灰白链霉菌 【技术领域】
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种具有杀虫作用的微生物。
背景技术
蚜虫(Aphis medicaginis)、螨虫(Tetranychus cinnabarius)、黏虫(Leneaniaseparata)等害虫是农作物的主要害虫。因此，抑制上述害虫是非常重要的。
【发明内容】
本发明的目的是提供一种其发酵液具有杀虫作用的微生物—灰白链霉菌。
其发酵液还对白色念珠菌，枯草芽孢杆菌有抗菌活性。
本发明所述的灰白链霉菌命名为灰白链霉菌Streptomyces griseoalbus YIM30823，保藏编号为CCTCC NO：M203014。
本发明所述的灰白链霉菌系从我国云南中甸采集的土壤样品中分离得到。现保藏在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2003年2月14日，保藏编号为CCTCC NO：M203014。
本发明所述的链霉菌在大多数培养基上生长良好，气生菌丝灰白，白色，基内菌丝橙黄色至黄褐色。孢子链螺旋状。孢子短杆状，孢子表面有皱折。明胶液化、牛奶凝固、胨化呈阳性，淀粉水解、硝酸还原呈阴性，不产生硫化氢，形成黑色素。能利用葡萄糖、半乳糖、果糖木糖、棉子糖、鼠李糖、蜜二糖、甜醇、甘油、甘露醇、山梨醇、醋酸钠。细胞壁含有L-二氨基庚二酸和甘氨酸，全细胞水解物无特征性糖。
培养条件：
(一)斜面培养条件：培养基：葡萄糖4g；酵母膏4g；麦芽膏5g；复合维生素3.75mg/L；琼脂15g；蒸馏水水1000ml，pH7.2；培养温度为28℃，培养时间为1周。
(二)种子培养条件：从斜面挑取部分菌丝体接入种子液中，摇瓶培养36小时。种子培养基：糊精120g；大豆粉40g；酵母膏2g；色氨酸0.5g；β-丙氨酸5g；硫酸镁0.5g；磷酸铵0.2g；蒸馏水1000ml，pH7.2，培养温度为28℃。
(三)发酵培养条件：按10％的接种量接到种子培养基中，摇瓶培养6天。培养基：大豆粉10g；葡萄糖10g；蛋白胨3g；氯化钠2.5g；碳酸钙2g；蒸馏水1000ml，pH7.2，培养温度为28℃。得到发酵液。
本发酵液杀虫活性筛选流程图：
20ml发酵液→1∶1的乙醇抽提4hr→离心→浓缩→用水分别稀释20，200，2000倍。
选用不同的害虫活体，直接喷洒后于12，24，36，48hr观察死亡情况。
本发酵液杀虫活性筛选结果：
菌株YIM30823的发酵液对蚜虫(Aphis medicaginis)、螨虫(Tetranychuscinnabarius)、黏虫(Leneania separata)等三种害虫的杀虫率均为100％。
本菌株的发酵液具有杀灭蚜虫(Aphis medicaginis)、螨虫(Tetranychuscinnabarius)、黏虫(Leneania separata)等害虫的作用，具有从中开发出新型、高效、无毒的天然药物的巨大潜力。
本发明所述的链霉菌命名为灰白链霉菌，已于2003年2月14日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏单位简称；CCTCC，保藏编号为M203014，保藏单位地址：武汉，珞珈山，武汉大学内，邮政编码430072。
【附图说明】
图1为本发明所述的灰白链霉菌在酵母膏-麦芽膏培养基上的电镜照片。
图2为本发明所述的灰白链霉菌地培养特征。
图3为本发明所述的灰白链霉菌的生理生化特征。
图4为本发明所述的灰白链霉菌的碳氮源利用情况。
图5为本发明所述的灰白链霉菌和部分相关菌在GenBank数据库的16SrDNA序列及登录号。
图6为本发明所述的灰白链霉菌及部分相关菌株依据16S rDNA序列构建的系统发育树。
【具体实施方式】
实施例：
从我国云南中甸采集的土壤样品，在实验室中按下列条件培养，即可获得本发明所述的灰白链霉菌。
(一)培养条件：
1.斜面培养条件：培养基：葡萄糖4g；酵母膏4g；麦芽膏5g；复合维生素3.75mg/L；琼脂15g；蒸馏水水1000ml，pH7.2；培养温度为28℃，培养时间为1周。
2.种子培养条件：从斜面挑取部分菌丝体接入种子液中，摇瓶培养36小时。种子培养基：糊精120g；大豆粉40g；酵母膏2g；色氨酸0.5g；β-丙氨酸5g；硫酸镁0.5g；磷酸铵0.2g；蒸馏水1000ml，pH7.2，培养温度为28℃。
按以下发酵培养条件培养，即可获得发酵液：按10％的接种量接到种子培养基中，摇瓶培养6天。培养基：大豆粉10g；葡萄糖10g；蛋白胨3g；氯化钠2.5g；碳酸钙2g；蒸馏水1000ml，pH7.2，培养温度为28℃。
本发明所述链霉菌的16S rDNA部分序列分析如下：
GAACGCTGGCGGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGTGAACCGGCTTCGGCTGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGT
AACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATATTACCTGGTGAGGCAT
CTTACTGGGTGGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTGATGGCCTACCAAGG
CGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCA
GTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTC
TTTCAGCAGGGAAGAAGCGAGAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATAC
GTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGATGTGAAAGCCCGGG
GCTTAACCCCGGGTCTGCATTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAA
TGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGG
AGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGTTGGGAACTAGGTGTGGGCGACATTCCACGTTGTCCGT
GCCGCAGCTAACGCATTAAGTTCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGC
ACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATACACCGGAAACATCCAG
AGATGGGTGCCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTC
CCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTCTGTGTTGCCAGCATGCCCTTCGGGGTGATGGGGACTCACAGGAGACTGCCGGGGTC
AACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTA
CAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCC
ATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTC
ACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCCTTGTGGGAGGGAGTCGTCGAAGGTGGGACTGGCGAT
TGGGACGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACGGAAGGA