LH－RH肽类似物、其用途及含有它们的药物组合物.pdf

现已发现，能提高一些激动剂生物活性的仅有的其它个别氨基酸修
饰是在7位。这样，LH-RH本身的Leu7的N-甲基化并不能提高其效价，
但是可提高一些6位带有特定D-氨基酸如D-Trp(Karten和River，
1986，同上)的合成的有效激动剂的活性；而且，带电的且比亮氨酸大的
L-氨基酸(Ser(Obut)、Asp(O-But)、Glu(O-But)、BocLys)可一定程度
上增强[des-Gly10；Pro9-N-乙酰胺]-LH-RH的活性，但使6位修饰的激动
剂的效价降低。(Karten和River，1986，同上)。

就拮抗剂而言，除Pro9外其它所有位置上大量修饰及其之间的大量
组合，在抑制内源性LH-RH活性方面取得了不同程度的成功。(Dutta，
未来药品(Drugs of the Future)，1988，13(8)，761-787；Karten和
River，内分泌综述，1986，7(1)，44-66)。例如，抗排卵肽是一种标准
有效的LH-RH拮抗剂，其由1、2、3、5、6、8和10位的氨基酸发生改
变得到。Leu7的N-甲基化引起效价降低，据报道在该位置仅有将Leu7替
换成Trp7或Phe7这样的改变可提高效价(最高2倍)。

现在已经发现用强疏水性氨基酸替换Leu7可提高LH-RH自身或已
知的高效LH-RH类似物(激动剂或拮抗剂)的活性。

特别地，已经发现用金刚烷基丙氨酸(Ada)或新戊基甘氨酸(Npg)
替换Leu7提高了LH-RH自身的活性，且有可能获得与LH-RH受体有
高亲和力的类似物。更特别地，本发明中[Npg7]-LH-RH类似物是高效的
体内LH-RH激动剂/拮抗剂。

所以，根据本发明的一方面，提供了与LH-RH受体有高亲和力的
LH-RH肽类似物，其中含有7-20个碳原子的非芳香族疏水性氨基酸，
如Ada7或优选地Npg7替换了Leu7。优选地，这些肽类似物及其药学可
接受的盐有分子式(SEQ ID NO：1)：

            A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z  (I)

其中：

--A1是pGlu；D-pGlu；Sar；AcSar；Pro或其衍生物如AcPro、
ForPro、OH-Pro、Ac-OH-Pro、脱氢-Pro或Ac-脱氢-Pro；Ser；D-Ser；
Ac-D-Ser；Thr；D-Thr；Ac-D-Thr；或可被酰化的芳香族D-氨基酸，
如D-Phe、D-HPhe、D-Tyr、D-Trp、D-Nal、D-1Nal、D-二苯基-Ala、
D-Bal、D-Pal、D-4Pal或D-Qal，其中D-Phe和D-Trp可由一个或多个
卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A2是价键；His；或芳香族D-氨基酸，如D-Phe、D-HPhe、D-Tyr、
D-Trp、D-Nal、D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-Bal、D-Pal、D-4Pal或D-Qal，
其中D-Phe和D-Trp可被一个或多个卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷
氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A3是芳香族L-或D-氨基酸如Phe、HPhe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、
二苯基-Ala、Bal、Pal、4Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个
卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A4是Ala、Ser、D-Ser、MeSer、Ser(OBut)、Ser(OBzl)或Thr；

--A5是芳香族L-氨基酸如Phe、HPhe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、二
苯基-Ala、Bal、Pal、4Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个卤
素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；或碱性的L-
或D-氨基酸如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、Cit、HCit、APhe或ACha，
其中Arg和HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基在一个或两个
氮原子上N-取代，Orn、Lys、HLys、APhe和ACha可以被一个或两个
(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被烟酰基、异烟酰基、6-
甲基-烟酰基、甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰基、呋喃基、甘氨酰-
呋喃基、呋喃基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-羰基、吡啶甲酰基、6-
甲基-吡啶甲酰基、莽草基、莽草基-甘氨酰基、Fmoc或Boc基N-取代；

--A6是Glu；D-Pro；D-Ser；D-Thr；D-Cys；D-Met；D-Pen；D-
(S-Me)Pen；D-(S-Et)Pen；D-Ser(OBut)；D-Asp(OBut)；D-Glu
(OBut)；D-Thr(OBut)；D-Cys(OBut)；D-Ser(OR1)，其中R1是
糖基；氮杂-氨基酸如氮杂甘氨酸或氮杂丙氨酸；可在咪唑环上由(C1-C6)
烷基或(C2-C7)酰基取代的D-His；带有(C1-C8)烷基或(C3-C6)环
烷基侧链的脂肪族D-氨基酸，如D-Ala、D-Abu、D-Aib、D-3Aib、D-Val、
D-Nva、D-Leu、D-Ile、D-Tle、D-Nle、D-Hol、D-Npg、D-CPa、D-Cpa、
D-Cba或D-Cha；芳香族D-氨基酸，如D-Phe、D-HPhe、D-Tyr、D-Trp、
D-Nal、D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-蒽基-Ala、D-菲基-Ala、D-二苯甲基
-Ala、D-芴基-Ala、D-Bal、D-Pal、D-4Pal或D-Qal，其中D-Phe和D-
Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟
甲基取代；D-环己二烯基-Gly；D-萘烷基-Ala；D-全氢化二苯基-Ala；或
碱性的L-或D-氨基酸，如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、Cit、HCit、
APhe或ACha，其中Arg和HArg可被一个(C1-C6)烷基或一个(C3-
C6)环烷基在一个或两个氮原子上N-取代，Orn、Lys、HLys、APhe和
ACha可以被一个或两个(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基N-取代或被
烟酰基、异烟酰基、6-甲基-烟酰基、甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰
基、呋喃基、甘氨酰-呋喃基、呋喃基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-
羰基、吡啶甲酰基、6-甲基-吡啶甲酰基、莽草基、莽草基-甘氨酰基、Fmoc
或Boc基N-取代；

--HAA是含有7-20个碳原子的非芳香族疏水性氨基酸；

--A7是碱性的L-或D-氨基酸，如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、
Cit、HCit、APhe或ACha，其中Arg或HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)
环烷基在一个或两个氮原子上N-取代，Orn、Lys、HLys、APhe和ACha
可以被一个或两个(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被烟酰
基、异烟酰基、6-甲基-烟酰基、甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰基、
呋喃基、甘氨酰-呋喃基、呋喃基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-羰基、
吡啶甲酰基、6-甲基-吡啶甲酰基、莽草基、莽草基-甘氨酰基、Fmoc或
Boc基N-取代；

--Z是GlyNH2；D-AlaNH2；azaGlyNH2；或-NHR2基，其中R2是
可被羟基或一个或几个氟原子取代的(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基或
选自吗啉基、吡咯烷基和哌啶基的杂环基；

在这些肽类似物中，HAA优选为Ada或Npg，它们可被(C1-C4)
烷基N-α-取代，该烷基任选地被一个或几个氟原子取代，特别优选Npg。

优选的一组肽类似物(1)及其药学可接受的盐包含下列分子式的肽
(SEQ ID NO：6)：

         A1-A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z   (I’)

其中：

--A1是pGlu；D-pGlu；Sar；AcSar；Pro或其衍生物，如AcPro、
ForPro、OH-Pro、Ac-OH-Pro、脱氢-Pro或Ac-脱氢-Pro；Ser；D-Ser；
Ac-D-Ser；Thr；D-Thr；Ac-D-Thr；或可被酰化的芳香族D-氨基酸，
如D-Phe、D-Tyr、D-Trp、D-Nal、D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-Bal、D-Pal、
或D-Qal，其中D-Phe和D-Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)烷基、
(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A2是价键；His；或芳香族D-氨基酸，如D-Phe、D-Tyr、D-Trp、
D-Nal、D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-Bal、D-Pal、或D-Qal，其中D-Phe
和D-Trp可被一个或多个卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基
或三氟甲基取代；

--A3是芳香族L-或D-氨基酸，如Phe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、二
苯基-Ala、Bal、Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)
烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A4是Ala、Ser、D-Ser、MeSer、Ser(OBut)、Ser(OBzl)或Thr；

--A5是芳香族L-氨基酸，如Phe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、二苯基-
Ala、Bal、Pal、或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)
烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；或碱性的L-或D-氨基酸
如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、Cit、HCit、APhe或ACha，其中
Arg和HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基在一个或两个氮原子
上N-取代，Orn、Lys、HLys、APhe和ACha可以被一个或两个(C1-C6)
烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被烟酰基、异烟酰基、6-甲基-烟酰基、
甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰基、呋喃基、甘氨酰-呋喃基、呋喃
基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-羰基、吡啶甲酰基、6-甲基-吡啶甲酰
基、莽草基、莽草基-甘氨酰基、Fmoc或Boc基N-取代；

--A6是Gly；D-Pro；D-Ser；D-Thr；D-Cys；D-Met；D-Pen；D-
(S-Me)Pen；D-(S-Et)Pen；D-Ser(OBut)；D-Asp(OBut)；D-Glu
(OBut)；D-Thr(OBut)；D-Cys(OBut)；D-Ser(OR1)，其中R1是
糖基；氮杂-氨基酸，如氮杂Gly或氮杂Ala；D-His，其可在咪唑环上由
(C1-C6)烷基或(C2-C7)酰基取代；带有(C1-C8)烷基或(C3-C6)环
烷基侧链的脂肪族D-氨基酸，如D-Ala、D-Abu、D-Aib、D-3Aib、D-Val、
D-Nva、D-Leu、D-Ile、D-Tle、D-Nle、D-Hol、D-Npg、D-CPa、D-Cpa、
D-Cba或D-Cha；芳香族D-氨基酸，如D-Phe、D-Tyr、D-Trp、D-Nal、
D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-蒽基-Ala、D-菲基-Ala、D-二苯甲基-Ala、D-
芴基-Ala、D-Bal、D-Pal或D-Qal，其中D-Phe和D-Trp可由一个或多
个卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；D-环己
二烯基-Gly；D-萘烷基-Ala；D-全氢化二苯基-Ala；或碱性的L-或D-氨
基酸，如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、Cit、HCit、APhe或ACha，
其中Arg和HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基在一个或两个
氮原子上N-取代，Orn、Lys、HLys、APhe和ACha可以被一个或两个
(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被烟酰基、异烟酰基、6-
甲基-烟酰基、甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰基、呋喃基、甘氨酰-
呋喃基、呋喃基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-羰基、吡啶甲酰基、6-
甲基-吡啶甲酰基、莽草基、莽草基-甘氨酰基、Fmoc或Boc基N-取代；

--Npg可被一个(C1-C4)烷基N-α-取代，其中烷基可被一个或几
个氟原子取代。

--A7是碱性的L-或D-氨基酸，如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、
Cit、HCit、APhe或ACha，其中Arg或HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)
环烷基在一个或两个氮原子上N-取代，Orn、Lys、HLys、APhe和ACha
可以被一个或两个(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被烟酰
基、异烟酰基、6-甲基-烟酰基、甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰基、
呋喃基、甘氨酰-呋喃基、呋喃基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-羰基、
吡啶甲酰基、6-甲基-吡啶甲酰基、莽草基、莽草基-甘氨酰基、Fmoc或
Boc基N-取代；

--Z是GlyNH2；D-AlaNH2；azaGlyNH2；或-NHR2基，其中R2是可
被羟基或一个或几个氟原子取代的(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基或选
自吗啉基、吡咯烷基和哌啶基的杂环基；

本说明书中，术语“(C1-C4)烷基”表示甲基、乙基、正-丙基、异丙
基、正丁基、异丁基，仲丁基和叔丁基。

术语“(C1-C6)烷基”表示甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正丁基、
异丁基，仲丁基和叔丁基、正戊基、异戊基、仲戊基、叔戊基和己基。

术语“(C1-C8)烷基”表示甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正丁基、
异丁基，仲丁基和叔丁基、正戊基、异戊基、仲戊基、叔戊基、己基、
庚基和辛基。

术语“(C1-C4)烷氧基”表示-OR基，其中R为(C1-C4)烷基。

术语“(C2-C7)酰基”表示-COR基，其中R为(C1-C6)烷基。

术语“(C3-C6)环烷基”表示环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

术语“糖基”表示D-或L-戊糖或己糖及其氨基衍生物。

术语“LH-RH类似物”表示LH-RH序列中至少有一个氨基酸经修饰
的肽。

术语“非芳香族疏水性氨基酸”表示带有5-18，更优选为5-11个碳原
子侧链(包括从β碳开始的)的线性、支链或环状氨基酸；合适的氨基
酸的疏水性质可如下定义：即与Leu相比，logP(P：在正辛醇/水系统
的分配系数)或Hansch疏水性常数π至少有0.5的正差。

在本说明书和权利要求中，采用以下缩写：

Abu：2-氨基丁酸                 Ac：乙酰基

ACha：氨基环己基丙氨酸          Aib：2-氨基异丁酸

3Aib：3-氨基异丁酸              Ala：丙氨酸

AlaNH2：丙氨酰胺               APhe：对氨基苯丙氨酸

Arg：精氨酸                     Asp：天冬氨酸

azaAla：氮杂丙氨酸              azaGly：氮杂甘氨酸

azaGlyNH2：氮杂甘氨酰胺        Bal：苯并噻吩丙氨酸

Boc：叔-丁氧基羰基              Cba：环丁基丙氨酸

Cha：环己基丙氨酸               Cit：瓜氨酸

CPa：环丙基丙氨酸               Cpa：环戊基丙氨酸

Fmoc：芴基甲氧羰基              For：甲酰基

Glu：谷氨酸                     Gly：甘氨酸

GlyNH2：甘氨酰胺               HArg：高精氨酸

HCit：高瓜氨酸                  His：组氨酸

HLys；高赖氨酸                  Hol：高亮氨酸

Ile：异亮氨酸                   IprLys：Nε-异丙基赖氨酸

Leu：亮氨酸                     Lys：赖氨酸

MeSer：N-甲基丝氨酸             Met：蛋氨酸

Nal：3-(2-萘基)丙氨酸           1-Nal：3-(1-萘基)丙氨酸

NEt：N-乙酰胺                   NicLys：Nε-烟酰赖氨酸

Nle：正亮氨酸                   Npg：新戊基甘氨酸

Nva：正缬氨酸                   OBut：叔丁氧基

OBzl：苯甲酯                    Orn：鸟氨酸

Pal：3-(3-吡啶基)丙氨酸         pCIPhe：3-(4-氯苯基)丙氨酸

Pen：青霉胺                     pGlu：焦谷氨酸

Phe：苯丙氨酸                   Pro：脯氨酸

Qal：3-(3-喹啉基)丙氨酸         Sar：肌氨酸

Ser：丝氨酸                     (S-Me)Pen：S-甲基-青霉胺

(S-Et)Pen：S-乙基-青霉胺        Thr：苏氨酸

Tle：叔-亮氨酸                  Trp：色氨酸

Tyr：酪氨酸                     Val：缬氨酸

Ada：金刚烷基丙氨酸             HPhe：高苯丙氨酸

MeNpg：N-甲基新戊基甘氨酸       4-Pal：3-(4-吡啶基)丙氨酸

根据本发明，优选的一组具有LH-RH激动剂活性的肽类似物包括
下列分子式的肽(SEQ ID NO：2)及其药学可接受的盐：

A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z  (Ha)

其中：

--A1是pGlu、Sar或AcSar；

--A2是His；

--A3是芳香族L-氨基酸如Phe、HPhe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、二
苯基-Ala、Bal、Pal、4Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个卤
素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A4是Ala、Ser、D-Ser、MeSer、Ser(OBut)、Ser(OBzl)或Thr；

--A5是芳香族L-氨基酸如Phe、HPhe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、二
苯基-Ala、Bal、Pal、4Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个卤
素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A6是Gly；D-Pro；D-Ser；D-Thr；D-Cys；D-Met；D-Pen；D-
(S-Me)Pen；D-(S-Et)Pen；D-Ser(OBut)；D-Asp(OBut)；D-Glu
(OBut)；D-Thr(OBut)；D-Cys(OBut)；D-Ser(oR1)，其中R1是
糖基；氮杂-氨基酸，比如氮杂甘氨酸或氮杂丙氨酸；D-His，其可在咪唑
环上由(C1-C6)烷基或(C1-C7)酰基取代；带有(C1-C8)烷基或(C3-
C6)环烷基侧链的脂肪族D-氨基酸，如D-Ala、D-Abu、D-Aib、D-3Aib、
D-Val、D-Nva、D-Leu、D-Ile、D-Tle、D-Nle、D-Hol、D-Npg、D-CPa、
D-Cpa、D-Cba或D-Cha；芳香族D-氨基酸如D-Phe、D-HPhe、D-Tyr、
D-Trp、D-Nal、D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-蒽基-Ala、D-菲基-Ala、D-
二苯甲基-Ala、D-芴基-Ala、D-Bal、D-Pal、D-4Pal或D-Qal，其中D-
Phe和D-Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝
基或三氟甲基取代；D-环己二烯基-Gly；D-萘烷基-Ala；D-全氢化二苯
基-Ala；或碱性的D-氨基酸，如D-Arg、D-HArg、D-Orn、D-Lys、D-
HLys、D-Cit、D-HCit、D-APhe或D-ACha，其中D-Arg和D-HArg可
被(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基在一个或两个氮原子上N-取代，D-
Orn、D-Lys、D-HLys、D-APhe和D-ACha可以被一个或两个(C1-C6)
烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被Fmoc或Boc基N-取代；

--HAA如(I)限定；

--A7是碱性的L-氨基酸如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、Cit、HCit、
APhe或ACha；

--Z是GlyNH2；azaGlyNH2；或-NHR2基，其中R2是可被羟基或一
个或几个氟原子取代的(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基，或选自吗啉基、
吡咯烷基和哌啶基的杂环基；

在这些肽类似物中，HAA优选为Ada或Npg，它们可被(C1-C4)
烷基N-α-取代，该烷基任选地被一个或几个氟原子取代，特别优选为
Npg。

一组优选的肽类似物(IIa)包含下式的肽(SEQ ID NO：7)及其
药学可接受的盐：

    A1-A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z  (II’a)

其中：

--A1是pGlu、Sar或AcSar；

--A2是His；

--A3是芳香族L-氨基酸，如Phe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、二苯基-
Ala、Bal、Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)
烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A4是Ala、Ser、D-Ser、MeSer、Ser(OBut)、Ser(OBzl)或Thr；

--A5是芳香族L-氨基酸，如Phe、Tyr、Trp、，Nal、1Nal、二苯基
-Ala、Bal、Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)
烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A6是Gly；D-Pro；D-Ser；D-Thr；D-Cys；D-Met；D-Pen；D-
(S-Me)Pen；D-(S-Et)Pen；D-Ser(OBut)；D-Asp(OBut)；D-Glu
(OBut)；D-Thr(OBut)；D-Cys(OBut)；D-Ser(OR1)，其中R1是
糖基；氮杂-氨基酸，如氮杂甘氨酸或氮杂丙氨酸；D-His，其可在咪唑环
上由(C1-C6)烷基或(C2-C7)酰基取代；带有(C1-C8)烷基或(C3-C6)
环烷基侧链的脂肪族D-氨基酸，如D-Ala、D-Abu、D-Aib、D-3Aib、D-Val、
D-Nva、D-Leu、D-Ile、D-Tle、D-Nle、D-Hol、D-Npg、D-CPa、D-Cpa、
D-Cba或D-Cha；芳香族D-氨基酸，如D-Phe、D-Tyr、D-Trp、D-Nal、
D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-蒽基-Ala、D-菲基-Ala、D-二苯甲基-Ala、D-
芴基-Ala、D-Bal、D-Pal或D-Qal，其中D-Phe和D-Typ可由一个或多
个卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；D-环己
二烯基-Gly；D-萘烷基-Ala；D-全氢化二苯基-Ala；或碱性的D-氨基酸，
如D-Arg、D-HArg、D-Orn、D-Lys、D-HLys、D-Cit、D-HCit、D-APhe
或D-ACha，其中D-Arg和D-HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)环
烷基在一个或两个氮原子上N-取代，D-Orn、D-Lys、D-HLys、D-APhe
和D-ACha可以被一个或两个(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，
或被Fmoc或Boc基N-取代；

--Npg可被(C1-C4)烷基N-α-取代，其中烷基可被一个或几个氟原
子取代。

-A7是碱性的L-氨基酸，如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、Cit、
HCit、APhe或Acha；

--Z是GlyNH2；azaGlyNH2；或-NHR2基，其中R2是可被一个羟基
或一个或几个氟原子取代的(C1-C4)烷基、(C3-C6)环烷基或选自吗啉
基、吡咯烷基和哌啶基的杂环基；

具有LH-RH拮抗剂活性的根据本发明的另一组优选的肽类似物包括
下列分子式的肽(SEQ ID NO：3)及其药学可接受的盐：

    A1-A2-A3-A4-A5-A6-HAA-A7-Pro-Z    (IIb)

其中：

--A1是pGlu；D-pGlu；Sar；AcSar；Pro或其衍生物，如AcPro、
ForPro、OH-Pro、Ac-OH-Pro、脱氢-Pro或Ac-脱氢-Pro；Ser；D-Ser；
Ac-D-Ser；Thr；D-Thr；Ac-D-Thr；或可被酰化的芳香族D-氨基酸，
如D-Phe、D-HPhe、D-Tyr、D-Trp、D-Nal、D-1Nal、D-二苯基-Ala、
D-Bal、D-Pal、D-4Pal或D-Qal，其中D-Phe和D-Trp可由一个或多个
卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A2是价键；或芳香族D-氨基酸，如D-Phe、D-HPhe、D-Tyr、D-
Trp、D-Nal、D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-Bal、D-Pal、D-4Pal或D-Qal，
其中D-Phe和D-Trp可被一个或多个卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷
氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A3是芳香族L-或D-氨基酸，如Phe、HPhe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、
二苯基-Ala、Bal、Pal、4Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个
卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A4是Ala、Ser、D-Ser、MeSer、Ser(OBut)、Ser(OBzl)或Thr；

--A5是芳香族L-氨基酸，如Phe、HPhe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、
二苯基-Ala、Bal、Pal、4Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个
卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；或碱性的
L-或D-氨基酸，如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、Cit、HCit、APhe
或ACha，其中Arg和HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基在一
个或两个氮原子上N-取代，Orn、Lys、HLys、APhe和ACha可以被一
个或两个(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被烟酰基、异烟
酰基、6-甲基-烟酰基、甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰基、呋喃基、
甘氨酰-呋喃基、呋喃基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-羰基、吡啶甲
酰基、6-甲基-吡啶甲酰基、莽草基、莽草基-甘氨酰基、Fmoc或Boc基
N-取代；

--A6是Gly；D-Pro；D-Ser；D-Thr；D-Cys；D-Met；D-Pen；D-
(S-Me)Pen；D-(S-Et)Pen；D-Ser(OBut)；D-Asp(OBut)；D-Glu
(OBut)；D-Thr(OBut)；D-Cys(OBut)；D-Ser(OR1)，其中R1是
糖基；带有(C1-C8)烷基或(C3-C6)环烷基侧链的脂肪族D-氨基酸，
如D-Ala、D-Abu、D-Aib、D-3Aib、D-Val、D-Nva、D-Leu、D-Ile、D-Tle、
D-Nle、D-Hol、D-Npg、D-CPa、D-Cpa、D-Cba或D-Cha；芳香族D-
氨基酸，如D-Phe、D-HPhe、D-Tyr、D-Trp、D-Nal、D-1Nal、D-二苯
基-Ala、D-蒽基-Ala、D-菲基-Ala、D-二苯甲基-Ala、D-芴基-Ala、D-Bal、
D-Pal、D-4Pal或D-Qal，其中D-Phe和D-Trp可由一个或多个卤素、
(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；D-环己二烯基-
Gly；D-萘烷基-Ala；D-全氢化二苯基-Ala；或碱性的L-或D-氨基酸如
Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、Cit、HCit、APhe或ACha，其中Arg
和HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基在一个或两个氮原子上N-
取代，Orn、Lys、HLys、APhe和ACha可以被一个或两个(C1-C6)烷
基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被烟酰基、异烟酰基、6-甲基-烟酰基、
甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰基、呋喃基、甘氨酰-呋喃基、呋喃
基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-羰基、吡啶甲酰基、6-甲基-吡啶甲酰
基、莽草基、莽草基-甘氨酰基、Fmoc或Boc基N-取代；

--HAA如(I)限定；

--A7是碱性的L-或D-氨基酸，如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、
Cit、HCit、APhe或ACha，其中Arg和HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)
环烷基在一个或两个氮原子上N-取代，Om、Lys、HLys、APhe和ACha
可以被一个或两个(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被烟酰
基、异烟酰基、6-甲基-烟酰基、甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰基、
呋喃基、甘氨酰-呋喃基、呋喃基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-羰基、
吡啶甲酰基、6-甲基-吡啶甲酰基、莽草基、莽草基-甘氨酰基，Fmoc或
Boc基N-取代；

--Z是GlyNH2或D-AlaNH2；

在这些肽类似物中，HAA优选为Ada或Npg，它们可被(C1-C4)
烷基N-α-取代，该烷基任选地被一个或几个氟原子取代，特别优选为
Npg。

一组优选的肽类似物(IIb)包含下列分子式的肽(SEQ ID NO：8)
及其药学可接受的盐：

            A1-A2-A3-A4-A5-A6-Npg-A7-Pro-Z   (II′b)

其中：

--A1是pGlu；D-pGlu；Sar；AcSar；Pro或其衍生物如AcPro，
ForPro，OH-Pro，Ac-OH-Pro，脱氢-Pro或Ac-脱氢-Pro；Ser；D-Ser；
Ac-D-Ser；Thr；D-Thr；Ac-D-Thr；或可被酰化的芳香族D-氨基酸，
如D-Phe、D-Tyr、D-Trp、D-Nal、D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-Bal、D-Pal、
或D-Qal，其中D-Phe和D-Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)烷基、
(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A2是价键；或芳香族D-氨基酸如D-Phe、D-Tyr、D-Typ、D-Nal、
D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-Bal、D-Pal或D-Qal，其中D-Phe和D-Trp
可被一个或多个卤素、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基
取代；

--A3是芳香族L-或D-氨基酸，如Phe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、二
苯基-Ala、Bal、Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)
烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；

--A4是Ala、Ser、D-Ser、MeSer、Ser(OBut)，Ser(OBzl)或Thr；

--A5是芳香族L-氨基酸，如Phe、Tyr、Trp、Nal、1Nal、二苯基-
Ala、Bal、Pal或Qal，其中Phe和Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)
烷基、(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；或碱性的L-或D-氨基酸
如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、Cit、HCit、APhe或ACha，其中
Arg和HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基在一个或两个氮原子
上N-取代，Orn、Lys、HLys、APhe和ACha可以被一个或两个(C1-C6)
烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被烟酰基、异烟酰基、6-甲基-烟酰基、
甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰基、呋喃基、甘氨酰-呋喃基、呋喃
基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-羰基、吡啶甲酰基、6-甲基-吡啶甲酰
基、莽草基、莽草基-甘氨酰基、Fmoc或Boc基N-取代；

