称“毛橘红”，后者习称“光七爪”“光五爪”。具散寒，燥湿，利气，消痰之功效。用于风寒咳嗽，喉痒痰多，食积伤酒，呕恶痞闷。[1]化橘红为广东省名贵的地道药材，其主要化学成分有挥发油、黄酮、多糖等，关于化橘红止咳化痰的活性成分，说法不一至。周荣汉等认为，其黄酮类成分是消炎、止咳、平喘活性成分[2]；周博文等认为多糖是祛痰镇咳作用的活性成分之一[3]；化橘红挥发油含有51个成分，已鉴定出28个成分，其化学组成以单萜类及其衍生物为主体，含量较高的成分有D-柠檬烯(53.57％)、3-蒈烯(15.62％)、β-月桂烯(8.17％)、α-蒎烯(1.09％)、β-蒎烯(0.60％)、2-蒈烯(1.76％)等[4]。目前，对化橘红挥发油的止咳化痰作用尚未有研究报导。为此，有必要对化橘红的止咳化痰作用的活性成分进行进一步研究。
【发明内容】
本发明的目的在于提供化橘红中活性成分挥发油的新用途，即在制药中的新应用。
实际上，本发明涉及化橘红中活性成分作为制备治疗或预防止咳化痰药中的应用。
同时，化橘红中具有止咳化痰作用的必要活性成分是化橘红挥发油。其可用于制成具有止咳化痰作用的单方或复方药物。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用化橘红不同提取物的止咳化痰活性研究来说明其在制药领域中的新用途。
1.氨水引咳法镇咳试验
1.1试验材料
1.1.1受试药物：化橘红挥发油β-环糊精包合物，化橘红总黄酮，化橘红多糖，本室自制；阳性对照药：金荞麦片，批号：021105，南通精华制药有限公司；阴性对照药：0.5％CMC-Na溶液。
1.1.2挥发油β-环糊精包合物的制备：称取化橘红药材颗粒300g，加10倍量水浸泡过夜，在挥发油提取器中提取挥发油6小时，收集油水混合液，乙醚萃取，回收乙醚，得化橘红挥发油0.4ml，用4gβ-环糊精进行包合，得化橘红挥发油β-环糊精包合物4g。
1.1.3总黄酮及总多糖的制备：将1.1.2项下水提液过滤，药渣续用10倍量水提取1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩，得浓度为1g生药/ml水液，上D101大孔树脂柱，先用水洗脱至无色，收集合并水洗脱液，减压浓缩至比重为1.05水液，用5倍量酒精醇沉，静置24小时，抽滤，用95％乙醇洗涤，干燥，得化橘红多糖35.4g。水洗脱尽多糖类成分后，改用70％乙醇进行洗脱，收集洗脱液，合并，浓缩，干燥，得化橘红总黄酮粉末12g。
1.1.4其余试剂为市售分析纯试剂。
1.1.5动物昆明种小鼠，雄性，18～22g。
1.2方法与结果
小鼠随机分为化橘红挥发油、化橘红总黄酮、化橘红多糖、金荞麦组和阴性对照组，分别灌胃给予小鼠化橘红挥发油β-环糊精包合物0.9mg/kg，化橘红总黄酮3mg/kg，化橘红多糖10mg/kg和金荞麦1.2片/kg及同体积空白溶媒。连续三天，每日一次，末次给药前15小时给小鼠禁食，末次给药后1hr将小白鼠置于500ml玻璃钟罩内，通过空气压缩机连接玻璃喷雾头，以400mmHg恒压将浓氨水(25～28％氢氧化铵)均匀地喷入钟罩内，持续5s，观察并记录小鼠地咳嗽潜伏期及两分钟内的咳嗽次数，作为指标。结果见表1。
表1.化橘红提取物对小鼠氨水致咳作用的影响(n＝10)
组别 剂量(mg/kg) 潜伏期(s) 咳嗽次数(次/2min)
阴性对照 -- 35.3±9.7 51.6±18.2
化橘红挥发油 1.8 45.1±5.6* 37.5±9.9*
化橘红总黄酮 6.0 43.0±11.2 45.9±14.4
化橘红总多糖 20.0 45.7±14.8 43.6±9.7
金荞麦片 0.004片/只 56.3±15.9* 28.9±13.1*
*p＜0.05，与阴性对照组比
注：化橘红各给药组剂量均相当于0.2g生药/kg小鼠。
2.酚红排泌法祛痰试验
2.1试验材料。
2.1.1受试药物：同前
2.1.2药品及仪器：酚红，NaHCO3，NaOH，生理盐水，752分光光度计，手术剪，眼科镊，小试管
2.1.3动物：昆明种小鼠，雄性，18～22g
2.2酚红标准曲线的制备：精密称取酚红5.2mg，置50ml容量瓶中，5％NaHCO3溶液定容至刻度，作为对照品溶液(104μg/ml)。量取对照品溶液1ml，置10ml容量瓶中，5％NaHCO3溶液定容至刻度，摇匀。再分别精密吸取1，2，3，4，5，6ml于5％NaHCO3溶液25ml中定容至刻度，摇匀，得浓度分别为1.664，3.328，4.992，6.656，8.320，9.984μg/ml酚红溶液。以5％NaHCO3为空白，在558nm下测定A值，经回归得标准曲线方程：A＝0.0748C-0.0002，r＝0.9998(C：μg/ml)，酚红在1.664～9.984μg/ml范围内线性良好。
2.3方法与结果
小鼠随机分组、给药同1.2。末次给药后30min每鼠ip5％酚红生理盐水溶液500mg/kg，30min后处死小鼠，分离气管，取气管一段，放入2ml5％NaHCO3溶液中浸泡，振摇，放置待沉淀后取上清液于558nm测定A值，带入标准曲线方程计算酚红浓度，为呼吸道分泌作用的指标。结果见表2。
表2.化橘红提取物对小鼠呼吸道分泌的影响(n＝10)
组别 剂量(mg/kg) A 酚红浓度(μg/m)
阴性对照 -- 0.1 94±0.046 2.60±0.61
化橘红挥发油 1.8 0.291±0.063*** 3.90±0.849***
化橘红总黄酮 6.0 0.215±0.044 2.87±0.59
化橘红总多糖 20.0 0.223±0.050 2.99±0.67
金荞麦片 0.004片/只 0.247±0.023** 3.30±0.31**
**p＜0.01，与阴性对照组比
注：化橘红各给药组剂量均相当于0.2g生药/kg小鼠。
上述实验结果表明，化橘红挥发油具有良好的止咳化痰作用，是化橘红中具有止咳化痰作用的必要活性成分。
【具体实施方式】
实施例1
化橘红挥发油的制备：称取化橘红药材300g(粉碎成粗颗粒)，加10倍量水浸泡过夜，在挥发油提取器中提取挥发油6小时，收集油水混合液，乙醚萃取，回收乙醚，得化橘红挥发油0.4ml。
实施例2
化橘红挥发油β-环糊精包合物的制备：称取β-环糊精6～12g，加入等量蒸馏水，用研棒顺时针搅匀，将化橘红挥发油1ml(已用0.8ml95％乙醇溶解)逐滴加入，边加边顺时针搅拌，加完后继续搅拌30min至近干，于40℃下真空干燥，得β-环糊精包合物6～12g。
实施例3
化橘红挥发油制剂：取化橘红挥发油β-环糊精包合物10g，加淀粉90g，混合均匀，制粒后真充胶囊或制成片剂。
实施例4
化橘红挥发油制剂：取化橘红挥发油β-环糊精包合物15g，加淀粉85g，混合均匀，制粒后真充胶囊或制成片剂。
实施例5
化橘红挥发油制剂：取化橘红挥发油β-环糊精包合物20g，加淀粉80g，混合均匀，制粒后真充胶囊或制成片剂。
实施例6
化橘红挥发油制剂：取化橘红挥发油β-环糊精包合物30g，加淀粉70g，混合均匀，制粒后真充胶囊或制成片剂。
参考文献：
1、中华人民共和国药典委员会.《中华人民共和国药典》2000年版一部[S].北京：化学工业出版社，2000：56-57
2、周荣汉，等.药用植物化学分类学[S]，1988：87
3、周博文，胡文雅，吴俊景.化州橘红多糖的药用研究.中国药学杂志[J]；1993，28(3)：135-136
4、徐国钧，徐珞珊，王峥涛主编.常用中药材品种整理和质量研究南方协作组(第四册)[S]，福州：福建科学技术出版社，2001，437-462