一种灰树花蛋白聚糖的制备方法 所属技术领域：
本发明涉及一种食药用菌蛋白聚糖的制备方法，尤其是一种灰树花蛋白聚糖的制备方法。
背景技术：
灰树花蛋白聚糖具有免疫活性与抗肿瘤活性。目前已有的制备方法：热水提取灰树花得水提取液——将水提取液经醇沉——沉淀物经脱游离蛋白——经酸提取后的残余物用碱溶解——碱溶液经醇沉后——脱蛋白——醇沉——沉淀物即为蛋白聚糖。该法的提取得率较低，大约在千分之二到千分之五；反复沉淀工序繁锁；水提取后的灰树花中的碱溶物中部分也有生物活性，未提取。(Nanba，1987；Chem.Parm.Bull 35(3)1162-1168；The Chemical Structure of anAntitumor Polysaccharide in Fruit Bodies of Grifola frondosa)。国内对灰树花蛋白聚糖的研究还少有开展，更未有对其制备方法的研究与报道。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题在于提供一种灰树花蛋白聚糖的制备方法，以解决现有技术中蛋白聚糖提取得率低、提取工序繁琐、提取不完全的缺点。
本发明的原理：一种双提取并结合超滤技术的方法，通过先用热水提取灰树花子实体，后用一定浓度的碱性溶液提取灰树花子实体，并对其提取液分别利用超滤方法，截留获得水溶性与碱溶性的灰树花蛋白聚糖溶液，经浓缩、干燥(喷雾或真空干燥、冷冻干燥)得到灰树花蛋白聚糖干粉。该方法不仅获得水提物中的蛋白聚糖，还能获得碱溶性蛋白聚糖；同时减少了灰树花蛋白聚糖制备的步骤。
本发明的目的是提供一种灰树花蛋白聚糖的制备方法，该方法包括如下步骤：
①用5～50倍体积的水浸没灰树花子实体，在80～100℃条件下，保温1～10小时；
②重复提取1～5次；
③提取液经粗过滤后用10～100万道尔顿的中空纤维超滤膜进行超滤，收集被截留的部分为水溶性蛋白聚糖溶液；
④水提后的灰树花子实体加入10～50倍体积地碱溶液，在10-50℃条件下，保温1～12小时；
⑤重复提取1～5次；
⑥提取液经粗过滤后用10～100万道尔顿的中空纤维超滤膜进行超滤，收集被截留的部分为碱溶性蛋白聚糖溶液；
⑦将水溶性与碱溶性的蛋白聚糖溶液一起浓缩干燥，即得到灰树花蛋白聚糖干粉。
优选的提取步骤为：
①用10～30倍体积的水浸没灰树花子实体，在90～100℃条件下，保温2～4小时；
②重复提取1～3次；
③提取液经粗过滤后用10～75万道尔顿的中空纤维超滤膜进行超滤，收集被截留的部分为水溶性蛋白聚糖溶液；
④水提后的灰树花子实体加入10～30倍体积的碱溶液，在20-30℃条件下，保温4～8小时；
⑤重复提取2～4次；
⑥提取液经粗过滤后用10～75万道尔顿的中空纤维超滤膜进行超滤，收集被截留的部分为碱溶性蛋白聚糖溶液；
⑦将水溶性与碱溶性的蛋白聚糖溶液一起浓缩干燥，即得到灰树花蛋白聚糖干粉。
其中步骤④中所述的碱溶液为重量百分比为0.5％-10％的氢氧化钠或氢氧化钾中的一种或两种。
优选的碱溶液为重量百分比为2％-6％的氢氧化钠溶液。
本发明的优点在于：
①不仅提取了水溶性蛋白聚糖，而且提取了碱溶性蛋白聚糖，使蛋白聚糖的得率提高，适合大规模生产；
②步骤简单，易操作，耗时短；
③尽可能多地获得了灰树花中的活性蛋白聚糖，蛋白聚糖的生物活性提高，利用率提高。
④获得的蛋白聚糖具有抗肿瘤、提高生物体免疫活性的作用，可用于制备抗肿瘤、提高免疫活性的制剂。
实施例一：
①用10倍体积的水浸没灰树花子实体，在80℃条件下，保温2个小时；
②重复提取2次；
③提取液经粗过滤后用10万道尔顿的中空纤维超滤膜进行超滤，收集被截留的部分为水溶性蛋白聚糖溶液；
④水提后的灰树花子实体加入10倍体积的重量百分比浓度为6％的氢氧化钾碱溶液，在10℃条件下，保温12小时；
⑤重复提取1次；
⑥提取液经粗过滤后用10万道尔顿的中空纤维超滤膜进行超滤，收集被截留的部分为碱溶性蛋白聚糖溶液；
⑦将水溶性与碱溶性的蛋白聚糖溶液一起浓缩干燥，即得到灰树花蛋白聚糖干粉。
实施例二：
①用20倍体积的水浸没灰树花子实体，在90℃条件下，保温1个小时；
②重复提取3次；
③提取液经粗过滤后用50万道尔顿的中空纤维超滤膜进行超滤，收集被截留的部分为水溶性蛋白聚糖溶液；
④水提后的灰树花子实体加入20倍体积的重量百分比浓度为4％的氢氧化钠碱溶液，在20℃条件下，保温8小时；
⑤重复提取2次；
⑥提取液经粗过滤后用10万道尔顿的中空纤维超滤膜进行超滤，收集被截留的部分为碱溶性蛋白聚糖溶液；
⑦将水溶性与碱溶性的蛋白聚糖溶液一起浓缩干燥，即得到灰树花蛋白聚糖干粉。
实施例三：
①用40倍体积的水浸没灰树花子实体，在100℃条件下，保温2个小时；
②重复提取1次；
③提取液经粗过滤后用50万道尔顿的中空纤维超滤膜进行超滤，收集被截留的部分为水溶性蛋白聚糖溶液；
④水提后的灰树花子实体加入40倍体积的2％氢氧化钠碱溶液，在30℃条件下，保温4小时；
⑤重复提取5次；
⑥提取液经粗过滤后用50万道尔顿的中空纤维超滤膜进行超滤，收集被截留的部分为碱溶性蛋白聚糖溶液；
⑦将水溶性与碱溶性的蛋白聚糖溶液一起浓缩干燥，即得到灰树花蛋白聚糖干粉。