--A6是Gly；D-Pro；D-Ser；D-Thr；D-Cys；D-Met；D-Pen；D-
(S-Me)Pen；D-(S-Et)Pen；D-Ser(OBut)；D-Asp(OBut)；D-Glu
(OBut)；D-Thr(OBut)；D-Cys(OBut)；D-Ser(OR1)其中R1是糖
基；带有(C1-C8)烷基或(C3-C6)环烷基侧链的脂肪族D-氨基酸，如
D-Ala、D-Abu、D-Aib、D-3Aib、D-Val、D-Nva、D-Leu、D-Ile、D-Tle、
D-Nle、D-Hol、D-Npg、D-CPa、D-Cpa、D-Cba或D-Cha；芳香族D-
氨基酸，如D-Phe、D-Tyr、D-Trp、D-Nal、D-1Nal、D-二苯基-Ala、D-
蒽基-Ala、D-菲基-Ala、D-二苯甲基-Ala、D-芴基-Ala、D-Bal、D-Pal
或D-Qal，其中D-Phe和D-Trp可由一个或多个卤素、(C1-C4)烷基、
(C1-C4)烷氧基、硝基或三氟甲基取代；D-环己二烯基-Gly；D-萘烷基-
Ala；D-全氢化二苯基-Ala；或碱性的L-或D-氨基酸，如Arg、HArg、
Orn、Lys、HLys、Cit、HCit、APhe或ACha，其中Arg和HArg可被
(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基在一个或两个氮原子上N-取代，Orn、
Lys、HLys、APhe和ACha可以被一个或两个(C1-C6)烷基或(C3-C6)
环烷基N-取代，或被烟酰基、异烟酰基、6-甲基-烟酰基、甘氨酰-烟酰基、
烟酰基-氮杂甘氨酰基、呋喃基、甘氨酰-呋喃基、呋喃基-氮杂甘氨酰基、
吡嗪基、吡嗪基-羰基、吡啶甲酰基、6-甲基-吡啶甲酰基、莽草基、莽草
基-甘氨酰基、Fmoc或Boc基N-取代；

--Npg可被(C1-C4)烷基N-α-取代，其中烷基可被一个或几个氟原
子取代。

--A7是碱性的L-或D-氨基酸，如Arg、HArg、Orn、Lys、HLys、
Cit、HCit、APhe或ACha，其中Arg和HArg可被(C1-C6)烷基或(C3-C6)
环烷基在一个或两个氮原子上N-取代，Orn，Lys，HLys，APhe和ACha
可以被一个或两个(C1-C6)烷基或(C3-C6)环烷基N-取代，或被烟酰
基、异烟酰基、6-甲基-烟酰基、甘氨酰-烟酰基、烟酰基-氮杂甘氨酰基、
呋喃基、甘氨酰-呋喃基、呋喃基-氮杂甘氨酰基、吡嗪基、吡嗪基-羰基、
吡啶甲酰基、6-甲基-吡啶甲酰基、莽草基、莽草基-甘氨酰基、Fmoc或
Boc基N-取代；

--Z是GlyNH2或D-AlaNH2；

在具有(IIa)分子式的肽类似物中，特别优选具有下列分子式的肽
及其药学可接受的盐(SEQ ID NO：4)：

      pGlu-His-A3-Ser-Tyr-A6-HAA-Arg-Pro-Z  (IHa)

其中：

--A3和HAA同(IIa)限定的一样；

--A6是Gly；带有(C1-C8)烷基侧链的脂肪族D-氨基酸；或芳香族
D-氨基酸；

--Z是GlyNH2或-NHC2H5。

在具有(IIIa)分子式的肽类似物中，优选那些A3是Trp的肽；在
后者中，特别优选那些HAA是可被N-α甲基化的Npg的肽。

在具有(IIb)分子式的肽中，特别优选下式的肽及其药学可接受的
盐(SEQ ID NO：5)：
Ac-D-Nal-D-pClphe-DPal-Ser-A5-A6-HAA-A7-Pro-D-AlaNH2  (IIIb)

其中：

-A5和A7同以上(IIb)限定的一样；

-A6是Gly或碱性的L-或D-氨基酸；

-HAA同(IIb)限定的一样；

在具有(IIIb)分子式的肽类似物中，优选那些HAA是可被N-α-
甲基化的Npg的肽。

含有药学可接受的酸的盐的例子是那些无机酸的盐，譬如盐酸盐、
氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硼酸盐、硫酸氢盐、磷酸二氢盐或硝酸盐，
和那些有机酸的盐，譬如醋酸盐、草酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、马来
酸盐、延胡索酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐、pamoate、苹果酸盐、抗坏血
酸、苯甲酸盐、对甲苯磺酸盐或萘磺酸盐。

带有药学可接受的碱的盐的例子是那些碱金属或碱土金属的盐，譬
如钠、钾、钙或镁，和那些有机碱的盐，譬如胺、trometamol、N-甲基谷
氨酰胺等。

可用肽化学众所周知的技术如溶液中的肽合成或固相肽合成制备本
发明的肽。一般地，这些技术包括逐步加入一个或多个可被适当保护的
氨基酸以形成肽链。

优选地，用带有N-α-Fmoc保护的逐步固相合成(1，2)的方法合
成本发明的肽。如：在4-甲苯羟胺树脂上(Peninsula实验室，英国)或
在氨甲基树脂上(Peninsula实验室，英国)装配肽。将C末端脯氨酸以
4-(Boc-脯氨酰甲氧基)苯乙酸导入。然后，用三氟乙酸移去Boc保护
基，再用二氯甲烷和二甲基甲酰胺(DMF)冲洗，并用二异丙基乙基胺
中和。使用Fmoc合成方法(2)时也可以使用“Rink”树脂(4-(2｀，4｀-
二甲氧苯基)-Fmoc-氨基甲苯氧基树脂)。

该合成包括装配、裂解和纯化步骤，如下所述：
I.装配

对所有肽而言均采用以下脱保护/偶合过程：

1-DMF洗涤(3次-1分钟)

2-含25％哌啶的DMF(1分钟)

3-含25％哌啶的DMF(2次-15分钟)

4-DMF洗涤(7次-1分钟)

每一步按每克肽树脂15ml溶剂使用。

所有氨基酸(3倍过量)的偶合在BOP、HOBT和DIEA(3)存在
下在DMF中进行。通过水合茚三酮试验(4)来控制每一个偶合步骤的
结束，必要时进行二次偶合。如果在二次偶合后试验仍是阳性的，则树
脂被乙酰化(乙酸酐，10倍过量和DIEA)。

一般地，在脱保护/裂解步骤之前用三氟乙酸(TFA)进行处理。
II.裂解

将肽从树脂上裂解下来，用液态氢氟酸(HF)或TFA处理以完全脱
保护。在清除剂对甲酚和乙二硫醇(用于含色氨酸的肽)的存在下，一
般按每克肽树脂10mlHF或TFA，在0℃分别作用45分钟或2.5小时。

HF蒸发后，反应混合物粗品用乙醚洗涤，溶于TFA，乙醚沉淀，减
压干燥。

需要的话，在HF脱保护前，将肽从树脂上裂解下来，然后用乙胺
处理以酰胺化。(每克肽树脂5ml乙胺，-78℃，20小时)。

如果终产物中有苯基，用TFA进行最终的裂解/脱保护(每克肽树脂
10ml，0℃，2.5小时)。

如下是TFA裂解混合物的组成(用v％表示)如下：

TFA：       83.3％

乙二硫醇：  2.1％

苯硫基甲烷：4.2％

水：        4.2％

苯酚：      6.2％

树脂过滤后，加入大量乙醚将肽从反应混合物中沉淀出来。用乙醚洗
涤几次后，减压干燥肽粗品。
III.纯化

所有肽用反相液相色谱纯化。

每个肽总的纯化过程相同，不过有机溶剂的梯度需根据每个肽的初始
保留时间调整。

纯化的一般条件：

仪器：KRONWALD SPERATIONSTECHNIK，配备Glass柱的中

压液相色谱系统(德国)

固定相：硅胶Bondapack C18(Waters)15-25μm，100

柱体积：40×340mm

洗脱条件：流动相：洗脱液A：0.1％TFA水溶液

          洗脱液B：CH3CN/A60/40(体积)

温度：室温

流速：40ml

检测：紫外210nm

级分：每个级分5ml

用分析型HPLC个别分析含目标化合物的所有级分。合并纯度高于
95％的级分，冷干。假如一次纯化步骤后没有达到所需的纯度，需要的
话，可进行第二次和第三次纯化步骤。除了为了增加分辨度会调整一下
梯度斜率外，第二步和第三步纯化条件同上。

冷干后，所有纯化的肽以其三氟乙酸盐存在。每个肽相应的最终粉
末由分析型HPLC控制。质谱分析测定每个化合物的结构，UV吸收确
定肽的净含量。

依据本发明得到的肽与LH-RH受体有高效亲和力。

按如下方法测定其亲和力：

摘去雌性Sgpraue Dawley大鼠的脑垂体，在25mM HEPES缓冲液
(PH7.4)中用Potter匀浆器搅匀，该缓冲液中含0.32M蔗糖、100μg/l
PMSF(苯甲基磺酰氟)、5.6U/L抑蛋白酶肽和10000U/l杆菌肽。匀浆物
以700g离心10分钟，上清用12,500g再离心30分钟。如上所述在相同
的缓冲液中将沉淀搅匀并离心，但其中不含蔗糖。

所有的匀浆、离心和以后的温育步骤均在4℃进行。

在20-70pM〔125I〕-布舍瑞林的存在下(在1000至2000Ci/mmol
之间，取决于配体批号)，将双份膜级分等分物与浓度逐渐增加的受试化
合物温育2小时。通过经Whatman GF/B玻璃纤维滤膜负压过滤(Brandel
96-孔收集器)终止检测。反复洗涤后，将滤膜放入含闪烁液的计数瓶中
测量125I的放射性。每次实验中，通过残余的特异性结合与受试化合物浓
度的拟合曲线可得出50％抑制率(IC50)。每个化合物至少测定4次。

LH-RH受体测试是通过在存在或不存在1μM未标记布舍瑞林情况
下，用浓度递增的〔125I〕-布舍瑞林进行4次饱和实验来测定非特异性结
合。按Scatchard的方法分析特异性结合数据。在平衡时(温育2小时)，
解离常数(Kd)和与〔125I〕-布舍瑞林结合位点的数目分别为88±6pM
和15.6±2.9pM。

对于每个受试化合物而言，抑制常数(Ki)根据Cheng和Prussof
方程由其IC50计算得来：Ki＝IC50/(1+[放射性配体]/Kd)。为最终表示亲
和力的大小将Ki转换成pKi(＝-logKi)。

LH-RH本身作为天然配体表现出强亲和力，其实验IC50在10nM
范围内，即，pKi约等于8。

所谓的超级激动剂如布舍瑞林、leuprorelin、tryptorelin、组胺瑞林
或deslorelin和拮抗剂(如抗排卵肽)表现出与LH-RH受体更强的结合
力，且IC50在亚纳摩尔级范围，即pKi＞9。

下面的表1给出了本发明的受试肽与LH-RH受体的亲和力：

         表1：与LH-RH受体的亲和力
化合物
  pKi(n)
化合物
  pKi(n)
实施例1
  8.83(3)
实施例14
  9.50(3)
实施例2
  9.61(3)
实施例15
  9.23(3)
实施例3
  9.57(3)
实施例16
  10.17(3)
实施例4
  10.01(3)
实施例17
  9.72(3)
实施例5
  8.86(3)
实施例18
  10.07(3)
实施例6
  9.33(3)
实施例19
  10.11(3)
实施例7
  8.20(3)
LH-RH
  8.04(4)
实施例8
  8.73(3)
Goserelin
  8.58(4)
实施例9
  8.63(3)
抗排卵肽
  9.16(12)
实施例10
  9.64(3)
Leuprorelin
  9.33(4)
实施例11
  9.34(3)
Buserelin
  9.35(108)
实施例12
  9.79(3)
Tryptorelin
  9.85(4)
实施例13
  8.97(3)
Deslorelin
  9.90(4)
组胺瑞林
  9.98(4)

(n)：测定号

依据通式(IIa)的肽在体内对LH-RH受体表现出激动剂的活性，
可刺激脑垂体分泌LH，对男性而言，LH可刺激睾丸分泌睾酮。

给成年雄性Sueprag-Dawley大鼠皮下注射各种剂量的溶于磷酸缓冲
盐液中(PBS)的LH-RH、tryptorelin或leuprorelin或其各自的Npg7
替代Leu7的对应物：实施例1([Npg7]-LH-RH)、实施例6([Npg7]-
leuprorelin)或实施例11([Npg7]-tryptorelin)。两小时后，抽取血样，
用直接放射免疫测试法(Immunotech)测定总血浆睾酮。实施例1具有
LH-RH本身二倍以上的活性，其它化合物的表现象所谓<超级激动剂>，
可以比LH-RH更低的剂量(对数X轴)更强烈的刺激睾酮分泌(图1；
每点8个动物)。这4个超级激动剂在20ng/Kg剂量能同样地最大限度使
睾酮的分泌增高(指数性Y轴值)，但在10ng/Kg剂量时，实施例6和11
分别具有leuprorelin和tryptorelin两倍以上的活性。

在10ng/kg的中间剂量，筛选本发明中用Npg7或Ada7替代Leu7的
几个实施例来检测其激动剂活性(表2和表3)。如果能从Bachem(法
国)或Sigma(法国)得到的话，测试相应的带有Leu7的标准激动剂作
为比较。这六个实施例中同时有Npg7和Ada7修饰的实施例活性较强，
依Leu7对应化合物的不同而活性不同(表2)。有两例用Ada7替代比用
Npg7替代更好(实施例27和28)。相反，在另两个结构中Npg7替代比
Ada7有更强的激动剂活性(实施例6和11)。

诸多发现表明，增加LH-RH类似物7位氨基酸的总的疏水性是增
强体内效价的通用手段。依据分子的其它部分，7位侧链的其它特性如空
间位阻可调节最终的活性。

如以Npg7为例，疏水性的增强与3位和6位的几种改变相当，可产
生与Leuprorelin和Tryptorelin活性范围相近的几种激动剂(实施例5、
9、13、20、21、22或25；表2和表3)。Npg7的N-甲基化也与非常强
的激动剂活性相适应。(实施例23；表3)。

表2：睾酮分泌的刺激
化合物
   剂量(ng/kg)
  总血浆睾酮(nmol/l)
    n
载体(PBS)
      -
     2.7±0.3
    46
[D-Ala6]-LH-RH
实施例3
      10
      10
     6.4±1.9*
     16.7±1.9***
    8
    8
[D-Ala6，Pro9NEt]-LH-RH
实施例4
实施例28
      10
      10
      10
     30.6±7.2***
     33.8±5.8***
     44.9±6.0***
    16
    16
    16
[D-Phe6，Pro9NEt]-LH-RH
实施例10
实施例27
      10
      10
      10
     16.7±4.3***
     23.5±4.0***
     28.0±4.1***
    16
    16
    16
Tyrptorelin
实施例6
实施例29
      10
      10
      10
     33.5±3.5***
     48.6±4.3***
     36.2±4.5***
    22
    22
    16
Deslorelin
实施例11
实施例30
      10
      10
      10
     20.3±2.5***
     30.8±3.5***
     24.8±4.1***
    22
    22
    15
Leuprorelin
实施例12
      10
      10
     11.8±3.5**
     20.5±5.2***
    6
    6
实施例5
实施例9
实施例13
      10
      10
      10
     21.2±6.6**
     30.9±3.6***
     22.9±4.2***
    6
    8
    6

*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001仅与载体比较
n：动物数

表3：睾酮分泌的刺激
化合物
 剂量(ng/kg)
  总血浆睾酮(nmol/l)
    n
载体(PBS)
     -
     4.3±1.2
    16
实施例20
实施例21
实施例22
实施例23
实施例24
实施例25
实施例26
     10
     10
     10
     10
     10
     10
     10
     24.9±5.0**
     32.4±7.0**
     34.8±4.5***
     49.4±4.6***
     14.3±4.3*
     27.3±6.9**
     12.2±2.7
    8
    8
    8
    8
    8
    8
    8

*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001仅与载体比较
n：动物数

总之，一方面实施例6和23，另一方面实施例28，是迄今为止通过
分别用Npg或Ada增加7位氨基酸的疏水性所获得的比当前治疗用LH-
RH类似物更有效的LH-RH激动剂的最好例证。

根据通式(IIb)的肽在体内对LH-RH受体表现出拮抗剂活性，可
抑制雌性排卵。

通过每日阴道涂片首先监测成年雌性Wistar大鼠的正常动情周期。
在至少2个规律的4天周期后，在动情前期这天的下午2：00左右给它
们皮下注射载体(0.5ml丙二醇和水的混合物：20/80体积/体积)，或溶
于此载体的根据式(IIb)的LH-RH拮抗剂。通过在输卵管中重获大量
卵母细胞表明，除一只动物外，所有载体处理的动物均在第二天早晨自
发排卵。

有效的话，LH-RH拮抗剂可完全抑制排卵。一种可得的商业化LH-
RH拮抗剂标准品(来自Bachem，法国)抗排卵肽显示排卵抑制与剂量
相关(表4)。半对数回归分析得出50％抑制剂量(ID50)为每只大鼠0.99
μg。在抗排卵肽的结构中用Npg7取代Leu7(实施例15)时，抑制效价
在每只大鼠0.5和0.25μg时明显提高，结果ID50为每只大鼠0.26μg。6
位和8位碱性氨基酸的改变与Npg7相似，可产生比抗排卵肽有更强活性
的拮抗剂，如实施例16、17、18或19在每只大鼠1μg剂量表现出最大
或亚最大活性所示(表4)。实施例17活性特别强，但其作用与研究剂量
范围中的剂量无关。所以，在7位导入疏水性的氨基酸有助于获得更强
的LH-RH拮抗剂性质，如迄今最好的例子所示，Npg7取代Leu7使抗排
卵肽的抗排卵能力提高了4倍。(实施例15)

表4：排卵抑制
处置

  剂量(μg/大鼠)

   雌性排卵数/总处
     置雌性数
 抑制百分比％

载体
     -
       38/39
      -
抗排卵肽




     10
     5
     2.5
     1
     0.5
       0/8
       0/11
       2/6
       5/16
       4/5
     100％
     100％
     67％
     69％
     20％
[Npg7]-抗排卵肽
(实施例15)


     1
     0.5
     0.25
     0.1
       1/5
       0/5
       4/10
       5/5
     80％
     100％
     60％
     0％
实施例16

     1
     0.25
       0/5
       4/5
     100％
     20％
实施例17



     1
     0.75
     0.5
     0.25
       0/12
       0/7
       4/7
       1/5
     100％
     100％
     43％
     80％
实施例18

     1
     0.25
       1/5
       4/5
     80％
     20％
实施例19

     1
     0.25
       0/5
       3/5
     100％
     40％

对激动剂和拮抗剂的体内研究的总结表明，用疏水性更强的非芳香
族氨基酸如Npg或Ada取代Leu7，可系统地增加现有类似物的效价。而
且，不和直接的Leu7对应体比较的话，7位带疏水性氨基酸的密切相关
的类似物常常呈现出各自有趣的活性水平。

所以，要求保护根据通式(I)限定的LH-RH类似物序列中第7位
采用Npg、Ada或其它疏水性氨基酸的化合物，这是获得具有体内高活
性或活性增强的新LH-RH激动剂或拮抗剂的共同特征。

在药学活性剂量，未见本发明肽的任何毒性迹象。

所以，本发明的肽和其药学可接受的盐可用于需要LH-RH激动剂
或拮抗剂活性的各种不适或疾病的治疗或预防。

LH-RH类似物的主要靶点是脑垂体，但对性腺本身(睾丸和卵巢)、
胸腺和一些淋巴细胞系、乳腺细胞和乳腺、前列腺或胰腺肿瘤的直接作
用也有报道。

对任何LH-RH敏感靶点，根据式(IIa)的LH-RH激动剂可通过
短期急性或脉冲式给药表现出刺激活性，或可通过重复或连续给药诱导
LH-RH受体的脱敏和下调表现出抑制作用。就下丘脑-垂体-性腺轴而言，
延长给药导致所谓“化学”阉割。

对任何LH-RH敏感靶点，根据式(IIb)的LH-RH拮抗剂主要表
现出抑制效应，但当治疗中断时，也可用于获得或设计LH和FSH反弹
的刺激性释放。

基于LH-RH的激动剂和拮抗剂相反的潜在用途，根据式(I)的所
有类似物依据剂量、治疗方案和给药途径，不仅能在动物中，而且能在
人生殖内分泌方面和对性激素依赖的良性或恶性肿瘤治疗或预防方面，
找到合适的治疗用途，可单独使用之，也可与其它激素或其它抗肿瘤药
物合用。单独使用或与抗肿瘤药物合用根据式(I)的LH-RH类似物时，
LH-RH敏感的性激素非依赖性的良性或恶性肿瘤也可消退。根据式(I)
的LH-RH类似物也可调整免疫机制，可单独使用之或与免疫调节剂或免
疫抑制剂合用，如糖皮质激素、环孢菌素、雷帕霉素、tacrolimus、或其
衍生物等。因此本发明的LH-RH类似物对自身免疫疾病、移植排斥或特
异反应性疾病的治疗或预防以及对良性或恶性淋巴增生性疾病的治疗非
常有价值。

单独使用或与性类固醇或促性腺激素合用时，根据式(I)的LH-RH
类似物对抑制、计划和引发体外受精过程中的排卵特别有用，对雄性和
雌性不育或性腺功能低下的治疗也特别有用。相反，单独使用之或与性
类固醇或促性腺激素合用时，它们也可用于雄性或雌性避孕或性腺功能
亢进的治疗。这不仅适用于男性或女性，也适用于野生或家养动物，以
对其生育过程进行改善或控制，或作为优化生育策略的工具。

根据式(I)的LH-RH类似物对治疗男性的晚期前列腺癌也特别有
用，也可用于该适应症和良性前列腺增生的一线治疗，可单独使用之或
与雄激素作用抑制剂合用，即抗雄激素如：醋酸环丙氯地孕酮、Osaterone
acetate、醋酸氯地孕酮、氟硝丁酰胺、尼鲁米特或bicalutamide等，或
5α-还原酶抑制剂如非那甾胺、epristeride或turosteride等，或C17-20裂
解酶抑制剂如abiraterone等。

根据式(I)的LH-RH类似物对于治疗或预防女性和男性乳腺癌，
特别是雌激素受体阳性的肿瘤也特别有用，可单独使用之或与抗雌激素
合用，如他莫昔芬、雷洛昔芬或屈洛昔芬等，或与芳香酶抑制剂如阿他
斯坦、福麦司坦、letrozole和anastrozole等，或与C17-20裂解酶抑制剂
如abiraterone等合用，也可用于预防或治疗应答LH-RH的直接作用或
间接应答对其抑制性腺活性的某些雌激素受体阴性的肿瘤。

其它妇科疾病，如子宫内膜增生、平滑肌瘤、腺肌瘤、子宫内膜异
位、多囊卵巢综合症、多毛症和良性乳腺疾病(疼痛、囊肿、纤维化)，
也可用根据式(I)的LH-RH类似物预防或治疗，单独使用之或与抗雌
激素(如上所述)、孕酮如醋酸环丙孕酮、osaterone acetate、醋酸氯地
孕酮、醋酸诺美司酮、丙甲雌烯酮、地美孕酮、trimegestone等合用，或
其避孕药或绝经后的替代组合制剂与雌激素如雌二醇或炔雌醇合用。本
发明的肽也能通过诱导流产或引产的方式干扰妊娠，可单独使用之或与
雌激素(如上所述)、抗孕酮如米非司酮或前列腺素类似物如前列磺酮合
用。

在兽医学中雄性或雌性家养或野生动物也会出现需使用根据式(I)
的LH-RH类似物的类似适应症。

因此本发明的另一方面是含有有效量的分子式(I)的至少一种肽或
其药学可接受的盐的药物组合物，其可以是单独成分，或混有合适的药
物赋形剂。

本发明还有一方面涉及治疗和/或预防上述疾病的方法，包括给予需
要这种治疗和/或预防的病人或动物治疗有效量的分子式(I)的肽或其药
学可接受的盐。

本发明还有一方面涉及式(IIa)的肽或其药学可接受的盐的用途，
其用于制备具有LH-RH激动剂活性的药物。式(IIb)的肽或其药学可
接受的盐用于制备具有LH-RH拮抗剂活性的药物的用途也在本发明范围
内。

尽管若适当增加剂量的话，口服剂型也有效，本发明的肽优选通过
非肠道途径给药。

对用于长期下丘脑-性腺抑制性适应症中的式(IIa)的LH-RH激动
剂而言，优选输送系统是缓释可植入的装置或可注射的生物降解的聚合
微米颗粒或纳米颗粒或胶囊，或微米或纳米乳剂，肽或其相应盐的单位
剂量范围为每病人1mg到100mg，作用时间为1个月到1年。将式(IIb)
的LH-RH拮抗剂长期给药时一般在相同缓释剂型中需更高剂量，剂量范
围从10mg到1g，作用时间从1周到1年。动物剂量根据使用式(I)的
LH-RH激动剂或拮抗剂治疗的野生或家养动物种类依体重进行调整。

适合快速、延迟或计划输送本发明肽的所有其它非肠道给药方式包
括：皮下、肌肉内、静脉内、性腺内或肿瘤内团针(needle bolus)注射、
或用适当泵技术进行的延续的、脉冲的或计划的灌流或微量灌注；气推
皮下微量注射；阴道霜、凝胶或栓剂；直肠灌肠剂或栓剂；透皮霜、凝
胶、洗剂、溶液、创口贴或离子电渗装置；鼻喷雾剂或干粉吸入装置；
眼液、凝胶、霜或接触镜；肺部吸入由手工或适当的研磨器或气雾器产
生的微米或纳米颗粒或滴。

对式(IIa)的LH-RH激动剂而言，非肠道给药的单位剂量在人体
从每天0.001mg到10mg不等，而对式(IIb)的LH-RH拮抗剂而言，
范围从每天0.01到100mg，每天1-16次(对于脉冲给药)。

本发明的肽口服给药时优选使用胃耐受的小肠或结肠缓释剂型，可
以是包含两种或更多成分的经包被的药丸或药片、硬化明胶胶囊、包含
本发明的肽的特殊聚合巨大颗粒、微米颗粒或纳米颗粒，或任何防止其
发生胃肠降解及在需要时使其释放的装置。只要增加剂量，也可使用任
何其它合适的口服剂型如溶液、悬液、糖浆、凝胶等，或舌、舌下或可
咀嚼剂型。

总的说来，用以上任何一种剂型均可达到有效的口服治疗，其中式
(I)肽的单位剂量从每人每天1mg到1g不等，每天1-16次(对于脉冲
给药)。

以上提及的本发明的肽及其药学可接受的盐的口服或非肠道剂型按
特定给药途径的需要可以含有一种或几种药物赋形剂、一种或几种蛋白
酶抑制剂和一种或几种吸收增强剂。

也可使用本发明的纯肽或其药学可接受的盐的粗粉，特别是以冻干
形式用于快速舌下给药。